Technique to simultaneously evaluate ram sperm morphology, acrosome and membrane integrity

Several laboratory methods to evaluate ram sperm quality have been developed. The combination of different fluorescent probes is suitable to simultaneously evaluate different sperm characteristics but the need fora fluorescent microscope restricts its use. The Aim of the present study was to evaluate the efficacy of Hypoosmotic Trypan Blue Giemsa (HTBG) staining to simultaneously detect sperm morphological abnormalities, plasma and acrosomal membrane integrity using phase contrast and fluorescence microscopy as the gold standards. Samples from twelve fresh ejaculates from three rams (4 ejaculates/ram) were used in the study. Sperm cells were evaluated using HTBG, phase contrast (PC) and fluorescent (FLUO) techniques. HTBG was more effective in detecting sperm defects when compared to PC (P < 0.05). No significant differences (P > 0.05) were observed between HTBG and FLUO in the assessment of plasmatic membrane and acrosome integrity. High correlation between HTBG and FLUO techniques was observed when assessing plasma membrane and acrosome (R = 0.97 and 0.96, respectively). In conclusion, the HTBG staining is suitable to assess ram sperm morphology, plasma and acrossomal membrane integrity simultaneously.(AU)

Technique to simultaneously evaluate ram sperm morphology, acrosome and membrane integrity

Several laboratory methods to evaluate ram sperm quality have been developed. The combination of different fluorescent probes is suitable to simultaneously evaluate different sperm characteristics but the need fora fluorescent microscope restricts its use. The Aim of the present study was to evaluate the efficacy of Hypoosmotic Trypan Blue Giemsa (HTBG) staining to simultaneously detect sperm morphological abnormalities, plasma and acrosomal membrane integrity using phase contrast and fluorescence microscopy as the gold standards. Samples from twelve fresh ejaculates from three rams (4 ejaculates/ram) were used in the study. Sperm cells were evaluated using HTBG, phase contrast (PC) and fluorescent (FLUO) techniques. HTBG was more effective in detecting sperm defects when compared to PC (P 0.05) were observed between HTBG and FLUO in the assessment of plasmatic membrane and acrosome integrity. High correlation between HTBG and FLUO techniques was observed when assessing plasma membrane and acrosome (R = 0.97 and 0.96, respectively). In conclusion, the HTBG staining is suitable to assess ram sperm morphology, plasma and acrossomal membrane integrity simultaneously.

Ingestão de azevém pré-secado ou in natura e a relação com as taxas de gestação e de mortalidade embrionária em éguas da raça Crioula / Intake of ryegrass pré-dried or fresch and the relationship to pregnancy rates and embryonic death in Crioulo mares

O presente estudo objetivou avaliar as taxas de gestação e de mortalidade embrionária de éguas da raça Crioula, nutridas com azevém (Lolium multiflorum), na região dos Campos Gerais do Paraná. Os animais foram separados em dois grupos (G): G1- éguas alimentadas com pré-secado de azevém (n = 41); e G2 - éguas alimentadas com pasto de azevém in natura (n = 39). Cada um dos grupos foi subdivido em três subgrupos: 1.1 e 2.1- éguas no cio do potro; 1.2 e 2.2 - éguas lactantes; e 1.3 e 2.3 - éguas não lactantes. Todos os animais foram inseminados com sêmen fresco e sem diluição, proveniente de garanhões previamente avaliados e enquadrados nos padrões mínimos de qualidade de sêmen. Os parâmetros reprodutivos avaliados no estudo foram as taxas de gestação e de mortalidade embrionária. Como resultado total, o grupo 1 (azevém pré-secado) apresentou 80,49% de gestação (33/41 éguas), e o grupo 2 (azevém in natura) 92,31% de gestação (36/39 éguas) (P > 0,05). Nos subgrupos (SG), obtiveram-se, respectivamente, 78,95% de gestação; 87,50; 85,71; 92,31; 75; 100,00% de gestação para 1.1, 2.1, 1.2, 2.2, 1.3 e 2.3. Não ocorreu diferença significativa entre as taxas de gestação dos dois grupos e dos subgrupos. Relativamente à taxa de mortalidade embrionária até os 40 dias de gestação, o G1 apresentou 9,75% e o grupo 2, 2,56% (P > 0,05). Concluiu-se, no presente estudo, que não houve diferença nas taxas de gestação e de morte embrionária nas éguas da raça Crioula, alimentadas com o pré-secado de azevém ou com o azevém in natura.(AU)

This study aimed to evaluate pregnancy rates and embryonic death in mares of Crioulo breed, supplied with Lolium multiflorum in the Campos Gerais of Paraná. The animals were divided into two groups (G): G1 mares supplied with pre-dried Lolium multiflorum (n = 41) and G2 mares with Lolium multiflorum in natura (n = 39). Each group was subdivided into three sub-groups: 1.1 and 2.1 in foal heat; 2.2 1.2 lactating mares and 1.3 and 2.3 non-lactating mares. All animals were inseminated with fresh semen and without dilution, from fertile stallions. The reproductive parameters evaluated in the study were pregnancy rate and embryonic mortality. As a result it was found that group 1 (pre-dried) showed a 80.49% pregnancy rate (33/41 mares) and group 2 (Lolium multiflorum in natura) showed a 92.31% pregnancy (36/39 mares). In subgroups (SG) were obtained respectively 78.95 pregnancy, 87.5, 85.71, 92.31, 75, 100% pregnancy to 1.1, 2.1, 1.2, 2.2, 1.3 and 2.3. There was no significant difference in pregnancy rates between the two groups and subgroups. Regarding the rate at embryonic mortality until the 40 days of gestation, the G1 presented 9.75 and group 2, 2.56% (P > 0.05). It was concluded in this study, no difference in pregnancy rates and embryonic death in mares Criollo, fed with pre dried ryegrass or ryegrass cultivar.(AU)

Ingestão de azevém pré-secado ou in natura e a relação com as taxas de gestação e de mortalidade embrionária em éguas da raça Crioula / Intake of ryegrass pré-dried or fresch and the relationship to pregnancy rates and embryonic death in Crioulo mares

O presente estudo objetivou avaliar as taxas de gestação e de mortalidade embrionária de éguas da raça Crioula, nutridas com azevém (Lolium multiflorum), na região dos Campos Gerais do Paraná. Os animais foram separados em dois grupos (G): G1- éguas alimentadas com pré-secado de azevém (n = 41); e G2 - éguas alimentadas com pasto de azevém in natura (n = 39). Cada um dos grupos foi subdivido em três subgrupos: 1.1 e 2.1- éguas no cio do potro; 1.2 e 2.2 - éguas lactantes; e 1.3 e 2.3 - éguas não lactantes. Todos os animais foram inseminados com sêmen fresco e sem diluição, proveniente de garanhões previamente avaliados e enquadrados nos padrões mínimos de qualidade de sêmen. Os parâmetros reprodutivos avaliados no estudo foram as taxas de gestação e de mortalidade embrionária. Como resultado total, o grupo 1 (azevém pré-secado) apresentou 80,49% de gestação (33/41 éguas), e o grupo 2 (azevém in natura) 92,31% de gestação (36/39 éguas) (P > 0,05). Nos subgrupos (SG), obtiveram-se, respectivamente, 78,95% de gestação; 87,50; 85,71; 92,31; 75; 100,00% de gestação para 1.1, 2.1, 1.2, 2.2, 1.3 e 2.3. Não ocorreu diferença significativa entre as taxas de gestação dos dois grupos e dos subgrupos. Relativamente à taxa de mortalidade embrionária até os 40 dias de gestação, o G1 apresentou 9,75% e o grupo 2, 2,56% (P > 0,05). Concluiu-se, no presente estudo, que não houve diferença nas taxas de gestação e de morte embrionária nas éguas da raça Crioula, alimentadas com o pré-secado de azevém ou com o azevém in natura.

This study aimed to evaluate pregnancy rates and embryonic death in mares of Crioulo breed, supplied with Lolium multiflorum in the Campos Gerais of Paraná. The animals were divided into two groups (G): G1 mares supplied with pre-dried Lolium multiflorum (n = 41) and G2 mares with Lolium multiflorum in natura (n = 39). Each group was subdivided into three sub-groups: 1.1 and 2.1 in foal heat; 2.2 1.2 lactating mares and 1.3 and 2.3 non-lactating mares. All animals were inseminated with fresh semen and without dilution, from fertile stallions. The reproductive parameters evaluated in the study were pregnancy rate and embryonic mortality. As a result it was found that group 1 (pre-dried) showed a 80.49% pregnancy rate (33/41 mares) and group 2 (Lolium multiflorum in natura) showed a 92.31% pregnancy (36/39 mares). In subgroups (SG) were obtained respectively 78.95 pregnancy, 87.5, 85.71, 92.31, 75, 100% pregnancy to 1.1, 2.1, 1.2, 2.2, 1.3 and 2.3. There was no significant difference in pregnancy rates between the two groups and subgroups. Regarding the rate at embryonic mortality until the 40 days of gestation, the G1 presented 9.75 and group 2, 2.56% (P > 0.05). It was concluded in this study, no difference in pregnancy rates and embryonic death in mares Criollo, fed with pre dried ryegrass or ryegrass cultivar.

Comparative validation using quantitative real-time PCR (qPCR) and conventional PCR of bovine semen centrifuged in continuous density gradient / Validação comparativa utilizando PCR quantitativo em tempo real (qPCR) e PCR convencional de sêmen bovino centrifugado em gradiente de densidade contínuo

The objective of the present study was to determine the sperm enrichment with X-bearing spermatozoa, after one centrifugation in a Percoll or OptiPrep continuous density gradient, using quantitative real-time polymerase chain reaction (qPCR) of sperm DNA and resultant in vitro-produced bovine embryos by PCR. Frozen/thawed sperm was layered on density gradients and the tubes were centrifuged. Supernatants were gently aspirated and the sperm recovered from the bottom of the tubes. Cleavage and blastocyst rates were determined through in vitro production of embryos and PCR was performed to identify the embryos' genetic sex. A difference in blastocyst rate was found in the Percoll treatment compared to OptiPrep (P<0.05). The percentage of female embryos in the Percoll and OptiPrep groups was 62.0 percent and 47.1 percent, respectively. These results were confirmed by qPCR of spermatozoa DNA and underestimation was seen only in the Percoll group. It was possible to sexing sperm using simple approach.(AU)

O objetivo do presente estudo foi determinar o enriquecimento de espermatozoides portadores do cromossomo X após a centrifugação em gradiente de densidade contínuo de Percoll ou OptiPrep, utilizando reação em cadeia da polimerase quantitativa em tempo real (qPCR) do DNA do espermatozoide e dos embriões bovinos produzidos in vitro resultantes pela PCR convencional. Espermatozoides descongelado foram depositados em gradientes de densidade e os tubos foram centrifugados. Os sobrenadantes foram gentilmente aspirados e os espermatozoides recuperados do fundo dos tubos. As taxas de clivagem e de blastocisto foram determinadas pela produção in vitro de embriões e a PCR foi realizada para a identificação genética do sexo dos embriões. Verificou-se diferença na taxa de blastocistos entre os grupos Percoll e OptiPrep (P<0,05). A porcentagem de embriões de fêmeas nos grupos Percoll e OptiPrep foi de 62,0 por cento e 47,1 por cento, respectivamente. Estes resultados foram confirmados pela qPCR do DNA de espermatozoides e uma subestimação foi observada no grupo do gradiente de densidade de Percoll. Foi possível a sexagem de espermatozoides utilizando uma metodologia simples.(AU)