Resumo
Objetivou-se avaliar a ocorrência de Aeromonas spp. em peixes e amostras de água na região semiárida de Pernambuco e avaliar a frequência de aerolissina (aerA), enterotoxina citotóxica (act), enterotoxina citotônica (alt) e serina protease (ahp) nesses isolados. Foram analisados 70 peixes vivos e oito mortos com sinais clínicos de aeromoniose e 16 amostras de água. Aeromonas spp. foram identificadas por análises microbiológicas (provas bioquímicas) e molecular, usando-se primers específicos para a região 16S rRNA, e a distribuição dos quatro fatores de virulência (aerA, alt, act e ahp) foi investigada por ensaio de PCR. Cento e cinquenta e cinco (84,7%) isolados foram confirmados como Aeromonas spp. na análise molecular. Os genes de virulência mais frequentes foram act (53,55%) e aerA (51,61%). De acordo com o tipo de amostra, observou-se maior frequência do gene aerA (87,5% P=0,0474) em isolados de peixes mortos e a menor frequência do gene act (47,73% P=0,0002) em peixes vivos. Este estudo demonstrou a presença de aeromoniose no cultivo de tilápias em tanques-rede, nos municípios de Jatobá e Petrolândia, na região semiárida de Pernambuco. A detecção de aerA, act e alt pode ser utilizada na tipagem de virulência de Aeromonas spp.(AU)
The purpose of this study was to evaluate the occurrence of Aeromonas spp. from fishes and tilapia net-cage farm water in semi-arid regions of Pernambuco and to evaluate the frequency of the aerolysin (aerA), cytotoxic enterotoxin (act), cytotonic enterotoxin (alt) and serine protease (ahp) genes in Aeromonas isolates. 70 live and eight dead fish with aeromoniosis clinical signs and 16 water samples were analyzed. Aeromonas spp. isolated were identified by microbiological (biochemical evidence) and molecular analysis using specific primers for 16SrRNA region, while the distribution of four virulence factors, including aerA, alt, act and ahp, was investigated by PCR assay. One hundred fifty-five (84.7%) isolates were confirmed as Aeromonas spp. by molecular analysis. The most frequent virulence genes in isolates were act (53.55%) and aerA (51,61%). According to the kind of sample, the higher frequency of aerA gene (87.5% P= 0.0474) was observed in isolates from dead fish and the lowest frequency of act gene (47.73% P= 0.0002) from live fish. This study found the presence of aeromoniosis on tilapia farming in net-cages on Jatobá and Petrolândia counties in the semiarid Pernambuco region. The detection of aerA, act and alt can be used for virulence typing of Aeromonas spp. isolates.(AU)
Assuntos
Animais , Tilápia/microbiologia , Aeromonas/patogenicidade , Ciclídeos/microbiologia , Pesqueiros , VirulênciaResumo
Objetivou-se avaliar a ocorrência de Aeromonas spp. em peixes e amostras de água na região semiárida de Pernambuco e avaliar a frequência de aerolissina (aerA), enterotoxina citotóxica (act), enterotoxina citotônica (alt) e serina protease (ahp) nesses isolados. Foram analisados 70 peixes vivos e oito mortos com sinais clínicos de aeromoniose e 16 amostras de água. Aeromonas spp. foram identificadas por análises microbiológicas (provas bioquímicas) e molecular, usando-se primers específicos para a região 16S rRNA, e a distribuição dos quatro fatores de virulência (aerA, alt, act e ahp) foi investigada por ensaio de PCR. Cento e cinquenta e cinco (84,7%) isolados foram confirmados como Aeromonas spp. na análise molecular. Os genes de virulência mais frequentes foram act (53,55%) e aerA (51,61%). De acordo com o tipo de amostra, observou-se maior frequência do gene aerA (87,5% P=0,0474) em isolados de peixes mortos e a menor frequência do gene act (47,73% P=0,0002) em peixes vivos. Este estudo demonstrou a presença de aeromoniose no cultivo de tilápias em tanques-rede, nos municípios de Jatobá e Petrolândia, na região semiárida de Pernambuco. A detecção de aerA, act e alt pode ser utilizada na tipagem de virulência de Aeromonas spp.(AU)
The purpose of this study was to evaluate the occurrence of Aeromonas spp. from fishes and tilapia net-cage farm water in semi-arid regions of Pernambuco and to evaluate the frequency of the aerolysin (aerA), cytotoxic enterotoxin (act), cytotonic enterotoxin (alt) and serine protease (ahp) genes in Aeromonas isolates. 70 live and eight dead fish with aeromoniosis clinical signs and 16 water samples were analyzed. Aeromonas spp. isolated were identified by microbiological (biochemical evidence) and molecular analysis using specific primers for 16SrRNA region, while the distribution of four virulence factors, including aerA, alt, act and ahp, was investigated by PCR assay. One hundred fifty-five (84.7%) isolates were confirmed as Aeromonas spp. by molecular analysis. The most frequent virulence genes in isolates were act (53.55%) and aerA (51,61%). According to the kind of sample, the higher frequency of aerA gene (87.5% P= 0.0474) was observed in isolates from dead fish and the lowest frequency of act gene (47.73% P= 0.0002) from live fish. This study found the presence of aeromoniosis on tilapia farming in net-cages on Jatobá and Petrolândia counties in the semiarid Pernambuco region. The detection of aerA, act and alt can be used for virulence typing of Aeromonas spp. isolates.(AU)
Assuntos
Animais , Tilápia/microbiologia , Aeromonas/patogenicidade , Ciclídeos/microbiologia , Pesqueiros , VirulênciaResumo
O cultivo da tilápia do Nilo (Oreochromis niloticus) vem crescendo atualmente no Brasil e em Pernambuco. O sistema de cultivo intensivo associado ao manejo inadequado resulta no aparecimento de doenças oportunistas, principalmente as de origem bacteriana. As bactérias dos gêneros Aeromonas ssp. e Streptococcus ssp. são responsáveis pela maioria das mortalidades nas fazendas de peixe, causando morte por septicemia, além de se disseminar rapidamente nos plantéis. Objetivou-se neste estudo desenvolver um diagnóstico rápido por Reação em Cadeia de Polimerase - PCR para bactérias do gênero Aeromonas e Streptococcus, além de analisar a ocorrência dessas bactérias oriundas de tilapiculturas nos municípios de Jatobá e Petrolândia em Pernambuco. Foi padronizada uma PCR multiplex para o gênero Aeromonas e para a espécie Aeromonas hydrophila, com temperatura ideal de anelamento de 57.6°C e limite de detecção até 10-10 g/L de DNA extraído diretamente das colônias em cultivo microbiológico, utilizando como alvos os genes 16S rRNA e a citotoxina enterotóxica aerolisina (aer). Também foram estudadas a ocorrência de bactérias do gênero Aeromonas e Streptococcus oriundas de tilapiculturas localizadas nos municípios de Jatobá e Petrolândia no sertão de Pernambuco. Todos os 70 peixes coletados e todas as 16 amostras de água apresentaram isolados de Aeromonas spp. e Aeromonas hydrophila com prevalência dos fatores de virulência aerolisina (aer) e enterotoxina citotóxica (act) de 53,6% e 52,9%, respectivamente. Não foram encontrados isolados de Streptococcus ssp. tanto nos peixes como na água das tilapiculturas estudadas. A padronização de técnicas de diagnóstico bem como a ocorrência de aeromoniose em peixes cultivados no sertão de Pernambuco, demonstra a importância de pesquisas nessa área com objetivo de impulsionar a tilapicultura no Estado e otimizar o diagnóstico de doenças bacterianas.
Culture os nile tilapia (Oreochromis niloticus) is currently expanding in Brazil and Pernambuco. Intensive culture systems are associated with inadequate management, which results in the ocorrence of opportunistic bacterial diseases. The bacterial genera Aeromonas ssp. and Streptococcus ssp. are responsible for mortality in fish farms, due to septicemia and rapid spread of infection among animals. The aim of this study was to develop a quick assay for diagnosis by Polimerase Chain Reaction - PCR for Aeromonas ssp. and Streptococcus ssp., to investigate the occurrence of these bacterias from tilapia culture in Jatobá and Petrolândia - PE. It was standardized a mPCR for Aeromonas hydrophila and Aeromonas genus, with annealing temperature 57.6 °C and 10-10 g/L detection limit of DNA extracted directly from colonies in microbiological culture, using as targets the 16S rRNA genes and the virulence gene enterotoxic cytotoxin aerolysin (aer). Were also studied the occurrence of Aeromonas ssp. and Streptococcus ssp. colected from tilapia cultures located on Jatoba and Petrolândia - PE. All 70 collected fish and 16 water samples showed Aeromonas spp.and Aeromonas hydrophila isolates, with prevalence of virulence factors (aer) and cytotoxic enterotoxin (act) of 53.6% and 52.9%, respectively. None Streptococcus ssp.isolates were identify. The diagnostic techniques standardization and the occurrence of Aeromoniosis in fish farmed in Pernambuco demonstrates the importance of research in this area with the objective of boosting tilapicultura in the state and optimize the bacterial diseases diagnosis.