Molecular characterization of Corynebacterium pseudotuberculosis, C. silvaticum, and C. auriscanis by ERIC-PCR / Caracterização molecular de Corynebacterium pseudotuberculosis, C. silvaticum e C. auriscanis pelo ERIC-PCR

The aims of the present study were (i) to genotype Corynebacterium pseudotuberculosis, C. silvaticum, and C. auriscanis strains using enterobacterial repetitive intergenic consensus (ERIC-PCR), and (ii) to analyze the epidemiological relationships among isolates according to biovar (Equi and Ovis), species, host, and geographical origin of the C. pseudotuberculosis strains. Sixty-eight C. pseudotuberculosis, nine C. silvaticum, and one C. auriscanis, C. pseudotuberculosis ATCC® 19410™ strain and the attenuated C. pseudotuberculosis 1002 vaccinal strain were fingerprinted by ERIC 1+2-PCR. Field strains were isolated from various hosts (cattle, buffaloes, sheep, goats, horses, dogs, and pigs) in six countries (Mexico, Portugal, Brazil, Equatorial Guinea, Egypt, and Israel). High genetic diversity was found among the studied Corynebacterium spp. isolates, clustering in 24 genotypes with a Hunter & Gaston diversity index (HGDI) of 0.937. The minimal spanning tree of Corynebacterium spp. revealed three clonal complexes, each associated with one bacterial species. Twenty-two genotypes were observed among C. pseudotuberculosis isolates, with an HGDI of 0.934. Three major clonal complexes were formed at the minimal spanning tree, grouped around the geographic origin of C. pseudotuberculosis isolates. These results reinforce the high typeability, epidemiological concordance, and discriminatory power of ERIC-PCR as a consistent genotyping method for C. pseudotuberculosis, which could be useful as an epidemiological tool to control caseous lymphadenitis. Moreover, our results also indicate the potential of ERIC 1+2-PCR for the genotyping of other species of Corynebacterium other than C. pseudotuberculosis.

Os objetivos do presente estudo foram (i) genotipar amostras de Corynebacterium pseudotuberculosis, C. silvaticum e C. auriscanis usando Enterobacterial Repetitive Intergenic Consensus (ERIC-PCR), bem como (ii) analisar as relações epidemiológicas entre os isolados de acordo com biovar (Equi e Ovis), espécie, hospedeiro e origem geográfica das amostras de C. pseudotuberculosis. Sessenta e oito isolados de C. pseudotuberculosis, nove C. silvaticum, um C. auriscanis, C. pseudotuberculosis ATCC® 19410 ™ e a amostra vacinal atenuada C. pseudotuberculosis 1002 foram tipificadas por ERIC 1 + 2-PCR. As amostras de campo foram isoladas de diferentes hospedeiros (bovinos, búfalos, ovinos, caprinos, equinos, cães e suínos) em seis países (México, Portugal, Brasil, Guiné Equatorial, Egito e Israel). Uma alta diversidade genética foi observada entre os isolados de Corynebacterium spp., agrupados em vinte e quatro genótipos com um índice de diversidade Hunter & Gaston (HGDI) de 0,937. A análise da minimal spanning tree (MST) de Corynebacterium spp. revelou três complexos clonais, cada um associado a uma espécie bacteriana. Vinte e dois genótipos foram observados entre isolados de C. pseudotuberculosis, com um HGDI de 0,934. Na análise da MST, três grandes complexos clonais foram formados, agrupando-se em torno da origem geográfica dos isolados de C. pseudotuberculosis. Esses resultados reforçam a alta tipabilidade, concordância epidemiológica e poder discriminatório do ERIC-PCR como método consistente de genotipagem para C. pseudotuberculosis, podendo ser útil como ferramenta epidemiológica no controle da linfadenite caseosa. Além disso, os resultados também indicam o grande potencial de ERIC 1 + 2-PCR para genotipagem de espécies do gênero Corynebacterium além de C. pseudotuberculosis.

Seroprevalence of caseous lymphadenitis in goats sold in an animal fair in the northeastern semi-arid region of Brazil / Soroprevalência da linfadenite caseosa em caprinos comercializados em feira de animais no Semiárido nordestino

Goat farming in the northeastern regions of Brazil plays an important role in the socio-economic functions of the country. However, high rates of morbidity and mortality occur in the animals, caused primarily by infectious diseases like caseous lymphadenitis, which is widespread in goat herds; this causes serious economic losses to the farming business. Although events such as animal fairs are common in the region, wherein most of the goats and sheep are sold, the risk of disease transmission remains, since the health condition of the animal is unknown. The aim of this study was to determine the frequency of anti-Corynebacterium pseudotuberculosis antibodies present in the goats sold at the animal fair of Tabira - PE, Northeastern semi-arid. Serum samples from 233 goats were collected from the period of November 2014 to June 2015. The diagnosis of infection by C. pseudotuberculosis was made using the indirect ELISA technique. The number of goats seropositive for C. pseudotuberculosis was identified as 87 (37.34%; 95% CI = 31.38 - 43.71%). Of the nine flocks evaluated, five (55.55%) were positive. Thus, it is suggested that infection by C. pseudotuberculosis is widespread in the goats sold at the animal fairs in the semi-arid Northeastern, reinforcing the need for disease diagnosis in goat herds in the region for the possible implementation of disease control programs.(AU)

A caprinocultura se destaca na região Nordeste do Brasil por desempenhar importante função socioeconômica. Contudo altas taxas de morbidade e mortalidade ocorrem nas propriedades causadas principalmente por doenças infecciosas, destacando-se a linfadenite caseosa, que se encontra amplamente difundida nos rebanhos caprinos, acarretando sérios prejuízos econômicos à atividade. Eventos do tipo feira de animais são comuns na região, onde é comercializada grande parte da produção de caprinos e ovinos, porém existe um risco de transmissão de doenças nesses locais quando a condição sanitáriados animais é desconhecida. O objetivo desse estudo foi determinar a frequência de anticorpos anti-Corynebacterium pseudotuberculosis em caprinos comercializados na feira de animais do município de Tabira-PE, Semiárido nordestino. Foram coletadas amostras de soro de 233 caprinos no período de novembro de 2014 a junho de 2015. O diagnóstico da infecção por C. pseudotuberculosis foi realizado pela técnica de ELISA-indireto. Foram identificados 87 (37,34%; IC 95% = 31,38 - 43,71%) caprinos soropositivos para C. pseudotuberculosis. Dos nove rebanhos avaliados, cinco (55,55%) resultaram positivos. Sugere-se que a infecção por C. pseudotuberculosis encontra-se disseminada nos caprinos comercializados em feiras de animais do Semiárido nordestino, reforçando a necessidade do diagnóstico da enfermidade em rebanhos caprinos da região para possível implementação de programas de controle da doença.(AU)

Resistance of Corynebacterium pseudotuberculosis in the Brazilian semiarid environment / Resistência de Corynebacterium pesudotuberculosis no ambiente do semiárido brasileiro

The semiarid northeast of Brazil contains a unique biome known as caatinga, with a maximum temperature of 40 ºC and a relativity humidity of 56%. The caatinga is characterized by a variety of plants, including Cereus jamacaru Dc (mandacaru), Poincianella microphylla Mart. ex G. Don (catingueira), Pilosocereus gounellei FAC Weber (xique-xique) and Mimosa tenuiflora (Willd.) Poir (jurema preta). Sheep and goat industries are economically strong in that region, despite the fact that caseous lymphadenitis is highly prevalent. The aim of the present study was to assess the survival and biofilm production of Corynebacterium pseudotuberculosis isolates in the environment and under controlled temperatures (28°C, 37°C and 42°C) under different surfaces (plants, soil, wood, wire and thorns). In addition, we investigated the effects of applying the disinfectants chlorhexidine, hypochlorite and quaternary ammonia in soil, tiles, wood and vegetation cover. Four strains of C. pseudotuberculosis were selected (two from goats and two from sheep) for inoculation according to their in vitro biofilm production. Adherence to microplates was used to assess the biofilm-forming ability of the bacteria. Lower survival rates were observed when isolates of C. pseudotuberculosis were subjected to a temperature of 42°C. In terms of caatinga biome plants, contamination of jurema-preta plants resulted in the lowest survival rates. The disinfectant quaternary ammonia promoted a lower inoculum survival in all surfaces. The disinfectants and the higher temperature contributed to the reduction of biofilm production in isolates of C. pseudotuberculosis. knowledge of these patterns is important for the establishment of disease control measures, given the questionable efficacy of the treatment and the immuno-prophylaxis of caseous lymphadenitis.(AU)

O semiárido nordestino do Brasil possui um bioma exclusivo, a caatinga, que apresenta temperatura máxima de 40oC e uma umidade relativa do ar de 56%. A caatinga é caracterizada por uma diversidade de plantas, entre elas Cereus jamacaru DC. (mandacaru), Poincianella microphylla Mart ex G. Don (catingueira), Pilosocereus gounellei F.A.C. Weber (xique-xique) e Mimosa tenuiflora (Willd.) Poir (jurema preta). A produção de ovinos e caprinos está em franca expansão, porém a linfadenite caseosa é uma enfermidade de alta prevalência na região. Objetiva-se com o presente estudo, verificar a sobrevivência e produção de biofilme em isolados de Corynebacterium pseudotuberculosis em temperaturas de 28oC, 37oC e 42oC, quando inoculado em superfícies de solo, madeira, arame e espinho e em plantas nas condições ambientais da caatinga. Além disto, foi verificado o efeito da aplicação dos desinfetantes clorexidine, hipoclorito e amônia quaternária sobre o solo, piso (lajota), madeira e vegetação de cobertura do solo. Foram selecionadas quatro amostras de C. pseudotuberculosis (dois caprinos e dois ovinos) para inoculação de acordo com a sua produção in vitro de biofilme. A adesão a microplacas foi utilizado para avaliar a capacidade de formação de biofilme das bactérias. As menores taxas de sobrevivência foram observadas quando isolados de C. pseudotuberculosis foram submetidos a uma temperatura de 42°C. Com relação as plantas do bioma caatinga, a contaminação na planta jurema-preta apresentou menores índices de sobrevivência. O desinfetante amônia quartenária promoveu uma menor sobrevivência do inóculo em todas as superfícies. Os desinfetantes e temperatura contribuíram para a redução na produção de biofilme nos isolados de Corynebacterium pseudotuberculosis. O conhecimento destes padrões é importante para o estabelecimento de medidas de controle da enfermidade, dada a eficiência questionável do tratamento e imunoprofilaxia da linfadenite caseosa.(AU)

Resistance of Corynebacterium pseudotuberculosis in the Brazilian semiarid environment / Resistência de Corynebacterium pesudotuberculosis no ambiente do semiárido brasileiro

The semiarid northeast of Brazil contains a unique biome known as caatinga, with a maximum temperature of 40 ºC and a relativity humidity of 56%. The caatinga is characterized by a variety of plants, including Cereus jamacaru Dc (mandacaru), Poincianella microphylla Mart. ex G. Don (catingueira), Pilosocereus gounellei FAC Weber (xique-xique) and Mimosa tenuiflora (Willd.) Poir (jurema preta). Sheep and goat industries are economically strong in that region, despite the fact that caseous lymphadenitis is highly prevalent. The aim of the present study was to assess the survival and biofilm production of Corynebacterium pseudotuberculosis isolates in the environment and under controlled temperatures (28°C, 37°C and 42°C) under different surfaces (plants, soil, wood, wire and thorns). In addition, we investigated the effects of applying the disinfectants chlorhexidine, hypochlorite and quaternary ammonia in soil, tiles, wood and vegetation cover. Four strains of C. pseudotuberculosis were selected (two from goats and two from sheep) for inoculation according to their in vitro biofilm production. Adherence to microplates was used to assess the biofilm-forming ability of the bacteria. Lower survival rates were observed when isolates of C. pseudotuberculosis were subjected to a temperature of 42°C. In terms of caatinga biome plants, contamination of jurema-preta plants resulted in the lowest survival rates. The disinfectant quaternary ammonia promoted a lower inoculum survival in all surfaces. The disinfectants and the higher temperature contributed to the reduction of biofilm production in isolates of C. pseudotuberculosis. knowledge of these patterns is important for the establishment of disease control measures, given the questionable efficacy of the treatment and the immuno-prophylaxis of caseous lymphadenitis.(AU)

O semiárido nordestino do Brasil possui um bioma exclusivo, a caatinga, que apresenta temperatura máxima de 40oC e uma umidade relativa do ar de 56%. A caatinga é caracterizada por uma diversidade de plantas, entre elas Cereus jamacaru DC. (mandacaru), Poincianella microphylla Mart ex G. Don (catingueira), Pilosocereus gounellei F.A.C. Weber (xique-xique) e Mimosa tenuiflora (Willd.) Poir (jurema preta). A produção de ovinos e caprinos está em franca expansão, porém a linfadenite caseosa é uma enfermidade de alta prevalência na região. Objetiva-se com o presente estudo, verificar a sobrevivência e produção de biofilme em isolados de Corynebacterium pseudotuberculosis em temperaturas de 28oC, 37oC e 42oC, quando inoculado em superfícies de solo, madeira, arame e espinho e em plantas nas condições ambientais da caatinga. Além disto, foi verificado o efeito da aplicação dos desinfetantes clorexidine, hipoclorito e amônia quaternária sobre o solo, piso (lajota), madeira e vegetação de cobertura do solo. Foram selecionadas quatro amostras de C. pseudotuberculosis (dois caprinos e dois ovinos) para inoculação de acordo com a sua produção in vitro de biofilme. A adesão a microplacas foi utilizado para avaliar a capacidade de formação de biofilme das bactérias. As menores taxas de sobrevivência foram observadas quando isolados de C. pseudotuberculosis foram submetidos a uma temperatura de 42°C. Com relação as plantas do bioma caatinga, a contaminação na planta jurema-preta apresentou menores índices de sobrevivência. O desinfetante amônia quartenária promoveu uma menor sobrevivência do inóculo em todas as superfícies. Os desinfetantes e temperatura contribuíram para a redução na produção de biofilme nos isolados de Corynebacterium pseudotuberculosis. O conhecimento destes padrões é importante para o estabelecimento de medidas de controle da enfermidade, dada a eficiência questionável do tratamento e imunoprofilaxia da linfadenite caseosa.(AU)

Resistance of Corynebacterium pseudotuberculosis in the Brazilian semiarid environment

ABSTRACT: The semiarid northeast of Brazil contains a unique biome known as caatinga, with a maximum temperature of 40 ºC and a relativity humidity of 56%. The caatinga is characterized by a variety of plants, including Cereus jamacaru Dc (mandacaru), Poincianella microphylla Mart. ex G. Don (catingueira), Pilosocereus gounellei FAC Weber (xique-xique) and Mimosa tenuiflora (Willd.) Poir (jurema preta). Sheep and goat industries are economically strong in that region, despite the fact that caseous lymphadenitis is highly prevalent. The aim of the present study was to assess the survival and biofilm production of Corynebacterium pseudotuberculosis isolates in the environment and under controlled temperatures (28°C, 37°C and 42°C) under different surfaces (plants, soil, wood, wire and thorns). In addition, we investigated the effects of applying the disinfectants chlorhexidine, hypochlorite and quaternary ammonia in soil, tiles, wood and vegetation cover. Four strains of C. pseudotuberculosis were selected (two from goats and two from sheep) for inoculation according to their in vitro biofilm production. Adherence to microplates was used to assess the biofilm-forming ability of the bacteria. Lower survival rates were observed when isolates of C. pseudotuberculosis were subjected to a temperature of 42°C. In terms of caatinga biome plants, contamination of jurema-preta plants resulted in the lowest survival rates. The disinfectant quaternary ammonia promoted a lower inoculum survival in all surfaces. The disinfectants and the higher temperature contributed to the reduction of biofilm production in isolates of C. pseudotuberculosis. knowledge of these patterns is important for the establishment of disease control measures, given the questionable efficacy of the treatment and the immuno-prophylaxis of caseous lymphadenitis.

RESUMO: O semiárido nordestino do Brasil possui um bioma exclusivo, a caatinga, que apresenta temperatura máxima de 40oC e uma umidade relativa do ar de 56%. A caatinga é caracterizada por uma diversidade de plantas, entre elas Cereus jamacaru DC. (mandacaru), Poincianella microphylla Mart ex G. Don (catingueira), Pilosocereus gounellei F.A.C. Weber (xique-xique) e Mimosa tenuiflora (Willd.) Poir (jurema preta). A produção de ovinos e caprinos está em franca expansão, porém a linfadenite caseosa é uma enfermidade de alta prevalência na região. Objetiva-se com o presente estudo, verificar a sobrevivência e produção de biofilme em isolados de Corynebacterium pseudotuberculosis em temperaturas de 28oC, 37oC e 42oC, quando inoculado em superfícies de solo, madeira, arame e espinho e em plantas nas condições ambientais da caatinga. Além disto, foi verificado o efeito da aplicação dos desinfetantes clorexidine, hipoclorito e amônia quaternária sobre o solo, piso (lajota), madeira e vegetação de cobertura do solo. Foram selecionadas quatro amostras de C. pseudotuberculosis (dois caprinos e dois ovinos) para inoculação de acordo com a sua produção in vitro de biofilme. A adesão a microplacas foi utilizado para avaliar a capacidade de formação de biofilme das bactérias. As menores taxas de sobrevivência foram observadas quando isolados de C. pseudotuberculosis foram submetidos a uma temperatura de 42°C. Com relação as plantas do bioma caatinga, a contaminação na planta jurema-preta apresentou menores índices de sobrevivência. O desinfetante amônia quartenária promoveu uma menor sobrevivência do inóculo em todas as superfícies. Os desinfetantes e temperatura contribuíram para a redução na produção de biofilme nos isolados de Corynebacterium pseudotuberculosis. O conhecimento destes padrões é importante para o estabelecimento de medidas de controle da enfermidade, dada a eficiência questionável do tratamento e imunoprofilaxia da linfadenite caseosa.

Soroprevalência da infecção por Corynebacterium pseudotuberulosis em caprinos no Nordeste brasileiro utilizando técnica de imunoabsorção enzimática (ELISA-indireto) / Serological study on Corynebacterium pseudotuberculosis infection in goats in the Brazilian Northeast using enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA-indirect)

A caprinocultura na região Nordeste do Brasil desempenha importante função socioeconômica e estratégica. A rusticidade desta atividade nesta região, aliada a sua rápida expansão em outros estados, tem gerado perdas na sua cadeia produtiva a nível regional e nacional, causadas por doenças infecciosas, destacando-se a Linfadenite Caseosa (LC), afecção amplamente difundida nos rebanhos caprinos, acarretando sérios prejuízos econômicos à atividade. Embora LC tenha sido detectada como um problema endêmico no nordeste brasileiro, uma análise abrangente e mais recente desta prevalência nos rebanhos caprinos brasileiros se faz necessária. O objetivo desse estudo foi determinar a frequência de anticorpos anti-Corynebacterium pseudotuberculosis em cinco dos nove estados que compõem a região Nordeste do Brasil. Foram processadas amostras de soro de 2571 caprinos provenientes de 218 propriedades rurais oriundas de cinco estados da região Nordeste do Brasil, coletadas entre os anos de 2010 a 2012. O diagnóstico da infecção por C. pseudotuberculosis foi realizado pela técnica de ELISA-indireto. Em 88,5% (193/218) das propriedades investigadas, pelo menos um caprino foi soropositivo para C. pseudotuberculosis, sugerindo que o agente se encontra disseminado nos rebanhos do Nordeste, com a maior prevalência encontrada no Rio Grande do Norte (94,5%) e a menor no estado de Sergipe (70,3%). Foram identificados 783 (30,4%; IC 95%=28,7-32,2%) caprinos soropositivos, com a maior prevalência entre animais encontrada no Piauí (41,4%) e a menor no estado de Sergipe (22,5%). De um total de 279 reprodutores avaliados, 106 (37,9%) resultaram soropositivos, destacando-se o Rio Grande do Norte, com 45,30%, e Piauí com 46,8% dos reprodutores positivos para LC. Das 1420 matrizes testadas, 599(42,1%) apresentaram sorologia positiva para C. pseudotuberculosis. Entre os estados esta distribuição também se manteve semelhante, destacando-se o Rio Grande do Norte, com 47,5% e Piauí com 59,5% das matrizes positivos para LC. Entre os 872 caprinos jovens avaliados, 78 (8,9%) foram soropositivos para LC, observando-se uma diferença estatística na frequência de sopositividade obtidas entre os adultos e os jovens (P<0,001). Reforça-se a necessidade do diagnóstico da enfermidade em rebanhos caprinos da região Nordeste para possível implementação de programas de controle da doença e medidas mais precisas no manejo da LC junto aos criadores de caprinos.(AU)

Goat farming in the Northeast region of Brazil plays an important socioeconomic and strategic role. The rusticity of this activity in this region, allied with its rapid expansion in other states, has caused losses in its production chain in regional and national levels, caused by infectious diseases, especially caseous lymphadenitis (CL), a widespread goat herds disease which has been causing serious economic loss to this activity. Although CL has been detected as an endemic problem in the Brazilian Northeast, a comprehensive and more recent analysis of this prevalence in Brazilian goats is necessary. The objective of this study was to determine the frequency of anti-Corynebacterium pseudotuberculosis antibodies in five of nine states of the northeast region of Brazil. Serum samples were collected from 2571 goats from 218 farms in five states in the Northeast region of Brazil, collected between 2010 and 2012. The diagnosis of C. pseudotuberculosis infection was made using the ELISA-indirect technique. In 88.5% (193/218) of the investigated properties, at least one goat was seropositive for C. pseudotuberculosis, suggesting that the agent is widespread in Northeast herds, with the highest prevalence found in Rio Grande do Norte (94.5%) and the lowest one in the state of Sergipe (70.3%). A total of 783 (30.45%; 95% CI = 28.71-32.26%) seropositive goats were found, and the highest prevalence among animals was found in Piauí (41.4%) and the lowest in the state of Sergipe (22.5%). Out of a total of 279 breeding herds, 106 (37.99%) were seropositive, standing out the Rio Grande do Norte, with a total of 45.30%, and Piauí 46.8% of positive breeding for CL. A total of the 1420 tested matrices, 599 (42.1%) presented positive serology for C. pseudotuberculosis. Among the States, this distribution also remained similar, standing out Rio Grande do Norte with 47.5%, and Piauí with 59.5% of positive matrices for CL. Among 872 young goats evaluated, 78 (8.9%) were seropositive for CL, observing a statistical difference in the frequency of soropositivity obtained between adults and young adults (P<0.001). The necessity to diagnose the disease in goat herds in the Northeast region is reinforced for the possible implementation of disease control programs and more precise measures to manage CL along with goat farmers.(AU)

Soroprevalência da infecção por Corynebacterium pseudotuberulosis em caprinos no Nordeste brasileiro utilizando técnica de imunoabsorção enzimática (ELISA-indireto) / Serological study on Corynebacterium pseudotuberculosis infection in goats in the Brazilian Northeast using enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA-indirect)

A caprinocultura na região Nordeste do Brasil desempenha importante função socioeconômica e estratégica. A rusticidade desta atividade nesta região, aliada a sua rápida expansão em outros estados, tem gerado perdas na sua cadeia produtiva a nível regional e nacional, causadas por doenças infecciosas, destacando-se a Linfadenite Caseosa (LC), afecção amplamente difundida nos rebanhos caprinos, acarretando sérios prejuízos econômicos à atividade. Embora LC tenha sido detectada como um problema endêmico no nordeste brasileiro, uma análise abrangente e mais recente desta prevalência nos rebanhos caprinos brasileiros se faz necessária. O objetivo desse estudo foi determinar a frequência de anticorpos anti-Corynebacterium pseudotuberculosis em cinco dos nove estados que compõem a região Nordeste do Brasil. Foram processadas amostras de soro de 2571 caprinos provenientes de 218 propriedades rurais oriundas de cinco estados da região Nordeste do Brasil, coletadas entre os anos de 2010 a 2012. O diagnóstico da infecção por C. pseudotuberculosis foi realizado pela técnica de ELISA-indireto. Em 88,5% (193/218) das propriedades investigadas, pelo menos um caprino foi soropositivo para C. pseudotuberculosis, sugerindo que o agente se encontra disseminado nos rebanhos do Nordeste, com a maior prevalência encontrada no Rio Grande do Norte (94,5%) e a menor no estado de Sergipe (70,3%). Foram identificados 783 (30,4%; IC 95%=28,7-32,2%) caprinos soropositivos, com a maior prevalência entre animais encontrada no Piauí (41,4%) e a menor no estado de Sergipe (22,5%). De um total de 279 reprodutores avaliados, 106 (37,9%) resultaram soropositivos, destacando-se o Rio Grande do Norte, com 45,30%, e Piauí com 46,8% dos reprodutores positivos para LC. Das 1420 matrizes testadas, 599(42,1%) apresentaram sorologia positiva para C. pseudotuberculosis. Entre os estados esta distribuição também se manteve semelhante, destacando-se o Rio Grande do Norte...(AU)

Goat farming in the Northeast region of Brazil plays an important socioeconomic and strategic role. The rusticity of this activity in this region, allied with its rapid expansion in other states, has caused losses in its production chain in regional and national levels, caused by infectious diseases, especially caseous lymphadenitis (CL), a widespread goat herds disease which has been causing serious economic loss to this activity. Although CL has been detected as an endemic problem in the Brazilian Northeast, a comprehensive and more recent analysis of this prevalence in Brazilian goats is necessary. The objective of this study was to determine the frequency of anti-Corynebacterium pseudotuberculosis antibodies in five of nine states of the northeast region of Brazil. Serum samples were collected from 2571 goats from 218 farms in five states in the Northeast region of Brazil, collected between 2010 and 2012. The diagnosis of C. pseudotuberculosis infection was made using the ELISA-indirect technique. In 88.5% (193/218) of the investigated properties, at least one goat was seropositive for C. pseudotuberculosis, suggesting that the agent is widespread in Northeast herds, with the highest prevalence found in Rio Grande do Norte (94.5%) and the lowest one in the state of Sergipe (70.3%). A total of 783 (30.45%; 95% CI = 28.71-32.26%) seropositive goats were found, and the highest prevalence among animals was found in Piauí (41.4%) and the lowest in the state of Sergipe (22.5%). Out of a total of 279 breeding herds, 106 (37.99%) were seropositive, standing out the Rio Grande do Norte, with a total of 45.30%, and Piauí 46.8% of positive breeding for CL. A total of the 1420 tested matrices, 599 (42.1%) presented positive serology for C. pseudotuberculosis. Among the States, this distribution also remained similar, standing out Rio Grande do Norte with 47.5%, and Piauí with 59.5% of positive matrices for CL. Among 872 young goats... (AU)

Soroprevalência da infecção por Corynebacterium pseudotuberulosis em caprinos no Nordeste brasileiro utilizando técnica de imunoabsorção enzimática (ELISA-indireto)

ABSTRACT: Goat farming in the Northeast region of Brazil plays an important socioeconomic and strategic role. The rusticity of this activity in this region, allied with its rapid expansion in other states, has caused losses in its production chain in regional and national levels, caused by infectious diseases, especially caseous lymphadenitis (CL), a widespread goat herds disease which has been causing serious economic loss to this activity. Although CL has been detected as an endemic problem in the Brazilian Northeast, a comprehensive and more recent analysis of this prevalence in Brazilian goats is necessary. The objective of this study was to determine the frequency of anti-Corynebacterium pseudotuberculosis antibodies in five of nine states of the northeast region of Brazil. Serum samples were collected from 2571 goats from 218 farms in five states in the Northeast region of Brazil, collected between 2010 and 2012. The diagnosis of C. pseudotuberculosis infection was made using the ELISA-indirect technique. In 88.5% (193/218) of the investigated properties, at least one goat was seropositive for C. pseudotuberculosis, suggesting that the agent is widespread in Northeast herds, with the highest prevalence found in Rio Grande do Norte (94.5%) and the lowest one in the state of Sergipe (70.3%). A total of 783 (30.45%; 95% CI = 28.71-32.26%) seropositive goats were found, and the highest prevalence among animals was found in Piauí (41.4%) and the lowest in the state of Sergipe (22.5%). Out of a total of 279 breeding herds, 106 (37.99%) were seropositive, standing out the Rio Grande do Norte, with a total of 45.30%, and Piauí 46.8% of positive breeding for CL. A total of the 1420 tested matrices, 599 (42.1%) presented positive serology for C. pseudotuberculosis. Among the States, this distribution also remained similar, standing out Rio Grande do Norte with 47.5%, and Piauí with 59.5% of positive matrices for CL. Among 872 young goats evaluated, 78 (8.9%) were seropositive for CL, observing a statistical difference in the frequency of soropositivity obtained between adults and young adults (P 0.001). The necessity to diagnose the disease in goat herds in the Northeast region is reinforced for the possible implementation of disease control programs and more precise measures to manage CL along with goat farmers.

RESUMO: A caprinocultura na região Nordeste do Brasil desempenha importante função socioeconômica e estratégica. A rusticidade desta atividade nesta região, aliada a sua rápida expansão em outros estados, tem gerado perdas na sua cadeia produtiva a nível regional e nacional, causadas por doenças infecciosas, destacando-se a Linfadenite Caseosa (LC), afecção amplamente difundida nos rebanhos caprinos, acarretando sérios prejuízos econômicos à atividade. Embora LC tenha sido detectada como um problema endêmico no nordeste brasileiro, uma análise abrangente e mais recente desta prevalência nos rebanhos caprinos brasileiros se faz necessária. O objetivo desse estudo foi determinar a frequência de anticorpos anti-Corynebacterium pseudotuberculosis em cinco dos nove estados que compõem a região Nordeste do Brasil. Foram processadas amostras de soro de 2571 caprinos provenientes de 218 propriedades rurais oriundas de cinco estados da região Nordeste do Brasil, coletadas entre os anos de 2010 a 2012. O diagnóstico da infecção por C. pseudotuberculosis foi realizado pela técnica de ELISA-indireto. Em 88,5% (193/218) das propriedades investigadas, pelo menos um caprino foi soropositivo para C. pseudotuberculosis, sugerindo que o agente se encontra disseminado nos rebanhos do Nordeste, com a maior prevalência encontrada no Rio Grande do Norte (94,5%) e a menor no estado de Sergipe (70,3%). Foram identificados 783 (30,4%; IC 95%=28,7-32,2%) caprinos soropositivos, com a maior prevalência entre animais encontrada no Piauí (41,4%) e a menor no estado de Sergipe (22,5%). De um total de 279 reprodutores avaliados, 106 (37,9%) resultaram soropositivos, destacando-se o Rio Grande do Norte, com 45,30%, e Piauí com 46,8% dos reprodutores positivos para LC. Das 1420 matrizes testadas, 599(42,1%) apresentaram sorologia positiva para C. pseudotuberculosis. Entre os estados esta distribuição também se manteve semelhante, destacando-se o Rio Grande do Norte, com 47,5% e Piauí com 59,5% das matrizes positivos para LC. Entre os 872 caprinos jovens avaliados, 78 (8,9%) foram soropositivos para LC, observando-se uma diferença estatística na frequência de sopositividade obtidas entre os adultos e os jovens (P 0,001). Reforça-se a necessidade do diagnóstico da enfermidade em rebanhos caprinos da região Nordeste para possível implementação de programas de controle da doença e medidas mais precisas no manejo da LC junto aos criadores de caprinos.

Indigestão Vagal Incomum Em Caprino Associada A Abscesso Hepático Por Corynebacterium Pseudotuberculosis / Unusual Vagal Indigestion In Goat Associated With Liver Abscess By Corynebacterium Pseudotuberculosis / Indigestión Vagal Incomum En Caprino Asociados Al Absceso Del Hígado Por Corynebacterium Pseudotuberculosis

Relata-se indigestão vagal incomum em caprino, relacionada com a manifestação visceral da linfadenite caseosa, causada por Corynebacterium pseudotuberculosis. Inicialmente o animal apresentou timpanismo recidivante, seguido de diminuição do apetite, perda de peso, desidratação moderada, distensão abdominal e rúmen hipermotílico com movimentos fracos. Na laparoruminotomia exploratória observou-se aumento de volume do líquido peritoneal, aderências do retículo a órgãos adjacentes e aumento de volume e rigidez do fígado. Na necropsia, observou-se que a lesão hepática decorria de abscesso por C. pseudotuberculosis. Abscessos e aderências envolvendo a parede do retículo estão entre as principais causas de quadros de indigestão vagal em bovinos, o que sugere que, essas causas também estejam relacionadas com a indigestão na espécie caprina.(AU)

We report unusual vagal indigestion in goats, related to the visceral manifestation of caseous lymphadenitis, caused by Corynebacterium pseudotuberculosis. Initially, the animal presented recurrent bloat, followed by decreased appetite, weight loss, moderate dehydration, abdominal distention and hypermotile rumen with weak movements. In the exploratory laparoruminotomy, there was an increase in volume of the peritoneal fluid, adhesions of the reticulum to adjacent organs and increase of volume and stiffness of the liver. At necropsy, it was observed that the liver lesion was caused by C. pseudotuberculosis. Abscesses and adhesions involving the reticulum wall are among the main causes of vagal indigestion in bovines, suggesting that these causes are also related to indigestion in the goat species.(AU)

Se ha informado de la indigestión vagal incomun en las cabras, en relación con la manifestación visceral de la linfadenitis caseosa causada por Corynebacterium pseudotuberculosis. Inicialmente, el animal mostró hinchazón recurrente, seguido de disminución del apetito, pérdida de peso, deshidratación moderada, distensión abdominal y ruminal hipermotílico con movimientos débiles. En el laparoruminotomia exploratorio observado aumento del volumen de fluido peritoneal, la adhesión retícula a órganos adyacentes y la hinchazón y la rigidez del hígado. En la autopsia, se observó que el absceso lesión hepática se deriva de C. pseudotuberculosis. Abscesos y adherencias que involucran la pared del retículo se encuentran entre las principales causas de los marcos de la indigestión vagal en el ganado, lo que sugiere que estas causas también se relacionan con la indigestión en cabras.(AU)

Indigestão Vagal Incomum Em Caprino Associada A Abscesso Hepático Por Corynebacterium Pseudotuberculosis / Unusual Vagal Indigestion In Goat Associated With Liver Abscess By Corynebacterium Pseudotuberculosis / Indigestión Vagal Incomum En Caprino Asociados Al Absceso Del Hígado Por Corynebacterium Pseudotuberculosis

Relata-se indigestão vagal incomum em caprino, relacionada com a manifestação visceral da linfadenite caseosa, causada por Corynebacterium pseudotuberculosis. Inicialmente o animal apresentou timpanismo recidivante, seguido de diminuição do apetite, perda de peso, desidratação moderada, distensão abdominal e rúmen hipermotílico com movimentos fracos. Na laparoruminotomia exploratória observou-se aumento de volume do líquido peritoneal, aderências do retículo a órgãos adjacentes e aumento de volume e rigidez do fígado. Na necropsia, observou-se que a lesão hepática decorria de abscesso por C. pseudotuberculosis. Abscessos e aderências envolvendo a parede do retículo estão entre as principais causas de quadros de indigestão vagal em bovinos, o que sugere que, essas causas também estejam relacionadas com a indigestão na espécie caprina.

We report unusual vagal indigestion in goats, related to the visceral manifestation of caseous lymphadenitis, caused by Corynebacterium pseudotuberculosis. Initially, the animal presented recurrent bloat, followed by decreased appetite, weight loss, moderate dehydration, abdominal distention and hypermotile rumen with weak movements. In the exploratory laparoruminotomy, there was an increase in volume of the peritoneal fluid, adhesions of the reticulum to adjacent organs and increase of volume and stiffness of the liver. At necropsy, it was observed that the liver lesion was caused by C. pseudotuberculosis. Abscesses and adhesions involving the reticulum wall are among the main causes of vagal indigestion in bovines, suggesting that these causes are also related to indigestion in the goat species.

Se ha informado de la indigestión vagal incomun en las cabras, en relación con la manifestación visceral de la linfadenitis caseosa causada por Corynebacterium pseudotuberculosis. Inicialmente, el animal mostró hinchazón recurrente, seguido de disminución del apetito, pérdida de peso, deshidratación moderada, distensión abdominal y ruminal hipermotílico con movimientos débiles. En el laparoruminotomia exploratorio observado aumento del volumen de fluido peritoneal, la adhesión retícula a órganos adyacentes y la hinchazón y la rigidez del hígado. En la autopsia, se observó que el absceso lesión hepática se deriva de C. pseudotuberculosis. Abscesos y adherencias que involucran la pared del retículo se encuentran entre las principales causas de los marcos de la indigestión vagal en el ganado, lo que sugiere que estas causas también se relacionan con la indigestión en cabras.

NANOPARTÍCULAS DE PRATA BIOGÊNICAS E DE EXTRATOS DE PRÓPOLIS EM BIOFILMES DE CORYNEBACTERIUM PSEUDOTUBERCULOSIS

Santos, L. M. C. Nanopartículas de prata biogênicas e extratos de própolis em biofilmes de Corynebacterium pseudotuberculosis. 2021. 129p. Tese (Doutorado em Ciência Animal nos Trópicos) Escola de Medicina Veterinária e Zootecnia. Universidade Federal da Bahia, Salvador, 2021. A linfadenite caseosa é uma doença infecto-contagiosa, crônica e debilitante causada por Corynebacterium pseudotuberculosis. Esta enfermidade é caracterizada pelo desenvolvimento de granulomas encapsulados em linfonodos superficiais e viscerais, como também em diversos órgãos. O problema principal da LC deve-se a dificuldade de implantação de um tratamento eficaz, em vista de que o atual basea-se na drenagem e limpeza das lesões utilizando solução de iodo a 10%, acarretando assim altos riscos de contaminação ambiental. Além disso, o tratamento é geralmente refratário à terapia antibiótica. Portanto, é vital a busca de estratégias inovadoras, a partir de novas terapias antimicrobianas, para enfrentar o principal problema da LC. A partir deste cenário, objetivou-se com este estudo avaliar, a capacidade de formação de biofilme de C. pseudotuberculosis e determinar a susceptibilidade de isolados bacterianos formadores de biofilme aos extratos etanólico e supercrítico de própolis e a nanopartículas de prata (AgNP) biogênicas. Foram utilizadas as metodologias de microdiluição em caldo, atividade da disrupção do biofilme consolidado, interferência na formação de biofilme e imagens obtidas através da Microscopia Eletrônica de Varredura (MEV) para determinar a sensibilidade dos isolados aos agentes antimicrobianos. As AgNPs, bem como os extratos etanólico de própolis verde e supercrítico de própolis vermelha causarm disrupção do biofilme consolidado de C. pseudotuberculosis e foram eficazes na capacidade de interferir na formação inical do biofilme bacteriano. As AgNPs reduziram de forma significativa os biofilmes consolidados de C. pseudotuberculosis. As imagens da MEV mostram mudanças da morfologia do biofilme consolidado e poucas alterações estruturais das bactérias expostas aos extratos de própolis. Observamos disrupção completa do biofilme e severos danos estruturas das bactérias expostas a AgNPs. Conclui-se que as nanopartículas de prata e os extratos de própolis podem ser consideradas como um agente terapêutico promissor para o tratamento da linfadenite caseosa em pequenos ruminantes, com ações não somente em forma planctônica de C. pseudotuberculosis, mas também sobre seu biofilme associado.

Santos, L. M. C. biogenic silver nanoparticles and of própolis extracts in Corynebacterium pseudotuberculosis biofilms. 2021. 130p. Thesis (PhD in Tropical Animal Science) School of Veterinary Medicine and Zootechny. Federal University of Bahia, Salvador, 2021. Corynebacterium pseudotuberculosis is a Gram-positive and intracellular bacterium that causes caseous lymphadenitis (CL) in small ruminants, a chronic disease characterized by the development of encapsulated granulomas in superficial and visceral lymph nodes, as well as in various organs. An important feature of chronic bacterial infections is the development of biofilm. Considering this scenario, the aim of this study was to evaluate the biofilm formation capacity of C. pseudotuberculosis and to determine the susceptibility of biofilm-forming bacterial isolates to ethanolic and supercritical extracts of propolis, and to silver nanoparticles (AgNP). The broth microdilution methodology, the analysis of the disruption of the consolidated biofilm and the interference in the formation of biofilm assays were used to determine the sensitivity of the isolates to antimicrobials. Mature biofilms were visualized by Scanning Electron Microscopy. The ethanolic extracts of green propolis and supercritical red propolis were not effective in inhibiting the C. pseudotuberculosis consolidated biofilm but were able to interfere in the formation of bacterial biofilm. The AgNPs acted for 48 hours in C. pseudotuberculosis controlling the change between planktonic and sessile forms, decreasing the fixation and colonization in a microplate. The colloidal AgNP solution significantly reduced the consolidated biofilms of C. pseudotuberculosis. The SEM images showed that the AgNP were able to disrupt the bacterial biofilm, and that there were morphological changes in the bacteria present in the treated biofilms. It can be concluced that AgNPs con be considered a promising therapeutical agent in the treatment of the caseous lymphadenitis in small ruminants.

RESPOSTA IMUNE HUMORAL CONTRA Corynebacterium pseudotuberculosis EM CABRAS COM FALHA REPRODUTIVA, CORRELACIONADA À FUNÇÃO LUTEAL

Costa, J. O. Resposta imune humoral contra Corynebacterium pseudotuberculosis em cabras com falha reprodutiva, correlacionada à função luteal. Salvador, 2021. 3 8 p Dissertação (Mestrado em Ciência Animal nos Trópicos) Escola de Medicina Veterinária e Zootecnia Universidade Federal da Bahia, 2021. A Linfadenite Caseosa (LC) é uma doença infectocontagiosa de pequenos ruminantes que tem como agente etiológico a bactéria Corynebacterium pseudotuberculosis. Por se tratar de uma doença de alta morbidade, é de grande importância econômica na caprinocultura, pois observa-se queda na produção e danos reprodutivos em rebanhos acometidos. Neste estudo objetivou-se avaliar a resposta imune humoral contra C. pseudotuberculosis em fêmeas caprinas de um rebanho proveniente de região endêmica do estado da Bahia e correlacionar a infecção à função luteal, que consiste no exame ultrassonográfico do corpo lúteo e aos níveis plasmáticos de progesterona (P4). Dezesseis fêmeas caprinas foram diagnosticadas quanto à presença de anticorpos específico anti-C. pseudotuberculosis e divididas em 2 grupos: positivas para LC (GP) e negativas para LC (GN), com 8 animais cada. Os animais foram então submetidos à sincronização de estro e em seguida à monta controlada. As avaliações do corpo lúteo aconteceram 7 e 20 dias após a monta (D7 e D20) e as mensurações dos níveis séricos de P4 foram realizadas nos dias 7, 20 e 80 após a monta (D7, D20 e D80). Não foram encontradas diferenças significativas entre os dois grupos (P > 0,05) nas avaliações ultrassonográficas do corpo lúteo, e nem entre os níveis de P4 nas avaliações do D7 e D80, porém, identificou-se aumento dos níveis plasmáticos de P4 nos animais do GP em relação aos do GN no tempo D20 (P < 0,05), gerando uma correlação positiva entre a produção de anticorpos contra C. pseudotuberculosis e os níveis de progesterona plasmática (4,344 ± 11,694) destes animais. Estes resultados corroboram e complementam estudos prévios que esclarecem a interferência da LC no trato reprodutor de caprinos, demonstrando uma provável relação com os níveis de P4.

Costa, J. O. Humoral immune response against Corynebacterium pseudotuberculosis in goats with reproductive failure and correlation with the luteal function. Salvador, 2021. 3 8 p Dissertação (Mestrado em Ciência Animal nos Trópicos) Escola de Medicina Veterinária e Zootecnia Universidade Federal da Bahia, 2021. Caseous Lymphadenitis ( is an infectious disease that affects small ruminants, having the Corynebacterium pseudotuberculosis as its etiological agent. This disease presents a high morbidity rate and has a great economic impact on goat farming, leading to a reduced production of milk and meat and to reproductive losses. This study aimed to evaluate the immune humoral response against C. pseudotuberculosis in female goats from a herd of an endemic region in Bahia ( and its correlation with their luteal function through the ultrasonographic exam of corpus luteum, and progesterone ( plasmatic levels. Sixteen female goats were diagnosed for the presence of C. pseudotuberculosis specific antibodies and d ivided into 2 groups: CL positives animals ( and CL negatives animals ( with 8 individuals each They were submitted to oestrous synchronization followed by contr olled mating. Corpus luteum evaluations were performed on the 7th and 20th day s after mating (D7 and D20) and the serum levels of P4 were obtained for the 7th, 20th and 80th day s after mating ( D20 and D80). The ultrasonographic were not statistically different between the two groups P 0,05), as well as P4 plasmatic levels on D7 and D80 evaluation po ints However, an increase in progesterone serum levels on the GP group was identified on D20 P 0,05), indicating a positive correlation between C. pseudotuberculosis antibodies production an d the serum levels of progesterone in the infected animals (4,344 11,694). The result of this study corroborates and enhances previous studies pointing to C. pseudotuberculosis infection interferences on the reproductive tract of goats that may be related to p4 plasmatic levels.

Infecção por Corynebacterium pseudotuberculosis em equinos: aspectos microbiológicos, clínicos e preventivos / Corynebacterium pseudotuberculosis infection in horses: clinical, microbiological and prevention aspects

Corynebacterium pseudotuberculosis é o agente causador da linfadenite caseosa em caprinos e ovinos, sendo responsável por significativas perdas econômicas na ovinocaprinocultura mundialmente. Esta bactéria Gram-positiva também infecta equinos, causando desde quadros assintomáticos até infecções sistêmicas, podendo levar o animal a óbito. Especificamente no Brasil, não foram relatados casos de infecção em equinos, mas acredita-se que, devido à convivência de pequenos ruminantes infectados com equinos em diversas propriedades rurais, seja natural que ocorra a infecção desses animais. A presente revisão tem como objetivo fornecer informações sobre a bactéria C. pseudotuberculosis, sobre os aspectos epidemiológicos e clínicos da infecção em equídeos, bem como sobre técnicas de manejo para sua prevenção.(AU)

Corynebacterium pseudotuberculosis is the etiologic agent of caseous lymphadenitis in sheep and goats, an infectious disease that is responsible for significant economic losses in small ruminants breeding units worldwide. This Gram-positive bacterium can infect horses, causing symptomatic disease to systemic infections, which can lead to animals' death. Specifically in Brazil, there are no scientific records of equine infections, but it is believed that, due to the maintenance of infected small ruminants in close association to horses in many properties, the infection of horses may be a reality. The present work had the objective to present information on the bacteria C. pseudotuberculosis, on the epidemiological and clinical aspects of the infection in horses, as well as information about breeding procedures that can be adopted in order to prevent the infection.(AU)

Caracterização epidemiológica da linfadenite caseosa em pequenos ruminantes no Nordeste do Brasil

Essa tese é composta por três artigos. No Capítulo I foi determinada a soroprevalência da infecção por Corynebactetium pseudotuberculosis em ovinos no Nordeste brasileiro por meio da técnica de ELISA (enzyme linked immunosorbent assay) indireto. Foram coletadas amostras de 2.638 ovinos provenientes de 223 propriedades de cinco estados (Ceará, Paraíba, Piauí, Rio Grande do Norte, e Sergipe). Dos 2.638 ovinos testados, 996 (37,76%; IC 95% = 35,93 39,62%) foram sororeativos e das 223 propriedades avaliadas, 210 (94,17%; IC 95% = 90,28 96,56%) resultaram positivas. O teste de ELISA-indireto apresentou sensibilidade e especificidade de 91,84% e 97,01%, respectivamente, demonstrando ser útil no diagnóstico da linfadenite caseosa (LC) em ovinos. A infecção por C. pseudotuberculosis, encontra-se disseminada nos rebanhos ovinos dos estados da região Nordeste do Brasil. No Capítulo II foram avaliados os fatores associados à sororeatividade para C. pseudotuberculosis na região Nordeste. Foram colhidas amostras de 2.312 ovinos originados de 196 propriedades estudadas no Capítulo I. Foram identificadas 93,88% (184/196) das propriedades e 37,46% (866/2.312) dos animais com resultado sorológico positivo para C. pseudotuberculosis. Animais de raça pura (PR = 1,189; p = 0,017), origem do reprodutor de exposição (PR = 1,192; p = 0,020), separar as crias das mães (PR = 1,132; p = 0,048), origem da água de lagoa (PR = 1,365; p = 0,002) e eliminar animais infectados como medida de controle (PR = 1,263; p = 0,027) foram identificados com fatores associados à soropositividade. Recomendam-se medidas de incrementação do controle da doença nos animais de raças puras e que participam de aglomerações animais, que visem reduzir a contaminação ambiental pelo agente, o estresse no manejo de desmama, o descarte adequado dos infectados e isolamento com inspeção em animais recém adquiridos antes de introduzi-los aos rebanhos, bem como incentivar a utilização do diagnóstico precoce e da vacinação para diminuir a ocorrência da doença. No Capítulo III foi conduzido um estudo de soroprevalência da linfadenite caseosa em caprinos comercializados em feira de animais vivos no semiárido nordestino. Foram coletadas amostras de 233 caprinos e realizado diagnóstico por meio da técnica de ELISA-indireto. Foram identificados 87 (37,34%; IC 95% = 31,38 43,71%) caprinos sororeativos para C. pseudotuberculosis. A infecção por C. pseudotuberculosis está presente nos rebanhos caprinos comercializados. São recomendadas políticas de incentivo ao acesso do diagnóstico precoce da doença pelos produtores e a implementação de um programa de controle da LC com o objetivo de reduzir a alta prevalência observada nas propriedades e nos animais.

This thesis consists of three articles. In Chapter I, seroprevalence of C. pseudotuberculosis infection in sheep in Northeastern Brazil was determined by indirect enzyme linked immunosorbent assay (i-ELISA). Samples were collected from 2,638 sheep from 223 farms of five states (Ceara, Paraiba, Piaui, Rio Grande do Norte, and Sergipe). From 2,638 sheep tested, 996 (37.76%; 95% CI = 35.93 - 39.62%) were seroreactives and from 223 properties evaluated, 210 (94.17%; 95% CI = 90.28 - 96, 56%) were positive. The i-ELISA test showed sensitivity and specificity of 91.84% e 97.01%, repectively, proving to be useful in diagnosis of caseous lymphadenitis (CLA) in sheep. In Chapter II, factors associated with seroreactivity for C. pseudotuberculosis in the Northeast region were evaluated. Samples were collected from 2,312 sheep from 196 farms studied in Chapter I. It was identified 93.88% (184/196) of the properties and 37.46% (866/2312) animals with positive serological result for C. pseudotuberculosis. Purebred animals (PR = 1.189; p = 0.017), source of exposure breeder (PR = 1.192; p = 0.020), separate lambs from ewes (PR = 1.132; p = 0.048), lakes water source ( PR = 1.65; p = 0.002) and eliminating infected animals as a control measure (PR = 1.263; p = 0.027) were identified with factors associated with seropositivity. Measures to increase disease control are recommended in purebred animals that participate in agglomerations of animals, to reduce environmental contamination by the agent, stress in handling weaning, proper disposal of the infected and isolation with inspection on recently acquired animals before introducing them to herds, as well as to encourage the use of early diagnosis and vaccination to reduce the occurrence of the disease. In Chapter III a seroprevalence study of caseous lymphadenitis was conducted in goats sold in animals fair on northeastern semiarid. Samples were collected from 233 goats and the diagnostic was performed by the i-ELISA. Eighty-seven (37.34%; 95% CI = 31.38 - 43.71%) seroreacitive goats were identified. C. pseudotuberculosis infection is present in marketed goat herds. Policies to encourage early access to disease diagnosis by producers and the implementation of a CLA control program are recommended to reduce the high prevalence observed in farms and animals.

Development of an indirect ELISA to detect Corynebacterium pseudotuberculosis specific antibodies in sheep employing T1 strain culture supernatant as antigen / Desenvolvimento de ELISA indireto para detectar anticorpos específicos contra Corynebacterium pseudotuberculosis em ovinos utilizando o supernadante de cultura da cepa T1 como antígeno

Corynebacterium pseudotuberculosis is the etiologic agent of caseous lymphadenitis (CLA), a chronic disease that affects goats and sheep, characterized by granuloma formation in subcutaneous and internal lymph nodes. CLA causes significant economic losses to commercial goat herds. In this study, we aimed to test secreted antigens secreted from T1 strain bacteria grown in brain heart infusion (BHI) broth in an indirect ELISA system to determine the presence of specific immunoglobulins against C. pseudotuberculosis. We analyzed the BHI antigen electrophoretic profile and the recognition pattern by infected sheep sera samples. The ELISA results were compared with multiplex PCR assay and IFN-gamma production. The ELISA was able to discriminate between negative and positive animals, with a sensitivity of 89% and a specificity of 99%, using microbiological isolation as gold standard. When this assay was compared with multiplex PCR and specific IFN-gamma quantification, six discrepant results were found among thirty-two samples. We concluded that the ELISA using antigens secreted from C. pseudotuberculosis T1 strain growth in BHI broth culture can be used for the serodiagnosis of CLA in sheep. (AU)

Corynebacterium pseudotuberculosis é o agente etiológico da linfadenite caseosa (LC) uma doença crônica que afeta ovinos e caprinos caracterizada pela formação de granulomas em linfonodos. A LC causa perdas econômicas significativas em criações de pequenos ruminantes. Este trabalho teve como objetivo testar antígenos secretados da cepa T1 da bactéria em um sistema de ELISA indireto para detecção de anticorpos específicos contra C. pseudotuberculosis. O perfil eletroforético do antígeno foi analisado, bem como o padrão de reconhecimento por soros de animais infectados. Os resultados do ELISA foram comparados com ensaio de multiplex PCR e com teste de indução de produção específica de IFN-gama. O ELISA foi capaz de discriminar animais positivos de animais negativos, com sensibilidade de 89% e especificidade de 99%, usando o isolamento microbiológico como padrão ouro. Quando o ensaio foi comparado com o multiplex PCR e a produção específica de IFN-gama, somente seis resultados discrepantes foram encontrados em trinta e duas amostras. Pode-se concluir que o ensaio de ELISA desenvolvido pode ser utilizado com alto grau de confiança para o diagnóstico da LC em ovinos. (AU)

DIAGNÓSTICO CLÍNICO DA LINFADENITE CASEOSA EM PEQUENOS RUMINANTES NOS REBANHOS DA REGIONAL DO BAIXO PARNAÍBA COMO CONTRIBUIÇÃO PARA O PROGRAMA NACIONAL DE SANIDADE DE CAPRINOS E OVINOS (PNSCO) NO MARANHÃO

O agente causador da linfadenite caseosa em caprinos e ovinos é o Corynebacterium pseudotuberculosis, sendo responsável por significativas perdas econômicas na ovinocaprinocultura mundial. Este trabalho teve como objetivo realizar e determinar através do estudo clínico, a ocorrência e localização anatômica dos linfonodos superficiais com alterações (abscessos e/ou cicatrizes e/ou feridas em processo de cicatrização), sugestivas de Linfadenite Caseosa (LC) em pequenos ruminantes. Foram realizados 5.130 exames clínicos em caprinos e ovinos de 82 rebanhos distribuídos em 12 municípios da Regional de Chapadinha. A comparação da ocorrência da doença entre as espécies avaliadas, bem como a associação à localização do linfonodo superficial mais acometido, faixa etária, sexo e georreferenciamento, nos forneceu resultados estatisticamente significativos para avaliarmos as perdas econômicas ocasionadas pela doença. A ocorrência de linfadenite clínica em caprinos e ovinos foi de 4,5% (174/3890) e de 1,5% (19/1240) respectivamente. Em caprinos, as principais lesões estavam nos linfonodos pré-escapulares em 25% (51/205), seguido do linfonodo retro faríngeo com 20%(41/205), pré crural em 19%(39/205), cervical 10,5%(21/205), submandibular 9%(19/205), parotídeo 7%(15/205), axilar 4,5%(9/205), mamário 4%(8/205), por fim o poplíteo com 1%(2/205). Nos ovinos, apenas 23 lesões/cicatrizes foram encontradas e a frequência predominante também foi no linfonodo pré escapular com 52%(12/23), seguido do cervical com 21,5%(5/23), pré crural em 17,5%(4/23), do parotídeo com 4,5%(1/23) e do submandibular 4,5%(1/23), os linfonodos retrofaríngeo, axilar, mamário e poplíteo não apresentaram nenhuma lesão 0%. Fica evidente a necessidade de estudos futuros para avaliar as perdas econômicas ocasionadas pela doença.

The responsible agent of Caseous lymphadenitis in ovine and caprine animals is Corynebacterium pseudotuberculosis, being responsible for great economical loss in sheep and goat farming over the world.The research was aimed at finding out and determining, through clinical study, the topographic occurrence and distribution of superficial lymph nodes with changes (abscesses and / or scars and / or wounds in the healing process) suggestive of Caseous Lymphadenitis (LC) in small ruminants animals. 5,105 clinical tests were carried out in ovine and caprine animals in 82 properties distributed in 12 towns in this region, the comparison of the disease occurrence among assessed species, as well as the association, the location of most affected superficial lymph node, age range, gender, geographic reference, have provided us significant statistics results, to evaluate economic losses caused by the disease. The occurrence of animals with macroscopic changes in superficial lymph nodes clinically assessed in caprine and ovine animals were 4.5% (174/3890) and 1.5% (19/1240), respectively. In caprine animals , the main lesions were located in the pre-scapular lymph nodes in 25% (51/205), followed by the retro pharyngeal lymph nodes with 20% (41/205), pre-crural with 19% (39/205), cervical 10.5% (21/205), submandibular node 9% (19/205), parotid 7% (15/205), axillary 4.5% (9/205), mammary 4% (8/205), fand the popliteal with 1% (2/205). Among ovine animals, only 23 lesions / scars were found, and their main frequency was in the pre-scapular lympho node too with 52% (12/23), followed by the cervical with 21.5% (5/23), pre-crural with 17.5% (4/23), parotid with 4.5% (1/23) and submandibular 4.5% (1/23), the lympho retropharyngeal, axillary, mammary and popliteal did not present any lesion 0%. It is evident the necessity of future studies to evaluate the economic loss caused by the disese.

Reposta imune humoral e celular em camundongos e cinética de anticorpos e proteínas de fase aguda em caprinos imunizados com uma vacina atenuada liofilizada contra Linfadenite Caseosa

A Linfadenite Caseosa é uma doença infecto-contagiosa crônica que acomete os caprinos e ovinos, caracterizada pela presença de granulomas nos linfonodos superficiais e internos causada pela bactéria Corynebacterium pseudotuberculosis. O objetivo do trabalho foi avaliar a resposta imune humoral e celular e a resposta inata de uma vacina liofilizada produzida a partir da cepa 1002, utilizando os modelos murino e caprino. Para tanto, 50 camundongos BALB/c foram divididos em cinco grupos (n=10/grupo) que receberam as seguintes doses de antígeno vacinal: G - controle solução salina, G1- 106UFC/mL, G2- 106 UFC/mL revacinado com 21 dias; G3-107UFC/mL; G4-107UFC/mL revacinados com 21 dias. A resposta humoral foi obtida pela determinação das concentrações de IgG total através dos ELISAS com antígenos BHI, BMD e Q5 e resposta celular através das dosagens de óxido nítrico e citocinas dos perfis Th1 (IFN-, IL2 e TNF) e Th2 (IL-4, IL-5). No modelo caprino, 100 cabras foram divididas em cinco grupos (n=20/grupo) que receberam as seguintes doses de antígeno vacinal: G - controle solução salina, G1 - 107UFC/mL, G2 -107 UFC/mL revacinado com 21 dias; G3 - 106UFC/mL; G4 - 106UFC/mL revacinados com 21 dias. A resposta humoral foi avaliada pela determinação das concentrações de IgG total através do ELISA indireto com antígeno BMD e a resposta inata pela determinação das concentrações de proteínas de fase aguda (ceruplasmina, haptoglobina, glicoproteína ácida e albumina). No modelo murino observou-se resposta humoral com produção de IgG total em todos os grupos não havendo diferenças significativas entre eles. Na resposta celular, os grupos 1, 2 e 3 mostraram melhor produção de óxido nítrico quando comparados com os grupos controle e 4 (p<0,05), os três antígenos não mostraram diferenças estatisticamente significativas na estimulação da produção de óxido nítrico. Na produção de citocinas não foi verificada diferenças significantes entre os grupos nem entre os perfis de regulação Th1/Th2. No modelo caprino verificou-se produção de IgG total ao longo de doze meses, entretanto não houve diferenças significativas entre os grupos testados. Houve aumento nas concentrações séricas de proteínas aguda (ceruplasmina, haptoglobina) demonstrando possivelmente, estimulação da resposta inata. O estudo evidenciou que a vacina produzida a partir da cepa 1002, liofilizada teve a capacidade de estimular a resposta imune humoral e celular no modelo murino e a resposta humoral no modelo caprino constituindo-se como uma alternativa para o controle da linfadenite caseosa.

Caseous Lymphadenitis is a chronic infectious disease that affects goats and sheep, characterized by the presence of granulomas in the superficial and internal lymph nodes caused by the bacterium Corynebacterium pseudotuberculosis. The objective of this work was to evaluate the humoral and cellular immune response and the inate response of a vaccine produced from lyophilized strain 1002, using the murine and goat models. For this, 50 balb / c mice were divided in five groups (n = 10 / group) that received the following doses of vaccine antigen: G-control saline solution; G1- 106UFC/mL, G2-106 UFC/mL revaccinated with 21 days; G3-107UFC/mL; G4-107UFC/mL revaccinated with 21 days. The humoral response was determined through ELISAs with BHI, BMD and Q5 antigens and cellular response through nitric oxide and Th1 (IFN-, IL2 and TNF) and Th2 (IL-4, IL-5) cytokine dosages. In the goat model, 100 goats were divided in five groups (n = 20 / group) that received the following doses of vaccine antigen: G - control saline solution G1- 107UFC/mL, G2-107 UFC/mL revaccinated with 21 days; G3- 106UFC/mL; G4- 106UFC/mL revaccinated with 21 days. The humoral response was evaluated through the indirect ELISA with BMD antigen and the inate response through the serum dosage of acute phase proteins (ceruplasmin, haptoglobin, acid glycoprotein, and albumin). In the murine model, humoral response with total IgG production was observed in all groups, with no significant differences between them. In the cellular response, groups 1, 2 and 3 showed better nitric oxide production when compared to the control and 4 (p <0.05) groups, the three antigens showed no statistically significant differences in the stimulation of nitric oxide production. Cytokine production didnt show significant differences between the groups nor between Th1 /Th2 regulation profiles. In the goat model there was total IgG production over twelve months, however there were no significant differences between the tested groups. There was an increase in serum concentrations of acute proteins (ceruplasmin, haptoglobin) possibly demonstrating stimulation of the innate response. The study demonstrated that the vaccine produced from strain 1002, lyophilized has the ability to stimulate the humoral and cellular immune response in the model and the humoral response in the goat model constituting as an alternative for the control of caseous lymphadenitis.

AVALIAÇÃO DE PERDA ECONÔMICA POR LINFADENITE CASEOSA EM CAPRINOS ENCAMINHADOS A ABATEDOURO NO SEMIÁRIDO BRASILEIRO

A Linfadenite Caseosa (LC) causada pelo Corynebacterium pseudotuberculosis provoca perda econômica por condenação de carcaça em abatedouros, comprometendo a caprinocultura. Há alta prevalência no rebanho nacional, resultando em prejuízos por gastos com tratamento, queda de produção, condenação de leite, carcaça, órgãos, vísceras e desvalorização da pele. Buscou-se com este trabalho caracterizar e dimensionar o prejuízo financeiro associado à LC por condenação na linha de abate. Desenvolveu-se a pesquisa no Abatedouro Municipal da cidade de Patos, Estado da Paraíba, Brasil, onde ocorre abate de caprídeos provenientes desta região geográfica intermediária. No ano de 2017 foram abatidos 3.662 animais, uma média de 305/mês. Durante o período de estudo, março a agosto do mesmo ano, avaliou-se 304 caprinos sem padrão racial definido, ambos os sexos e idades. No exame ante mortem foram submetidos à inspeção e palpação de linfonodos superficiais; post mortem, órgãos e vísceras. O material caseoso coletado foi submetido à análise microbiológica para diagnóstico. Para cálculo de prejuízo se adotou o preço médio em Real [R$ 17,39 (IC: 16,45 - 18,33)] do quilograma (Kg) da carne caprina e da buchada de bode (obtido por meio de pesquisa em frigoríficos e supermercados da cidade de Patos). Isolou-se C. pseudotuberculosis em 84,42% das amostras (65/77), o que representa 21,38% (65/304) dos indivíduos avaliados. As fêmeas responderam por 13,16% da prevalência, enquanto os machos, 8,22%. Dos acometidos, 11,51% apresentaram a forma clínica, enquanto 9,87% a subclínica; destes, 1,31% tiveram simultaneamente forma clínica e comprometimento interno. Os linfonodos pré-crurais 25,71%, mamários 11,43% e pré-escapulares 11,43% foram mais afetados; internamente, fígado 63,33%, pulmão 13,33% e linfonodo do mediastino médio 10%. Comprovou-se como fatores de risco a presença de lesão/cicatriz cutânea (Odds ratio = 2,394; IC 95% = 1,371 - 4,182; p = 0,003) e o sexo (fêmea) (Odds ratio = 1,845; IC 95% = 1,053 - 3,232; p = 0,044). Considerando o peso médio de carcaça (11,485 Kg), órgãos (1,085 Kg) e vísceras (2,013 Kg), houve produção média de 4.447,815 Kg/mês, resultando em R$ 77.347,50. As condenações subtraíram mensalmente 270,872 Kg, equivalente a R$ 4.710,46. Da produção anual (53.373,780 Kg), houve redução de 3.250,464 Kg por descarte, causando decréscimo de R$ 56.525,57. Atribui-se à afecção um impacto negativo de 6,09% na receita. A LC se encontra presente em caprinos do semiárido encaminhados ao abate, acarretando considerável detrimento financeiro, reforçando a necessidade de implementar medidas de controle para essa doença visando maior retorno financeiro à atividade, bem como maior atenção à inspeção nos abatedouros por parte dos fiscais sanitários.

Caseous Lymphadenitis (CL) caused by Corynebacterium pseudotuberculosis causes economic loss due to condemnation of carcass in slaughterhouses, compromising goat breeding. There is a high prevalence in the national herd, resulting in losses due to treatment expenses, production drop, condemnation of milk, carcass, organs, viscera and devaluation of the skin. This work aimed to characterize and size the financial loss associated with CL by condemnation in the slaughter line. The research was carried out in the Municipal Abattoir of the city of Patos, Paraíba, Brazil, where there is slaughter of caprines from this region. In the year 2017, 3.662 animals were slaughtered, an average of 305/month. During the study period, from March to August of the same year, 304 goats with no defined racial pattern were evaluated, both sexes and ages. The ante-mortem examination was submitted to inspection and palpation of superficial lymph nodes; post mortem, organs and viscera. The collected caseous material was submitted to microbiological analysis for diagnosis. The average price of the kilogram (Kg) of goat meat and "buchada de bode" (obtained by means of research in refrigerators and supermarkets in the city of Patos) was used to calculate the loss in the Real [R$ 17,39 (CI: 16,45 - 18,33)]. C. pseudotuberculosis was isolated in 84,42% of the samples (65/77), representing 21,38% (65/304) of the evaluated individuals. Females accounted for 13,16% of the prevalence, while males, 8,22%. Of those affected, 11,51% presented the clinical form, while 9,87% presented the subclinical form; of these, 1,31% had both clinical form and internal impairment. Pre-crural lymph nodes affected 25,71%, mammary nodes 11,43% and pre-scapular 11,43% were more affected; internally, liver 63,33%, lung 13,33% and medium mediastinal lymph node 10%. The presence of lesion/cutaneous scar (Odds ratio = 2,394, CI 95% = 1,371 - 4,182; p = 0,003) and female sex (Odds ratio = 1,845, CI 95% = 1,053 - 3,232; p = 0,044). Considering the average carcass weight (11,485 Kg), organs (1,085 Kg) and viscera (2,013 Kg), there was an average production of 4.447,815 Kg/month, resulting in R$ 77.347,50. The convictions subtracted monthly 270,872 Kg, equivalent to R$ 4.710,46. Of the annual production (53.373,780 Kg), there was a reduction of 3.250,464 Kg per discard, causing a decrease of R$ 56.525,57. A negative impact of 6,09% on revenue is attributed to the condition. CL is present in semi-arid caprines sent to slaughter, causing considerable financial detriment, reinforcing the need to implement control measures for this disease aiming at a greater financial return to the activity, as well as greater attention to inspections in the abattoirs by health inspectors.

Synergistic haemolytic activity and its correlation to phospholipase D productivity by Corynebacteruim pseudotuberculosis Egyptian isolates from sheep and buffaloes

Fourteen isolates of Corynebacteruim pseudotuberculosis of them 7 were isolated from sheep with Caseous Lymphadenitis "biotype 1" and 7 isolated from buffaloes with Oedematous Skin Disease "biotype 2". All isolates were identified by standard microbiological techniques and by polymerase chain reaction targeting, 16S rRNA and phospholipase D genes. Synergistic haemolytic titers of all isolates were assayed by plate technique. The presences of phospholipase D gene in supernatants of all isolates were performed by sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis immunoblot technique by using hyperimmune serum raised in rabbit immunized with recombinant phospholipase D gene antigen. The concentration of phospholipase D gene was assayed by scanning the bound phospholipase D gene with specific antibodies that appeared at 31.5 kDa. Results presented that there is no correlation between titer of Synergistic haemolytic activity and the actual phospholipase D genes concentration in culture supernatants. Also results presented that Synergistic haemolytic activity and phospholipase D genes produced by biotype 2 (buffalo isolates) was generally higher than those by biotype 1(sheep isolates).

Prevalência de anticorpos contra a linfadenite caseosa em criações comerciais de ovinos no Distrito Federal, Brasil

The objective of this study was to determinate the seroprevalence of caseous lymphadenitis (CL) in commercial sheep herds in the Federal District, Brazil. One thousand and twenty-eight serum samples were collected, between March and June 2004, from all the properties (32) with at least 20 adult females in the flock. The seroprevalence of caseous lymphadenitis was determined by ELISA with secreted proteins of Corynebacterium pseudotuberculosis. The real prevalence value for the animals was 44.0% (CI 95: 41.0; 47.0), and 50.0% of the 32 herds had at least one animal seropositive for CL. Therefore, these data show that CL is fairly widespread in commercial flocks of sheep in the Federal District.

O objetivo deste trabalho foi determinar a prevalência de anticorpos contra linfadenite caseosa (LC) em rebanhos ovinos comerciais do Distrito Federal (DF). Foram coletadas 1.028 amostras de soro entre março e junho de 2004, de todas as propriedades (32) do Distrito Federal com pelo menos 20 fêmeas adultas no rebanho. A soroprevalência da linfadenite caseosa foi determinada por ELISA com proteínas secretadas de Corynebacterium pseudotuberculosis. Cinquenta por cento das 32 propriedades apresentaram pelo menos um animal soropositivo para o LC e a prevalência real para animais foi de 44,0% (IC 95: 41,0; 47,0), portanto, esses dados sugerem que a LC está presente em rebanhos ovinos comerciais no Distrito Federal.