Hemostatic evaluation of rabbits envenomed with Bothrops alternatus treated with anti-bothropic serum, desmopressin and tranexamin acid / Avaliação hemostática de coelhos envenenados com Bothrops alternatus e tratados com soro antibotrópico, desmopressina e ácido tranexâmico

In Brazil, snakes from the Bothrops genus are responsible for thousands of accidents, and their venoms are mainly composed of proteolytic enzymes. Although the antibothropic serum produced by the Brazilian Institutes is remarkably efficient, more studies are necessary, especially in veterinary medicine. The venom contain enzymes and non-enzymatic proteins that interfere with hemostasis leading to hemorrhage or even thrombosis. Possible treatment associations with known bothropic antivenom were the reason for the development of the present study. The aim of this study was to evaluate hemostasis alterations caused by Bothrops alternatus venom in rabbits followed by treatments with anti-bothropic serum, tranexamic acid and desmopressin. Twenty New Zealand rabbits were distributed into five groups (n=4) that were experimentally envenomed with 150mcg/kg of B. alternatus venom via intramuscular injection and treated as follow: Group 1 (G1) was the positive control and received venom and PBS/BSA; Group 2 (G2) was treated with tranexamic acid; Group 3 (G3) with desmopressin; Group 4 (G4) with tranexamic acid and anti-bothropic serum; and Group 5 (G5) with anti-bothropic serum and desmopressin. Blood samples were collected before venom administration, and one, four, eight and 12 hours after, for Partial activated partial thromboplastin time, Prothrombin Time, Thrombin Time and fibrinogen evaluation. Thrombin generation (TG) test was carried out with a pool of samples from final times (8 and 12h). At the end of 12h, all animals were euthanized and necropsy was conducted. Samples from muscle tissue, heart, lungs and kidney were analyzed. Classic coagulation tests showed no significant differences amongst groups and times. However, TG indicated that the venom causes a hypocoagulability state, which was not reversed by proposed treatments. Histology showed muscle inflammation, hemorrhage and necrosis, as well as hemorrhage in other tissues with no differences amongst groups. B. alternatus envenomation causes hypocoagulability detected by TG assay, but not through classical coagulation tests. The use of tranexamic acid and desmopressin for hemostasis stabilization after inoculation of the venom did not show advantage in coagulation restoration.(AU)

No Brasil, as serpentes do gênero Bothrops são responsáveis por milhares de acidentes, e seus venenos são compostos principalmente de enzimas proteolíticas. Embora o soro antiofídico produzido pelos institutos brasileiros seja notavelmente eficiente, mais estudos são necessários, especialmente na medicina veterinária. O veneno contem enzimas e proteínas não-enzimáticas que interferem com a hemostasia levando a hemorragias ou trombose. A associação de outros tratamentos ao soro antibotrópico foi a razão para o desenvolvimento do presente estudo. O objetivo deste estudo foi avaliar as alterações da hemostasia causadas pelo veneno de Bothrops alternatus em coelhos, após tratamento com soro antibotrópico, ácido tranexâmico e desmopressina. Vinte coelhos da Nova Zelândia foram distribuídos em cinco grupos (n = 4) que foram submetidos a experimentos com 150mcg/kg de veneno de B. alternatus por injeção intramuscular. O Grupo 1 (G1) foi o controle positivo e recebeu veneno e PBS / BSA, enquanto o Grupo 2 (G2) foi tratado com ácido tranexâmico, o Grupo 3 (G3) com desmopressina, o Grupo 4 (G4) com ácido tranexâmico e soro antibotrópico, e o Grupo 5 (G5) com soro antibotrópico e desmopressina. As amostras de sangue foram coletadas antes da administração do veneno, e uma, quatro, oito e 12 horas após os tratamentos para realização de tempo de tromboplastina parcial ativada parcial (TTPa), tempo de protrombina (TP), tempo de trombina (TT) e mensuração de fibrinogênio. Para o ensaio de geração de trombina (TG) foi realizado com um pool de amostras nos tempos finais (8 e 12h). Ao final das 12h, todos os animais foram sacrificados e a necropsia foi realizada. Amostras de tecido muscular, coração, pulmões e rins foram analisadas. Os testes TTPa, TP, TT e fibrinogênio não mostraram diferenças significativas entre os grupos e os tempos. No entanto, o TG indicou que o veneno causa um estado de hipocoagulabilidade, que não foi revertido pelos tratamentos propostos. Na histologia, foram observadas inflamação muscular, hemorragia e necrose, além de hemorragia em outros tecidos, sem diferenças entre os grupos. O envenenamento por B. alternatus causa hipocoagulabilidade detectada mais precocemente pelo teste de geração de trombina. O uso de ácido tranexâmico e desmopressina para estabilização da hemostasia após a inoculação do veneno não mostrou vantagem na restauração da coagulação.(AU)

Hemostatic evaluation of rabbits envenomed with Bothrops alternatus treated with anti-bothropic serum, desmopressin and tranexamin acid / Avaliação hemostática de coelhos envenenados com Bothrops alternatus e tratados com soro antibotrópico, desmopressina e ácido tranexâmico

In Brazil, snakes from the Bothrops genus are responsible for thousands of accidents, and their venoms are mainly composed of proteolytic enzymes. Although the antibothropic serum produced by the Brazilian Institutes is remarkably efficient, more studies are necessary, especially in veterinary medicine. The venom contain enzymes and non-enzymatic proteins that interfere with hemostasis leading to hemorrhage or even thrombosis. Possible treatment associations with known bothropic antivenom were the reason for the development of the present study. The aim of this study was to evaluate hemostasis alterations caused by Bothrops alternatus venom in rabbits followed by treatments with anti-bothropic serum, tranexamic acid and desmopressin. Twenty New Zealand rabbits were distributed into five groups (n=4) that were experimentally envenomed with 150mcg/kg of B. alternatus venom via intramuscular injection and treated as follow: Group 1 (G1) was the positive control and received venom and PBS/BSA; Group 2 (G2) was treated with tranexamic acid; Group 3 (G3) with desmopressin; Group 4 (G4) with tranexamic acid and anti-bothropic serum; and Group 5 (G5) with anti-bothropic serum and desmopressin. Blood samples were collected before venom administration, and one, four, eight and 12 hours after, for Partial activated partial thromboplastin time, Prothrombin Time, Thrombin Time and fibrinogen evaluation. Thrombin generation (TG) test was carried out with a pool of samples from final times (8 and 12h). At the end of 12h, all animals were euthanized and necropsy was conducted. Samples from muscle tissue, heart, lungs and kidney were analyzed. Classic coagulation tests showed no significant differences amongst groups and times. However, TG indicated that the venom causes a hypocoagulability state, which was not reversed by proposed treatments. Histology showed muscle inflammation, hemorrhage and necrosis, as well as hemorrhage in other tissues with no differences amongst groups. B. alternatus envenomation causes hypocoagulability detected by TG assay, but not through classical coagulation tests. The use of tranexamic acid and desmopressin for hemostasis stabilization after inoculation of the venom did not show advantage in coagulation restoration.(AU)

No Brasil, as serpentes do gênero Bothrops são responsáveis por milhares de acidentes, e seus venenos são compostos principalmente de enzimas proteolíticas. Embora o soro antiofídico produzido pelos institutos brasileiros seja notavelmente eficiente, mais estudos são necessários, especialmente na medicina veterinária. O veneno contem enzimas e proteínas não-enzimáticas que interferem com a hemostasia levando a hemorragias ou trombose. A associação de outros tratamentos ao soro antibotrópico foi a razão para o desenvolvimento do presente estudo. O objetivo deste estudo foi avaliar as alterações da hemostasia causadas pelo veneno de Bothrops alternatus em coelhos, após tratamento com soro antibotrópico, ácido tranexâmico e desmopressina. Vinte coelhos da Nova Zelândia foram distribuídos em cinco grupos (n = 4) que foram submetidos a experimentos com 150mcg/kg de veneno de B. alternatus por injeção intramuscular. O Grupo 1 (G1) foi o controle positivo e recebeu veneno e PBS / BSA, enquanto o Grupo 2 (G2) foi tratado com ácido tranexâmico, o Grupo 3 (G3) com desmopressina, o Grupo 4 (G4) com ácido tranexâmico e soro antibotrópico, e o Grupo 5 (G5) com soro antibotrópico e desmopressina. As amostras de sangue foram coletadas antes da administração do veneno, e uma, quatro, oito e 12 horas após os tratamentos para realização de tempo de tromboplastina parcial ativada parcial (TTPa), tempo de protrombina (TP), tempo de trombina (TT) e mensuração de fibrinogênio. Para o ensaio de geração de trombina (TG) foi realizado com um pool de amostras nos tempos finais (8 e 12h). Ao final das 12h, todos os animais foram sacrificados e a necropsia foi realizada. Amostras de tecido muscular, coração, pulmões e rins foram analisadas. Os testes TTPa, TP, TT e fibrinogênio não mostraram diferenças significativas entre os grupos e os tempos. No entanto, o TG indicou que o veneno causa um estado de hipocoagulabilidade, que não foi revertido pelos tratamentos propostos. Na histologia, foram observadas inflamação muscular, hemorragia e necrose, além de hemorragia em outros tecidos, sem diferenças entre os grupos. O envenenamento por B. alternatus causa hipocoagulabilidade detectada mais precocemente pelo teste de geração de trombina. O uso de ácido tranexâmico e desmopressina para estabilização da hemostasia após a inoculação do veneno não mostrou vantagem na restauração da coagulação.(AU)

Sazonalidade e rotas de coleta influenciam a ocorrência de leite instável não ácido, a densidade e a crioscopia do leite fornecido a um laticínio no Norte de Minas Gerais / [Seasonality and collection routes influence the occurrence of non-acid unstable milk, the density and cryoscopy of milk supplied to a dairy industry in northern Minas Gerais]

Objetivou-se avaliar, nos meses, nas estações do ano e nas rotas de coleta, a ocorrência de leite instável não ácido (LINA) e de outras classes de leite, de acidez titulável, densidade e crioscopia em 10.654 resultados de laticínio localizado em Montes Claros, MG. Em rotas de coleta, agruparam-se:a)Bocaiúva; Brasília de Minas, Coração de Jesus e São João da Lagoa; b) Capitão Enéas e Janaúba; Francisco Sá; c) Icaraí de Minas e São Francisco; d)Juramento e Glaucilândia; e) Montes Claros; f) Pedras de Maria da Cruz, Japonvar, Lontra e São João da Ponte;e g) Ubaí. Foram avaliados frequências das classes de leite, teste do álcool, acidez titulável, densidade e crioscopiapor mês, estação do ano e rota. Com testes de qui-quadrado e análises de variância, verificou-se influência de mês, estação do ano e rota em acidez titulável, densidade e crioscopia. Análises de correspondência múltipla descreveram a associação de classes de leite e mês ou rotas e de teste do álcool, acidez titulável, densidade e crioscopia em relação às estações do ano.Por regressão logística, calculou-se probabilidade de ocorrência de LINA por grupos de meses e de rotas. Houve maior porcentagem de amostras dentro da normalidade. Resultados normais, LINA, amostras alcalinas e ácidas foram, respectivamente, 79,46%; 12,93%; 4,14% e 3,48% de 10.271 resultados. Positividade ao teste do álcool (n=10.561) foi mais frequente no final do inverno. LINA associou-se à transição da seca para chuva, com maior chance de ocorrência em setembro e janeiro. As rotas de Brasília de Minas, Icaraí de Minas e Ubaí apresentaram maiores desconformidades e probabilidades para ocorrência de LINA.(AU)

The purpose of this study was to evaluate in the months, seasons and collection routes, the occurrence of non-acidic unstable milk (UNAM) and other milk categories, titratable acidity, density and cryoscopy in 10,654 samples from a dairy industry located in Montes Claros, MG, Brazil. Municipalities were grouped in collection routes: a) Bocaiúva; Brasília de Minas, Coração de Jesus and São João da Lagoa; b) Capitão Enéas and Janaúba; c) Francisco Sá; Icaraí de Minas and São Francisco; d) Juramento and Glaucilândia; e) Montes Claros; f) Pedras de Maria da Cruz, Japonvar, Lontra and São João da Ponte and g) Ubaí. The milk category frequencies and alcohol test, titratable acidity, density and cryoscopy of milk by months, season and routes were evaluated. Chi-square tests and variance analysis showed the influence of month, season and route on titratable acidity, density and cryoscopy. Multiple correspondence analyzes described the association of milk and month or routes and alcohol test categories, titratable acidity, density and cryoscopy in relation to the seasons. The probability of occurrence of LINA by month and route groups was calculated by logistic regression. There were a higher percentage of samples within the normal range. Normal, UNAM, alkaline and acid milk results were respectively 79.46, 12.93, 4.14 and 3.48% of 10,271 results. Alcohol test positivity (n=10,561) was more frequent in late winter. UNAM was associated with the transition from drought to rainy season, most likely to occur in September and January. The Brasília de Minas, Icaraí de Minas and Ubaí routes presented higher nonconformities and probabilities for UNAM occurrence.(AU)

Sazonalidade e rotas de coleta influenciam a ocorrência de leite instável não ácido, a densidade e a crioscopia do leite fornecido a um laticínio no Norte de Minas Gerais / [Seasonality and collection routes influence the occurrence of non-acid unstable milk, the density and cryoscopy of milk supplied to a dairy industry in northern Minas Gerais]

Objetivou-se avaliar, nos meses, nas estações do ano e nas rotas de coleta, a ocorrência de leite instável não ácido (LINA) e de outras classes de leite, de acidez titulável, densidade e crioscopia em 10.654 resultados de laticínio localizado em Montes Claros, MG. Em rotas de coleta, agruparam-se:a)Bocaiúva; Brasília de Minas, Coração de Jesus e São João da Lagoa; b) Capitão Enéas e Janaúba; Francisco Sá; c) Icaraí de Minas e São Francisco; d)Juramento e Glaucilândia; e) Montes Claros; f) Pedras de Maria da Cruz, Japonvar, Lontra e São João da Ponte;e g) Ubaí. Foram avaliados frequências das classes de leite, teste do álcool, acidez titulável, densidade e crioscopiapor mês, estação do ano e rota. Com testes de qui-quadrado e análises de variância, verificou-se influência de mês, estação do ano e rota em acidez titulável, densidade e crioscopia. Análises de correspondência múltipla descreveram a associação de classes de leite e mês ou rotas e de teste do álcool, acidez titulável, densidade e crioscopia em relação às estações do ano.Por regressão logística, calculou-se probabilidade de ocorrência de LINA por grupos de meses e de rotas. Houve maior porcentagem de amostras dentro da normalidade. Resultados normais, LINA, amostras alcalinas e ácidas foram, respectivamente, 79,46%; 12,93%; 4,14% e 3,48% de 10.271 resultados. Positividade ao teste do álcool (n=10.561) foi mais frequente no final do inverno. LINA associou-se à transição da seca para chuva, com maior chance de ocorrência em setembro e janeiro. As rotas de Brasília de Minas, Icaraí de Minas e Ubaí apresentaram maiores desconformidades e probabilidades para ocorrência de LINA.(AU)

The purpose of this study was to evaluate in the months, seasons and collection routes, the occurrence of non-acidic unstable milk (UNAM) and other milk categories, titratable acidity, density and cryoscopy in 10,654 samples from a dairy industry located in Montes Claros, MG, Brazil. Municipalities were grouped in collection routes: a) Bocaiúva; Brasília de Minas, Coração de Jesus and São João da Lagoa; b) Capitão Enéas and Janaúba; c) Francisco Sá; Icaraí de Minas and São Francisco; d) Juramento and Glaucilândia; e) Montes Claros; f) Pedras de Maria da Cruz, Japonvar, Lontra and São João da Ponte and g) Ubaí. The milk category frequencies and alcohol test, titratable acidity, density and cryoscopy of milk by months, season and routes were evaluated. Chi-square tests and variance analysis showed the influence of month, season and route on titratable acidity, density and cryoscopy. Multiple correspondence analyzes described the association of milk and month or routes and alcohol test categories, titratable acidity, density and cryoscopy in relation to the seasons. The probability of occurrence of LINA by month and route groups was calculated by logistic regression. There were a higher percentage of samples within the normal range. Normal, UNAM, alkaline and acid milk results were respectively 79.46, 12.93, 4.14 and 3.48% of 10,271 results. Alcohol test positivity (n=10,561) was more frequent in late winter. UNAM was associated with the transition from drought to rainy season, most likely to occur in September and January. The Brasília de Minas, Icaraí de Minas and Ubaí routes presented higher nonconformities and probabilities for UNAM occurrence.(AU)

Extraction, physical-chemical characterization and in vitro inhibitorypotential of thrombin generation of crude sulfated polysaccharides from Brazilian tropical seaweeds / Extração, caracterização físico-química e potencial inibitório in vitro da geração detrombina de polissacarídeos sulfatados brutos de algas marinhas tropicais brasileiras

The biotechnological value of macroalgae for screening assays of thrombin generation-TG using sulfated polysaccharides-SPs as substitutes to heparin has been poorly explored. Five Brazilian species of macroalgae (Gracilaria birdiae, Acanthophora muscoides, Halymenia sp., Caulerpa cupressoides and C. racemosa) wereanalyzed and compared for their abundance, physical-chemical characteristics and in vitro anticoagulant assays of activated partial thromboplastin time-APTT, prothrombin time-PT and TG. Papain extraction yielded (p < 0.001) from 0.66±0.03% (C. racemosa) to 41.60±1.10% (Halymenia sp.) of crude SPs varying sulfate (8.41-42.60%) and total sugars (47.80-70.53%). Crude SPs showed difference in mobility and resolution pattern by agarose electrophoresis, while polyacrylamide analysis revealed SPs of > 100 kDa. These procedures,combined with the use of Stains-All, also indicated nonSPs. APTTs ranged from 2.81 (A. muscoides) to 21.30 IU(Halymenia sp.) vs. heparin (193 IU), and were dependent on sulfation of the crude SPs. PT was not altered. Withrespect to TG assay, crude SPs modified concentration-dependent and independently from molecular mass TGby both intrinsic/extrinsic pathways in 60-fold diluted human plasma, with total intrinsic inactivation using crudeSPs from A. muscoides in parallel to heparin (p < 0.05). Thrombosis in vitro is differentially modulated by distinctcrude SPs from Brazilian seaweeds.(AU)

O valor biotecnológico das macroalgas para ensaios de varredura de geração de trombina-GT pouco tem sido explorado usando polissacarídeos sulfatados-PSs como substitutos à heparina. Foramanalisadas e comparadas cinco espécies brasileiras de macroalgas (Gracilaria birdiae, Acanthophora muscoides, Halymenia sp., Caulerpa cupressoides e C. racemosa) quanto à abundância, às característicasfísico-químicas e os ensaios anticoagulantes in vitro de tempo de tromboplastina parcial ativada-TTPA, aotempo de protrombina-TP e a GT. A extração com papaína rendeu (p < 0,001) de 0,66±0,03%(C. racemosa) a 41,60±1,10% (Halymenia sp.) de PSs brutos variando sulfato (8,41-42,60%) e açúcarestotais (47,80-70,53%). Os PSs brutos mostraram diferenças na mobilidade e resolução por eletroforese emagarose, enquanto pela análise em poliacrilamida revelou PSs brutos de >100 kDa. Esses procedimentos,combinados ao uso de azul de toluidina/Stains-All, indicaram também polissacarídeos-não sulfatados. OsTTPAs foram dependentes da sulfatação dos PSs brutos e variaram de 2,81 (A. muscoides) a 21,30 UI (Halymenia sp.) vs. heparina (193 UI). O TP não foi alterado. Com respeito ao ensaio de GT, os PSs brutos modificaram, dependente de concentração e independentemente de massa molecular, GT pelas viasintrínseca/extrínseca no plasma humano diluído 60 vezes, com inativação intrínseca total usando PSs brutosde A. muscoides em paralelo à heparina (p < 0,05). A trombose in vitro é modulada diferencialmente porPSs brutos distintos de algas marinhas brasileiras.(AU)

Extraction, physical-chemical characterization and in vitro inhibitorypotential of thrombin generation of crude sulfated polysaccharides from Brazilian tropical seaweeds / Extração, caracterização físico-química e potencial inibitório in vitro da geração detrombina de polissacarídeos sulfatados brutos de algas marinhas tropicais brasileiras

The biotechnological value of macroalgae for screening assays of thrombin generation-TG using sulfated polysaccharides-SPs as substitutes to heparin has been poorly explored. Five Brazilian species of macroalgae (Gracilaria birdiae, Acanthophora muscoides, Halymenia sp., Caulerpa cupressoides and C. racemosa) wereanalyzed and compared for their abundance, physical-chemical characteristics and in vitro anticoagulant assays of activated partial thromboplastin time-APTT, prothrombin time-PT and TG. Papain extraction yielded (p 100 kDa. These procedures,combined with the use of Stains-All, also indicated nonSPs. APTTs ranged from 2.81 (A. muscoides) to 21.30 IU(Halymenia sp.) vs. heparin (193 IU), and were dependent on sulfation of the crude SPs. PT was not altered. Withrespect to TG assay, crude SPs modified concentration-dependent and independently from molecular mass TGby both intrinsic/extrinsic pathways in 60-fold diluted human plasma, with total intrinsic inactivation using crudeSPs from A. muscoides in parallel to heparin (p < 0.05). Thrombosis in vitro is differentially modulated by distinctcrude SPs from Brazilian seaweeds.

O valor biotecnológico das macroalgas para ensaios de varredura de geração de trombina-GT pouco tem sido explorado usando polissacarídeos sulfatados-PSs como substitutos à heparina. Foramanalisadas e comparadas cinco espécies brasileiras de macroalgas (Gracilaria birdiae, Acanthophora muscoides, Halymenia sp., Caulerpa cupressoides e C. racemosa) quanto à abundância, às característicasfísico-químicas e os ensaios anticoagulantes in vitro de tempo de tromboplastina parcial ativada-TTPA, aotempo de protrombina-TP e a GT. A extração com papaína rendeu (p 100 kDa. Esses procedimentos,combinados ao uso de azul de toluidina/Stains-All, indicaram também polissacarídeos-não sulfatados. OsTTPAs foram dependentes da sulfatação dos PSs brutos e variaram de 2,81 (A. muscoides) a 21,30 UI (Halymenia sp.) vs. heparina (193 UI). O TP não foi alterado. Com respeito ao ensaio de GT, os PSs brutos modificaram, dependente de concentração e independentemente de massa molecular, GT pelas viasintrínseca/extrínseca no plasma humano diluído 60 vezes, com inativação intrínseca total usando PSs brutosde A. muscoides em paralelo à heparina (p < 0,05). A trombose in vitro é modulada diferencialmente porPSs brutos distintos de algas marinhas brasileiras.

Milk coagulation properties and methods of detection / Propriedades de coagulação do leite e métodos de detecção

One of the most crucial steps in cheesemaking is the coagulation process, and knowledge of the parameters involved in the clotting process plays an important technological role in the dairy industry. Milk of different ruminant species vary in terms of their coagulation capacities because they are influenced by the milk composition and mainly by the milk protein genetic variants. The milk coagulation capacity can be measured by means of mechanical and/or optical devices, such as Lactodynamographic Analysis and Near-Infrared and Mid-Infrared Spectroscopy.

Uma das etapas mais importantes na fabricação de queijos é o processo de coagulação. O conhecimento dos parâmetros envolvidos nesse processo desempenha um papel tecnológico importante para a indústria de laticínios. O leite de diferentes espécies de ruminantes varia em termos de capacidade de coagulação, pois são influenciados pela composição e principalmente pelas variantes genéticas da caseína. Estas características podem ser avaliadas por meio de dispositivos mecânicos e/ou ópticos, tais como, a Análise Lactodinamográfica e a Espectroscopia de Reflectância do Visível ao Infravermelho Próximo (NIR) e Médio (MIR).

Milk coagulation properties and methods of detection / Propriedades de coagulação do leite e métodos de detecção

One of the most crucial steps in cheesemaking is the coagulation process, and knowledge of the parameters involved in the clotting process plays an important technological role in the dairy industry. Milk of different ruminant species vary in terms of their coagulation capacities because they are influenced by the milk composition and mainly by the milk protein genetic variants. The milk coagulation capacity can be measured by means of mechanical and/or optical devices, such as Lactodynamographic Analysis and Near-Infrared and Mid-Infrared Spectroscopy.(AU)

Uma das etapas mais importantes na fabricação de queijos é o processo de coagulação. O conhecimento dos parâmetros envolvidos nesse processo desempenha um papel tecnológico importante para a indústria de laticínios. O leite de diferentes espécies de ruminantes varia em termos de capacidade de coagulação, pois são influenciados pela composição e principalmente pelas variantes genéticas da caseína. Estas características podem ser avaliadas por meio de dispositivos mecânicos e/ou ópticos, tais como, a Análise Lactodinamográfica e a Espectroscopia de Reflectância do Visível ao Infravermelho Próximo (NIR) e Médio (MIR).(AU)

DETERMINAÇÃO DOS INTERVALOS DE REFERÊNCIA DAS VARIÁVEIS TROMBOELASTOGRÁFICAS SEM O USO DE ATIVADORES EM DIFERENTES AMOSTRAS SANGUÍNEAS DE CÃES HÍGIDOS

O sistema hemostático compreende um conjunto de eventos fisiológicos e complexos do organismo. Este previne o escape de sangue a partir dos vasos sanguíneos e a formação de trombos que afetarão o fluxo sanguíneo. Para manter a fluidez do sangue nos vasos sanguíneos, é necessária a interação em homeostase de vários componentes, como a parede vascular, plaquetas, fatores de coagulação, substâncias anticoagulantes naturais e substâncias fibrinolíticas, entre outros. A avaliação de desordens hemostáticas é realizada por meio de exames laboratoriais geralmente subdivididos em testes convencionais e em testes viscoelásticos, como a tromboelastografia (TEG). O presente estudo teve como objetivo evidenciar as variáveis tromboelastográficas de cães hígidos utilizando diferentes amostras sanguíneas, como o sangue total fresco (STF), sangue total com citrato de sódio a 3,2% (STC), plasma fresco (PF) e plasma fresco congelado (PFC). A finalidade foi estabelecer intervalo de referência (IR) para tais variáveis em cães hígidos e verificar se o tipo de amostra e o método de conservação da amostra alteram o traçado tromboelastográfico. Para este projeto, foram selecionados 22 cães sadios oriundos do serviço de atendimento clínico do Núcleo de Atendimento Veterinário do Centro Universitário Moura Lacerda, Ribeirão Preto/SP, que buscaram o atendimento para avaliações rotineiras anuais de sanidade. As diferentes amostras sanguíneas foram coletadas por meio de venopunção jugular e submetidas à análise tromboelastográfica em diferentes circunstâncias. Para determinação dos IR, foi realizado teste t Student com intervalo de confiança (IC) de 95%, valor-p 0,05 e teste de Fisher para verificar homogeneidade. Além disso, foi realizado teste de Shapiro Wilk para verificação de normalidade e com auxílio de gráficos box plot para detecção e exclusão de valores extremos (outliers). Os dados foram processados no software estatístico livre RGui versão 4.0.0 (R Core Team (2020). O conjunto de eventos do sistema hemostático, necessita de avaliação laboratorial robusta, como testes viscoelásticos, para melhor interpretação. Portanto, realizar tromboelastografia em diferentes amostras sanguíneas, bem como, determinar intervalo de referência para as variáveis TEG das diferentes amostras, mostra avanço para a realização do TEG em laboratórios clínicos veterinários. A obtenção de IR para diferentes tipos de amostras, possibilita o acesso ao exame tromboelastográfico em diferentes circunstâncias. O presente projeto mostrou ser possível e viável a realização da tromboelastografia em diferentes amostras sanguíneas e todas elas representam o paciente animal de maneira confiável.

The hemostatic system comprises a set of physiological and complex events in the body. This prevents the leakage of blood from the blood vessels and the formation of thrombi that will affect blood flow. To maintain the fluidity of blood in blood vessels, it is necessary to interact in homeostasis of various components, such as the vascular wall, platelets, coagulation factors, natural anticoagulant substances and fibrinolytic substances, among others. The evaluation of hemostatic disorders is performed through laboratory tests, usually subdivided into conventional tests and viscoelastic tests, such as thromboelastography (TEG). The present study aimed to evidence the thromboelastographic variables of healthy dogs using different blood samples, such as fresh whole blood (FTS), whole blood with 3.2% sodium citrate (STC), fresh plasma (FP) and fresh plasma frozen (PFC). The purpose was to establish a reference interval (RI) for such variables in healthy dogs and to verify whether the type of sample and the method of sample conservation alter the thromboelastographic tracing. For this project, 22 healthy dogs were selected from the clinical care service of the Center for Veterinary Care of the Moura Lacerda University Center, Ribeirão Preto/SP, which sought care for routine annual health assessments. Different blood samples were collected through jugular venipuncture and submitted to thromboelastographic analysis under different circumstances. To determine the RI, Student's t test was performed with a confidence interval (CI) of 95%, p-value 0.05 and Fisher's test to verify homogeneity. In addition, the Shapiro Wilk test was performed to verify normality and with the aid of box plot graphics for detection and exclusion of extreme values (outliers). Data were processed in the free statistical software RGui version 4.0.0 (R Core Team (2020). The set of events of the hemostatic system requires robust laboratory evaluation, such as viscoelastic tests, for better interpretation. Therefore, perform thromboelastography in different samples blood tests, as well as determining the reference interval for the TEG variables of different samples, shows advances in the performance of TEG in clinical veterinary laboratories. This project showed that it is possible and viable to perform thromboelastography in different blood samples and all of them represent the animal patient reliably.

Hemostatic assessment of dogs associated with hepatic parasite load of Leishmania infantum chagasi / Avaliação hemostática de cães associada com a carga parasitária hepática de Leishmania infantum chagasi

Leishmania infantum chagasi liver parasite load was compared to hemostatic abnormalities, as well as to clinical, laboratorial, and histopathological findings in dogs with visceral leishmaniasis. The liver parasite load of 30 dogs L. infantum chagasi naturally-infected was evaluated by quantitative real- time PCR and the results were compared with serum biochemistry and primary and secondary hemostasis findings. Moreover, hepatic histological lesions were described in these dogs. Prolonged bleeding time, prothrombin time (PT), and activated partial thromboplastin time (APTT), were observed in the group with visceral leishmaniasis. Eleven dogs presented inflammatory liver lesions, with predominance of mild multifocal mononuclear periportal hepatitis. No association between the presence of parasites and abnormalities in screening tests was observed by Spearmans rank correlation coefficient. The clinical progression in leishmaniasis is associated with the occurrence of hemorrhagic diathesis, which depends not only on the presence of the parasite but also the inflammatory process, compromised immunological response, hepatic and renal failure in symptomatic dogs.(AU)

A carga parasitária de Leishmania infantum chagasi do fígado foi comparada às anormalidades hemostáticas, bem como aos achados clínicos, laboratoriais e histopatológicos em cães com leishmaniose visceral. A carga parasitária do fígado de 30 cães naturalmente infectados por L. infantum chagasi foi avaliada por PCR quantitativo em tempo real e os resultados foram comparados com bioquímica sérica e achados de hemostasia primária e secundária. Além disso, foram descritas as lesões hepáticas nestes cães. Prolongado tempo de sangramento, tempo de protrombina (TP) e tempo de tromboplastina parcial ativada (TTPA) foram observados no grupo com leishmaniose visceral. Onze cães apresentaram lesões inflamatórias no fígado, predominando hepatite periportal mononuclear multifocal. Não foi observada associação entre a presença de parasitos e as anormalidades nos testes laboratoriais por correlação de Spearman. A progressão clínica na leishmaniose está associada com a ocorrência de diátese hemorrágica, que depende não só da presença do parasito, mas também do processo inflamatório, do comprometimento da resposta imunológica e da falência renal e hepática em cães sintomáticos.(AU)

Na2EDTA anticoagulant impaired blood samples from the teleost Piaractus mesopotamicus / Anticoagulante Na2EDTA danifica amostras de sangue do teleósteo Piaractus mesopotamicus

The present study aimed to evaluate the effects of Na heparin and Na2EDTA on blood of Piaractus mesopotamicus (360.7±42.4g, 26.4±1.0cm). Twenty fishes were sampled in two experiment trials, ten for erythrocyte fragility analysis and ten for hematologic and plasma biochemical study. The blood collected by venous-caudal puncture was fractioned and stored in anticoagulants solution: Na2EDTA 10%, Na2EDTA 3%, Na heparin 5000 IU and Na heparin 100 IU. Plasmatic levels of calcium presented in the Na2EDTA stored samples were about 80% lower than both heparin groups. Blood samples of P. mesopotamicus stored with Na2EDTA demonstrated increase in the hematocrit and MCV, and decrease in MCHC. The dose-response effect was observed in this study. The results are reinforced by the higher levels of plasmatic protein and hemolysis presented in the Na2EDTA 10% stored blood, confirming the deleterious effect of this anticoagulant treatment on the quality of blood samples. Na2EDTA is not indicated to store P. mesopotamicus blood samples, but sodium heparin at 100 IU is the most recommended anticoagulant, since this treatment presented the lower rate of alterations in the stored blood.(AU)

O presente estudo teve por objetivo avaliar os efeitos da heparina sódica e Na2EDTA no sangue de Piaractus mesopotamicus (360,7±42,4g, 26,4±1,0cm). Foram amostrados vinte peixes em dois ensaios experimentais, sendo dez peixes utilizados para análise da fragilidade dos eritrócitos e dez peixes para análise dos parâmetros hematológicos e estudo bioquímico do plasma. O sangue coletado por punção veno-caudal foi aliquotado e armazenado em diferentes soluções anticoagulantes: Na2EDTA 10%, Na2EDTA 3%, heparina sódica 5.000 UI e heparina sódica 100 UI. Níveis plasmáticos de cálcio apresentados nas amostras armazenados em Na2EDTA diminuíram cerca de 80% em relação aos dois grupos armazenados com heparina. Amostras de sangue de pacus armazenados com Na2EDTA demonstraram aumento do hematócrito e VCM, e diminuição na CHCM. O efeito dose-resposta foi observado neste estudo. Estes resultados são reforçados pelos níveis mais elevados de proteína plasmática e hemólise apresentado no sangue armazenado com Na2EDTA 10%, o que confirma o efeito deletério desse tratamento anticoagulante na qualidade de amostras de sangue. Na2EDTA não é indicada para armazenar amostras de sangue de P. mesopotamicus, e heparina sódica a 100 UI é o anticoagulante mais recomendado, uma vez que este tratamento apresentou a menor taxa de alterações no sangue armazenado.(AU)

Ultrasonic shears and bipolar vessel-sealing system for three-port laparoscopic ovariohysterectomy in dogs / Bisturi ultrassônico e sistema de selamento de vasos sanguíneos para ovário-histerectomia laparoscópica com três portais em cães

In the current experimental study, two different instruments were compared for prophylactic hemostasis during a 3-port technique of laparoscopic ovariohysterectomy (OVH) in bitches. Moreover, the need for port enlargement for specimen retrieval using 5mm or 10mm trocartes, technical difficulties and complications were assessed. Ultrasonic energy and a vascular sealing system were tested. Duration of surgery, patient weight and diameter of the uterine arteries and veins were compared among the groups. Fifteen dogs randomly divided into three groups (GI, GII, GIII) were submitted to ovariohysterectomy with hemostasis from the use of ultrasonic scalpel or vascular sealing equipment. In GI and GII the LigaSure(tm) impedance-controlled bipolar vessel-sealing device was used, differing in the size of trocartes used between groups, and in GIII Autosonix(tm) was used. Patients' weight, duration of surgery, technical difficulties and complications were compared among the groups. Statistical analysis showed no difference between the data analyzed among the groups. In conclusion, both methods of hemostasis were effective for 3-port total laparoscopic ovariohysterectomy in bitches. However, 5mm trocartes were not adequate for retrieval of the uterus and ovaries without need for enlargement of the port incision.(AU)

No presente experimento, foram comparados dois diferentes equipamentos, um com emprego de energia ultrassônica, e outro utilizando sistema de selamento vascular, como única forma de hemostasia em ovário-histerectomias laparoscópicas com três portais em cadelas. Ademais, a necessidade de ampliação da incisão do portal de 5mm ou de 10mm para a remoção dos espécimes ressecados, dificuldades técnicas e complicações foram avaliadas. Quinze cadelas aleatoriamente distribuídas em três grupos (GI, GII, GIII) foram submetidas à ovário-histerectomia com hemostasia a partir da utilização de bisturi ultrassônico ou equipamento de selamento vascular. Nos GI e GII foi utilizado um sistema de selamento vascular eletrotérmico bipolar (LigaSure(r)), diferindo-se no tamanho dos portais utilizados, em GIII foi utilizado bisturi ultrassônico (Autosonix(r)). A análise estatística não demonstrou diferença significativa entre os dados analisados nos três grupos. Conclui-se que ambos os métodos de hemostasia utilizados mostraram-se adequados e viabilizaram a realização de ovário-histerectomia laparoscópica em cadelas. Todavia, o trocarte de 5mm não foi adequado para remoção do útero e ovários sem necessidade de ampliação da incisão de acesso.(AU)

The use of cryoprecipitate in a dog with acute hemorrhage: case report / Uso de crioprecipitado em cão com hemorragia aguda: relato de caso

It is reported the case of the use of cryoprecipitate in a canine patient, Yorkshire Terrier, who presented acute heavy bleeding disorder during arthroplasty procedure. At the time of bleeding disorder the patient had values of activated partial thromboplastin time (aPTT) above 240 seconds, and prothrombin time (PT) of 14.9 seconds. It was opted for the use of plasma components to correct the bleeding disorders, and since the patient had low weight (4.8kg), it was decided by the transfusion of one unit of cryoprecipitate (20 mL), quickly (20 minutes), even during surgery. The aPTT and PT post-transfusion values were 45.5 and 10.2 seconds respectively, with rapid control of bleeding. On return after 13 days the values of APTT and PT were within the normal range for the species. Because it contains high concentration of clotting factors and reduced volume, cryoprecipitate may be a good choice for patients with secondary bleeding disorders, especially in small animals. The effectiveness in transfusion therapy directed to the rational use of blood components illustrates the need for knowledge of the different blood components and individual study of each case.(AU)

Relata-se o caso do uso de crioprecipitado em um paciente canino, Yorkshire Terrier, que apresentou sangramento agudo intenso durante procedimento de artroplastia. No momento do distúrbio hemorrágico o paciente possuía valores de tromboplastina parcial ativada (TTPA) acima de 240 segundos, e de tempo de protrombina (TP) de 14,9 segundos. Optou-se pelo uso de hemocomponentes plasmáticos a fim de corrigir os distúrbios hemorrágicos, e uma vez que o paciente possuía peso reduzido (4,8kg), foi decidido pela transfusão de uma unidade de crioprecipitado (20 mL), de forma rápida (20 minutos), ainda no trans-operatório. Os valores de TTPA e TP pós-transfusionais foram de 45,5 e 10,2 segundos, respectivamente, com rápido controle do sangramento. No retorno após 13 dias os valores de TTPA e TP estavam dentro dos valores de normalidade para a espécie. Conclui-se que o crioprecipitado ofereceu os fatores de coagulação necessários para correção do distúrbio hemorrágico, controlando o sangramento e melhorando os valores de TTPA e TP. Por conter alta concentração de fatores de coagulação e volume reduzido, o crioprecipitado pode ser uma boa escolha para pacientes com coagulopatias secundárias, especialmente em animais de pequeno porte. A eficácia na terapia transfusional direcionada com o uso racional do melhor hemocomponente para o caso ilustra a necessidade de conhecimento dos diferentes hemocomponentes e estudo individual dos casos.(AU)

Geração de trombina em cães com doença renal crônica proteinúrica.

Cães com doença renal crônica (DRC) apresentam risco de eventos tromboembólicos, porém o mecanismo que leva à hipercoagulabilidade e ao risco na população de cães é desconhecido. O objetivo deste trabalho foi avaliar as possíveis tendências trombóticas e sua correlação com o estadiamento da DRC em cães. Trata-se de um estudo observacional transversal de casos-controle de cães atendidos no Hospital Veterinário da FMVZ UNESP, com sinais clínicos compatíveis com DRC. Os animais incluídos neste estudo foram cães de tutores voluntários, com diagnóstico de DRC proteinúrica (n=19) e animais saudáveis (n=20). Foram avaliados hemograma, perfil bioquímico renal, hepático, lipídico e proteínas, urinálise e razão proteína/creatinina urinária, fibrinogênio, TP, TTPa, tromboelastometria (TEM) e o teste de geração de trombina (TGT). Não houve diferença na geração de trombina entre os grupos, refutando a hipótese de que a geração de trombina contribui para o estado de hipercoagulabilidade em cães com DRC e proteinúria. O fibrinogênio aumentado é o principal achado encontrado em cães com DRC, corroborando com os achados de hiercoagulabilidade na TEM. Estudos adicionais são necessários para explorar uma possível contribuição da trombogenicidade para as manifestações clínicas da DRC.

Dogs with chronic kidney disease (CKD) are at risk thromboembolic events, but the mechanism leading to hypercoagulability and the population of dogs at risk are unknown. The aim of this study is to evaluate the possible thrombotic tendencies and their correlation with the staging of CKD in dogs. This is a observational cross-section study of client-owned dogs presented to Small Animal Clinical Service at the School of Veterinary Medicine and Animal Science of São Paulo State University, with clinical signs compatible with proteinuric CKD. The animals included this study were client-owned dogs with a diagnosis of proteinuric CKD (n=19) and healthy case-matched controls (n=20). Complete blood counts, renal, hepatic, lipidic and proteins serum biochemistry profile, urinalysis and urinary ratio protein/creatinine, fibrinogen, PT, aPTT, and thrombin generation test were evaluated. There was no difference in generation of thrombin between groups, refuting the hypothesis that thrombin generation is required for the state of hypercoagulability in dogs with CKD and proteinuria. Increased fibrinogen is the main finding found in dogs with CKD, corroborating with the findings of hypercoagulability in thromboelastometry. Studies are mandatory for the evaluation of thrombogenicity for clinical manifestations of DRC.

DESCRIÇÃO DO STATUS HEMOSTÁTICO DE EQUINOS COM ABDOME AGUDO POR TÉCNICAS CONVENCIONAIS E TROMBOELASTOGRÁFICAS

Alterações hemostáticas são anormalidades suspeitadas em equinos com obstruções intestinais, estando associadas a elevadas taxas de morbidade e mortalidade. Contudo, as técnicas e/ou testes usados rotineiramente para avaliar a hemostasia apresentam grandes limitações, pois avaliam fases ou componentes isolados do processo hemostático. Em contraste, a tromboelastografia é uma técnica atual que avalia a dinâmica do processo de coagulação sanguínea em conjunto, tornando possível a obtenção de informações acuradas. Como estudos recentes relataram que o uso de plasma fresco ou congelado estaria apresentado resultados satisfatórios tanto em seres humanos como em animais, o presente estudo teve como objetivo inicial realizar testes hemostáticos convencionais (TP, TTPA, Fibrinogênio) e viscoelásticas (tromboelastografia) do plasma de 20 equinos hígidos, 20 equinos com obstrução simples (compactação de colo) e de 20 com obstrução estrangulativa (vólvulo) de alças intestinais de ocorrência natural. Na interpretação dos resultados, verificou-se que o uso da Análise por Componentes Principais foi efetiva na caracterização dos indíviduos a partir dos resultados dos testes realizados. Ademais, ao transformar a interação entre os componentes do processo hemostático em uma visualização gráfica, a tromboelastografia possibilitou uma interpretação e entendimento efetivos do que está acontecendo na coagulação do indivíduo. Assim sendo, pode-se concluir que os testes por métodos convencionais e a avaliação viscoelástica do plasma citratado foram eficazes na caracterização individual do status hemostático de equinos com obstrução intestinal de ocorrência natural, revelando que as obstruções simples também podem causar distúrbios hemostáticos relevantes.

Haemostatic changes are suspected abnormalities in horses with intestinal obstructions, being associated with high rates of morbidity and mortality. However, the techniques and / or tests routinely used to evaluate hemostasis have major limitations, since they evaluate isolated phases or components of the hemostatic process. In contrast, thromboelastography is a current technique that evaluates the dynamics of the blood coagulation process together, making it possible to obtain accurate information. As recent studies have reported that the use of fresh or frozen plasma would present satisfactory results in both humans and animals, the present study aimed to perform conventional hemostatic (PT, APTT, Fibrinogen) and viscoelastic (thromboelastography) plasma analyzes of 20 healthy equines, 20 equines with simple obstruction (colon impactation), and 20 with strangulative obstruction (volvulus) of naturally occurring intestinal loops. In the interpretation of the results, it was verified that the use of Principal Component Analysis was effective in the characterization of the individuals from the results of the tests performed. In addition, by transforming the interaction between the components of the hemostatic process in a graphical view, thromboelastography enabled an effective interpretation and understanding of what is happening in the coagulation of the individual. Thus, it can be concluded that tests by conventional methods and the viscoelastic evaluation of citrated plasma were effective in the individual characterization of hemostatic status of horses with naturally occurring intestinal obstruction, revealing that simple obstructions can also cause relevant haemostatic disorders.

Caracterização histopatológica da piometra e sua relação com a hemostasia na espécie canina

A piometra é uma afecção uterina que acomete cadelas sob ação da progesterona. Trata-se de uma afecção grave que ainda desafia o médico veterinário no momento de determinar o prognóstico do paciente. O objetivo deste experimento foi avaliar os diferentes graus de lesão uterina promovido pela piometra em cadelas e sua influência na concentração dos fatores de coagulação. Para a realização do experimento, foram selecionadas 12 cadelas em diestro citológico, submetidas à ovário histerectomia (OHE) eletiva, compondo o grupo diestro e 15 cadelas diagnosticadas com piometra cujo tratamento foi a OHE, compondo o grupo piometra. Foi colhido sangue previamente ao procedimento cirúrgico, de todas as fêmeas, para realização de hemograma completo, proteína plasmática (PT), função renal, função hepática e análise dos fatores de coagulação: contagem de plaquetas, tempo de protrombina (TP), tempo de tromboplastina parcial ativada (TTPa) e fibrinogênio. Ainda, foram coletados três fragmentos uterinos das seguintes regiões: corno uterino direito, corno uterino esquerdo e corpo do útero para avaliação histopatológica. No grupo piometra as cadelas apresentaram valores de hemácias (5,08 x106/µL ± 1,64), hematócrito (31,47% ± 8,20) e hemoglobina (10,48 g/dL ± 3,45) abaixo dos valores de referência, diferente do grupo diestro, em que o valores estavam dentro da normalidade (hemácia: 6,40 x106/µL ± 1,15; hematócrito: 47,17% ± 4,78; hemoglobina: 15,66 g/dL ± 1,63). A dosagem de proteína total no grupo piometra estava acima do valor de referência (8,18 g/dL ± 0,84), enquanto o grupo diestro apresentou valor dentro da normalidade. Ainda, fêmeas do grupo piometra apresentaram leucocitose acentuada (37920 x103/µL ± 16756,67), devido ao processo inflamatório gerado pelo quadro de piometra, fato não observado nas fêmeas em diestro (8991,67 x103/µL ± 1993,38). O perfil renal (ureia e creatinina) estavam dentro do intervalo de referência grupo diestro (39,50 mg/dl) e grupo piometra (59,73 mg/dl) e a função hepática a dosagem de ALT tanto para o grupo piometra e no grupo diestro respectivamente (60,38 e 34,33 U/L) e a dosagem de fosfatase alcalina (ALP) para o grupo diestro estava dentro da faixa de normalidade (95,13) diferente do grupo piometra que está superior ao valor de referência para a espécie (321,53 U/L). O perfil hemostático na piometra (plaquetas 260600,00x103/µL ± 151203,17; TP: 7,57 ± 1,15 segundos e TTPa: 21,18 ± 8,41 segundos e fibrinogênio: 368,93 ± 153,68 mg/dl) não apresentou diferença com o grupo diestro (plaquetas: 320250,00x103/µL ± 79713,36; TP: 7,35 ± 0,49 segundos; TTPa: 17,84 ± 5,15 segundos e fibrinogênio: 424,33 ± 173,34 mg/dl). Apesar de não haver diferença estatística, foi observado TTPa superior ao limite da normalidade no grupo piometra. Na análise histopatológica, os fragmentos uterinos foram classificados como diestro ou piometra, e no grupo piometra as lâminas foram classificadas em tipo I, II, III, conforme características do tecido. Na análise histopatológica foi possível verificar que a presença de dilatação cística de glândulas endometriais, processo inflamatório polimorfonuclear/eosinofílico, difuso e acentuado e processo inflamatório em mucosa, foram diferenciais para o diagnóstico da piometra em relação ao diestro. Com base nos achados, pode-se concluir que é de grande importância o diagnóstico precoce de cadelas com piometra, para que se tenha um prognóstico favorável no que se diz respeito à hemostasia, função renal e hepática.

Pyometra is a uterine condition that affects bitches under the action of progesterone. It is a serious condition that still challenges the veterinarian when determining the patient's prognosis. The objective of this experiment was to evaluate the different degrees of uterine injury promoted by pyometra in bitches and their influence on the production of coagulation factors. For the experiment, 12 female dogs were selected on cytological dystrophy, submitted to elective hysterectomy, constituting the diestrous group and 15 female dogs diagnosed with pyometra, whose treatment was OSH, comprising the pyometra group. Blood samples were taken before the surgical procedure, from all females, for complete blood count, renal function, liver function and coagulation factors analysis: platelet count, prothrombin time (PT), activated partial thromboplastin time (aPTT) and fibrinogen. In addition, three uterine fragments were collected from the following regions: right uterine horn, left uterine horn and uterine body for histopathological evaluation. In the GP group, the bitches presented values of red blood cells (5.08 x106 / L ± 1.64), hematocrit (31.47% ± 8.20), and hemoglobin (10.48 g / dL ± 3.45) below the values (hematocrit: 47017% ± 4.78, hemoglobin: 15.66 g / dL ± 1, hematocrit, hematocrit, 63). The total protein dosage in the pyometra group was above the reference value (8.18 g / dL ± 0.84), while the diestrous group presented a value within normal limits. Still, pyometra group females presented marked leukocytosis (37920 x103 / L ± 16756,67), due to the inflammatory process generated by the pyometra, a fact not observed in right-handed females (8991.67 x103 / L ± 1993,38). The hemostatic profile on the pyometra (platelets 260600,00x103 / L ± 151203,17; TP: 7.57 ± 1.15 seconds and aPTT: 21.18 ± 8.41 seconds and fibrinogen: 368.93 ± 153.68 mg / dl) showed no difference with the diestrous group (platelets: 320250,00x103 / L ± 79713,36; TP: 7,35 ± 0,49 seconds; aPTT: 17.84 ± 5.15 seconds and fibrinogen: 424.33 ± 173.34 mg / dl), although there was no statistical difference, aPTT greater than the limit of normality was observed in the pyometra group. In the histopathological analysis, the uterine fragments were classified as diestrous or pyometra, and in pyometra group the slides were classified as type I, II, III, according to tissue characteristics. In the histopathological analysis it was possible to verify that the presence of cystic dilation of the endometrial glands, polymorphonuclear/eosinophilic inflammatory process, diffuse and accentuated and inflammatory process in the mucosa, were differential for the diagnosis of pyometra in relation to the diestrous. In conclusion, the early diagnosis of bitches with pyometra is of great importance in order to have a favorable prognosis regarding hemostasis, renal and hepatic function.

Effect of calcium addition and pH on yield and texture of Minas cured cheese / Efeito da adição de cálcio e do pH sobre o rendimento e a textura de queijo-de-Minas curado

Milk calcium concentration is a factor related to cheese texture, an important rheological property of cheese quality as perceived by consumers. This study aimed to evaluate the effect of different pH conditions (5.8 and 6.6) and calcium addition (0, 150, 300 ppm of CaCl2), on yield and nutrient retention of the clots obtained and on the texture of Minascured cheese. Clots were analyzed for wet and dry yield, percentage content and retention of protein, fat and calcium. The texture of the cheese was evaluated by instrumental and sensorial tests. No differences were observed on the wet and dry yields, or on the protein content, fat and calcium retention of clots produced in the different experimental conditions. The instrumental evaluation showed that calcium addition significantly influenced the texture of cheeses, regardless of the pH of milk clotting. The sensory panel did not find a difference in the hardness ofcheeses produced at the same pH of milk clotting in function of CaCl2 addition. There was no difference in the texture of Minascured cheese due to the calcium addition to milk for dairy product consumers, which brings a new perspective on manufacture for cheese markers.(AU)

Avaliou-se o efeito de diferentes condições de pH ­5,8 e 6,6 ­e da adição de cálcio ­0, 150, 300ppm de CaCl2 - sobre o rendimento, a retenção de nutrientes nos coágulos produzidos e a textura de queijo-de-Minas curado. Foram analisados nos coágulos os rendimentos úmido e seco, o percentual e a retenção de proteína, de gordura e de cálcio. A textura dos queijos foi avaliada por testes instrumental e sensorial. Não foram observadas diferenças nos rendimentos úmido e seco, no conteúdo percentual e na retenção de proteína, gordura e cálcio nos coágulos produzidos em diferentes condições experimentais. A análise instrumental mostrou que a adição ou não de cálcio influenciou a textura dos queijos, independentemente do pH de coagulação do leite. O painel sensorial não diferiu quanto à dureza dos queijos produzidos em um mesmo valor de pH de coagulação do leite mediante a adição de CaCl2. Para os consumidores, não houve diferença na textura do queijo Minas curado em razão da adição de cálcio ao leite. Isto traz nova perspectiva na fabricação para os produtores de queijo.(AU)

Analysis of two drying methods on the yield and activity of sulfated polysaccharides extracted from Halymenia sp (Rhodophyceae) / Análise de dois métodos de secagem sobre o rendimento e atividade de polissacarídeos sulfatados extraídos da rodofícea Halymenia sp

Sulfated polysaccharides (SPs) have attracted growing interest for various biotechnological applications. We evaluated the efficiency of two methods of drying SPs (M I and II) extracted from Halymenia sp Rhodophyceae in order to compare the yield, purification and anticoagulant activity. The total SPs (TSPs) were first extracted with papain in 100 mM sodium acetate (pH 5.0) containing cysteine and EDTA (5 mM). The TSPs obtained were dried in an oven (M I) or lyophilized (M II) and then examined by ion exchange chromatography (DEAE-cellulose) using the NaCl gradient technique. The fractions were analyzed by 0.5% agarose gel electrophoresis and the in vitro anticoagulant activity was evaluated by the activated partial thromboplastin time test using normal human plasma and compared to heparin (HEP) (193.00 IU mg-1). There was a difference in TSP yield of 19.05% and similar chromatographic SP profiles. Electrophoresis revealed fractions with distinct resolutions. The fractions eluted with 0.75 M of salt (M I and II) were the most active, measuring 27.40 and 72.66 IU mg-1, respectively, when compared to HEP. Therefore, obtaining SP with anticoagulant activity from Halymenia sp. is more efficient by freeze-drying.

Os polissacarídeos sulfatados (PS) têm despertado interesse crescente para diversas aplicações em biotecnologia. Avaliou-se a eficiência de duas metodologias de secagem de PSs (M I e II) extraídos da rodofícea Halymenia sp. a fim de se comparar o rendimento, a purificação e a atividade anticoagulante. Inicialmente, os PS totais (PSTs) foram extraídos com papaína em tampão acetato de sódio 100 mM (pH 5,0) contendo cisteína e EDTA (5 mM). Os PSTs foram secados em estufa (M I) ou liofilizados (M II), seguido por cromatografia de troca iônica (DEAE-celulose) utilizando um gradiente de NaCl. As frações foram analisadas por eletroforese em gel de agarose a 0,5% e a atividade anticoagulante "in vitro" avaliada por meio do teste do tempo de tromboplastina parcial ativada usando plasma humano normal e comparadas à heparina (HEP) (193.00 UI mg-1). Verificaram-se diferença no rendimento de PSTs (19,05%) e semelhantes perfis cromatográficos de PS, revelando, por eletroforese, frações de PS distintas em grau de resolução entre os métodos. As frações eluídas com 0,75 M de sal (M I e II) foram as mais ativas, com valores de atividade da ordem de 27,40 e 72,66 UI mg-1, respectivamente, em relação à HEP. Portanto, a secagem por liofilização seria uma forma mais eficaz na obtenção de PSs com atividade anticoagulante de Halymenia sp.

Glicosaminoglicanos isolados da pele de palombeta (Chloroscombrus chrysurus) e guaiúba (Ocyurus chrysurus): características e implicações biológicas / Glycosaminoglycans isolated from the skin of 'palombeta' (Chloroscombrus chrysurus) and 'guaiúba' (Ocyurus chrysurus): features and biological implications

O Brasil abriga uma das maiores biodiversidades marinhas do mundo, favorecendo a descoberta de fontes alternativas de compostos farmacológicos. Desta forma, objetivou-se avaliar o potencial anticoagulante de glicosaminoglicanos (GAGs) isolados das peles da palombeta (Chloroscombrus chrysurus) e guaiúba (Ocyurus chrysurus). Os GAGs foram extraídos com papaína bruta em tampão acetato de sódio 0,1 M (pH 5,0) contendo cisteína 5 mM e EDTA 5 mM, seguido por cromatografia de troca iônica do extrato total em coluna de DEAE-celulose. As frações obtidas foram analisadas quanto à composição química (proteínas contaminantes e carboidratos totais) e os GAGs identificados por eletroforese em gel de agarose a 0,5%. Os ensaios de atividade anticoagulante foram realizados por meio do tempo de tromboplastina parcial ativada (TTPA) usando plasma humano normal e heparina-padrão (193,00 UI mg-1). O procedimento de obtenção e fracionamento dos GAGs mostrou-se eficiente, indicando semelhantes perfis cromatográficos entre as espécies avaliadas e, revelando para C. chrysurus, bandas com mobilidades semelhantes ao dermatam sulfato e com atividade de apenas 3,30 UI mg-1.

A great number of pharmacological compounds is found in the Brazilian marine diversity. This study evaluated the anticoagulant potential of glycosaminoglycans (GAGs) isolated from the skin of 'palombeta' Chloroscombrus chrysurus and 'guaiúba' Ocyurus chrysurus. GAGs were extracted with crude papain in 0.1 M sodium acetate buffer (pH 5.0) containing 5 mM cysteine and 5 mM EDTA, followed by ion exchange chromatography on DEAE-cellulose column. The chemical composition (contaminant proteins and total carbohydrates) and the analysis by 0.5% agarose gel electrophoresis of fractions were also determined. Anticoagulant assays were performed by activated partial thromboplastin time (APTT) using normal human plasma and standard heparin (193.00 IU mg-1). The obtaining and fractionation procedures of GAGs were effective and similar chromatographic profiles were verified between the species. A similar mobility to dermatan sulfate was revealed for C. chrysurus. This GAG also showed a low activity of 3.30 IU mg-1.

Identificação de Proteases de Leptospiras Envolvidas na Degradação de Proteínas da Matriz Extracelular e do Plasma Humano

Leptospiras são bactérias espiroquetas altamente móveis dotadas de estratégias que possibilitam grande eficiência nos processos de invasão e disseminação no hospedeiro. Nosso grupo demonstrou previamente que leptospiras patogênicas secretam proteases capazes de clivar e inativar moléculas-chave do sistema complemento humano, o que confere a essas bactérias a capacidade de driblar os mecanismos de defesa do sistema imune inato. Dada a rápida disseminação das leptospiras durante o processo de infecção, aventou-se a hipótese de que essas proteases secretadas pudessem alvejar uma gama maior de moléculas do hospedeiro. No presente estudo, a atividade proteolítica de proteínas secretadas por leptospiras sobre um painel de moléculas da matriz extracelular e do plasma foi avaliada. O sobrenadante de cultura da estirpe virulenta L. interrogans sorovar Kennewicki Fromm degradou fibrinogênio humano, fibronectina plasmática, colágeno Tipo I, e as proteoglicanas decorina, biglicam e lumicam. A atividade proteolítica foi inibida por 1,10-fenantrolina, sugerindo o envolvimento de metaloproteases. Laminina, matrigel, plasminogênio e trombina não foram clivados por proteases presentes nos sobrenadantes. Ainda, os dados indicam que a produção de proteases deve ser um determinante de virulência importante, uma vez que os sobrenadantes de estirpes saprófitas ou patogênicas atenuadas em cultura não apresentaram atividade proteolítica sobre componentes da matriz ou do plasma. A análise dos genomas de leptospiras disponíveis nos levou à identificação de quatro termolisinas, metaloproteases presentes apenas nas espécies patogênicas. Uma delas, codificada pele LIC13322, foi produzida na forma recombinante e apresentou atividade proteolítica sobre fibrinogênio, biglicam e decorina. Em paralelo, foram também realizadas análises comparativas dos exoproteomas das estirpes Fromm e Patoc I. Algumas metaloproteases que podem estar envolvidas na degradação de moléculas do hospedeiro foram identificadas. A capacidade de clivar moléculas do tecido conjuntivo e proteínas da cascata de coagulação pode certamente contribuir para a invasão e a destruição tecidual observadas durante a infecção por Leptospira.

Leptospires are highly motile spirochetes equipped with strategies for efficient invasion and dissemination within the host. Our group previously demonstrated that pathogenic leptospires secrete proteases capable of cleaving and inactivating key molecules of the human complement system, allowing these bacteria to circumvent host´s innate immune defense mechanisms. Given the successful dissemination of leptospires during infection, we wondered if such proteases would target a broader range of host molecules. In the present study, the proteolytic activity of secreted leptospiral proteases against a panel of extracellular matrix and plasma proteins was assessed. The culture supernatant of the virulent L. interrogans serovar Kennewicki strain Fromm degraded human fibrinogen, plasma fibronectin, collagen Type 1, and the proteoglycans decorin, biglycan, and lumican. Proteolytic activity was inhibited by 1,10-phenanthroline, suggesting the participation of metalloproteases. Laminin, matrigel, plasminogen and thrombin were not cleaved by proteases present in the supernatants. Moreover, production of proteases might be an important virulence determinant since culture-attenuated or saprophytic Leptospira did not display proteolytic acticity against ECM or plasma components. A search against Leptospira genomes allowed identification of four thermolysins, which are metalloproteases found exclusively in pathogenic species. One of them, encoded by LIC13322, was produced in the recombinant form and displayed proteolytic activity against fibrinogen, biglycan and decorin. Comparative exoproteomic analyses using Fromm and Patoc I strains were also performed and allowed identification of a few metalloproteases that could be involved in the degradation of host components. The ability to cleave connective tissue molecules and coagulation cascade proteins may certainly contribute to invasion and tissue destruction observed upon infection with Leptospira.