Ganciclovir attenuates the respiratory disease induced by Equid alphaherpesvirus 1 in rabbits / O ganciclovir atenua a doença respiratória produzida pelo alfaherpesvírus equino 1 em coelhos

Equid alphaherpesvirus 1 (EHV-1) is an important pathogen of horses, associated with respiratory, neurological disease and abortions. As vaccination is not always effective, anti-herpetic therapy may represent an alternative to prevent the losses caused by the infection. We herein investigated the activity of ganciclovir (GCV), an anti-herpetic human drug, in rabbits experimentally infected with EHV-1. Thirty-days-old New Zealand rabbits were allocated in three groups (6 animals each) and submitted to different treatments: G1 (non-infected controls), G2 (inoculated with EHV-1) - 107 TCID50 intranasally - IN) and G3 (inoculated IN with EHV-1 and treated with GCV - 5mg/kg/day for 7 days) and monitored thereafter. All animals of G2 developed systemic signs (moderate to severe apathy, anorexia), ocular discharge and respiratory signs (serous to mucopurulent nasal discharge), including mild to severe respiratory distress. Viremia was detected in all rabbits of G2 for up to 11 days (mean duration = 6.5 days). One animal died after severe respiratory distress and neurological signs (bruxism, opistotonus). In addition, these animals gained less weight than the control (G1) and GCV-treated rabbits (G3) from days 4 to 14pi (p<0.05). The clinical score of rabbits of G2 was statistically higher than the other groups from days 3 to 6pi (p<0.05), demonstrating a more severe disease. In contrast, G3 rabbits did not present systemic signs, presented only a mild and transient nasal secretion and gained more weight than G2 animals (p<0.05). In addition, viremia was detected in only 3 rabbits and was transient (average of 2.3 days). Thus, administration of GCV to rabbits inoculated IN with EHV-1 resulted in an important attenuation of the clinical disease as demonstrated by full prevention of systemic signs, maintenance of weight gain and by drastic reduction in viremia and in the magnitude of respiratory signs. These results are promising towards further testing of GCV as a potential drug for anti-herpetic therapy in horses.(AU)

O alfaherpesvírus equino 1 (EHV-1) é um importante patógeno de equinos, associado com doença respiratória, neurológica e abortos. Como a vacinação nem sempre é eficaz, a terapia anti-herpética pode representar uma alternativa para prevenir as perdas causadas pela infecção. Para tal, investigou-se a atividade do ganciclovir (GCV), uma droga anti-herpética de uso humano, em coelhos infectados experimentalmente com o EHV-1. Coelhos da raça Nova Zelândia com 30 dias de idade foram alocados em três grupos (6 animais cada) e submetidos a diferentes tratamentos: G1 (controles não infectados), G2 (inoculados com o EHV-1) - 107 TCID50 intranasal - IN) e G3 (inoculados IN com o EHV-1 e tratados com GCV - 5mg/kg/dia por 7 dias), e monitorados posteriormente. Todos os animais do G2 desenvolveram sinais sistêmicos (apatia moderada a grave, anorexia), secreção ocular e sinais respiratórios (secreção nasal serosa a mucopurulenta), incluindo dificuldade respiratória leve a grave. Viremia foi detectada em todos os coelhos do G2 por até 11 dias (duração média = 6,5 dias). Um animal morreu após dificuldade respiratória grave e sinais neurológicos (bruxismo, opistótono). Além disso, esses animais ganharam menos peso que os coelhos controle (G1) e tratados com GCV (G3) entre os dias 4 e 14pi (p<0,05). O escore clínico de coelhos do G2 foi estatisticamente maior que os demais grupos dos dias 3 a 6pi (p<0,05), demonstrando uma doença mais grave. Em contraste, os coelhos do G3 não apresentaram sinais sistêmicos, apresentaram apenas secreção nasal leve e transiente e ganharam mais peso que os animais do G2 (p<0,05). Além disso, a viremia foi detectada em apenas 3 coelhos e foi transitória (média de 2,3 dias). Assim, a administração de GCV a coelhos inoculados com EHV-1 resultou em uma importante atenuação da doença clínica, como demonstrado pela prevenção completa de sinais sistêmicos, manutenção do ganho de peso e pela redução drástica da viremia e da magnitude dos sinais respiratórios. Estes resultados são promissores para testes adicionais com o GCV para potencial terapêutico anti-herpética em equinos.(AU)

Ganciclovir attenuates the respiratory disease induced by Equid alphaherpesvirus 1 in rabbits

ABSTRACT: Equid alphaherpesvirus 1 (EHV-1) is an important pathogen of horses, associated with respiratory, neurological disease and abortions. As vaccination is not always effective, anti-herpetic therapy may represent an alternative to prevent the losses caused by the infection. We herein investigated the activity of ganciclovir (GCV), an anti-herpetic human drug, in rabbits experimentally infected with EHV-1. Thirty-days-old New Zealand rabbits were allocated in three groups (6 animals each) and submitted to different treatments: G1 (non-infected controls), G2 (inoculated with EHV-1) - 107 TCID50 intranasally - IN) and G3 (inoculated IN with EHV-1 and treated with GCV - 5mg/kg/day for 7 days) and monitored thereafter. All animals of G2 developed systemic signs (moderate to severe apathy, anorexia), ocular discharge and respiratory signs (serous to mucopurulent nasal discharge), including mild to severe respiratory distress. Viremia was detected in all rabbits of G2 for up to 11 days (mean duration = 6.5 days). One animal died after severe respiratory distress and neurological signs (bruxism, opistotonus). In addition, these animals gained less weight than the control (G1) and GCV-treated rabbits (G3) from days 4 to 14pi (p 0.05). The clinical score of rabbits of G2 was statistically higher than the other groups from days 3 to 6pi (p 0.05), demonstrating a more severe disease. In contrast, G3 rabbits did not present systemic signs, presented only a mild and transient nasal secretion and gained more weight than G2 animals (p 0.05). In addition, viremia was detected in only 3 rabbits and was transient (average of 2.3 days). Thus, administration of GCV to rabbits inoculated IN with EHV-1 resulted in an important attenuation of the clinical disease as demonstrated by full prevention of systemic signs, maintenance of weight gain and by drastic reduction in viremia and in the magnitude of respiratory signs. These results are promising towards further testing of GCV as a potential drug for anti-herpetic therapy in horses.

RESUMO: O alfaherpesvírus equino 1 (EHV-1) é um importante patógeno de equinos, associado com doença respiratória, neurológica e abortos. Como a vacinação nem sempre é eficaz, a terapia anti-herpética pode representar uma alternativa para prevenir as perdas causadas pela infecção. Para tal, investigou-se a atividade do ganciclovir (GCV), uma droga anti-herpética de uso humano, em coelhos infectados experimentalmente com o EHV-1. Coelhos da raça Nova Zelândia com 30 dias de idade foram alocados em três grupos (6 animais cada) e submetidos a diferentes tratamentos: G1 (controles não infectados), G2 (inoculados com o EHV-1) - 107 TCID50 intranasal - IN) e G3 (inoculados IN com o EHV-1 e tratados com GCV - 5mg/kg/dia por 7 dias), e monitorados posteriormente. Todos os animais do G2 desenvolveram sinais sistêmicos (apatia moderada a grave, anorexia), secreção ocular e sinais respiratórios (secreção nasal serosa a mucopurulenta), incluindo dificuldade respiratória leve a grave. Viremia foi detectada em todos os coelhos do G2 por até 11 dias (duração média = 6,5 dias). Um animal morreu após dificuldade respiratória grave e sinais neurológicos (bruxismo, opistótono). Além disso, esses animais ganharam menos peso que os coelhos controle (G1) e tratados com GCV (G3) entre os dias 4 e 14pi (p 0,05). O escore clínico de coelhos do G2 foi estatisticamente maior que os demais grupos dos dias 3 a 6pi (p 0,05), demonstrando uma doença mais grave. Em contraste, os coelhos do G3 não apresentaram sinais sistêmicos, apresentaram apenas secreção nasal leve e transiente e ganharam mais peso que os animais do G2 (p 0,05). Além disso, a viremia foi detectada em apenas 3 coelhos e foi transitória (média de 2,3 dias). Assim, a administração de GCV a coelhos inoculados com EHV-1 resultou em uma importante atenuação da doença clínica, como demonstrado pela prevenção completa de sinais sistêmicos, manutenção do ganho de peso e pela redução drástica da viremia e da magnitude dos sinais respiratórios. Estes resultados são promissores para testes adicionais com o GCV para potencial terapêutico anti-herpética em equinos.

Ganciclovir attenuates the respiratory disease induced by Equid alphaherpesvirus 1 in rabbits / O ganciclovir atenua a doença respiratória produzida pelo alfaherpesvírus equino 1 em coelhos

Equid alphaherpesvirus 1 (EHV-1) is an important pathogen of horses, associated with respiratory, neurological disease and abortions. As vaccination is not always effective, anti-herpetic therapy may represent an alternative to prevent the losses caused by the infection. We herein investigated the activity of ganciclovir (GCV), an anti-herpetic human drug, in rabbits experimentally infected with EHV-1. Thirty-days-old New Zealand rabbits were allocated in three groups (6 animals each) and submitted to different treatments: G1 (non-infected controls), G2 (inoculated with EHV-1) - 107 TCID50 intranasally - IN) and G3 (inoculated IN with EHV-1 and treated with GCV - 5mg/kg/day for 7 days) and monitored thereafter. All animals of G2 developed systemic signs (moderate to severe apathy, anorexia), ocular discharge and respiratory signs (serous to mucopurulent nasal discharge), including mild to severe respiratory distress. Viremia was detected in all rabbits of G2 for up to 11 days (mean duration = 6.5 days). One animal died after severe respiratory distress and neurological signs (bruxism, opistotonus). In addition, these animals gained less weight than the control (G1) and GCV-treated rabbits (G3) from days 4 to 14pi (p<0.05). The clinical score of rabbits of G2 was statistically higher than the other groups from days 3 to 6pi (p<0.05), demonstrating a more severe disease. In contrast, G3 rabbits did not present systemic signs, presented only a mild and transient nasal secretion and gained more weight than G2 animals (p<0.05). In addition, viremia was detected in only 3 rabbits and was transient (average of 2.3 days)...(AU)

O alfaherpesvírus equino 1 (EHV-1) é um importante patógeno de equinos, associado com doença respiratória, neurológica e abortos. Como a vacinação nem sempre é eficaz, a terapia anti-herpética pode representar uma alternativa para prevenir as perdas causadas pela infecção. Para tal, investigou-se a atividade do ganciclovir (GCV), uma droga anti-herpética de uso humano, em coelhos infectados experimentalmente com o EHV-1. Coelhos da raça Nova Zelândia com 30 dias de idade foram alocados em três grupos (6 animais cada) e submetidos a diferentes tratamentos: G1 (controles não infectados), G2 (inoculados com o EHV-1) - 107 TCID50 intranasal - IN) e G3 (inoculados IN com o EHV-1 e tratados com GCV - 5mg/kg/dia por 7 dias), e monitorados posteriormente. Todos os animais do G2 desenvolveram sinais sistêmicos (apatia moderada a grave, anorexia), secreção ocular e sinais respiratórios (secreção nasal serosa a mucopurulenta), incluindo dificuldade respiratória leve a grave. Viremia foi detectada em todos os coelhos do G2 por até 11 dias (duração média = 6,5 dias). Um animal morreu após dificuldade respiratória grave e sinais neurológicos (bruxismo, opistótono). Além disso, esses animais ganharam menos peso que os coelhos controle (G1) e tratados com GCV (G3) entre os dias 4 e 14pi (p<0,05). O escore clínico de coelhos do G2 foi estatisticamente maior que os demais grupos dos dias 3 a 6pi (p<0,05), demonstrando uma doença mais grave. Em contraste, os coelhos do G3 não apresentaram sinais sistêmicos, apresentaram apenas secreção nasal leve e transiente e ganharam mais peso que os animais do G2 (p<0,05). Além disso, a viremia foi detectada em apenas 3 coelhos e foi transitória (média de 2,3 dias)...(AU)

In vitro activity of six antiviral drugs against equid alphaherpesvirus type 1 indicates ganciclovir as promising drug for in vivo studies / A atividade in vitro de seis drogas antivirais contra o alfaherpesvírus equino tipo 1 indica que o ganciclovir é uma droga promissora para estudos in vivo

Equid alphaherpesvirus type 1 (EHV-1) is distributed worldwide and is a major agent of abortion, respiratory and neurological disease in horses. No specific treatment is available for EHV-1 infection, yet the potential of antiviral therapy has been explored. In this study we investigated the in vitro activity of Acyclovir, Ganciclovir, Foscarnet, Famciclovir, Vidarabina and Cidofovir against EHV-1. For this, the MTT test was performed, in which all the tested drugs showed no toxicity up to 200g/mL. Subsequently, different drug concentrations were submitted to viral plaque reduction assays in cell culture. The selectivity index (SI) of the compounds was determined using the cytotoxic concentration for 50% of cells (CC50), obtained by MTT, and effective drug concentration to inhibit by 50% the number of viral plaques (EC50). Ganciclovir (SI: 490; EC50: 1.9 g/mL) was the most efficient and safest drug against EHV-1, followed by Cidofovir (SI: 150, EC50: 5.7g/mL), Acyclovir (SI: 37.4, EC50: 22.2g/mL), Famciclovir (SI: 25.1, EC50: 24.5g/mL), Vidarabine (SI: 12.2, EC50: 40.9g/mL) and Foscarnet (SI: 6.9, EC50: 49.5 g/mL), respectively. These results indicated that Ganciclovir (followed by Cidofovir), is a promising candidate for use in in vivo experiments.(AU)

O alfaherpesvírus equino tipo 1 (EHV-1) está amplamente distribuído nos rebanhos equinos de todo o mundo e é um dos principais agentes causadores de abortos, doença respiratória e neurológica em equinos. Ainda não há tratamento específico para a infecção pelo EHV-1 em equinos, mas o potencial da terapia antiviral tem sido investigado. Neste trabalho, foi investigada a atividade anti-herpética in vitro dos fármacos Aciclovir, Ganciclovir, Foscanet, Famciclovir, Vidarabina e Cidofovir frente ao EHV-1. Para isso, foi realizado o teste de MTT, em que todas as drogas não apresentaram citotoxicidade até a dose de 200g/mL. A seguir, diferentes concentrações dos fármacos foram submetidas ao teste de redução de placas virais em cultivo celular. O índice de seletividade (IS) dos compostos foi determinado usando a concentração citotóxica para 50% dos cultivos celulares (CC50), obtida pelo MTT, e pela concentração dos fármacos efetiva para inibir em 50% o número de placas virais (EC50). O Ganciclovir (IS: 490; EC50: 1,9g/mL) foi o mais eficiente e seguro frente ao EHV-1, seguido pelo Cidofovir (IS: 150; EC50: 5,7 g/mL), Aciclovir (IS: 37,4; EC50: 22,2g/mL), Famciclovir (IS: 25,1; EC50: 24,5g/mL), Vidarabina (IS: 12,2; EC50: 40,9g/mL) e Foscarnet (IS: 6,9; EC50: 49,5g/mL). Estes resultados indicam que o Ganciclovir constitui-se em um candidato para uso em experimentos in vivo.(AU)

PERFIL SANITÁRIO DE ASININOS ERRANTES DO NORDESTE BRASILEIRO

A anemia infecciosa equina, a arterite viral equina, a febre do Nilo ocidental, as encefalomielites equinas leste, oeste e venezuelana, as herpesviroses equinas e o mormo são doenças infecciosas que acometem os membros da família Equidae (equinos, asininos e muares). A maioria dos estudos de prevalência dessas doenças foi conduzida em equinos (Equus caballus), com pouca informação comparativa sobre a infecção nas outras espécies da família, como os asininos (jumentos). O Brasil possui uma das maiores populações de jumentos (Equus asinus) do mundo, concentrada principalmente na região nordeste, sendo que muitos deles vivem de forma errante ou abandonados, com status sanitário desconhecido. O presente trabalho teve por objetivo pesquisar através de métodos sorológicos e moleculares a presença do Equine infectious anemia virus (EIAV), do Alphaarterivirus equid, o West nile virus (WNV), Eastern equine encephalitis vírus (EEEV), Western equine encephalitis virus (WEEV), Venezuelan equine encephalitis vírus (VEEV) e dos Equine herpesvirus (EHV), além do mormo em asininos errantes do nordeste brasileiro. Os resultados encontrados, na população estudada, demonstraram que os asininos não estão infectados pela Burkholderia mallei e VEEV, porém os agentes EIAV, EHV, EEEV, WEEV, Alphaarterivirus equid e WNV estão circulando em algumas regiões do nordeste. Esse é o maior estudo feito para essas oito agentes em asininos no mundo, e permite avaliar o impacto dessa espécie como hospedeira natural dos respectivos agentes infecciosos nesta região do Brasil

Equine infectious anemia, equine viral arteritis, West Nile fever, eastern, western and Venezuelan equine encephalomyelitis, equine herpesviruses and glanders are infectious diseases that affect members of the family Equidae (horses, donkeys and mules). The Most studies on prevalence of these diseases have been conducted in horses (Equus caballus), with little comparative information about the infection in other species of the family, such as donkeys. Brazil has one of the largest populations of donkeys (Equus asinus) in the world, concentrated mainly in the northeast region, and many of them live wandering or abandoned, with unknown health status. The present work aimed to investigate the presence of Equine infectious anemia virus (EIAV), Alphaarterivirus equid, West Nile virus (WNV), Eastern equine encephalitis virus (EEEV), Western equine encephalitis virus (WEEV), Venezuelan equine encephalitis virus (VEEV) and Equine herpesvirus (EHV), in addition to glanders in errant donkeys from northeastern Brazil, through serological and molecular methods. The results found in the studied population showed that donkeys are not affected by Burkholderia mallei and VEEV, but the agents EIAV, EHV, EEEV, WEEV, Alphaarterivirus equid and WNV are circulating in some regions of the northeast. This is the largest study carried out on these eight pathogens in donkeys in the world, and allows us to evaluate impact of this species as a natural host of the respective infectious agents in this region of Brazil

OCORRÊNCIA DE ANTICORPOS CONTRA O HERPESVÍRUS EQUINO E VIRUS DA ARTERITE EQUINA EM REBANHOS EQUINOS DO ESTADO DO RIO DE JANEIRO

title>Abstract /title> p>Infections by equine herpesvirus (EHV) and equine arteritis virus (EAV) have been associated with important economic losses for the equine industry worldwide. Serological studies have indicated the presence of these agents in Brazil. The aim of this study was to evaluate the occurrence of specific antibodies against EAV and EHV in horse herds from different regions of Rio de Janeiro state. For this purpose, serum samples of 581 non-vaccinated animals and 44 breeding mares regularly vaccinated against equine rhinopneumonitis were collected. All samples were submitted to the virus neutralization test for the detection of specific antibodies to each virus. Results showed 29.6% (172/581) of seropositive animals for EHV (titers between 2 and 256) and 0.79% (5/630) for EAV (titers between 2 and 4,096). Considering the non-vaccinated animals, these findings demonstrated that specific antibodies were induced after natural exposure to the respective viruses, suggesting a probable circulation of these agents in the studied herds. /p>

title>Resumo /title> p>A infecção pelo herpesvírus equino (EHV) e o vírus da arterite equina (EAV) tem sido associada a perdas econômicas importantes para a equideocultura em nível mundial. Estudos sorológicos têm demonstrado a circulação destes agentes no Brasil. O presente trabalho teve como objetivo principal estudar a ocorrência de anticorpos específicos contra o EAV e EHV em cavalos oriundos de diferentes regiões do estado do Rio de Janeiro. Para este propósito, foram coletadas amostras de soro de 581 animais não vacinados e de 44 éguas provenientes de um plantel vacinado regularmente contra a rinopneunonite equina. Todas as amostras foram submetidas ao teste de soroneutralização para a pesquisa de anticorpos específicos contra cada um dos vírus. Os resultados demonstraram 29,6% (172/581) de animais soropositivos para o EHV (títulos entre 2 e 256) e 0,79% (05/630) para o EAV (títulos entre 2 e 4.096). Considerando a sorologia positiva em animais não imunizados, os achados demonstram a indução de anticorpos específicos após exposição natural aos respectivos vírus, indicando uma possível circulação desses agentes nos rebanhos analisados. /p>

Ocorrência de anticorpos contra o herpesvírus equino e virus da arterite equina em rebanhos equinos do estado do Rio de Janeiro / Occurrence of antibodies against equine herpesvirus and equine arteritis virus in horse herds of Rio de Janeiro state, Brazil

Infections by equine herpesvirus (EHV) and equine arteritis virus (EAV) have been associated with important economic losses for the equine industry worldwide. Serological studies have indicated the presence of these agents in Brazil. The aim of this study was to evaluate the occurrence of specific antibodies against EAV and EHV in horse herds from different regions of Rio de Janeiro state. For this purpose, serum samples of 581 non-vaccinated animals and 44 breeding mares regularly vaccinated against equine rhinopneumonitis were collected. All samples were submitted to the virus neutralization test for the detection of specific antibodies to each virus. Results showed 29.6% (172/581) of seropositive animals for EHV (titers between 2 and ? 256) and 0.79% (5/630) for EAV (titers between 2 and 4,096). Considering the non-vaccinated animals, these findings demonstrated that specific antibodies were induced after natural exposure to the respective viruses, suggesting a probable circulation of these agents in the studied herds.

A infecção pelo herpesvírus equino (EHV) e o vírus da arterite equina (EAV) tem sido associada a perdas econômicas importantes para a equideocultura em nível mundial. Estudos sorológicos têm demonstrado a circulação destes agentes no Brasil. O presente trabalho teve como objetivo principal estudar a ocorrência de anticorpos específicos contra o EAV e EHV em cavalos oriundos de diferentes regiões do estado do Rio de Janeiro. Para este propósito, foram coletadas amostras de soro de 581 animais não vacinados e de 44 éguas provenientes de um plantel vacinado regularmente contra a rinopneunonite equina. Todas as amostras foram submetidas ao teste de soroneutralização para a pesquisa de anticorpos específicos contra cada um dos vírus. Os resultados demonstraram 29,6% (172/581) de animais soropositivos para o EHV (títulos entre 2 e ? 256) e 0,79% (05/630) para o EAV (títulos entre  2 e 4.096). Considerando a sorologia positiva em animais não imunizados, os achados demonstram a indução de anticorpos específicos após exposição natural aos respectivos vírus, indicando uma possível circulação desses agentes nos rebanhos analisados.

Ocorrência de anticorpos contra o herpesvírus equino e virus da arterite equina em rebanhos equinos do estado do Rio de Janeiro / Occurrence of antibodies against equine herpesvirus and equine arteritis virus in horse herds of Rio de Janeiro state, Brazil

Infections by equine herpesvirus (EHV) and equine arteritis virus (EAV) have been associated with important economic losses for the equine industry worldwide. Serological studies have indicated the presence of these agents in Brazil. The aim of this study was to evaluate the occurrence of specific antibodies against EAV and EHV in horse herds from different regions of Rio de Janeiro state. For this purpose, serum samples of 581 non-vaccinated animals and 44 breeding mares regularly vaccinated against equine rhinopneumonitis were collected. All samples were submitted to the virus neutralization test for the detection of specific antibodies to each virus. Results showed 29.6% (172/581) of seropositive animals for EHV (titers between 2 and ? 256) and 0.79% (5/630) for EAV (titers between 2 and 4,096). Considering the non-vaccinated animals, these findings demonstrated that specific antibodies were induced after natural exposure to the respective viruses, suggesting a probable circulation of these agents in the studied herds.(AU)

A infecção pelo herpesvírus equino (EHV) e o vírus da arterite equina (EAV) tem sido associada a perdas econômicas importantes para a equideocultura em nível mundial. Estudos sorológicos têm demonstrado a circulação destes agentes no Brasil. O presente trabalho teve como objetivo principal estudar a ocorrência de anticorpos específicos contra o EAV e EHV em cavalos oriundos de diferentes regiões do estado do Rio de Janeiro. Para este propósito, foram coletadas amostras de soro de 581 animais não vacinados e de 44 éguas provenientes de um plantel vacinado regularmente contra a rinopneunonite equina. Todas as amostras foram submetidas ao teste de soroneutralização para a pesquisa de anticorpos específicos contra cada um dos vírus. Os resultados demonstraram 29,6% (172/581) de animais soropositivos para o EHV (títulos entre 2 e ? 256) e 0,79% (05/630) para o EAV (títulos entre  2 e 4.096). Considerando a sorologia positiva em animais não imunizados, os achados demonstram a indução de anticorpos específicos após exposição natural aos respectivos vírus, indicando uma possível circulação desses agentes nos rebanhos analisados.(AU)

Atividade do ganciclovir em coelhos inoculados com o alfaherpesvírus equino 1

O alfaherpesvírus equino 1 (EHV-1), membro da família Herpesviridae e subfamília Alphaherpesvirinae, possui distribuição mundial e tem sido associado com abortos, doença respiratória e neurológica em equinos. Como os fármacos anti-herpéticos de uso humano ainda não são rotineiramente utilizados em medicina equina, não há tratamento específico para as doenças associadas com o EHV-1. Assim, o objetivo deste trabalho foi investigar a atividade in vivo anti-EHV-1 do ganciclovir (GCV), um análogo de nucleosídeo utilizado no tratamento de infecções herpéticas em humanos. Os testes in vivo foram realizados em coelhos, um modelo experimental para a doença respiratória pelo EHV-1. Para isso, dezoito coelhos da raça Nova Zelândia com aproximadamente 30 dias de idade foram alocados em três grupos de 6 animais cada, e cada grupo recebeu um tratamento: (G1) inoculados pela via intranasal (IN) com meio RPMI; (G2) inoculados pela via IN com 107 DICC50 do EHV-1 cepa Kentucky D e (G3) inoculados com o EHV-1 e tratados com o GCV (via intravenosa, 2,5mg/kg a cada 12h por 7 dias). Após a inoculação, os animais foram monitorados nos aspectos clínicos, virológicos e patológicos durante 15 dias. Todos os animais do G2 apresentaram sinais sistêmicos (apatia, inapetência) e sinais clínicos respiratórios, de severidade variável, entre os dias 3 e 13 pi. Esses sinais consistiram de secreção nasal serosa à mucopurulenta e dificuldade respiratória leve à grave, além de secreção ocular. Além disso, esses animais apresentaram ganho de peso inferior aos grupos controle (G1) e ao grupo tratado com GCV (G3) nos dias 4, 6, 10, 12 e 14 pi (p<0,05). Um coelho deste grupo apresentou sinais neurológicos e morreu no dia 3 pós inoculação (pi). A presença do vírus no pulmão deste animal foi confirmada pelo isolamento viral e achados de histopatologia. Ao contrário, os animais do grupo G3 (inoculados com o EHV-1 e tratados com GCV) não apresentaram sinais sistêmicos e apresentaram apenas secreção nasal serosa leve. O ganho de peso desses animais foi semelhante aos animais do grupo controle (G1) e superior aos do grupo G2 nos dias 4, 6, 10, 12 e 14 pi (p<0,05). Excreção viral em secreções e soroconversão ao EHV-1 foram observados tanto nos animais do G2 quanto do G3, sem diferenças evidentes em magnitude e duração. Assim, o tratamento com GCV nos coelhos infectados com o EHV-1 (G3) resultou em manutenção do ganho diário de peso, abolição dos sinais sistêmicos e atenuação importante dos sinais clínicos respiratórios. Esses resultados são promissores no sentido da utilização do GCV no tratamento de infecções herpéticas em equinos. Não obstante, estudos mais aprofundados investigando-se diferentes doses, frequência de administração e atividade quando administrado após início dos sinais clínicos são necessários antes de sua utilização nessa espécie.

Equine alfaherpervirus 1 (EHV-1), a member of the family Herpesviridae and subfamily Alphaherpesvirinae, is distributed worldwide and associated with abortions, respiratory and neurological disease in horses. No specific treatment for diseases associated with EHV-1 in horses is available, since human anti-herpetic drugs are not yet routinely used in equine medicine. Thus, the objective of this study was to investigate the in vivo anti-herpetic activity of ganciclovir (GCV), a nucleoside analogue drug used in the herpesvirus infections treatment in humans, against EHV-1. In vivo tests were performed in rabbits, an experimental model for EHV-1 respiratory disease. For this, eighteen New Zealand rabbits with approximately 30 days of age were alocated into three groups of 6 animals each and each group received a treatment: (G1) inoculated by the intranasal route (IN) with RPMI medium; (G2) inoculated by the IN route with 107 DICC50 of EHV-1 strain Kentucky D and (G3) inoculated with EHV-1 and treated with GCV (intravenously with 2.5mg / kg every 12h for 7 days). After inoculation, the animals were monitored for clinical, virological and pathological aspects for 15 days. All animals of G2 developed systemic signs (apathy, inappetence) and respiratory signs of variable severity between days 3 and 13 pi. These signs consisted of serous to mucopurulent nasal secretion and mild to severe respiratory distress, as well as ocular secretion. In addition, these animals presented lower weight gain than the control (G1) and GCV (G3) groups at days 4, 6, 10, 12 and 14 pi (p <0.05). A rabbit from this group presented neurological signs and died on day three after inoculation (pi). The presence of the virus in the lung of this animal was confirmed by viral isolation and histopathology. In contrast, animals from the G3 group (inoculated with EHV-1 and treated with GCV) showed no systemic signs and presented only mild serous nasal secretion. The weight gain of these animals was similar to those of the control group (G1) and higher than those of the G2 group at days 4, 6, 10, 12 and 14 pi (p <0.05). Viral excretion in secretions and seroconversion to EHV-1 were observed in both G2 and G3 animals, with no evident differences in magnitude and duration. Thus, GCV treatment in rabbits infected with EHV-1 (G3) resulted in maintenance of daily weight gain, abolition of systemic signs and significant attenuation of respiratory clinical signs. These results are promising for the use of GCV in the treatment of herpes infections in horses. However, further studies investigating different doses, frequency of administration and activity when administered after the onset of clinical signs are necessary prior to its use in this species.

Equine Multinodular Pulmonary Fibrosis Associated with Equine Herpesvirus 5 in a Horse in Brazil

This report describes the first diagnosed case of equine multinodular pulmonary fibrosis associated with equineherpesvirus 5 (EHV-5) in a horse in Brazil. A 7-year-old Thoroughbred mare from a stud farm in southern Brazil died aftera chronic respiratory disease characterized by tachypnea, respiratory distress, and cough accompanied by weight loss,anorexia, and intermittent fever. Hematological findings included mild neutrophilia, lymphopenia, andhyperfibrinogenemia. At necropsy the cadaver was extremely emaciated and the lungs did not collapse when the rib cagewas removed. Significant gross lesions were restricted to the lungs and consisted of numerous, firm, coalescing noduleswidely distributed throughout the organ. The nodules were 1-5 cm in diameter, pale tan-white, and sharply demarcated fromthe scant normal lung parenchyma. Microscopically, the nodules consisted of marked expansion of the interstitium by wellorganized,mature collagen and infiltration by lymphocytes, macrophages, neutrophils and occasional eosinophils. Cuboidalepithelial cells lined the alveoli in affected areas and their lumina were filled with a moderate to high number of neutrophilsand foamy macrophages, which occasionally displayed oval amphophilic intranuclear inclusion bodies. Nucleic acidsequence analyses of amplicons from polymerase chain reaction assays targeting the viral gBand gHgenes showed closesthomology with multiple corresponding sequences of the gB and gH genes of EHV 5 available in GenBank.

Equine Multinodular Pulmonary Fibrosis Associated with Equine Herpesvirus 5 in a Horse in Brazil

This report describes the first diagnosed case of equine multinodular pulmonary fibrosis associated with equineherpesvirus 5 (EHV-5) in a horse in Brazil. A 7-year-old Thoroughbred mare from a stud farm in southern Brazil died aftera chronic respiratory disease characterized by tachypnea, respiratory distress, and cough accompanied by weight loss,anorexia, and intermittent fever. Hematological findings included mild neutrophilia, lymphopenia, andhyperfibrinogenemia. At necropsy the cadaver was extremely emaciated and the lungs did not collapse when the rib cagewas removed. Significant gross lesions were restricted to the lungs and consisted of numerous, firm, coalescing noduleswidely distributed throughout the organ. The nodules were 1-5 cm in diameter, pale tan-white, and sharply demarcated fromthe scant normal lung parenchyma. Microscopically, the nodules consisted of marked expansion of the interstitium by wellorganized,mature collagen and infiltration by lymphocytes, macrophages, neutrophils and occasional eosinophils. Cuboidalepithelial cells lined the alveoli in affected areas and their lumina were filled with a moderate to high number of neutrophilsand foamy macrophages, which occasionally displayed oval amphophilic intranuclear inclusion bodies. Nucleic acidsequence analyses of amplicons from polymerase chain reaction assays targeting the viral gBand gHgenes showed closesthomology with multiple corresponding sequences of the gB and gH genes of EHV 5 available in GenBank.(AU)

AVALIAÇÃO DA PRESENÇA DE HERPESVÍRUS (ALPHA E GAMMA) NO TRATO RESPIRATÓRIO SUPERIOR DE EQUINOS E MUARES

O Brasil possui o maior rebanho de equinos da América Latina e o terceiro mundial. Somados aos muares (mulas e burros) e asininos (jumentos e jumentas) são 8 milhões de animais. As viroses possuem grande importância sanitária e econômica na equideocultura mundial, destacando-se as infecções herpéticas. As doenças respiratórias estão entre as mais comuns entre os equinos. No Brasil, até o momento, existem poucos estudos que definem as principais causas de morbidade e mortalidade nos equídeos. Os objetivos deste estudo foram avaliar a presença de DNA de herpesvírus equino (EHV) no trato respiratório superior de equinos assintomáticos e detectar a presença de EHV em potros muares sintomáticos e assintomáticos nos primeiros seis meses de idade. No primeiro estudo foi avaliada a presença de EHV -1, -2, -4 e -5 em 17 amostras de soro e lavado traqueal coletados de potros muares sintomáticos e assintomáticos, de uma fazenda do estado do Rio de Janeiro, Brasil. Três lavados traqueais foram coletados de cada animal durante 6 meses, desde o primeiro mês de idade. A detecção do vírus foi realizada pela técnica de nested-PCR, utilizando primers específicos para o EHV -1, -2, -4 e -5 identificados pelo gene da glicoproteína B (gB). Dos resultados obtidos pela técnica de nested-PCR foram confirmados por sequenciamento. As amostras positivas para EHV-1 e -4 na nested-PCR, foram testadas pelo Kit de ELISA Svanovir® EHV-1 / EHV-4 Ab (Svanova) para a detecção de anticorpos. Doze lavados traqueais (10 mulas) foram positivos para EHV. Quatro amostras foram positivas para EHV-2, 5 (4 mulas) para EHV -5, 2 amostras (2 mulas) para EHV-1 e 1 (1 mula) para EHV-4. O soro dos animais com infecção aguda e convalescentes testados pela técnica de ELISA foram negativos para EHV-1. Entretanto, para EHV-4 o soro na fase convalescente foi positivo, sugerindo infecção aguda. Estes resultados sugerem que as mulas podem ser portadoras de EHV e são importantes fontes de infecção, uma vez que equinos e muares habitam o mesmo ambiente. O segundo estudo teve como objetivo avaliar a presença de DNA de herpesvírus no trato respiratório superior de equinos assintomáticos. Foram coletados 18 suabes nasais de um rebanho localizado no Paraná e 8 de um rebanho localizado no Rio Grande do Sul. A técnica de nested-PCR foi utilizada para o diagnóstico de EHV -1, -2, -4 e -5 pela amplificação da glicoproteína B (gB). A identidade das sequências foi confirmada em comparação com sequências depositadas em GenBank. Este estudo identificou alta frequência de gamaherpesvírus em equinos assintomáticos, sendo 15,4% para EHV-2, 46,1% EHV-5, 15,4% para EHV-2 e -5. Todas as amostras foram negativas para EHV-1 e -4. A alta taxa de detecção de EHV-2 e -5 em equinos assintomáticos deste estudo sugere que as infecções causadas pelo gamaherpesvírus podem ser endêmicas no país. O diagnóstico de EHV-1, -2, -4 e -5 em equinos e muares demonstra uma associação comum destas viroses em equídeos.

Brazil has the largest herd of horses in Latin America and the third in the world, added to mule (mules) and asininos (donkeys) are 8 million animals. Viruses have an economic and sanitary importance in the equideoculture world, mainly for infections caused by herpesvirus. Respiratory diseases have more incidence among horses populations all over the world. In Brazil, until now, there are few publicatios that shown the main causes of morbidity and mortality in equines. The aims of this study were to evaluate the presence of equine herpesvirus DNA in the upper respiratory tract of asymptomatic horses and to identify the presence of EHV in symptomatic and asymptomatic mules foals in the first six months of age. The first study aimed to assess the presence of equine herpesviruses -1, -2, -4 and -5 in mule foals during this early period. For this purpose, serum and tracheal wash samples were collected from 17 symptomatic and asymptomatic mule foals from a farm in Brazil, Rio de Janeiro state. Three tracheal wash were collected from each animal during six months, since of the first month of age. The virological detection was performed by nested-PCR technique, by specific primers for EHV-1, -2, -4 and -5, targeting the B glycoprotein (gB) gene. The results of nested-PCR were confirmed by sequencing. Acute and convalescent sera of mule foals having PCR positive results for EHV-1 or -4 were tested with Kit ELISA Svanovir® EHV-1/EHV-4-Ab (Svanova) for differentiation of antibodies response against both viruses. Twelve tracheal samples (10 mules) were positive for EHV. With the specific EHV primers (gB), 4 samples were positive for EHV-2, and 5 samples (4 mules) were positive for EHV-5. In addition, 2 samples (2 mules) were positive for EHV-1, and 1 sample was positive for EHV-4. The acute and convalescent sera of these foals, tested by ELISA, were negative for EHV-1. For the EHV-4 positive foal, the acute serum was negative, but the convalescent serum was highly positive, indicating seroconversion and suggesting active infection. These results suggest that mules may be carriers for equine herpesviruses, and important sources of infection since horses and mules usually inhabit the same environment. The second study evaluated the presence of EHV-2 and -5 in horses from Brazil. 18 nasal swabs were collected from a herd located in Paraná and 8 from a herd located in Rio Grande do Sul. The nested-PCR technique was used to detect EHV-2 and -5 with the partial amplification of gB, the same was done for EHV-1 and -4. The identity of the sequences was confirmed in comparison with sequences deposited in GenBank. This study identified a high frequency of gamma equine virus in adult asymptomatic horses, 15,4% for EHV-2, 46,1% for EHV-5 and 15,4% for EHV-2 and -5. All samples were negative for EHV-1 and -4. The high detection of EHV-2 and -5 in asymptomatic horses, in this study, suggests that gammaherpesvirus infections may be endemic in Brazil. EHV-1, -2, -4 and -5 diagnoses in horses and mules suggests a common association of these viruses in equideos populations.

Clonagem e expressão do gene da glicoproteína D do herpesvírus equídeo tipo 1 em Pichia pastoris e avaliação de sua imunogenicidade

O herpesvírus equídeo 1 (EHV-1) apresenta distribuição mundial e causa graves prejuízos à equídeocultura e a cadeia produtiva desse agronegócio, como agente de surtos de doença respiratória, reprodutiva e neurológica, em animais jovens e adultos. A glicoproteína D do EHV-1 (gDEHV-1) é uma glicoproteína do envelope, essencial para a penetração do agente em células do hospedeiro e já demonstrou capacidade de induzir proteção contra esse agente em modelos murino e equino. O objetivo deste trabalho foi clonar, expressar e demonstrar a imunogenicidade da gDEHV-1 expressa em Pichia pastoris, em modelo murino. Para tanto, avaliou-se a resposta imune induzida por duas vacinas: uma formulada com a gDEHV-1 e outra com a gDEHV-1 associada ao EHV-1; frente a três vacinas: uma comercial, formulada com o EHV-1 associado ao EHV-4, outra experimental, formulada com EHV-1, e o controle, formulado com PBS. Em todas as vacinas o adjuvante utilizado foi hidróxido de alumínio a 10%. Os resultados encontrados permitem concluir que a glicoproteína D recombinante do EHV-1, expressa em P. pastoris, demonstrou sua antigenicidade e imunogenicidade. Além disso, conservou epítopos que permitiram sua identificação por anticorpos específicos anti-EHV-1 induzidos pelas vacinas, comercial e experimental, formuladas com vírus íntegro inativado. A vacina experimental contendo vírus íntegro (EHV-1) inativado acrescido da glicoproteína D recombinante do EHV-1 foi significativamente superior na indução de anticorpos específicos contra a gDEHV-1, no ELISA indireto, em comparação com as vacinas contendo vírus íntegro ou de subunidades do vírus.

Equine herpesvirus 1 (EHV-1) has a worldwide distribution and causes serious damage to the equidoculture and the productive chain of this agribusiness, as an agent of outbreaks of respiratory, reproductive and neurological disease, in young and adult animals. EHV-1 glycoprotein D (gDEHV-1) is an enveloped glycoprotein essential for the agent penetration into the host cells and has already demonstrated the ability to induce protection against this agent in murine and equine models. The objective of this work was to clone, express and demonstrate the immunogenicity of gDEHV-1 expressed in Pichia pastoris, in a murine model. For this, the immune response induced by two vaccines was evaluated: one formulated with gDEHV-1 and another with gDEHV-1 associated with EHV-1; compared to three vaccines: one commercial, formulated with EHV-1 associated with EHV-4, another experimental, formulated with EHV-1, and the control, formulated with PBS. In all vaccines the adjuvant used was 10% aluminum hydroxide. The results showed that recombinant D-glycoprotein EHV-1, expressed in P. pastoris, demonstrated its antigenicity and immunogenicity. In addition, it conserved epitopes that allowed its identification by commercial and experimental vaccine-induced anti-EHV-1 specific antibodies formulated with inactivated whole virus. The experimental vaccine containing inactivated whole virus (EHV-1) plus the recombinant D-glycoprotein of EHV-1 was significantly superior in the induction of specific antibodies against gDEHV-1 in the indirect ELISA when compared to the vaccines containing whole virus or subunits of the virus.

Pesquisa de anticorpos anti-Neospora spp. e anti-herpersvírus equino em cavalos de tração no município de Santa Maria, RS, Brasil

This study aimed to investigate the prevalence of antibodies against Neospora spp and equine herpesvirus (EHV) among carter horses in Santa Maria, RS, Brazil. Serum samples from 91 horses, involved in the extension project "Programa de Ação Social Amigo do Carroceiro" at Universidade Federal de Santa Maria, were collected from March of 2006 to May of 2008. Immunofluorescence assay was used to detect Neospora spp. and virus neutralization assay to EHV. This research showed 15.4% (14/91) samples were positive to Neospora spp. and no antibodies against EHV were detected. These results suggest the presence of Neospora spp. in carter horses of Santa Maria. Additional studies are needed to determine the zoonotic potential risk and the sanitary importance this protozoan in the population analyzed.

O presente estudo teve como objetivo investigar a ocorrência de anticorpos contra Neospora spp. e o herpesvírus equino (EHV) em soros de cavalos de tração de Santa Maria, RS, Brasil. Os soros sanguineos provenientes de 91 animais do projeto de extensão da Universidade Federal de Santa Maria "Programa de Ação Social Amigos do Carroceiro" (PASAC) foram colhidos no período de março de 2006 a maio de 2008 e submetidos ao teste de imunofluorescência indireta para detecção de anticorpos anti-Neospora spp. e à técnica de soro neutralização para anticorpos anti-EHV. Constatou-se que 15,4% (14/91) das amostras foram reagentes para o Neospora spp. e não se verificou a presença da infecção pelo herpesvírus equino. Sugere-se a circulação do coccídeo na população equina estudada. Salienta-se a necessidade de estudos adicionais sobre o potencial risco zoonótico e a importância sanitária desse protozoário nos cavalos de tração.

Pesquisa de anticorpos anti-Neospora spp. e anti-herpersvírus equino em cavalos de tração no município de Santa Maria, RS, Brasil

This study aimed to investigate the prevalence of antibodies against Neospora spp and equine herpesvirus (EHV) among carter horses in Santa Maria, RS, Brazil. Serum samples from 91 horses, involved in the extension project "Programa de Ação Social Amigo do Carroceiro" at Universidade Federal de Santa Maria, were collected from March of 2006 to May of 2008. Immunofluorescence assay was used to detect Neospora spp. and virus neutralization assay to EHV. This research showed 15.4% (14/91) samples were positive to Neospora spp. and no antibodies against EHV were detected. These results suggest the presence of Neospora spp. in carter horses of Santa Maria. Additional studies are needed to determine the zoonotic potential risk and the sanitary importance this protozoan in the population analyzed.

O presente estudo teve como objetivo investigar a ocorrência de anticorpos contra Neospora spp. e o herpesvírus equino (EHV) em soros de cavalos de tração de Santa Maria, RS, Brasil. Os soros sanguineos provenientes de 91 animais do projeto de extensão da Universidade Federal de Santa Maria "Programa de Ação Social Amigos do Carroceiro" (PASAC) foram colhidos no período de março de 2006 a maio de 2008 e submetidos ao teste de imunofluorescência indireta para detecção de anticorpos anti-Neospora spp. e à técnica de soro neutralização para anticorpos anti-EHV. Constatou-se que 15,4% (14/91) das amostras foram reagentes para o Neospora spp. e não se verificou a presença da infecção pelo herpesvírus equino. Sugere-se a circulação do coccídeo na população equina estudada. Salienta-se a necessidade de estudos adicionais sobre o potencial risco zoonótico e a importância sanitária desse protozoário nos cavalos de tração.

Avaliação da resposta inflamatória no sistema nervoso central causada pelo herpesvírus equino tipo 1 utilizando um modelo murino de neuroinfecção

O herpesvirus equino tipo 1 (EHV-1) é um importante patógeno que causa doença respiratória, abortamento e desordens neurológicas em equinos. O presente estudo foi realizado visando avaliar a resposta inflamatória causada pelo EHV-1 por meio da análise das manifestações clínicas, alterações histopatológicas e resposta imune do hospedeiro no sistema nervoso central (SNC). Camundongos das linhagens BALB/c (H2d), C57BL/6 (H2b) e C3H/HeJ (H2k) foram inoculados por via intranasal com as estirpes brasileiras A4/72 e A9/92 do EHV-1. Nesse estudo, associou-se a histopatologia, a resposta de citocinas pró-inflamatórias no SNC de camundongos das diferentes linhagens e o método de transcrição reversa seguida pela reação em cadeia da polimerase quantitativa em tempo real (RT-qPCR) para investigar a relação entre a infecção pelo EHV-1 e a resposta inflamatória com o desenvolvimento de lesões. As estirpes brasileiras A4/72 e A9/92 do EHV-1 causaram infecção aguda e letal nas diferentes linhagens de camundongos isogênicos. Os sinais clínicos e neurológicos, tais como perda de peso, pelos arrepiados, postura arqueada, apatia, dispneia, desidratação e sialorreia apareceram entre o 2º e 3º dia pós-infecção (dpi). Essas manifestações foram acompanhadas pelo aumento da sensibilidade a estímulos externos, convulsões, recumbência e morte. As alterações histopatológicas consistiram em necrose neuronal, edema, necrose de liquefação, leptomeningite neutrofílica, manguito perivascular, hemorragia focal, inflamação não supurativa, gliose multifocal e infiltração perivascular de células polimorfonucleares e mononucleares. As características e a extensão das lesões variaram entre as linhagens de camundongos. Animais inoculados com a estirpe A4/72 apresentaram lesões histopatológicas de maior grau de severidade quando comparados com aqueles inoculados com a estirpe A9/92. Observou-se aumento da concentração plasmática de TNF-, IL-6, CCL2 e IFN-g nos camundongos infectados pelo EHV-1 no 2º dpi. Detectou-se aumento da concentração plasmática e da expressão de mRNA para TNF-, IL-6 e CCL2 no SNC dos camundongos infectados pelo EHV-1 no 3º dpi; entretanto, não houve aumento da concentração plasmática nem da expressão de mRNA para IFN-g no 3º dpi. Evidenciou-se que a estirpe A4/72 do EHV-1 induz uma resposta imune sistêmica mais efetiva, enquanto que o vírus A9/92 culmina em uma resposta imunológica mais efetiva no SNC. Os camundongos com o fundo genético C57BL/6 e BALB/c mostraram níveis mais altos de expressão de mRNA para TNF-, IL-6 e CCL2, quando comparados com os C3H/HeJ. A gravidade dos sinais clínicos observados em camundongos infectados pode ser correlacionada com o pico dessas citocinas pró-inflamatórias (TNF- e IL-6) e da quimiocina CCL2, que são produzidas logo após a infecção viral por células residentes da glia e/ou infiltrativas no SNC. Esses achados indicam que as diferentes linhagens de camundongos isogênicos são susceptíveis à infecção por estirpes neuropatogênicas do EHV-1; as diferenças no padrão de alterações histopatológicas mostram que elas dependem do hospedeiro infectado, da estirpe viral e da resposta imunológica; e a supressão do interferon (IFN) tipo 1 sugere ser um mecanismo de escape do EHV-1 frente ao sistema imune. A baixa expressão de IL-6, TNF- e da quimiocina CCL2 em camundongos C3H/HeJ se explica pela mutação no gene toll-like receptor 4 (TLR-4) existente nessa linhagem de camundongo. Adicionalmente, os camundongos C3H/HeJ apresentaram lesões histopatológicas mais severas no SNC quando comparados com BALB/c e C57BL/6. Sugere-se que o IFN tipo I e o gene TLR-4 apresentam importante papel na patogênese do EHV-1 bem como proteínas do agente viral responsáveis pela supressão do IFN e partículas virais que sejam reconhecidas pelo TLR-4 podem ser alvos para o desenvolvimento de novas abordagens para o tratamento da doença viral e para a eficiência de imunógenos.

The equine herpesvirus type 1 (EHV-1) is an important pathogen that causes respiratory disease, abortion and neurological disorders in horses. This study was conducted to evaluate the inflammatory response caused by EHV-1 by the analysis of clinical manifestations, histopathological changes and the host immune response in the central nervous system (CNS). BALB/c (H2d), C57BL/6 (H2b) and C3H/HeJ (H2k) mice were inoculated intranasally with Brazilian EHV-1 strains A4/72 and A9/92. In this study, joined histopathology, the response of proinflammatory cytokines in the CNS of mice of different strains and reverse transcription method followed by quantitative polymerase chain reaction in real time (RT-qPCR) to investigate the relationship between infection by EHV-1 and inflammatory response in the development of lesions. Brazilian strains A4/72 and A9/92 EHV-1 caused acute lethal infection in different strains of inbred mice. Clinical and neurological signs such as weight loss, the bristly hair, hunched posture, apathy, dyspnoea, dehydration and salivary hypersecretion appeared between 2nd and 3rd day after infection (dpi). These events were accompanied by increase in the sensitivity to external stimuli, convulsions, recumbency and death. Histopathological changes were neuronal necrosis, edema, liquefaction necrosis, neutrophilic leptomeningitis, perivascular cuff, focal hemorrhage, non-suppurative inflammation, multifocal gliosis and perivascular infiltration of polymorphonuclear and mononuclear cells. The characteristics and the extent of the injuries varied between strains of mice. Animals inoculated with the A4/72 strain showed histopathological lesions of greater severity when compared with those inoculated with the A9/92 strain. There was an increase in plasma concentrations of TNF-, IL-6, CCL2 and IFN-g in mice infected by EHV-1 in 2nd dpi. Plasma concentrations and the expression of mRNA for TNF-, IL-6 and CCL2 in the CNS of mice infected with EHV-1 at 3rd dpi were increased; however, there was no increase in plasma concentration or expression for the mRNA of IFN-g at 3rd dpi. It was evident that the EHV-1 strain A4/72 induces a more effective systemic immune response, whereas the A9/92 virus culminates in a more effective immune response in the CNS. The C57BL/6 and BALB/c mice showed higher levels of mRNA expression for TNF-, IL-6 and CCL2, compared to C3H/HeJ mice. The severity of clinical signs observed in infected mice can be correlated with the peak of these proinflammatory cytokines (TNF- and IL-6) and CCL2 chemokine, which are then produced after viral infection by resident glial cells and/or infiltrative cells in the CNS. These findings indicate that different strains of inbred mice are susceptible to infection neuropathogenic EHV-1 strains; the differences in the pattern of pathological changes show that they depend on the infected host, the EHV-1 strain and the immune response; and the suppression of interferon (IFN) type I suggested to be an escape mechanism for the EHV-1 against the immune system. The low expression of IL-6, TNF- and chemokine CCL2 in C3H/HeJ mice can be explained by a mutation in toll-like receptor 4 (TLR-4) gene existing in this mouse strain. Additionally, C3H/HeJ mice exhibited more severe histopathological lesions in the CNS as compared to BALB/c and C57BL/6. It is suggested that type I IFN and TLR-4 gene have important role in the pathogenesis of EHV-1 and viral agent proteins responsible for the suppression of IFN and the viral particles that are recognized by TLR-4 can be targets for the development of new approaches for the treatment of viral disease and the efficiency of immunogens.

Inquérito sorológico da infecção por herpesvírus equino no Estado de Minas Gerais / Serological survey of equine herpesvirus infection in Minas Gerais state

Os herpesvírus equinos tipo 1 (HVE-1) e 4 (HVE-4) são agentes causadores de diferentes formas de doença em cavalos, das quais as mais comuns são a rinopneumonite, o abortamento, a mortalidade perinatal e a mieloencefalopatia herpética equinas, que causam grandes perdas econômicas. Tem sido descrita mundialmente, havendo poucos estudos no Brasil. O objetivo do presente trabalho foi estudar a ocorrência e a distribuição da infecção por herpesvírus equinos (HVE) em equídeos criados em dez Delegacias Regionais do Estado de Minas Gerais: Almenara, Bambuí, Curvelo, Governador Valadares, Montes Claros, Oliveira, São Gonçalo do Sapucaí, Teófilo Otoni, Unaí e Viçosa. Foi utilizada a técnica de soroneutralização em microplacas com o intuito de detectar anticorpos soro neutralizantes. Das amostras analisadas, 17,6% (145/826) foram soropositivas para o HVE, sendo 18,7% (140/749) cavalos soropositivos, 6,8% (5/73) muares soropositivos e nenhum asinino soropositivo (0/4). Conclui-se que o HVE-1 encontra-se amplamente disseminado no Estado de Minas Gerais, pois todas as regiões estudadas apresentaram animais sororreagentes ao HVE-1. Observou-se maior ocorrência de anticorpos contra o HVE em animais adultos, indicando assim o potencial desses animais como fonte de infecção para os potros. (AU)

Equine herpesvirus type 1 (EHV-1) and 4 (EHV-4) are major pathogens affecting horses, and cause respiratory disease, abortion, perinatal mortality and neurological disease, bringing economical losses. This infection has been reported worldwide, but there are only a few studies in Brazil. The present study was undertaken in order to evaluate the occurrence and distribution of equine herpesviruses (EHV) infection in equids from ten regions of Minas Gerais State: Almenara, Bambuí, Curvelo, Governador Valadares, Montes Claros, Oliveira, São Gonçalo do Sapucaí, Teófilo Otoni, Unaí and Viçosa. To detect antibodies against EHV virus neutralization test in microplates was used. We found 17.6% (145/826) positive animals for EHV. 18.7% (140/749) positive horses, 6.8% (5/73) positive mules and none positive (0/4) donkeys. All ten regions studied showed animals reagents to EHV. The results suggest that EHV is widespread in equids of Minas Gerais State. It was observed a higher occurrence of antibodies against EHV in adult animals, indicating the potential of these animals as source of infection for foals. (AU)

Susceptibilidade de hamsters frente à infecção pelo herpesvirus equino tipo 1 causando encefalite e doença respiratória

Este trabalho teve por objetivo avaliar as alterações respiratórias e neurológicas resultantes da infecção por via intranasal das diferentes estirpes nacionais do herpesvírus equino tipo 1 (EHV-1) em hamsters comparando sua susceptibilidade com estudos sobre infecção do EHV-1 em camundongos e equinos. Para isso, hamsters sírios machos, três semanas de idade, foram infectados por via intranasal com as estirpes do EHV-1 obtidas a partir de fetos abortados e potro neonato infectados (A4/72, A9/92, A3/97 e Iso/72). Os animais foram pesados e examinados diariamente em busca de sinais clínicos e neurológicos. Conforme os sintomas neurológicos apareceram, grupos de cinco hamsters foram eutanasiados por overdose de isoflurano na primeira etapa do projeto, e, de cetamina/xilazina por via intraperitoneal na segunda etapa. Na necropsia, sistema nervoso central (SNC), pulmão, fígado, baço e timo foram coletados para isolamento viral em cultura de células E-dermal e para análise histopatológica. Na segunda etapa do projeto, a lavagem broncoalveolar (LBA) com 3 ml de PBS por hamsters foi realizada para determinar a resposta inflamatória pulmonar através da contagem total e diferencial de leucócitos. Similar aos experimentos com camundongos, hamsters desafiados com as estirpes virais A4/72 e A9/92 apresentaram manifestações clínicas severas no terceiro dia pós-inoculação (dpi), tais como perda de peso aguda, dispnéia, desidratação, decúbito e morte. Observou-se também sinais neurológicos como hiperexcitabilidade, paralisia, espasmos, perda de propriocepção, andar em círculos e convulsões. Ao contrário dos camundongos, que não desenvolveram a doença; hamsters inoculados com as estirpes virais A3/97 e Iso/72 manifestaram sintomas respiratórios e neurológicos agudos entre quarto e quinto dpi, sendo as alterações respiratórias as mais evidentes, principalmente hemoptise e conjuntivite. O isolamento do vírus a partir do SNC foi positivo em todos os animais infectados; no entanto, todas as amostras de pulmões foram positivas apenas nos grupos infectado pelas estirpes virais A9/92 e A4/72. Todas as estirpes do EHV-1 foram isoladas a partir do baço, no entanto, a partir do timo foram isoladas apenas as estirpes A9/92 e A4/72, e, de fígado somente a estirpe viral Iso/72 não foi isolada. No LBA, a contagem total de leucócitos não demonstrou diferenças de valores significativas entre os grupos experimentais, sendo apenas evidente a presença de eritrócitos, macrófagos e neutrófilos na maioria dos esfregaços dos hamsters infectados. Porém, na contagem diferencial de leucócitos observou-se um aumento significativo de neutrófilo com consequente diminuição significativa de macrófagos nos hamsters infectados pelas estirpes virais A3/97, Iso/72 e A4/72 quando comparados ao grupo controle. Os hamsters infectados pela estirpe viral A9/92 mantiveram valores próximos aos do grupo controle. Ao avaliar microscopicamente o SNC, fígado e pulmão dos hamsters infectados foi observado infiltrado inflamatório, necrose e manguito perivascular em SNC; leucocitose e necrose no parênquima hepático com discreta pericolangite e proliferação de ducto biliar; e em pulmão observou inflamação, necrose, edema e hemorragia em bronquíolos e alvéolos. Concluindo, os resultados apontaram o hamster como a espécie mais susceptível à infecção pelo EHV-1 servindo como um modelo experimental complementar para estudos de doenças respiratória e neurológica provocadas por este agente em equinos. Palavras-chave: Herpesvírus equino tipo 1. Hamster. Susceptibilidade ao EHV-1. Infecção intranasal.

This study aimed to evaluate the respiratory and neurological disorders resulting from intranasal infection with different national strains of equine herpesvirus type 1 (EHV-1) in hamsters comparing their susceptibility to studies about EHV-1 infection in mice and horses. Therefore, male Syrian hamsters, three weeks of age, were infected via intransal with EHV-1 strains obtained from aborted fetuses and neonatal foal infected (A4/72, A9/92, A3/97 and Iso/72). The animals were weighed and examined daily for clinical search and neurological signs. As neurological symptoms appeared five hamsters groups were euthanized by isoflurane overdose in the first stage of the project, and ketamine/xylazine via intraperitoneal in the second stage. At necropsy, central nervous system (CNS), lung, liver, spleen and thymus were collected for virus isolation in E-dermal cell culture and histopathological analysis. In the second stage of the project, bronchoalveolar lavage (BAL) with 3 ml of PBS per hamsters was performed to determine the pulmonary inflammatory response through the total and differential leukocyte count. Similar to the experiments with mice, hamsters challenged with viral strains A4/72 and A9/92 had severe clinical manifestations in the third day post-inoculation (dpi), such as acute weight loss, dyspnea, dehydration, recumbency, and death. It was also observed neurological signs such as hyperexcitability, paralysis, spasms, loss of proprioception, circling and convulsions. Unlike mice, which did not develop disease; hamsters inoculated with viral strains A3/97 and Iso/72 showed acute respiratory and neurological symptoms between fourth and fifth dpi, and the most evident respiratory distress was hemoptysis and conjunctivitis. The virus isolation from CNS was positive in all infected animals; however, all lung samples were positive only in groups infected by A9/92 and A4/72 viral strains. All EHV-1 strains were recovered from spleen, however, only A9/92 and A4/72 viral strains were recovered from thymus, but only Iso/72 viral strain was not recovered from liver. BAL total leukocyte count showed no significant differences in values between the experimental groups but the presence of erythrocytes, macrophages and neutrophils were evident in most smears of infected hamsters. However, in the leukocyte differential count it was observed a significant increase in neutrophils with consequent significant reduction of macrophages in hamsters infected by viral strains A3/97, Iso/72 and A9/92 when compared with the control group. Hamsters infected with the A9/92 viral strain maintained values similar to the control group. When evaluating microscopically the CNS, liver and lungs of infected hamsters it was observed inflammatory infiltrate, necrosis and perivascular cuff in CNS; leukocytosis and necrosis in the liver parenchyma with discrete pericholangitis and bile duct proliferation; and inflammation, necrosis, edema and hemorrhage in the bronchioles and alveoli. Concluding, the results showed the hamster as the most susceptible species to EHV-1 infection serving as a complementary experimental model for studies of respiratory and neurological diseases caused by this agent in horses.

Epidemiological and clinical aspects of equine Herpesvirus encephalitis infection in horses that died with neurological signs from Minas Gerais state, Brazil / Aspectos epidemiológicos e clínicos da infecção neurológica associada ao herpesvírus eqüino 1 (ehv-1) em cavalos que morreram com sinais nervosos no Estado de Minas Gerais, Brasil

During the period of October 2004 until February 2006, 75 samples of central nervous system (CNS) obtained from horses that died with neurological signs in the state of Minas Gerais were sent to the Laboratory of Compared Virology in ICB/UFMG for diagnosis of equine herpesviruses. All samples were previously diagnosticated negative for rabies virus by the Laboratório de Saúde Animal of the Instituto Mineiro de Agropecuária (IMA). Among the analyzed samples, 39 (52%) were positive for the equine herpesvirus 1(EHV-1) through the polymerase chain reaction assay (PCR). In most cases, the histopathological examination of the CNS revealed a mild vasculitis with perivascular mononuclear cuffing, congestion, arterial thrombosis and degeneration of nervous tissue. The positive CNS samples for EHV-1 were obtained from horses. sampled from 30 municipalities of Minas Gerais state. The cases occurred in an isolated form in different periods of the year, not presenting a seasonal character. The clinical course duration was acute, varying between one and four days. The most frequently observed neurological signs were ataxia, unsteadiness in the hind limb, paralysis of hind limbs and recumbency. According to information provided by IMA, the infections caused by EHV-1 were as frequent as the ones caused by rabies virus in horses of Minas Gerais state during the studied period. Hence, it became important to include EHV-1 encephalitis in the differential diagnosis from other diseases of the central nervous system in horses of Minas Gerais state.(AU)

Durante o período de Outubro de 2004 a Fevereiro de 2006, 75 amostras de sistema nervoso central (SNC) oriundas de eqüinos que morreram com sinais neurológicos no estado de Minas Gerais foram enviadas ao Laboratório de Virologia Comparada no ICB/UFMG para o diagnóstico de herpesvírus eqüino. Essas amostras foram previamente diagnosticadas negativas para o vírus da raiva através dos testes de imunofluorescência direta e inoculação em camundongos,no Laboratório de Saúde Animal (LSA) do Instituto Mineiro de Agropecuária (IMA). Dentre as amostras analisadas, 39 (52%) foram positivas para o herpesvírus eqüino 1 (EHV-1) através da técnica de reação em cadeia pela polimerase (PCR). Na maioria dos casos, o exame histopatológico do SNC revelou uma discreta vasculite com infiltrado perivascular de células mononucleares, congestão, trombose arterial e degeneração do tecido nervoso central. As amostras de SNC positivas para o EHV-1 foram coletadas de eqüinos oriundos de 30 municípios de Minas Gerais. Os casos de EHV-1 ocorreram de forma isolada não apresentando caráter sazonal. Na maioria dos casos(71,8%), a evolução dos sinais clínicos foi aguda, sendo que os sinais clínicos observados com mais freqüência foram ataxia, instabilidade dos membros posteriores, paralisia dos membros posteriores e decúbito. De acordo com informações relatadas pelo IMA, as infecções causadas pelo EHV-1 foram tão freqüentes como as infecções causadas pelo vírus da raiva em eqüinos no estado de Minas Gerais durante o período estudado. Portanto, torna-se importante a inclusão da encefalite pelo EHV-1 no diagnóstico diferencial de outras doenças do SNC de eqüinos no estado de Minas Gerais.(AU)

First isolation of equine herpesvirus type 1 from a horse with neurological disease in brazil

ABSTRACT This report describes the first Brazilian equine herpesvirus type 1 (EHV-1) isolation from a single fatal equine herpes myeloencephalopathy case in a mare. The isolation of EHV-1 was confirmed from the first passage of cerebrospinal fluid (CSF) sample in Vero cells by PCR and virus neutralization assay. As virus isolation from CSF is unlikely to be successful, as has been shown in several case reports, this circumstantial evidence suggests that the neurological disease was caused by particularly neurovirulent strain of EHV-1.

RESUMO O presente relato refere-se ao primeiro isolamento no Brasil do herpesvírus eqüino tipo 1 (HVE-1) proveniente de um caso clínico de mieloncefalopatia herpética em uma égua, que evoluiu para o óbito. O isolado do HVE-1, denominado 07/05, foi obtido a partir de uma amostra de líquor na primeira passagem em células Vero, confirmando-se sua identidade pela PCR e pela prova de neutralização viral. Como o isolamento viral a partir do líquor geralmente não é bem sucedido, conforme demonstrado em vários relatos de casos, o presente achado sugere que a doença neurológica foi causada por uma amostra particularmente neurovirulenta de HVE-1.