Detection of efflux pump CmeABC in enrofloxacin resistant Campylobacter spp. strains isolated from broiler chickens (Gallus gallus domesticus) in the state of Rio de Janeiro, Brazil / Detecção da bomba de efluxo CmeABC em cepas de Campylobacter spp. resistentes à enrofloxacina isoladas de frangos de corte (Gallus gallus domesticus) no Estado do Rio de Janeiro, Brasil

Fowls are the main reservoirs of the highly important food-originating pathogen called Campylobacter spp. and broilers' meat and byproducts are the main vehicles of this microorganism. Increasing of Campylobacter spp. resistant strains to fluorquinolones, an antimicrobial class often employed in poultry farming and in human medicine has become a great concern to poultry breeders. In fact, several studies evaluated increasing bacterial resistance against these antimicrobial agents. The role of CmeABC efflux system has been underscored among the resistance mechanisms in Campylobacter spp. to fluorquinolones. This study investigated the occurrence of CmeABC efflux pump in 81 and 78 enrofloxacin resistant strains of Campylobacter jejuni and C. coli respectively, isolated from broilers collected from six abattoirs situated at São José do Vale do Rio Preto/RJ poultry center and from two commercial abattoirs situated at Metropolitan Region of Rio de Janeiro, from 2013 to 2016. The resistance to enrofloxacin was assessed by agar dilution to determine minimum inhibitory concentration (MIC). The CmeABC efflux system was investigated through the detection of genes genes cmeA, cmeB and cmeC by PCR. The activity of CmeABC efflux pump was investigated in 20 strains by using the efflux pump inhibitor Phenylalanine-Arginine ß-Naphthylamide (PAßN). The three genes cmeA, cmeB and cmeC were detected in 94.3% of the strains (C. jejuni = 80 and C. coli = 70), whereas the system was absent or incomplete in 5.7% of strains (C. jejuni = 1 and C. coli = 8). MIC varied between 0.5µg/ml and 64µg/ml, and 88.7% of strains were enrofloxacin resistant and 11.3% featuring intermediate resistance. The inhibition of the efflux pump by PAßN reduced the MIC to enrofloxacin up to eight times in fifteen strains (75%). These results indicate that this system is frequent and active in Campylobacter spp. Resistant strains in the presence of enrofloxacin.(AU)

As aves são os principais reservatórios de Campylobacter spp., importante patógeno de origem alimentar e a carne de frango e produtos derivados são os principais veículos desse microrganismo. O aumento de cepas de Campylobacter spp. resistentes às fluorquinolonas, uma classe antimicrobiana frequentemente empregada na avicultura e na medicina humana, tornou-se uma grande preocupação para os produtores de aves e vários estudos avaliaram o aumento da resistência bacteriana a esses antimicrobianos. O papel do sistema de efluxo CmeABC tem sido enfatizado entre os mecanismos de resistência em Campylobacter spp. à fluorquinolonas. O presente estudo investigou a ocorrência da bomba de efluxo CmeABC em 81 cepas de Campylobacter jejuni e 78 cepas de Campylobacter coli resistentes à enrofloxacina, isoladas de frangos de corte coletados em seis abatedouros situados no polo avícola de São José do Rio Preto/RJ e de dois abatedouros comerciais situados na Região Metropolitana do Rio de Janeiro, de 2013 a 2016. A resistência à enrofloxacina foi avaliada pelo método de diluição em ágar para determinar a concentração inibitória mínima (CIM). O sistema de efluxo CmeABC foi investigado através da detecção dos genes cmeA, cmeB e cmeC por PCR. A atividade da bomba de efluxo CmeABC foi investigada em 20 cepas utilizando o inibidor da bomba de efluxo Phenylalanine-Arginine ß-Naftilamida (PAßN). Os três genes cmeA, cmeB e cmeC foram detectados em 94,3% das cepas (C. jejuni = 80 e C. coli = 70), enquanto o sistema estava ausente ou incompleto em 5,7% das cepas (C. jejuni = 1 e C coli = 8). A CIM variou entre 0,5µg/ml e 64µg/ml e 88,7% das cepas foram resistentes à enrofloxacina, enquanto 11,3% apresentaram resistência intermediária. A inibição da bomba de efluxo pelo PAßN reduziu a CIM da enrofloxacina até oito vezes em quinze cepas (75%). Estes resultados indicam que este sistema é frequente e ativo em cepas resistentes de Campylobacter spp. na presença de enrofloxacina.(AU)

Detection of efflux pump CmeABC in enrofloxacin resistant Campylobacter spp. strains isolated from broiler chickens (Gallus gallus domesticus) in the state of Rio de Janeiro, Brazil / Detecção da bomba de efluxo CmeABC em cepas de Campylobacter spp. resistentes à enrofloxacina isoladas de frangos de corte (Gallus gallus domesticus) no Estado do Rio de Janeiro, Brasil

Fowls are the main reservoirs of the highly important food-originating pathogen called Campylobacter spp. and broilers' meat and byproducts are the main vehicles of this microorganism. Increasing of Campylobacter spp. resistant strains to fluorquinolones, an antimicrobial class often employed in poultry farming and in human medicine has become a great concern to poultry breeders. In fact, several studies evaluated increasing bacterial resistance against these antimicrobial agents. The role of CmeABC efflux system has been underscored among the resistance mechanisms in Campylobacter spp. to fluorquinolones. This study investigated the occurrence of CmeABC efflux pump in 81 and 78 enrofloxacin resistant strains of Campylobacter jejuni and C. coli respectively, isolated from broilers collected from six abattoirs situated at São José do Vale do Rio Preto/RJ poultry center and from two commercial abattoirs situated at Metropolitan Region of Rio de Janeiro, from 2013 to 2016. The resistance to enrofloxacin was assessed by agar dilution to determine minimum inhibitory concentration (MIC). The CmeABC efflux system was investigated through the detection of genes genes cmeA, cmeB and cmeC by PCR. The activity of CmeABC efflux pump was investigated in 20 strains by using the efflux pump inhibitor Phenylalanine-Arginine ß-Naphthylamide (PAßN). The three genes cmeA, cmeB and cmeC were detected in 94.3% of the strains (C. jejuni = 80 and C. coli = 70), whereas the system was absent or incomplete in 5.7% of strains (C. jejuni = 1 and C. coli = 8). MIC varied between 0.5µg/ml and 64µg/ml, and 88.7% of strains were enrofloxacin resistant and 11.3% featuring intermediate resistance. The inhibition of the efflux pump by PAßN reduced the MIC to enrofloxacin up to eight times in fifteen strains (75%). These results indicate that this system is frequent and active in Campylobacter spp. Resistant strains in the presence of enrofloxacin.(AU)

As aves são os principais reservatórios de Campylobacter spp., importante patógeno de origem alimentar e a carne de frango e produtos derivados são os principais veículos desse microrganismo. O aumento de cepas de Campylobacter spp. resistentes às fluorquinolonas, uma classe antimicrobiana frequentemente empregada na avicultura e na medicina humana, tornou-se uma grande preocupação para os produtores de aves e vários estudos avaliaram o aumento da resistência bacteriana a esses antimicrobianos. O papel do sistema de efluxo CmeABC tem sido enfatizado entre os mecanismos de resistência em Campylobacter spp. à fluorquinolonas. O presente estudo investigou a ocorrência da bomba de efluxo CmeABC em 81 cepas de Campylobacter jejuni e 78 cepas de Campylobacter coli resistentes à enrofloxacina, isoladas de frangos de corte coletados em seis abatedouros situados no polo avícola de São José do Rio Preto/RJ e de dois abatedouros comerciais situados na Região Metropolitana do Rio de Janeiro, de 2013 a 2016. A resistência à enrofloxacina foi avaliada pelo método de diluição em ágar para determinar a concentração inibitória mínima (CIM). O sistema de efluxo CmeABC foi investigado através da detecção dos genes cmeA, cmeB e cmeC por PCR. A atividade da bomba de efluxo CmeABC foi investigada em 20 cepas utilizando o inibidor da bomba de efluxo Phenylalanine-Arginine ß-Naftilamida (PAßN). Os três genes cmeA, cmeB e cmeC foram detectados em 94,3% das cepas (C. jejuni = 80 e C. coli = 70), enquanto o sistema estava ausente ou incompleto em 5,7% das cepas (C. jejuni = 1 e C coli = 8). A CIM variou entre 0,5µg/ml e 64µg/ml e 88,7% das cepas foram resistentes à enrofloxacina, enquanto 11,3% apresentaram resistência intermediária. A inibição da bomba de efluxo pelo PAßN reduziu a CIM da enrofloxacina até oito vezes em quinze cepas (75%). Estes resultados indicam que este sistema é frequente e ativo em cepas resistentes de Campylobacter spp. na presença de enrofloxacina.(AU)

Detection of efflux pump CmeABC in enrofloxacin resistant Campylobacter spp. strains isolated from broiler chickens (Gallus gallus domesticus) in the state of Rio de Janeiro, Brazil

ABSTRACT: Fowls are the main reservoirs of the highly important food-originating pathogen called Campylobacter spp. and broilers meat and byproducts are the main vehicles of this microorganism. Increasing of Campylobacter spp. resistant strains to fluorquinolones, an antimicrobial class often employed in poultry farming and in human medicine has become a great concern to poultry breeders. In fact, several studies evaluated increasing bacterial resistance against these antimicrobial agents. The role of CmeABC efflux system has been underscored among the resistance mechanisms in Campylobacter spp. to fluorquinolones. This study investigated the occurrence of CmeABC efflux pump in 81 and 78 enrofloxacin resistant strains of Campylobacter jejuni and C. coli respectively, isolated from broilers collected from six abattoirs situated at São José do Vale do Rio Preto/RJ poultry center and from two commercial abattoirs situated at Metropolitan Region of Rio de Janeiro, from 2013 to 2016. The resistance to enrofloxacin was assessed by agar dilution to determine minimum inhibitory concentration (MIC). The CmeABC efflux system was investigated through the detection of genes genes cmeA, cmeB and cmeC by PCR. The activity of CmeABC efflux pump was investigated in 20 strains by using the efflux pump inhibitor Phenylalanine-Arginine -Naphthylamide (PAN). The three genes cmeA, cmeB and cmeC were detected in 94.3% of the strains (C. jejuni = 80 and C. coli = 70), whereas the system was absent or incomplete in 5.7% of strains (C. jejuni = 1 and C. coli = 8). MIC varied between 0.5g/ml and 64g/ml, and 88.7% of strains were enrofloxacin resistant and 11.3% featuring intermediate resistance. The inhibition of the efflux pump by PAN reduced the MIC to enrofloxacin up to eight times in fifteen strains (75%). These results indicate that this system is frequent and active in Campylobacter spp. Resistant strains in the presence of enrofloxacin.

RESUMO: As aves são os principais reservatórios de Campylobacter spp., importante patógeno de origem alimentar e a carne de frango e produtos derivados são os principais veículos desse microrganismo. O aumento de cepas de Campylobacter spp. resistentes às fluorquinolonas, uma classe antimicrobiana frequentemente empregada na avicultura e na medicina humana, tornou-se uma grande preocupação para os produtores de aves e vários estudos avaliaram o aumento da resistência bacteriana a esses antimicrobianos. O papel do sistema de efluxo CmeABC tem sido enfatizado entre os mecanismos de resistência em Campylobacter spp. à fluorquinolonas. O presente estudo investigou a ocorrência da bomba de efluxo CmeABC em 81 cepas de Campylobacter jejuni e 78 cepas de Campylobacter coli resistentes à enrofloxacina, isoladas de frangos de corte coletados em seis abatedouros situados no polo avícola de São José do Rio Preto/RJ e de dois abatedouros comerciais situados na Região Metropolitana do Rio de Janeiro, de 2013 a 2016. A resistência à enrofloxacina foi avaliada pelo método de diluição em ágar para determinar a concentração inibitória mínima (CIM). O sistema de efluxo CmeABC foi investigado através da detecção dos genes cmeA, cmeB e cmeC por PCR. A atividade da bomba de efluxo CmeABC foi investigada em 20 cepas utilizando o inibidor da bomba de efluxo Phenylalanine-Arginine -Naftilamida (PAN). Os três genes cmeA, cmeB e cmeC foram detectados em 94,3% das cepas (C. jejuni = 80 e C. coli = 70), enquanto o sistema estava ausente ou incompleto em 5,7% das cepas (C. jejuni = 1 e C coli = 8). A CIM variou entre 0,5g/ml e 64g/ml e 88,7% das cepas foram resistentes à enrofloxacina, enquanto 11,3% apresentaram resistência intermediária. A inibição da bomba de efluxo pelo PAN reduziu a CIM da enrofloxacina até oito vezes em quinze cepas (75%). Estes resultados indicam que este sistema é frequente e ativo em cepas resistentes de Campylobacter spp. na presença de enrofloxacina.

Detection and analysis of different interactions between resistance mechanisms and carbapenems in clinical isolates of Klebsiella pneumoniae

Carbapenems are considered last-line agents for the treatment of serious infections caused by Klebsiella pneumoniae, and this microorganism may exhibit resistance to -lactam antibiotics due to different mechanisms of resistance. We evaluated 27 isolates of K. pneumoniae resistant to carbapenems recovered from inpatients at the University Hospital of Santa Maria-RS from July 2013 to August 2014. We carried out antimicrobial susceptibility, carbapenemase detection, testing for the presence of efflux pump by broth microdilution and loss of porin by sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis. Genetic similarity was evaluated by ERIC-PCR. High levels of resistance were verified by the minimum inhibitory concentration for the antimicrobials tested. The blaKPC gene was present in 89% of the clinical isolates. Blue-Carba and combined disk with AFB tests showed 100% concordance, while the combined disk test with EDTA showed a high number of false-positives (48%) compared with the gold-standard genotypic test. Four isolates showed a phenotypic resistance profile consistent with the overexpression of the efflux pump, and all clinical isolates had lost one or both porins. The ERIC-PCR dendrogram demonstrated the presence of nine clusters. The main mechanism of resistance to carbapenems found in the assessed isolates was the presence of the blaKPC gene.(AU)

Antibacterial activity of different types of snake venom from the Viperidae family against Staphylococcus aureus / Atividade antibacteriana de diferentes tipos de veneno de serpentes da família Viperidae contra Staphylococcus aureus

Toxins and venoms produced by living organisms have exhibited a variety of biological activities against microorganisms. In this study, we tested seven snake venoms from the family Viperidae for antibacterial activity and the activities of reversal of antibiotic resistance and inhibition of biofilm formation against 22 clinical isolates of Staphylococcus aureus. Bothrops moojeni venom exhibited anti staphylococcal activity with the lowest mean value of minimum inhibitory concentration (MIC). Moreover, reversal of antibiotic resistance was observed for combinations of B. moojeni venom (½ x MIC) and norfloxacin or ampicillin (both ½ x MIC) for 86.4% and 50% of the isolates, respectively. B. moojeni venom alone at ½ MIC inhibited 90% of biofilm formation, whereas in combination with ciprofloxacin, both at ½ MIC, a reduction on the NorA efflux pump activity was observed. The detection of in vitro mutants colonies of S. aureus resistant to B. moojeni venom was low and they did not survive. A phospholipase A2 was purified from the venom of B. moojeni and displayed anti-staphylococcal activity when tested alone or in combination with ciprofloxacin. The results presented here will contribute to the search for new antimicrobial agents against resistant S. aureus.(AU)

Toxinas e venenos exibem uma variedade de atividades biológicas contra micro-organismos. Neste estudo, investigou-se a atividade de sete venenos de serpentes, da família Viperidae, sobre o crescimento de Staphylococcus aureus, na reversão fenotípica da resistência a antibióticos e inibição de formação de biofilme contra 22 isolados clínicos de S. aureus. O veneno de Bothrops moojeni apresentou a menor média de concentração inibitória mínima (CIM). Além disso, observou-se reversão da resistência a antibióticos para combinações do veneno de B. moojeni (½ x CIM) e norfloxacina ou ampicilina (ambos ½ x CIM) para 86,4% e 50% dos isolados, respectivamente. O veneno de B. moojeni na concentração de ½ CIM inibiu 90% de formação de biofilme, enquanto ele em combinação com ciprofloxacina, ambos na concentração de ½ CIM, diminuiu a atividade da bomba de efluxo NorA. A detecção in vitro de colônias mutantes de S. aureus resistente ao veneno de B. moojeni foi baixa e eles não sobreviveram. Uma fosfolipase A2 purificada a partir do veneno de B. moojeni exibiu atividade antibacteriana quando testada sozinha ou em combinação com ciprofloxacina. Os dados obtidos poderão contribuir para a pesquisa de novos agentes antimicrobianos contra S. aureus.(AU)

Resistance to B-lactam and tetracycline in Campylobacter spp isolated from broiler slaughterhouses in southern Brazil / Resistência a B-lactâmicos e tetraciclina em Campylobacter spp isolados de matadouros-frigoríficos de aves no sul do Brasil

The study was carried out to screen and analyze the genetic characteristics of antimicrobial resistance in Campylobacter spp. from poultry sources. A total of 141 strains of Campylobacter isolated from samples of broilers of slaughterhouses in southern Brazil was identified by phenotypic and genotypic methods. Campylobacter isolates were evaluated for its antimicrobial susceptibility and the presence of resistance genes. The strains were investigated for antimicrobial susceptibility against two agents (ampicillin and tetracycline) by disk diffusion method. PCR assay was used to confirm the specie and the presence of ampicillin (blaOXA-61), tetracycline tet(O), and the energy-dependent multi-drug efflux pump (cmeB) genes. Campylobacter jejuni was the most ubiquitous; its presence was determined in 140 samples out of 141 (99.3%), whereas Campylobacter coli was found only in one of the contaminated samples (0.70%). The results obtained showed 65% and 35.5% of Campylobacter isolates resistant to β-lactams and tetracyclines, respectively. The cmeB gene responsible for multidrug resistance was detected in 26 isolates out 141 strains (18.5%). Moreover, 36 out of 141 Campylobacter strains (25.6%) were found to be resistant to at least two different antimicrobia resistance markers (β-lactams and tetracyclines).(AU)

O presente estudo foi realizado para examinar e analisar as características genéticas de resistência antimicrobiana de Campylobacter spp. a partir de fontes avícolas. Um total de 141 amostras de Campylobacter isolados em matadouros-frigoríficos de aves do estado do Rio Grande do Sul, Brasil, foi identificado por métodos fenotípicos e genotípicos. Foi analisada a susceptibilidade antimicrobiana e a presença de genes de resistência. As cepas foram testadas para detectar sensibilidade frente a dois antimicrobianos (ampicilina e tetraciclina) pelo método de difusão em disco. A seguir, usando a reação em cadeia da polimerase foi confirmada a espécie e a presença dos genes de resistência à ampicilina (blaOXA-61) e tetraciclina tet(O), assim como a detecção da bomba de efluxo (cmeB). Campylobacter jejuni foi a espécie mais isolada, sua presença foi determinada em 140 amostras (99,3%), e Campylobacter coli foi encontrada em uma única amostra (0,70%). Os resultados obtidos mostraram 65% e 35,5% de Campylobacter isolados resistentes a β-lactâmicos e tetraciclinas, respectivamente. O gene cmeB responsável pela resistência a múltiplos antimicrobianos foi detectado em 26 amostras (18,5%). Neste contexto, 36 das 141 amostras (25,6%) foram consideradas resistentes a dois grupos diferentes de antimicrobianos (β-lactâmicos e tetraciclinas).(AU)

Resistance to -lactam and tetracycline in Campylobacter spp.isolated from broiler slaughterhouses in southern Brazil

Abstract The study was carried out to screen and analyze the genetic characteristics of antimicrobial resistance in Campylobacter spp. from poultry sources. A total of 141 strains of Campylobacter isolated from samples of broilers of slaughterhouses in southern Brazil was identified by phenotypic and genotypic methods. Campylobacter isolates were evaluated for its antimicrobial susceptibility and the presence of resistance genes. The strains were investigated for antimicrobial susceptibility against two agents (ampicillin and tetracycline) by disk diffusion method. PCR assay was used to confirm the specie and the presence of ampicillin (blaOXA-61), tetracycline tet(O), and the energy-dependent multi-drug efflux pump (cmeB) genes. Campylobacter jejuni was the most ubiquitous; its presence was determined in 140 samples out of 141 (99.3%), whereas Campylobacter coli was found only in one of the contaminated samples (0.70%). The results obtained showed 65% and 35.5% of Campylobacter isolates resistant to -lactams and tetracyclines, respectively. The cmeB gene responsible for multidrug resistance was detected in 26 isolates out 141 strains (18.5%). Moreover, 36 out of 141 Campylobacter strains (25.6%) were found to be resistant to at least two different antimicrobia resistance markers (-lactams and tetracyclines).

Resumo O presente estudo foi realizado para examinar e analisar as características genéticas de resistência antimicrobiana de Campylobacter spp. a partir de fontes avícolas. Um total de 141 amostras de Campylobacter isolados em matadouros-frigoríficos de aves do estado do Rio Grande do Sul, Brasil, foi identificado por métodos fenotípicos e genotípicos. Foi analisada a susceptibilidade antimicrobiana e a presença de genes de resistência. As cepas foram testadas para detectar sensibilidade frente a dois antimicrobianos (ampicilina e tetraciclina) pelo método de difusão em disco. A seguir, usando a reação em cadeia da polimerase foi confirmada a espécie e a presença dos genes de resistência à ampicilina (blaOXA-61) e tetraciclina tet(O), assim como a detecção da bomba de efluxo (cmeB). Campylobacter jejuni foi a espécie mais isolada, sua presença foi determinada em 140 amostras (99,3%), e Campylobacter coli foi encontrada em uma única amostra (0,70%). Os resultados obtidos mostraram 65% e 35,5% de Campylobacter isolados resistentes a -lactâmicos e tetraciclinas, respectivamente. O gene cmeB responsável pela resistência a múltiplos antimicrobianos foi detectado em 26 amostras (18,5%). Neste contexto, 36 das 141 amostras (25,6%) foram consideradas resistentes a dois grupos diferentes de antimicrobianos (-lactâmicos e tetraciclinas).

Genotypic and phenotypic detection of efflux pump in Rhodococcus equi

The req_39680 gene, associated to a putative efflux system, was detected in 60% (54/90) of R. equi isolates by PCR. The phenotypic expression of efflux mechanism was verified in 20% of the isolates using ethidium bromide. For the first time, the expression of efflux mechanism was demonstrated in R. equi.

PARTICIPAÇÃO DA BOMBA DE EFLUXO CMEABC NA RESISTÊNCIA À ENROFLOXACINA EM CEPAS DE Campylobacter jejuni E Campylobacter coli ISOLADAS DE FRANGOS DE CORTE DO ESTADO DO RIO DE JANEIRO

As aves são consideradas o principal reservatório de Campylobacter spp., um importante patógeno de origem alimentar e a carne e subprodutos de frango são descritos como os principais veiculadores deste microrganismo. A crescente seleção de cepas de Campylobacter spp. resistentes às fluoroquinolonas, classe de antimicrobiano frequentemente utilizada na avicultura e na medicina humana, é motivo de preocupação em todo o mundo e diversos estudos são realizados para avaliar a real contribuição do uso destes antimicrobianos na produção animal e na resistência bacteriana a estes antimicrobianos. Dentre os conhecidos mecanismos de resistência em Campylobacter spp., o sistema de efluxo CmeABC, é apontado por desempenhar importante papel na resistência a diferentes antimicrobianos e a compostos tóxicos. Objetivou-se com este estudo obter cepas de Campylobacter spp. a partir do conteúdo cecal de frangos de corte e investigar a resistência à enrofloxacina e a participação do sistema de efluxo CmeABC na aquisição de resistência a esse antimicrobiano. Foram investigadas para a presença desse sistema de efluxo, 159 cepas de Campylobacter spp., sendo 55 cepas de C. jejuni e 25 de C. coli obtidas de frangos de criação orgânica, 30 cepas de C. coli e 19 cepas de C. jejuni de criação convencional e 7 cepas de C. jejuni e 23 de C. coli obtidas de frangos de matadouros comerciais. A detecção dos genes cmeA, cmeB e cmeC foi realizada pela Polymerase Chain Reaction (PCR). O nível de resistência das cepas foi investigado em 26 cepas pela determinação da Concentração Inibitória Mínima (CIM) da enrofloxacina pelo método de diluição em ágar com e sem o uso de um inibidor de sistemas de efluxo Phenylalanine Arginine -Naphthylamide (PaN) para a confirmação da atividade deste sistema. Da totalidade (n=159) de cepas analisadas para a presença do sistema de efluxo, foi verificada a presença dos genes cmeA, cmeB e cmeC em 94,3% das cepas. Nove cepas (5,7%) não apresentaram o sistema de efluxo completo. O gene cmeA não foi detectado em uma cepa de C. jejuni e em uma de C. coli. Outra cepa de C. coli, não continha os genes cmeB e cmeC, enquanto outras cinco não possuíam o gene cmeB. Não foi detectado nenhum gene da bomba CmeABC em apenas uma cepa de C. coli. No teste de diluição em ágar, todas as cepas foram resistentes ou apresentaram resistência intermediária à enrofloxacina com CIM variando de 0,5g/mL a 32g/mL. Com o uso do inibidor da bomba de efluxo, foi observada redução significativa da CIM de enrofloxacina. Este estudo permitiu concluir que a CIM da enrofloxacina é elevada em cepas de Campylobacter sendo o sistema de efluxo CmeABC muito frequente e ativo na presença de enrofloxacina, determinando redução significativa da CIM .Este sistema pode estar atuando como um mecanismo sinérgico a outros mecanismos de resistência em Campylobacter spp. Sugere-se que o uso de inibidores da bomba de efluxo podem ser uma ferramenta na redução da resistência antimicrobiana e na colonização de Campylobacter em animais de produção.

Poultry are considered the main reservoir of Campylobacter spp., an important foodborne pathogen and meat and chicken by-products are described as the main carriers of this microorganism. The growing selection of Campylobacter spp. resistant to fluoroquinolones, an antimicrobial class frequently used in poultry and human medicine, is a worldwide concern and several studies are conducted to evaluate the real contribution of the use of these antimicrobials in animal production and bacterial resistance to these antimicrobials. Among the known mechanisms of resistance in Campylobacter spp., the CmeABC efflux system is considered to play an important role in resistance to different antimicrobials and toxic compounds. The aim of this study was to obtain strains of Campylobacter spp. from the cecal content of broiler chickens and investigate resistance to enrofloxacin and the participation of the CmeABC efflux system in the acquisition of resistance to this antimicrobial. A total of 159 strains of Campylobacter spp., 55 strains of C. jejuni and 25 strains of C. coli obtained from organic broilers, 30 strains of C. coli and 19 C. jejuni strains from convencional breeding, and 7 strains of C. jejuni and 23 C. coli obtained from chickens from commercial slaughterhouses were investigated for the presence of this efflux system. Detection of the cmeA, cmeB and cmeC genes was performed by Polymerase Chain Reaction (PCR). The level of strains resistance was investigated in 26 strains by determination of the Minimum Inhibitory Concentration (MIC) of enrofloxacin by the agar dilution method with and without the use of the Phenylalanine Arginine -Naphthylamide (PaN) an efflux pump inhibitor to confirmation the activity of this system. From the total (n = 159) of strains analyzed for the presence of the efflux system, the genes cmeA, cmeB and cmeC genes were detected in 94.3% of the strains, nine strains (5.7%) did not present the efflux system complete. The cmeA gene was not detected in a strain of C. jejuni and one C. coli. Another of C. coli did not present the cmeB and cmeC genes, while another five did not present the cmeB gene. No CmeABC pump gene was detected in only one C. coli strain. In the agar dilution test, all strains were resistant or had intermediate resistance to enrofloxacin and presented MIC ranging from 0.5 g / mL to 32 g / mL. With the use of the efflux pump inhibitor, enrofloxacin MIC decreased significantly. This study allowed us to conclude that the MIC of enrofloxacin is elevated in Campylobacter strains and the CmeABC efflux system is very frequent and active in the presence of enrofloxacin, determining a significant reduction of MIC. This system may be acting as a synergistic mechanism to other resistance mechanisms in Campylobacter spp.. It is suggested that the use of efflux pump inhibitors (EPI) may be a tool in reducing antimicrobial resistance and in colonization of Campylobacter in production animals.

Aeromonas spp.: fatores de virulência e perfis de resistência a antimicrobianos e metais pesados

Bacteria from Aeromonas spp. genus are considered as opportunistic pathogens that can carry many virulence factors. The resistance phenomenon to antimicrobial drugs and heavy metals is another problem and may occurs by several factors, as the indiscriminate usage, environmental pollution and the presence of resistance determinants as efflux pumps, being many of them transmitted by genetic mobile elements as plasmid. The purpose of this article is to review about the virulence factors, antimicrobial and heavy metal resistance, as well as the mechanisms that can help its transfer among Aeromonas genus bacteria. Studies of the resistance mechanisms associated to molecular biology could produce information about control and prophylaxis methods to this disease of impact on aquatic organisms, man and environment.

As bactérias do gênero Aeromonas spp. são considerados como patógenos oportunistas carreadores de múltiplos fatores de virulência. O fenômeno da resistência aos antimicrobianos e metais pesados constitui outro problema, podendo ocorrer por diferentes fatores, dentre eles o uso indiscriminado de agentes antimicrobianos, poluição ambiental e a presença de mecanismos de resistência, como bombas de efluxo, sendo que muitos destes podem ser transmitidos por elementos genéticos móveis como os plasmídeos. O objetivo desse artigo é fazer uma revisão bibliográfica sobre os fatores de virulência, resistência a antimicrobianos e metais pesados, bem como os mecanismos que podem intervir nessa resistência e sua transferência entre bactérias do gênero Aeromonas. Os estudos dos fatores envolvidos no mecanismo de surgimento da resistência, aliado aos estudos de biologia molecular, fornecem subsídios para elaboração de métodos de controle e profilaxia dessas enfermidades de impacto aos organismos aquáticos, seres humanos e meio ambiente.

Aeromonas spp. fatores de virulência e perfis de resistência a antimicrobianos e metais pesados / Aeromonas spp. virulence factors and resistance patterns to antimicrobial and heavy metals

As bactérias do gênero Aeromonas spp. são considerados como patógenos oportunistas carreadores de múltiplos fatores de virulência. O fenômeno da resistência aos antimicrobianos e metais pesados constitui outro problema, podendo ocorrer por diferentes fatores, dentre eles o uso indiscriminado de agentes antimicrobianos, poluição ambiental e a presença de mecanismos de resistência, como bombas de efluxo, sendo que muitos destes podem ser transmitidos por elementos genéticos móveis como os plasmídeos. O objetivo desse artigo é fazer uma revisão bibliográfica sobre os fatores de virulência, resistência a antimicrobianos e metais pesados, bem como os mecanismos que podem intervir nessa resistência e sua transferência entre bactérias do gênero Aeromonas. Os estudos dos fatores envolvidos no mecanismo de surgimento da resistência, aliado aos estudos de biologia molecular, fornecem subsídios para elaboração de métodos de controle e profilaxia dessas enfermidades de impacto aos organismos aquáticos, seres humanos e meio ambiente.

AEROMONAS SPP.: VIRULENCE FACTORS AND RESISTANCE PATTERNS TO ANTIMICROBIAL AND HEAVY METALS. Bacteria from Aeromonas spp. genus are considered as opportunistic pathogens that can carry many virulence factors. The resistance phenomenon to antimicrobial drugs and heavy metals is another problem and may occurs by several factors, as the indiscriminate usage, environmental pollution and the presence of resistance determinants as efflux pumps, being many of them transmitted by genetic mobile elements as plasmid. The purpose of this article is to review about the virulence factors, antimicrobial and heavy metal resistance, as well as the mechanisms that can help its transfer among Aeromonas genus bacteria. Studies of the resistance mechanisms associated to molecular biology could produce information about control and prophylaxis methods to this disease of impact on aquatic organisms, man and environment.

Antimicrobial resistance of Staphylococcus spp. from small ruminant mastitis in Brazil / Resistência antimicrobiana de Staphylococcus spp. de mastite de pequenos ruminantes no Brasil

The study aimed to determine the antimicrobial resistance patterns and to identify molecular resistance markers in Staphylococcus spp. (n=210) isolated from small ruminant mastitis in Brazil. The antimicrobial resistance patterns were evaluated by the disk diffusion test and by detection of the presence of mecA, blaZ, ermA, ermB, ermC and msrA genes by PCR. The efflux pump test was performed using ethidium bromide and biofilm production was determined by Congo red agar test along with PCR for detection of the icaD gene. The isolates were most resistant to amoxicillin (50.0%), streptomycin (42.8%), tetracycline (40.4%), lincomycin (39.0%) and erythromycin (33.8%). Pan-susceptibility to all tested drugs was observed in 71 (33.8%) isolates and 41 Staphylococcus isolates were positive for the efflux pump. Although phenotypic resistance to oxacillin was observed in 12.8% of the isolates, none harbored the mecA gene. However, 45.7% of the isolates harbored blaZ indicating that beta-lactamase production was the main mechanism associated with staphylococci resistance to beta-lactams in the present study. The other determinants of resistance to antimicrobial agents ermA, ermB, ermC, and msrA were observed in 1.4%, 10.4%, 16.2%, and 0.9% of the isolates, respectively. (AU)

O presente trabalho teve como objetivo determinar os padrões de resistência a agentes antimicrobianos e identificar marcadores moleculares de resistência em Staphylococcus spp. (n=210) isolados de mastite de pequenos ruminantes no Brasil. Os padrões de resistência a agentes antimicrobianos foram avaliados pelo teste de difusão em disco e pela detecção da presença dos genes mecA, blaZ, ermA, ermB, ermC e msrA via PCR. O teste da bomba de efluxo foi realizado utilizando brometo de etídio e a produção de biofime foi determinada pelo teste do vermelho congo em paralelo com o PCR para detecção do gene icaD. Os isolados foram mais resistentes a amoxicilina (50,0%), estreptomicina (42,8%), tetraciclina (40,4%), lincomicina (39,0%) e eritromicina (33,8%). Setenta e um (33,8%) isolados foram sensíveis a todas as drogas testadas e 41 foram positivos para a bomba de efluxo. Embora a resistência fenotípica a oxacilina tenha sido observada observada em 12,8% dos isolados, nenhum possuiu o gene mecA. Entretanto, 45,7% dos isolados continham a gene blaZ, indicando que a produção de beta-lactamases foi o principal mecanismo associado com a resistência dos Staphylococcus aos beta-lactâmicos. Os outros determinantes de resistência a agentes antimicrobianos ermA, ermb, ermC e msrA foram observados em 1,4%, 10,4%, 16,2% e 0,9% dos isolados respectivamente. (AU)

Suscetibilidade a desinfetantes e perfil de resistência a antimicrobianos em isolados de Escherichia coli / Susceptibility to disinfectants and antimicrobial resistance profile in Escherichia coli isolates

A colibacilose, causada por Escherichia coli, é a enfermidade entérica de maior impacto na produção de suínos, podendo levar à morte do animal. Esta bactéria possui grande capacidade de desenvolver resistência a múltiplos antimicrobianos e a desinfetantes. Desta forma, estudos que abordem mecanismos de resistência e perfil de amostras de campo tornam-se necessários. E. coli é amplamente utilizada como modelo de estudos que exploram a resistência intrínseca e extrínseca a multidrogas. Neste trabalho, buscou-se verificar o perfil de sensibilidade de 62 isolados de E. coli de suínos frente a três desinfetantes e a 13 antimicrobianos. Ainda, em 31 destes isolados foi pesquisada a presença de mecanismo de efluxo. Dos três desinfetantes avaliados, o cloreto de alquil dimetil benzil amônio+poliexietilenonilfenileter foi o que se mostrou mais eficaz (100%), seguido do glutaraldeído+cloreto de alquil dimetil benzil amônio (95,2%) e do cloreto de alquil dimetil benzil amônio (88,8%). Dentre os antimicrobianos testados, observou-se maior resistência para a tetraciclina (62,2%) e maior sensibilidade para o florfenicol (88,6%). A alta sensibilidade dos isolados frente aos desinfetantes pode estar relacionada à ausência de mecanismo de efluxo. O índice de resistência múltipla médio aos antimicrobianos foi de 0,52, o que demonstra um perfil multirresistente dos isolados, conduzindo para a necessidade do uso racional destas drogas em suinocultura.(AU)

Colibacillosis caused by Escherichia coli is the most important enteric disease in pig production, which may lead to death of the affected animal. The bacterium has a great ability to develop resistance to multiple antibiotics and disinfectants. Thus, investigation addressing mechanisms of resistance and profile of field samples is necessary. E. coli is widely used as a model for studies that explore the intrinsic and extrinsic resistance to multidrugs. In this paper, we attempt to associate the susceptibility profile of 62 isolates of E. coli to three disinfectants and 13 antimicrobials. Also 31 isolates were tested for the presence of efflux mechanism. Of the three disinfectants tested, alkyldimethylbenzylammonium chloride+nonyl phenoxy polyethoxy ethanol was the most effective (100%), followed by glutaraldehyde+alkyldimethylbenzylammonium chloride (95.2%) and alkyldimethylbenzylammonium chloride (88.8%). Among the antimicrobials tested, there was greater resistance to tetracycline (62.2%) and higher sensitivity to florfenicol (88.6%). The high sensitivity of the isolates against disinfectants may be related to the absence of efflux mechanism. The average index of multiple resistance to antimicrobials was 0.52, what demonstrates a profile of multidrug resistant isolates, showing the need for rational use of these drugs in pig production.(AU)

Aeromonas spp. fatores de virulência e perfis de resistência a antimicrobianos e metais pesados / Aeromonas spp. virulence factors and resistance patterns to antimicrobial and heavy metals

As bactérias do gênero Aeromonas spp. são considerados como patógenos oportunistas carreadores de múltiplos fatores de virulência. O fenômeno da resistência aos antimicrobianos e metais pesados constitui outro problema, podendo ocorrer por diferentes fatores, dentre eles o uso indiscriminado de agentes antimicrobianos, poluição ambiental e a presença de mecanismos de resistência, como bombas de efluxo, sendo que muitos destes podem ser transmitidos por elementos genéticos móveis como os plasmídeos. O objetivo desse artigo é fazer uma revisão bibliográfica sobre os fatores de virulência, resistência a antimicrobianos e metais pesados, bem como os mecanismos que podem intervir nessa resistência e sua transferência entre bactérias do gênero Aeromonas. Os estudos dos fatores envolvidos no mecanismo de surgimento da resistência, aliado aos estudos de biologia molecular, fornecem subsídios para elaboração de métodos de controle e profilaxia dessas enfermidades de impacto aos organismos aquáticos, seres humanos e meio ambiente.(AU)

AEROMONAS SPP.: VIRULENCE FACTORS AND RESISTANCE PATTERNS TO ANTIMICROBIAL AND HEAVY METALS. Bacteria from Aeromonas spp. genus are considered as opportunistic pathogens that can carry many virulence factors. The resistance phenomenon to antimicrobial drugs and heavy metals is another problem and may occurs by several factors, as the indiscriminate usage, environmental pollution and the presence of resistance determinants as efflux pumps, being many of them transmitted by genetic mobile elements as plasmid. The purpose of this article is to review about the virulence factors, antimicrobial and heavy metal resistance, as well as the mechanisms that can help its transfer among Aeromonas genus bacteria. Studies of the resistance mechanisms associated to molecular biology could produce information about control and prophylaxis methods to this disease of impact on aquatic organisms, man and environment. (AU)

Effect of galbanic acid, a sesquiterpene coumarin from Ferula szowitsiana, as an inhibitor of efflux mechanism in resistant clinical isolates of Staphylococcus aureus

Galbanic acid, a sesquiterpene coumarin from Ferula szowitsiana roots, was investigated for its potentiating effect on the antimicrobial activity of antibiotics as well as ethidium bromide, in 6 multidrug resistance (MDR) clinical isolates of Staphylococcus aureus. Galbanic acid had inhibitory effect on none of the isolated bacteria tested (up to 800 µg /ml). The MIC range of ciprofloxacin, tetracycline and ethidium bromide, against all tested S. aureus were 10-80, 10-80 and 4-16 µg/ml, respectively. These were reduced to 2.5-5, 2.5-5 and 0.5-2 µg/ml in the presence of galbanic acid (300 µg /ml) or verapamil (100 µg /ml). The rate of ethidium bromide (2 µg /ml) accumulation in clinical isolates was enhanced with galbanic acid (300 µg /ml). There is also a decrease in loss of ethidium bromide from bacteria in the presence of galbanic acid. Similar results were obtained when verapamil (100 µg /ml) was used as an efflux pump inhibitor. Galbanic acid, like verapamil, a typical inhibitor of efflux pump, reduced the MIC of ethidium bromide and tested antibiotics. Since efflux is the only known reported mechanism for ethidium bromide resistance, the reduction in ethidium bromide MIC and enhanced accumulation as well as decreased efflux of ethidium bromide in the presence of galbanic acid, can be attributed to this efflux inhibitory properties.

ATIVIDADE DE Moringa oleifera IN VITRO CONTRA FUNGOS ASSOCIADOS À CARCINICULTURA DE Macrobrachium amazonicum E ENVOLVIMENTO DE BOMBAS DE EFLUXO NO FENÔMENO DE RESISTÊNCIA A DERIVADOS AZÓLICOS EM Candida spp.

Espécies de fungos são isoladas com frequência da microbiota de diversos sítios anatômicos de animais sem causar danos ao hospedeiro, podendo ser encontradas também em ambientes terrestres e aquáticos, especialmente em áreas de cultivo animal. Espécies de Candida são comumente isoladas destes ambientes e de animais, sendo frequente a resistência a azólicos nestes isolados, por vezes, maior que o observado em isolados humanos. Este aparente paradoxo é mal compreendido, uma vez que a exposição de cepas ambientais e animais a estes antifúngicos não ocorre por tratamento/profilaxia dos hospedeiros animais. O presente estudo verificou a atividade antifúngica de extratos de Moringa oleifera frente 14 cepas de Candida spp. (3 C. ciferrii; 6 C. famata; 2 C. guilliermondii; 2 C. parapsilosis; e 1 C. tropicalis) e 10 cepas de Hortaea werneckii isolados da carcinicultura de M. amazonicum, assim como avaliou a toxicidade destes extratos in vitro. Ademais, foi investigada a expressão gênica das bombas de efluxo CDR1 e CDR2 em cepas de C. albicans resistentes a azólicos isoladas de animais (n=16) e humanos (n=2) e também a influência da exposição ao tetraconazol (azólico agrícola) e malathion (organofosforado) na ocorrência de resistência ao fluconazol, itraconazol e voriconazol em C. parapsilosis ATCC 22019. A partir dos dados obtidos no teste de microdiluição in vitro, evidenciou-se que o extrato clorofórmico de flores inibiu o crescimento de todas as cepas fúngicas associadas à carcinicultura de M. amazonicum. O extrato etanólico de folhas, flores e sementes inibiu o crescimento de 22/24, 21/24 e 20/24 cepas, respectivamente. O extrato de vagens inibiu somente cepas de Candida spp. (14/14) e, por sua vez, o extrato de caule inibiu apenas quatro cepas de H. werneckii (4/10). Os extratos de sementes, flores (fração clorofórmica), caules e folhas apresentaram baixa ou nenhuma toxicidade em larvas de M. amazonicum, enquanto que extratos de vagens e flores (fração etanólica) apresentaram toxicidade moderada. Quanto à expressão gênica analisada por qPCR, verificou-se que há correlação entre a resistência a fluconazol e a expressão de CDR1 em C. albicans resistentes a azólicos, uma vez que a expressão de CDR1 estava aumentada em 56,25% (9/16) destas cepas. Foi demonstrado ainda que a exposição, in vitro, ao tetraconazol, mas não ao malathion, diminui a sensibilidade aos azólicos clínicos, especialmente ao fluconazol. Este fenômeno é mediado, pelo menos em parte, pela atividade de bombas de efluxo dependentes de ATP, haja visto o aumento da sensibilidade das réplicas de C. parapsilosis, com o uso de prometazina; assim como o aumento no efluxo de rhodamina 6G e o aumento de expressão dos genes das bombas de efluxo CDR. Também há indícios de envolvimento de bombas MDR nas réplicas resistentes a fluconazol, sem alteração na biossíntese de ergosterol nem na expressão do gene ERG11. Portanto, ficou demonstrado na primeira parte deste trabalho, a potencialidade do uso de extratos de M. oleifera no controle de fungos associados a carcinicultura de M. amazonicum. Ademais, ficou evidente, na análise molecular, o envolvimento de bombas de efluxo CDR em C. albicans de origem animal resistentes a azólicos. Por fim, demonstrou-se que a exposição de C. parapsilosis ao tetraconazol, in vitro, induz resistência a azólicos de uso clínico também via superexpressão de CDR.

Fungal species are often isolated from microbiota of several anatomical sites from animals without causing harm to the host, and can also be found in terrestrial and aquatic environments, especially in animal farming areas. Candida species are opportunistic pathogens commonly isolated from these environments and animals, and azole resistance are frequent in these isolates, sometimes greater than that observed in human isolates. This apparent paradox is poorly understood, since exposure of environmental and animal strains to these antifungals does not occur during treatment/prophylaxis of animal hosts. This study investigated the antifungal activity of M. oleifera extracts against 14 strains of Candida spp. (3 C. ciferrii; 6 C. famata; 2 C. guilliermondii; 2 C. parapsilosis; and 1 C. tropicalis) and 10 strains of Hortaea werneckii isolated from shrimp Macrobrachium amazonicum, as well as the in vitro toxicity of these extracts. In addition, we investigated the gene expression of efflux pumps CDR1 and CDR2 in azole-resistant C. albicans strains from animals (n = 16) and humans (n = 2) and also the influence of exposure to tetraconazole (agricultural azole) and malathion (organophosphate) in the occurrence of resistance to fluconazole, itraconazole and voriconazole in C. parapsilosis ATCC 22019. Data from in vitro microdilution test demonstrated that the chloroform flower extract inhibits the growth of all tested fungal strains from shrimp M. amazonicum. The ethanolic extract of leaves, flowers and seeds inhibited the growth of 22/24, 21/24 and 20/24 of strains, respectively. The ethanolic extract of pods inhibited Candida spp. strains (14/14), in its turn, extracts of stem inhibited only four strains of H. werneckii (4/10). The extract of seed, flowers (chloroform fraction), stems and leaves showed low or no toxicity, while ethanolic pods and flowers extracts showed moderate toxicity. Concerning efflux pumps gene expression by qPCR, it was observed correlation between resistance to fluconazole and CDR1 expression in azole resistant C. albicans, since the CDR1 expression was increased in 56.25% (9/16) in these strains. Additionally, it was shown that exposure to tetraconazole, but not to malathion, decreases susceptibility to clinical azoles, particularly to fluconazole. This phenomenon is mediated, at least partially, by the increased activity of ATP-dependent efflux pumps, considering the increase in antifungal susceptibility after the addition of the efflux pump inhibitor promethazine, the increase in efflux of rhodamine 6G and in CDR gene expression. There is also evidence of involvement of MDR pumps in fluconazole-resistant replicas, with no change in ergosterol biosynthesis or in the expression of ERG11 gene. Therefore, the first part of this study showed the potential use of M. oleifera extracts in M. amazonicum shrimp farming fungal control. Moreover, in the molecular analysis, it was evident the involvement of CDR efflux pumps in azole resistance in C. albicans strains from animals. Finally, it was shown that in vitro exposure to tetraconazole in C. parapsilosis induces clinical azole resistance by CDR overexpression too.

Phenotypic and molecular characterization of isolates of Staphylococcus spp. obtained from sheep milk Chapecó-SC / Caracterização fenotípica e molecular de isolados de Staphylococcus spp. obtidos de leite de ovelhas do Município de Chapecó-SC

This study aimed to determine the antimicrobial susceptibility profile and to assess the presence of mechanisms of antimicrobial resistance in Staphylococcus spp. (n=36) isolated from mastitis in sheeps Chapecó-SC. The potential for biofilm production was determined by phenotypic tests of Congo Red Agar, DAPI and Gentian Violet and by PCR for the detection of icaD gene. To evaluate the antimicrobial resistance testing was performed disk diffusion and detection of resistance genes blaZ, mecA, ermA, ermB and ermC and msrA also performed by PCR.The pump test was conducted by efuxo crop growth Muller Hinton agar containing ethidium bromide. The results showed that 1 (2,78%), 36 (100%) and 10 (27,78%) isolates were considered to produce a biofilm on Congo Red Agar test, Gentian Violet and DAPI, respectively, while the gene icaD was observed in only 2 (5.55%) isolates. The lowest percentage of sensitivity was observed for ampicillin (58.33%) and penicillin (58.33%). All strains tested were negative for the mecA, ermA, ermB and ermC genes. However, the isolates were positive for other resistance genes, being the blaZ and the msrA, with percentages of positivity of 58.33% and 11.11% respectively. Only one sample was positive for efflux pump test.

O presente trabalho teve como objetivos determinar o perfil de sensibilidade aos antimicrobianos e avaliar a presença de mecanismos de resistência antimicrobiana em Staphylococcus spp. (n=36) isolados de mastite em ovelhas do município de Chapecó-SC. O potencial para produção de biofilme foi determinado pelos testes fenotípicos de Agar Vermelho Congo, DAPI e Violeta de Genciana e por teste molecular pela técnica de PCR para a detecção do gene icaD. Para determinar o perfil de resistência aos antimicrobianos, foi realizado o teste de difusão em disco e detecção dos genes de resistência blaZ, mecA, erm (A, B e C) e msrA. O teste da bomba de efuxo foi realizado através do crescimento das culturas em Agar Muller Hinton contendo brometo de etídio. Os resultados mostraram que 1 (2,78%), 36 (100%) e 10 (27,78%) isolados foram considerados produtores de biofilme pelos testes de Agar Vermelho Congo, DAPI e Violeta de Genciana, respectivamente, enquanto que o gene icaD foi observado em apenas 2 (5,55%) isolados. O menor percentual de sensibilidade foi observado para ampicilina (58,33%) e penicilina (58,33%). Os isolados avaliados foram positivos para os genes de resistência blaZ (58,33%) e msrA (11,11%). Nenhum isolado apresentou os genes de resistência erm (A, B, C) e apenas uma amostra foi positiva para o teste da bomba de efluxo.

Phenotypic and molecular characterization of isolates of Staphylococcus spp. obtained from sheep milk Chapecó-SC / Caracterização fenotípica e molecular de isolados de Staphylococcus spp. obtidos de leite de ovelhas do Município de Chapecó-SC

This study aimed to determine the antimicrobial susceptibility profile and to assess the presence of mechanisms of antimicrobial resistance in Staphylococcus spp. (n=36) isolated from mastitis in sheeps Chapecó-SC. The potential for biofilm production was determined by phenotypic tests of Congo Red Agar, DAPI and Gentian Violet and by PCR for the detection of icaD gene. To evaluate the antimicrobial resistance testing was performed disk diffusion and detection of resistance genes blaZ, mecA, ermA, ermB and ermC and msrA also performed by PCR.The pump test was conducted by efuxo crop growth Muller Hinton agar containing ethidium bromide. The results showed that 1 (2,78%), 36 (100%) and 10 (27,78%) isolates were considered to produce a biofilm on Congo Red Agar test, Gentian Violet and DAPI, respectively, while the gene icaD was observed in only 2 (5.55%) isolates. The lowest percentage of sensitivity was observed for ampicillin (58.33%) and penicillin (58.33%). All strains tested were negative for the mecA, ermA, ermB and ermC genes. However, the isolates were positive for other resistance genes, being the blaZ and the msrA, with percentages of positivity of 58.33% and 11.11% respectively. Only one sample was positive for efflux pump test.

O presente trabalho teve como objetivos determinar o perfil de sensibilidade aos antimicrobianos e avaliar a presença de mecanismos de resistência antimicrobiana em Staphylococcus spp. (n=36) isolados de mastite em ovelhas do município de Chapecó-SC. O potencial para produção de biofilme foi determinado pelos testes fenotípicos de Agar Vermelho Congo, DAPI e Violeta de Genciana e por teste molecular pela técnica de PCR para a detecção do gene icaD. Para determinar o perfil de resistência aos antimicrobianos, foi realizado o teste de difusão em disco e detecção dos genes de resistência blaZ, mecA, erm (A, B e C) e msrA. O teste da bomba de efuxo foi realizado através do crescimento das culturas em Agar Muller Hinton contendo brometo de etídio. Os resultados mostraram que 1 (2,78%), 36 (100%) e 10 (27,78%) isolados foram considerados produtores de biofilme pelos testes de Agar Vermelho Congo, DAPI e Violeta de Genciana, respectivamente, enquanto que o gene icaD foi observado em apenas 2 (5,55%) isolados. O menor percentual de sensibilidade foi observado para ampicilina (58,33%) e penicilina (58,33%). Os isolados avaliados foram positivos para os genes de resistência blaZ (58,33%) e msrA (11,11%). Nenhum isolado apresentou os genes de resistência erm (A, B, C) e apenas uma amostra foi positiva para o teste da bomba de efluxo.