Análise de ângulos e pontos para vacinação de tilápias-do-nilo / Analysis of angles and points for nile tilapia vaccination / Análisis de ángulos y puntos para la vacunación la tilapia del nilo

Objetivou-se com o presente estudo avaliar diferentes ângulos e pontos de vacinação de juvenis de Tilapias-do-Nilo contra streptococose. Foram vacinados 450 juvenis de tilápias-do-nilo (Oreochroimis niloticus). Os animais foram divididos em três grupos (n=150) de acordo com seus pesos (grupo um: 140 g; grupo dois: 225 g e grupo três: 295 g). Os peixes foram vacinados em diferentes ângulos (45° ou 90°) e em diferentes pontos localizados na região intraperitoneal, entre as nadadeiras pélvicas (Ponto 0- meia nadadeira; ponto 1- entre meia nadadeira e a inserção da nadadeira, ponto 2 ­ paralelo a inserção da nadadeira), totalizando 75 peixes para cada ângulo proposto e 25 peixes para cada ponto de vacinação. Utilizou-se vacina comercial inativada com adjuvante oleoso contra Streptococcus agalactiae. Para análise do manejo vacinal elaborou-se um formulário que foi preenchido dividindo os peixes como bem vacinados, pouco vacinados e sem vacina. Os resultados foram obtidos por análise visual e expressos em porcentagem de acordo com os critérios estabelecidos. A vacinação do grupo um (140 g) e do grupo dois (225 g) no ângulo de 90° no ponto 2 possibilitou que 88% dos peixes fossem bem vacinados. O grupo três (295g) também foi melhor vacinado no ângulo de 90° no ponto 2, com 80% dos peixes bem vacinados. O ângulo de 90° no ponto 2 se mostrou mais eficiente para vacinação de juvenis de tilápia-do-Nilo para ambos os grupos de peso estudados.(AU)

The objective of this study was to evaluate different angles and points of vaccination of juvenile Nile Tilapia against streptococcosis. 450 juveniles of Nile tilapia (Oreochromis niloticus) were vaccinated. The animals were divided into three groups (n = 150) according to their weight (group one: 140 g; group two: 225 g and group three: 295 g). The fish were vaccinated at different angles (45 ° or 90 °) and at different points located in the intraperitoneal region, between the pelvic fins (Point 0- half fin; point 1- between half fin and the insertion of the fin, point 2 - parallel inserting the fin), totaling 75 fish for each proposed angle and 25 fish for each vaccination point. Inactivated commercial vaccine with oily adjuvant against Streptococcus agalactiae was used. For the analysis of vaccine management, a form was elaborated that was filled out dividing the fish as well vaccinated, poorly vaccinated and without vaccine. The results were obtained by visual analysis and expressed as a percentage according to the established criteria. The vaccination of group one (140 g) and group two (225 g) at the 90 ° angle at point 2 allowed 88% of the fish to be well vaccinated. Group three (295g) was also better vaccinated at the 90 ° angle at point 2, with 80% of the fish well vaccinated. The 90 ° angle at point 2 was more efficient for vaccinating juvenile Nile tilapia for both weight groups studied.(AU)

El objetivo de este estudio fue evaluar diferentes ángulos y puntos de vacunación de juvenilesde Tilapia del Nilo contra estreptococosis. Se vacunaron 450 juveniles de tilapia del Nilo(Oreochromis niloticus). Los animales se dividieron en tres grupos (n = 150) según supeso(grupo uno: 140 g; grupo dos: 225 gy grupo tres: 295 g). Los peces fueron vacunados endiferentes ángulos (45 ° y 90 °) y en diferentes puntos ubicados en la región intraperitoneal, entre las aletas pélvicas (Punto 0- media aleta; punto 1- entre média aleta y la insercióndelaaleta, punto 2 - paralelo insertando la aleta), totalizando 75 peces por cada ángulo propuestoy 25 peces por cada punto de vacunación. Se utilizó vacuna comercial inactivada conadyuvante oleoso contra Streptococcus agalactiae. Para el análisis del manejo de vacunas seelaboró un formulario que se llenó dividiendo a los peces bien vacunados, mal vacunadosysin vacuna. Los resultados se obtuvieron mediante análisis visual y se expresaronenporcentaje según los criterios establecidos. La vacunación del grupo uno (140 g) y del grupodos (225 g) en el ángulo de 90 ° en el punto 2 permitió que el 88% de los peces estuvieranbien vacunados. El grupo tres (295 g) también se vacunó mejor en el ángulo de 90 ° enel punto 2, con el 80% de los peces bien vacunados. El ángulo de 90 ° en el punto 2 fue máseficiente para vacunar a la tilapia juvenil del Nilo para ambos os grupos de peso estudados.(AU)

Streptococcus agalactiae infection in Nile tilapia (Oreochromis niloticus) / Infecção por Streptococcus agalactiae em tilápias do Nilo (Oreochromis niloticus)

This review aims to provide greater understanding of estreptococosis in reared tilapia and thereby assist in choosing the best method of prevention and control of this disease. Streptococcus agalactiae is a cosmopolitan pathogen and the main etiologic agent of septicaemia and meningoencephalitis in teleost. Outbreaks caused by this bacteria lead to high rates of morbidity and mortality of fish, resulting in serious economic losses, especially in the cage tilapia culture that is a branch of aquaculture which produces most in Brazil. This paper presents the main estreptococosis characteristics in Nile tilapia and its prevention by using intraperitoneal vaccines. Further studies should be conducted with the intention of clarifying its pathogenesis and improving the prevention and control.

Esta revisão tem por objetivo proporcionar maior entendimento sobre a estreptococose na criação de tilápias e com isso auxiliar na escolha do melhor método de profilaxia e controle desta enfermidade. Streptococcus agalactiae é um patógeno cosmopolita e o principal agente etiológico de septicemia e meningoencefalite em teleósteos. Surtos provocados por essa bactéria levam a altas taxas de morbidade e mortalidade de peixes, resultando em sérios prejuízos econômicos, especialmente na tilapicultura que é o ramo da aquicultura que mais produz no Brasil. Este trabalho traz as principais características da estreptococose em tilápias do Nilo e sua prevenção pelo uso de vacinas intraperitoneais. Novos estudos devem ser realizados com intuito de esclarecer ainda mais sua patogênese e aperfeiçoar os métodos profiláticos e de controle.

Streptococcus agalactiae infection in Nile tilapia (Oreochromis niloticus) / Infecção por Streptococcus agalactiae em tilápias do Nilo (Oreochromis niloticus)

This review aims to provide greater understanding of estreptococosis in reared tilapia and thereby assist in choosing the best method of prevention and control of this disease. Streptococcus agalactiae is a cosmopolitan pathogen and the main etiologic agent of septicaemia and meningoencephalitis in teleost. Outbreaks caused by this bacteria lead to high rates of morbidity and mortality of fish, resulting in serious economic losses, especially in the cage tilapia culture that is a branch of aquaculture which produces most in Brazil. This paper presents the main estreptococosis characteristics in Nile tilapia and its prevention by using intraperitoneal vaccines. Further studies should be conducted with the intention of clarifying its pathogenesis and improving the prevention and control.(AU)

Esta revisão tem por objetivo proporcionar maior entendimento sobre a estreptococose na criação de tilápias e com isso auxiliar na escolha do melhor método de profilaxia e controle desta enfermidade. Streptococcus agalactiae é um patógeno cosmopolita e o principal agente etiológico de septicemia e meningoencefalite em teleósteos. Surtos provocados por essa bactéria levam a altas taxas de morbidade e mortalidade de peixes, resultando em sérios prejuízos econômicos, especialmente na tilapicultura que é o ramo da aquicultura que mais produz no Brasil. Este trabalho traz as principais características da estreptococose em tilápias do Nilo e sua prevenção pelo uso de vacinas intraperitoneais. Novos estudos devem ser realizados com intuito de esclarecer ainda mais sua patogênese e aperfeiçoar os métodos profiláticos e de controle.(AU)

DESENVOLVIMENTO E PADRONIZAÇÃO DE UMA PCR MULTIPLEX PARA A DETECÇÃO DE Aeromonas spp. E Streptococcus spp. EM TILÁPIAS DO NILO (Oreochromis niloticus) NOS MUNICÍPIOS DE JATOBÁ E PETROLÂNDIA EM PERNAMBUCO, BRASIL.

O cultivo da tilápia do Nilo (Oreochromis niloticus) vem crescendo atualmente no Brasil e em Pernambuco. O sistema de cultivo intensivo associado ao manejo inadequado resulta no aparecimento de doenças oportunistas, principalmente as de origem bacteriana. As bactérias dos gêneros Aeromonas ssp. e Streptococcus ssp. são responsáveis pela maioria das mortalidades nas fazendas de peixe, causando morte por septicemia, além de se disseminar rapidamente nos plantéis. Objetivou-se neste estudo desenvolver um diagnóstico rápido por Reação em Cadeia de Polimerase - PCR para bactérias do gênero Aeromonas e Streptococcus, além de analisar a ocorrência dessas bactérias oriundas de tilapiculturas nos municípios de Jatobá e Petrolândia em Pernambuco. Foi padronizada uma PCR multiplex para o gênero Aeromonas e para a espécie Aeromonas hydrophila, com temperatura ideal de anelamento de 57.6°C e limite de detecção até 10-10 g/L de DNA extraído diretamente das colônias em cultivo microbiológico, utilizando como alvos os genes 16S rRNA e a citotoxina enterotóxica aerolisina (aer). Também foram estudadas a ocorrência de bactérias do gênero Aeromonas e Streptococcus oriundas de tilapiculturas localizadas nos municípios de Jatobá e Petrolândia no sertão de Pernambuco. Todos os 70 peixes coletados e todas as 16 amostras de água apresentaram isolados de Aeromonas spp. e Aeromonas hydrophila com prevalência dos fatores de virulência aerolisina (aer) e enterotoxina citotóxica (act) de 53,6% e 52,9%, respectivamente. Não foram encontrados isolados de Streptococcus ssp. tanto nos peixes como na água das tilapiculturas estudadas. A padronização de técnicas de diagnóstico bem como a ocorrência de aeromoniose em peixes cultivados no sertão de Pernambuco, demonstra a importância de pesquisas nessa área com objetivo de impulsionar a tilapicultura no Estado e otimizar o diagnóstico de doenças bacterianas.

Culture os nile tilapia (Oreochromis niloticus) is currently expanding in Brazil and Pernambuco. Intensive culture systems are associated with inadequate management, which results in the ocorrence of opportunistic bacterial diseases. The bacterial genera Aeromonas ssp. and Streptococcus ssp. are responsible for mortality in fish farms, due to septicemia and rapid spread of infection among animals. The aim of this study was to develop a quick assay for diagnosis by Polimerase Chain Reaction - PCR for Aeromonas ssp. and Streptococcus ssp., to investigate the occurrence of these bacterias from tilapia culture in Jatobá and Petrolândia - PE. It was standardized a mPCR for Aeromonas hydrophila and Aeromonas genus, with annealing temperature 57.6 °C and 10-10 g/L detection limit of DNA extracted directly from colonies in microbiological culture, using as targets the 16S rRNA genes and the virulence gene enterotoxic cytotoxin aerolysin (aer). Were also studied the occurrence of Aeromonas ssp. and Streptococcus ssp. colected from tilapia cultures located on Jatoba and Petrolândia - PE. All 70 collected fish and 16 water samples showed Aeromonas spp.and Aeromonas hydrophila isolates, with prevalence of virulence factors (aer) and cytotoxic enterotoxin (act) of 53.6% and 52.9%, respectively. None Streptococcus ssp.isolates were identify. The diagnostic techniques standardization and the occurrence of Aeromoniosis in fish farmed in Pernambuco demonstrates the importance of research in this area with the objective of boosting tilapicultura in the state and optimize the bacterial diseases diagnosis.

IMUNOHISTOQUÍMICA EM ÓRGÃOS DE TILÁPIAS-DO-NILO IMUNIZADAS COM ANTÍGENO INSOLÚVEL DE Streptococcus agalactiae

A infecção causada por Streptococcus agalactiae provoca grandes perdas em sistemas de criação intensiva de tilápias no Brasil e uma das soluções para minimizar estas perdas é a utilização de vacinas. Assim, este estudo avaliou a partir da marcação de células por meio da imunohistoquímica com anticorpo Ig M as respostas e participação do rim, baço e fígado na resposta imune humoral induzida pela vacina contra S. agalactiae. Para tanto foram utilizadas 166 tilápias-do-Nilo (Oreochromis niloticus) com peso médio de 200 ± 25 g. Foi determinada a concentração bacteriana letal para 50,0% dos peixes (DL50) forma utilizados 40 tilápias distribuídas em 4 caixas de fibra de vidro de 250 L, 10 animais/. Os animais foram inoculados com doses crescentes de S. agalactiae (1x102; 1x104; 1x106 e 1x108), obtendo a DL50 estimada em 1x107,71 e com o limite inferior e superior em 1x106,52 e 1x107,98, respectivamente. Posteriormente foi realizado o ensaio para coleta dos órgãos para posterior avaliação histológica e imunohistoquímica. Para tanto foram utilizados dois grupos (n= 63), sendo eles; grupo injetado com 200 L salina 0,65% (controle) e grupo imunizado com a vacina contendo a porção insolúvel do produto da sonicação do S. agalactiae adicionado ao adjuvante incompleto de Freund (1:1), com volume final de 200 L. A vacina e a salina foram aplicadas por via intracelomática (i.c) e em todos os grupos foram realizada a coleta dos órgãos pré imunização e coletas seriadas pós imunização nos tempos de 7, 14, 21, 28, 35, 42, 60 e 90 dias, para avaliação da dinâmica da resposta imune humoral por meio da imunohistoquímica com o anticorpo Ig M e avaliação histológica na coloração de hematoxilia e eosina. Os resultados foram comparados por meio de análise de variância (ANOVA) ao nível de 5% de probabilidade e a diferença entre as médias foi comparada pelo teste de Tukey. A imunização de tilápias-do-Nilo com antígeno insolúvel de S. agalactiae induziu a proliferação de linfócitos esplênicos, levando ao aumento significativo de células produtoras da imunoglobulina M no baço e rim dos animais vacinados, a partir de 14 e 28 dias após o estímulo, respectivamente, mantendo-se elevados até 90 dias. Também apresentaram maior quantidade de centro de melanomacrófagos no baço a partir de 21 dias pós-estímulo quando comparadas as tilápias do grupo controle.

The infection caused by Streptococcus agalactiae causes heavy losses in intensive farming of tilapia systems in Brazil and one of the solutions to minimize these losses is the use of vaccines. Thus, this study evaluated the tag from the cells by immunohistochemistry Ig M antibody responses and participate in the kidney, spleen and liver in the humoral immune response induced by the vaccine against S. agalactiae. Therefore, we analyzed 166 of the tilapia (Oreochromis niloticus) with an average weight of 200 ± 25 g. It determined the bacterial concentration lethal to 50.0% of the fish (LD50) 40 tilapias used medium 4 distributed in 250 L glass fiber boxes 10 animals. The animals were inoculated with increasing doses of S. agalactiae (1x102, 1x104, 1x106 and 1x108), getting the LD50 estimated at 1x107,71 and the lower and upper limit in 1x106,52 and 1x107,98 respectively. Later the test was carried out to collect the bodies for subsequent histological and immunohistochemical evaluation. Therefore, we used two groups (n = 63), namely; group injected with 200 uL saline 0.65% (control) and group immunized with the vaccine containing the insoluble portion of the product of sonication S. agalactiae added to Freund's incomplete adjuvant (1:1) with final volume of 200 uL. The vaccine and saline were applied via intracelomic (i.c) and in all the groups were made to collect the pre immunization organs and graded post immunization collected on days 7, 14, 21, 28, 35, 42, 60 and 90 days to evaluate the dynamics of humoral immune response by immunohistochemistry with the Ig M antibody and histological evaluation in the coloring hematoxilia and eosin. The results were compared using analysis of variance (ANOVA) at 5% probability and the difference between the means were compared by Tukey test. Immunization of the Nile tilapia with S. agalactiae insoluble antigen-induced proliferation of splenic lymphocytes, leading to significant increases in immunoglobulin-producing cells in the spleen and kidney M of the vaccinated animals from 14 and 28 days after challenge respectively, remaining elevated for up to 90 days. Also exhibit increased melanomacrophages center in the spleen from 21 days post-stimulation when compared to the control group tilapia.