Desempenho e preferência voluntária de rações padronizadas para roedores de laboratório / Performance and voluntary preference of standardized rations for laboratory rodents

Objetivou-se com este estudo avaliar o desempenho e preferência de camundongos isogênicos BALB/c Nude e hamsters Golden. Foram avaliados 54 machos recém desmamados de cada biomodelo que receberam três rações padronizadas (R1, R2, e R3) durante 28 dias. Foi avaliado o desempenho e a preferência por consumo voluntário dos animais durante a fase de crescimento. Não houve diferenças significativas entre as rações para camundongos (P > 0,05), porém, os hamsters Golden tiveram melhor desempenho quando alimentados com rações com maior densidade nutricional (P < 0,05). Ao teste de preferência os camundongos tiveram maior consumo voluntário pelas rações mais nutritivas (R2 e R3), e os hamstes pela ração com menor densidade nutricional (R1). Camundongos e hamsters Golden apresentam perfil alimentar distintos, devido as características anatomofisiológicas e etológicas e por isso, devem ser fornecidas rações que atendam a cada biomodelo nas suas peculiaridades.

The objective of this study was to evaluate the performance and preference of BALB/c Nude isogenic mice and Golden hamsters. 54 newly weaned males from each biomodel were evaluated and received three standardized diets (R1, R2, and R3) for 28 days. Performance and preference for voluntary consumption of animals during the growth phase were evaluated. There were no significant differences between the diets for mice (P> 0.05), however, Golden hamsters performed better when fed diets with higher nutritional density (P<0.05). In the preference test, the mice had higher voluntary consumption for the most nutritious diets (R2 and R3), and the hamsters for the diet with lower nutritional density (R1). Golden mice and hamsters have different food profiles, due to the anatomophysiological and ethological characteristics and therefore, diets that meet each biomodel in its peculiarities must be provided.

Desempenho e preferência voluntária de rações padronizadas para roedores de laboratório / Performance and voluntary preference of standardized rations for laboratory rodents

Objetivou-se com este estudo avaliar o desempenho e preferência de camundongos isogênicos BALB/c Nude e hamsters Golden. Foram avaliados 54 machos recém desmamados de cada biomodelo que receberam três rações padronizadas (R1, R2, e R3) durante 28 dias. Foi avaliado o desempenho e a preferência por consumo voluntário dos animais durante a fase de crescimento. Não houve diferenças significativas entre as rações para camundongos (P > 0,05), porém, os hamsters Golden tiveram melhor desempenho quando alimentados com rações com maior densidade nutricional (P < 0,05). Ao teste de preferência os camundongos tiveram maior consumo voluntário pelas rações mais nutritivas (R2 e R3), e os hamstes pela ração com menor densidade nutricional (R1). Camundongos e hamsters Golden apresentam perfil alimentar distintos, devido as características anatomofisiológicas e etológicas e por isso, devem ser fornecidas rações que atendam a cada biomodelo nas suas peculiaridades.(AU)

The objective of this study was to evaluate the performance and preference of BALB/c Nude isogenic mice and Golden hamsters. 54 newly weaned males from each biomodel were evaluated and received three standardized diets (R1, R2, and R3) for 28 days. Performance and preference for voluntary consumption of animals during the growth phase were evaluated. There were no significant differences between the diets for mice (P> 0.05), however, Golden hamsters performed better when fed diets with higher nutritional density (P<0.05). In the preference test, the mice had higher voluntary consumption for the most nutritious diets (R2 and R3), and the hamsters for the diet with lower nutritional density (R1). Golden mice and hamsters have different food profiles, due to the anatomophysiological and ethological characteristics and therefore, diets that meet each biomodel in its peculiarities must be provided.(AU)

Diagnóstico parasitológico de Tritrichomonas muris (Grassi, 1879) em hamster golden (Mesocricetus auratus) (Waterhouse, 1839): comparação entre as técnicas de sedimentação, flutuação e exame direto / Parasitological diagnosis of Tritrichomonas muris (Grassi, 1879) in golden hamster (Mesocricetus auratus) (Waterhouse, 1839): comparison between sedimentation, flotation and direct examination techniques

A experimentação animal é primordial para os avanços científicos em prol da saúde humana e animal. Inúmeros parasitos que acometem animais de laboratório podem interferir nas pesquisas, comprometendo os resultados. O protozoário Tritrichomonas muris pode ser um bioindicador de quebra de barreiras sanitárias em instalações de animais de laboratório, auxiliando na conduta do manejo e melhoria do padrão de qualidade animal. Este trabalho comparou três métodos parasitológicos, visando implantar a metodologia mais adequada em uma rotina de monitoramento sanitário de um biotério de criação de hamsters golden (Mesocricetus auratus). Foram utilizados 50 hamsters, entre três meses a um ano de idade, selecionados por amostragem, para exames parasitológicos nos períodos de monitoramento sanitário pré-estabelecidos. A análise foi feita por dois anos, abrangendo um total de oito exames trimestrais. O diagnóstico foi realizado por exame direto, flutuação de Willis-Mollay e sedimentação espontânea de Dennis Stone & Swanson a partir da mucosa intestinal e das fezes frescas in natura. Foram identificados apenas trofozoítos de T. muris nas três primeiras porções intestinais selecionadas no estudo (intestino delgado, ceco e cólon), enquantoa forma de pseudocisto foi detectada nas amostras fecais e na região do reto onde já há fezes formadas. Tais achados são embasados no mecanismo do ciclo de vida do protozoário em questão. O método direto mostrou maior eficácia para o diagnóstico de T. muris para a identificação de trofozoítos e pseudocistos, tanto nas fezes formadas, como na mucosa intestinal devidamente fragmentada em suas diferentes regiões.

Animal experimentation is primordial to scientific advances for human and animal health. Numerous parasites that affect laboratory animals can interfere with research, compromising the results. The protozoan Tritrichomonas muris can be a bioindicator of breaking down health barriers in laboratory animal facilities, helping to conduct management and improve animal quality standards. This work compared three parasitological methods, aiming to implement the most suitable methodology in a sanitary monitoring routine of a golden hamster breeding (Mesocricetus auratus). Fifty hamsters from three months to one year of age, selected by sampling, were used for parasitological examinations in pre-established sanitary monitoring periods. Analysis was performed for two years, covering a total of eight quarterly exams. The diagnosis was carried out by direct examination, Willis-Mollay flotation and spontaneous sedimentation by Dennis Stone & Swanson from the intestinal mucosa and fresh stool. Only T. muris trophozoites were identified in the first three intestinal portions selected in the study (small intestine, cecum and colon), while the pseudocyst form was detected in faecal samples and in the rectal region where there are already formed stools. Such findings are based on the life-cycle mechanism of this protozoan. The direct method showed greater efficacy for the diagnosis of T. muris for the identification of trophozoites and pseudocysts, both in formed feces and in the intestinal mucosa, properly fragmented in their different regions.

Diagnóstico parasitológico de Tritrichomonas muris (Grassi, 1879) em hamster golden (Mesocricetus auratus) (Waterhouse, 1839): comparação entre as técnicas de sedimentação, flutuação e exame direto / Parasitological diagnosis of Tritrichomonas muris (Grassi, 1879) in golden hamster (Mesocricetus auratus) (Waterhouse, 1839): comparison between sedimentation, flotation and direct examination techniques

A experimentação animal é primordial para os avanços científicos em prol da saúde humana e animal. Inúmeros parasitos que acometem animais de laboratório podem interferir nas pesquisas, comprometendo os resultados. O protozoário Tritrichomonas muris pode ser um bioindicador de quebra de barreiras sanitárias em instalações de animais de laboratório, auxiliando na conduta do manejo e melhoria do padrão de qualidade animal. Este trabalho comparou três métodos parasitológicos, visando implantar a metodologia mais adequada em uma rotina de monitoramento sanitário de um biotério de criação de hamsters golden (Mesocricetus auratus). Foram utilizados 50 hamsters, entre três meses a um ano de idade, selecionados por amostragem, para exames parasitológicos nos períodos de monitoramento sanitário pré-estabelecidos. A análise foi feita por dois anos, abrangendo um total de oito exames trimestrais. O diagnóstico foi realizado por exame direto, flutuação de Willis-Mollay e sedimentação espontânea de Dennis Stone & Swanson a partir da mucosa intestinal e das fezes frescas in natura. Foram identificados apenas trofozoítos de T. muris nas três primeiras porções intestinais selecionadas no estudo (intestino delgado, ceco e cólon), enquantoa forma de pseudocisto foi detectada nas amostras fecais e na região do reto onde já há fezes formadas. Tais achados são embasados no mecanismo do ciclo de vida do protozoário em questão. O método direto mostrou maior eficácia para o diagnóstico de T. muris para a identificação de trofozoítos e pseudocistos, tanto nas fezes formadas, como na mucosa intestinal devidamente fragmentada em suas diferentes regiões.(AU)

Animal experimentation is primordial to scientific advances for human and animal health. Numerous parasites that affect laboratory animals can interfere with research, compromising the results. The protozoan Tritrichomonas muris can be a bioindicator of breaking down health barriers in laboratory animal facilities, helping to conduct management and improve animal quality standards. This work compared three parasitological methods, aiming to implement the most suitable methodology in a sanitary monitoring routine of a golden hamster breeding (Mesocricetus auratus). Fifty hamsters from three months to one year of age, selected by sampling, were used for parasitological examinations in pre-established sanitary monitoring periods. Analysis was performed for two years, covering a total of eight quarterly exams. The diagnosis was carried out by direct examination, Willis-Mollay flotation and spontaneous sedimentation by Dennis Stone & Swanson from the intestinal mucosa and fresh stool. Only T. muris trophozoites were identified in the first three intestinal portions selected in the study (small intestine, cecum and colon), while the pseudocyst form was detected in faecal samples and in the rectal region where there are already formed stools. Such findings are based on the life-cycle mechanism of this protozoan. The direct method showed greater efficacy for the diagnosis of T. muris for the identification of trophozoites and pseudocysts, both in formed feces and in the intestinal mucosa, properly fragmented in their different regions.(AU)

Efeitos da infecção por Leishmania infantum na morfologia e composição celular do timo de hamster (Mesocricetus auratus)

O Timo é um órgão linfoide primário responsável pela maturação de linfócitos T que são importantes células efetoras da imunidade adaptativa. As células apresentadoras de antígeno conectam a imunidade inata a adaptativa e esta interação vai determinar o padrão de resposta imune a leishmaniose visceral resultando em doença sintomática quando um padrão de resposta é Th2 e uma resposta protetora com doenças assintomática quando o padrão é Th1. Outros tipos de respostas tais como a Th17 e Treg também são ativadas durante a doença. Está revisão tem como objetivo descrever os efeitos da leishmaniose visceral sobre o timo, um órgão linfoide primário que tem com função a maturação dos linfócitos T. Para isso foi realizada a análise e comparação de artigos científicos sobre as infecções Leishmania infantum (chagasi) no timo publicados nas bases de dados informatizadas PubMed, LILACS, SciELO, Google Scholar e no Portal de Periódicos da CAPES em língua inglesa no período de 1973 a 2020. Entre os estudos utilizados destacamos cinco que abortam a presença e/ou os efeitos da Leishmaniose Visceral sobre o timo em diferentes modelos experimentais e infecção natural em cães. Concluímos que L. infantum está presente no timo de animais infectados e leva a um aumento de peso e celularidade do órgão em contraste com a redução na porcentagem de CD4 + e linfócitos duplos negativos em camundongos BALB/c e inflamação e atrofia granulomatosa ou piogranulomatosa em cães.

The thymus is a primary lymphoid organ responsible for the maturation of T lymphocytes. T lymphocytes are an important part of adaptive immunity. Antigenpresenting cells connect adaptive immunity and innate immunity, and this interaction will determine the pattern of immune response to visceral leishamaniasis leading to symptomatic disease when a pattern is Th2 and a protective response with asymptomatic presentation, when is Th1. Other responses, such as Th17 and Treg, also participate in the response to visceral leishmaniasis. This review aims to describe the effects of Visceral Leishmaniasis on the thymus, primary lymphoid organ that has the function of maturing T lymphocytes. Therefore, there is an analysis and comparison of scientific articles that demonstrate the presence of Leishmania infantum (chagasi) or the effects of Visceral Leishmaniasis on the thymus, published in the computerized databases PubMed, LILACS, SciELO, Google Scholar and CAPES in English from 1973 to 2020. We concluded that L. infantum is present in the thymus of infected animals and leads to an increase in weight and cellularity in contrast to a reduction in the percentage of CD4 + and double negative lymphocytes in BALB/c mice and inflammation and granulomatous or pyogenic granulomatous atrophy in dogs.

Refinamento das técnicas de anestesia injetável em hamsters

Garantir uma conduta ética e humanitária aos animais é premissa básica na área de experimentação animal. Inclui-se aqui o estabelecimento de protocolos anestésicos que proporcionem segurança e bem-estar aos animais, com redução da porcentagem de óbitos. Considerando que os fármacos, individualmente, não possuem todas as propriedades necessárias para promover uma anestesia ideal, é interessante o estabelecimento de protocolos anestésicos multimodais a fim de potencializar as propriedades anestésicas e analgésicas das drogas e minimizar os efeitos adversos. Ainda, a maioria dos autores não menciona a administração de protocolos anestésicos com associação de mais de dois fármacos em pequenos roedores. Assim, o objetivo desse trabalho foi avaliar a segurança e a duração de dois protocolos de anestesia injetável em hamsters, com associação de fármacos anestésicos e analgésicos, bem como suas alterações em parâmetros bioquímicos e hematológicos. Ambas associações promoveram anestesia cirúrgica e se mostraram seguras para hamsters, sem ocorrência de óbitos. Entretanto, o protocolo AXCM promoveu uma anestesia de maior duração e menor período de indução e recuperação para ambos os sexos, parecendo ser mais adequada para hamsters do que o protocolo AXCT. Os machos levaram mais tempo para entrar em plano de anestesia cirúrgica e tiveram menor período de anestesia quando comparados com fêmeas. Em ambos os protocolos observamos que os parâmetros fisiológicos se mantiveram mais altos para as fêmeas durante todo o período anestésico. Ambas associações promoveram diminuição de saturação de oxigênio, a qual foi muito expressiva nas fêmeas do grupo AXCT e prontamente corrigida com a utilização de máscara de oxigênio. A queda de temperatura, crítica em pequenos roedores, foi controlada por meio do fornecimento de calor, tendo sido mínima e permanecendo estável. O monitoramento dos parâmetros fisiológicos por meio de equipamento adequado para a espécie mostra-se também como importante auxiliar na manutenção do bem-estar animal, permitindo uma pronta intervenção caso necessário. A hiperglicemia promovida pelo uso de agonistas de receptores 2-adrenérgicos, e mais discretamente pelo uso de cetamina e acepromazina, pode ser prevenida ou reduzida a partir de um período de jejum curto de até quatro horas e não mais do que isso uma vez que os pequenos roedores possuem um metabolismo acelerado, estando muito suscetíveis a hipoglicemia. Por último, torna-se importante avaliar a trombocitopenia sob o ponto de vista clínico, uma vez que essa condição pode determinar um aumento no risco de sangramento durante procedimentos cirúrgicos.

Ensuring ethical and humane conduct for animals is a basic premise in the area of animal experimentation. This includes the establishment of anesthetic protocols that provide safety and welfare to animals, and reducing the percentage of deaths. Considering that drugs individually do not possess all the properties necessary to promote optimal anesthesia, it is interesting to establish multimodal anesthetic protocols in order to enhance the anesthetic and analgesic properties of drugs and minimize adverse effects. Still, most authors do not mention the administration of anesthetic protocols with the association of more than two drugs in small rodents. Thus, the objective of this work was to evaluate the safety and duration of two injectable anesthesia protocols in hamsters, with an association of anesthetic and analgesic drugs, as well as their alterations in biochemical and hematological parameters. Both associations promoted surgical anesthesia and proved safe for hamsters, with no deaths. However, the AXCM protocol promoted longer anesthesia and shorter induction and recovery period for both sexes, which seems to be more appropriate for hamsters than the AXCT protocol. Males took longer to enter the surgical anesthesia plan and had a shorter anesthetic period when compared to females. In both protocols, we observed that the physiological parameters remained higher for females throughout the anesthetic period. Both associations promoted decrease in oxygen saturation, which was very expressive in females of the AXCT group and promptly corrected with the use of oxygen mask. The temperature drop, critical in small rodents, was controlled by heat supply, having been minimal and remaining stable. Monitoring of physiological parameters by appropriate equipment for the species is also an important aid in maintaining animal welfare, allowing prompt intervention if necessary. Hyperglycemia promoted by the use of 2 -adrenergic receptor agonists, and more discreetly by the use of ketamine and acepromazine, can be prevented or reduced from a short fasting period of up to four hours, since small rodents have an accelerated metabolism and are very susceptible to hypoglycaemia. Finally, it is important to evaluate thrombocytopenia from a clinical point of view, as this condition may increase the risk of bleeding during surgical procedures.

TOXICIDADE PRÉ-CLÍNICA DE FORMULAÇÕES CONTENDO EXTRATO DE Sonchus oleraceus L. EM Rattus novergicus albinus LINHAGEM WISTAR

O uso de produtos medicinais a base de plantas é uma prática comum na terapêutica, desde épocas remotas. Dessa forma, são essenciais os estudos sobre caracterização dos compostos químicos presentes nas plantas e suas atividades farmacológicas. Os objetivos desde trabalho foram: caracterizar os compostos fitoquímicos presentes no extrato de S. oleraceus L.; avaliar a citotoxicidade do extrato de S. oleraceus L. com atividades em fibroblastos e avaliar a toxicidade sistêmica de formulações contendo extrato de S. oleraceus L. por meio de análises hematológica, bioquímica e histopatológica. Para a triagem fitoquímica utilizou-se a cromatografia em fase reversa com detecção de compostos apolares empregando HPLC-UV, e quantificação de polifenóis e flavonóides totais pela técnica espectrofotométrica. Para a análise da citoxicidade utilizou-se cultivo celular das linhagens celulares utilizadas foram: MDCK e NIH-3T3, medida melo MTT. Para a toxicidade sistêmica utilizou-se uma amostra experimental com 100 ratos. Os grupos: VEM (veículo/macho); VEF (veículo/fêmea); SSOM (suspensão manipulada/macho); SSOF (suspensão manipulada/ fêmea); contendo sete animais em cada grupo (28 animais) foram utilizados para o teste da dose única (aguda) com indução oral da formulação com a dose equivalente a 6g/kg do extrato. Para os grupos de doses repetidas (crônica) utilizou-se um total de 72 animais, subdivididos em grupos de nove animais: VEM; VEF; SSOM1; SSOM2; SSOM3; SSOF1; SSOF2; SSOF3 com indução oral de formulações nas doses de 100, 200 e 300mg/Kg. Sobre a triagem fitoquímica do extrato de S. oleraceus L. o resultado mostrou a presença de compostos apolares como: ácido arjúnico, ácido maslínico, ácido betulínico, lupeol, -amirina, -amirina, estgmasterol e sitosterol, ambos com atividades biológicas benéficas ao organismo. Verificouse que em cada grama do extrato contém 22,83mg de polifenóis e 7,77mg de flavonóides. Após o tempo de 60 horas de exposição das linhagens de células normais de fibroblastos NHI/3T3, verificou-se que de acordo com o EC50 o extrato em concentrações 2,057µg/mL estimulam a crescimento e viabilidade celular. As avaliações sistêmicas, parâmetros hematológicos e bioquímicos, mostraram pouca divergência entre a dose única e as doses repetidas ressaltando que na maioria das vezes a variação foi quanto à diferença entre os sexos, quando comparado aos tratamentos. A avaliação anatomopatológica mostrou integridade dos órgãos avaliados tanto macroscopicamente quando microscopicamente. Esses dados conferem segurança para uso em testes clínicos de formulações contendo extrato de S. oleraceus L.

The use of medicinal herbal products has been a common practice in therapeutics since ancient times. Thus, studies of the characterization of the chemical compounds present in plants and their pharmacological activities are essential. The objectives of this study were: to characterize the phytochemical compounds present in the extract of S. oleraceus L .; to evaluate the cytotoxicity of the extract of S. oleraceus L. with activities over fibroblasts and to evaluate the systemic toxicity of formulations containing extract of S. oleraceus L. by hematologist, serum biochemical and histopathological analyzes. Phytochemical screening was performed using reverse phase chromatography with detection of apolar compounds using HPLC-UV, and quantification of polyphenols and total flavonoids by the spectrophotometric technique. To cell cytotoxicity analysis, the cell lines used were MDCK and NIH-3T3, measured melo MTT. For the systemic toxicity, an experimental sample with 100 rats was used. The groups VEM (vehicle/male), VEF (vehicle/female), SSOM (manipulated suspension/male), SSOF (manipulated suspension/female), containing seven animals in each group (28 animals) and were used for the single dose test (acute test) with oral induction of the formulation at the dose equivalent to 6g / kg of the extract. For the repeated dose groups (chronic test) a total of 72 animals were used, subdivided into groups of nine animals: VEM; VEF; SSOM1; SSOM2; SSOM3; SSOF1; SSOF2; SSOF3 with oral induction of formulations at doses of 100, 200 and 300mg/kg. On the phytochemical evaluation of the S. oleraceus L. extract, the results showed the presence of apolar compounds such as arjunic acid, maslinic acid, betulinic acid, lupeol, amirin, -amirin, stgmasterol and sitosterol, both with beneficial biological activities into human organism. It was verified that in each gram of the extract contains 22.83mg of polyphenols and 7.77mg of flavonoids. After the 60-hour exposure time of normal NHI / 3T3 fibroblast cell lines, it was found that according to the EC50 the extract at concentrations 2,057 g / mL stimulated cell growth and viability. The systemic evaluations, hematological and biochemical parameters, showed little divergence between the single dose and the repeated doses, emphasizing that most of the time the variation was regarding the difference between the sexes, when compared to the treatments. The anatomopathological evaluation showed integrity of the evaluated organs both macroscopically and microscopically. These data confer safety for use in clinical trials of formulations containing extract of S. oleraceus L.

Cutaneous myxosarcoma in a Syrian hamster (Mesocricetus auratus) / Mixossarcoma cutâneo em um hamster Sírio

The pathological findings in a 2-years-old Syrian hamster (Mesocricetus auratus) with a cutaneous myxosarcoma are described. Grossly, there was a large cutaneous mass in the right cervical region. Microscopical evaluation revealed a myxosarcoma characterized by pleomorphic, fusiform cells loosely arranged, randomly distributed, and presenting a moderate amount of basophilic amorphous stroma. There were hemorrhagic areas within the tumor. The basophilic amorphous stroma was positive to Alcian blue confirming the presence of a mucopolysaccharide matrix. Immunohistochemically, the neoplastic cells expressed vimentin, and were negative for cytokeratin or glial fibrillary acidic protein (GFAP).

São descritos os achados anatomopatológicos de um caso de mixossarcoma cutâneo em um Hamster Sírio de 2 anos de idade. Macroscopicamente, foi evidenciada um grande massa cutânea na região cervical lateral direita. A microscopia revelou a presença de um mixossarcoma caracterizado por células fusiformes pleomórficas, frouxamente arranjadas, distribuídas aleatoriamente e, apresentando quantidade moderada de substância basofílica amorfa no estroma e áreas hemorrágicas. O estroma basofílico amorfo foi positivo na coloração Alcian blue, confirmando a presença de matriz mucopolissacarídea. Na imunoistoquímica, as células neoplásicas expressaram vimentina e foram negativas para a marcação de citoqueratina e proteína ácida fibrilar (GFAP).

Presence of amastigotes in the central nervous system of hamsters infected with Leishmania sp.

Visceral leishmaniasis (VL) is a severe chronic disease caused by Leishmania (Leishmania) infantum chagasi. Better knowledge on the effects caused by this disease can help develop adequate clinical management and treatment. Parasitological and immunohistochemical studies were performed golden hamsters Mesocricetus auratus infected with bone marrow from individuals with VL in the State of Mato Grosso do Sul, central-west Brazil. The effects of parasitism in the spleen, liver, kidneys, lungs, heart and brain of the animals were examined. Eighteen hamsters were inoculated intraperitoneally, and six healthy animals were used as negative controls. The animals were kept in the animal house and checked for clinical signs. Specimens of each organ were examined for the presence of amastigotes. Immunohistochemical technique was performed in all brain specimens and organs negative on the direct examination of parasites. Direct examination of amastigotes was positive in the spleen and liver of all infected animals; 33.3% showed the parasite in the kidneys and lungs, and 16.7% in the heart. Parasitic forms were seen in 83.3% (15/18) of the brain examined. Immunohistochemistry confirmed the results of the direct examination, except in two specimens of lung tissue and in the brain specimens. Other studies are needed to further clarify the effect of the parasite in the central nervous system.

A leishmaniose visceral (LV) é uma doença crônica grave, causada pelo parasito Leishmania (Leishmania) infantum chagasi. Esclarecer as alterações provocadas pela doença é fundamental para que se adotem condutas clínicas e de tratamento adequadas. Com o objetivo de analisar a infecção experimental em hamsters da linhagem golden, Mesocricetus auratus, infectados com tecido de medula óssea de pacientes com LV no Estado de Mato Grosso do Sul, foram realizados estudos parasitológicos e de imunomarcação. Foi verificada a distribuição do parasitismo no baço, fígado, rim, pulmão, coração e encéfalo desses animais. Foram utilizados 18 hamsters experimentalmente inoculados via intra-peritoneal, e seis animais sadios como controles negativos. Os animais foram mantidos em biotério de experimentação e observados, em busca de alterações clínicas. Com fragmentos de cada órgão, procedeu-se a confecção de lâminas por aposição para pesquisa de amastigotas. Nos órgãos com resultado negativo na pesquisa direta do parasito, e em todas as amostras de encéfalo, foi realizada a técnica de imunohistoquímica. A pesquisa direta de amastigotas foi positiva no baço e fígado de todos os animais infectados; 33,3% apresentaram o parasito em rim e pulmão, e 16,7% no coração. Quando realizada a pesquisa em encéfalo, formas parasitárias foram observadas em 83,3% (15/18) dos animais. A imunomarcação confirmou os resultados da pesquisa direta, exceto em duas amostras de tecido pulmonar e nas amostras de encéfalo. Mais estudos são necessários, para esclarecer o real papel do parasito no sistema nervoso central.

Presence of amastigotes in the central nervous system of hamsters infected with Leishmania sp / Presença de amastigotas em sistema nervoso central de hamster infectado com Leishmania sp

Visceral leishmaniasis (VL) is a severe chronic disease caused by Leishmania (Leishmania) infantum chagasi. Better knowledge on the effects caused by this disease can help develop adequate clinical management and treatment. Parasitological and immunohistochemical studies were performed golden hamsters Mesocricetus auratus infected with bone marrow from individuals with VL in the State of Mato Grosso do Sul, central-west Brazil. The effects of parasitism in the spleen, liver, kidneys, lungs, heart and brain of the animals were examined. Eighteen hamsters were inoculated intraperitoneally, and six healthy animals were used as negative controls. The animals were kept in the animal house and checked for clinical signs. Specimens of each organ were examined for the presence of amastigotes. Immunohistochemical technique was performed in all brain specimens and organs negative on the direct examination of parasites. Direct examination of amastigotes was positive in the spleen and liver of all infected animals; 33.3% showed the parasite in the kidneys and lungs, and 16.7% in the heart. Parasitic forms were seen in 83.3% (15/18) of the brain examined. Immunohistochemistry confirmed the results of the direct examination, except in two specimens of lung tissue and in the brain specimens. Other studies are needed to further clarify the effect of the parasite in the central nervous system.(AU)

A leishmaniose visceral (LV) é uma doença crônica grave, causada pelo parasito Leishmania (Leishmania) infantum chagasi. Esclarecer as alterações provocadas pela doença é fundamental para que se adotem condutas clínicas e de tratamento adequadas. Com o objetivo de analisar a infecção experimental em hamsters da linhagem golden, Mesocricetus auratus, infectados com tecido de medula óssea de pacientes com LV no Estado de Mato Grosso do Sul, foram realizados estudos parasitológicos e de imunomarcação. Foi verificada a distribuição do parasitismo no baço, fígado, rim, pulmão, coração e encéfalo desses animais. Foram utilizados 18 hamsters experimentalmente inoculados via intra-peritoneal, e seis animais sadios como controles negativos. Os animais foram mantidos em biotério de experimentação e observados, em busca de alterações clínicas. Com fragmentos de cada órgão, procedeu-se a confecção de lâminas por aposição para pesquisa de amastigotas. Nos órgãos com resultado negativo na pesquisa direta do parasito, e em todas as amostras de encéfalo, foi realizada a técnica de imunohistoquímica. A pesquisa direta de amastigotas foi positiva no baço e fígado de todos os animais infectados; 33,3% apresentaram o parasito em rim e pulmão, e 16,7% no coração. Quando realizada a pesquisa em encéfalo, formas parasitárias foram observadas em 83,3% (15/18) dos animais. A imunomarcação confirmou os resultados da pesquisa direta, exceto em duas amostras de tecido pulmonar e nas amostras de encéfalo. Mais estudos são necessários, para esclarecer o real papel do parasito no sistema nervoso central.(AU)

Validação de um radioimunoensaio para a quantificação de metabólitos fecais de testosterona em hamster Sírio (Mesocricetus auratus) / Validation of a radioimmunoassay for the quantification of fecal testosterone metabolites in the Syrian hamster (Mesocricetus auratus)

Modelo para o estudo de diversas doenças humanas, o hamster tem sido objeto de numerosos estudos comportamentais e envolvendo estresse e/ou comportamento agonístico que supõem, muitas vezes, o monitoramento das flutuações hormonais nos indivíduos envolvidos. O objetivo do presente trabalho foi confirmar a adequação de um conjunto comercial para dosagem de testosterona em sangue humano para a quantificação de metabólitos fecais de testosterona (MFT) em hamsters Sírios machos e fêmeas. Dez machos foram submetidos a um desafio com um agonista de GnRH para estimular a atividade testicular, elevando os níveis circulantes de testosterona. Cinco fêmeas receberam uma injeção de testosterona enquanto cinco outras receberam uma injeção de solução salina. Amostras de fezes coletadas antes e depois dos procedimentos, assim como amostras fecais de 20 fêmeas gestantes coletadas ao longo da gestação foram analisadas com um conjunto comercial para radioimunoensaio. Um pico de MFT 12h após a injeção seguido de uma queda abaixo do nível basal comprovou que, nos machos, as alterações nos níveis de MFT refletem as alterações da concentração de testosterona no sangue. Nestes observou-se um ciclo circadiano das concentrações de MFT com acrofase no início do período claro correspondendo ao ciclo descrito para as concentrações sanguíneas na literatura. Nas fêmeas a administração de testosterona exógena provocou uma elevação importante dos níveis de MFT, mas as concentrações medidas ao longo da gestação não refletiram o padrão dos níveis sanguíneos do hormônio endógeno. O conjunto para radioimunoensaio para testosterona em sangue humano mostrou-se adequado para o monitoramento da função testicular no hamster macho, mas um ensaio mais específico seria necessário para as fêmeas.(AU)

Besides being models for a variety of human diseases, hamsters have been object of numerous behavioral studies about stress and agonistic behavior. Such studies usually involve hormone change monitoring. The aim of the present study was to confirm the suitability of a commercial kit for human serum testosterone analysis to quantify testosterone metabolites in the feces (MFT) of male and female Syrian hamsters. Ten males were submitted to a GnRH challenge test to stimulate testicular activity and increase circulating testosterone levels. Five females received a testosterone injection and five other females were given a saline injection. Fecal samples collected before and after the procedures, and fecal samples collected from 20 pregnant females through gestation were analyzed for MFT with a commercial radioimmunoassay. The detection of a MFT peak 12 h after GnRH administration followed by a decrease under baseline showed that, in males, changes in the levels of MFT are related to respective changes of testosterone concentrations in the blood. Again in males a circadian cycle of MFT similar to the circadian rhythm described in literature for blood concentrations was detected. The administration of exogenous testosterone caused in females a dramatic peak of MFT. However, the concentrations measured through gestation did not reflect the pattern of endogenous testosterone blood levels as described in the literature. Therefore, the use of a radioimmunoassay for human blood testosterone was validated in male Syrian hamster, but a more specific assay would be necessary for female hamsters.(AU)

Susceptibilidade de hamsters frente à infecção pelo herpesvirus equino tipo 1 causando encefalite e doença respiratória

Este trabalho teve por objetivo avaliar as alterações respiratórias e neurológicas resultantes da infecção por via intranasal das diferentes estirpes nacionais do herpesvírus equino tipo 1 (EHV-1) em hamsters comparando sua susceptibilidade com estudos sobre infecção do EHV-1 em camundongos e equinos. Para isso, hamsters sírios machos, três semanas de idade, foram infectados por via intranasal com as estirpes do EHV-1 obtidas a partir de fetos abortados e potro neonato infectados (A4/72, A9/92, A3/97 e Iso/72). Os animais foram pesados e examinados diariamente em busca de sinais clínicos e neurológicos. Conforme os sintomas neurológicos apareceram, grupos de cinco hamsters foram eutanasiados por overdose de isoflurano na primeira etapa do projeto, e, de cetamina/xilazina por via intraperitoneal na segunda etapa. Na necropsia, sistema nervoso central (SNC), pulmão, fígado, baço e timo foram coletados para isolamento viral em cultura de células E-dermal e para análise histopatológica. Na segunda etapa do projeto, a lavagem broncoalveolar (LBA) com 3 ml de PBS por hamsters foi realizada para determinar a resposta inflamatória pulmonar através da contagem total e diferencial de leucócitos. Similar aos experimentos com camundongos, hamsters desafiados com as estirpes virais A4/72 e A9/92 apresentaram manifestações clínicas severas no terceiro dia pós-inoculação (dpi), tais como perda de peso aguda, dispnéia, desidratação, decúbito e morte. Observou-se também sinais neurológicos como hiperexcitabilidade, paralisia, espasmos, perda de propriocepção, andar em círculos e convulsões. Ao contrário dos camundongos, que não desenvolveram a doença; hamsters inoculados com as estirpes virais A3/97 e Iso/72 manifestaram sintomas respiratórios e neurológicos agudos entre quarto e quinto dpi, sendo as alterações respiratórias as mais evidentes, principalmente hemoptise e conjuntivite. O isolamento do vírus a partir do SNC foi positivo em todos os animais infectados; no entanto, todas as amostras de pulmões foram positivas apenas nos grupos infectado pelas estirpes virais A9/92 e A4/72. Todas as estirpes do EHV-1 foram isoladas a partir do baço, no entanto, a partir do timo foram isoladas apenas as estirpes A9/92 e A4/72, e, de fígado somente a estirpe viral Iso/72 não foi isolada. No LBA, a contagem total de leucócitos não demonstrou diferenças de valores significativas entre os grupos experimentais, sendo apenas evidente a presença de eritrócitos, macrófagos e neutrófilos na maioria dos esfregaços dos hamsters infectados. Porém, na contagem diferencial de leucócitos observou-se um aumento significativo de neutrófilo com consequente diminuição significativa de macrófagos nos hamsters infectados pelas estirpes virais A3/97, Iso/72 e A4/72 quando comparados ao grupo controle. Os hamsters infectados pela estirpe viral A9/92 mantiveram valores próximos aos do grupo controle. Ao avaliar microscopicamente o SNC, fígado e pulmão dos hamsters infectados foi observado infiltrado inflamatório, necrose e manguito perivascular em SNC; leucocitose e necrose no parênquima hepático com discreta pericolangite e proliferação de ducto biliar; e em pulmão observou inflamação, necrose, edema e hemorragia em bronquíolos e alvéolos. Concluindo, os resultados apontaram o hamster como a espécie mais susceptível à infecção pelo EHV-1 servindo como um modelo experimental complementar para estudos de doenças respiratória e neurológica provocadas por este agente em equinos. Palavras-chave: Herpesvírus equino tipo 1. Hamster. Susceptibilidade ao EHV-1. Infecção intranasal.

This study aimed to evaluate the respiratory and neurological disorders resulting from intranasal infection with different national strains of equine herpesvirus type 1 (EHV-1) in hamsters comparing their susceptibility to studies about EHV-1 infection in mice and horses. Therefore, male Syrian hamsters, three weeks of age, were infected via intransal with EHV-1 strains obtained from aborted fetuses and neonatal foal infected (A4/72, A9/92, A3/97 and Iso/72). The animals were weighed and examined daily for clinical search and neurological signs. As neurological symptoms appeared five hamsters groups were euthanized by isoflurane overdose in the first stage of the project, and ketamine/xylazine via intraperitoneal in the second stage. At necropsy, central nervous system (CNS), lung, liver, spleen and thymus were collected for virus isolation in E-dermal cell culture and histopathological analysis. In the second stage of the project, bronchoalveolar lavage (BAL) with 3 ml of PBS per hamsters was performed to determine the pulmonary inflammatory response through the total and differential leukocyte count. Similar to the experiments with mice, hamsters challenged with viral strains A4/72 and A9/92 had severe clinical manifestations in the third day post-inoculation (dpi), such as acute weight loss, dyspnea, dehydration, recumbency, and death. It was also observed neurological signs such as hyperexcitability, paralysis, spasms, loss of proprioception, circling and convulsions. Unlike mice, which did not develop disease; hamsters inoculated with viral strains A3/97 and Iso/72 showed acute respiratory and neurological symptoms between fourth and fifth dpi, and the most evident respiratory distress was hemoptysis and conjunctivitis. The virus isolation from CNS was positive in all infected animals; however, all lung samples were positive only in groups infected by A9/92 and A4/72 viral strains. All EHV-1 strains were recovered from spleen, however, only A9/92 and A4/72 viral strains were recovered from thymus, but only Iso/72 viral strain was not recovered from liver. BAL total leukocyte count showed no significant differences in values between the experimental groups but the presence of erythrocytes, macrophages and neutrophils were evident in most smears of infected hamsters. However, in the leukocyte differential count it was observed a significant increase in neutrophils with consequent significant reduction of macrophages in hamsters infected by viral strains A3/97, Iso/72 and A9/92 when compared with the control group. Hamsters infected with the A9/92 viral strain maintained values similar to the control group. When evaluating microscopically the CNS, liver and lungs of infected hamsters it was observed inflammatory infiltrate, necrosis and perivascular cuff in CNS; leukocytosis and necrosis in the liver parenchyma with discrete pericholangitis and bile duct proliferation; and inflammation, necrosis, edema and hemorrhage in the bronchioles and alveoli. Concluding, the results showed the hamster as the most susceptible species to EHV-1 infection serving as a complementary experimental model for studies of respiratory and neurological diseases caused by this agent in horses.

Estabelecimento da leptospirose por infecção experimental em hamsters (Mesocricetus auratus) com Leptospira interrogans sorovar Canicola, estirpe LO4, por exposição cutânea integra e com abrasões / Development of the leptospirosis by experimental infection in hamsters (Mesocricetus auratus) with Leptospira interrogans serovar Canicola, strain LO4, by intact and scratched skin exposures

O estabelecimento e a evolução da leptospirose em hamster (Mesocricetus auratus) pela infecção experimental com Leptospira interrogans sorovar Canicola, estirpe LO4, pela exposição cutânea íntegra e escarificada, tendo como controle a via intraperitoneal foram avaliados. Foram utilizados 120 hamsters, fêmeas, distribuídas em dois grupos de acordo com a via de inoculação (pele escarificada e pele íntegra). O inóculo infeccioso foi constituído por uma cultura pura de L. interrogans sorovar Canicola (estirpe LO4), isolada do fígado de um suíno de abatedouro em Londrina, Estado do Paraná e tipificada pela técnica de adsorção de aglutininas com o kit de anticorpos monoclonais no Royal Tropical Institute, Amsterdã, Holanda. Os animais foram observados duas vezes ao dia, durante 21 dias. Os animais que vieram a óbito foram necropsiados e colhidos assepticamente rins, fígado, sistema genital (útero e ovário) e cérebro. Os animais sobreviventes foram eutanasiados após 21 dias. Foram ainda colhidas amostras de soro sanguíneo por punção cardíaca para a pesquisa de aglutininas antileptospiras nos animais sobreviventes, pela técnica de soroaglutinação microscópica (SAM). Para a detecção de leptospiras, foram utilizados microscopia direta a fresco e cultivo microbiológico. A via cutânea escarificada induziu maior letalidade quando comparada com a pele integra, com estabelecimento e evolução da leptospirose. Por outro lado, a via cutânea íntegra induziu mais frequentemente o estado de portador renal e/ou genital para leptospirose. A estirpe LO4 apresentou baixo poder imunogênico, induzindo soroconversão na SAM em apenas um animal. (AU)

The establishment and evolution of leptospirosis in hamster (Mesocricetus auratus) by experimental infection with Leptospira interrogans serovar Canicola, LO4 strain, by intact and scratched skin exposures, having as control the intraperitoneal route, were evaluated. Hundred-twenty female hamsters distributed in two groups according to inoculation route (intact and scratched skin) were used. Infectious inoculum was constituted by a pure culture of L. interrogans serovar Canicola (strain LO4), isolated from liver from a slaughtered swine in Londrina, Paraná state and typified by agglutinins adsortion technique with monoclonal antibody kit at the Royal Tropical Institute, Amsterdam, the Netherlands. The animals were observed twice a day during 21 days. Animals that died were necropsied and kidneys, liver, genital tract (uterus and ovaries) and brain were aseptically collected. On the 21st post-inoculation day, surviving animals were euthanized. In these animals, serum samples were also collected by cardiac puncture to antileptospires agglutinins research using microscopic agglutination test (MAT). Fresh direct microscopy and microbiological culture were used for the detection of leptospires. Scratched skin route induced larger lethality when compared to intact skin route, with establishment and evolution of leptospirosis. On the other hand, intact skin route induced renal and/or genital carrier state more frequently. LO4 strain presented low immunogenic power, characterized by soroconversion at the MAT in only one inoculated animal. (AU)

Poder imunogênico de bacterina experimental anti leptospirose canina: ensaio em hamsters desafiados com estirpes de leptospiras dos sorovares Copenhageni e Canicola isoladas no Brasil / Immunogenic power of an experimental canine antileptospirosis bacterin: assay in hamsters challenged with strains of leptospiras serovars Copenhageni and Canicola isolated in Brazil

A proteção induzida por uma vacina comercial anti-leptospirose importada, bivalente produzida com estirpes de referência dos sorovares Icterohaemorrhagiae e Canicola, foi comparada a promovida por uma bacterina experimental, bivalente produzida com as estirpes autóctones M64/06 e LO-4, respectivamente dos sorovares Copenhageni e Canicola, isoladas no Brasil e tipificadas com anticorpos monoclonais produzidos pelo Royal Tropical Institut, Laboratório de Referência da Organização Mundial de Saúde. O ensaio foi conduzido pelo teste de potência com desafio em hamsters. A vacina experimental, bivalente foi inativada com fenol a 37%, ajustada para concentração de 108 leptospiras por mL, por sorovar e produzida nas versões com e sem adjuvante hidróxido de alumínio a 0,15%. Os hamsters foram imunizados com 0,25 mL de vacina, via subcutânea em duas aplicações com 15 dias de intervalo. Os desafios foram efetuados com as estirpes LO4 (Canicola) ou L1-130 (Copenhageni) isoladas no Brasil, respectivamente nas diluições de 10-3 e 10-1 no volume de 0,5 mL via intraperitoneal por animal, 15 dias após a última dose da vacina. A estirpe de desafio do sorovar Copenhageni foi caracterizada, por anticorpos monoclonais, como idêntica a M64/06 e foi escolhida devido a apresentar melhor regularidade em termos de patogenicidade para os hamsters. Decorridos 20 dias do desafio os hamsters sobreviventes foram eutanasiados em câmara de CO2, necropsiados e nos seus rins foi efetuada a pesquisa do estado de portador de leptospiras por cultivo em meio de Fletcher. Nos desafios efetuados com a estirpe autóctone, L1-130 do sorovar Copenhageni foi obtida a proteção contra a doença clínica em oito de dez animais, para as duas vacinas experimentais, no entanto, entre os sobreviventes, houve portadores renais de leptospiras, em maior número para a vacina sem adjuvante (n=5), quando comparado a vacina acrescida de Al(OH)3, (n=3); para a vacina comercial a proteção foi total, tanto contra a doença como quanto a infecção não havendo qualquer morte por leptospirose e todos os cultivos renais dos sobreviventes foram negativos para leptospiras. Nos desafios efetuados com a estirpe autóctone, LO4 do sorovar Canicola, a proteção conferida pelas três vacinas ensaiadas foi total, não havendo mortes por leptospirose e todos os sobreviventes apresentaram resultados negativos para leptospiras nos cultivos de tecido renal. Os números de DL50 empregadas nos inóculos de desafio foram superiores a 10.000, para os dois sorovares ensaiados, pois na titulação dos inóculos morreram mais do que 50% dos animais até a última diluição testada. Foi, portanto, demonstrado a existência de proteção cruzada entre os sorovares Copenhageni e Icterohaemorrhagiae e que a bacterina importada foi capaz de induzir proteção contra a doença e contra a infecção para estirpes de leptospiras autóctones dos sorovares Canicola e Copenhageni isoladas no Brasil. Nos desafios efetuados com o sorovar Canicola a vacina experimental induziu proteção contra a doença e contra a infecção, mas nos que empregaram o sorovar Copenhageni houve proteção apenas contra a doença, constatando-se menor número de portadores renais de leptospiras entre os animais imunizados com a bacterina experimental acrescida do adjuvante de hidróxido de alumínio

The protection induced by an imported commercial bivalent anti-leptospirosis vaccine produced with the reference strain of the serovars Icterohaemorrhagiae and Canicola was compared to one promoted by an experimental, bivalent bacterial vaccine produced with the indigenous strains M64/06 and LO-4, respectively of the serovars Copenhageni and Canicola isolated in Brazil and typified with monoclonal antibodies produced by the Royal Tropical Institut, Reference Laboratory of the World Health Organization. The assay was conducted by using the potency test with challenge in hamsters. The experimental bivalent vaccine was inactivated with 37% phenol and adjusted at a concentration of 108 leptospires/mL, for each serovar and produced in the versions with and without adjuvant (0.15% aluminium hydroxide). The hamsters were immunized by 0.25 mL of vaccine, by subcutaneous route in two applications with 15 days of interval. Fifteen days after receiving the last dose of the vaccine, the challenges were performed by employing the strains LO4 (Canicola) or L1-130 (Copenhageni), which were isolated in Brazil, respectively at the dilution of 10-3 and 10-1, in the volume of 0.5 mL/each animal by the intraperitoneal route. The challenge strain serovar Copenhageni has been characterized as identical to M64/06 strain by means of monoclonal antibodies and it was chosen due to its better regularity in terms of pathogenicity determined in hamsters. After 20 days of the challenge, the surviving hamsters were sacrificed in CO2 chamber, submitted to necropsy and the kidneys were examined to test the carrier state of leptospires by cultivation in Fletcher\'s medium. In the challenges effectuated with the indigenous strain, L1-130 of the serovar Copenhageni the protection was obtained against the clinical disease in eight of ten animals, for two experimental vaccines, however, among the survivors, there were renal carriers of leptospires, in higher number for the vaccine without containing the adjuvant (n=5), when compared to the one added with Al (OH) (n=3). For the commercial vaccine, the protection was total both against the disease and as for infection, when no death was found in consequence of leptospirosis and all the renal cultures of the survivors were negative for leptospires. In the challenges performed with the indigenous strain LO4 of the serovar Canicola, the protection conferred by the three vaccines tested was total, without observing any deaths due to leptospirosis and all the survivors presented negative culturing results for leptospires in the renal tissue. The challenge doses of the inocula were superior to 10,000 LD50, for the two serovars tested, since in the titration of the inocula have died more than 50 % of the animals up to the last tested dilution. So, the crossed protection existing between the serovars Copenhageni and Icterohaemorrhagiae was demonstrated and that the imported bacterial vaccine was able to induce protection against the disease and against the infection for the native strains of leptospires serovars Canicola and Copenhageni isolated in Brazil. In the challenges effectuated with the serovar Canicola, the experimental vaccine induced protection against the disease and against the infection, but in vaccine employing the serovar Copenhageni, protection was found only against the disease, when less number of renal carriers of leptospires was observed among the animals immunized with the experimental vaccine added with the aluminium hydroxide adjuvant

Perfil patogênico de um isolado do vírus da raiva procedente do morcego insetívoro Lassiurus ega e do virus fixo Challenge Virus Standard (CVS) no modelo hamster (Mesocricetus auratus) e camundongo (Mus musculus) / Pathogenic profile of a rabies virus isolate from insectivorous bat Lassiurus ega and fixed virus Challenge Virus Standard (CVS) in hamster model (Mesocricetus auratus) and mouse (Mus musculus)

O isolamento do vírus da raiva (genótipo 1) a partir de morcegos não hematófagos está se tornando cada vez mais freqüente nas grandes cidades do Brasil. Este trabalho foi delineado para investigar a patogenicidade de um isolado do vírus da raiva, do morcego insetívoro Lassiurus ega, procedente do município de Presidente Prudente SP, em comparação ao vírus fixo da raiva, amostra CVS/32 (Challenge Vírus Standard). Os vírus foram reativados por meio de inoculação intracerebral em camundongos e os experimentos de patogenicidade foram realizados em camundongos e hamsters, desafiando-os pelas vias intramuscular (IM), intradérmica (ID), intranasal (IN) e abrasão superficial da pele (AP). A presença do vírus nos cérebros de animais que haviam manifestado sinais compatíveis à raiva, foi confirmada mediante a prova de imunofluorescência direta. Foram considerados para a avaliação da patogenicidade o quadro clínico, proporção de mortos, e a duração dos períodos de incubação (PI) e clínicos (PC) em dias. Em hamsters, o isolado de L. ega exibiu um quadro furioso, com proporção total de mortos de 2.60%; assim discriminada: 2.08% IM (PI: 11 dias; PC: 6 dias) e 8.33% IN (PI:10.66 ± 1.15 e PC: 7.33 ± 1.54). A presença do vírus no SNC foi detectada apenas em animais inoculados por essas vias. Por outro lado, o vírus CVS produziu um quadro paralítico com mortalidade total de 39.84%, com a seguinte distribuição: 62.50% IM (PI 7.50 ± 2.33; PC: 5.13 ± 1.89) 78.12% ID (PI 9.13 ± 2.23; PC 3.88 ± 2.23) 18.75% IN (PI 12.00 ± 2.77; PC 7.14 ± 2.54). Em camundongos, o isolado do L. ega manifestou sinais de agressividade e a raiva foi confirmada em animais inoculados IM e IN. A proporção de mortos observados em camundongos foi de 50.00% (PI 16.80 ± 2.20; PC 1.4 ± 0.54) e 30% (PI 14 ± 4.35; PC: 2.66 ± 0.57) respectivamente e o vírus CVS produziu mortalidade de 45.00% (PI: 6.30 ± 0.67; PC: 1.5 ± 0.70), 70% (PI: 7.14 ± 1.34; PC 2.28 ± 1.25) e 30% (PI:10.00; PC:1) pelas vias mencionadas acima, com quadro clínico de paralisia. O isolado de L. ega mostrou diferenças na proporção de mortos e quadro clínico furioso quando comparado com o CVS nos dois modelos animais. Os resultados sugerem que o contato com os morcegos insetívoros infectados pelo vírus da raiva representa um risco de transmissão da doença, por meio de ferimentos superficiais da pele provocadas pelas mordeduras ou ainda pela via respiratória, supostamente por meio de aerossóis. Pelo sequenciamento completo da proteína G viral do isolado do L. ega, foram observadas substituições na seqüência de aminoácidos nos sítios antigênicos AI, AII, assim como no domínio de fusão dependente de baixo pH. Os resultados obtidos, sugerem que as diferenças no comportamento biológico podem estar associadas às substituições encontradas na sequencia de aminoácidos da proteína G

The isolation of rabies virus (genotype 1) from the non-hematophagous bats is becoming frequent in heavy urbanized areas in Brazil. This work intended to investigate the pathogenicity of a Brazilian rabies virus isolate from the insectivorous bat Lassiurus ega, from PresidentePrudente-SP, comparing with the CVS/32 (Challenge Virus Standard) fixed rabies virus strain. The viruses were reactivated through intracerebral inoculation into mice and the pathogenicity experiments were made in hamsters and mice, challenged by intramuscular (IM), intradermal (ID) and intranasal (IN) routes and by superficial abrasion of skin. The presence of virus in the brain of animals manifesting the signs compatible with rabies was confirmed by the direct immunofluorescence test. For the evaluation of the pathogenicity, the clinical manifestations, incubation (IP) and clinical (CP) periods in days and the mortality were considered. In hamsters, the isolate of L. ega exhibited a furious form of rabies with total mortality rate of 2.60%, with following distribution: 2.08% IM (IP: 11 days; CP: 6 days) and 8.33% IN (IP: 10.66 ± 1.15 and PC: 7.33 ± 1.54). The presence of rabies virus in the CNS was detected only in animals inoculated through IM and IN routes. The CVS strain has provoked paralytic disease with a total mortality rate of 39.84% as the follow: 62.50% IM (IP 7.50 ± 2.33; CP: 5.13 ± 1.89), 78.12% ID (IP 9.13 ± 2.23; CP 3.88 ± 2.23) and 18.75% IN (IP 12.00 ± 2.77; CP 7.14 ± 2.54). In mice, the isolate of L. ega manifested signs of aggressiveness and rabies was confirmed in animals that were inoculated intramuscularly and intranasally. The total mortality rate observed in mice was 20%, by the IM route was 50% (IP 16.80 ± 2.20; CP 1.4 ± 0.54) and 30% by the intranasal route (IP 14.00 ± 4.35; CP: 2.66 ± 0.57) respectively. The CVS strain showed a total mortality rate of 45.00% and by the IM route, 100% (PI: 6.30 ± 0.67; CP: 1.5 ± 0.70), by the ID route, 70% (IP: 7.14 ± 1.34; CP 2.28 ± 1.25) and by IN, 30% (IP: 10, 00; C: 1.00) showing signs of paralysis. Compared to the CVS strain, the isolate of L. ega showed difference in mortality rate and signs of aggressiveness were found both in hamster and mouse model. The results suggest that the contact with the insectivorous bats infected with rabies virus would represent a risk of disease transmission, by means of superficial wounds of the skin inflicted by bites or by inhalation of aerosols. By the complete sequencing of the viral G protein of the isolate of L. ega, sequencings of amino acids substitutions were observed at antigenic sites AI, AII, as well as the in domain of fusion dependent on low pH. According to the results, differences in the biological behavior may be associated to the substitutions found in the amino acids sequence of the G protein

Técnica para obtenção do aparelho geniturinário e dosagem do PSA (Prostate Specific Antigen) no hamster sírio, Mesocricetus auratus

Purpose: To explain the available technique in collecting blood for PSA (Prostate Specific Antigen) dosing and the genitourinary system extracting from Syrian Hamster, Mesocricetus auratus, and correspond PSA findings to anexed sexual histologic changes. Methods: Thirty (n=30) Hamsters were used in the experiment: ten (n=10) animals were on the average age of 47,5 days on the decease mourent, being qualified as young and twenty ( n=20) animals over the age of one year were qualified as adults. After being under chetamina cloridate and diazepam anesthesia, on the superior abdomen level, c. 1,5mL to 2,0mL of blood were collected for total PSA dosing though ELISA method, with human antigen. They died after blood extracting. After verifying the animal death, laparatomy was carried out, extracting in complete monoblock the genitourinary system for a histologic study of sexual anexes. A PSA correlation was set with the found histologic changes. Results: An excellent anesthesian plan was obtained after shooting chetamina cloridate and diazepam intraperitoneum on the animals, that made possible to collect blood through the cava vein trans-derm via to the superior abdomen for the PSA dosing. The animal died after blood collecting. Laparatomy was carried out with the complete monoblock extracting of the genitourinary system for a histologic study of sexual anexes and found changes to dosed PSA. Among young Hamsters the PSA found level was 0,252ng/mL, Pattern change (PC) = 0,36. Among adult Hamsters, the average was 0,325ng/mL, (PC)=0,12. When comparing these PSA averages between the young and adult groups, the obtained result was p= 0.0427. Among young Hamsters, three of them presented PSA no detectable and young animals did not present histologic changes in their checked sexual annexes, among adult Hamsters, fourteen (70) of them presented change in their sexual annexes such as: ten (50%) present only PBH (Prostate Benign Hiperplasia), one (5%) prostatitis and seminal vesicle inflammation and PBH, one (5%) seminal vesicle suppurative inflammation, one (5%) seminal vesicle inflammation and one (5%) presented testicle infarct and prostatitis. Conclusion: The depicted surgical technique has shown to be efficient in obtaining the genitourinary system with its organs and structures, even for a histologic study of those organs and PSA dosing in Syrian Hamster, Mesocricetus auratus.

Objetivo: Expor a técnica utilizada na colheita de sangue para dosagem do PSA ( Prostate Specific Antigen ) e retirada do aparelho geniturinário no hamster sírio, Mesocricetus auratus, e correlacionar os achados do PSA com as alterações histológicas dos anexos sexuais desse roedor. Métodos: Foram usados no experimento trinta (n= 30) Hamsters: dez (n=10) animais considerados jovens com idade média no momento da morte de 47,5 dias e vinte (n=20) animais considerados adultos com idade superior à um ano. Após serem anestesiados com cloridrato de quetamina e diazepam, foi colhido diretamente da veia cava, em nível de abdome superior, cerca de 1,5mL a 2,0mL de sangue para dosagem do PSA totalpelo método ELISA, com antígeno humano. Morriam após colheita do sangue. Constatado a morte do animal, fazia-se a laparotomia retirando-se em monobloco todo aparelho geniturinário para estudo histológico dos anexos sexuais. Correlacionou-se o PSA com as alterações histológicas encontradas. Resultados: Os animais após serem anestesiados com cloridrato de quetamina e diazepam intraperitonealmente, obteve-se um excelente plano anestésico, que possibilitou colher via trans-dérmica da veia cava inferior em abdome superior sangue para dosagem do PSA. O animal morria após colheita do sangue. Fazia-se a laparotomia, com retirada em monobloco do aparelho geniturinário para estudo histológico e comparação das alterações encontradas nos anexos sexuais com o PSA dosado. Entre os Hamsters Jovens a média do PSA encontrado foi de 0,252ng/mL. Desvio Padrão (DP) = 0,36. Entre os Hamsters adultos esta média foi de 0,325 ng/mL, DP= 0,12 . Quando comparou-se as médias do PSA entre os dois grupos de jovens e adultos obteve-se p= 0,0427. Dentre os Hamsters jovens, três apresentaram PSA não detectado. A análise histológica mostrou que, entre os animais jovens, não foi identificada qualquer alteração das estruturas microscópicas da próstata, vesículas seminais e testículos. Observou-se nos Hamsters adultos (n=20), setenta por cento de alterações nos anexos sexuais a saber: um caso (5%) de processo supurativo das vesículas seminais, um caso (5%) de processo inflamatório isolado das vesículas seminais, um caso (5%) de Processo inflamatório das vesículas seminais, HBP e prostatite concomitante e um caso (5%) de infarto testicular e prostatite. Onze animais (55%), dos Hamsters adultos, apresentaram HBP (Hiperplasia Benigna da Próstata). Conclusão: A técnica cirúrgica descrita mostrou-se eficiente para a obtenção dos orgãos e estruturas do aparelho geniturinário, estudo histológico desses orgãos e dosagem do PSA no Hamster Sírio, Mesocricetus auratus.

Mixossarcoma cutâneo em um Hamster Sírio / Cutaneous myxosarcoma in a Syrian hamster (Mesocricetus auratus)

São descritos os achados anatomopatológicos de um caso de mixossarcoma cutâneo em um Hamster Sírio de 2 anos de idade. Macroscopicamente, foi evidenciada um grande massa cutânea na região cervical lateral direita. A microscopia revelou a presença de um caso de mixossarcoma caracterizado por células fusiformes pleomórficas, frouxamente arranjadas, distribuídas aleatoriamente e, apresentando quantidade moderada de substância basofílica amorfa no estroma e áreas hemorrágicas. O estroma basofílico amorfo foi positivo na coloração Alcian blue, confirmando a presença de matriz mucopolissacarídea. Na imunoistoquímica, as células neoplásicas expressaram vimentina e foram negativas para a marcação de citoqueratina e proteína ácida fibrilar (GFAP).

The pathological findings in a 2-years-old Syrian hamster (Mesocricetus auratus) with a cutaneous myxosarcoma are described. Grossly, there was a large cutaneous mass in the right cervical region. Microscopical evaluation revealed a myxosarcoma characterized by pleomorphic, fusiform cells loosely arranged, randomly distributed, and presenting a moderate amount of basophilic amorphous stroma. There were hemorrhagic areas within the tumor. The basophilic amorphous stroma was positive to Alcian blue confirming the presence of a mucopolysaccharide matrix. Immunohistochemically, the neoplastic cells expressed vimentin, and were negative for cytokeratin or glial fibrillary acidic protein (GFAP).

Mixossarcoma cutâneo em um Hamster Sírio / Cutaneous myxosarcoma in a Syrian hamster (Mesocricetus auratus)

São descritos os achados anatomopatológicos de um caso de mixossarcoma cutâneo em um Hamster Sírio de 2 anos de idade. Macroscopicamente, foi evidenciada um grande massa cutânea na região cervical lateral direita. A microscopia revelou a presença de um caso de mixossarcoma caracterizado por células fusiformes pleomórficas, frouxamente arranjadas, distribuídas aleatoriamente e, apresentando quantidade moderada de substância basofílica amorfa no estroma e áreas hemorrágicas. O estroma basofílico amorfo foi positivo na coloração Alcian blue, confirmando a presença de matriz mucopolissacarídea. Na imunoistoquímica, as células neoplásicas expressaram vimentina e foram negativas para a marcação de citoqueratina e proteína ácida fibrilar (GFAP).

The pathological findings in a 2-years-old Syrian hamster (Mesocricetus auratus) with a cutaneous myxosarcoma are described. Grossly, there was a large cutaneous mass in the right cervical region. Microscopical evaluation revealed a myxosarcoma characterized by pleomorphic, fusiform cells loosely arranged, randomly distributed, and presenting a moderate amount of basophilic amorphous stroma. There were hemorrhagic areas within the tumor. The basophilic amorphous stroma was positive to Alcian blue confirming the presence of a mucopolysaccharide matrix. Immunohistochemically, the neoplastic cells expressed vimentin, and were negative for cytokeratin or glial fibrillary acidic protein (GFAP).

Estabelecimento da leptospirose por infecção experimental em hamsters (Mesocricetus auratus) com Leptospira interrogans sorovar Canicola, estirpe LO4, pela exposição cutânea íntegra e com abrasões e seu potencial de transmissão ambiental / Establishment of leptospirosis by experimental infection in hamsters (Mesocricetus auratus) with Leptospira interrogans serovar Canicola, strain LO4, by intact and scratched skin exposures and its potential for environmental transmission

O estabelecimento e a evolução da leptospirose em hamster (Mesocricetus auratus) pela infecção experimental com Leptospira interrogans sorovar Canicola, estirpe LO4, pela exposição cutânea íntegra e escarificada, tendo como controle a via intraperitoneal foram avaliados, bem como o efeito da freqüência de exposições e da concentração do inóculo infectante quanto ao estabelecimento da doença e do portador renal e/ou genital, o potencial de transmissão e disseminação ambiental entre hamsters doentes e saudáveis com pele íntegra e escarificada e a resposta humoral induzida pela infecção experimental e exposição ambiental. O experimento foi conduzido em duas fases. No experimento 1, foram utilizados 130 hamsters fêmeas divididos em 12 grupos de acordo com a concentração do inóculo infectante (30 e 100 leptospiras/campo), a freqüência de exposição (uma, duas e quatro exposições) e a via de inoculação (pele escarificada e pele íntegra). No experimento 2, foram formados dois grupos de 10 animais, separados em caixas de polipropileno: animais sadios com escarificação cutânea (G1); e animais sadios com pele íntegra (G2). Nas caixas de ambos os grupos foi introduzido um hamster previamente infectado com Leptospira interrogans sorovar Canicola, estirpe LO4, por escarificação cutânea na dose de 100 leptospiras/campo. As condições de umidade foram mantidas por borrifações diárias (duas vezes ao dia) com água, por um período de 21 dias. Em ambas as fases, os animais foram observados duas vezes ao dia, durante 21 dias. Os animais que vieram a óbito foram necropsiados e colhidos assepticamente rins, fígado, sistema genital (útero e ovário) e cérebro. Os animais sobreviventes foram eutanasiados após 21 dias. Foram ainda colhidas amostras de soro sanguíneo por punção cardíaca para a pesquisa de aglutininas antileptospiras nos animais sobreviventes. Para a detecção de leptospiras, foram utilizados microscopia direta a fresco, cultivo microbiológico e coloração pelo método de Whartin-Starry. Para a observação das alterações patológicas dos órgãos foi utilizada a coloração por Hematoxilina-Eosina. O teste de soroaglutinação microscópica (SAM) foi utilizado para a detecção de aglutininas antileptospiras. As técnicas de microscopia direta e o cultivo microbiológico foram eficientes na identificação de leptospiras nos órgãos de hamsters inoculados com o sorovar Canicola, estirpe LO4. A via cutânea escarificada induziu maior letalidade quando comparada com a pele integra nas duas concentrações do inóculo infectante, com estabelecimento e evolução da leptospirose com lesões típicas da doença; por outro lado, a via cutânea íntegra induziu mais freqüentemente o estado de portador renal e/ou genital para leptospirose. A freqüência de exposição e a concentração do inóculo infectante não influenciaram no estado de portador renal e/ou genital ou mesmo na presença de leptospiras no tecido cerebral nas duas condições cutâneas empregadas na infecção experimental. A estirpe LO4 apresentou baixo poder imunogênico, não apresentando soroconversão na SAM, em ambas as condições de inoculação cutânea. Foi possível a transmissão da bactéria entre hamsters pela exposição ao ambiente contaminado

The establishment and evolution of leptospirosis in hamster (Mesocricetus auratus) by experimental infection with Leptospira interrogans serovar Canicola, strain LO4, by intact and scratched skin exposures, having as control the intraperitoneal route, were evaluated, as well as the effect of the frequency of exposures and concentration of the infectant inoculum regarding the establishment of the disease and the renal and/or genital carrier states, the potential of environmental transmission and spread among diseased and healthy hamsters with intact and scratched skin and the humoral response induced by experimental infection and environmental exposure. The experiment was conducted in two phases. In the experiment 1, 130 female hamsters were distributed in 12 groups according to concentration of the infectant inoculum (30 and 100 leptospires/microscopic field), frequency of exposure (one, two and four exposures) and inoculation route (intact and scratched skin). In the experiment 2, two groups of 10 animals were allocated in polypropylene boxes: healthy animals with scratched skin (G1); and healthy animals with intact skin (G2). A hamster previously infected with Leptospira interrogans serovar Canicola, strain LO4, by cutaneous scratch at a concentration of 100 leptospires/microscopic field was introduced inside the boxes. The humidity terms were kept by daily aspersions (twice in a day) with water, by a period of 21 days. In both phases, animals were observed twice in a day during 21 days. Animals that died were necropsied and kidneys, liver, genital tract (uterus and ovaries) and brain were aseptically collected. On the 21st post-inoculation day, surviving animals were euthanized. In these animals, serum samples were also collected by cardiac puncture to antileptospires agglutinins research. Fresh direct microscopy, microbiological culture and Whartin-Starry staining method were used for the detection of leptospires. For the observation of pathological changes in organs, Hematoxilin-Eosin staining method was used. Microscopic agglutination test (MAT) was carried out to the detection of anti-leptospires agglutinins. Direct microscopy and microbiological culture were efficient in the identification of leptospires in organs from hamsters inoculated with serovar Canicola, strain LO4. Scratched skin route induced larger lethality when compared to intact skin route at the two concentrations of the infectant inoculum, with establishment and evolution of leptospirosis with typical lesions of the disease; on the other hand, intact skin route induced renal and/or genital carrier state more frequently. The frequency of exposure and the concentration of the infectant inoculums had no influence in the renal and/or genital carrier state, as well as in the presence of leptospires in brain tissue in the two cutaneous routes employed to experimental infection. LO4 strain presented low immunogenic power, characterized by no soroconversion at the MAT in both cutaneous routes. The transmission of the bacterium among hamsters by exposure to contaminated environment was possible

Investigation on the presence of leptospires in ovaries of hamsters experimentally infected whith Leptospiras interrogans serovar pomona / Investigação sobre a presença de leptospiras nos ovários de hamsters experimentalmente infectados com Leptospiras interrogans sorotipo pomona

After inoculating L. interrogans serovar pomona in 75 primiparous hamsters (Mesocricetus auratus), the invasiveness of leptospires into lhe ovaries and lhe ability in causing ovary morphologic alterations were investigated by means of microscopic examination and bacterial isolation. For this purpose, 75 hamsters were inoculated with 0.5 ml of virulent strain containing 30-40 leptospires by the microscopic field and the other 15 hamsters were held as the uninfected controls. Signs and symptoms (prostration, tachypnea, rufled hair, jaundice, and nasal, bucal and perineal hemorrage) were detected in all inoculated animals. The animals were killed in the agonic state of the illness, which were done through 4th and 7th day post inoculation. The ovaries were taken asseptically during the necropsies, thoroughly washed using the sterile phosphate buffered saline, in order to eliminate the possible external contamination. The fresh ovary samples were submitted to the dark field direct microscopic examination. After the formalin fixation, the specimens were stained by means of histopathologic techniques using the Levaditi and Hematoxylin Eosin stains. The ovary smears were also examined by the direct fluorescent antibody technique andlhe bacterial isolation was carried out in the Fletchers medium. The dark field direct microscopic examination was found tobe less sensitive in demonstrati

De 90 hamsters primíparas com 80 a 120 gramas de peso vivo, 75 foram inoculadas com a dose individual de 0,5 ml de estirpe virulenta do sorotipo pomona (30 a 40 leptospiras ativas por campo microscópico, no aumento de 200 vezes) e as 15 remanescentes constituíram o grupo testemunho não infectado. Todos os animais tratados com leptospiras apresentaram os sinais da infecção (prostração, taquipnéia, eriçamento do pelame, icterícia e hemorragias nasal, bucal e perineal) e foram sacrificados por ocasião da fase agônica da doença, situada entre o quarto e o sétimo dia da inoculação. Nesta oportunidade, os ovários foram colhidos em condições assépticas e submetidos à técnica de visualização de leptospiras (exame direto em microscopia de campo escuro, coloração argêntica de Levaditi e reação de imunofluorescência direta), cultivo em meio de Fletcher e exame histopatológico (coloração de hematoxilina e eosina). A ocorrência de uma possível contaminação estabelecida durante a retirada dos ovários foi investigada através da lavagem em solução salina tamponada estéril. As leptospiras foram demonstradas em todos os ovários do grupo de animais experimentalmente inoculados (lavados e não lavados), através da coloração de Levaditi, reação imunofluorescência direta e também no cultivo em meio de Fletcher. O exame direto em microscopia de campo escuro mostrou ser uma técnica muito pouco sensível