Effectiveness of tes-tris or tris association with low density lipoprotein on in vitro longevity of refrigerated buffalo semen / Eficácia da associação TES-TRIS ou TRIS com lipoproteína de baixa densidade sobre a longevidade in vitro de sêmen refrigerado de búfalos

This study investigated in vitro the efficacy of four different extenders (TES-TRIS and TRIS with LDL low-density lipoprotein at concentrations of 10 or 5%) on the longevity of buffalo sperm in the refrigeration process at 5ºC. Sperm motility was assessed every 24 hours up to 72 hours of incubation using computer assisted sperm analysis and sperm membrane integrity was examined by the hypoosmotic test (HOST) at T1, T24, T48 and T72 hours. Eleven buffaloes (1 ejaculate per buffalo) of the Murrah breed were used, ranging in age from 4 to 5 years. Immediately after collection, each ejaculate was fractionated into 4 aliquots, and each aliquot was diluted in one of four diluents to obtain 50x106SPTZ/mL. The samples were packed in 0.5mL straws and refrigerated (-0.25°C/min) to 5°C and maintained at this temperature until evaluation. Prior to evaluation the samples were heated at 37°C for 30 seconds. The statistical package used for analysis was STATA 12.0 "Statistical Analysis Software" and means were compared by the Friedman test (P<0.05). The results of sperm kinetics and HOST indicate that the TRIS diluent with 10% LDL could be a promising alternative for semen refrigeration at 5ºC, to be used in conventional and fixed time artificial insemination.(AU)

Este estudo investigou in vitro a eficácia de quatro diferentes extensores (TES-TRIS e TRIS com lipoproteína de baixa densidade - LDL, nas concentrações de 10 ou 5%) sobre a longevidade espermática de búfalos no processo de refrigeração a 5ºC. A motilidade espermática foi avaliada a cada 24 horas até 72 horas de incubação, por sistema computadorizado "CASA", e a integridade de membrana espermática foi examinada pelo teste hiposmótico (HOST) em T1, T24, T48 e T72 horas. Foram utilizados 11 búfalos (um ejaculado por búfalo) da raça Murrah, com idade variando de quatro a cinco anos. Imediatamente após a coleta, cada ejaculado foi fracionado em quatro alíquotas, e cada alíquota foi diluída em um dos quatro diluidores para a obtenção de 50x106 SPTZ/mL. As amostras foram envasadas em palhetas de 0,5 mL, refrigeradas (-0,25oC/minuto) até 5oC e mantidas nessa temperatura até a avaliação. Previamente à avaliação, as amostras foram aquecidas a 37oC por 30 segundos. O pacote estatístico utilizado para as análises foi o STATA 12.0 "Statistical Analysis Software", e as médias foram comparadas pelo teste de Friedman (P<0,05). Os resultados de cinética e HOST até o tempo de 48 horas indicam que o diluidor TRIS com 10% LDL seria uma alternativa promissora para a refrigeração do sêmen a 5ºC, a ser utilizado na inseminação artificial e na inseminação artificial em tempo fixo.(AU)

Effectiveness of tes-tris or tris association with low density lipoprotein on in vitro longevity of refrigerated buffalo semen / Eficácia da associação TES-TRIS ou TRIS com lipoproteína de baixa densidade sobre a longevidade in vitro de sêmen refrigerado de búfalos

This study investigated in vitro the efficacy of four different extenders (TES-TRIS and TRIS with LDL low-density lipoprotein at concentrations of 10 or 5%) on the longevity of buffalo sperm in the refrigeration process at 5ºC. Sperm motility was assessed every 24 hours up to 72 hours of incubation using computer assisted sperm analysis and sperm membrane integrity was examined by the hypoosmotic test (HOST) at T1, T24, T48 and T72 hours. Eleven buffaloes (1 ejaculate per buffalo) of the Murrah breed were used, ranging in age from 4 to 5 years. Immediately after collection, each ejaculate was fractionated into 4 aliquots, and each aliquot was diluted in one of four diluents to obtain 50x106SPTZ/mL. The samples were packed in 0.5mL straws and refrigerated (-0.25°C/min) to 5°C and maintained at this temperature until evaluation. Prior to evaluation the samples were heated at 37°C for 30 seconds. The statistical package used for analysis was STATA 12.0 "Statistical Analysis Software" and means were compared by the Friedman test (P<0.05). The results of sperm kinetics and HOST indicate that the TRIS diluent with 10% LDL could be a promising alternative for semen refrigeration at 5ºC, to be used in conventional and fixed time artificial insemination.(AU)

Este estudo investigou in vitro a eficácia de quatro diferentes extensores (TES-TRIS e TRIS com lipoproteína de baixa densidade - LDL, nas concentrações de 10 ou 5%) sobre a longevidade espermática de búfalos no processo de refrigeração a 5ºC. A motilidade espermática foi avaliada a cada 24 horas até 72 horas de incubação, por sistema computadorizado "CASA", e a integridade de membrana espermática foi examinada pelo teste hiposmótico (HOST) em T1, T24, T48 e T72 horas. Foram utilizados 11 búfalos (um ejaculado por búfalo) da raça Murrah, com idade variando de quatro a cinco anos. Imediatamente após a coleta, cada ejaculado foi fracionado em quatro alíquotas, e cada alíquota foi diluída em um dos quatro diluidores para a obtenção de 50x106 SPTZ/mL. As amostras foram envasadas em palhetas de 0,5 mL, refrigeradas (-0,25oC/minuto) até 5oC e mantidas nessa temperatura até a avaliação. Previamente à avaliação, as amostras foram aquecidas a 37oC por 30 segundos. O pacote estatístico utilizado para as análises foi o STATA 12.0 "Statistical Analysis Software", e as médias foram comparadas pelo teste de Friedman (P<0,05). Os resultados de cinética e HOST até o tempo de 48 horas indicam que o diluidor TRIS com 10% LDL seria uma alternativa promissora para a refrigeração do sêmen a 5ºC, a ser utilizado na inseminação artificial e na inseminação artificial em tempo fixo.(AU)

Parâmetros metabólicos, inflamatórios e de saciedade de gatos obesos alimentados com dieta com adição de beta-glucanos

RISOLIA, L.W. Parâmetros metabólicos, inflamatórios e de saciedade de gatos obesos alimentados com dieta com adição de beta-glucanos. 2021. 104 f. Tese (Doutorado em Ciências) Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade de São Paulo, São Paulo, 2021. Beta-glucanos são polissacarídeos que podem melhorar diversas alterações metabólicas e de saciedade consequentes à obesidade. O objetivo do presente estudo foi avaliar os efeitos da inclusão de 0,06% de beta-glucanos na dieta de gatos obesos em parâmetros do metabolismo de carboidratos e lipídeos, indicadores de resistência insulínica, citocinas inflamatórias, parâmetros de saciedade e coeficiente de digestibilidade aparente (CDA) dos nutrientes. Nove gatos diagnosticados com obesidade não-induzida [(grupo obeso OB) escore de condição corporal (ECC) 8-9 /9] e nove gatos não obesos [(Grupo controle CO) ECC 5/9] foram alimentados por 15 dias (T0) com a dieta controle (0,0% de beta-glucanos) e depois por 90 dias (T90) com a dieta teste (0,06% de beta-glucanos). Amostras de sangue foram coletadas em T0 e T90 para avaliação do índice HOMA (insulina basal x glicemia basal/22,5), concentrações plasmáticas de triglicerídeos, colesterol e lipoproteínas (por método enzimático-colorimétrico e cromatografia líquida para separação rápida de proteínas FPLC), anandamida (por ELISA), frutosamina (por ensaio colorimétrico cinético), amilina, interleucina 10 (IL-10), grelina e peptídeo semelhante ao glucagon 1 (GLP-1) (por reação em cadeia de polimerase em tempo real quantitativo). A composição corporal também foi avaliada no início e final do estudo pelo método de diluição de isótopos de deutério. Foram utilizados sete gatos do centro de pesquisa para a determinação do CDA das dietas, pelo método de coleta total de fezes. Para avaliar a comparação entre os grupos e o efeito da dieta foi realizado teste de ANOVA com medidas repetidas no tempo. Quando houve diferença entre as médias foi realizado o teste de Tukey. Para a análise de consumo de beta-glucanos, digestibilidade e resultados da análise de expressão gênica, os dados foram analisados por análise de variância e, valores de P<0,05 foram considerados significativos. O grupo CO consumiu mais beta-glucanos do que o OB e em T90, foi observado aumento de massa muscular em CO e OB sem alteração da gordura corporal. Não houve diferença nas concentrações de frutosamina e anandamida entre os grupos antes e após o consumo da dieta Teste. O grupo OB apresentou maior concentração de colesterol e triglicerídeos em VLDL (%; mg/dL), maior índice HOMA e maior concentração de insulina do que o CO, independente da dieta. O grupo CO apresentou maior concentração de triglicérides em LDL (%; mg/dL) e em HDL (%), independente da dieta. Em T0, o grupo CO apresentou maior concentração de colesterol total (TCOL) do que o OB. Em T90, o grupo OB apresentou aumento de TCOL e em LDL (%; mg/dL) além de redução de colesterol em HDL. Não houve variação na expressão gênica de amilina, GLP-1, grelina e IL-10 entre os grupos. A inclusão de beta-glucano não alterou o CDA dos nutrientes após o consumo do alimento Teste pelos dois grupos. Concluise que com a dose utilizada no presente estudo, o consumo de beta-glucanos não proporciona melhora dos parâmetros do metabolismo de carboidratos, lipídeos, inflamação, saciedade e não altera o CDA dos nutrientes.

RISOLIA, L.W. Metabolic, inflammatory and satiety parameters of obese cats fed a diet with the addition of beta glucans. 2021. 104 f. Tese (Doutorado em Ciências) Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade de São Paulo, São Paulo, 2020. Beta-glucans are polysaccharides capable of improving many satiety and metabolic alterations related to obesity. The aim of the present study was to evaluate the effects of the addition of 0.06% of beta-glucans in the diet of obese cats in parameters of carbohidrates and lipids metabolism, insuin resistance indicators, pro-inflamatory citokines, satiety parameters and nutrients aparent digestibility coefficient (ADC). For that, nine client owned cats with non induced obesity [(obese group - OB) body condition score (BCS) 8-9/9] and nine client owned lean cats [(Control Group - CO) BCS 5/9] were fed for 15 days (T0) with a control diet (0,0% of beta-glucans) and then for 90 days (T90) with a test diet (0.06% of beta-glucans). Blood samples were collected at T0 and T90 in order to evaluate the HOMA index (basal insulin x basal glucose/22.5), triglycerides, cholesterol and lipoproteins (through enzymatic - colorimetric method and fast protein liquid chromatography - FLPC), anandamide (through ELISA), fructosamine (through kinetic colorimetric assay), amylin, interleukin 10 (IL-10), ghrelin and glucagon-like peptide-1 (GLP-1) (through quantitative real time polymerase chain reaction). The body composition was also evaluated at the beginning and at the end of the study through deuterium isotope dilution technique. The ADC test was carried out with 7 cats from the research center through total feces collection. In order to evaluate the comparison between the groups, a repeated measures ANOVA test was performed. When differences between the averages occurred, the Tukey test was run. For the beta-glucans consumption, digestibility and gene expression results analysis, the data were analyzed through the variance analysis. The CO group consumed more beta-glucans than the OB and at T90 it was observed muscle mass (MM) gain in CO and OB without any change in body fat. There wasn't any difference in fructosamine and anandamide between the groups before and after the consumption of the experimental diet. The OB group presented more cholesterol and triglycerides in VLDL (%; mg/dL), HOMA index and insulin than in CO, regardless of the diet. The CO group presented more triglycerides in LDL (%; mg/dL) and in HDL (%), regardless of the diet. At T0, the CO group had more total cholesterol than the OB group. At T90, the OB group showed an increase in total and LDL cholesterol (%; mg/dL) in addition to a reduction in HDL cholesterol. There was no variation in amylin, GLP-1, ghrelin and IL-10, nor in the nutrient CDA after consumption of beta-glucans. It is concluded that with the dose used in this study, the consumption of beta-glucans does not improve the parameters of carbohydrate metabolism, lipids, inflammation, satiety and does not change the ADC of nutrients.

Crioprotetor para sêmen de carneiro a base de plasma de gema mantém membrana acrossomal intacta após a descongelação / Ram semen cryoprotector based on egg yolk plasma maintain the viability of acrosomal membrane

O presente estudo teve como objetivo avaliar a capacidade crioprotetora das lipoproteínas de baixa densidade (LDL) presentes no plasma de gema de ovo, adicionado ao trihidroxiaminometano (TRIS) para congelar sêmen ovino. Trinta e seis ejaculados foram coletados para formar 12 "pool". Cada alíquota de sêmen foi diluída em TRIS-gema de ovo (TRISG) ou TRIS- plasma de gema de ovo (TRISP) antes de congelar o sêmen. Para a obtenção do plasma da gema de ovo, foi utilizado o método de ultracentrifugação. Após o descongelamento, não houve diferença entre os dois extensores em relação aos parâmetros seminais (motilidade, viabilidade, membrana acrossômica e plasma). No entanto, no Teste de Termo Resistência Lenta (TTRL - 4h/38°C), o sêmen congelado com TRISP resultou no aumento do número de espermatozoides com acrossoma intacto (P 0,032). Conclui-se que o diluente TRISP é uma alternativa para criopreservação do sêmen de carneiros, pois permite uma melhora da característica seminal em relação ao diluente TRIS gema, mas sem a necessidade do processo de purificação das LDL.(AU)

The present study aimed to evaluate the cryoprotectant low-density lipoprotein (LDL) present in the plasma of egg yolk added to the extender trihidroxiaminometano (TRIS) for freezing ram semen. Thirty-six ejaculates were collected to form 12 pool. Each aliquot of semen was diluted in TRIS-egg yolk (TRISG) or TRIS-egg yolk plasma (TRISP) before freezing the semen. The plasma of egg yolk was obtained by ultracentrifugation. After thawing, no difference was detected between the two extenders in relation to seminal parameters (motility, viability, plasma membrane and acrosome). However, in the thermal resistance slow test (4h in a water bath at 38°C), the semen frozen with TRISP resulted in higher number of sperm with intact acrosome than those with TRISG (P 0.032). It was concluded that the TRISP extender is an alternative for cryopreservation of ram semen, once it improves the semen characteristics in comparison to TRISG, avoiding the purification process of LDL.

Nanopartículas de lipoproteína de baixa densidade melhoram a criopreservação do sêmen canino

Estruturas na escala manométrica apresentam propriedades funcionais únicas, não encontradas na escala macro, devido principalmente à elevada área superficial de contato, que resulta em uma intensa interação com a matriz na qual as nanopartículas estão inseridas. Em diluentes de criopreservação seminal à base de gema de ovo, o principal componente crioprotetor é a lipoproteína de baixa densidade (LDL). A LDL possui propriedades que permitem a interação com as membranas espermáticas, diminuindo crioinjúrias. Contudo, a gema de ovo possui outros constituintes que são deletérios para os gametas. Neste contexto, a extração das micelas de LDL para congelamento seminal, através da fração plasmática da gema de ovo (EYP) vem demonstrando resultados promissores. Diante do exposto, este estudo objetivou avaliar diferentes protocolos de produção nanopartículas de LDL, sobre a qualidade do sêmen canino criopreservado. O plasma de gema de ovo (EYP) foi submetido à três sistemas: banho de ultrassom (LDL-B) - 30 min em 40 A; ponteira de ultrassom (LDL-P) - 50 % da amplitude, 30 min; homogeneização de alta pressão (LDL-P) - 10.000 PSI por 6 ciclos. Propriedades de diâmetro, índice de polidispersão (PDI) e potencial zeta foram avaliados. A qualidade espermática após o descongelamento foi mensurada através do computer-assisted sperm analysis (CASA) e citometria de fluxo. As nano técnicas aplicadas em EYP modificaram propriedades de diâmetro, PDI e potencial zeta das partículas de LDL. LDL-P caracterizou-se como um sistema monodisperso (PDI = 0,37) e estável, enquanto nos outros grupos experimentais foram obtidas soluções polidispersas. O processamento de EYP formou diluentes de congelamento mais eficazes no controle da produção de espécies reativas de oxigênio intracelular (P < 0,05). Os sistemas de ultrassom (LDL-B e LDL-P) produziram micelas capazes de manter a maior motilidade espermática total, após o descongelamento (P < 0,05). Comparado ao controle EYP, LDL-P foi mais eficiente na manutenção da motilidade espermática progressiva, integridade e fluidez de membrana (P < 0,05). A ultrassonicação por ponteira de ultrassom demostrou-se efetiva para a produção de nanopartículas de LDL para diluentes de congelamento seminal de cães. Meios de criopreservação com 249,34 nm de tamanho médio de partículas de LDL, PDI de 0,37, e potencial zeta de -1,15 mV foram relacionadas aos melhores parâmetros de qualidade espermática após o descongelamento.

Structures in the manometric scale have unique functional properties, not found in the macro scale, mainly due to their high contact surface area, which results in an intense interaction with the matrix in which they are inserted. In egg yolk-based seminal cryopreservation diluents, the main cryoprotective component is low density lipoprotein (LDL). LDL has properties that allow interaction with sperm membranes and decreases cryoinjury. However, the egg yolk has other constituents that are deleterious to the gametes. In this context, the extraction of LDL for seminal freezing through the egg yolk plasma fraction (EYP) has shown promising results. In view of the above, this study aimed to evaluate different protocols for the production of LDL nanoparticles, on the quality of cryopreserved canine semen. Egg yolk plasma (EYP) was submitted to three systems: ultrasonic bath (LDL-B) - 30 min at 40 A; Ultrasound tip (LDL-P) - 50 % of the amplitude for 30 min; high pressure homogenization (LDLP) - 10,000 PSI for 6 cycles. Properties of diameter, polydispersity index (PDI) and zeta potential were evaluated. Sperm quality after thawing was measured by computer-assisted sperm analysis (CASA) and flow cytometry. The nano techniques applied in EYP modified properties of diameter, PDI and zeta potential of LDL particles. LDL-P was characterized as a monodisperse (PDI = 0.37) and stable, while in the other experimental groups polydispersed solutions were obtained. EYP processing formed more efficient solutions to control the production of reactive oxygen species (P < 0.05). Ultrasound systems (LDL-B and LDL-P) produced diluents capable of maintaining the highest total sperm motility after thawing (P < 0.05). Compared to the EYP control, the LDL-P was more efficient in maintaining progressive sperm motility, membrane integrity and fluidity (P < 0.05). Ultrasonography by ultrasound tip has been shown to be effective for the production of LDL nanoparticles for seminal freezing diluents of dogs. Diluents of cryopreservation with 249.34 nm mean LDL particle size, PDI of 0.37, and zeta potential of -1.15 mV were related to the best parameters of sperm quality after thawing.

Efeito de diferentes métodos de congelamento, diluentes e tempos de resfriamento sobre a qualidade do sêmen suíno criopreservado / Effect of different freezing methods, extenders and duration of freezing on quality of frozen boar semen

Artificial inseminations in swine are conducted with liquid semen cooled at 15 to 18ºC for 1 to 5 d. Frozen semen in not routinely used due to its poor reproductive performance in comparison with cooled semen. In semen freezing protocols, egg yolk is added to extenders to protect the sperm membrane against cold shock. The cryoprotectant effect of egg yolk is attributed to the presence of low density lipoprotein (LDL) in its composition. Thus, replacement of egg yolk by LDL in the composition of extenders may be feasible to reduce cryoinjuries in sperm cells due to cold shock. During the process of sperm freezing the cell receive structural and functional injuries that could impair the fertilization process. Two experiments were conducted to evaluate the effect of freezing method, extenders and duration of the freezing process.[...]

Efeito de diferentes métodos de congelamento, diluentes e tempos de resfriamento sobre a qualidade do sêmen suíno criopreservado / Effect of different freezing methods, extenders and duration of freezing on quality of frozen boar semen

Artificial inseminations in swine are conducted with liquid semen cooled at 15 to 18ºC for 1 to 5 d. Frozen semen in not routinely used due to its poor reproductive performance in comparison with cooled semen. In semen freezing protocols, egg yolk is added to extenders to protect the sperm membrane against cold shock. The cryoprotectant effect of egg yolk is attributed to the presence of low density lipoprotein (LDL) in its composition. Thus, replacement of egg yolk by LDL in the composition of extenders may be feasible to reduce cryoinjuries in sperm cells due to cold shock. During the process of sperm freezing the cell receive structural and functional injuries that could impair the fertilization process. Two experiments were conducted to evaluate the effect of freezing method, extenders and duration of the freezing process.[...](AU)

OTIMIZAÇÃO DE PROTOCOLOS DE CRIOPRESERVAÇÃO DO SÊMEN DE CATETOS (Pecari tajacu LINNEAUS, 1758)

A presente tese teve como objetivo aperfeiçoar protocolos de criopreservação de sêmen de catetos (Pecari tajacu). Para tanto, foram utilizados animais adultos oriundos do Centro de Multiplicação de Animais Silvestres (CEMAS) da Universidade Federal Rural do Semi-Árido (UFERSA), cujo sêmen foi coletado por eletroejaculação e imediatamente avaliado. O primeiro experimento objetivou avaliar o efeito da lipoproteína de baixa densidade (LDL) purificada, em relação à gema de ovo (G) e determinar a concentração ideal (20%, 10% e 5%) para criopreservação de sêmen em catetos. Após a análise dos dados verificou-se que a LDL (20%) pode ser utilizada em substituição à gema de ovo, tendo sido verificados 36.4±5.3% e 21.8±6.9 de motilidade espermática total após a descongelação, respectivamente. No segundo experimento, avaliou-se a ação do gel de Aloe vera (AV) tanto na refrigeração quanto na congelação do sêmen de catetos, em diferentes concentrações (20%, 10%, 5%) ou associado à gema de ovo (10%:10%). Verificou-se que o gel de Aloe vera (20%) se mostrou eficiente para a refrigeração a 5°C, mantendo a longevidade espermática por até 48 horas de avaliação apresentando uma motilidade total de 54.2±21.3%; quanto ao processo de criopreservação, verificou-se que o uso de Aloe vera a 20% pode substituir a gema de ovo, porém a associação desta com a gema promoveram a melhor preservação da viabilidade (32.7±2.3%), resposta osmótica (37.8±4.2%) e integridade de membrana (40.2±3.1). No terceiro experimento verificou-se a ação da adição (0,5% e 1,0%) do detergente a base de dodecil sulfato de sódio (SDS), Equex®STM, no sêmen de catetos. Entretanto, observou-se que este, em nenhuma concentração proposta, foi eficiente em aumentar a longevidade da célula espérmática de catetos além dos 15 minutos, conforme previamente descrito para a espécie. Os experimentos realizados foram suficientes a responder as hipóteses propostas, sendo úteis para o aperfeiçoamento de protocolos de criopreservação de sêmen de catetos (Pecari tajacu).

The present thesis had as objective optimized peccaries semen cryopreservation protocols (Pecari tajacu). Therefore, adult animals were used originated from the Multiplication Center of Wild Animals (CEMAS) of the Federal Rural University of the Semi-Arid (UFERSA), which semen was collected by electroejaculation and immediately evaluated. The first experiment aimed at evaluating the effect of low-density lipoprotein (LDL) purified in relation to egg yolk (G) and defines the ideal concentration (20%, 10% and 5%) for semen cryopreservation in peccaries. After the data analysis it was found that LDL (20%) can be used to replace egg yolk having been verified 36.4 ± 5.3 and 21.8 ± 6.9% of the total sperm motility after thawing, respectively. The second experiment evaluated the action of Aloe vera gel (AV) both refrigeration and in the peccaries of semen freezing in different concentrations (20%, 10%, 5%) or associated with egg yolk (10%:10%). It was found that Aloe vera gel (20%) proved to be efficient cooling at 5 ° C, maintaining the longevity of sperm for up to 48 hours of total motility assessment having a 54.2 ± 21.3%; as the cryopreservation process, it was found that the use of Aloe vera 20% can replace egg yolk, but its association with gem promoted better preservation of viability (32.7 ± 2.3%), osmotic response (37.8 ± 4.2%) and membrane integrity (40.2 ± 3.1). In the third experiment evaluated the addition of the action (0.5% and 1.0%) of base detergent sodium dodecyl sulfate (SDS), Equex®STM, the peccaries of semen. However, it was observed that, at any concentration proposal was effective in increasing the longevity of sperm cell peccaries over 15 minutes as previously described for the species. The experiments have been sufficient to answer the hypotheses and are useful for the improvement of semen cryopreservation protocols of collared peccary (Pecari tajacu).

Effect of pigpel extender on the boar semen quality stored at different temperatures / Efeito do diluente pigpel na qualidade do sêmen suíno refrigerado em diferentes temperaturas

This study aim to evaluate the quality of boar semen stored at different temperatures  and media on PIGPEL5 extender, using egg yolk as an external membrane protector, and on PIGPEL5Plus, containing low density lipoprotein (LDL) as protector. In the experiment 1, the semen doses were stored in a semen container at 5 and 17 C and the results were compared with semen stored at 17 C in BTS extender. In the experiment 2, the doses with the PIGPEL5 and PIGPEL5Plus extenders were stored in a commercial refrigerator and in semen container, both at 5 C. The use of extenders with extracellular cryoprotectant (PIGPEL5 e PIGPEL5Plus) showed higher (p 0.05) motility values in comparison to BTS until 48 h. Furthermore, the use of extracellular cryoprotectant was good to maintenance of membrane integrity and normal morphology at 5 oC similarly to 17 oC extenders. There was no difference (p > 0.05) in the motility, membrane integrity and morphology for the substitution of egg yolk (PIGPEL5) for LDL (PIGPEL5Plus). In experiment 2, also there was no difference (p > 0.05) in motility, membrane integrity and morphology between extenders and type of container until 72 h. The conservation of semen on PIGPEL5 extender and commercial refrigerator (5 ºC) allowed patterns of sperm quality according recommended for AI.

Este estudo avaliou a qualidade do sêmen suíno preservado em diferentes temperaturas e meios de conservação no diluente PIGPEL5, utilizando gema de ovo como protetor externo de membrana, e no diluente PIGPEL5Plus, utilizando lipoproteína de baixa densidade (LDL) como protetor. No experimento 1, as doses de sêmen foram conservadas em refrigerador de sêmen a 5 e 17 C nos diluentes PIGPEL5 e PIGPEL5Plus e comparadas ao diluente BTS a 17 C. Já no experimento 2, foi comparada a conservação do sêmen nos diluentes PIGPEL5 e PIGPEL5Plus em geladeira convencional ou em refrigerador de sêmen a 5 ºC. Observou-se que o uso de diluidores com crioprotetor extracelular (PIGPEL5 e PIGPEL5Plus) apresentou maiores (p 0,05) resultados de motilidade com relação ao BTS até 48 h. Além do mais, o uso de crioprotetor extracelular foi benéfico para a manutenção da integridade e morfologia normais a temperatura de 5 ºC em níveis similares aos diluidores a 17 ºC. Não houve diferença (p > 0,05) na motilidade, integridade de membrana e morfologia para a substituição da gema de ovo (PIGPEL5) pela LDL (PIGPEL5Plus). No experimento 2, também não houve diferença na motilidade, integridade de membrana e morfologia espermática entre os diluentes e formas de acondicionamento testados até 72 h (p > 0,05). O acondicionamento do sêmen no diluente PIGPEL5 em geladeira doméstica (5 ºC) proporcionou  padrõ

Effect of pigpel extender on the boar semen quality stored at different temperatures / Efeito do diluente pigpel na qualidade do sêmen suíno refrigerado em diferentes temperaturas

This study aim to evaluate the quality of boar semen stored at different temperatures  and media on PIGPEL5 extender, using egg yolk as an external membrane protector, and on PIGPEL5Plus, containing low density lipoprotein (LDL) as protector. In the experiment 1, the semen doses were stored in a semen container at 5 and 17 C and the results were compared with semen stored at 17 C in BTS extender. In the experiment 2, the doses with the PIGPEL5 and PIGPEL5Plus extenders were stored in a commercial refrigerator and in semen container, both at 5 C. The use of extenders with extracellular cryoprotectant (PIGPEL5 e PIGPEL5Plus) showed higher (p 0.05) motility values in comparison to BTS until 48 h. Furthermore, the use of extracellular cryoprotectant was good to maintenance of membrane integrity and normal morphology at 5 oC similarly to 17 oC extenders. There was no difference (p > 0.05) in the motility, membrane integrity and morphology for the substitution of egg yolk (PIGPEL5) for LDL (PIGPEL5Plus). In experiment 2, also there was no difference (p > 0.05) in motility, membrane integrity and morphology between extenders and type of container until 72 h. The conservation of semen on PIGPEL5 extender and commercial refrigerator (5 ºC) allowed patterns of sperm quality according recommended for AI.

Este estudo avaliou a qualidade do sêmen suíno preservado em diferentes temperaturas e meios de conservação no diluente PIGPEL5, utilizando gema de ovo como protetor externo de membrana, e no diluente PIGPEL5Plus, utilizando lipoproteína de baixa densidade (LDL) como protetor. No experimento 1, as doses de sêmen foram conservadas em refrigerador de sêmen a 5 e 17 C nos diluentes PIGPEL5 e PIGPEL5Plus e comparadas ao diluente BTS a 17 C. Já no experimento 2, foi comparada a conservação do sêmen nos diluentes PIGPEL5 e PIGPEL5Plus em geladeira convencional ou em refrigerador de sêmen a 5 ºC. Observou-se que o uso de diluidores com crioprotetor extracelular (PIGPEL5 e PIGPEL5Plus) apresentou maiores (p 0,05) resultados de motilidade com relação ao BTS até 48 h. Além do mais, o uso de crioprotetor extracelular foi benéfico para a manutenção da integridade e morfologia normais a temperatura de 5 ºC em níveis similares aos diluidores a 17 ºC. Não houve diferença (p > 0,05) na motilidade, integridade de membrana e morfologia para a substituição da gema de ovo (PIGPEL5) pela LDL (PIGPEL5Plus). No experimento 2, também não houve diferença na motilidade, integridade de membrana e morfologia espermática entre os diluentes e formas de acondicionamento testados até 72 h (p > 0,05). O acondicionamento do sêmen no diluente PIGPEL5 em geladeira doméstica (5 ºC) proporcionou  padrõ

Efeito da lipoproteína de baixa densidade sobre algumas características funcionais dos espermatozóides eqüinos criopreservados / Effect of low-density lipoprotein on some functional characteristics of cryopreserved equine spermatozoa

A gema do ovo é uma das principais substâncias usadas na composição dos diluentes de criopreservação do sêmen de eqüinos. Entretanto, a gema de ovo possui na sua composição substâncias indesejáveis, as quais podem interferir no processo de criopreservação. O efeito benéfico da gema de ovo é atribuído, principalmente, à lipoproteína de baixa densidade (LDL). Este trabalho teve como objetivo avaliar o efeito da substituição da gema de ovo integral do um diluente modificado de Martin et al. (1979), pela LDL em diferentes concentrações, sobre a Motilidade Total (MT), Velocidade de Trajeto (VAPμ/ms), Velocidade Curvilinear (VCLμ/ms), Velocidade Progressiva (VSLμ/ms) e o Choque Hiposmótico (CHIPO%). No experimento 1 (EXP1) foi utilizado o diluente modificado de Martin et al.,(1979) gema 20% como controle (T0), e LDL purificada nas concentrações de 8% (T1), 10% (T2) e 12% (T3). Sêmen de cinco garanhões da raça Puro Sangue Inglês foi utilizado, cujos ejaculados possuíam motilidade ≥ 70%, vigor ≥ 3 e patologias ≤ 30%, além de fertilidade conhecida. O sêmen foi colhido com o auxílio da vagina artificial modelo Hannover e, imediatamente, separado da porção de gel. O volume foi mensurado e o sêmen centrifugado a 800 x g/5min com o diluente G-EDTA, eliminando o plasma seminal. O pellet formado foi dividido em 4 porções iguais e adicionado aos 4 tratamentos (T0), (T1), (T2), (T3). A concentração de células espermáticas foi ajustada para 200 x 106 espermatozóides/ml. Para o acondicionamento do sêmen foram usadas palhetas francesas de 0,5ml. As palhetas foram colocadas em uma máquina de congelação (TK 3000), e a curva seguiu um padrão de resfriamento até 5C e, posteriormente, até -120C, onde foram colocadas diretamente no nitrogênio líquido. No experimento 2 (EXP2) foi utilizado sêmen de 3 garanhões da raça Crioula, utilizando os procedimentos do EXP1, entretanto, a centrifugação do sêmen foi realizada sem a adição no diluente G-EDTA e a concentração espermática foi de 50 x 106 espermatozóides/ml. No EXP2 foi utilizado o diluente modificado de Martin et al.(1979) (T0), e a LDL purificada na concentração de 8% no lugar da gema de ovo (T1). O descongelamento do sêmen foi realizado em banho-maria a 37C / 30s nos EXP1 e EXP2. No EXP1, as amostras foram submetidas à análise computadorizada (Computer-Assisted Semen Analysis - CASA), onde foram observadas a Motilidade Total (MT), Velocidade de Trajeto (VAPμ/ms), Velocidade Curvilinear (VCLμ/ms) e Velocidade Progressiva (VSLμ/ms). No EXP2 foram avaliadas a (MT) e o teste para avaliação da integridade de membrana, choque hiposmótico, (CHIPO). As variáveis respostas foram analisadas através do programa Statitix, utilizando a análise da variância com medidas repetidas e comparação de médias pela diferença mínima significante (LSD). No EXP1, as MT médias nos tratamentos T0 (23,3%), T1 (18,0%), T2 (15,1%) e T3 (16,9%), não diferiram (P>0,05). A VAP nos tratamentos T0 (86,0μ/ms) e T1 (81,5μ/ms) não diferiu (P>0,05). O T0 foi superior (P<0,05) aos tratamentos T2 (77,2μ/ms) e T3 (77,9μ/ms), entretanto, o T1, T2 e T3 foram iguais (P>0,05). A VCL nos tratamentos T0 (158,2μ/ms) e T1 (147,3μ/ms) não diferiu (P>0,05), entretanto, o T0 foi superior (P<0,05) aos tratamentos T2 (138,2/μms) e T3 (141,8/μms). A VSL nos tratamentos T0 (61,3 μ3/ms), T1 (60,6μ/ms), T2 (58,1μ/ms) e T3 (57,8μ/ms), não foi diferente (P>0,05). No EXP2 , MT média nos tratamentos T0 (35,5%) e T1 (48,8%) diferiu (P<0,05) sendo T1 superior a T0. O CHIPO nos tratamentos T0 (30,1%) e T1 (27,8%) não diferiu (P>0,05) sendo T0 igual a T1. Dessa forma, concluímos que a LDL na concentração de 8%, pode substituir a gema de ovo na composição do diluente modificado de Martin et al.(1979) utilizado para criopreservar sêmen eqüino

Egg yolk is one the main substances used in extenders for cryopreservation of equine semen. Its function is to reduce the cold shock caused by temperature variation during the freezing-thawing process. However, egg yolk contains substances that can have negative effects on cryopreservation and can also carry potentially patogenic substances. Benefits derived from the use of egg yolk are mainly attributed to the presence of low-density lipoproteins (LDL). LDL act either by incorporating their content of phopholipids and cholesterol to the spermatozoa plasma membrane or by their association with seminal plasma proteins, which prevents such proteins to phopholipids and cholesterol from the spermatozoa plasma membrane. Thus, LDL make spermatozoa plasma membrane more stable, reducing their sensitivity to cold shock. This study aimed to investigate the effects of the replacement of the egg yolk in a commercial extender by different concentrations of LDL on some functional characteristics of cryopreserved equine spermatozoa. In experiment 1 (EXP1), the control treatment was the Martin et al. (1979) extender (T0) whereas the LDL treatments had concentrations of 8% (T1), 10% (T2) and 12% (T3). We used semen from five thoroughbred stallions with known fertility presenting at least 70% of sperm motility, sperm vigor of 3 and at most 30% of morphological sperm abnormalities. Semen was collected with a Hannover artificial vagina and immediately separated from its gel portion. After measument of the volume, the semen was centrifugated at 800 g during 5 m with G-DETA extender to eliminate seminal plasma. The pellet was divided in 4 fractions, one for each treatment (T0), (T1), (T2), and (T3). Sperm cells concentration was adjusted to 200 x 106 per ml and place in to 0,5 ml straws. Straws were put in a TK 3000 freezing machine, with cooling at 5C, followed by reduction to -120C. After wards, straws were immersed in liquid Nitrogen. In Experiment 2 (EXP2), we used semen from 3 Crioulo bred stallions, and the same procedures used in EXP1, although semen centrifugation was done without G-EDTA and sperm concentration was adjusted to 50 x 106 spermatozoa/ml. In EXP 2, (T0) used the Martin et al. extender in the control group (T0) compared against its replacement by 8% LDL (T1). In both EXP1 and EXP2, thawing was done in water-bath at 37C during 30 s. In EXP1, semen samples were submitted to analysis through the Computer-Assisted Semen Analysis (CASA), with evaluation of: total Motility (MT); speed of trajectory in μ/ms (VAP); curvilinear speed in μ/ms (VCL); and progressive speed in μ/ms (VSL). In EXP2, the characteristics evaluated were MT and response to hypoosmotic swelling test (CHIPO). The dependent variables were submitted to repeated measures analysis of variance, with comparisons of means by LSD test. In EXP1, mean MT% did not differ (P > 0,05). among treatments: T0 (23,3%); T1 (18,0%); T2 (15,1%); and T3 (16,9%). VAP for T0 (86,0μ/ms) was higher (P < 0,05) than for T2 and T3 (77,2 and 77,9μ/ms, respectively), but did not differ (P > 0,05) from T1 (81,5μ/ms). However, VAP was similar for T1, T2 and T3 (P > 0,05). VCL did not differ (P > 0,05), for T0 (158,2μ/ms) and T1 (147,3μ/ms), but it was higher (P<0,05) for T0 than for T2 (138,2/μms) and T3 (141,8/μms). VSL did not differ (P > 0,05) across treatments: T0 (61,3 μ3/ms); T1 (60,6μ/ms); T2 (58,1μ/ms); and T3 (57,8μ/ms). In EXP2, MT in T1 (48,8%) was higher (P < 0,05) than in T0 (35,5%), although no differences (P > 0,05) were observed in the response to CHIPO: T0 (30,1%); and T1 (27,8%). Therefore, LDL at 8% can replace egg yolk in the composition of the Martin et al.(1979) extender for cryopreservation of equine semen, without detrimental effects for semen quality

Efeito dos diluentes pigpel-5 e pigpel-5 plus sobre a qualidade do sêmen suíno acondicionado à 5C e 17C / Effect of diluents pigpel-5 and pigpel-5 plus under the quality of swine semen packaged at 5C and 17C

A utilização de caixas acondicionadoras com termostato regulável faz-se necessária, quando se utilizam diluentes capazes de manter a qualidade das doses inseminantes entre 15 e 18C. Porém, é importante considerar que estas caixas apresentam um custo elevado e quando submetidas a grandes variações de temperatura ambiente, apresentam dificuldade em manter estável a temperatura interna na amplitude desejada. Além disso, a temperatura de estocagem do sêmen suíno entre 15 e 18C limita seu transporte, restringindo seu tempo de vida útil e permitindo o crescimento bacteriano. O objetivo deste estudo foi avaliar a qualidade do sêmen suíno acondicionado no diluente PIGPEL-5, em que se utilizou gema de ovo como crioprotetor e no diluente PIGPEL5 Plus, com lipoproteína de baixa densidade (LDL), extraída da gema do ovo, como crioprotetor. No experimento 1, as doses inseminantes foram armazenadas utilizando-se caixas acondicionadoras à 5C e 17C, comparando-se os resultados entre os diluentes PIGPEL-5 e PIGPEL5 Plus, e dos mesmos em relação ao diluente BTS, acondicionado à 17C, com o objetivo de comprovar a versatilidade dos diluentes em diferentes temperaturas de armazenamento. Os mesmos diluentes foram testados, no experimento 2, utilizando-se geladeira comercial e caixa acondicionadora de sêmen, ambas à 5C, objetivando comprovar a eficácia dos diluentes testados quando acondicionados em geladeiras sem controle rígido de temperatura. Em ambos experimentos foram realizados testes de motilidade, morfologia espermática e integridade funcional da membrana através do choque hiposmótico. No experimento 1, o diluente PIGPEL- 5 manteve a motilidade espermática, à 5C e à 17C, especialmente até 48 h de acondicionamento, não ocorrendo benefício com a adição de LDL. Quanto ao choque hiposmótico, o diluente PIGPEL5 Plus à 17C foi superior (P<0,05) nas 48h aos diluentes à 5C, e nas 72h foi superior (P<0,05) ao PIGPEL-5 à 17C e BTS. O percentual de espermatozóides com morfologia normal não diferiu (P>0,05) entre os diferentes diluentes, a partir das 0h de acondicionamento. Quanto ao uso de geladeira comercial (experimento 2), os resultados não diferiram entre os diluentes testados (P>0,05). Ficou demonstrada a eficácia do diluente PIGPEL-5 quando acondicionado à 5C e à 17C, com gema de ovo ou na substituição desta por LDL (PIGPEL5 Plus), mantendo a qualidade espermática nos testes de motilidade, morfologia espermática e integridade funcional da membrana. Ficou demonstrado ainda a possibilidade do seu uso, tanto em caixa acondicionadora quanto em geladeira comercial

The use of freezing packages with adjustable thermostat is necessary when we use diluents that are able to keep the quality of the inseminating doses between 15C and 18C. However, it is important to consider that these packages are expensive and when submitted to great variation of ambient temperature they present difficulty to keep the internal temperature in the desired amplitude. Besides this, the swine semen storage between 15C and 18C limits its transportation, constraining its useful lifetime and allowing bacterial growth. The goal of this study was to evaluate the quality of swine semen preserved in diluent PIGPEL-5, in which we added egg yolk as cryoprotectant and also to evaluate the quality of PIGPEL5 Plus, in which we added low density lipoprotein (LDL), extracted from egg yolk as cryoprotectant. In experiment 1 the inseminating doses were stored using freezing packages at 5C and 17C, to compare the results between diluents PIGPEL-5 and PIGPEL5 Plus, and these results related to extensor BTS, packaged at 17C in order to prove the versatility of the diluent in different storage temperatures. The same diluents were tested in experiment 2, using commercial fridge and semen freezing package, both at 5C, in order to prove the efficacy of the tested diluents when they are kept in fridges without severe control of temperature. In both experiments motility tests, sperm morphology and functional integrity of membrane through hypoosmotic shock were accomplished. In experiment 1, diluent PIGPEL-5 kept its sperm motility at 5C and at 17C, especially until 48h of packaging, not showing any benefit when LDL was added. As for hypoosmotic shock, the diluent PIGPEL5 Plus at 17C was superior (P<0,05) in the 48h than PIGPEL-5 at 17C and BTS. The percentage of sperms with normal morphology did not differ (P>0,05) between the different diluents as from 0h of packaging. As for the use of commercial fridge (experiment 2), the results did not differ between the tested diluents (P>0,05). The effectiveness of PIGPEL-5 when packaged at 5C and 17C with egg yolk (PIGPEL5 Plus) keeping the sperm quality in the motility tests, sperm morphology and functional integrity of the membrane was demonstrated. The possibility of its use both in freezing package and in commercial fridge was also demonstrated