Intra-articular concentration of gentamicin administered by intravenous regional limb perfusion in healthy horses / Concentração intra-articular de gentamicina administrada por perfusão regional intravenosa em membros de equinos sadios

Intravenous regional limb perfusion (IRLP) is an efficient method to treat horses with synovial infections. However, information on the dose, volume, and intervals of administration is lacking. The aim of this study was to evaluate the intra-articular concentration of gentamicin administered by IRLP in horses over 24 h post-administration and evaluate the influence of the total perfused volume. Twenty horses were assigned to two treatment groups. Gentamicin 60 group (G60, n=10) and Gentamicin 250 group (G250, n=10) received IRLP of 6.6 mg/kg of gentamicin diluted in Ringers lactate for a total volume of 60 ml (G60) and 250 ml (G250), respectively. Synovial fluid harvests were performed in the metacarpophalangeal joint before (0) and 4, 8, 12, 16, 20, and 24 hours after IRLP. Agar diffusion was the assay for measuring gentamicin concentrations. Four hours after IRLP, the intra-articular concentration of gentamicin was 47.58±49.21 g/ml in G60 and 10.92±6.11 g/ml in G250. During the 24 h of harvest, the intra-articular concentration of gentamicin remained above the minimum inhibitory concentration for horses (MIC; 2 g/ml) in both experimental groups. In G60, the concentration of gentamicin in synovial fluid reached the maximal concentration and remained 8 to 10-fold higher than the MIC (Cmax: 16 to 20 g/ml) during 12 h after IRLP. These findings support that IRLP with 6.6 mg/kg of gentamicin diluted to a volume of 60 ml promotes intra-articular concentrations higher than 250 ml, remaining above the MIC for 24 h and at the maximum concentration for 12 h.(AU)

A perfusão regional intravenosa (PRI) em membros de equinos é um método comprovadamente eficiente para o tratamento de infecções sinoviais, porém ainda existem lacunas quanto à dose, volume e intervalos de administração a serem utilizados. Neste estudo, objetivou-se avaliar a concentração intra-articular da gentamicina administrada por PRI em equinos, ao longo de 24 horas pós-administração, bem como avaliar a influência do volume total perfundido. Vinte equinos foram distribuídos em dois grupos experimentais, Grupo Gentamicina 60 (G60) e Grupo Gentamicina 250 (G250), representados por 10 equinos em cada grupo que receberam, por PRI, 6,6 mg/kg de gentamicina diluída em Ringer lactato para um total de 60 ml (G60) ou 250 ml (G250). As colheitas de líquido sinovial foram realizadas, na articulação metacarpo-falangeana, antes do início do experimento e após 4, 8, 12, 16, 20, e 24 horas. Difusão em ágar foi o método para doseamento das concentrações de gentamicina. Quatro horas após a PRI, a concentração intra-articular da gentamicina era de 47,58±49,21 µg/ml no G60 e 10,92±6,11 µg/ml no G250. Durante as 24 horas de colheita, a concentração intra-articular de gentamicina permaneceu acima da concentração inibitória mínima (CIM) (2 g/ml) em ambos os grupos experimentais. No G60, as concentrações de gentamicina no líquido sinovial atingiram a concentração máxima e mantiveram-se 8 a 10 vezes mais elevadas que a CIM (Cmáx: 16 a 20 g/ml) durante 12 horas após a PRI. Conclui-se que a PRI em membros, com 6,6 mg/kg de gentamicina diluída para o volume de 60 ml, promove concentrações intra-articulares mais elevadas que o volume de 250 ml, permanecendo acima da CIM durante 24 horas e em concentração máxima durante 12 horas.(AU)

Etiology, multidrug resistance, and acute-phase proteins biomarkers as in equine septic arthritis / Etiologia, resistência antimicrobiana e proteínas de fase aguda como biomarcadores na artrite séptica equina

Etiology, multiple antibiotic resistance index, and acute-phase protein profile in the serum and synovial fluid of 44 horses presenting septic arthritis were investigated. Young animals up to 24 months of age not yet submitted to taming were sampled. Synovial samples from the horses were submitted to culture and bacterial isolates subjected to 18 antimicrobials to investigate the in vitro multidrug resistance pattern. Also, hematological aspects, fibrinogen, and serum levels of some acute-phase proteins (total protein, albumin, globulin, amyloid A, and C-reactive protein) were assessed. To statistical analysis, microbiological isolation were divided into four groups: G1 = animals with negative isolation, G2 = isolation of Gram-negative bacteria, G3 = isolation of Gram-positive bacteria), and G4 = isolation of fungi. Microbial isolation was obtained from 77.2% (32/44) of the synovial samples. Escherichia coli (7/44 = 15.9%), Staphylococcus aureus (5/44 = 11.4%), Streptococcus equi subsp. equi (3/44 = 6.8%), Aspergillus niger (3/44 = 6.8%), Pseudomonas aeruginosa (2/44 = 4.5%), Streptococcus equi subsp. zooepidemicus (1/44 = 2.3%), Trueperella pyogenes (1/44 = 2.3%), and Rhodococcus equi (1/44 = 2.3%) were prevalent bacterial agents. Aspergillus niger is reported by the first time as a primary agent of septic arthritis in horses. Gentamicin (84.9%), marbofloxacin (79.3%) and ceftriaxone (72.4%) were the most effective antimicrobials, whereas high resistance of the isolates (>50%) was found to erythromycin (75.9%), clarithromycin (75.9%), penicillin (69%), clindamycin (58.6%), and streptomycin (55.2%). Multiple antibiotic resistance index ( 0.3) was identified in 50% (16/32) of the isolates, with highest resistance in Gram-negative bacterial isolates. Serum levels of amyloid A, C-reactive protein, fibrinogen, globulin, and total protein, as well as the number of nucleated cells in the synovial fluid had values above the reference for horses, reinforcing acute-phase proteins as biomarkers in diagnosis of septic arthritis. We highlighted the diversity of microorganisms that may be involved in equine septic arthritis, the high resistance of bacterial isolates to conventional antimicrobials, the high lethality of young horses with septic arthritis, and importance of in vitro antimicrobial susceptibility pattern tests to therapeutic approaches in the disease.(AU)

Foram investigados a etiologia, o índice de resistência múltipla aos antibióticos e o perfil de proteínas de fase aguda, no soro ou líquido sinovial, de 44 equinos com sinais clínicos compatíveis com artrite séptica. Foram amostrados animais até 24 meses de idade não submetidos a doma. As amostras de líquido sinovial dos 44 animais foram submetidas à cultura bacteriológica e fúngica, e os isolados bacterianos submetidos in vitro diante de 18 antimicrobianos visando investigar a multirresistência. Também foram avaliados os aspectos hematológicos e o fibrinogênio sérico, bem como os níveis séricos de certas proteínas de fase aguda (proteína total, albumina, globulina, amilóide sérico A e proteína C reativa). O isolamento microbiano das amostras foi dividido em quatro grupos: G1 = animais com isolamento negativo; G2 = isolamento de bactérias Gram-negativas; G3 = isolamento de bactérias Gram-positivas e G4 = isolamento fúngico. O isolamento microbiano foi obtido em 77,2% (32/44) das amostras de líquido sinovial. Escherichia coli (7/44 = 15,9%), Staphylococcus aureus (5/44 = 11,4%), Streptococcus equi subsp. equi (3/44 = 6,8%), Aspergillus niger (3/44 = 6,8%), Pseudomonas aeruginosa (2/44 = 4,5%), Streptococcus equi subsp. zooepidemicus (1/44 = 2,3%), Trueperella pyogenes (1/44=2,3%) e Rhodococcus equi (1/44 = 2,3%) foram os patógenos mais frequentes. Aspergillus niger é relatado pela primeira vez como agente primário de artrite séptica em cavalos. Gentamicina (84,9%), marbofloxacino (79,3%) e ceftriaxona (72,4%) foram os antimicrobianos mais eficazes, enquanto elevada resistência dos isolados (>50%) foi encontrada para eritromicina (75,9%), claritromicina (75,9%), penicilina (69%), clindamicina (58,6%) e estreptomicina (55,2%). O índice de resistência múltipla aos antibióticos ( 0,3) foi identificado em 50% (16/32) dos isolados, com maior resistência obervada em bactérias Gram-negativas. Os níveis séricos de amilóide A, proteína C reativa, fibrinogênio, globulina e concentração total de proteínas, bem como o número de células nucleadas no líquido sinovial apresentaram valores acima da referência para equinos saudáveis, reforçando o uso destas proteínas de fase aguda como biomarcadores no diagnóstico da doença. O presente estudo enfatiza a diversidade de microrganismos que podem estar envolvidos na artrite séptica equina, a alta resistência dos isolados aos antimicrobianos convencionais, a alta mortalidade de equinos jovens com artrite séptica e a importância de realizar o tratamento da afecção com respaldo em testes de sensibilidade microbiana in vitro.(AU)

Concentrations of acute-phase proteins and immunoglobulins in serum and synovial fluid in clinically healthy heifers and steers / Concentração de proteínas de fase aguda e de imunoglobulinas no soro e no líquido sinovial de bovinos clinicamente saudáveis

The aim of the study was to determine the concentration pattern of intra-articular acute phase proteins (APPs) and immunoglobulins in healthy crossbred cattle. Synovial fluid (SF) samples were collected from the radiocarpal joint of 25 heifers and 25 steers. Concentrations of APPs were measured by SDS-PAGE. The results were submitted to analysis of variance using the SAS statistical program, and means were compared by the Student-Newman-Keuls test (P<0.05). Thirty-seven proteins with molecular weights ranging from 7 to 37kDa were identified in SF of all animals. Eight were nominally identified with immunoglobulin A (IgA) and G (IgG), ceruloplasmin (Cp), transferrin (Tf), albumin (Ab), α1-antitripsin (AAT), α1-acid glycoprotein (AGP), and haptoglobin (Hp). The α1-antitripsin was only identified in the Sf of the heifers. The SF values of Cp, Hp, AGP and IgA were significantly higher in heifers than in steers. In sera, 34 proteins with molecular weights between 7 and 244kDa were identified in heifers and steers. Similar proteins were nominally identified in the sera, however the α1-antitrypsin was identified only in SF. The serum values Tf, AGP and IgG were significantly higher in heifers compared with steers. In conclusion, the physiological acute-phase proteins concentrations in synovial fluid of healthy ruminants can be useful in the interpretation of samples from animals with joint diseases. The SF electrophoretic profile of healthy ruminants differs depending on gender. Similar proteins were nominally identified in the sera, but only the SF of α1-antitrypsin.(AU)

O objetivo do estudo foi determinar o padrão de concentração de proteínas de fase aguda e de imunoglobulinas intra-articulares (APPs) em bovinos mestiços saudáveis. As amostras de fluido sinovial (SF) foram coletadas da articulação radiocárpica de 25 novilhas e 25 novilhos. As concentrações de APPs foram mensuradas por SDS-PAGE. Os resultados foram submetidos à análise de variância usando o programa estatístico SAS, e os meios foram comparados pelo teste Student-Newman-Keuls (P<0,05). Trinta e sete proteínas com pesos moleculares variando de 7 a 37kDa foram identificadas no SF de todos os animais. Oito foram nominalmente identificadas como imunoglobulina A (IgA) e G (IgG), ceruloplasmina (Cp), transferrina (Tf), albumina (Ab), a1-antitripsina (AAT), glicoproteína a1-ácido (AGP) e haptoglobina (Hp). A α1-antitripsina foi identificada apenas no SF das novilhas. Os valores de Cp, Hp, AGP e IgA no SF foram significativamente maiores em novilhas do que em novilhos. No soro, 34 proteínas com pesos moleculares entre 7 e 244kDa foram identificadas nas novilhas e novilhos. Proteínas similares foram identificadas nos soros, mas apenas o SF das novilhas apresentou a α1-antitripsina. Os valores séricos de Tf, AGP e IgG foram significativamente maiores em novilhas em relação aos novilhos. Conclui-se que a mensuração das concentrações das proteínas da fase aguda no líquido sinovial de animais saudáveis pode ser útil na avaliação de amostras oriundas de bovinos com afecções articulares. O perfil eletroforético do SF de ruminantes saudáveis difere em função do gênero e as diferenças devem ser levadas em consideração na interpretação dos achados.(AU)

Concentrations of acute-phase proteins and immunoglobulins in serum and synovial fluid in clinically healthy heifers and steers / Concentração de proteínas de fase aguda e de imunoglobulinas no soro e no líquido sinovial de bovinos clinicamente saudáveis

The aim of the study was to determine the concentration pattern of intra-articular acute phase proteins (APPs) and immunoglobulins in healthy crossbred cattle. Synovial fluid (SF) samples were collected from the radiocarpal joint of 25 heifers and 25 steers. Concentrations of APPs were measured by SDS-PAGE. The results were submitted to analysis of variance using the SAS statistical program, and means were compared by the Student-Newman-Keuls test (P<0.05). Thirty-seven proteins with molecular weights ranging from 7 to 37kDa were identified in SF of all animals. Eight were nominally identified with immunoglobulin A (IgA) and G (IgG), ceruloplasmin (Cp), transferrin (Tf), albumin (Ab), α1-antitripsin (AAT), α1-acid glycoprotein (AGP), and haptoglobin (Hp). The α1-antitripsin was only identified in the Sf of the heifers. The SF values of Cp, Hp, AGP and IgA were significantly higher in heifers than in steers. In sera, 34 proteins with molecular weights between 7 and 244kDa were identified in heifers and steers. Similar proteins were nominally identified in the sera, however the α1-antitrypsin was identified only in SF. The serum values Tf, AGP and IgG were significantly higher in heifers compared with steers. In conclusion, the physiological acute-phase proteins concentrations in synovial fluid of healthy ruminants can be useful in the interpretation of samples from animals with joint diseases. The SF electrophoretic profile of healthy ruminants differs depending on gender. Similar proteins were nominally identified in the sera, but only the SF of α1-antitrypsin.(AU)

O objetivo do estudo foi determinar o padrão de concentração de proteínas de fase aguda e de imunoglobulinas intra-articulares (APPs) em bovinos mestiços saudáveis. As amostras de fluido sinovial (SF) foram coletadas da articulação radiocárpica de 25 novilhas e 25 novilhos. As concentrações de APPs foram mensuradas por SDS-PAGE. Os resultados foram submetidos à análise de variância usando o programa estatístico SAS, e os meios foram comparados pelo teste Student-Newman-Keuls (P<0,05). Trinta e sete proteínas com pesos moleculares variando de 7 a 37kDa foram identificadas no SF de todos os animais. Oito foram nominalmente identificadas como imunoglobulina A (IgA) e G (IgG), ceruloplasmina (Cp), transferrina (Tf), albumina (Ab), a1-antitripsina (AAT), glicoproteína a1-ácido (AGP) e haptoglobina (Hp). A α1-antitripsina foi identificada apenas no SF das novilhas. Os valores de Cp, Hp, AGP e IgA no SF foram significativamente maiores em novilhas do que em novilhos. No soro, 34 proteínas com pesos moleculares entre 7 e 244kDa foram identificadas nas novilhas e novilhos. Proteínas similares foram identificadas nos soros, mas apenas o SF das novilhas apresentou a α1-antitripsina. Os valores séricos de Tf, AGP e IgG foram significativamente maiores em novilhas em relação aos novilhos. Conclui-se que a mensuração das concentrações das proteínas da fase aguda no líquido sinovial de animais saudáveis pode ser útil na avaliação de amostras oriundas de bovinos com afecções articulares. O perfil eletroforético do SF de ruminantes saudáveis difere em função do gênero e as diferenças devem ser levadas em consideração na interpretação dos achados.(AU)

Poliartrite em cães - 27 casos (2007-2013) / Polyarthritis in dogs - 27 cases (2007-2013)

O objetivo deste estudo foi identificar cães com poliartrite e obter informações a respeito da idade, sexo, raça, peso corporal, queixa principal, alterações no exame físico, do líquido sinovial e resposta à terapia instituída. Os cães sem raça definida e acima de seis anos de idade foram os mais acometidos e o principal sinal clínico observado foi dificuldade de locomoção (71,5%), seguido de dor articular (52,3%) e claudicação (33,3%). Febre e inapetência foram observadas em cinco (18,5%) e quatro cães (14,8%), respectivamente. As principais alterações hematológicas encontradas foram anemia não regenerativa (29,6%), leucocitose (26%) e trombocitopenia (18,5%). Os resultados da bioquímica sérica foram considerados normais em sete de 27 cães (26%) e as principais alterações foram hiperproteinemia (55,5%) e hipoalbuminemia (37%). A inflamação sinovial foi considerada acentuada em 17 cães (77,5%), sendo os neutrófilos predominantes em 52,4% dos casos (n=14). O tratamento foi realizado em 18 cães com doses imunossupressoras de corticosteroides, sendo efetivo em 89% dos casos.(AU)

The aim of this study was to identify dogs with polyarthritis (PA) and information about age, sex, race, body weight, chief complaint, changes in physical examination, cytology of synovial fluid and response to therapy. Mixed breeds dogs over six years of age were the most affected and the main symptoms observed were limited mobility (71.5%) followed by joint pain (52.3%) and claudication (33.3%). Inapetence and fever were observed in five (18.5%) and four dogs (14.8%), respectively. Haematological abnormalities as non regenerative anemia (29.6%), leukocytosis (26%) and thrombocytopenia (18.5%) were found. The results of serum biochemistry were normal in seven of 27 dogs (26%) and the major changes were hyperproteinemia (55.5%) and hypoalbuminemia (37%). The synovial inflammation was considered severe in 17 dogs (77.5%) and neutrophils prevalent in 52.4% of cases (n = 14). The treatment was performed in 18 dogs with immunosuppressive doses of corticosteroids, and was effective in 89% of cases.(AU)

Efeito terapêutico do pentosan polissulfatado sódico sobre a osteoartrite de equinos

GRIGOLETTO, R. Efeito terapêutico do pentosan polisulfatado sódico sobre a osteoartrite de equinos. 80f. Tese (Doutorado) Faculdade de Zootecnia e Engenharia de Alimentos, Universidade de São Paulo, Pirassununga, 2020. A deterioração progressiva e perda da cartilagem articular são os eventos finais da osteoartrite (OA) em equinos, causando dor e comprometendo o desempenho atlético. A grande incidência da osteoartrite em equinos justifica a realização de pesquisas envolvendo novas técnicas terapêutica para doenças articulares. Para isso, esse estudo teve como objetivo avaliar comparativamente o tratamento da OA em equinos com Fenilbutazona, via intravenoso (IV) ou Pentosan Polisulfatado Sódio (PPS), via intra-articular (IA). Foram utilizados dez equinos, com idade media de 13,4 anos e diagnosticados com OA por avaliação radiográfica, os quais foram submetidos a administração de fenilbutazona intravenosa, durante cinco dias (Tratamento 1), seguido de um período de washout de 7 dias e administração IA de Pentosan Polisulfatado Sódio (PPS), a cada sete dias, em um total de quatro aplicações (T0, T7, T14, T21; Tratamento 2). Foram realizados exames de claudicação, grau de efusão sinovial, inspeção visual e avaliação em líquido sinovial da articulação envolvida quanto à concentração da citocina IL-6 e da proteína de fase aguda amilóide sérico A antes do início do experimento (D0) e após tratamento com fenilbutazona (D5), antes do início da administração de PPS IA (T0) e a cada sete dias (T7, T14, T21, T28) e após 30 e 60 dias (T30 e T60). Foi realizado exame hematológico, bioquímica sérica (função hepática e renal) e avaliação bioquímica e citológica de líquido sinovial antes do início do tratamento 2 (T0) e após a última administração IA de PPS (T28), a fim de avaliar alterações sistêmicas e ou locais que a administração de PPS IA poderia causar. Foi observado menor grau de claudicação quando os animais receberam PPS IA, em relação a quando os animais foram tratados com fenilbutazona IV, assim como as concentrações de IL-6 e ASA foram menores no tratamento 2 (p < 0.05). A administração repetida de PPS IA promoveu aumento da efusão sinovial, de maneira reversível e elevação da celularidade sinovial, sem alterações hematológicas ou de função hepática e renal. Conclui-se que o PPS administrado por via intra-articular em equinos, auxilia os animais acometidos por osteoartrite, reduzindo dor e inflamação sinovial, sem efeitos indesejáveis sistêmicos.

GRIGOLETTO, R. Therapeutic effect of sodium polysulfated pentosan on equine osteoarthritis. 80f. PhD Thesis Faculdade de Zotecnia e Engenharia de Alimentos, Universidade de São Paulo, Pirassununga, 2020. Progressive deterioration and loss of articular cartilage are the final events of osteoarthritis (OA) in horses, causing pain and impairing athletic performance. The high incidence of osteoarthritis in horses justifies conducting research involving new therapeutic techniques for articular diseases. Therefore, this study aimed to evaluate comparatively the treatment of OA in horses with intravenous (IV) phenylbutazone or Pentosan polysulfated sodium (PPS) by intra-articular (IA). Ten horses, with an average age of 13.4 years and diagnosed with OA by radiographic evaluation, were submitted to intravenous phenylbutazone for five days (Treatment 1) followed by a washout period of 7 days and IA administration of Pentosan Polysulfated Sodium (PPS) every seven days for a total of four applications (T0, T7, T14, T21; Treatment 2). Lameness, synovial effusion, visual inspection, and synovial fluid assessment of the involved articular were performed for the concentration of IL-6 cytokine and serum acute amyloid protein A. The experimental period was conducted before the initial of experiment (D0) and after phenylbutazone treatment (D5), also before PPS IA (T0) administration and every seven days (T7, T14, T21, T28) and after 30 and 60 days (T30 and T60). Hematological examination, serum biochemistry (liver and renal function), biochemical and cytological evaluation of synovial fluid were performed before initiation of treatment 2 (T0) and after the last PPS IA administration (T28) to assess systemic changes and/or sites that administration of PPS IA could cause. Lower lameness was observed when animals received PPS IA compared to when animals were treated with phenylbutazone IV as well as IL-6 and serum amyloid A (SAA) concentrations were lower in treatment 2 (p <0.05). Repeated administration of PPS IA promoted a reversible increase in synovial effusion and elevation of synovial cellularity, without hematological or hepatic and renal function changes. It can be concluded that intra-articular PPS administered to horses helps animals with osteoarthritis, reducing pain and synovial inflammation without systemic undesirable effects.

Avaliação dos efeitos in vitro do Dimetilsulfóxido em células sinoviais de equinos e de sua utilização intra-articular como tratamento para sinovite aguda

As lesões articulares na espécie equina causam inúmeras perdas econômicas e funcionais, com objetivo de minimizá-las vários estudos sobre técnicas e terapias são realizadas e se fazem necessárias. Acredita-se que o dimetilsulfóxido (DMSO) tenha ação moduladora nos processos inflamatórios articulares agudos e ação sobre radicais livres, porém sua eficácia ainda é dúbia. Este estudo teve como objetivo avaliar os efeitos do DMSO sobre células sinoviais e a lavagem articular com diferentes concentrações de DMSO (5% e 10%), em um modelo experimental de indução da sinovite aguda em equinos, com LPS. Para tanto, este estudo foi dividido em duas etapas. A primeira etapa visou verificar o efeito do DMSO sobre células sinoviais, através da análise de viabilidade celular após a estimulação das células sinoviais pelo LPS e tratamento com o DMSO. Para a segunda etapa do estuo foram utilizadas 26 articulações tibiotársicas, distribuídas aletoriamente em quatro grupos. Os grupos foram tratados e organizados da seguinte forma: grupo solução de ringer lactato; grupo DMSO 5% em solução de ringer lactato; grupo DMSO 10% em solução de ringer lactato; e Grupo controle (apenas indução da sinovite). Foram realizadas coletas do líquido sinovial (LS) antes da infiltração das articulações com LPS, na dose de 0,5 ng (M0), após 1h (M1), antes das lavagens (M8), e após 24h e 48h (M24 e M48) da indução da sinovite, as amostras de LS foram utilizadas para contagem total de células nucleadas e diferenciação celular, quantificação de PGE2, interleucina-1, interleucina-6, TNF-, AH, CS, ureia, proteína total e análise do burst oxidativo. As células sinoviais estimuladas por LPS e tratadas com DMSO 5% apresentaram menor porcentagem de células viáveis após vinte e quatro horas, entretanto após 48h somente as células tratadas com ringer lactato apresentaram menor porcentagem de células viáveis. O equipamento Lameness Locator® foi utilizado para verificar a presença de dor articular, previamente a todas coletas. Todos os grupos apresentaram aumento na contagem total de células nucleadas, concentração de PGE2, IL-1, IL-6 e proteína total no M8. Sendo que os grupos DMSO 5% e DMSO 10% apresentaram diminuição da contagem total de células nucleadas após a lavagem articular. A concentração de PGE2 e IL-1 no grupo DMSO 10% foi menor no M48 em relação ao M8, e o grupo ringer lactato apresentou menor concentração de IL-1 que os grupos DMSO 5% e controle no M24. O grupo DMSO 10% apresentou menor concentração de IL-6 em relação aos grupos DMSO 5% e ringer lactato no momento 24. O TNF- apresentou aumento em todos os grupos no M1. Os grupos DMSO 10% e controle apresentaram menor concentração de TNF- nos M24 e M48 em relação ao M1. Os grupos DMSO 5% e controle não apresentaram diferença na concentração de IL-10, porém os grupos ringer lactato e DMSO 10% apresentaram maior concentração no M48. Os grupos DSMO 10% e ringer lactato apresentaram menor concentração de AH no M24. Todos os grupos apresentaram aumento da concentração de CS após as lavagens articulares. Não houve diferença na avaliação de dor articular, bem como na análise do burst oxidativo e concentração de ureia. Os diferentes grupos apresentaram similaridade de comportamento das células e citocinas estudadas no líquido sinovial ao longo do experimento, contudo o grupo DMSO 10% foi o que apresentou mais rapidamente o retorno próximo aos valores basais. Os resultados apresentados neste estudo permitem concluir que frente à necessidade de se realizar lavagens articulares a utilização de solução de ringer lactato com DMSO 10% é mais indicada que o uso de ringer lactato ou solução com DMSO a 5%. Entretanto, nenhum tratamento foi capaz de demonstrar efeito condroprotetor.

Joint injuries in the equine species cause numerous economic and functional losses, in order to minimize them, several studies on techniques and therapies are performed and are necessary. Dimethylsulfoxide (DMSO) is thought to have modulating action on acute joint inflammatory processes and action on free radicals, but its efficacy is still dubious. This study aimed to evaluate the effects of DMSO on synovial cells and joint lavage with different concentrations of DMSO (5% and 10%) in an experimental model of induction of acute synovitis in horses with LPS. Therefore, this study was divided into two steps. The first step aimed to verify the effect of DMSO on synovial cells by analyzing cell viability after stimulation of synovial cells by LPS and treatment with DMSO. For the second stage of the study, 26 tibiotarsal joints were used, divided into four groups. The groups were treated and organized as follows: ringer lactate solution group; 5% DMSO group in ringer lactate solution; 10% DMSO group in ringer lactate solution; and Control group (synovitis induction only). Synovial fluid (LS) was collected prior to infiltration of the joints with LPS at a dose of 0.5 ng (M0), after 1h (M1), before washes (M8), and after 24h and 48h (M24 and M48), from synovitis induction. LS samples were used for total nucleated cell count and cell differentiation, PGE2 quantification, interleukin-1, interleukin-6, TNF-, HA, CS, urea, total protein and burst oxidative analysis. The synovial cells stimulated by LPS and treated with DMSO 5% presented lower percentage of viable cells-after 24 hours, however after 48h only the cells treated with Ringer lactate showed lower percentage of viable cells. Lameness Locator® equipment was used to verify the presence of joint pain, prior to all collections. All groups showed an increase in total nucleated cell count, PGE2, IL-1, IL-6 and total protein in M8. The DMSO 5% and DMSO 10% groups showed a decrease in the total nucleated cell count after joint washing. The concentration of PGE2 and IL-1 in the 10% DMSO group was lower in M48 compared to M8, and the ringer lactate group presented lower IL-1 concentration than the 5% DMSO and control groups in M24. The 10% DMSO group showed lower IL-6 concentration compared to the 5% DMSO and ringer lactate groups at time 24. TNF- increased in all groups at M1. The 10% DMSO and control groups presented lower TNF- concentration in M24 and M48 in relation to M1. The 5% DMSO and control groups showed no difference in IL-10 concentration, but the ringer lactate and 10% DMSO groups showed higher concentration in M48. The DSMO 10% and ringer lactate groups presented lower HA concentration in M24. All groups showed increased concentration of CS after joint washes. There was no difference in joint pain evaluation, oxidative burst analysis and urea concentration. The different groups showed similarity of behavior of cells and cytokines studied in the synovial fluid throughout the experiment, however the 10% DMSO group showed the fastest return near basal values. The results presented in this study allow us to conclude that in view of the need to perform joint washes, the use of 10% DMSO lactated ringer's solution is better than the use of 5% DMSO lactated ringer's solution. However, no treatment was able to demonstrate chondroprotective effect

Avaliação dos efeitos inflamatório e oxidante do ozônio medicinal em articulações sinoviais de equinos hígidos

A ozonioterapia consiste na aplicação de ozônio medicinal, uma mistura de ozônio e oxigênio, que através das espécies reativas de oxigênio e produtos de lipoperoxidação exercem diversos efeitos no organismo como, melhora da oxigenação e metabolismo dos tecidos, angiogênese, aumento dos mecanismos antioxidantes, melhora do sistema imune, efeito anti-inflamatório, entre outros. Esta modalidade terapêutica já é amplamente estudada na medicina humana e vem sendo aplicada na medicina esportiva equina no tratamento de osteoartrite, porém sem estudos expressivos que comprovem sua segurança e eficácia. O objetivo do presente estudo é analisar os efeitos inflamatório e oxidante do ozônio medicinal em articulações sinoviais de equinos hígidos. Para tanto foram utilizadas 24 articulações tibiotársicas distribuídas aleatoriamente em três grupos. Nos grupos tratados foram realizadas três aplicações semanais de 15 ml de ozônio medicinal na concentração de 20 (GA) e 40 µg/ml (GB), no total de 10 aplicações. Já no grupo controle, as articulações receberam três aplicações semanais de 15 ml de O2 (GC), também no total de dez aplicações. Foram realizados exames físico, de claudicação e ultrassonográfico, bem como análise do líquido sinovial, incluindo contagem total de células nucleadas e quantificação de proteína total, prostaglandina E2, Substância P, interleucina-1, interleucina-6, interleucina 10, fator de necrose tumoral-, ácido hialurônico (concentração e peso molecular) e condroitim sulfato. Para avaliação antioxidante no líquido sinovial foi determinada a atividade da superóxido desmutase e o burst oxidativo. Houve aumento da temperatura em GA e GB, os animais de GB apresentaram maior claudicação comparado aos demais grupos e observou-se aumento em todos os grupos dos escores ultrassonográficos. Na análise do líquido sinovial observou-se aumento nas contagens celulares de GA e GB, acompanhado de polimorfonucleares em GB, aumento da concentração de proteína no GA e GB, da atividade da superóxido desmutase e do índice de ativação em GA e diminuição da concentração de ácido hialurônico em todos os grupos e condroitim sulfato em GB e GC. Não houve diferença nas concentrações de PGE2, substância P, IL-1, IL-6, IL-10 e TNF-. A aplicação consecutiva do ozônio medicinal intra-articular provocou alterações ultrassonográficas e no exame de claudicação, mais perceptível na dose de 40 ug/mL. Estas alterações estão mais relacionadas à distensão articular causada pela infusão de gases do que aos efeitos inflamatórios provindos do O3, uma vez que as análises de líquido sinovial não mostraram relevante inflamação. Conclui-se que a aplicação intra-articular de ozônio medicinal em equinos é segura em ambas as doses, e que experimentos devem ser realizados utilizando-se animais com diferentes doenças articulares, para que os benefícios da ozonioterapia sejam evidenciados e compreendidos

Ozone therapy consists of the application of medicinal ozone, a mixture of ozone and oxygen, which through reactive oxygen species and products of lipoperoxidation exert various effects on the body, such as improvement of tissue oxygenation and metabolism, angiogenesis, increase of antioxidant mechanisms, improvement of the immune system, anti-inflammatory effect, among others. This therapeutic modality is already widely studied in human medicine and has been applied in equine sports medicine in the treatment of osteoarthritis, but without expressive studies that prove its safety and efficacy. The objective of the present study is to analyze the inflammatory and oxidizing effects of medicinal ozone on synovial joints of healthy horses. Twenty-four tibiotarsic joints were randomly distributed in three groups. In the treated groups three weekly applications of 15 ml of medicinal ozone in the concentration of 20 (GA) and 40 g / ml (GB) were carried out for a total of 10 applications. Already in the control group, the joints received three weekly applications of 15 ml of O2 (GC), also in the total of 10 applications. Physical, lameness and ultrasound examinations were performed, as well as synovial fluid analysis, including total nucleated cell count and quantification of total protein, prostaglandin E2, Substance P, interleukin-1, interleukin-6, interleukin-10, tumor necrosis factor-, hyaluronic acid (concentration and molecular weight) and chondroitin sulfate. For the antioxidant evaluation in the synovial fluid, the activity of the superoxide dismutase and the oxidative burst was determined. There was an increase in temperature in GA and GB, GB animals presented greater lameness compared to the other groups and an increase was observed in all groups of ultrasound scores. In the synovial fluid analysis, GA and GB cell counts were observed, followed by polymorphonuclear cells in GB, increased protein concentration in GA and GB, superoxide desmutase activity and activation index in GA, and decrease in concentration of Hyaluronic acid in all groups and chondrocyte sulfate in GB and CG. There was no difference in the concentrations of PGE2, substance P, IL-1, IL-6, IL-10 and TNF-. The consecutive application of intra-articular medicinal ozone caused ultrasonography changes and lameness, more noticeable at 40 ug / mL. These changes related more to joint distension caused by gas infusion than to inflammatory effects from O3, since synovial fluid analyzes did not show relevant inflammation. It is concluded that the intra-articular application of medical ozone in horses is safe in both doses, and that experiments must be performed using animals with different joint diseases, so that the benefits of ozonotherapy are evidenced and understood

Do blood components affect the production of reactive oxygen species (ROS) by equine synovial cells in vitro? / Os componentes do sangue afetam a produção de (ERO) pelas células sinoviais de equinos in vitro?

Blood-derived products are commonly administered to horses and humans to treat many musculoskeletal diseases, due to their potential antioxidant and anti-inflammatory effects. Nevertheless, antioxidant effects have never been shown upon horse synovial fluid cells in vitro. If proved, this could give a new perspective to justify the clinical application of blood-derived products. The aim of the present study was to investigate the antioxidant effects of two blood-derived products - plasma (unconditioned blood product - UBP) and a commercial blood preparation (conditioned blood product - CBP)¹ - upon stimulated equine synovial fluid cells. Healthy tarsocrural joints (60) were tapped to obtain synovial fluid cells; these cells were pooled, processed, stimulated with lipopolysaccharide (LPS) or phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA), and evaluated by flow cytometry for the production of reactive oxygen species (ROS). Upon addition of any blood-derived product here used - UBP and CBP - there was a significant decrease in the oxidative burst of synovial fluid cells (P<0.05). There was no difference between UBP and CBP effects. In conclusion, treatment of stimulated equine synovial cells with either UBP or CBP efficiently restored their redox equilibrium.(AU)

Produtos derivados do sangue são comumente usados, tanto no homem como em cavalos, para tratar diversas doenças musculoesqueléticas, principalmente devido a seus efeitos antioxidantes e anti-inflamatórios. Contudo, efeitos antioxidantes nunca foram demonstrados em células de líquido sinovial in vitro. Caso esses efeitos sejam efetivamente demonstrados, uma nova perspectiva para justificar a aplicação clínica desses produtos poderia surgir. Sendo assim, o objetivo do presente estudo foi investigar os efeitos antioxidantes de dois produtos derivados de sangue - plasma (produto de sangue não condicionado - UBP) e uma preparação comercial de sangue (produto de sangue condicionado - CBP)¹ - sobre células estimuladas extraídas do líquido sinovial de equinos. Articulações tibiotársicas saudáveis (60) foram puncionadas para a obtenção de células de líquido sinovial; essas células foram concentradas, processadas, estimuladas com lipopolissacarídeos (LPS) ou forbol 12-miristato 13-acetato (PMA), e avaliadas por citometria de fluxo quanto à produção de espécies reativas de oxigênio (ROS). Após a adição de ambos os produtos derivados do sangue - UBP ou CBP - ocorreu uma significativa queda no burst oxidativo em células do líquido sinovial (P<0,05). Não houve diferença entre os efeitos de UBP e CBP. Em conclusão, tratamento de células estimuladas do líquido sinovial de equinos com UBP ou CBP restaurou eficientemente o equilíbrio redox das células.(AU)

ODONTOLOGIA EQUINA: ALTERAÇÕES CLÍNICAS E LABORATORIAIS

KUNZ, J. R. Odontologia Equina: Alterações clínicas e laboratoriais. 2017, 113p. Dissertação (Mestrado em Ciência Animal) Universidade do Estado de Santa Catarina. Programa de Pós-Graduação em Ciência Animal, Lages, 2017. Trabalhos referentes à frequência de enfermidades odontológicas em equinos ainda são pouco discutidos e escassos naqueles submetidos à função de tração, bem como estudos comparando as alterações odontológicas em equinos sob diferentes tipos de manejo e também a respeito do efeito do tratamento odontológico na avaliação clínica, hematológica e da análise do líquido sinovial da articulação temporomandibular. Foi realizado o exame clínico geral, odontológico específico e a colheita do líquido sinovial da articulação temporomandibular. O exame clínico consistiu da avaliação dos parâmetros vitais, peso e condição corporal. Foram colhidas amostras de sangue para a realização do hemograma, concentração de proteína total e fibrinogênio plasmático. Para a avaliação odontológica os equinos foram mantidos em jejum por oito horas e no momento do procedimento odontológico sedados utilizando-se detomidina 1% por via intravenosa. A cavidade oral de cada equino foi avaliada para o diagnóstico das diferentes enfermidades, seguindo-se o tratamento das afecções dentárias. A colheita e análise do líquido sinovial foi realizada levando em conta a celularidade, pH, proteína e densidade. Foram incluídos na pesquisa 115 equinos, adultos, de ambos os sexos, de raça indefinida e sem tratamento odontológico prévio por no mínimo 5 anos. O desenvolvimento da pesquisa procedeu em 4 fases, para a avaliação da frequência de enfermidades da cavidade oral de equinos que realizam função de tração foram utilizados 70 animais. Para a avaliação da influência do tipo de manejo na frequência de enfermidades da cavidade oral foram utilizados 69 equinos divididos em três grupos de 23 animais, sendo manejo extensivo, semiextensivo e intensivo. Para avaliação do efeito do tratamento odontológico nos parâmetros clínicos e hematológicos foram utilizados 62 equinos e para a avaliação do líquido sinovial foram utilizados 33 animais. As avaliações foram divididas nos momentos imediatamente antes do tratamento dentário, 30 dias após; 60 dias após e 90 dias após o tratamento odontológico. A análise estatística dos dados foi realizada utilizando-se análise descritiva e o teste Quiquadrado para variáveis nominais e a análise de variância (ANOVA) e Tukey para comparação entre médias e grupos (P<0,05). A frequência de alterações dentárias em equinos que realizam função de tração na cidade de Lages-SC é significativa, destacando-se as pontas de esmalte, diastemas e úlceras nas mucosas. A exposição pulpar dos dentes incisivos ocorreu em maior frequência em equinos geriátricos bem como a frequência de rampas e curvatura dorsal foi maior em fêmeas. Em relação ao manejo conclui-se que as pontas de esmalte estão presentes em todos os animais independentemente do tipo de manejo, sendo que os diastemas em incisivos, pré-molares e molares, e incisivos são prevalentes no manejo extensivo. A curvatura dorsal dos incisivos foi maior no manejo semiextensivo e as cristas transversais excessivas no manejo intensivo. Foi observado de acordo com os dados obtidos no presente trabalho que as afecções leves, moderadas e severas bem como o tratamento odontológico não interferem nos parâmetros clínicos e hematológicos e apresentam pouca influência no líquido sinovial da articulação temporomandibular de equinos.

KUNZ, J. R. Equine dentistry: Clinical and laboratory alterations. 2017, 113p. Dissertation (Masters in Animal Science) - Santa Catarina State University. Post Graduate Program in Animal Science, Lages, 2017. Studies of the frequency of dental diseases in horses are still poorly discussed and scarce in traction horses, as well as studies comparing odontological changes in horses under different types of management and also on the effect of dental treatment on the clinical, hematological evaluation And analysis of the synovial fluid of the temporomandibular joint. General clinical examination, specific dentistry and the collection of synovial fluid from the temporomandibular joint were performed. The clinical examination consisted of the evaluation of vital parameters, weight and body condition. Blood samples were collected for hemogram, total protein concentration and plasma fibrinogen. For the dental evaluation the horses were fasted for eight hours and at the time of the dental procedure sedated using 1% detomidine intravenously. The oral cavity of each horse was evaluated for the diagnosis of different diseases, followed by the treatment of dental conditions. Harvest and analysis of synovial fluid was performed taking into account cellularity, pH, protein and density. Included in the study were 115 adult, male and female horses, of indefinite race and without previous dental treatment for at least 5 years. The development of the research carried out in 4 phases, 70 animals were used to evaluate the frequency of diseases of the oral cavity of horses performing traction function. For the evaluation of the influence of the type of management on the frequency of diseases of the oral cavity, 69 equines were divided into three groups of 23 animals, being extensive, semi-extensive and intensive management. To evaluate the effect of dental treatment on the clinical and hematological parameters, 62 horses were used and 33 animals were used to evaluate the synovial fluid. The evaluations were divided in the moments immediately before the dental treatment, 30 days later; 60 days after and 90 days after dental treatment. The statistical analysis of the data was performed using descriptive analysis and Chi-square test for nominal variables and analysis of variance (ANOVA) and Tukey for comparison between means and groups (P <0.05). The frequency of dental changes in horses that perform a traction function in the city of Lages-SC is significant, especially the sharp enamel points, diastema and buccal ulcers. Pulp exposure of the incisor teeth occurred more frequently in geriatric horses as well as the frequency of ramps and dorsal curvature was higher in females. Regarding management, it was concluded that enamel sharp points are present in all animals regardless of the type of management, and the diastemas in incisors, cheek teeth, and incisors are prevalent in extensive management. The dorsal curvature of the incisors was greater in the semi-extensive management and the excessive transverse ridges in the intensive management. It was observed according to the data obtained in the present study that mild, moderate and severe affections as well as dental treatment do not interfere in the clinical and hematological parameters and present little influence on the synovial fluid of the temporomandibular joint of horses.

An experimental study to compare inflammatory response due to liquid or gas joint distension in horses submitted to arthroscopy / Estudo experimental para comparar a resposta inflamatória decorrente da distensão líquida ou gasosa em cavalos submetidos à artroscopia

PURPOSE: To assess comparatively the inflammatory response that follows CO2 or Ringer's lactate joint capsular distension of horses submitted to experimental arthroscopy METHODS: Each animal was submitted to a bilateral tarsocrural arthroscopy employing gas distention in one joint and fluid distention in the contralateral joint. Synovial fluid was evaluated at 0, six, 12, 24 and 48 hours post-operative. RESULTS: The use of CO2 for arthroscopy causes an acute and mild synovitis alike to the liquid capsular distension, showing similar synovial fluid increase of leukocytes, TP, and TNF-α. Although synovial fluid PGE2 content was higher in joints submitted to CO2 distension, lower levels of hemoglobin and leukocytes oxidative burst after surgery indicates that CO2 arthroscopy decreased intra-articular bleeding and activation of infiltrating leukocytes. CONCLUSIONS: The use of CO2 for arthroscopic examination causes acute and mild synovitis that is similar to the effects caused by the liquid capsular distension. CO2 also seems to decrease intra-articular bleeding and activation of leukocytes.(AU)

OBJETIVO: Avaliar comparativamente a resposta inflamatória decorrente da distensão líquida ou gasosa em cavalos submetidos ao exame artroscópico. MÉTODOS: Cada animal foi submetido a uma artroscopia bilateral tarsocrural empregando uma distensão com gás em uma articulação e líquido na articulação contralateral. O líquido sinovial foi avaliado as zero, seis, 12, 24 e 48 horas do pós-operatório. RESULTADOS: A utilização de CO2 para a artroscopia provoca uma sinovite aguda e leve tal como a distensão capsular por líquido, mostrando um aumento similar de leucócitos, TP (proteína total) e TNF-a. Embora no líquido sinovial a quantidade de PGE2 tenha sido maior nas articulações submetidas à distensão por CO2, níveis mais baixos de hemoglobina e explosão oxidativa de leucócitos após a cirurgia indica que a artroscopia com CO2 diminuiu o sangramento intra-articular e ativação de leucócitos. CONCLUSÕES: A utilização de CO2 para exame artroscópico provoca uma sinovite aguda e leve que são semelhantes aos efeitos causados pela distensão capsular por líquido. O CO2 também parece diminuir o sangramento intra-articular e a ativação de leucócitos.(AU)

EXPRESSÃO DE TLR-2, FOXP3 E COX-2 NA MEMBRANA SINOVIAL E CARACTERÍSTICAS DO LÍQUIDO ARTICULAR EM CÃES NATURALMENTE INFECTADOS POR Leishmania infantum

Em cães, as artropatias são pouco frequentes e podem ser de origem infecciosa ou imunomediada. Na leishmaniose visceral canina (LVC) o comprometimento articular tem sido relatado associado a diminuição da atividade física. Objetivou-se analisar os aspectos físicos, bioquímicos e celulares do líquido sinovial (LS), e avaliar as expressões de TLR-2, FOXP3 e COX-2 na membrana sinovial de cães naturalmente infectados por Leishmania infantum. Cães (N=30) foram divididos em dois grupos: controle (GC; n=10) e infectados por L.infantum (GNIL; n=20) que foram avaliados quanto aos critérios clínicos ortopédicos. O LS foi analisado quanto ao volume, aspecto, viscosidade, células nucleadas totais, neutróifilos, concentração total de proteínas e reatividade sorológica do fator reumatóide (FR). Na segunda etapa do estudo, GNIL (N=20) foi subdividido em três grupos de acordo com a concentração de proteínas toais do LS, grupo I: 2 a 2,5 g/dL (valor de referência normal); Grupo Normal (GN); grupo II: 2,5 a 6,0 g/dL, Grupo Moderado (GM) e grupo III: > 6g/dL, Gurpo Elevado (GE). Amostras de membrana sinovial foram coletadas da região da articulação do joelho, foram processadas por histologia de rotina e marcadas por imuno-histoquímica com anticorpos monoclonais anti TLR2, FOXP3 e COX2 e foram descritas como nenhuma, leve, moderada e intensa marcação. Todo o protocolo experimental foi submetido ao Comitê de Ética em Uso de Animais (CEUA) da Universidade Estadual do Ceará (UECE) sob protocolo nº O volume médio de líquido sinovial do GC foi de 0,17±0,09 mL e do GNIL foi de 0,45±0,12 mL (P < 0,0001), concentração de proteínas totais do GC foi de 2,32±0,2 g/dL e do GNIL 5,83±2,0 g/dL (P < 0,0001). Em relação a CNT, observou-se no GC 72±12 células/mm³, enquanto no GNIL de 5.845±4.478 células/mm³ (P > 0,001). A média da contagem de neutrófilos no GC foi de 5±1células/mm³ e no GNIL 978±136 células/mm³. Foram visualizadas formas amastigotas de L. infantum no interior de macrófagos em 60% das amostras de LS, bem como extracelular. Foram reativos para FR, 75% dos animais. Na membrana sinovial houve um aumento da expressão dos marcadores TLR2 e COX2 em GIII (GE) quando comparado aos grupos GII (GM) e GI (GN). Em relação a expressão de FOXP3, houve uma moderada marcação em GN, e apenas uma levc marcação em GM e GE. Neste trabalho, pode-se concluir que a poliartrite apresentada nos cães pode estar associada a LVC e que a Proteína do Líquido sinovial reflete as alterações nas expressões de TLR2, FOXP3 e COX2 na membrana sinovial e sugerem uma interação entre LPG da L.infantum e TLR-2 modulando o processo inflamatório.

Canine visceral leishmaniasis (CVL) in up to 30% of affected dogs causes muscle atrophy, a decrease in physical activity often associated with arthritis. The objective was to analyze the physical, biochemical and cellular aspects of synovial fluid (LS), and evaluate the expression of TLR-2, FOXP3 and COX-2 in the synovial membrane of dogs naturally infected with Leishmania infantum. Dogs (N = 30) were divided into two groups: control (GC; n = 10) and L.infantum (GNIL; n = 20) infected with clinical orthopedic criteria. LS was analyzed for volume, appearance, viscosity, total nucleated cells, neutrophils, total protein concentration and rheumatoid factor (RF) serological reactivity. In the second part of the study dogs (N = 20) were divided into three groups: GI, GII and GII, according to the increasing concentration of total proteins of the synovial fluid (LS). Synovial membrane samples were collected from the knee joint region, were processed by routine histology and labeled by immunohistochemistry with monoclonal antibodies anti TLR2, FOXP3 and COX2 and were described as no, mild, moderate and intense marking. The entire experimental protocol was submitted to the Committee on Ethics in Animal Use (CEUA) of the State University of Ceará (UECE) under protocol # The mean synovial fluid volume of the GC was 0.17 ± 0.09 mL and the GNIL was of 0.45 ± 0.12 mL (P <0.0001), total GC protein concentration was 2.32 ± 0.2 g / dL and GNIL 5.83 ± 2.0 g/dL (P <0.0001). Regarding CNT, 72 ± 12 cells / mm³ was observed in the GC, whereas in the GNIL it was 5,845 ± 4,478 cells / mm³ (P> 0.001). The mean neutrophil count in the GC was 5 ± 1 cells / mm 3 and in the GNIL 978±136 cells / mm 3. Amastigote forms of leishmania infantum were visualized within macrophages in 60% of the LS as well as extracellular samples. 75% of the animals were RF reactive. In the synovial membrane there was an increase in the expression of the TLR2 and COX2 markers in GIII when compared to the GII and GI groups; however, in relation to the expression of FOXP3, there was a moderate GI marking, and only a low marking in GII and GIII. This work suggests that LVC may be the source of polyarthritis in dogs. Possibly CVL is modifying the expression of TLR2, FOP3 and COX2 in the synovial membrane of dogs naturally infected by L.infantum, with a possible interaction between L.infantum LPG and TLR2 membrane protein.

Avaliação microbiológica e molecular de líquidos articulares e peri-articulares de suínos / Microbiological and molecular evaluation of articulares and peri-articulares fluids of pigs

No presente estudo coletaram-se 115 amostras de líquido articular e peri-articular de suínos com suspeita clínica de doença articular oriundos de maternidade (30,43 por cento), creche (44,35 por cento) e crescimento/terminação (25,22 por cento) de Sistemas Intensivos de Produção de Suínos (SIPs) para avaliação microbiológica e molecular. Observaram-se 57 (49,5 por cento) amostras positivas em pelo menos uma das técnicas. No isolamento microbiano, 39,13 por cento das amostras foram positivas, sendo Streptococcus spp. (19,72 por cento), Arcabobacterium pyogenes (18,13 por cento) e Escherichia coli (12,68 por cento) os mais frequentes, havendo também a presença de Candida sp. (2,6 por cento). Na técnica de Reação em Cadeia da Polimerase (PCR), em 20 por cento das amostras foram detectados microrganismos com uma maior ocorrência de Mycoplasma hyosinoviae (34,09 por cento), Erysipelotrix tonsilarum (20,45 por cento) e Haemophilus parasuis (15,90 por cento). Os microrganismos mais frequentemente isolados em animais com artrite, apresentaram distribuição em todas as faixas etárias, entretanto a fase de crescimento/terminação apresentou maior percentual (69 por cento) de amostras positivas. Streptococcus spp. ocorreu em todas as fases sendo o microrganismo mais detectado. M. hyosinoviae foi observado principalmente em animais de creche. Na fase de crescimento/terminação as bactérias predominantes foram A. pyogenes, H. parasuis e E. tonsilarum. Aproximadamente metade dos casos foi negativo o que indica a provável ocorrência de processos degenerativos como a osteocondrose, embora a participação de infecções articulares e peri-articulares possam representar grandes perdas com menor ou maior impacto dependendo da fase de criação. Problemas articulares e/ou peri-articulares de origem infecciosas foram encontrados em todas as propriedades estudadas. O principal agente foi M. hyosynoviae, principalmente na creche, porém não se pode descartar o envolvimento de problemas degenerativos em associação.(AU)

In this study, 115 samples of articular and peri-articular liquid from swine with clinical suspected disease were collected from farrow (30.43 percent), nursery (44.35 percent) and growing-finishing (25.22 percent) phases of Intensive Pig Production Systems (IPPSs) for microbiological and molecular evaluation. A total of 57 (49.5 percent) samples was positive for at least one test. In bacterial isolation, 39.13 percent were positive, with highest frequency of Streptococcus spp. (19.72 percent), Arcanobacterium pyogenes (18.13 percent) and Escherichia coli (12.68 percent), and in some cases the fungus Candida sp. (2.6 percent). In the polymerase chain reaction test, 20 percent of the samples were positive mostly for Mycoplasma hyosinoviae (34.09 percent), Erysipelotrix tonsilarum (20.45 percent) and Haemophilus parasuis (15.90 percent). Almost all microorganisms were distributed over every growth phase, with a higher percentage of cases in the growing-finishing phase (69 percent). Streptococcus spp. were the principal microorganisms detected and were frequent in all phases. M. hyosinoviae was predomiant in the nursery phase. In the growing-finishing phase, A. pyogenes, H. parasuis and E. tonsilarum were predominant. About half of the cases were negative, what probably indicates degenerative processes like osteochondrosis; however articular and peri-articular infections still represent great economic losses with more or less impact depending on the growing phase of the pigs. Articular and peri-articular infectious problems were found in all herds analyzed. M. hyosinoviae mainly in nursery phase, however associated with degenerative processes, could not be excluded.(AU)

Comparação dos efeitos da aplicação intra-articular de ácido hialurônico de diferentes pesos moleculares em modelo de sinovite aguda induzida por LPS em equinos

Diversos experimentos em humanos e equinos discutem a eficácia do uso intra-articular do ácido hialurônico (AH). Pouco se sabe a respeito de seu potencial pró ou anti-inflamatório, bem como sobre a eficácia das moléculas de AH de diferentes pesos moleculares. O objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos anti-inflamatórios, anabólicos e antioxidantes da aplicação intra-articular de AH em sinovite aguda induzida por lipopolissacarídeo (LPS) em equinos. Foram utilizadas 24 articulações metacarpofalangeanas hígidas de 12 equinos jovens, avaliadas por exame físico, radiográfico e ultrassonográfico. As articulações foram divididas aleatoriamente em três grupos de oito, sendo o grupo controle tratado com triancinolona (TA) (10 mg), o grupo AH de baixo peso molecular (AH-BPM), e o grupo AH de alto peso molecular (AH-APM). Inicialmente, foram aplicados 0,25 ng de LPS por via intra-articular (momento 0). Após uma hora (momento 1), coletou-se líquido sinovial (LS) para contagem celular e imediatamente após realizado o tratamento com TA, AH-BPM ou AH-APM. Posteriormente, LS foi coletado nos momentos 8, 24 e 48 horas para contagem celular, avaliação do burst oxidativo, quantificação de prostaglandina E2 (PGE2), condroitim sulfato (CS), AH e mensuração do peso molecular do AH. Exame físico dos animais, incluindo mensuração da circunferência articular e avaliação de claudicação por meio do equipamento Lameness Locator® foi realizado em todos os momentos. As frequências cardíaca e respiratória dos animais aumentaram em todos os grupos às 8 horas (P<0,05), sendo menor no grupo TA. Em relação à circunferência articular o grupo AH-BPM apresentou maior aumento às 24 e 48 horas em relação aos outros grupos (p<0,05). O grau de claudicação do grupo AH-APM foi maior que o do grupo TA às 8 e 24 horas, mas similar ao grupo AH-BPM. O grupo TA apresentou maior quantidade de células nucleadas no LS do que o grupo AH-BPM as 24 e 28 horas e do que o grupo AH-APM às 48 horas. A concentração de PGE2 foi menor no grupo TA em relação ao grupo AH-APM às 8 horas, e a ambos os grupos que receberam AH às 48 horas (p<0,05). O grupo AH-APM mostrou maior concentração de AH às 8 horas do que os outros grupos, contudo às 48 horas o grupo TA mostrou maior concentração de AH do que os outros grupos (p<0,05). Também às 48 horas o grupo TA foi o que apresentou a menor porcentagem de AH de alto peso molecular (p<0,05). A maior concentração de CS no LS às 24 e 48 horas ocorreu no grupo TA, também observou-se o grupo TA foi o único em que a concentração de CS aumentou as 8 horas em relação aos valores basais. O grupo AH-APM foi o que apresentou menor concentração de CS às 8 horas (p<0,05). O grupo tratado com AH-BPM apresentou maior intensidade de fluorescência nos momentos 24 e 48 horas (p<0,05). Apesar da triancinolona possuir efeito superior ao ácido hialurônico no controle da inflamação, ela possui efeito catabólico sobre a cartilagem articular, demonstrado pelo aumento da concentração de CS, além de quebra da molécula de AH no líquido sinovial. O AH-APM é mais indicado para terapia intra-articular em equinos uma vez que demonstrou menor efeito catabólico e oxidativo do que o AH-BPM

Several experiments have compared the efficacy of intra-articular usage of hyaluronic acid (HA) within horses. Little is known about the effectiveness of different subtypes of HA in terms of its pro- and anti-inflammatory potential. The goal of this study was to investigate the anti-inflammatory, anabolic and antioxidant effects of intra-articular application of HA in acute synovitis induced by lipopolysaccharide (LPS) in horses. 24 metacarpophalangeal joints of 12 young horses without musculoskeletal alterations were subjected to lameness examination (Lameness Locator®), radiography and ultrasound. These joints were divided into three groups: a positive control group treated with triamcinolone acetonide (TA) (10mg) and 2 experimental groups treated with either hyaluronic acid of low molecular weight (HA- LMW) or hyaluronic acid of high molecular weight (HA- HWM). Initially, all joints were injected with 0.25ng of LPS. After an hour, synovial fluid (SF) was collected for cell counting. TA, HA- HWM or HA- LMW treatments were then applied to the joints. After treatment applications, SF was collected at 3 different time points (8, 24 and 48 hours) for cell counts, oxidative burst evaluation, prostaglandin E2 (PGE2) quantification, chondroitin sulfate (CS), HA and molecular weight measurements. Physical examinations, circumference measurements and lameness evaluations were carried out at each time point. The heart and respiratory rate of the animals increased in all groups at 8 hours (p <0.05), that increase was lower in the TA group. Regarding the circumference of the joint the HA-LMW group showed a greater increase at 24 and 48 hours compared to the other groups (p <0.05). The lameness of the HA-HMW group was higher than the TA group at 8 and 24 hours, but similar to the HA-LMW group. The TA group had a higher nucleated cells count in the SF compared to the HA-LMW group at 24 hours and 28 hours, and higher than the HA-HMW group at 48 hours. The PGE2 concentration was lower in the TA group in relation to the HA-HMW group at 8 hours, and lower than both groups that received HA at 48 hours (p <0.05). The HA-HMW group showed higher HA concentration at 8 hours than the other groups at 48 hours. However, the TA group showed higher HA concentration than the other groups (p <0.05). Also, at 48 hours the TA group was the one with the lowest percentage of high molecular weight HA (p <0.05). The highest concentration of CS in SF at 24 and 48 hours occurred in the TA group, and it was also observed in the TA group was the only one in which the concentration of CS increased at eight hours compared to baseline. The HA-HMW group showed the lowest concentration of CS at 8 hours (p <0.05). The group treated with HA-LMW showed higher fluorescence intensity at 24 and 48 hours (p <0.05). Although triamcinolone have an superior effect of hyaluronic acid in controlling inflammation, it has catabolic effects on cartilage, shown by increased concentration of CS, and breakage of the HA molecule in synovial fluid. The HA-HMW is recommended for intra-articular therapy in equine joints since it showed less oxidative and catabolic effects.

Estudo in vitro do potencial de diferenciação condrogênico e osteogênico de células mesenquimais obtidas de líquido e membrana sinovial de equinos

Na espécie equina, as enfermidades osteoarticulares causam prejuízo econômico e impacto negativo no desempenho atlético, devido aos danos causados na cartilagem articular. A regeneração da cartilagem hialina e a manutenção da integridade das estruturas que a compõe norteiam a busca do tratamento ideal. Neste contexto, este estudo foi delineado com o objetivo de investigar a presença de células-tronco mesenquimais (CTMs) no líquido sinovial (LS) e na membrana sinovial (MS) de equinos com articulações hígidas, com osteocondrite dissecante (OCD) e com osteoartrite (OA) e compará-las, visando estabelecer qual fonte celular possui melhor característica fenotípica e capacidade de diferenciação celular, mais especificamente, aquela que seja superior em relação à capacidade condrogênica. Foram utilizados equinos machos e fêmeas de diferentes idades, totalizando 97 articulações. O LS e MS foram coletados durante artroscopia e as células foram cultivadas, e avaliadas por citometria de fluxo com os anticorpos CD44, CD90, CD105, CD34; e por imunocitoquímica com os anticorpos nanog, oct4, PGP 9.5, lisozima, vimentina e citoqueratina. Adicionalmente, o potencial de diferenciação das células foi avaliado para as linhagens condrogênica, osteogênica e adipogênica. Foi realizado teste de tumorigenicidade em camundongos Balb- Cnu/nu, para comprovar aplicabilidade clínica, e posteriormente, as CTMs provenientes de LS de articulações hígidas foram aplicadas em articulações de equinos. A identidade das células foi comprovada durante o cultivo demonstrando características de adesão ao plástico e morfologia fibroblastóide. A média percentual das populações positivas para CD90 foi de 64,9% (LS-H), 48,3% (LS-OCD), 48,1% (LS-OA), 66,6% (MS-H), 40,2% (MS-OCD) e 40,3% (MS-OA). A porcentagem de células positivas para CD44 foi de 1,18% (LS-H), 3,98% (LS-OCD), 14,2% (LS-OA), 1,9% (MS-H), 2,17% (MS-OCD) 8,56% (MS-OA). Não foi observada expressão dos anticorpos CD34 e CD105. Na análise imunocitoquímica foi detectada expressão positiva para os anticorpos: lisozima, PGP 9.5, PCNA e vimentina, e negativa para nanog, oct4 e citoqueratina. A multipotência (osteogênica, condrogênica e adipogênica) das células foi confirmada através da coloração Alizarin Red para detecção de matriz de cálcio, Oil Red O para detecção de gotículas de gordura e azul de toluidina, alcian blue e hematoxilina eosina para detecção de matriz de proteoglicanos. Com relação aos resultados do teste tumorigênico, nenhum órgão dos camundongos foi afetado, assegurando a aplicabilidade das células estudadas. Ainda, as articulações de equinos tratadas, não apresentaram quaisquer sinais de reação inflamatória após aplicação de células alogênicas. Por fim, concluímos que, a fenotipagem positiva de CD44 e CD90 somada à capacidade de diferenciação nas linhagens osteogênica e condrogênica confirma a presença de CTMs nas populações celulares obtidas de LS e MS de equinos. Também foi observado que as células de LS provenientes de articulações hígidas, são as de melhor utilização clínica, uma vez que apresentaram maior expressão de CD90 e demonstraram melhor capacidade de diferenciação celular em relação às células derivadas de articulações enfermas. Além disso, possuem método mais fácil de colheita em relação à colheita de MS, visando futura terapia celular na rotina clínica.

In the equine species, osteoarticular diseases cause significant economic losses and negative impact on equine athletic performance. The hyaline cartilage regeneration and the maintenance of integrity of its components guide the search for the ideal treatment. In this scenario, this study aimed to investigate the presence of mesenchymal stem cell (MSCs) in the synovial fluid (SF) and in the synovial membrane (SM) of healthy equine joints, osteoarthritic (OA) and osteochondritic joints (OCD), comparing their potential as cellular sources, according to their differentiation ability, in particular with superior chondrogenic potential and the phenotypic characteristics of the MSCs. Ninety-seven equine joints from males and females of different ages were used to harvest cells. SF and SM were obtained during arthroscopy and the cells SF and SM were cultured and assessed for CD90, CD44, CD105 and CD34 markers by flow cytometry, and nanog, oct4, PGP 9.5, lyzozyme, vimentin and cytokeratin were assessed by immunocytochemistry. Additionally, cells were evaluated in vitro for their osteogenic, adipogenic and chondrogenic differentiation potential. The tumorigenicity test was carried in Balb-C nu/nu mice, to verify the safety of cell sources and, later, mesenchymal stem cells harvested from healthy equine joints were injected into equine joints. The identity of these cells was confirmed during cell growth, through properties of plastic adhesion and fibroblastoid morphology. The mean percentage of CD90 positive cells was 64.9% (SF-H), 48.3% (SF-OCD), 48.1% (SF-OA), 66.6% (SM-H), 40.2% (SM- OCD) and 40.3% (SM-OA). The percentage of CD44 positive cells was 1.18 % (SF-H), 3.98% (SFOCD), 14.2% (SF-OA), 1.9% (SM-H), 2.17% (SM-OCD) and 8.56% (SM-OA). The expression of CD34 and CD105 antibodies was not observed. Through immunocytochemical analysis, expression for lysozyme, PGP9.5, PCNA e vimentin antibodies was detected and negative expression for nanog, oct4 e cytokeratin was observed. The multipotent capacity of mesenchymal stromal cells for lineage differentiation (osteogenic, chondrogenoic and adipogenic) was confirmed with different staining techniques: Alizarin Red enabled detection of the calcium matrix, Oil Red O enabled the detection of fat droplets and Toluidin Blue, Alcian Blue and haematoxylin eosin enabled detection of proteoglycan matrix. Results of tumorigenic tests in mice showed no compromise of any internal organ, assuring applicability of the studied cells. Furthermore, equine joints treated with MSC harvested from healthy joints did not show any signs of an inflammatory reaction after injection of the allogeneic cells. The presence of cells with positive CD44 and CD90 phenotypes and with the ability to differentiate into osteogenic and chondrogenic lineages confirms the presence of MSCs in equine SF and SM. Cells obtained from healthy SF were more suitable for clinical application, for they presented higher CD90 expression and demonstrated greater differentiation capabilities, when compared to that of cells retrieved from compromised joints. In addition to that, SF derived cells are easier to obtain when compared to SM cells, aiming their future application clinical.

Artrite traumática em equino: relato de caso / Traumatic arthritis in the horse: a case report / Artritis traumática en el caballo: reporte de un caso

A artrite é uma inflamação que ocorre nos tecidos moles que compõe o espaço articular podendo evoluir para processo degenerativo como a osteoartrite, pela liberação de enzimas, mediadores inflamatório se citocinas. Um equino, fêmea, raça Quarto de Milha, pelagem castanha, de 4 anos de idade, utilizado para provas de laço em dupla, foi atendida no dia 6 de agosto de 2014 no Hospital Veterinário da UENP com o histórico de aumento da volume na região articular dos carpos do membro esquerdo. O exame do aparelho locomotor revelou claudicação de grau IV,aumento de volume de consistência flutuante, dor apalpação,aumento de temperatura local e edema na região dorsal dos carpos, aumento de temperatura local e edema na região dorsal da região cárpica. Exames radiográficos e análise do líquido sinovial foram realizados.O tratamento recomendado foi realizado no hospital, e na semana seguinte o animal apresentou melhora.

Arthritis is an inflammation that occurs in the soft tissues that make up the joint space mayprogress to degenerative process such as osteoarthritis, by releasing enzymes, inflammatory mediators and cytokines. One horse, female, Quarter Horse, brown fur, 4 years old, used for tests of double-Ioop, wasserved on August 6,2014 at the Veterinary Hospital of UENP with historical increase in volume in the regioncarpal joint of the left limb. The examination of the locomotor system revealed lameness grade IV, swellingfloating consistency, pain during palpation, increased local temperature and edema in the dorsal region ofCarpi, increased local temperature and edema in the dorsal region of the carpal region. Radiographicexaminations and synovial fluid analysis were performed. The recommended treatment was performed inthe hospital, and the following week the animal showed improvement.

La artritis es una irf!~maci~r ql!~se produce en los tejidos blandos que conforman el espaciode Ia articulación puede progresar a proceso degenerativo tales como Ia osteoartritis, mediante Ia liberación de enzimas, mediadores inflamatorios y citoquinas. Un caballo, femenino, Cuarto de milla, piei marrón, de4 anos, que se utiliza para Ias pruebas de doble circuito, se sirvió el 6 de agosto de 2014 el Hospital Veterinario de UENP con aumento histórico en volumen en Ia región carpo de Ia extremidad izquierda. EIexamen dei aparato locomotor reveló Ia cojera grado IV, hinchazón consistencia flotante, dolor durante Ia palpación, aumento de Ia temperatura local y el edema en Ia región dorsal de Carpi, aumento de Ia temperaturalocal y el edema en Ia región dorsal de Ia región carpiano. Se lIevaron a cabo exámenes radiográficos yanálisis dei líquido sinovial. EI tratamiento recomendado se lIevó a cabo en el hospital, y Ia semana siguienteel animal mostró una mejoría.

Artrite traumática em equino: relato de caso / Traumatic arthritis in the horse: a case report / Artritis traumática en el caballo: reporte de un caso

A artrite é uma inflamação que ocorre nos tecidos moles que compõe o espaço articular podendo evoluir para processo degenerativo como a osteoartrite, pela liberação de enzimas, mediadores inflamatório se citocinas. Um equino, fêmea, raça Quarto de Milha, pelagem castanha, de 4 anos de idade, utilizado para provas de laço em dupla, foi atendida no dia 6 de agosto de 2014 no Hospital Veterinário da UENP com o histórico de aumento da volume na região articular dos carpos do membro esquerdo. O exame do aparelho locomotor revelou claudicação de grau IV,aumento de volume de consistência flutuante, dor apalpação,aumento de temperatura local e edema na região dorsal dos carpos, aumento de temperatura local e edema na região dorsal da região cárpica. Exames radiográficos e análise do líquido sinovial foram realizados.O tratamento recomendado foi realizado no hospital, e na semana seguinte o animal apresentou melhora. (AU)

Arthritis is an inflammation that occurs in the soft tissues that make up the joint space mayprogress to degenerative process such as osteoarthritis, by releasing enzymes, inflammatory mediators and cytokines. One horse, female, Quarter Horse, brown fur, 4 years old, used for tests of double-Ioop, wasserved on August 6,2014 at the Veterinary Hospital of UENP with historical increase in volume in the regioncarpal joint of the left limb. The examination of the locomotor system revealed lameness grade IV, swellingfloating consistency, pain during palpation, increased local temperature and edema in the dorsal region ofCarpi, increased local temperature and edema in the dorsal region of the carpal region. Radiographicexaminations and synovial fluid analysis were performed. The recommended treatment was performed inthe hospital, and the following week the animal showed improvement. (AU)

La artritis es una irf!~maci~r ql!~se produce en los tejidos blandos que conforman el espaciode Ia articulación puede progresar a proceso degenerativo tales como Ia osteoartritis, mediante Ia liberación de enzimas, mediadores inflamatorios y citoquinas. Un caballo, femenino, Cuarto de milla, piei marrón, de4 anos, que se utiliza para Ias pruebas de doble circuito, se sirvió el 6 de agosto de 2014 el Hospital Veterinario de UENP con aumento histórico en volumen en Ia región carpo de Ia extremidad izquierda. EIexamen dei aparato locomotor reveló Ia cojera grado IV, hinchazón consistencia flotante, dolor durante Ia palpación, aumento de Ia temperatura local y el edema en Ia región dorsal de Carpi, aumento de Ia temperaturalocal y el edema en Ia región dorsal de Ia región carpiano. Se lIevaron a cabo exámenes radiográficos yanálisis dei líquido sinovial. EI tratamiento recomendado se lIevó a cabo en el hospital, y Ia semana siguienteel animal mostró una mejoría. (AU)

Características fisicoquímicas e citológicas do líquido sinovial da articulação temporomandibular em eqüinos / Physical, biochemical and cytological characteristics of the equine temporomandibular joint synovial fluid

Foram estudadas as características fisicoquímicas e citológicas do líquido sinovial da articulação temporomandibular de dez eqüinos hígidos. Verificou-se que o líquido é viscoso, amarelo claro a citrino, límpido e livre de partículas à temperatura ambiente. Houve contaminação da amostra por sangue em três amostras que se apresentaram amarelo avermelhadas a vermelhas e de aspecto turvo. A taxa de glicose variou entre 100 e 250 e a concentração protéica não ultrapassou 3,8g/dL. O número médio de células nucleadas foi de 417 células/µL, com predominância de grandes células mononucleares e linfócitos. As mensurações das características pesquisadas no líquido sinovial da articulação temporomandibular de eqüinos são de execução simples e passíveis de implantação na rotina de atendimentos clínico-cirúrgicos.(AU)

Physical, biochemical and cytological characteristics of the temporomandibular joint synovial fluid were studied in ten clinically normal horses. It is a viscous, pale yellow, clear fluid and without flocculent material at room temperature. There was blood contamination in three samples, they presented red-yellow to red and cloudy. The range of glucose levels were 100 to 250 and its protein concentration was up to 3,8g/dL. Nucleated cells mean number was 417 cells/µL, with predominating large mononuclear cells and lymphocytes. Equine temporomandibular synovial fluids can be easily evaluated, being feasible in clinical and surgical routine, and the information may be useful to the diagnosis, treatment and prognosis of animals with temporomandibular alterations.(AU)

Diagnóstico da leishmaniose visceral canina por meio de amostras de conjuntiva ocular, humor aquoso, membrana sinovial, líquido sinovial e líquido cefalorraquidiano

A Leishmaniose Visceral Canina (LVC) é uma zoonose sistêmica grave, causada pelo protozoário intracelular obrigatório Leishmania infantum. Os cães são considerados os principais reservatórios da doença e podem desenvolver desde a infecção assintomática, a uma variedade de sinais clínicos, tais como linfadenopatia periférica, perda de peso, letargia, lesões ulcerativas de pele e febre. Alterações oculares, ortopédicas e neurológicas também podem ser observadas associadas à LVC, tais como ceratoconjuntivite, uveíte, convulsões, alterações comportamentais, artralgia e claudicação. Tal fato inclui a doença no diagnóstico diferencial das afecções oftálmicas, osteoarticulares e neurológicas, principalmente em áreas consideradas endêmicas para a infecção. O objetivo deste trabalho foi realizar o diagnóstico da leishmaniose visceral canina utilizando amostras de conjuntiva, humor aquoso, líquido sinovial, membrana sinovial e líquido cefalorraquidiano (LCR). O teste ELISA foi aplicado em amostras de LCR, líquido sinovial e humor aquoso; e avaliações histológica e imunohistoquímica foram realizadas na conjuntiva e na membrana sinovial. As amostras foram coletadas de 20 cães sorologicamente positivos para leishmaniose visceral. Através do Ensaio Imunoenzimático foi possível detectar anticorpos IgG anti-Leishmania em uma das amostras de LCR e de humor aquoso, e em seis amostras de líquido sinovial. A imunohistoquímica apresentou marcação positiva de formas amastigotas de L. infantum em cinco membranas sinoviais e cinco conjuntivas estudadas. Diante dos resultados, conclui-se que formas amastigotas de Leishmania sp. são encontradas parasitando a membrana sinovial e a conjuntiva de cães sorologicamente positivos para a doença, bem como anticorpos IgG específicos no humor aquoso, no LCR e no líquido sinovial desses animais.

Canine Visceral Leishmaniasis (CVL) is a severe systemic zoonosos caused by the obligate intracellular protozoan Leishmania infantum. The dogs are the major reservoir of the disease and may develop since asymptomatic infection to a variety of clinical signs, such as peripheral lymphadenopathy, weight loss, lethargy, ulcerative lesions of the skin and fever. Ocular, orthopedic and neurological disorders can also be seen associated with CVL, such as keratitis, seizures, behavioral changes, joint pain and lameness. This fact includes the disease in the differential diagnosis of ophthalmic disorders, osteoarticular and nervous system, especially in endemic areas to infection. The aim of this study was the diagnosis of canine visceral leishmaniasis using samples of conjunctiva, aqueous humor, synovial fluid, synovial membrane and cerebrospinal fluid (CSF). The ELISA test was applied to samples of CSF, synovial fluid and aqueous humor, and histological and immunohistochemical evaluations were performed in the conjunctiva and in the synovial membrane of these animals. The samples were collected from 20 dogs serologically positive for visceral leishmaniasis. Through the immunoenzymatic assay could detect anti-Leishmania IgG antibodies in a sample of CSF and aqueous humor, and six samples of synovial fluid. Immunohistochemistry showed positive staining of amastigotes of L. infantum five synovial membranes and connective five studied. From the results, we conclude that amastigotes of Leishmania sp. are found parasitizing the synovial membrane and the conjunctiva of dogs serologically positive for the disease, as well as specific IgG antibodies in aqueous humor, CSF and synovial fluid of these animals.

Obtenção e caracterização de linhagens celulares de membrana e líquido sinoviais equinos / Obtention and characterization of cell lines from equine synovial membrane and synovial fluid

A cartilagem articular é um tecido avascular, com baixa celularidade, composta principalmente de colágeno extracelular e proteoglicanos, com uma capacidade limitada de regeneração. Nos últimos anos, diversas abordagens clínicas e de pesquisa têm sido adotadas para reparar danos na cartilagem articular, como transplante de condrócitos, enxerto de periósteo, células-tronco mesenquimais e tecidos derivados dessas células. O isolamento de células-tronco mesenquimais foi relatado a partir de diferentes tecidos, incluindo medula óssea, tecido adiposo, sangue do cordão umbilical, sangue periférico e saco vitelino em equinos. As células-tronco mesenquimais derivadas de líquido e membrana sinoviais foram obtidas em humanos, cães, suínos e caprinos e são fontes promissoras para regeneração articular, já que são tecido-específicas e de fácil obtenção e cultivo. O objetivo deste trabalho foi estabelecer e caracterizar a linhagens de células obtidas de membrana e líquido sinoviais equinos. Os fragmentos foram obtidos por meio de artroscopias e cultivados em meios de cultura DMEM-H e MEM para obtenção das linhagens. Para análise da morfologia celular foi realizada a fotodocumentação das garrafas em microscopia invertida. A expressão de marcadores de células-tronco (CD45RO, OCT3/4, NANOG, CD105, CD90, CD34, CD117, CD133, TRA-1-81, VEGF-R1 e Ly6a), marcadores inflamatórios (COX-2, TNF-R1-r, CD11, CD1a e MCP-1) e marcadores envolvidos na checagem e progressão do ciclo celular (Caspase-3 fosforilada, HSP-47, P21, Ki67, Ciclina D1 e P53) mostraram diferencialmente expressos, sugerindo que podemos considerá-las uma possível fonte de células-tronco mesenquimais. Devido ao grande impacto que patologias na articulação têm sobre o desempenho atlético em cavalos, os resultados demonstrados neste trabalho será uma base para conduzir outros experimentos na avaliação das aplicações terapêuticas dessas células

The articular cartilage is an avascular tissue with low cellularity composed of extracellular collagen and proteoglicans. It has a limited capacity of regeneration. Condrocyte transplantation, mesenchymal stem cells and tissues derived from these cells has been used by several researches to repair damage to the articular cartilage. The isolation of mesenchymal stem cells has been reported from different tissues such as bone marrow, adipose tissue, blood, umbilical cord, and yolk sac. The mesenchymal stem cells from synovial fluid and synovial membrane were obtained from humans, dogs, pigs and goats. These cells are tissue specific and easy to obtain and cultivate. The objective of this research is to obtain and characterize cells from equine synovial fluid and synovial membrane. The samples were obtained by arthroscopy and cultivated in the DMEM-H and MEM media. Cell morphology analyses were made by photodocumentation in inverted microscopy. The expression of stem cell markers (CD45RO, OCT3/4, NANOG, CD105, CD90, CD34, CD117, CD133, TRA-1-81, VEGF-R1 and Ly6a), inflammation markers (COX-2, TNF-R1-r, CD11, CD1a and MCP-1) and markers involved in checking and cell cycle progression (Caspase-3, HSP-47, P21, Ki67, Ciclina D1 and P53) showed differentially expressed. Mesenchymal stem cells from synovial membrane and synovial fluid provide promise for cell-based therapies for articular cartilage repair. These results may lead other experiments to use these cells to new therapeutic applications