Estudo da ocorrência de otopatias em felinos domésticos no município de Fortaleza/CE / Study of the occurrence of otopathies in domestic felines in the municipality of Fortaleza/CE

Estima-se que as otites externas estão presentes em 2 a 10% dos atendimentos na clínica de felinos, correspondendo a uma afecção clinicamente desafiadora nessa espécie. Diante disso, este trabalho tem como objetivo realizar um levantamento retrospectivo da ocorrência de otopatias em felinos no município de Fortaleza/CE, em um período de três anos, contribuindo para o estabelecimento do perfil epidemiológico da região. O estudo foi realizado através da coparticipação de médicos-veterinários dermatólogos e clínicos de felinos, sendo elaborado de forma retrospectiva avaliando-se fichas clínicas de gatos com histórico de otopatias. Os dados demonstraram uma maior frequência de otites associadas às causas infecciosas, com 30% dos gatos acometidos pela levedura Malassezia spp., 17% por bactérias do tipo cocos e 1% pelo fungo dimórfico Sporothix schencki, seguido de origem parasitária pelos ácaros Otodectes cynotis e Notoedres cati com 18% e 2% dos animais estudados, respectivamente. Na associação entre os patógenos, a maior incidência correspondeu à infecção mista por fungos e bactérias (17%). Tratando-se de raças, os SRD obtiveram uma maior frequência geral no estudo e gatos machos foram mais acometidos em relação às fêmeas. Logo, ressalta-se a importância de estudos retrospectivos para a saúde única, a partir do estabelecimento do perfil epidemiológico da região e da identificação de potenciais agentes zoonóticos.

It is estimated that external otitis accounts for 2 to 10% of attendances at to the feline clinics, corresponding to a clinically challenging condition in this species. This work aims to carry out a retrospective survey of the occurrence of otopathies in cats in the city of Fortaleza/Ce in a period of 3 years, contributing to the establishment of the epidemiological profile of the region. The study was carried out through the co-participation of veterinarians, dermatologists and feline clinicians, and was elaborated retrospectively by evaluating clinical records of cats with a history of ear diseases. The data showed a higher frequency of otitis associated with infectious causes, with 30% of cats affected by the yeast Malassezia spp., 17% by coccus-type bacteria, and 1% by the dimorphic fungus Sporothix schencki, followed by otitis of parasitic origin caused by the mites Otodectes cynotis and Notoedres cati, corresponding to 18% and 2% of the studied animals, respectively. In the association between pathogens, the highest incidence corresponded to mixed infection by fungi and bacteria (17%). Regarding the breeds, SRD presented a higher overall frequency in the study, and male cats were more affected than females. Therefore, the importance of retrospective studies for single health is emphasized, based on the establishment of the epidemiological profile of the region and the identification of potential zoonotic agents.

Estudo retrospectivo das otites em cães e gatos atendidos no Hospital Veterinário em Santos/SP / Retrospective study of otitis in dogs and cats admitted at the Veterinary Hospital in Santos/SP

A otite é um processo inflamatório envolvendo tecidos de revestimento e estruturas associadas aos ouvidos caninos e felinos, sendo uma alteração dermatológica multifatorial, que representa 10% a 20% dos atendimentos na clínica médica. Os sinais envolvidos na otite, incluem: prurido, meneios cefálicos e presença de exsudato no conduto auditivo. A citologia otológica é um método útil no diagnóstico de otite, podendo sugerir a presença de patógenos a partir de sua morfologia, tais como bastonetes, cocos, leveduras e ácaros. O objetivo deste trabalho consistiu na avaliação retrospectiva dos prontuários clínicos de cães e gatos atendidos no Centro Médico Veterinário São Judas – campus Unimonte, durante o período de janeiro de 2014 a janeiro de 2018 a fim de analisar quanto a influência racial, sexo, idade e identificação dos agentes etiológicos por meio da citologia otológica. De acordo com os resultados obtidos, observou-se o acometimento de 679 (94%) animais da espécie canina e 40 (6%) da espécie felina. Quanto às raças, 349 (67%) eram cães Sem Raça Definida e 35 (87%) gatos Sem Raça Definida, no quesito de faixa etária, a espécie canina obteve 335 (49%) com idade igual ou superior a 5 anos e na espécie felina, 20 (50%) com idade de 01 a 05 anos de idade. No diagnóstico citológico houve predomínio de otite causada por Malassezia spp. No presente estudo, pode-se concluir que a maior parte das otites na espécie canina está relacionada com a infecção fúngica, seguida de otite sem ação de patógenos envolvidos, porém uma minoria destes cães apresentavam neoplasia em conduto auditivo unilateral e infecção mista e na espécie felina está relacionada com a infecção fúngica, otoacaríase e infecção mista.

Otitis is an inflammatory process involving lining tissues and structures associated with the canine and feline ear, being a multifactorial dermatological alteration, which represents 10% to 20% in medical clinic visits. The signs involved in otitis include: pruritus, cephalic wiggles and the presence of exudate in the ear canal. Otological cytology is a useful methond in the diagnosis of otitis, and may suggest the presence of microorganisms from its morphology, such as rods, coconuts, yeasts and mite. The objective of this work consisted of a restropective evaluate of the clinical record of dogs and cats attendend at the Center Medical Veterinary São Judas – Campus Unimonte, from January 2014 to January 2018 in order to analyze the racial influence, sex, age and identification of the etiological agentes through otological cytology. According to the results obtained, 679 (94%) in the canine species and 40 (6%) in the feline were affected. As for the breeds, 349 (67%) were dogs with no defined breed and 35 (87%) cats with no defined breed, in terms of age, the canine species obtained 335 (49%) aged 5 years and over in feline species 20 (50%) aged 01 to 05 years old. In the cytological diagnosis, there was a predominance of otitis caused by the yeast Malassezia spp. In the presente study, it can be concluded that most otitis in the canine species is related to fungal infection, folllowed by otitis without the action pf pathogens involved, however a minotity of these dog had neoplasia in unilateral ear canal and mixed infection and in the feline species it is related to fungal infection, otoachariasis and mixed infection.

Estudo retrospectivo das otites em cães e gatos atendidos no Hospital Veterinário em Santos/SP / Retrospective study of otitis in dogs and cats admitted at the Veterinary Hospital in Santos/SP

A otite é um processo inflamatório envolvendo tecidos de revestimento e estruturas associadas aos ouvidos caninos e felinos, sendo uma alteração dermatológica multifatorial, que representa 10% a 20% dos atendimentos na clínica médica. Os sinais envolvidos na otite, incluem: prurido, meneios cefálicos e presença de exsudato no conduto auditivo. A citologia otológica é um método útil no diagnóstico de otite, podendo sugerir a presença de patógenos a partir de sua morfologia, tais como bastonetes, cocos, leveduras e ácaros. O objetivo deste trabalho consistiu na avaliação retrospectiva dos prontuários clínicos de cães e gatos atendidos no Centro Médico Veterinário São Judas campus Unimonte, durante o período de janeiro de 2014 a janeiro de 2018 a fim de analisar quanto a influência racial, sexo, idade e identificação dos agentes etiológicos por meio da citologia otológica. De acordo com os resultados obtidos, observou-se o acometimento de 679 (94%) animais da espécie canina e 40 (6%) da espécie felina. Quanto às raças, 349 (67%) eram cães Sem Raça Definida e 35 (87%) gatos Sem Raça Definida, no quesito de faixa etária, a espécie canina obteve 335 (49%) com idade igual ou superior a 5 anos e na espécie felina, 20 (50%) com idade de 01 a 05 anos de idade. No diagnóstico citológico houve predomínio de otite causada por Malassezia spp. No presente estudo, pode-se concluir que a maior parte das otites na espécie canina está relacionada com a infecção fúngica, seguida de otite sem ação de patógenos envolvidos, porém uma minoria destes cães apresentavam neoplasia em conduto auditivo unilateral e infecção mista e na espécie felina está relacionada com a infecção fúngica, otoacaríase e infecção mista.(AU)

Otitis is an inflammatory process involving lining tissues and structures associated with the canine and feline ear, being a multifactorial dermatological alteration, which represents 10% to 20% in medical clinic visits. The signs involved in otitis include: pruritus, cephalic wiggles and the presence of exudate in the ear canal. Otological cytology is a useful methond in the diagnosis of otitis, and may suggest the presence of microorganisms from its morphology, such as rods, coconuts, yeasts and mite. The objective of this work consisted of a restropective evaluate of the clinical record of dogs and cats attendend at the Center Medical Veterinary São Judas Campus Unimonte, from January 2014 to January 2018 in order to analyze the racial influence, sex, age and identification of the etiological agentes through otological cytology. According to the results obtained, 679 (94%) in the canine species and 40 (6%) in the feline were affected. As for the breeds, 349 (67%) were dogs with no defined breed and 35 (87%) cats with no defined breed, in terms of age, the canine species obtained 335 (49%) aged 5 years and over in feline species 20 (50%) aged 01 to 05 years old. In the cytological diagnosis, there was a predominance of otitis caused by the yeast Malassezia spp. In the presente study, it can be concluded that most otitis in the canine species is related to fungal infection, folllowed by otitis without the action pf pathogens involved, however a minotity of these dog had neoplasia in unilateral ear canal and mixed infection and in the feline species it is related to fungal infection, otoachariasis and mixed infection.(AU)

Topical treatment of external otitis in cats with combination of levofloxacin, miconazole and dexamethasone / Tratamento tópico de otite externa em gatos com a associação de levofloxacina, miconazol e dexametasona

The objective of this work was to evaluate the efficacy of a topical formulation containing levofloxacin, miconazole, and dexamethasone in the treatment of external otitis in cats. Eighteen cats showing clinical signs of external otitisin the video otoscopy examination and cerumen cytologywere evaluated. The animals were divided into three groups of six animals. Group 1 (G1) was the control group; Group 2 (G2) was treated with a combination of 0.5% levofloxacin, 2% miconazole, and 0.02% dexamethasone, using distilled water as the vehicle; and Group 3 (G3) was treated with the same combination, using vegetable glycerin as the vehicle. The animals were reassessed weekly; animals in G1 had no improvement of clinical signs of otitis or in the findings in the cerumen cytology. However, animals in G2 and G3 showed improvement of clinical signs, and control of yeasts and/or bacteria in the cytological examination of the ear after seven days of treatment. Based on the results, the formulation containing the combination of levofloxacin, miconazole, and dexamethasone was effective in controlling the perpetuating factors of external otitis in cats.

O objetivo deste trabalho foi avaliar a eficácia de uma formulação tópica contento levofloxacina, miconazol e dexametasona no tratamento da otite externa em gatos. Foram utilizados 18 gatos que apresentavam sinais clínicos de otite externa no exame de videotoscopia e na citologia do cerúmen. Os animais foram divididos em três grupos com seis animais cada. O grupo 1 foi o grupo controle; grupo 2 foi tratado com a associação de levofloxacina 0,5%, miconazol a 2% e dexametasona 0,02% sendo o veículo água destilada; já o grupo 3 foi medicado com a mesma associação, sendo o veículo glicerina vegetal. Os animais foram reavaliados semanalmente e os animais do grupo controle não tiveram melhora dos sinais clínicos de otite e nos achados na citologia de cerúmen. No entanto, os animais do grupo 2 e 3 apresentaram melhora dos sinais clínicos e no controle de leveduras e/ou bactérias no exame citológico de ouvido a partir de sete dias de tratamento. Com base nos resultados foi possível concluir que a formulação contendo a associação levofloxacina + miconazol + dexametasona foi eficaz no controle dos fatores perpetuantes da otite externa em gatos.

Topical treatment of external otitis in cats with combination of levofloxacin, miconazole and dexamethasone / Tratamento tópico de otite externa em gatos com a associação de levofloxacina, miconazol e dexametasona

The objective of this work was to evaluate the efficacy of a topical formulation containing levofloxacin, miconazole, and dexamethasone in the treatment of external otitis in cats. Eighteen cats showing clinical signs of external otitisin the video otoscopy examination and cerumen cytologywere evaluated. The animals were divided into three groups of six animals. Group 1 (G1) was the control group; Group 2 (G2) was treated with a combination of 0.5% levofloxacin, 2% miconazole, and 0.02% dexamethasone, using distilled water as the vehicle; and Group 3 (G3) was treated with the same combination, using vegetable glycerin as the vehicle. The animals were reassessed weekly; animals in G1 had no improvement of clinical signs of otitis or in the findings in the cerumen cytology. However, animals in G2 and G3 showed improvement of clinical signs, and control of yeasts and/or bacteria in the cytological examination of the ear after seven days of treatment. Based on the results, the formulation containing the combination of levofloxacin, miconazole, and dexamethasone was effective in controlling the perpetuating factors of external otitis in cats.(AU)

O objetivo deste trabalho foi avaliar a eficácia de uma formulação tópica contento levofloxacina, miconazol e dexametasona no tratamento da otite externa em gatos. Foram utilizados 18 gatos que apresentavam sinais clínicos de otite externa no exame de videotoscopia e na citologia do cerúmen. Os animais foram divididos em três grupos com seis animais cada. O grupo 1 foi o grupo controle; grupo 2 foi tratado com a associação de levofloxacina 0,5%, miconazol a 2% e dexametasona 0,02% sendo o veículo água destilada; já o grupo 3 foi medicado com a mesma associação, sendo o veículo glicerina vegetal. Os animais foram reavaliados semanalmente e os animais do grupo controle não tiveram melhora dos sinais clínicos de otite e nos achados na citologia de cerúmen. No entanto, os animais do grupo 2 e 3 apresentaram melhora dos sinais clínicos e no controle de leveduras e/ou bactérias no exame citológico de ouvido a partir de sete dias de tratamento. Com base nos resultados foi possível concluir que a formulação contendo a associação levofloxacina + miconazol + dexametasona foi eficaz no controle dos fatores perpetuantes da otite externa em gatos.(AU)

Onychomycosis caused by Malassezia pachydermatis in a dog

Background: Malassezia species are commensal skin organisms of warm-blooded vertebrates that can act as opportunisticpathogens. Malassezia pachydermatis is of importance in both veterinary and human medicine. Recognised initially ascauses of infection of the skin, they are now known to be superficial commensals as well as potential causes of infections indomestic animals and more serious human conditions such as fungemia. They have also been implicated in the pathogenesisof allergic and other inflammatory diseases. Onychomycosis is defined as fungal infection of the claw (nail disease) causedby dermatophytes (Microsporum and Trichophyton genus), non-dermatophyte molds (hyaline and dematiaceous) and/oryeasts. The objective of this work was to report a case of canine onychomycosis by Malassezia pachydermatis based onreference standard diagnostics of this pathology.Case: A 9-year-old male West Highland White Terrier presented history of claw abnormality: brown staining and partlybrittle. The dog has no apparent history of trauma on the affected claw and no skin disease was reported. Direct examinationof claw was performed using the tape strip technique revealed Malassezia organisms. Nail fragments were cultured ontoSabouraud Dextrose Agar with Chloramphenicol and Cycloheximide. After 10 days of incubation (32ºC) nail fragmentsallowed the isolation of pure colonies of Malassezia pachydermatis. The histopathological evaluation was performed bySector of Veterinary Clinical Pathology, Faculdade de Veterinária (FAVET/UFRGS) and fungal infection due to Malasseziapachydermatis was confirmed by histopathologic examination (Hematoxylin and eosin and Grocott’s methenamine silverstain) of the nail, that revealed abundant yeasts (blastoconidia).Discussion: Fungal infection of the skin, hair and nails are common and are primary caused by the dermatophyte molds.Non-dermatophyte molds isolated from nails...

Onychomycosis caused by Malassezia pachydermatis in a dog

Background: Malassezia species are commensal skin organisms of warm-blooded vertebrates that can act as opportunisticpathogens. Malassezia pachydermatis is of importance in both veterinary and human medicine. Recognised initially ascauses of infection of the skin, they are now known to be superficial commensals as well as potential causes of infections indomestic animals and more serious human conditions such as fungemia. They have also been implicated in the pathogenesisof allergic and other inflammatory diseases. Onychomycosis is defined as fungal infection of the claw (nail disease) causedby dermatophytes (Microsporum and Trichophyton genus), non-dermatophyte molds (hyaline and dematiaceous) and/oryeasts. The objective of this work was to report a case of canine onychomycosis by Malassezia pachydermatis based onreference standard diagnostics of this pathology.Case: A 9-year-old male West Highland White Terrier presented history of claw abnormality: brown staining and partlybrittle. The dog has no apparent history of trauma on the affected claw and no skin disease was reported. Direct examinationof claw was performed using the tape strip technique revealed Malassezia organisms. Nail fragments were cultured ontoSabouraud Dextrose Agar with Chloramphenicol and Cycloheximide. After 10 days of incubation (32ºC) nail fragmentsallowed the isolation of pure colonies of Malassezia pachydermatis. The histopathological evaluation was performed bySector of Veterinary Clinical Pathology, Faculdade de Veterinária (FAVET/UFRGS) and fungal infection due to Malasseziapachydermatis was confirmed by histopathologic examination (Hematoxylin and eosin and Grocotts methenamine silverstain) of the nail, that revealed abundant yeasts (blastoconidia).Discussion: Fungal infection of the skin, hair and nails are common and are primary caused by the dermatophyte molds.Non-dermatophyte molds isolated from nails...(AU)

Genotyping of Malassezia pachydermatis disclosed genetic variation in isolates from dogs in Colombia / Genotipagem de Malassezia pachydermatis revelou variação genética em isolados de cães na Colômbia

Malassezia pachydermatis is a lipophilic and lipid-dependent yeast mostly isolated from animals' skin; hence, it is regarded as a zoophilic species causing otitis externa in dogs. Aspects associated with its epidemiology and pathogenicity is a matter of interest. This study aimed to conduct a molecular characterization of 43 isolates of M. pachydermatis obtained from dogs with otitis externa. For this purpose, the 5.8S internal transcribed spacer 2 (ITS2) and D1/D2 26S rRNA regions were amplified, sequenced and analyzed using restriction fragment length polymorphism (RFLP) with AluI, CfoI, and BstF5I endonucleases. Phylogenetic analyses revealed that these isolates grouped with the sequence types I, IV and V, previously proposed for M. pachydermatis. Interestingly, we found a new polymorphic RFLP pattern using BstF5I, these isolates were associated with the sequence types IV and V, nevertheless an association between polymorphic RFLP patterns, and fosfolipase activity or canine population data was not observed. These findings underline the genetic diversity of M. pachydermatis and provide new insights about the epidemiology of this species in the analyzed population.(AU)

Malassezia pachydermatis é uma levedura lipofílica e dependente de lipídios, principalmente da pele de animais. Sendo, por essa razão, considerada uma espécie zoofílica e causadora de otite externa em cães. Neste sentido, aspectos associados à sua epidemiologia e patogenicidade constituem um tema de interesse científico. O objetivo deste estudo foi realizar a caracterização molecular de 43 isolados de M. pachydermatis obtidos a partir de cães com otite externa. Para esta propósito, foram amplificadas, sequenciadas e analisadas com enzimas de restrição as regiões do gene 5.8S, do espaçador interno transcrito 2 (ITS2) e D1/D2 do 26S do rRNA pelo método RFLP, com as endonucleases AluI, CfOI e BstF5I. Análises filogenéticas revelaram que os isolados se agruparam com as sequências tipo I, IV e V de M. pachydermatis como já descrito anteriormente. De maneira interessante, se observou um novo RFLP polimórfico utilizando BstF5I. Os isolados que mostraram esse padrão foram associados com os padrões IV e V. No entanto, não foi observada associação entre padrões polimórficos de RFLP e atividade de fosfolipase ou dados da população canina. Estes resultados demonstram a diversidade genética de M. pachydermatis e fornecem novas perspectivas sobre a epidemiologia destas espécies na população analisada.(AU)

Genotyping of Malassezia pachydermatis disclosed genetic variation in isolates from dogs in Colombia / Genotipagem de Malassezia pachydermatis revelou variação genética em isolados de cães na Colômbia

Malassezia pachydermatis is a lipophilic and lipid-dependent yeast mostly isolated from animals' skin; hence, it is regarded as a zoophilic species causing otitis externa in dogs. Aspects associated with its epidemiology and pathogenicity is a matter of interest. This study aimed to conduct a molecular characterization of 43 isolates of M. pachydermatis obtained from dogs with otitis externa. For this purpose, the 5.8S internal transcribed spacer 2 (ITS2) and D1/D2 26S rRNA regions were amplified, sequenced and analyzed using restriction fragment length polymorphism (RFLP) with AluI, CfoI, and BstF5I endonucleases. Phylogenetic analyses revealed that these isolates grouped with the sequence types I, IV and V, previously proposed for M. pachydermatis. Interestingly, we found a new polymorphic RFLP pattern using BstF5I, these isolates were associated with the sequence types IV and V, nevertheless an association between polymorphic RFLP patterns, and fosfolipase activity or canine population data was not observed. These findings underline the genetic diversity of M. pachydermatis and provide new insights about the epidemiology of this species in the analyzed population.(AU)

Malassezia pachydermatis é uma levedura lipofílica e dependente de lipídios, principalmente da pele de animais. Sendo, por essa razão, considerada uma espécie zoofílica e causadora de otite externa em cães. Neste sentido, aspectos associados à sua epidemiologia e patogenicidade constituem um tema de interesse científico. O objetivo deste estudo foi realizar a caracterização molecular de 43 isolados de M. pachydermatis obtidos a partir de cães com otite externa. Para esta propósito, foram amplificadas, sequenciadas e analisadas com enzimas de restrição as regiões do gene 5.8S, do espaçador interno transcrito 2 (ITS2) e D1/D2 do 26S do rRNA pelo método RFLP, com as endonucleases AluI, CfOI e BstF5I. Análises filogenéticas revelaram que os isolados se agruparam com as sequências tipo I, IV e V de M. pachydermatis como já descrito anteriormente. De maneira interessante, se observou um novo RFLP polimórfico utilizando BstF5I. Os isolados que mostraram esse padrão foram associados com os padrões IV e V. No entanto, não foi observada associação entre padrões polimórficos de RFLP e atividade de fosfolipase ou dados da população canina. Estes resultados demonstram a diversidade genética de M. pachydermatis e fornecem novas perspectivas sobre a epidemiologia destas espécies na população analisada.(AU)

Genotyping of Malassezia pachydermatis disclosed genetic variation in isolates from dogs in Colombia

ABSTRACT: Malassezia pachydermatis is a lipophilic and lipid-dependent yeast mostly isolated from animals skin; hence, it is regarded as a zoophilic species causing otitis externa in dogs. Aspects associated with its epidemiology and pathogenicity is a matter of interest. This study aimed to conduct a molecular characterization of 43 isolates of M. pachydermatis obtained from dogs with otitis externa. For this purpose, the 5.8S internal transcribed spacer 2 (ITS2) and D1/D2 26S rRNA regions were amplified, sequenced and analyzed using restriction fragment length polymorphism (RFLP) with AluI, CfoI, and BstF5I endonucleases. Phylogenetic analyses revealed that these isolates grouped with the sequence types I, IV and V, previously proposed for M. pachydermatis. Interestingly, we found a new polymorphic RFLP pattern using BstF5I, these isolates were associated with the sequence types IV and V, nevertheless an association between polymorphic RFLP patterns, and fosfolipase activity or canine population data was not observed. These findings underline the genetic diversity of M. pachydermatis and provide new insights about the epidemiology of this species in the analyzed population.

RESUMO: Malassezia pachydermatis é uma levedura lipofílica e dependente de lipídios, principalmente da pele de animais. Sendo, por essa razão, considerada uma espécie zoofílica e causadora de otite externa em cães. Neste sentido, aspectos associados à sua epidemiologia e patogenicidade constituem um tema de interesse científico. O objetivo deste estudo foi realizar a caracterização molecular de 43 isolados de M. pachydermatis obtidos a partir de cães com otite externa. Para esta propósito, foram amplificadas, sequenciadas e analisadas com enzimas de restrição as regiões do gene 5.8S, do espaçador interno transcrito 2 (ITS2) e D1/D2 do 26S do rRNA pelo método RFLP, com as endonucleases AluI, CfOI e BstF5I. Análises filogenéticas revelaram que os isolados se agruparam com as sequências tipo I, IV e V de M. pachydermatis como já descrito anteriormente. De maneira interessante, se observou um novo RFLP polimórfico utilizando BstF5I. Os isolados que mostraram esse padrão foram associados com os padrões IV e V. No entanto, não foi observada associação entre padrões polimórficos de RFLP e atividade de fosfolipase ou dados da população canina. Estes resultados demonstram a diversidade genética de M. pachydermatis e fornecem novas perspectivas sobre a epidemiologia destas espécies na população analisada.

RAPD-based genotyping of Malassezia pachydermatis from Domestic and wild animals / Genotipificação de Malassezia pachydermatis através da técnica de RAPD

Malassezia pachydermatis (M. pachydermatis) is a fungus of importance in human and veterinary medicine. Although a part of the normal microbiota, it can sometimes be present in its pathogenic form, particularly causing otitis and dermatitis in animals. Among human beings, it mainly affects immune compromised patients and newborns, causing simple pustulosis, seborrheic dermatitis, tinea versicolor or fungemia. This study aimed to analyze the genomic polymorphism in M. pachydermatis samples isolated from Canis familiaris (domestic dog), Felis catus (domestic cat), and Myrmecophaga tridactyla (giant anteater). Two hundred and fourteen samples were collected and cultured in Sabouraud agar with chloranphenicol (100mg L-1) and incubated at 37 C for a period of 7 to 10 days. One hundred and sixty six samples that appeared morphologically comparable to yeast cultures were processed for DNA extraction and PCR was performed for a specific region in the Internal Transcribed Spacer (ITS) of M. pachydermatis. Among these, seven (4.21%) were negative and 159 (95.79%) were positive. Of the 159 positive samples, 102 (64.15%) were from animals with clinical signs and 57 (35.85%) without clinical signs. Fifty-seven samples were selected at random for RAPD-PCR based genotyping and distributed into four genetic groups. Types I and II were more frequent in animals with clinical signs while type III was frequent in healthy animals. Type IV occurred evenly across animals with or without clinical signs. These results indicate differences in pathogenicity of the fungus based on the genotype.

A levedura Malassezia pachydermatis é de importância na medicina humana e veterinária por se apresentar de forma comensal e por vezes sob a forma patogênica. Em animais, causa principalmente otites e dermatites e em humanos acomete principalmente pacientes imunocomprometidos e neonatos, causando desde pustulose simples, dermatite seborréica, pitiríase versicolor até fungemia. Este trabalho teve como objetivo analisar o polimorfismo genômico de amostras de M. pachydermatis nas 208 amostras das espécies Canis familiaris (cão doméstico), 03 amostras de Felis catus (gato doméstico) e 03 amostras de Myrmecophaga tridactyla (tamanduá bandeira). As 214 amostras coletadas foram cultivadas em agar Sabouraud acrescido de cloranfenicol (100mg/l) e incubados a 37C, por um período de sete à dez dias. Os 166 isolados morfologicamente compatíveis com a levedura foram processados para extração do ácido desoxirribonucleico (DNA) e realização da Reação em cadeia pela polimerase (PCR) com oligonucleotídeos específicos para região ITS (Internal Trancribed Spacer) da levedura M. pachydermatis. Quando submetidos à PCR, 07 (4.21%) foram negativas e 159 (95. 79%) tiveram identificação positivas. Das 159 amostras positivas, 102 (64.15%) eram oriundas de animais com sinais clínicos e 57 (35,85%) sem sinais clínicos. Destes, 57 isolados com e sem sinais clínicos, confirmados na PCR foram submetidos a técnica de RAPD-PCR, sendo distribuídos em 4 padrões genéticos. A maioria dos animais doentes foi classificada nos tipos I e II, enquanto os saudáveis no tipo III; no tipoIV houve equivalência entre os isolados, sugerindo diferenças na patogenicidade dos isolados.

RAPD-based genotyping of Malassezia pachydermatis from Domestic and wild animals / Genotipificação de Malassezia pachydermatis através da técnica de RAPD

Malassezia pachydermatis (M. pachydermatis) is a fungus of importance in human and veterinary medicine. Although a part of the normal microbiota, it can sometimes be present in its pathogenic form, particularly causing otitis and dermatitis in animals. Among human beings, it mainly affects immune compromised patients and newborns, causing simple pustulosis, seborrheic dermatitis, tinea versicolor or fungemia. This study aimed to analyze the genomic polymorphism in M. pachydermatis samples isolated from Canis familiaris (domestic dog), Felis catus (domestic cat), and Myrmecophaga tridactyla (giant anteater). Two hundred and fourteen samples were collected and cultured in Sabouraud agar with chloranphenicol (100mg L-1) and incubated at 37 C for a period of 7 to 10 days. One hundred and sixty six samples that appeared morphologically comparable to yeast cultures were processed for DNA extraction and PCR was performed for a specific region in the Internal Transcribed Spacer (ITS) of M. pachydermatis. Among these, seven (4.21%) were negative and 159 (95.79%) were positive. Of the 159 positive samples, 102 (64.15%) were from animals with clinical signs and 57 (35.85%) without clinical signs. Fifty-seven samples were selected at random for RAPD-PCR based genotyping and distributed into four genetic groups. Types I and II were more frequent in animals with clinical signs while type III was frequent in healthy animals. Type IV occurred evenly across animals with or without clinical signs. These results indicate differences in pathogenicity of the fungus based on the genotype.(AU)

A levedura Malassezia pachydermatis é de importância na medicina humana e veterinária por se apresentar de forma comensal e por vezes sob a forma patogênica. Em animais, causa principalmente otites e dermatites e em humanos acomete principalmente pacientes imunocomprometidos e neonatos, causando desde pustulose simples, dermatite seborréica, pitiríase versicolor até fungemia. Este trabalho teve como objetivo analisar o polimorfismo genômico de amostras de M. pachydermatis nas 208 amostras das espécies Canis familiaris (cão doméstico), 03 amostras de Felis catus (gato doméstico) e 03 amostras de Myrmecophaga tridactyla (tamanduá bandeira). As 214 amostras coletadas foram cultivadas em agar Sabouraud acrescido de cloranfenicol (100mg/l) e incubados a 37C, por um período de sete à dez dias. Os 166 isolados morfologicamente compatíveis com a levedura foram processados para extração do ácido desoxirribonucleico (DNA) e realização da Reação em cadeia pela polimerase (PCR) com oligonucleotídeos específicos para região ITS (Internal Trancribed Spacer) da levedura M. pachydermatis. Quando submetidos à PCR, 07 (4.21%) foram negativas e 159 (95. 79%) tiveram identificação positivas. Das 159 amostras positivas, 102 (64.15%) eram oriundas de animais com sinais clínicos e 57 (35,85%) sem sinais clínicos. Destes, 57 isolados com e sem sinais clínicos, confirmados na PCR foram submetidos a técnica de RAPD-PCR, sendo distribuídos em 4 padrões genéticos. A maioria dos animais doentes foi classificada nos tipos I e II, enquanto os saudáveis no tipo III; no tipoIV houve equivalência entre os isolados, sugerindo diferenças na patogenicidade dos isolados.(AU)

Is Malassezia nana the main species in horses ear canal microbiome?

The objective of this study was to characterize genotypically Malassezia spp. isolated from the external ear canal of healthy horses. Fifty-five horses, 39 (70.9%) males and 16 (29.1%) females, from different breeds and adults were studied. External ear canals were cleaned and a sterile cotton swab was introduced to collect cerumen. A total of 110 samples were cultured into Dixon medium and were incubated at 32 °C for up to 15 days. Macro- and micromorphology and phenotypic identification were performed. DNA was extracted, strains were submitted to polymerase chain reaction technique, and the products obtained were submitted to Restriction Fragment Length Polymorphism using the restriction enzymes BstCI and HhaI. Strains were sent off to genetic sequencing of the regions 26S rDNA D1/D2 and ITS1-5.8S-ITS2 rDNA. Malassezia spp. were isolated from 33/55 (60%) animals and 52/110 (47%) ear canals. No growth on Sabouraud dextrose agar was observed, confirming the lipid dependence of all strains. Polymerase chain reaction-Restriction fragment length polymorphism permitted the molecular identification of Malassezia nana - 42/52 (81%) and Malassezia slooffiae - 10/52 (19%). Sequencing confirmed RFLP identification. It was surprising that M. nana represented over 80% of the strains and no Malassezia equina was isolated in this study, differing from what was expected.(AU)

OCORRÊNCIA DE MALASSEZIA PACHYDERMATIS NO MICROBIOMA CUTÂNEO DE TUTORES DE CÃES COM MALASSEZIOSE E PESSOAS QUE NÃO CONVIVEM COM ANIMAIS

Malassezia spp. são leveduras que compõem o microbioma cutâneo de animais e do homem, podendo eventualmente causar infecções. Em cães, as infecções são particularmente associadas a M. pachydermatis, que é zoofílica e não lipodependente. Embora a malasseziose não seja considerada zoonose, se aventou a possibilidade da transmissão da doença a neonatos por profissionais de Unidades de Terapia Intensiva (UTIs) que possuíam cães. Há poucos estudos sobre a ocorrência de intercâmbio de espécies de Malassezia entre animais e homens que mantenham contato estreito. O objetivo deste trabalho foi isolar espécies de Malassezia em cães com otite e/ou dermatite, verificando-se a relação com as espécies encontradas no tutor. Foram estudados 18 cães com sinais condizentes com a infecção, dos quais foram colhidas amostras de conduto auditivo e pelame. De seu tutor, foram colhidas três amostras clínicas, da região superior do tronco, retroauricular e couro cabeludo. Em paralelo, foram colhidas amostras clínicas das mesmas regiões de 24 pessoas que não mantinham contato com animais (não-tutores). As amostras foram isoladas em meio de Dixon modificado e a identificação fenotípica realizada por macro e micromorfologia e provas bioquímicas. Após extração do DNA, o gene 26S rDNA foi amplificado através de PCR. Isolou-se Malassezia spp. em 77,8% (14/18) dos cães com sinais clínicos condizentes com malasseziose. Não se verificou predileção por sexo ou faixa etária. Malassezia spp. foram verificadas em porcentagens similares em pessoas que conviviam e que não conviviam com cães, respectivamente, 78,6% (11/14) e 83,3% (20/24). Malassezia pachydermatis foi a espécie mais prevalente em cães, sendo verificada em 95,7% (22/23) dos isolados. Em relação às pessoas, M. pachydermatis foi a espécie mais frequente no microbioma cutâneo dos tutores e representou 66,7%% (10/15) das cepas isoladas nas amostras clínicas, e Malassezia lipodependente 33,3% (5/15). Malassezia pachydermatis foi isolada dos três sítios amostrados, couro cabeludo, tronco superior e região retroauricular. Quanto aos indivíduos que não conviviam com cães, M. pachydermatis não foi isolada, verificando-se apenas Malassezia lipodependentes. Estatisticamente o fator convivência com cães influenciou na presença de M. pachydermatis, espécie considerada zoofílica, no microbioma cutâneo dos tutores (p<0.05). Os resultados obtidos nesta pesquisa comprovam que há alteração no microbioma cutâneo das espécies de Malassezia em pessoas que convivem com cães com malasseziose.

Malassezia spp. represent a type of yeasts occurring in the cutaneous microbiome of animals and humans, and may eventually cause infections. In dogs, infections are particularly associated with M. pachydermatis, which is zoophilic and not lipodependent. Although malasseziosis is not considered a zoonosis, the possibility of transmission of the disease to neonates by professionals from Intensive Care Units (ICUs) who had dogs was suggested. There are a few studies on the occurrence of exchange of Malassezia species between animals and men those are in close contact. The aim of this study was to isolate Malassezia spp. in dogs with otitis and/or dermatitis and to establish the relationship between the species found and their owners. Eighteen dogs with the signs suggestive of infection were studied. Of them, samples from the ear canal and haircoat were collected. From their owners, three clinical samples were collected from the upper trunk, retroauricular area, and scalp. Clinical samples were collected from the same areas from 24 people who did not have contact with animals (not-tutor). The samples were seeded on modified Dixons medium and phenotypic identification was performed by analysis of macro- and micromorphology and biochemical tests. After DNA extraction, the 26S rDNA gene was amplified by PCR. Malassezia spp. were isolated in 77.8% (14/18) of dogs with clinical signs consistent with malasseziosis. There was no predilection for gender or age. Malassezia spp. were verified in similar percentages, as 78.6% (11/14) and 83.3% (20/24), in people who lived and those who did not live with dogs, respectively. Malassezia pachydermatis was the most prevalent species in dogs and was verified in 95.7% (22/23) of the isolates. It was also the most frequent species in the cutaneous microbiome of the dog owners and represented 66.7% (10/15) of the isolates, while lipodependent Malassezia spp. represented 33.3% (5/15). M. pachydermatis was isolated from the three sampled sites: scalp, upper trunk and retroauricular region. As for individuals who did not live with dogs, M. pachydermatis was not isolated, and they showed only lipodependent Malassezia. Statistically, living with dogs influenced the presence of M. pachydermatis, a species considered zoophilic, in the cutaneous microbiome of the owners (p<0.05). The results obtained in this research reinforce an alteration in Malassezia species in the cutaneous microbiome of people living with dogs showing malasseziosis.

RELAÇÃO ENTRE UMIDADE, OLEOSIDADE E TEMPERATURA E POPULAÇÃO DE FUNGOS PATOGÊNICOS EM DIFERENTES ÁREAS ANATÔMICAS DE CÃES COM E SEM DERMATOPATIAS

RELAÇÃO ENTRE UMIDADE, OLEOSIDADE E TEMPERATURA E POPULAÇÃO DE FUNGOS PATOGÊNICOS EM DIFERENTES ÁREAS ANATÔMICAS DE CÃES COM E SEM DERMATOPATIAS. Malassezia pachydermatis e fungos dermatófitos são microrganismos associados a dermatopatias em cães, mas que também podem estar presentes no tegumento canino como microrganismos saprofíticos. Os fatores que modulam a migração desses agentes, da condição de saprófita para patógeno, são pouco conhecidos. O presente estudo avaliou a influência da umidade, oleosidade e temperatura da pele de cães sobre a população de leveduras do gênero Malassezia e dermatófitos, em 58 cães com e 69 sem dermatoses, independente de idade, raça e sexo. A umidade e a oleosidade foram medidas por meio de instrumentos de bioimpedância em quatro áreas anatômicas: área frontal da cabeça (AFC), axilar (AA) e área lombossacral (ALS). Nestes mesmos pontos, a temperatura da superfície da pele foi avaliada por termômetro infravermelho e amostras de pele foram coletadas com tiras de carpete estéril e submetidas à cultura quantitativa para Malassezia e dermatófitos, com valores expressos em UFC/ tira. A inter-relação entre os dados foi avaliada por meio da análise de componentes principais (PCA). No AA, a temperatura, umidade e oleosidade foram superiores aos demais. As ACPs revelaram que umidade e oleosidade interagem independentemente da população de patógenos fúngicos, em AFC e ADE. Dermatófitos parecem interagir com a oleosidade da pele na ALS. Cães com doenças de pele têm uma gama mais ampla de resultados e interações no ADE e ALS do que cães sem doenças de pele. Conclui-se que diferentes áreas anatômicas podem apresentar fatores homeostáticos que regulam a população de patógenos fúngicos.

RELATIONSHIP BETWEEN HUMIDITY, OILINESS AND TEMPERATURE AND POPULATION OF PATHOGENIC FUNGI IN DIFFERENT ANATOMICAL AREAS OF DOG WITH AND WITHOUT DERMATOPATHIES Malassezia pachydermatis and dermatophyte fungi are fungal microorganisms associated with dermatopathies in dogs, but which can also be present in the canine integument as saprophytic microorganisms. The factors that modulate the migration of these agents, from the condition of saprophyte to pathogen, are little known. The present study evaluated the influence of moisture, oiliness and skin temperature of dogs on the population of yeasts of the genus Malassezia and dermatophytes, in 58 dogs with and 69 without skin diseases, regardless of age, race and sex. Moisture and oiliness were measured by bioimpedance instrumenr in four anatomical areas: frontal area of the head (AFC), left and right axillae (AED) and lumbosacral area (ALS). At these same points, the temperature of the skin surface was assessed by infrared thermometer and skin samples were collected with sterile carpet strips and subjected to quantitative culture for Malassezia and dermatophytes, with values expressed in CFU / strip. The interrelation between the data was assessed by principal component analysis (PCA). In the ADE, temperature, humidity and oiliness were higher than the others. ACPs revealed that moisture and oilness interact independently of the population of fungal pathogens, in AFC and ADE. In ALS, dermatophytes appear to interact with skin oilness. Dogs with skin disorders have a wider range of results and interactions in the ADE and ALS than dogs without skin diseases. It is concluded that different anatomical areas may present homeostatic factors that regulate the population of fungal pathogens.

ANFOTERICINA B OU ITRACONAZOL ALTERAM A RESPOSTA DE MACRÓFAGOS DESAFIADOS COM Malassezia pachydermatis

Malassezia sp é o residente eucariótico predominante do microbioma cutâneo do homem e animais homeotermos. Entretanto, M. pachydermatis, que é zoofílica, tem sido implicada em surtos de infecção invasiva, com alta taxa de mortalidade em neonatos em unidades de terapia intensiva, evidenciando a necessidade de estudos mais aprofundados com esta espécie em sua relação com o hospedeiro. Pesquisadores também observaram que a capacidade fagocítica e a produção de citocinas podem ser alteradas pelo uso de antimicóticos habitualmente empregados na clínica. Portanto, o objetivo deste trabalho foi avaliar a influência do itraconazol ou anfotericina B na atividade de macrófagos desafiados com M. pachydermatis. Macrófagos murinos da linhagem RAW-264.7 foram previamente tratados com anfotericina B (4 µg/ml) ou itraconazol (2 µg/ml) e então infectados com M. pachydermartis na concentração de 5:1 (leveduras:macrófagos), calculando-se os índices fagocíticos 1h e 24h após os desafios. Avaliação dos níveis de citocinas pró e anti-inflamatórias (IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, IL-17A, IFN- e TNF-) e a viabilidade celular foram determinados por citometria de fluxo. Os resultados indicaram que em 1h o índice fagocítico foi menor para o grupo infectado tratado com o itraconazol e em 24h as células foram mais suscetíveis à proliferação de M. pachydermatis; o índice fagocítico não foi influenciado pelo tratamento com a anfotericina B. A viabilidade celular foi menor nos grupos infectados em 24h e a morte dos macrófagos ocorreu principalmente por necrose, quando empregou-se o itraconazol. A anfotericina B induziu maior número de mortes por apoptose. O itraconazol induziu nos macrófagos produção menor de TNF- do que a anfotericina B. O itraconazol atuou interferindo com a capacidade fagocítica e a viabilidade celular, e a anfotericina B estimulou a resposta inflamatória dos macrófagos, não interferindo na capacidade fagocítica. Os resultados obtidos indicam que a ação dos antifúngicos pode interferir na capacidade fagocítica e inflamatória, tendo impacto na função dos macrófagos murinos.

Malassezia sp is the predominant eukaryotic resident in the cutaneous microbiome of humans and other homeotherms. However, zoophilic M. pachydermatis has been implicated in outbreaks of invasive infection, with high mortality rates in neonates in intensive care units, highlighting the need for further studies with the relation of this species with the host. Researchers also noted that phagocytic capacity and cytokine production may be altered by the use of antimycotics commonly employed in the clinic. Therefore, the objective of this work was to evaluate the influence of itraconazole or amphotericin B on the activity of macrophages challenged with M. pachydermatis. Murine macrophages RAW-264.7 were previously treated with amphotericin B (4 µg/ml) or itraconazole (2 µg/ml) and then infected with M. pachydermartis at a 5:1 concentration (yeasts:macrophages), phagocytic indexes were calculated at 1h and 24h after the challenges. Evaluation of pro-and anti-inflammatory cytokines levels (IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, IL-17A, IFN- and TNF-) and cell viability were determined by flow cytometry. The results indicated that at 1h the phagocytic index was lower for the infected group treated with itraconazole and at 24h the cells were more susceptible to M. pachydermatis proliferation; phagocytic index was not influenced by amphotericin B treatment. Cell viability was lower in the infected groups at 24h and macrophage death occurred mainly by necrosis when itraconazole was used. Amphotericin B induced a higher number of apoptosis. Itraconazole induced lower TNF- production in macrophages than amphotericin B. Itraconazole interfered with phagocytic activity and cell viability, and amphotericin B stimulated inflammatory response, not interfering with phagocytic capacity. The results indicate that the action of antifungals may interfere with phagocytic and inflammatory capacity, impacting the function of murine macrophages.

Susceptibility variation of Malassezia pachydermatis to antifungal agents according to isolate source

Malassezia pachydermatisis associated with dermatomycoses and otomycosis in dogs and cats. This study compared the susceptibility of M. pachydermatis isolates from sick (G1) and healthy (G2) animals to azole and polyene antifungals using the M27-A3 protocol. Isolates from G1 animals were less sensitive to amphotericin B, nystatin, fluconazole, clotrimazole and miconazole.(AU)

Atividade antimicrobiana in vitro de extrato aquoso de alho (Allium sativum L.) frente a microrganismos isolados de casos de otite externa em cães

A otite externa em cães é um processo inflamatório que atinge o conduto auditivo externo e apresenta elevada casuística na clínica médica veterinária de pequenos animais. O tratamento tem sido desafiador, já que essa enfermidade possui etiologia multifatorial, incluindo fatores primários, predisponentes e perpetuantes. Os fatores perpetuantes incluem as bactérias Staphylococcus coagulase positiva e a levedura Malassezia pachydermatis. Atualmente, a resistência microbiana aos medicamentos convencionais é um agravante no quadro dessa enfermidade. Nesse caso, o uso de plantas com potencial medicinal, como o Allium sativum L., devem ser consideradas como parte da terapêutica. Portanto, este estudo objetivou avaliar o potencial antimicrobiano in vitro do extrato aquoso de alho frente a microrganismos isolados a partir de casos de otite externa em cães. Para realização desse estudo, utilizou-se dez isolados de Staphylococcus coagulase positiva e doze de Malassezia pachydermatis processadas na rotina diagnóstica do Laboratório de Microbiologia do Instituto Federal Catarinense, Campus Concórdia. Para produção do extrato aquoso de alho foi adquirido material vegetal de distribuidor comercial. Para realização dos testes in vitro utilizou-se a técnica de microdiluição em caldo com objetivo de obter a concentração inibitória mínima (CIM) bacteriana e fúngica, além da concentração fungicida mínima (CFM). O extrato aquoso de alho inibiu o crescimento de todos os isolados. A CIM dos isolados bacterianos variou de 93,75 a 375mg/mL e dos isolados fúngicos variou de 5,86 a 46,87mg/mL. Já a CFM variou de 5,86 a 375mg/mL. Conclui-se que o extrato aquoso de alho apresenta atividade antimicrobiana in vitro frente aos principais microrganismos isolados a partir de casos de otite externa canina.

External otitis is an inflammatory process that involves the external auditory canal, with high prevalence in small animals veterinary medicine. Treatment has been difficult, due its multifactorial etiology represented by primary, predisposing and perpetuating factors. Infectious agents as coagulase positive Staphylococcus (CPS) and Malassezia pachydermatis (M. pachydermatis) are examples of perpetuating factors. Actually, the microbial resistance to conventional drugs represents an aggravating process on this disease. In this case, the use of plants with medicinal properties, as garlic (Allium sativum L.) may be considered as part of therapeutically measures. Thus, the objective of the present study was to evaluate the in vitro antimicrobial potential of garlic aqueous extract against microorganisms isolated from external otitis in dogs. For this purpose, it were used 10 CPS and 12 M. pachydermatis strains, obtained from Laboratory of Veterinary Microbiology of Federal Institute (Santa Catarina State), Concórdia, Brazil. These strains were isolated from canine external otitis and belonged to the labs bacteriotheca. For aqueous extract production, the garlic samples were obtained from a commercial distributor. The microdilution technique was used for Minimum Inhibitory Concentration (MIC) evaluations, for both bacterial and yeast. The Minimum Fungicide Concentration (MFC) was evaluated for M. pachydermatis. The garlic aqueous extract inhibited the growth of all isolates. The MIC values against bacterial and fungi isolates ranged from 93.75 to 375mg/mL, and from 5.86 to 46.87mg/mL, respectively. The MFC ranged from 5.86 to 375mg/mL. It was possible to conclude that the garlic aqueous extract presents in vitro antimicrobial activity against the main microorganisms isolated from external otitis in dogs.

Essential oil from Cymbopogon citratus (DC) Stapf: a promising natural product against Malassezia spp

This study evaluated the sensitivity of Malassezia spp. strains, the etiologic agent of pityriasis versicolor, to essential oil from Cymbopogon citratus. The chemical composition of the essential oil was analysed by GC-MS, and the major constituents were: geraniol (52.80%), neral (36.65%) and myrcene (3.73%). The minimum inhibitory concentration (MIC) of C. citratus essential oil on to 22 strains of Malassezia spp. were determined by agar dilution technique in the presence and absence of ergosterol (50-250 ìg/mL) and sorbitol (0.8 M). Increased MIC values in the presence of ergosterol indicate an effect on fungal membrane, and the higher MIC values in the presence of sorbitol indicate a mechanism of action on thecell wall. The MIC ranged from 0.31 to 1.25 ìL/mL and it increased fourfold in the presence of ergosterol, regardless of concentration tested; and this fact was most likely related to the occurrence of the oil and exogenous ergosterol complexes. No change in MIC values in the presence of sorbitol was found. The sedata infer that C. citratus essential oil causes an effect on Malassezia spp. plasma membrane synthesis by binding to ergosterol. This study contributes to the development of new antifungal drugs, especially against Malassezia spp. (AU)

Extrato de Malassezia pachydermatis modula a atividade de macrófagos infectados com Encephalitozoon cuniculi

Malassezia (M.) sp. é um gênero amplo de fungos que faz parte da microbiota da pele em muitos animais, incluindo o homem. Estudos têm demonstrado que Malassezia são capazes de modular a produção de citocinas pro e anti-inflamatória por queratinócitos e monócitos humanos. Encephalitozoon (E.) cuniculi são fungos intracelulares obrigatórios que determinam doenças emergentes em humanos e outros animais, com relevância econômica. Ante essa capacidade imunomoduladora, foi objetivo deste estudo avaliar a atividade do extrato de M. pachydermatis na resposta de macrófagos ante a infecção pelo E. cuniculi. Para tanto, uma suspensão de M. pachydermatis foi submetida à fervura por 30 minutos, filtrada e utilizada como extrato para estimular macrófagos da linhagem Raw 264.7. Posteriormente, os macrófagos foram infectados com esporos de E. cuniculi (2:1) e avaliados aos 15, 30, 60 minutos e 48 horas. Foi dosada nas culturas de macrófagos a quantidade de peróxido de hidrogênio. O sobrenadante foi submetido à análise de óxido nítrico. Com a coloração de Calcoflúor foi realizada a contagem de esporos de E. cuniculi fagocitados e determinados o índice fagocítico (IF) e capacidade fagocítica (CF). Foi avaliada a atividade microbicida e fagocítica pela microscopia eletrônica de transmissão (MET). Os macrófagos não tratados tiveram CF, IF e quantidades de esporos fagocitados maiores que os tratados, porém pela MET observou-se que nos macrófagos tratados a atividade microbicida foi mais rápida, já que nos vacúolos fagocíticos havia poucos esporos em diferentes graus de degeneração e pouca quantidade de material amorfo. Os macrófagos tratados tiveram maior produção de peróxido de hidrogênio e apresentaram aumento na secreção das citocinas, excetuando-se o TNF- que teve diminuição em 15 minutos. Em conjunto, esses resultados demonstraram que o tratamento com o extrato de M. pachydermatis foi capaz de aumentar a atividade microbicida e fagocítica de macrófagos infectados com E. cuniculi.

Malassezia (M.) sp. is a broad genus of fungi that is part of the skin's microbiota in many animals, including man. Studies have shown that Malassezia are able to modulate the production of pro and anti-inflammatory cytokines by keratinocytes and human monocytes. Encephalitozoon (E.) cuniculi, are obligate intracellular fungi that determine emerging diseases in humans and other animals, with economic relevance. Faced with this immunomodulatory capacity, the objective of this study was to evaluate the activity of M. pachydermatis extract in the response of macrophages to infection by E. cuniculi. To this end, a suspension of M. pachydermatis was boiled for 30 minutes, filtered and used as an extract to stimulate macrophage of the Raw 264.7 lineage. Subsequently, macrophages were infected with spores of E. cuniculi (2: 1) and evaluated at 15, 30, 60 minutes and 48 hours. The amount of hydrogen peroxide was measured in macrophages cultures. The supernatant was subjected to nitric oxide analysis. Calcofluor was stained with phagocytic E. cuniculi spores and the phagocytic index (IF) and phagocytic capacity (CF) were determined. Microbicidal and phagocytic activity was evaluated by transmission electron microscopy (MET). The untreated macrophages had CF, IF, and larger amounts of phagocytosed spores than those treated, but by MET it was observed that in macrophages treated the microbicidal activity was faster, since in the phagocytic vacuoles there were few spores in different degrees of degeneration and few amount of amorphous material. The treated macrophages had higher production of hydrogen peroxide and increased cytokine secretion, with the exception of TNF-, which decreased in 15 minutes. Taken together, these results demonstrated that treatment with the extract of M. pachydermatis was able to increase the microbicidal and phagocytic activity of macrophages infected with E. cuniculi.