Comparison of nuclear abnormalities in Astyanax bifasciatus Cuvier, 1819 (Teleostei: Characidae) of two sections of rivers from the middle Iguaçu / Comparação de anormalidades nucleares em Astyanax bifasciatus Cuvier, 1819 (Teleostei: Characidae) de dois trechos de rios do médio Iguaçu

Most changes in water bodies are result of human activities that have the potential to undermine the environmental integrity of aquatic ecosystems. Changes in genetic material can be evidenced by the frequency of nuclear abnormalities in fish blood cells, in response to genotoxic agents even at low concentrations. Thus, we aimed at comparing the frequencies of nuclear abnormalities of fish kept in acclimation, with fish collected in Timbó river (Santa Cruz do Timbó, Santa Catarina State), under low anthropogenic interference, and fish collected in Iguaçu river (União da Vitória, Paraná State), a polluted river. The highest frequency of changes in nuclear morphology of fish erythrocytes was found in the urbanized area around the Iguaçu river, while, the fish collected in areas with preserved riparian forest surrounding the Timbó river and acclimated fish showed no morphological changes. Our results suggest that genotoxic compounds in the Iguaçu river are acting as stressors to aquatic communities, especially fish. In addition, the absence of nuclear abnormalities in fish from the Timbó river suggests that rivers without significant environmental changes can serve as reference point for comparative studies of genetic modifications for the species studied.

A maioria das alterações dos corpos hídricos é resultante das atividades antrópicas que são prejudiciais à integridade ambiental dos ecossistemas aquáticos. Alterações no material genético podem ser evidenciadas pela frequência de anormalidades nucleares em peixes, em resposta a agentes genotóxicos, mesmo em baixas concentrações. Dessa forma, o estudo consistiu em comparar as frequências de anormalidades nucleares de peixes mantidos em aclimatação, com peixes coletados no rio Timbó (Santa Cruz do Timbó, Estado de Santa Catarina), local com pouca interferência antropogênica e, peixes coletados no rio Iguaçu (União da Vitória, Estado do Paraná), um rio poluído. As maiores frequências de alterações na morfologia nuclear dos eritrócitos dos peixes foram visualizadas na área urbanizada ao redor do rio Iguaçu, quando comparados com os peixes coletados em área com mata ciliar preservada, no rio Timbó, e os peixes aclimatados, que não apresentaram alterações morfológicas. Esses resultados sugerem que há compostos genotóxicos no trecho médio do rio Iguaçu que são estressores para os peixes. Além disso, a não observação de anormalidades nucleares no rio Timbó sugere que rios sem alterações ambientais podem servir como ponto de referência para estudos comparativos de modificações genéticas para a espécie estudada.

Comparison of nuclear abnormalities in Astyanax bifasciatus Cuvier, 1819 (Teleostei: Characidae) of two sections of rivers from the middle Iguaçu / Comparação de anormalidades nucleares em Astyanax bifasciatus Cuvier, 1819 (Teleostei: Characidae) de dois trechos de rios do médio Iguaçu

Most changes in water bodies are result of human activities that have the potential to undermine the environmental integrity of aquatic ecosystems. Changes in genetic material can be evidenced by the frequency of nuclear abnormalities in fish blood cells, in response to genotoxic agents even at low concentrations. Thus, we aimed at comparing the frequencies of nuclear abnormalities of fish kept in acclimation, with fish collected in Timbó river (Santa Cruz do Timbó, Santa Catarina State), under low anthropogenic interference, and fish collected in Iguaçu river (União da Vitória, Paraná State), a polluted river. The highest frequency of changes in nuclear morphology of fish erythrocytes was found in the urbanized area around the Iguaçu river, while, the fish collected in areas with preserved riparian forest surrounding the Timbó river and acclimated fish showed no morphological changes. Our results suggest that genotoxic compounds in the Iguaçu river are acting as stressors to aquatic communities, especially fish. In addition, the absence of nuclear abnormalities in fish from the Timbó river suggests that rivers without significant environmental changes can serve as reference point for comparative studies of genetic modifications for the species studied.(AU)

A maioria das alterações dos corpos hídricos é resultante das atividades antrópicas que são prejudiciais à integridade ambiental dos ecossistemas aquáticos. Alterações no material genético podem ser evidenciadas pela frequência de anormalidades nucleares em peixes, em resposta a agentes genotóxicos, mesmo em baixas concentrações. Dessa forma, o estudo consistiu em comparar as frequências de anormalidades nucleares de peixes mantidos em aclimatação, com peixes coletados no rio Timbó (Santa Cruz do Timbó, Estado de Santa Catarina), local com pouca interferência antropogênica e, peixes coletados no rio Iguaçu (União da Vitória, Estado do Paraná), um rio poluído. As maiores frequências de alterações na morfologia nuclear dos eritrócitos dos peixes foram visualizadas na área urbanizada ao redor do rio Iguaçu, quando comparados com os peixes coletados em área com mata ciliar preservada, no rio Timbó, e os peixes aclimatados, que não apresentaram alterações morfológicas. Esses resultados sugerem que há compostos genotóxicos no trecho médio do rio Iguaçu que são estressores para os peixes. Além disso, a não observação de anormalidades nucleares no rio Timbó sugere que rios sem alterações ambientais podem servir como ponto de referência para estudos comparativos de modificações genéticas para a espécie estudada.(AU)

Caracterização de uma nova mutação com perda de função do gene Kmt2d em camundongos / Characterization of a new mutation with loss of function in the Kmt2d gene in mice

O camundongo mutante recessivo bate-palmas (bapa) originou-se de mutagênese química induzida por ENU (N-ethyl-N-nitrosourea) e apresenta alterações posturais com movimentos anormais dos membros posteriores quando levantado pela cauda. No sequenciamento do exoma identificou-se uma mutação no gene Kmt2d, localizado no cromossomo 15, que foi confirmada pelo sequenciamento do DNA pelo método de Sanger. A perda da função do gene KMT2D localizada no cromossomo 12 em humanos foi descrita como responsável pela síndrome de Kabuki, que é uma anomalia congênita rara, autossômica dominante. O fenótipo clínico da doença é variável, mas algumas características mais comuns são face dismórfica, anormalidades esqueléticas, alterações nas impressões digitais, leve a moderado retardo mental e retardo do crescimento pós-natal. O presente trabalho teve como objetivo a análise do comportamento e da morfologia craniofacial dos camundongos bapa comparando com modelos de mutação do gene Kmt2d descritos na literatura.

The recessive mutant mouse named bate-palmas (bapa) – claps in Portuguese, originates from an ENU (N-ethyl-N-nitrosourea) mutagenesis program, presenting balance impairment and motor incoordination. Exome sequencing identified a mutation in the KMT2D gene, located on chromosome 15, which was confirmed by DNA sequence by the Sanger method. The loss of function of the gene KMT2D, located on chromosome 12 in humans, was described as being responsible for Kabuki syndrome, also known as Niikawa-Koruki syndrome, which is a rare congenital anomaly, autosomal dominant. The clinical phenotype of the disease is variable, but some common characteristics are dysmorphic facial features, skeletal abnormalities, fingerprint alterations, mild to moderate cognitive problems and postnatal growth retardation. The objective os this study was to analyze the behavior and craniofacial morphology of bapa mice comparing to KMT2D gene mutation models described on literature.

Caracterização de uma nova mutação com perda de função do gene Kmt2d em camundongos / Characterization of a new mutation with loss of function in the Kmt2d gene in mice

O camundongo mutante recessivo bate-palmas (bapa) originou-se de mutagênese química induzida por ENU (N-ethyl-N-nitrosourea) e apresenta alterações posturais com movimentos anormais dos membros posteriores quando levantado pela cauda. No sequenciamento do exoma identificou-se uma mutação no gene Kmt2d, localizado no cromossomo 15, que foi confirmada pelo sequenciamento do DNA pelo método de Sanger. A perda da função do gene KMT2D localizada no cromossomo 12 em humanos foi descrita como responsável pela síndrome de Kabuki, que é uma anomalia congênita rara, autossômica dominante. O fenótipo clínico da doença é variável, mas algumas características mais comuns são face dismórfica, anormalidades esqueléticas, alterações nas impressões digitais, leve a moderado retardo mental e retardo do crescimento pós-natal. O presente trabalho teve como objetivo a análise do comportamento e da morfologia craniofacial dos camundongos bapa comparando com modelos de mutação do gene Kmt2d descritos na literatura.(AU)

The recessive mutant mouse named bate-palmas (bapa) claps in Portuguese, originates from an ENU (N-ethyl-N-nitrosourea) mutagenesis program, presenting balance impairment and motor incoordination. Exome sequencing identified a mutation in the KMT2D gene, located on chromosome 15, which was confirmed by DNA sequence by the Sanger method. The loss of function of the gene KMT2D, located on chromosome 12 in humans, was described as being responsible for Kabuki syndrome, also known as Niikawa-Koruki syndrome, which is a rare congenital anomaly, autosomal dominant. The clinical phenotype of the disease is variable, but some common characteristics are dysmorphic facial features, skeletal abnormalities, fingerprint alterations, mild to moderate cognitive problems and postnatal growth retardation. The objective os this study was to analyze the behavior and craniofacial morphology of bapa mice comparing to KMT2D gene mutation models described on literature.(AU)

BSA and molecular markers screening for salt stress tolerant mutant of Petunia obtained in in vitro culture / Rastreamento de BSA e marcadores moleculares para mutante tolerante ao estresse salino de Petunia obtido em cultura in vitro

In this study, we performed BSA to identify genetic markers linked to salt tolerance. We tested the genetic diversity among four bulked DNA samples of EMS induced mutant clones and one bulked DNA sample of non-mutated clone of Petunia for salt tolerance in in vitro callus cultures using RAPD and ISSR markers. Out of the 36 RAPD and 16 ISSR primers identified, 25 and 13 were effectively used to amplify genomic DNA of all the five bulked samples, respectively. In total, 114 RAPD amplifications products were obtained, of which 28% were polymorphic and 2% were genotype-specific bands. Out of the 64 ISSR amplification products obtained, 51% were polymorphic and 1% was genotype-specific bands. Results of this study indicated the existence of two patterns of distorted segregation among the studied markers. The first one indicates the differences between non-mutated clones of Petunia and its putative mutants. The second one was observed only between putative mutants and putative mutants tested for salt tolerance in in vitro culture. Both RAPD and ISSR analysis successfully detected the association with changes induced by chemical mutagenesis and salinity. Furthermore, our results indicate that BSA method can be useful in the rapid detection of molecular markers for further marker-assisted selection.(AU)

Neste estudo, realizamos BSA para identificar marcadores genéticos ligados à tolerância ao sal. Testamos a diversidade genética entre quatro amostras de DNA volumoso de clones mutantes induzidos por EMS, e uma amostra de DNA volumoso de clone não mutado de Petunia para tolerância a sal em culturas de calos in vitro usando marcadores RAPD e ISSR. Dos 36 primers RAPD e 16 ISSR identificados, 25 e 13 foram efetivamente usados para amplificar o DNA genômico de todas as cinco amostras, respectivamente. No total, foram obtidos 114 produtos de amplificação RAPD, dos quais 28% eram polimórficos e 2% eram bandas específicas de genótipos. Dos 64 produtos de amplificação ISSR obtidos, 51% eram polimórficos e 1% eram bandas específicas de genótipo. Os resultados deste estudo indicam a existência de dois padrões de segregação distorcida entre os marcadores estudados. O primeiro indica as diferenças entre os clones não mutantes de Petúnia e seus mutantes putativos. O segundo foi observado apenas entre mutantes putativos e mutantes putativos testados quanto à tolerância ao sal em cultura in vitro. Tanto a análise RAPD quanto a ISSR detectaram com sucesso a associação com alterações induzidas por mutagênese química e salinidade. Além disso, nossos resultados indicam que o método BSA pode ser útil na detecção rápida de marcadores moleculares para posterior seleção assistida por marcadores.(AU)

Evaluation of cytotoxicity and genotoxicity of Hancornia speciosa latex in Allium cepa root model

Abstract The latex obtained from Hancornia speciosa Gomes (Mangabeira tree) is widely used in traditional medicine to treat a variety of diseases, including diarrhea, ulcer, gastritis, tuberculosis, acne and warts. In this study, the cytotoxicity and genotoxicity effects of H. speciosa latex on the root meristem cells of Allium cepa were examined. Onion bulbs were exposed to different concentrations of latex and then submitted to microscopic analysis using Giemsa stain. Water was used as a negative control and sodium azide as a positive control. The results showed that, under the testing conditions, the mitotic index (MI) of the onion roots submitted to latex treatment did not differ significantly from the negative control, which suggests that the latex is not cytotoxic. Low incidence of chromosome aberrations in the cells treated with H. speciosa latex was also observed, indicating that the latex does not have genotoxic effect either. The MI and the chromosome aberration frequency responded to the latex concentration, requiring more studies to evaluate the dosage effect on genotoxicity. The results indicate that in tested concentrations H. speciosa latex is probably not harmful to human health and may be potentially used in medicine.(AU)

Resumo O látex obtido de Hancornia speciosa é amplamente utilizado na medicina popular para tratar uma variedade de doenças, tais como: diarreia, úlcera, gastrite, tuberculose, acne e verrugas. Nesse estudo, foram avaliados os efeitos citotóxicos e genotóxicos do látex de H. speciosa sobre as células meristemáticas das raízes de Allium cepa. Os bulbos das cebolas foram expostos a diferentes concentrações de látex e depois submetidos à analise microscópica usando o corante Giemsa. A água foi usada como controle negativo e a ázida sódica como controle positivo. Os resultados mostraram que o índice mitótico (IM) das raízes de cebola submetidas ao tratamento com látex, nas condições testadas, não diferiram significativamente do controle negativo, e sugerem que o látex não é citotóxico. Também foi observada uma baixa incidência de aberrações cromossômicas nas células tratadas com látex de H. speciosa, o que sugere que o látex também não possui efeito genotóxico. O IM e a frequência de aberrações cromossômicas foram dependentes da concentração de látex. Outros estudos devem ser realizados para avaliar o efeito da dose na genotoxidade. Os resultados indicam que o látex de mangabeira, nas concentrações testadas, provavelmente não é danoso para saúde humana e pode ter potencial para ser usado na medicina.(AU)

Evaluation of cytotoxicity and genotoxicity of Hancornia speciosa latex in Allium cepa root model

Abstract The latex obtained from Hancornia speciosa Gomes (Mangabeira tree) is widely used in traditional medicine to treat a variety of diseases, including diarrhea, ulcer, gastritis, tuberculosis, acne and warts. In this study, the cytotoxicity and genotoxicity effects of H. speciosa latex on the root meristem cells of Allium cepa were examined. Onion bulbs were exposed to different concentrations of latex and then submitted to microscopic analysis using Giemsa stain. Water was used as a negative control and sodium azide as a positive control. The results showed that, under the testing conditions, the mitotic index (MI) of the onion roots submitted to latex treatment did not differ significantly from the negative control, which suggests that the latex is not cytotoxic. Low incidence of chromosome aberrations in the cells treated with H. speciosa latex was also observed, indicating that the latex does not have genotoxic effect either. The MI and the chromosome aberration frequency responded to the latex concentration, requiring more studies to evaluate the dosage effect on genotoxicity. The results indicate that in tested concentrations H. speciosa latex is probably not harmful to human health and may be potentially used in medicine.

Resumo O látex obtido de Hancornia speciosa é amplamente utilizado na medicina popular para tratar uma variedade de doenças, tais como: diarreia, úlcera, gastrite, tuberculose, acne e verrugas. Nesse estudo, foram avaliados os efeitos citotóxicos e genotóxicos do látex de H. speciosa sobre as células meristemáticas das raízes de Allium cepa. Os bulbos das cebolas foram expostos a diferentes concentrações de látex e depois submetidos à analise microscópica usando o corante Giemsa. A água foi usada como controle negativo e a ázida sódica como controle positivo. Os resultados mostraram que o índice mitótico (IM) das raízes de cebola submetidas ao tratamento com látex, nas condições testadas, não diferiram significativamente do controle negativo, e sugerem que o látex não é citotóxico. Também foi observada uma baixa incidência de aberrações cromossômicas nas células tratadas com látex de H. speciosa, o que sugere que o látex também não possui efeito genotóxico. O IM e a frequência de aberrações cromossômicas foram dependentes da concentração de látex. Outros estudos devem ser realizados para avaliar o efeito da dose na genotoxidade. Os resultados indicam que o látex de mangabeira, nas concentrações testadas, provavelmente não é danoso para saúde humana e pode ter potencial para ser usado na medicina.

ESTUDO DA RESPOSTA IMUNE, COLONIZAÇÃO E INVASÃO DE AVES (Gallus gallus domesticus) POR ESTIRPES DE Salmonella Enteritidis e Salmonella Typhimurium CONTENDO DELEÇÕES NOS GENES clpP E fliD

Salmonella Enteritidis e Salmonella Typhimurium causam infecções em seres humanos e animais que são frequentemente associadas à extensa colonização intestinal e excreção fecal. A presença de estrutura flagelar no patógeno está relacionada à indução de inflamação intestinal e atenuação de infecção sistêmica no hospedeiro. Por outro lado, a infecção por estirpes aflageladas resulta em pouca inflamação e consequente infecção sistêmica grave. No presente estudo, foi avaliada a hipótese de que a síntese de maior quantidade de flagelina em estirpes de Salmonella geneticamente modificadas poderia levar a infecção sistêmica menos intensa em aves. Para investigar as conseqüências da superprodução de flagelina, foram construídas estirpes de Salmonella Enteritidis e Typhimurium contendo deleções nos genes clpP e fliD (que levam à superexpressão de flagelina) e patogenicidade e imunogenicidade foram comparadas com as respectivas estirpes selvagens em aves infectadas. Os resultados indicaram que o aumento da síntese de flagelina por SE clpPfliD e STM clpPfliD culmina em déficit da taxa de multiplicação bacteriana. Porém, tais alterações não interferiram na capacidade de colonização cecal e excreção fecal das estirpes mutantes. O mesmo foi observado em fígado e baço, mas após 14 dpi as estirpes mutantes tendem a serem eliminadas destes órgãos. Mesmo com síntese mais elevada de flagelina, as estirpes mutantes recrutaram quantidades semelhantes de linfócitos e macrófagos em tonsila cecal, baço e fígado que as estirpes selvagens. Infecções por STM clpPfliD produziram sinais clínicos mais brandos em comparação à STM, e alta produção de IL22 em 7 dpi. Enquanto que SE clpPfliD desencadeou sinais clínicos semelhantes aos induzidos por SE, porém, com níveis mais elevados de IL22 e IL18, porém com repressçao de CCl4, CXCLi2 e IL17 em no intestino no início da infecção. Ao que tudo indica a maior produção de flagelina por ambas as estirpes mutantes alteraram a patogenicidade, possivelmente por alterarem a ativação e modulação do sistema imune da ave.

Salmonella Enteritidis and Salmonella Typhimurium cause infections in humans and animals that are often associated with extensive intestinal colonization and faecal shedding. The presence of flagellar structure in the pathogen is related to the induction of intestinal inflammation and attenuation of systemic infection in the host. On the other hand, the absence of flagellin results in severe systemic infection as a result of mild inflammatory intestinal responses provoked by aflagellated strains. The hypothesis that higher flagellin production by Salmonella strains could induce immunogenic response during infection in chickens was evaluated in the present study. To investigate the consequences of flagellin overproduction, strains of Salmonella Enteritidis and Typhimurium containing clpP and fliD deletions (which lead to flagellin overexpression) were constructed, and pathogenicity and immunogenicity were compared with their respective wild-type strains in infected chickens. The results suggested that the increase in flagellin synthesis by SE clpPfliD and STM clpPfliD culminates in a deficit in the bacterial multiplication rate. However, that changes did not interfere with the capacity for caecal colonization and faecal excretion of mutant strains. The same was observed in the liver and spleen, but after 14 dpi, mutant strains tend to be eliminated from these organs. Even with higher flagellin synthesis, the mutant strains recruited similar amounts of lymphocytes and macrophages in the caecal tonsil, spleen and liver than wild-type strains. and high IL22 production at 7 dpi. While SE clpPfliD triggered clinical signs similar to those induced by SE, but with higher levels of IL22 and IL18, but with repression of CCl4, CXCLi2 and IL17 in the intestine at the beginning of the infection. Apparently, the higher production of flagellin by both mutant strains altered the pathogenicity, possibly by altering the activation and modulation of the chicken's immune system.

Evaluation of the genotoxicity of zinc oxide-eugenol cement to Allium cepa L / Avaliação da genotoxicidade do cimento de óxido de zinco e eugenol em Allium cepa L

Dental materials can induce local and systemic effects. The Allium cepa assay was used to evaluate the genotoxicity and/or cytotoxicity of zinc oxide and eugenol (ZOE) at different proportions. The ZOE solution was tested at the concentration of 1 drop of eugenol (in each drop of liquid, the approximate concentration of eugenol is 85%) and 1 portion of zinc oxide cement (treatment I), and twice the concentration of eugenol (treatment II) . Treated roots appeared to be yellowish-brown, fewer in number, thicker and less turgid compared with the control, suggesting a cytotoxic activity of ZOE. A significant difference was found in the root size between the control and treatment II. This treatment reduced by 79% the size of the root compared with the control, and the mitotic index was 66%, indicating a 22.4% reduction relative to the control, which in turn evidenced the cytotoxicity of ZOE. The significant increase in anaphase bridges suggests a genotoxic effect.

Materiais dentários podem induzir diversos efeitos, tanto local quanto sistêmico. Objetivou-se avaliar a ocorrência de danos genéticos e de alterações nucleares degenerativas indicativas de genotoxicidade e citotoxicidade em células de cebola em mitose, expostas a óxido de zinco e eugenol (ZOE) em diferentes proporções. Os bulbos foram postos a germinar, com a parte inferior mergulhada na solução de ZOE + água destilada. A solução de ZOE foi testada na concentração de uma gota de eugenol (aproximadamente 85%) e 1 porção do cimento de óxido de zinco (tratamento I) e o dobro da concentração do eugenol (tratamento II). As raízes do controle apresentaram coloração esbranquiçada e eram túrgidas, enquanto as raízes dos tratamentos se mostraram de cor amarela ­ amarronzada, em menor quantidade, mais grossas e menos túrgidas, sugerindo ação citotóxica de ZOE. Houve diferença significativa do tamanho das raízes entre o controle e o tratamento II. O tratamento II reduziu 79% do tamanho da raiz e o índice mitótico foi 66%. Isto mostra redução de 22,4% quando comparado com o controle, evidenciando a ação citotóxica de ZOE. O aumento significante de pontes anafásicas sugere efeito genotóxico.

Modelos animais de ataxias cerebelares humanas / /Animal models of human cerebellar ataxias

As ataxias cerebelares representam um conjunto de doenças neurológicas bastante emergentes e em rápida atualização tanto no número de condições clínicas quanto de proposições e ferramentas diagnósticas. Há grande desconhecimento, contudo, em relação aos mecanismos fisiopatológicos envolvidos e em abordagens terapêuticas eficientes. Assim, o desenvolvimento de modelos animais para ataxias cerebelares humanas para estudo da história natural e de novos esquemas de tratamento tornou- -se bastante proeminente na área da Neurologia Experimental associada às técnicas modernas de mutagênese em Biologia Molecular. Esta revisão objetiva resumir os principais modelos animais existentes para as ataxias cerebelares adquiridas e hereditárias mais prevalentes na prática clínica.

The cerebellar ataxias are a wide group of emerging and quickly updating neurological diseases both in the number of clinical conditions and diagnostic tools. There is great ignorance, however, regarding the pathophysiological mechanisms and effective therapeutic approaches. Thus, the development of animal models for human cerebellar ataxias to study the natural history and new treatment regimens became quite prominent in the field of Experimental Neurology associated with modern techniques of mutagenesis in Molecular Biology. This review aims to summarize the main existing animal models for the acquired and hereditary cerebellar ataxias most prevalent in clinical practice.

Modelos animais de ataxias cerebelares humanas / /Animal models of human cerebellar ataxias

As ataxias cerebelares representam um conjunto de doenças neurológicas bastante emergentes e em rápida atualização tanto no número de condições clínicas quanto de proposições e ferramentas diagnósticas. Há grande desconhecimento, contudo, em relação aos mecanismos fisiopatológicos envolvidos e em abordagens terapêuticas eficientes. Assim, o desenvolvimento de modelos animais para ataxias cerebelares humanas para estudo da história natural e de novos esquemas de tratamento tornou- -se bastante proeminente na área da Neurologia Experimental associada às técnicas modernas de mutagênese em Biologia Molecular. Esta revisão objetiva resumir os principais modelos animais existentes para as ataxias cerebelares adquiridas e hereditárias mais prevalentes na prática clínica.(AU)

The cerebellar ataxias are a wide group of emerging and quickly updating neurological diseases both in the number of clinical conditions and diagnostic tools. There is great ignorance, however, regarding the pathophysiological mechanisms and effective therapeutic approaches. Thus, the development of animal models for human cerebellar ataxias to study the natural history and new treatment regimens became quite prominent in the field of Experimental Neurology associated with modern techniques of mutagenesis in Molecular Biology. This review aims to summarize the main existing animal models for the acquired and hereditary cerebellar ataxias most prevalent in clinical practice.(AU)

Avaliação de tilápias expostas a sedimentos de ecossistemas aquáticos do sul do Espírito Santo

A degradação de ecossistemas aquáticos tem sido centro de preocupações devido aos possíveis danos gerados nos organismos que vivem nesses ambientes. A região do sul do Espírito Santo é muito exposta à poluição proveniente da intensa atividade industrial, portuária, pesqueira e turística. A avaliação da toxicidade do sedimento é importante para o monitoramento da qualidade ambiental, devido a sua capacidade de incorporar e acumular contaminantes. O presente estudo teve por objetivo avaliar a ecotoxicidade do sedimento de três pontos de ambientes aquáticos do sul Espírito Santo (UBU/ANCHIETA/ITAPEMIRIM), e os possíveis efeitos mutagênicos, genotóxicos e alterações histológicas utilizando como organismo-teste Oreochromis niloticus. Para isso, foram utilizados 75 peixes divididos em 5 grupos amostrais sendo 3 tanques com os sedimentos de Anchieta, Ubu e Itapemirim em uma razão de 40L/3kg de àgua/sedimento, além de um controle negativo e positivo.Ao fim de cada 5 dias, 5 peixes foram eutanasiados em um período total de 15 dias, para a pulsão de sangue e posterior confecção de esfregaços sanguíneos parao teste de micronúcleo e foram contabilizados 3000 eritrócitos por indivíduo. Para análise histopatológica, coletou-se brânquia e fígado, para preparação histológica de rotina (H/E), a fim de se quantificar as alterações e para a contagem de células mucosas em brânquias, foi empregada Ácido Periódico-Schiff (PAS). Para a estatística foi utilizado o teste não paramétrico Mann-Whitney. A análise de metais do sedimento foi realizada por meio de espectrometria ótica, e seus resultados para os metais apresentaram- se dentro dos limites aceitos internacionalmente pela Legislação do Canadá, com exceção do Cádmio. Com o teste de micronúcleo não foi observado diferença significativa para micronúcleo em todos os pontos de estudo e períodos de avaliação, contudo foi possível observar anormalidades nucleares, e apresentaram valores significativos para todos tratamentos expostos aos sedimentos dos três pontos de coleta e nos 3 períodos de experimento, logo o sedimento apresenta potencial genotóxico para os peixes expostos. Para as alterações histológicas as estatísticas também foram significativas em relaçãoao controle negativo nos períodos de 5, 10 e 15 dias, e as lesões observadasforam: proliferação do epitélio, fusão parcial da lamela, congestão edesprendimento do epitélio, estas lesões estão ligadas com a defesa do órgão,que tendem a diminuir o contato do contaminante e a corrente sanguínea dopeixe. Em contrapartida, para as células mucosas que são células produtoras demuco nas brânquias e relacionadas com a defesa natural do peixe, foi possível observar a presença significativa com relação ao controle negativo no período de 5 dias, somente nos peixes expostos ao sedimento de Itapemirim, porém com 10 dias de exposição todos os peixes apresentaram diferença do CN e aos 15 dias, nenhum dos tratamentos mostrou-se significativamente diferente em relação ao CN. Com relação a histologia de fígado, as alterações detectadas foram citoplasma vacuolizado e centros de melanomacrófagos, estas alterações estão ligadas por contaminação do ambiente por metais.Portanto os testes de ecotoxicidade foram sensíveis ao potencial tóxico do sedimento em peixes, ainda que os valores dos metais tenham sido dentro dos padrões limites internacionais.

The degradation of aquatic ecosystems has been the center of concern because of the possible damage caused in organisms living in these environments. Thesouthern region of the Espírito Santo is very exposed to pollution from intensiv industrial activity, port, fishing and tourism. The evaluation of sediment toxicity is important for monitoring environmental quality, due to its ability to incorporate and accumulate contaminants. The evaluation of sediment toxicity is important for monitoring environmental quality, due to its ability to incorporate and accumulate contaminants. This study aimed to evaluate the ecotoxicity of the sediment three points of aquatic environments southern Espírito Santo (UBU / ANCHIETA / ITAPEMIRIM), and the possible mutagenic effects, histological genotóxicos.ealterações using as Oreochromis niloticus test organism. For this, used were 75 for 5 peixesdivididos sample groups 3 and tanks with sediment Anchieta and Ubu Itapemirim at a rate of 40L / water 3 kg / pellet, and a negative control and positivo.Ao end of every 5 days 5 fish were killed in a total of 15 days, to drive blood and subsequent preparation of blood smears forthe micronucleus test and were accounted for 3000 erythrocytes per individual. For histopathological analysis, was collected and the liver, gill, for routine histological preparation (M / E) in order to quantify the changes and the mucosal cell count gills was employed Periodic Acid-Schiff (PAS). Statistical we used the nonparametric Mann-Whitney.A analysis of sediment metals was carried out by optical spectrometry, and the results for the metals were within the limits of internationally accepted by Environment Canada, with the exception of Cadmium. With the micronucleus test there was no significant difference in micronucleus at all points of study and evaluation periods, however we observed nuclear abnormalities, and showed significant values for all treatments exposed to the sediments of the three collection points and 3 periods experiment, so the sediment has genotoxic potential for exposed fish. For histological changes statistics were also significant compared to the negative control in periods of 5, 10 and 15 days and the lesions observed were proliferation of the epithelium, partial melting of the coverslip, congestion and detachment of the epithelium, these lesions are linked to the defense of the body that tend to decrease the contact of the contaminant and the blood of the fish chain.In contrast, for the mucous cells are mucus-producing cells in the gills and related natural defense of the fish, we observed a significant presence in relation to the negative control in the 5 days period, only in fish exposed to Itapemirim sediment, but with 10 days of exposure all fish showed differences CN and 15 days, none of the treatments showed significantly different in relation to CN. With regard to liver histology, changes detected were vacuolated cytoplasm and melanomacrophages centers, these changes are linked by environmental contamination by metals. Therefore ecotoxicity tests were sensitive to the toxic potential of the sediment in fish, although the amounts of metals were within the limits international standards.

Vegetal test-system investigation on cytotoxicity of water from urban streams located in the northeastern region of Maringá, Paraná State,Brazil / Investigação da citotoxicidade das águas de córregos urbanos localizadosna região nordeste de Maringá, Estado do Paraná, Brasil, em sistema-teste vegetal

The increase in consumption of water, the destruction of riparian forests and thepollution caused by humans, have severely degraded several water resources. Numerous streamcrisscross the city of Maringá, Paraná state, Brazil and most of their sources are scattered throughthe urban region. Current analysis assesses the cytotoxic potential of water from theCorregozinho, Isalto, Morangueira and Ozório streams, located within the high-populatednortheastern region of Maringá, inside the urban perimeter. Root meristematic cells of Alliumcepa were used as test-system. The roots of onion were prepared by Feulgens reaction andstained with Schiff's reagent. Results showed that there were no statistically significant changesevaluated by the chi-square test on the rates of cell division in cells of Allium cepa roots treatedwith the water of the streams when compared to data from controls. However, further analysesshould be undertaken at different times for a periodic assessment of conditions in the streams,coupled with an awareness of the population on the environment.(AU)

O aumento do consumo da água, a devastação das matas ciliares e a poluição causada pela espéciehumana, fizeram com que muitos recursos hídricos fossem drasticamente degradados. A cidadede Maringá, Paraná, Brasil possui inúmeros córregos que a cortam, sendo que as nascentes damaioria deles estão espalhadas pela região urbana. Assim, este trabalho objetivou avaliar opotencial citotóxico das águas dos córregos, Corregozinho, Isalto, Morangueira e Ozório,localizados na região nordeste de Maringá, no perímetro urbano, local de grande concentração dapopulação urbana. Foram utilizadas como sistema-teste as células meristemáticas de raiz deAllium cepa. As raízes de cebola foram preparadas pela reação de Feulgen e coradas com o reativo deSchiff. Os resultados obtidos indicaram que não houve alterações, estatisticamente significativas,pelo teste do qui-quadrado, nos índices de divisão celular nas células das raízes de Allium cepa tratadascom as águas dos córregos, em relação aos dados obtidos para os controles. Entretanto, convém queoutras análises, em diferentes épocas, sejam realizadas, para uma avaliação periódica das condiçõesapresentadas por estes córregos, e aliado a estes resultados, conscientizar a população em relação aosdanos provocados ao meio ambiente e a necessidade de conservação do mesmo.(AU)

NOVA VARIANTE DA PROTEÍNA FLUORESCENTE DSRED2 COM POTENCIAL APLICAÇÃO NA PISCICULTURA ORNAMENTAL

A rentabilidade econômica gerada pela aquicultura ornamental a torna um dos importantes componentes da indústria aquícola. O aumento da demanda de peixes ornamentais gera a necessidade da utilização de técnicas que permitam a produção de novas variedades. Neste cenário, genes codificantes para proteínas fluorescentes têm sido inseridos com êxito no genoma de diversas espécies de peixes, gerando novas variedades ornamentais. Porém, a disponibilidade de proteínas fluorescentes no mercado é limitada. Desse modo, este trabalho teve como objetivo desenvolver novas variantes de proteínas fluorescentes para aplicação na aquicultura ornamental. Para isso, o gene DsRed2 que codifica para a proteína vermelha fluorescente do coral Discosoma sp. foi utilizado como base para a produção de novas variantes através de mutagênese randômica induzida por error-prone PCR (epPCR). Um total de 12 genes variantes foram isolados, sequenciados e analisados. A variante denominada Mutante #10 apresentou alterações interessantes nas suas propriedades espectrais, possuindo xxxx emissão de fluorescência quando excitada nos comprimentos de onda de xxx e xxxxx nm, respectivamente. Esta nova variante foi expressa em Escherichia coli e também no tecido muscular do zebrafish (Danio rerio), apresentando a xxxxxx emissão de fluorescência em ambos modelos. Uma proteína com xxxxx emissão de fluorescência pode ter aplicações em diversas áreas, desde as ciências básicas até a aquicultura ornamental.

The economic profitability generated by ornamental aquaculture makes it one of the important components of the aquaculture industry. The increased demand for ornamental fish generates the need to use techniques that permit the production of new varieties. In this scenario, genes encoding fluorescent proteins have been successfully inserted into the genome of several species of fish, generating new ornamental varieties. However, the availability of fluorescent proteins in the market is limited. Thus, this study aimed to develop new variants of fluorescents proteins for use in ornamental aquaculture. For this, the DsRed2 gene encoding the red fluorescent protein from coral Discosoma sp. was used as the basis for production of new variants by random mutagenesis induced by error-prone PCR (epPCR). A total of 12 gene variants were isolated, sequenced and analyzed. The variant named Mutante #10 showed interesting changes in its spectral properties, having xxxx fluorescence emission, when excited at wavelengths of xxx and xxx nm, respectively. This new variant was expressed in Escherichia coli and in the muscle tissue of zebrafish (Danio rerio), with xxxx fluorescence emission in both models. A protein with xxxx fluorescence emission may have applications in various fields, ranging from basic sciences to the ornamental aquaculture.

Biocontrol potential of salinity tolerant mutants of Trichoderma harzianum against Fusarium oxysporum

Exposing a wild-type culture of Trichoderma harzianum to gamma irradiation induced two stable salt-tolerant mutants (Th50M6 and Th50M11). Under saline conditions, both mutants greatly surpassed their wild type strain in growth rate, sporulation and biological proficiency against Fusarium oxysporum, the causal agent of tomato wilt disease. Tolerant T. harzianum mutants detained a capability to grow and convinced sporulation in growth media containing up to 69 mM NaCl. In comparison with their parent strain, characterization of both mutants confirmed that they have reinforced contents of proline and hydroxyproline, relatively higher sodium content compared to potassium, calcium or magnesium contents, higher level of total phenols. Electrophoretic analysis of total soluble proteins in the salt tolerance mutant Th50M6 showed different bands accumulated in response to 69 mM NaCl. Data also showed that mutants produce certain active metabolites, such as chitinases, cellulases, beta-galactosidases, as well as, some antibiotics i.e., trichodermin, gliotoxin and gliovirin. Trichoderma mutants significantly reduced wilt disease incidence and improved yield and mineral contents of tomato plants under both saline and non-saline soil conditions, as well as, under infested and natural conditions. T. harzianum mutants were also more efficient in dropping the F. oxysporum growth in rhizosphere compared to the wild type strain. Population density of both mutants in rhizosphere far exceeded that of T. harzianum wild type strain.

A exposição de uma cepa selvagem de Trichoderma harzianum à irradiação gama induziu dois mutantes tolerantes a sal (Th50M6 e Th50M11). Em condições salinas, os dois mutantes foram muito superiores à cepa selvagem em relação à velocidade de multiplicação, esporulação e eficiência contra Fusarium oxysporum, o agente causador da doença wilt do tomate. Os mutantes tolerantes foram capazes de multiplicação e esporulação em meio de cultura contendo NaCl até 69 mM. Em comparação à cepa selvagem, os dois mutantes possuíam conteúdo mais elevado de prolina e hidroxiprolina, conteúdo de sódio superior ao de potássio, cálcio ou magnésio e conteúdo elevado de fenóis totais. A análise eletroforética das proteínas totais solúveis no mutante Th50M6 apresentou bandas diferentes acumuladas em resposta a NaCl 69 mM. Os resultados também indicaram que os mutantes produzem alguns metabólitos ativos como quitinases, celulases, beta-galactosidades e antibióticos como tricodermina, gliotoxina e gliovirina. Os mutantes de Trichoderma reduziram significativamente a incidência da doença e melhoraram o rendimento e o conteúdo de minerais do tomate tanto em condições salinas como não-salinas e também em condições naturais e de infestação. Quando comparados à cepa selvagem, os mutantes de Trichoderma foram também mais eficientes em diminuir o crescimento de F. oxysporum na rizosfera.A densidade populacional de ambos mutantes na rizosfera excedeu muito a da cepa selvagem.

65 kDa similar ao isolado selvagem, que pode ser a responsável pela sua ação inseticida. Os resultados obtidos demonstram a possibilidade de efetuar melhoramento genético em B. thuringiensis por meio de mutagênese mediada por transposon e abre caminho para o estudo das vias metabólicas envolvidas na produção de proteínas Cry / Obtenção de mutantes de Bacillus thuringiensis por inserção do transposon Tn-5 e avaliação da toxicidade frente a larvas de Spodoptera frugiperda / Bacillus is a gram-positive bacterium and produces internal crystal inclusions named crystal (Cry) proteins or d - endotoxins during the sporulation phase. These proteins as used to control several agriculture insect pests. However little is known concerning the metabolic pathways involved in the production of these proteins. For example, in nature, it is possible to find isolates that produce large quantities of the Cry proteins as well as it is possible to find ones that produce limited quantities. Since such difference might be related to gene regulation the identification of regulation factors found in these isolated should lead to an increment on the crystal protein production found in isolated naturally exhibiting lower production. In this work, ten mutant clones were analyzed compared to the wild type (Bt1) with respect to Spodoptera frugiperda neonatal larvae mortality considering also the amount of crystal protein produced by these mutants. The results have demonstrated that two mutant clones named B9 and E2 have produced strong control of these larvae; while at the same time eliciting a delay on the development of the ones that eventually did not dye at first. As for the Cry protein content, the cloned presented a protein profile ranging from

Bacillus thuringiensis é uma bactéria gram-positiva e possui habilidade de produzir proteínas denominadas Cry ou delta-endotoxinas, durante a fase de esporulação. Estas proteínas são utilizadas no controle biológico de várias ordens de insetos. No entanto, pouco se conhece a respeito das vias metabólicas envolvidas na produção dessas proteínas, por exemplo, na natureza, é possível encontrar isolados que produzem grande quantidade de proteínas Cry, como também é possível encontrar outros isolados que produzem poucas quantidades. Considerando que essa diferença é devida a uma regulação gênica diferenciada entre isolados, a identificação dessa regulação pode levar a um incremento na produção de proteínas. Neste trabalho, foram analisados 10 clones mutantes comparados com o isolado selvagem (Bt1) quanto à mortalidade de lagartas neonatas de Spodoptera frugiperda considerando também a quantidade de proteínas Cry produzidas por estes mutantes. Os resultados demonstram que dois clones identificados como B9 e E2, demonstraram um bom controle dessas lagartas, mesmo aquelas que permaneceram vivas, ocorreu um atraso em seu desenvolvimento. Quanto à produção de proteínas, os clones apresentaram perfil protéico entre

45 kDa e