Obtaining monokaryotic and dikaryotic mycelial cultures of two Amazonian strains of Geastrum (Geastraceae, Basidiomycota) / Obtenção de culturas miceliais monocariótica e dicariótica de duas linhagens amazônicas de Geastrum (Geastraceae, Basidiomycota)

The high diversity of the genus Geastrum and the difficulty of obtaining mycelial cultures impairs the study of the ecophysiology and the exploration of the biotechnological potential of the taxon. In this study, different culture media were tested to obtain mycelial cultures for G. lloydianum and G. subiculosum collected in the Brazilian Amazon. Data on spore germination, and isolation of monokaryotic cultures and in vitro sexual reproduction are presented, as well as a brief morphological description of the cultures obtained. For both species, Potato Dextrose Agar (PDA) was the most promising of the tested culture media. The highest growth in agar culture ever recorded for this genus is reported (4.9 mm per week for G. lloydianum and 7.5 mm for G. subiculosum). In the PDA culture medium, spores germinated after 35-40 days of incubation and the isolation of monokaryotic cultures of the two species, as well as in vitro sexual crosses, were successfully performed.(AU)

A alta diversidade do gênero Geastrum e a dificuldade de obtenção de culturas miceliais prejudicam o estudo ecofisiológico e a exploração do potencial biotecnológico do táxon. Nesse estudo, foram testados diferentes meios de cultivo, visando a obtenção de culturas miceliais para G. lloydianum e G. subiculosum coletadas na Amazônia brasileira. A germinação dos esporos, o isolamento das culturas monocarióticas e o cruzamento sexual in vitro são apresentados, além de uma breve descrição morfológica das culturas obtidas. O meio de cultura Batata Dextrose Ágar (BDA) foi o mais promissor dentre os meios de cultura testados no cultivo das duas espécies. Reportamos o maior crescimento em cultura de ágar já registrado para esse gênero (4,9 mm por semana para G. lloydianum e 7,5 mm por semana para G. subiculosum). Nesse meio de cultivo, os esporos germinaram após 35-40 dias de incubação e o isolamento de culturas monocarióticas das duas espécies, assim com os cruzamentos sexuais in vitro, foram realizados com sucesso.(AU)

Avaliação de diferentes métodos de preservação do fungo Phoma Dimorpha / Evaluation of different methods of preservation of Phoma dimorpha fungus

Frente a necessidade de preservação e a manutenção de materiais biológicos, dentre eles fungos com potencial para controle biológico, para o desenvolvimento biotecnológico e científico, que vêm ganhando destaque no cenário mundial. Sendo necessário a adequação de métodos de preservação que além de garantia a sobrevivência destes microrganismos permitam a conservação de suas características morfológicas, fisiológicas e genéticas, no entanto, não existe um método ideal ou universal para a conservação de materiais biológicos. Diante desta necessidade o presente trabalho teve como objetivo de avaliar a eficácia e viabilidade de três métodos de preservação de isolados do fungo Phomadimorpha (repicagens periódicas, Castellani e fragmentos de papel-filtro), em dois períodos de avaliação, seis e doze meses após o armazenamento. Estudou-se a eficácia e viabilidade, através do crescimento micelial do fungo em meio de cultivo contendo batata-dextrose-ágar. Houve variabilidade entre os métodos de preservação do isolado do fungo P. dimorpha para o crescimento micelial, eficácia do método e índice de velocidade do crescimento micelial, nos dois períodos de avaliação, após seis e doze meses de armazenamento. O método de preservação em fragmento de papel filtro mostrou-se como o mais eficaz na preservação do isolado do fungo P. dimorpha nos dois períodos de avaliação, após seis e doze meses de armazenamento, sendo ideal para obter o maior o crescimento micelial, eficácia do método e índice de velocidade do crescimento micelial.

Facing the need for preservation and maintenance of biological materials, among them fungi with potential for biological control, for biotechnological and scientific development, which are gaining prominence in the world scenario. It is necessary to adapt preservation methods that besides guaranteeing the survival of these microorganisms allow the conservation of their morphological, physiological and genetic characteristics, however, there is no ideal or universal method for the conservation of biological materials. In view of this need, the present work had the objective of evaluating the efficacy and feasibility of three methods for the preservation of Phoma dimorpha (periodic transfer, Castellani and filter paper fragments) isolates in two evaluation periods, six and twelve months after the storage. Efficacy and viability were studied by mycelial growth of the fungus in a culture medium containing potato-dextrose-agar. There was variability between the preservation methods of the P. dimorpha fungus isolate for mycelial growth, method efficacy and mycelial growth rate index, in the two evaluation periods, after six and twelve months of storage. The filter paper fragment preservation method was the most effective in reserving the P. dimorpha fungus isolate in the two evaluation periods, after six and twelve months of storage, being ideal to obtain the highest mycelial growth, efficacy of the method and mycelial growth rate index.

Avaliação de diferentes métodos de preservação do fungo Phoma Dimorpha / Evaluation of different methods of preservation of Phoma dimorpha fungus

Frente a necessidade de preservação e a manutenção de materiais biológicos, dentre eles fungos com potencial para controle biológico, para o desenvolvimento biotecnológico e científico, que vêm ganhando destaque no cenário mundial. Sendo necessário a adequação de métodos de preservação que além de garantia a sobrevivência destes microrganismos permitam a conservação de suas características morfológicas, fisiológicas e genéticas, no entanto, não existe um método ideal ou universal para a conservação de materiais biológicos. Diante desta necessidade o presente trabalho teve como objetivo de avaliar a eficácia e viabilidade de três métodos de preservação de isolados do fungo Phomadimorpha (repicagens periódicas, Castellani e fragmentos de papel-filtro), em dois períodos de avaliação, seis e doze meses após o armazenamento. Estudou-se a eficácia e viabilidade, através do crescimento micelial do fungo em meio de cultivo contendo batata-dextrose-ágar. Houve variabilidade entre os métodos de preservação do isolado do fungo P. dimorpha para o crescimento micelial, eficácia do método e índice de velocidade do crescimento micelial, nos dois períodos de avaliação, após seis e doze meses de armazenamento. O método de preservação em fragmento de papel filtro mostrou-se como o mais eficaz na preservação do isolado do fungo P. dimorpha nos dois períodos de avaliação, após seis e doze meses de armazenamento, sendo ideal para obter o maior o crescimento micelial, eficácia do método e índice de velocidade do crescimento micelial.(AU)

Facing the need for preservation and maintenance of biological materials, among them fungi with potential for biological control, for biotechnological and scientific development, which are gaining prominence in the world scenario. It is necessary to adapt preservation methods that besides guaranteeing the survival of these microorganisms allow the conservation of their morphological, physiological and genetic characteristics, however, there is no ideal or universal method for the conservation of biological materials. In view of this need, the present work had the objective of evaluating the efficacy and feasibility of three methods for the preservation of Phoma dimorpha (periodic transfer, Castellani and filter paper fragments) isolates in two evaluation periods, six and twelve months after the storage. Efficacy and viability were studied by mycelial growth of the fungus in a culture medium containing potato-dextrose-agar. There was variability between the preservation methods of the P. dimorpha fungus isolate for mycelial growth, method efficacy and mycelial growth rate index, in the two evaluation periods, after six and twelve months of storage. The filter paper fragment preservation method was the most effective in reserving the P. dimorpha fungus isolate in the two evaluation periods, after six and twelve months of storage, being ideal to obtain the highest mycelial growth, efficacy of the method and mycelial growth rate index.(AU)

Atividade antifúngica do extrato alcoólico de própolis, álcool de cereais e do óleo essencial de manjericão sobre Botrytis cinerea / Antifungal activity of propolis alcoholic extract, grain alcohol, and basil essential oil on Botrytis cinerea

A uva é uma fruta amplamente aceita pelos consumidores, além de ser produzida em larga escala no Brasil. Entretanto é uma cultura muito suscetível a perdas em pré-colheita ocasionadas por doenças e, entre elas, pode-se citar a podridão cinzenta do cacho, cujo agente causal é o fungo Botrytis cinerea. A busca por formas alternativas para o controle desse patógeno pode minimizar o uso de agrotóxicos, garantindo um alimento mais seguro. Objetivou-se avaliar o potencial antifúngico in vitro do extrato alcoólico de própolis, álcool de cereais e óleo essencial de manjericão (Ocimum basilicum), autoclavados ou não, sobre o crescimento micelial de Botrytis cinerea, ao longo do tempo de exposição. Os tratamentos avaliados foram: extrato alcoólico de própolis e álcool de cereais, ambos nas concentrações 0, 2,5, 6,25, 12,5%; e óleo essencial de manjericão, nas concentrações 0, 0,25, 0,50, 1%. Para a obtenção do crescimento micelial foram realizadas medidas em sentidos diametralmente opostos, com um paquímetro digital, durante 0, 24, 48, 72, 96, 120 e 144 h de exposição, para o cálculo da taxa de inibição do crescimento micelial (ICM, %). O experimento foi realizado em duplicata, sendo os tratamentos dispostos em esquema fatorial 4x7 (concentrações x tempos) e os dados foram analisados por comparação de médias (teste de Tukey, p ≤ 0,05), desdobrando a interação, quando significativa. Todos os tratamentos contendo óleo essencial de manjericão autoclavado e não autoclavado foram eficientes na inibição do crescimento micelial de B. cinerea. A autoclavagem do extrato alcoólico de própolis proporciona maior eficácia para o controle do patógeno do que a não autoclavagem. Para o álcool de cereais, a autoclavagem interfere na eficiência de controle de B. cinerea.

Grape is a fruit widely accepted by consumers, besides being produced in large scale in Brazil. However, it is a crop very susceptible to losses in pre-harvest and, among the main diseases responsible for these losses, we can mention the gray rot of the bunch, whose causal agent is the fungus Botrytis cinerea. The search for alternative ways to control this pathogen can minimize the use of agrochemicals, ensuring a safer food. The aim of this study was to evaluate the in vitro antifungal potential of propolis alcoholic extract, cereal alcohol and basil oil (Ocimum basilicum), autoclaved or not, on the mycelial growth of Botrytis cinerea, during the exposure time. The treatments evaluated were: alcoholic extract of propolis and cereal alcohol, both in concentrations 0.0, 2.5, 6.25, 12.5%; and basil oil, at concentrations 0.25, 0.50, 1.00%. In order to obtain the mycelial growth, measurements were carried out in diametrically opposite directions, with a digital caliper, during 0, 24, 48, 72, 96, 120 and 144 hours of exposure, to calculate the rate of inhibition of mycelial growth (IMG, %). The experiment was performed in duplicate, with the treatments arranged in a factorial scheme 4x7 (concentrations x times) and the data were analyzed by means comparison (Tukey's test, p ≤ 0.05), unfolding the interaction, when significant. All treatments containing autoclaved and non-autoclaved basil essential oil were efficient in inhibiting the mycelial growth of B. cinerea. The autoclaving of the propolis alcoholic extract provides greater efficacy for the control of the pathogen than non-autoclaving. For cereal alcohol, autoclaving interferes with the control efficiency of B. cinerea.

Atividade antifúngica do extrato alcoólico de própolis, álcool de cereais e do óleo essencial de manjericão sobre Botrytis cinerea / Antifungal activity of propolis alcoholic extract, grain alcohol, and basil essential oil on Botrytis cinerea

A uva é uma fruta amplamente aceita pelos consumidores, além de ser produzida em larga escala no Brasil. Entretanto é uma cultura muito suscetível a perdas em pré-colheita ocasionadas por doenças e, entre elas, pode-se citar a podridão cinzenta do cacho, cujo agente causal é o fungo Botrytis cinerea. A busca por formas alternativas para o controle desse patógeno pode minimizar o uso de agrotóxicos, garantindo um alimento mais seguro. Objetivou-se avaliar o potencial antifúngico in vitro do extrato alcoólico de própolis, álcool de cereais e óleo essencial de manjericão (Ocimum basilicum), autoclavados ou não, sobre o crescimento micelial de Botrytis cinerea, ao longo do tempo de exposição. Os tratamentos avaliados foram: extrato alcoólico de própolis e álcool de cereais, ambos nas concentrações 0, 2,5, 6,25, 12,5%; e óleo essencial de manjericão, nas concentrações 0, 0,25, 0,50, 1%. Para a obtenção do crescimento micelial foram realizadas medidas em sentidos diametralmente opostos, com um paquímetro digital, durante 0, 24, 48, 72, 96, 120 e 144 h de exposição, para o cálculo da taxa de inibição do crescimento micelial (ICM, %). O experimento foi realizado em duplicata, sendo os tratamentos dispostos em esquema fatorial 4x7 (concentrações x tempos) e os dados foram analisados por comparação de médias (teste de Tukey, p ≤ 0,05), desdobrando a interação, quando significativa. Todos os tratamentos contendo óleo essencial de manjericão autoclavado e não autoclavado foram eficientes na inibição do crescimento micelial de B. cinerea. A autoclavagem do extrato alcoólico de própolis proporciona maior eficácia para o controle do patógeno do que a não autoclavagem. Para o álcool de cereais, a autoclavagem interfere na eficiência de controle de B. cinerea.(AU)

Grape is a fruit widely accepted by consumers, besides being produced in large scale in Brazil. However, it is a crop very susceptible to losses in pre-harvest and, among the main diseases responsible for these losses, we can mention the gray rot of the bunch, whose causal agent is the fungus Botrytis cinerea. The search for alternative ways to control this pathogen can minimize the use of agrochemicals, ensuring a safer food. The aim of this study was to evaluate the in vitro antifungal potential of propolis alcoholic extract, cereal alcohol and basil oil (Ocimum basilicum), autoclaved or not, on the mycelial growth of Botrytis cinerea, during the exposure time. The treatments evaluated were: alcoholic extract of propolis and cereal alcohol, both in concentrations 0.0, 2.5, 6.25, 12.5%; and basil oil, at concentrations 0.25, 0.50, 1.00%. In order to obtain the mycelial growth, measurements were carried out in diametrically opposite directions, with a digital caliper, during 0, 24, 48, 72, 96, 120 and 144 hours of exposure, to calculate the rate of inhibition of mycelial growth (IMG, %). The experiment was performed in duplicate, with the treatments arranged in a factorial scheme 4x7 (concentrations x times) and the data were analyzed by means comparison (Tukey's test, p ≤ 0.05), unfolding the interaction, when significant. All treatments containing autoclaved and non-autoclaved basil essential oil were efficient in inhibiting the mycelial growth of B. cinerea. The autoclaving of the propolis alcoholic extract provides greater efficacy for the control of the pathogen than non-autoclaving. For cereal alcohol, autoclaving interferes with the control efficiency of B. cinerea.(AU)

Associação dos fungos Monacrosporium sinense e Pochonia chlamydosporia no controle biológico de nematoides gastrintestinais de bovinos

As infecções por nematoides são uma importante restrição à produção eficiente de ruminantes criados em pastagem no Brasil e no mundo. O presente estudo descreve sobre os fungos Monacrosporium sinense (SF53) e Pochonia chlamydosporia (VC4) e seu uso associado no controle de nematoides gastrintestinais de bovinos. As etapas dos estudos in vitro envolveram observação dos índices de velocidade de crescimento micelial (IVCM) de cada fungo em três meios de cultura, seis temperaturas e sete variações de pH; a compatibilidade entre estes isolados e suas atividades nematicidas conjuntas e isoladas sobre larvas infectantes (L3) de bovinos. A etapa do estudo in vivo avaliou os efeitos da administração oral de péletes contendo a combinação fúngica no controle biológico de L3 de nematoides parasitas gastrintestinais de bovinos criados em pastagens. Foi possível identificar que a temperatura de 40°C foi prejudicial para o crescimento dos fungos. M. sinense apresentou maior IVCM a 30°C nos três meios de cultura utilizados e na variação de pH 7 a 9 em meio BDA. P. chlamydosporia apresentou maior IVCM em meio ágar água a 20°C e em pH 7 em meio BDA. A compatibilidade entre os isolados SF53 e VC4 foi confirmada pelos testes de confrontação direta, antibiose e compostos voláteis. Além disso, a avaliação nematicida in vitro mostrou que a melhor eficácia foi quando os dois isolados foram usados em conjunto, com redução de 98,90% no número de L3 de nematoides de bovinos. Na avaliação a campo, a recuperação de L3 da pastagem do grupo tratado com a combinação fúngica foi 91,7% e 86,4% menor do que na pastagem do grupo controle, respectivamente para amostras coletadas a 20 cm e 40 cm das fezes. Os valores de ovos por grama de fezes (OPG) nos meses de maio de 2019 e janeiro de 2020 foram menores (p0.05) no grupo tratado. Portanto, os fungos M. sinense e P. chlamydosporia são promissores no controle de larvas infectantes de nematoides gastrintestinais de bovinos.

Nematode infections are an important restriction to the efficient production of pasture-raised ruminants in Brazil and worldwide. This study describes about fungi Monacrosporium sinense (SF53) and Pochonia chlamydosporia (VC4) and their associated use in the control of gastrointestinal nematodes (GIN) from cattle. The in vitro studies involved mycelial growth rate indices (MGRI) observations of each fungus in three culture media, six temperatures and seven pH variations; compatibility between these isolates and their joint nematicidal activities and isolated activities on cattle nematodes infective larvae (L3). The in vivo study evaluated the effects of oral administration of pellets containing fungal combination in the biological control of gastrointestinal parasitic nematodes in cattle and on pastures. It was possible to identify that the temperature of 40°C was harmful to fungi growth. M. sinense showed higher MGRI at 30°C in the three culture media used and in the pH range from 7 to 9 in PDA medium. P. chlamydosporia showed higher MGRI in water agar medium at 20°C and at pH 7 in PDA medium. The compatibility between SF53 and VC4 isolates was confirmed by direct confrontation, antibiosis and volatile compounds tests. Furthermore, the in vitro nematicidal evaluation showed that the best efficacy was when the two isolates were together used, with a 98.90% reduction in L3 number. In field evaluation, the L3 recovery in pasture of the group treated with the fungal combination was 91.7% and 86.4% lower than in pasture of the control group, respectively for samples collected at 20 cm and 40 cm from the feces. The eggs per gram of feces (OPG) values in the months of May 2019 and January 2020 were lower (p0.05) in the treated group. Therefore, the fungi M. sinense and P. chlamydosporia are promising in the control of bovine gastrointestinal nematodes

Effect of surfactants and temperature on germination and vegetative growth of Beauveria bassiana

Three non-ionic surfactants: Tween20, Tween80 and Breakthru® were screened for their effects on spore germination and mycelial growth rates and for their influence on three isolates of Beauveria bassiana spore germination at various temperatures. Tween20 and Tween80 were compatible with all the B. bassiana isolates in the germination studies, but inhibited germination at higher surfactant concentrations, irrespective of the conidial concentrations. Breakthru® had an inhibitory effect on germination even at the lowest concentration of 0.1% on all the B. bassiana isolates. The effects of the surfactants on spore germination did not correspond with their effects on colony growth. Conidial viability within the same formulation declined significantly with increases in temperature, irrespective of the surfactant. The optimal temperature for conidial germination of B. bassiana isolates was approximately 25 °C with an upper limit at 30 °C. Isolate 7320 was identified as the least affected by the different surfactants. This isolate was able to germinate rapidly in a broad temperature range of 25–30 °C after 24 h, this characteristic being an essential factor in controlling house fly populations in poultry houses.(AU)

Morphology and mycelial growth rate of Pleurotus spp. strains from the Mexican mixtec region

Two native Pleurotus spp. strains (white LB-050 and pale pink LB-051) were isolated from rotten tree trunks of cazahuate (Ipomoea murucoides) from the Mexican Mixtec Region. Both strains were chemically dedikaryotized to obtain their symmetrical monokaryotic components (neohaplonts). This was achieved employing homogenization time periods from 60 to 65 s, and 3 day incubation at 28 °C in a peptone-glucose solution (PGS). Pairing of compatible neohaplonts resulted in 56 hybrid strains which were classified into the four following hybrid types: (R1-n xB1-n, R1-n xB2-1, R2-n xB1-n and R2-n xB2-1). The mycelial growth of Pleurotus spp. monokaryotic and dikaryotic strains showed differences in texture (cottony or floccose), growth (scarce, regular or abundant), density (high, regular or low), and pigmentation (off-white, white or pale pink). To determine the rate and the amount of mycelium growth in malt extract agar at 28 °C, the diameter of the colony was measured every 24 h until the Petri dish was completely colonized. A linear model had the best fit to the mycelial growth kinetics. A direct relationship between mycelial morphology and growth rate was observed. Cottony mycelium presented significantly higher growth rates (p < 0.01) in comparison with floccose mycelium. Thus, mycelial morphology can be used as criterion to select which pairs must be used for optimizing compatible-mating studies. Hybrids resulting from cottony neohaplonts maintained the characteristically high growth rates of their parental strains with the hybrid R1-n xB1-n being faster than the latter.

Atividade de quitosanas com diferentes pesos moleculares sobre Alternaria solani / Activity of chitosan with different molecular weights on Alternaria solani

A quitosana tem demonstrado potencial antifúngico e de proteção das plantas contra fitopatógenos. O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito antifúngico de quitosanas sobre Alternaria solani, agente causal da pinta preta em tomateiros. Foram utilizadas três quitosanas: uma comercial (Qcom), encontrada em lojas de suplementos alimentares; uma de baixo peso molecular (Qbpm; 50-190 KDa) e outra de médio peso molecular (Qmpm; 190-310 KDa), ambas obtidas da Sigma Aldrich. As quitosanas foram depositadas sobre lâminas escavadas, para avaliar a germinação de conídios e alongamento do tubo germinativo, ou incorporadas ao meio BDA, para avaliar o crescimento micelial de A. solani. Evidenciou-se atividade antifúngica desses polissacarídeos sobre A. solani, com inibição da germinação de conídios e do crescimento micelial de 85% e 50%, respectivamente, quando utilizados em concentrações de 0,125 mg/mL e 0,5 mg/mL. O peso molecular da quitosana não influenciou a atividade antibiótica in vitro.

Chitosan has shown significant antifungal activity against several plant pathogens. The aim of this study was to evaluate the antifungal effect of chitosans on Alternaria solani, the causal agent of early blight in tomato. Three chitosans were used: a commercial one (Qcom), found in food supplement stores; one of low molecular weight (Qbpm; 50 - 190 KDa) and one of medium molecular weight (Qmpm; 190 - 310 KDa), the latter two obtained from Sigma Aldrich. The chitosan were deposited on slides, to assess the conidial germination and germ tube elongation, or incorporated into the BDA medium, to evaluate the mycelial growth of A. solani. The results showed an antifungal activity of these polysaccharides on A. solani, with inhibition of spore germination and mycelial growth of 85% and 50%, respectively, when used at concentrations of 0.125 mg/mL and 0.5 mg/mL. The molecular weight has not influenced the in vitro activity of chitosan.

ATIVIDADE DE QUITOSANAS COM DIFERENTES PESOS MOLECULARES SOBRE ALTERNARIA SOLANI

ABSTRACT Chitosan has shown significant antifungal activity against several plant pathogens. The aim of this study was to evaluate the antifungal effect of chitosans on Alternaria solani, the causal agent of early blight in tomato. Three chitosans were used: a commercial one (Qcom), found in food supplement stores; one of low molecular weight (Qbpm; 50 - 190 KDa) and one of medium molecular weight (Qmpm; 190 - 310 KDa), the latter two obtained from Sigma Aldrich. The chitosan were deposited on slides, to assess the conidial germination and germ tube elongation, or incorporated into the BDA medium, to evaluate the mycelial growth of A. solani. The results showed an antifungal activity of these polysaccharides on A. solani, with inhibition of spore germination and mycelial growth of 85% and 50%, respectively, when used at concentrations of 0.125 mg/mL and 0.5 mg/mL. The molecular weight has not influenced the in vitro activity of chitosan.

RESUMO A quitosana tem demonstrado potencial antifúngico e de proteção das plantas contra fitopatógenos. O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito antifúngico de quitosanas sobre Alternaria solani, agente causal da pinta preta em tomateiros. Foram utilizadas três quitosanas: uma comercial (Qcom), encontrada em lojas de suplementos alimentares; uma de baixo peso molecular (Qbpm; 50-190 KDa) e outra de médio peso molecular (Qmpm; 190-310 KDa), ambas obtidas da Sigma Aldrich. As quitosanas foram depositadas sobre lâminas escavadas, para avaliar a germinação de conídios e alongamento do tubo germinativo, ou incorporadas ao meio BDA, para avaliar o crescimento micelial de A. solani. Evidenciou-se atividade antifúngica desses polissacarídeos sobre A. solani, com inibição da germinação de conídios e do crescimento micelial de 85% e 50%, respectivamente, quando utilizados em concentrações de 0,125 mg/mL e 0,5 mg/mL. O peso molecular da quitosana não influenciou a atividade antibiótica in vitro.

Comparison of radial growth rate of the mutualistic fungus of Atta sexdens rubropilosa forel in two culture media

In vitro culture of the mutualistic fungus of leaf-cutting ants is troublesome due to its low growth rate, which leads to storage problems and contaminants accumulation. This paper aims at comparing the radial growth rate of the mutualistic fungus of Atta sexdens rubropilosa Forel in two different culture media (Pagnocca B and MEA LP). Although total MEA LP radial growth was greater all along the bioassay, no significant difference was detected between growth efficiencies of the two media. Previous evidences of low growth rate for this fungus were confirmed. Since these data cannot point greater efficiency of one culture medium over the other, MEA LP medium is indicated for in vitro studies with this mutualistic fungus due its simpler composition and translucent color, making the analysis easier.

Spore production in Paecilomyces lilacinus (Thom.) samson strains on agro-industrial residues

Paecilomyces lilacinus has potential for pests control. We aimed to analyze mycelial growth and spore production in P. lilacinus strains in several agro-industrial residues and commercial media. This study suggests alternative nutrient sources for fungi production and that the biotechnological potential of agro-industrial refuses could be employed in byproducts development.

Paecilomyces lilacinus apresenta potencial para controle de pragas. O objetivo deste trabalho foi analisar o crescimento micelial e a produção de esporos de linhagens de P. lilacinus em resíduos agro-industriais e meios comerciais. Este estudo sugere fontes alternativas para produção de fungos com potencial biotecnológico para desenvolvimento de bioprodutos.

Optimization of nutritional requirements for mycelial growth and sporulation of entomogenous fungus Aschersonia aleyrodis Webber

The objective of the present study was to investigate the optimal nutritional requirements for mycelial growth and sporulation of entomopathogenic fungus Aschersonia aleyrodis Webber by orthogonal layout methods. Herein the order of effects of nutrient components on mycelial growth was tryptone > Ca2+ > soluble starch > folacin, corresponding to the following optimal concentrations: 1.58% Soluble Starch, 3.16% Tryptone, 0.2 mmol l-1 Ca2+ and 0.005% Folacin. The optimal concentration of each factors for sporulation was 1.16% lactose, 0.394% tryptone, 0.4 mmol l-1 Fe2+ and 0.00125% V B1, and the effects of medium components on sporulation were found to be in the order lactose > V B1 > Fe2+ > tryptone. Under the optimal culture conditions, the maximum production of mycelial growth achieved 20.05 g l-1 after 7 days of fermentation, while the maximum spore yield reached 5.23 ×10(10) spores l-1 after 22 days of cultivation. This is the first report on optimization of nutritional requirements and design of simplified semi-synthetic media for mycelial growth and sporulation of A. aleyrodis.

O objetivo deste estudo foi investigar as exigências nutricionais ótimas para o crescimento micelial e esporulação do fungo entomopatogênico Aschersonia aleyrodis Webber. A ordem dos efeitos dos nutrientes na multiplicação micelial foi triptona>Ca2+>amido solúvel>folacina, com as seguintes concentrações ótimas: amido solúvel 1,58%, tritona 3,16%, Ca2+ 0,2mmol.l-1 e folacina 0,005%. Para a esporulação, a concentração ótima de cada fator foi: lactose 1,16%, triptona 0,394%, Fe2+ 0,4mmol.l-1 e V B1 0,00125%, na seguinte ordem: lactose> V B1> Fe2+>tritona. Em condições ótimas de cultura, a produção máxima de micélio foi 20,05g.l-1 após 7 dias de fermentação, enquanto o rendimento máximo de esporos foi 5,23 x 10(10) esporos.l-1 após 22 dias de cultivo. Esse é o primeiro relato sobre otimização das exigências nutricionais e desenvolvimento de meio de cultura semi-sintético para crescimento micelial e esporulação de A. aleyrodis.

Growth of symbiont fungi of some higher attine ants in mineral medium

Bioassays were conducted to verify the possibility of culturing the symbiont fungus of some higher attine in mineral medium and finding out the optimum pH value for their satisfactory mycelial growth. Three organic media and one mineral medium were inoculated with isolates from Atta sexdens piriventris and Acromyrmex heyeri. In mineral medium different values of pH (4.0, 5.0, 6.0 and 7.0) were tested with isolates from A. laevigata and A. laticeps. The behavior of isolates (colony diameter) was different in the mineral medium. However, even the one which grew the least of all provided enough mycelial for RAPD analysis. The best range of pH for fungal growth in mineral medium was between 4.0 and 5.0

Foram conduzidos bioensaios para verificar a possibilidade de cultivar o fungo simbionte de alguns attine superiores em meio mineral e obter um valor de pH ótimo para o seu crescimento micelial. Três meios orgânicos e um meio mineral foram testados, avaliando-se o crescimento (diâmetro da colônia) de isolados de fungos de Atta sexdens piriventris e Acromyrmex heyeri. No meio mineral, diferentes valores de pH (4,0, 5,0, 6,0 and 7,0) foram avaliados, por meio do mesmo parâmetro anterior, com isolados de fungos de A. laevigata e A. laticeps. No meio mineral, os isolados testados apresentaram crescimento diferenciado, entretanto mesmo aquele que menos cresceu, forneceu material suficiente para as análises de RAPD. No mesmo meio, verificou-se que a melhor faixa de pH para o crescimento micelial está entre 4,0 e 5,0.

Growth of symbiont fungi of some higher attine ants in mineral medium

Bioassays were conducted to verify the possibility of culturing the symbiont fungus of some higher attine in mineral medium and finding out the optimum pH value for their satisfactory mycelial growth. Three organic media and one mineral medium were inoculated with isolates from Atta sexdens piriventris and Acromyrmex heyeri. In mineral medium different values of pH (4.0, 5.0, 6.0 and 7.0) were tested with isolates from A. laevigata and A. laticeps. The behavior of isolates (colony diameter) was different in the mineral medium. However, even the one which grew the least of all provided enough mycelial for RAPD analysis. The best range of pH for fungal growth in mineral medium was between 4.0 and 5.0

Foram conduzidos bioensaios para verificar a possibilidade de cultivar o fungo simbionte de alguns attine superiores em meio mineral e obter um valor de pH ótimo para o seu crescimento micelial. Três meios orgânicos e um meio mineral foram testados, avaliando-se o crescimento (diâmetro da colônia) de isolados de fungos de Atta sexdens piriventris e Acromyrmex heyeri. No meio mineral, diferentes valores de pH (4,0, 5,0, 6,0 and 7,0) foram avaliados, por meio do mesmo parâmetro anterior, com isolados de fungos de A. laevigata e A. laticeps. No meio mineral, os isolados testados apresentaram crescimento diferenciado, entretanto mesmo aquele que menos cresceu, forneceu material suficiente para as análises de RAPD. No mesmo meio, verificou-se que a melhor faixa de pH para o crescimento micelial está entre 4,0 e 5,0.

ANALYSES OF GENETIC VARIABILITY IN LENTINULA EDODES THROUGH MYCELIA RESPONSES TO DIFFERENT ABIOTIC CONDITIONS AND RAPD MOLECULAR MARKERS

The growth of thirty-four Lentinula edodes strains submitted to different mycelial cultivation conditions (pH and temperature) was evaluated and strain variability was assessed by RAPD molecular markers. The growth at three pH values (5, 6 and 7) and four different temperatures (16, 25, 28 and 37ºC) was measured using the in vitro mycelial development rate and water retention as parameters. Mycelial cultivation was successful at all pH tested, while the ideal temperature for mycelial cultivation ranged between 25 and 28ºC. The water content was lower in strains grown at 37ºC. Among 20 OPA primers (Operon Technologies, Inc.) used for the RAPD analyses, seventeen presented good polymorphism (OPA01 to OPA05, OPA07 to OPA14, OPA17 to OPA20). The clustering based on similarity coefficients allowed the separation of strain in two groups with different geographic origins.

Analisou-se o comportamento de 34 linhagens de Lentinula edodes, quando submetidas a diferentes condições de cultivo micelial (pH e temperatura), e a variabilidade das linhagens através de marcadores moleculares RAPD. A caracterização das linhagens foi realizada observando-se o comportamento de cada uma delas quando submetidas a três pHs (5, 6 e 7) e quatro temperaturas diferentes (16, 25, 28 e 37ºC), em função da taxa de desenvolvimento e da retenção de água pelo micélio in vitro. O cultivo micelial foi bem sucedido em todos os pHs utilizados. Já para o fator temperatura, foi estabelecido como faixas ideais para cultivo micelial, aquelas compreendidas entre 25 e 28ºC. O conteúdo hídrico foi menor nas linhagens cultivadas a 37ºC. O padrão de RAPD foi determinado e foram testados 20 primers OPA (Operon Technologies, Inc.), dos quais 17 forneceram boa fonte de polimorfismo (OPA01 a OPA05, OPA07 a OPA14, OPA17 a OPA20). O agrupamento das linhagens baseado nos coeficientes de similaridade permitiu a separação de dois grupos de procedências geográficas distintas.

Growth and sporulation of Metarhizium flavoviride var. Flavoviride on culture media and lighting regimes

Entomopathogenic fungi from the genus Metarhizium are largely used for the biological control of agricultural pests by conidia spreading on the field. Although conidia production is well studied in M. anisopliae, only few research studies were done in M. flavoviride. The present work was carried out alming to evaluate the Mycelial growth and sporulation of the entomopathogenic fungus Metarhizium flavoviride var. flavoviride growing at 27 ± 2°C on Potato-dextrose-agar (PDA), Czapek-agar (CZP) and a complete agar medium (CM) under three lighting regimes, (continuous illumination, light/dark cycle and an black light/dark cycle) were investigated. A completely randomized 3 × 3 (culture media × lighting regime) factorial design with four replicates was used. The best mycelial growth and sporulation occurred on the PDA and CM media under continuous illumination (P = 0,05).

Fungos entomopatogênicos do genêro Metarhizium são empregados no controle biológico de pragas agrícolas por meio da dispersão de seus conídios no campo. Embora a produção de conídios em M. anisopliae esteja bem estudada, poucas pesquisas a respeito existem na espécie M. flavoviride. O presente trabalho foi realizado para avaliar o efeito de três meios de cultura, batata-dextrose-ágar (BDA), Czapek-ágar (CZP) e meio completo (MC), e três regimes de luminosidade, claro contínuo, alternância com luz do dia/escuro e luz negra/escuro, sobre o crescimento miceliano e esporulação do fungo entomopatogênico Metarhizium flavoviride var. flavoviride. O experimento foi realizado em câmara de incubação à temperatura de 27 ± 2°C. Empregou-se um delineamento experimental inteiramente casualizado, em arranjo fatorial 3°C 3 (meios de cultura e regime de luminosidade) com quatro repetições. As melhores condições para o crescimento miceliano e esporulação foram conseguidas tanto no meio de cultura BDA como no MC quando combinados com o regime claro contínuo (P = 0,05).

Germination and mycelial growth of Bipolaris euphorbiae Muchovej & Carvalho as influenced by herbicides and surfactants

Bipolaris euphorbiae Muchovej & Carvalho can be combined with herbicide in order to control a large spectrum of weed species, being a strong candidate for the biocontrol of Euphorbia heterophylla L. (milk weed). The fungus release can be combined with herbicide in order to control a broader spectrum of weed species. Thus, laboratory experiments were set up to study the feasibility of using tank mixes of B. euphorbiae spores with herbicides or surfactants recommended for soybean. Mycelial growth and conidia germination were evaluated in PDA medium enriched with the herbicides oxasulfuron (80 g/ha), glyphosate (4 L/ha), bentazon (1.5 L/ha), fomesafen (1 L/ha), chlorimuron-ethyl (80 g/ha), lactofen (1 L/ha) and imazetaphyr (1 L/ha), and the surfactants Energic (2 ml/L), Aterbane (2.5 ml/L), Silwet L-77Ag (1 ml/L), Herbitensil (2 ml/L) and Natur L'óleo (10 ml/L). Dilution of the herbicides at 50% and 25% were evaluated based on solution consumption of 300 L/ha. The surfactants were evaluated only in the recommended concentrations. Mycelial growth was not affected by bentazon and fomesafen and slightly by oxasulfuron. However, glyphosate and the surfactants Energic, Herbitensil and Aterbane strongly reduced its growth. The reduction observed on imazetaphyr enriched medium was intermediate and the Natur L'óleo promoted mycelial growth. All of the surfactants allowed B. euphorbiae conidia germination equivalent to that reached in the presence of water. Energic and Herbitensil caused an expressive retardation on spore germination. The germinative process only began after 120 minutes in the presence of Herbitensil. In relation to the herbicides, it was observed that only in the presence of glyphosate and imazetaphyr the conidia germination did not follow the trend of the treatment with water.

Bipolaris euphorbiae Muchovej & Carvalho é um forte candidato para o controle de Euphorbia heterophylla L. (amendoim bravo). Este fungo pode ser aplicado em combinação com herbicidas para controlar um maior espectro de espécies daninhas. Para tanto, experimentos laboratoriais foram realizados para verificar a possibilidade da utilização de mistura de tanque de esporos de B. euphorbiae e herbicidas ou surfatantes recomendados para a cultura da soja. Crescimento micelial e germinação de conídios foram avaliados em meio BDA acrescido dos herbicidas, nas concentrações recomendadas dos produtos comerciais, oxasulfuron (80 g/ha), glifosato (4 L/ha), bentazon (1.5 L/ha), fomesafen (1 L/ha), chlorimuron-ethyl (80 g/ha), lactofen (1 L/ha) e imazetaphyr (1 L/ha) e dos surfatantes Energic (2 ml/L), Aterbane (2,5 ml/L), Silwet L-77Ag (1 ml/L), Herbitensil (2 ml/L) e Natur L'óleo (10 ml/L). Diluições dos herbicidas de 50% e 25% foram avaliadas com um consumo de calda equivalente a 300 L/ha. Os surfatantes foram somente utilizados nas concentrações recomendadas. O crescimento micelial não foi afetado por bentazon e fomesafen e apenas levemente por oxasulfuron. Porém, glifosato, chlorimuron-ethyl, lactofen, Energic, Herbitensil, Silwet, e Aterbane o reduziram drasticamente. A redução observada com imazetaphyr foi intermediária e Natur L' óleo promoveu o crescimento micelial. Na presença dos surfatantes, observou-se que todos permitiram uma porcentagem de germinação equivalente àquela alcançada na presença de água. Energic e Herbitensil causaram um retardamento expressivo. Com Herbitensil, o processo germinativo iniciou somente aos 120 minutos. Com herbicidas, foi observado que somente na presença de glifosato e imazetaphyr a germinação dos conídios não seguiu a tendência observada com água, como ocorreu com os outros produtos testados.

Germination and mycelial growth of Bipolaris euphorbiae Muchovej & Carvalho as influenced by herbicides and surfactants

Bipolaris euphorbiae Muchovej & Carvalho can be combined with herbicide in order to control a large spectrum of weed species, being a strong candidate for the biocontrol of Euphorbia heterophylla L. (milk weed). The fungus release can be combined with herbicide in order to control a broader spectrum of weed species. Thus, laboratory experiments were set up to study the feasibility of using tank mixes of B. euphorbiae spores with herbicides or surfactants recommended for soybean. Mycelial growth and conidia germination were evaluated in PDA medium enriched with the herbicides oxasulfuron (80 g/ha), glyphosate (4 L/ha), bentazon (1.5 L/ha), fomesafen (1 L/ha), chlorimuron-ethyl (80 g/ha), lactofen (1 L/ha) and imazetaphyr (1 L/ha), and the surfactants Energic (2 ml/L), Aterbane (2.5 ml/L), Silwet L-77Ag (1 ml/L), Herbitensil (2 ml/L) and Natur L'óleo (10 ml/L). Dilution of the herbicides at 50% and 25% were evaluated based on solution consumption of 300 L/ha. The surfactants were evaluated only in the recommended concentrations. Mycelial growth was not affected by bentazon and fomesafen and slightly by oxasulfuron. However, glyphosate and the surfactants Energic, Herbitensil and Aterbane strongly reduced its growth. The reduction observed on imazetaphyr enriched medium was intermediate and the Natur L'óleo promoted mycelial growth. All of the surfactants allowed B. euphorbiae conidia germination equivalent to that reached in the presence of water. Energic and Herbitensil caused an expressive retardation on spore germination. The germinative process only began after 120 minutes in the presence of Herbitensil. In relation to the herbicides, it was observed that only in the presence of glyphosate and imazetaphyr the conidia germination did not follow the trend of the treatment with water.

Bipolaris euphorbiae Muchovej & Carvalho é um forte candidato para o controle de Euphorbia heterophylla L. (amendoim bravo). Este fungo pode ser aplicado em combinação com herbicidas para controlar um maior espectro de espécies daninhas. Para tanto, experimentos laboratoriais foram realizados para verificar a possibilidade da utilização de mistura de tanque de esporos de B. euphorbiae e herbicidas ou surfatantes recomendados para a cultura da soja. Crescimento micelial e germinação de conídios foram avaliados em meio BDA acrescido dos herbicidas, nas concentrações recomendadas dos produtos comerciais, oxasulfuron (80 g/ha), glifosato (4 L/ha), bentazon (1.5 L/ha), fomesafen (1 L/ha), chlorimuron-ethyl (80 g/ha), lactofen (1 L/ha) e imazetaphyr (1 L/ha) e dos surfatantes Energic (2 ml/L), Aterbane (2,5 ml/L), Silwet L-77Ag (1 ml/L), Herbitensil (2 ml/L) e Natur L'óleo (10 ml/L). Diluições dos herbicidas de 50% e 25% foram avaliadas com um consumo de calda equivalente a 300 L/ha. Os surfatantes foram somente utilizados nas concentrações recomendadas. O crescimento micelial não foi afetado por bentazon e fomesafen e apenas levemente por oxasulfuron. Porém, glifosato, chlorimuron-ethyl, lactofen, Energic, Herbitensil, Silwet, e Aterbane o reduziram drasticamente. A redução observada com imazetaphyr foi intermediária e Natur L' óleo promoveu o crescimento micelial. Na presença dos surfatantes, observou-se que todos permitiram uma porcentagem de germinação equivalente àquela alcançada na presença de água. Energic e Herbitensil causaram um retardamento expressivo. Com Herbitensil, o processo germinativo iniciou somente aos 120 minutos. Com herbicidas, foi observado que somente na presença de glifosato e imazetaphyr a germinação dos conídios não seguiu a tendência observada com água, como ocorreu com os outros produtos testados.

Growth and sporulation of Metarhizium flavoviride var. Flavoviride on culture media and lighting regimes

Entomopathogenic fungi from the genus Metarhizium are largely used for the biological control of agricultural pests by conidia spreading on the field. Although conidia production is well studied in M. anisopliae, only few research studies were done in M. flavoviride. The present work was carried out alming to evaluate the Mycelial growth and sporulation of the entomopathogenic fungus Metarhizium flavoviride var. flavoviride growing at 27 ± 2°C on Potato-dextrose-agar (PDA), Czapek-agar (CZP) and a complete agar medium (CM) under three lighting regimes, (continuous illumination, light/dark cycle and an black light/dark cycle) were investigated. A completely randomized 3 × 3 (culture media × lighting regime) factorial design with four replicates was used. The best mycelial growth and sporulation occurred on the PDA and CM media under continuous illumination (P = 0,05).

Fungos entomopatogênicos do genêro Metarhizium são empregados no controle biológico de pragas agrícolas por meio da dispersão de seus conídios no campo. Embora a produção de conídios em M. anisopliae esteja bem estudada, poucas pesquisas a respeito existem na espécie M. flavoviride. O presente trabalho foi realizado para avaliar o efeito de três meios de cultura, batata-dextrose-ágar (BDA), Czapek-ágar (CZP) e meio completo (MC), e três regimes de luminosidade, claro contínuo, alternância com luz do dia/escuro e luz negra/escuro, sobre o crescimento miceliano e esporulação do fungo entomopatogênico Metarhizium flavoviride var. flavoviride. O experimento foi realizado em câmara de incubação à temperatura de 27 ± 2°C. Empregou-se um delineamento experimental inteiramente casualizado, em arranjo fatorial 3°C 3 (meios de cultura e regime de luminosidade) com quatro repetições. As melhores condições para o crescimento miceliano e esporulação foram conseguidas tanto no meio de cultura BDA como no MC quando combinados com o regime claro contínuo (P = 0,05).