Lipopolysaccharide effects on activation and apoptosis of primordial ovarian follicles in heifers / Efeitos de lipopolissacarídeos na ativação e apoptose de folículos ovarianos primordiais em novilhas

The objective of the present study was to evaluate the effect of lipopolysaccharide (LPS) administration on activation and apoptosis of primordial follicles. There was no difference in the total number of follicles as well as in the different types of follicles. Furthermore, the LPS challenge didn't modulate the expression of genes related with ovarian reserve (HAM), oocyte survival (Survivin), activation rate (Pten, KIT, KITL1, KITL2, AKT1, SIRT1), and follicular abnormalities. Therefore, the LPS exposure with 24h interval had no effect on activation rate and primordial follicles abnormalities, and also had no effect on expression of anti-apoptotic genes and genes related with ovarian reserve, oocyte survival, activation rate, and primordial follicles abnormalities.

O objetivo do presente estudo foi avaliar o efeito da administração de lipopolissacarídeo (LPS) na ativação e a apoptose de folículos primordiais. Dez novilhas saudáveis (Bos taurus taurus), com idade média de 14 meses, alojadas em sistema de confinamento e alimentadas com TMR, foram utilizadas neste experimento. Os animais foram distribuídos aleatoriamente em dois grupos: grupo LPS (LPS; n = 5), que recebeu duas injeções intravenosas de 0,5µg/kg de peso corporal de lipopolissacarídeo (Sigma Aldrich®) diluído em 2mL de solução salina (0,9% de NaCl), com intervalo de 24h; e grupo controle (CTR; n = 5), que recebeu duas injeções intravenosas de 2mL de solução salina (0,9% de NaCl), com intervalo de 24h. A primeira injeção de LPS foi realizada no d 1, e no d 5 os animais foram abatidos, os ovários foram pesados e as amostras dos ovários foram coletadas para avaliação histológica e molecular. Não houve diferença no número total de folículos, bem como nos diferentes tipos de folículos. Além disso, o desafio com LPS não modulou a expressão de genes relacionados à reserva ovariana (HAM), à sobrevivência oocitária (Survivin), à taxa de ativação (Pten, KIT, KITL1, KITL2, AKT1, SIRT1) e às anormalidades foliculares. Portanto, a exposição ao LPS com intervalo de 24h não teve efeito sobre a taxa de ativação e as anormalidades dos folículos primordiais, bem como não teve efeito sobre a expressão de genes antiapoptóticos e de genes relacionados com a reserva ovariana, a sobrevivência oocitária, a taxa de ativação e as anormalidades dos folículos primordiais.

Cultivo in vitro de folículos pré-antrais bovinos: revisão, desafios, conquistas e perspectivas futuras / In vitro culture of bovine preantral follicles: review, challenges, achievements and future perspectives

A reprodução animal incide diretamente na eficiência e rentabilidade econômica de um rebanho, sendo considerada um dos fatores de maior importância para os sistemas de produção. Consequentemente, o desenvolvimento e a utilização de biotecnologia são indispensáveis para o aumento da eficiência reprodutiva, do melhoramento genético, da produção de alimentos e geração de riquezas. Nas últimas décadas várias foram as biotécnicas associadas à reprodução animal que apresentaram um grande potencial para a geração de genética, especialmente, ao que se referem aos avanços da reprodução assistida. Estes progressos possibilitaram a utilização de folículos pré-antrais como fonte de oócitos para biotecnologias reprodutivas. Deste modo, a técnica de cultivo in vitro proporciona a retomada do desenvolvimento dos folículos presente na reserva ovariana pela ativação in vitro forçada simulando a ocorrência de distúrbios na foliculogênesse. Até então, apenas a especie murina obteve descendentes vivos através dos folículos primordiais cultivados in vitro. Infelizmente, não há relatos de sucesso em outras espécies, tornando o desenvolvimento de sistemas ideias de cultivo in vitro um desafio. Portanto, o objetivo desta revisão é descrever e discutir os principais avanços da situação atual da pesquisa com folículos pré-antrais inclusos em folículos ovarianos.(AU)

Animal reproduction directly affects the efficiency and economic profitability of a herd, being considered one of the most important factors for production systems. Consequently, the development and use of biotechnology are indispensable for increasing reproductive efficiency, genetic improvement, food production and wealth generation. In the last few decades, biotechnologies associated with animal reproduction have shown great potential for the generation of genetics, especially with regard to advances in assisted reproduction. These advances have enabled the use of pre-antral follicles as a source of oocytes for reproductive biotechnologies. Thus, the in vitro culture technique provides the resumption of the development of follicles present in the ovarian reserve by forced in vitro activation, simulating the occurrence of disturbances in folliculogenesis. Until then, only the murine species obtained living descendants through primordial follicles cultivated in vitro. Unfortunately, there are no reports of success in other species, making the development of ideal in vitro culture systems a challenge.Therefore, the purpose of this review is to describe and discuss the main advances in the current research situation with preantral follicles included in ovarian follicles.(AU)

Cultivo in vitro de folículos pré-antrais bovinos: revisão, desafios, conquistas e perspectivas futuras / In vitro culture of bovine preantral follicles: review, challenges, achievements and future perspectives

A reprodução animal incide diretamente na eficiência e rentabilidade econômica de um rebanho, sendo considerada um dos fatores de maior importância para os sistemas de produção. Consequentemente, o desenvolvimento e a utilização de biotecnologia são indispensáveis para o aumento da eficiência reprodutiva, do melhoramento genético, da produção de alimentos e geração de riquezas. Nas últimas décadas várias foram as biotécnicas associadas à reprodução animal que apresentaram um grande potencial para a geração de genética, especialmente, ao que se referem aos avanços da reprodução assistida. Estes progressos possibilitaram a utilização de folículos pré-antrais como fonte de oócitos para biotecnologias reprodutivas. Deste modo, a técnica de cultivo in vitro proporciona a retomada do desenvolvimento dos folículos presente na reserva ovariana pela ativação in vitro forçada simulando a ocorrência de distúrbios na foliculogênesse. Até então, apenas a especie murina obteve descendentes vivos através dos folículos primordiais cultivados in vitro. Infelizmente, não há relatos de sucesso em outras espécies, tornando o desenvolvimento de sistemas ideias de cultivo in vitro um desafio. Portanto, o objetivo desta revisão é descrever e discutir os principais avanços da situação atual da pesquisa com folículos pré-antrais inclusos em folículos ovarianos.

Animal reproduction directly affects the efficiency and economic profitability of a herd, being considered one of the most important factors for production systems. Consequently, the development and use of biotechnology are indispensable for increasing reproductive efficiency, genetic improvement, food production and wealth generation. In the last few decades, biotechnologies associated with animal reproduction have shown great potential for the generation of genetics, especially with regard to advances in assisted reproduction. These advances have enabled the use of pre-antral follicles as a source of oocytes for reproductive biotechnologies. Thus, the in vitro culture technique provides the resumption of the development of follicles present in the ovarian reserve by forced in vitro activation, simulating the occurrence of disturbances in folliculogenesis. Until then, only the murine species obtained living descendants through primordial follicles cultivated in vitro. Unfortunately, there are no reports of success in other species, making the development of ideal in vitro culture systems a challenge.Therefore, the purpose of this review is to describe and discuss the main advances in the current research situation with preantral follicles included in ovarian follicles.

O que já sabemos sobre a reprodução de fêmeas de grandes felídeos? / What do we already know about the reproduction of big cats' females?

Os grandes felídeos são predadores de topo de cadeia com um papel essencial nos ecossistemas globais. O conceito de Conservação Única propõe a reprodução artificial como uma das ferramentas para reduzir a vulnerabilidade dessas espécies. Este manuscrito teve como objetivo avaliar o que há de novo na reprodução de grandes felídeos na última década. O conhecimento da fisiologia e do comportamento reprodutivo é o primeiro passo para o desenvolvimento de tecnologias reprodutivas em animais selvagens. Nos grandes felídeos, o comportamento copulatório é de fundamental importância, pois necessitam de mecanismos de indução da ovulação, que podem ser mecânicos, sensoriais ou via administração de hormônio luteinizante. O sucesso no cuidado neonatal representa o sucesso da tecnologia reprodutiva em fêmeas. Na última década, o sucesso da inseminação artificial foi relatado apenas em tigres-siberianos e leopardos da Anatólia, e a inseminação de onças-pintadas é foco de pesquisa do Instituto Reprocon, trocando material genético entre ambientes in situ e ex situ por meio de inseminação artificial. Para obter oócitos viáveis de alta qualidade, a técnica de escolha é a colheita de oócitos por laparoscopia. A produção de embriões in vitro enfrenta desafios para a maturação eficiente de oócitos e sua vitrificação eficiente. As técnicas reprodutivas precisam de estudos aprofundados em grandes felídeos para atingir a repetibilidade necessária para uma aplicação eficiente na conservação.

Big cats are apex predators with an essential role in global ecosystems. The One Conservation concept proposes artificial reproduction as one of the tools to reduce the vulnerability of these species. This manuscript aimed to assess what is new in big cat reproduction in the last decade. Knowledge of reproductive physiology and behavior is the first step towards developing reproductive technologies in wild animals. In big cats, copulatory behavior is of fundamental importance because they need ovulation induction mechanisms, which can be mechanical, sensory, or via the administration of the luteinizing hormone. The success in neonatal care represents the success of reproductive technology in females. In the last decade, successful artificial insemination was only reported in Siberian tigers and Anatolian leopards. Jaguar artificial insemination focuses on research at the Reprocon Institute, exchanging genetic material between in situ and ex situ environments thru artificial insemination. The technique of choice is laparoscopic ovum pick-up to obtain high-quality viable oocytes. The production of in vitro embryos faces challenges for the efficient maturation of oocytes and their efficient vitrification. Reproductive technologies need in-depth studies in big cats to achieve the repeatability necessary for efficient application in conservation.

Conjugated linoleic acid as a potential bioactive molecule to modulates gamete and embryo cryotolerance / Ácido linoleico conjugado como potencial bioativo para modulação e criotolerância de gametas e embriões

Conjugated linoleic acid (CLA) is a mixture of positional isomers of linoleic acid found in meat and dairy products from ruminants. It is a trans fat widely used by athletes as a food supplement, due to a supposed effect of maximizing the use of body fat reserves. The interest in diet and culture media supplementation with CLA is an emerging area, demanding studies in order to elucidate its benefits in the reproductive parameters, as well as in cryopreservation. Therefore, the aim of this review was to discuss the effects of CLA on the oocytes, sperm and embryos cryotolerance. Some studies have already demonstrated its use in cryopreservation of germline. Among those, it was observed that CLA supplementation during oocyte in vitro maturation can increase their viability post-freezing and developmental capacity. Regarding the use of CLA on sperm, there are few studies and their results are still inconclusive. Finally, studies about CLA supplementation on embryo culture media have shown promising results, indicating that this bioactive molecule is able to modulate lipid uptake on blastomeres. Altogether, these findings demonstrate the potential use of CLA as a bioactive molecule to improve germline and embryo cryotolerance and open new perspectives on human and animal reproduction field.

O ácido linoleico conjugado (CLA) é uma mistura de isômeros posicionais do ácido linoleico encontrado em carne e laticínios de ruminantes. É um tipo de gordura trans muito utilizada por atletas para como suplemento alimentar devido a um suposto efeito de maximizar a utilização das reservas de gordura corporal. O interesse na suplementação de dietas e meios de cultura com o CLA é uma área emergente, exigindo estudos para elucidar seus benefícios nos parâmetros reprodutivos e na criopreservação. Dessa forma, o objetivo dessa revisão foi discutir os efeitos do CLA na criotolerância de oócitos, espermatozóides e embriões. Alguns estudos já demonstraram seu uso na criopreservação da linhagem germinativa. Entre esses, foi observado que a suplementação de CLA durante a maturação in vitro de oócitos pode aumentar sua viabilidade pós-congelamento e capacidade de desenvolvimento. Em relação ao uso de CLA no esperma, existem poucos estudos e seus resultados ainda são inconclusivos. Por último, estudos sobre a suplementação de CLA em meios de cultura de embriões mostraram resultados promissores, indicando que essa molécula bioativa é capaz de modular a captação de lipídios em blastômeros. No total, essas descobertas demonstram o potencial uso do CLA como uma molécula bioativa para melhorar a linha germinativa e a criotolerância ao embrião e abrir novas perspectivas no campo da reprodução humana e animal.

Conjugated linoleic acid as a potential bioactive molecule to modulates gamete and embryo cryotolerance / Ácido linoleico conjugado como potencial bioativo para modulação e criotolerância de gametas e embriões

Conjugated linoleic acid (CLA) is a mixture of positional isomers of linoleic acid found in meat and dairy products from ruminants. It is a trans fat widely used by athletes as a food supplement, due to a supposed effect of maximizing the use of body fat reserves. The interest in diet and culture media supplementation with CLA is an emerging area, demanding studies in order to elucidate its benefits in the reproductive parameters, as well as in cryopreservation. Therefore, the aim of this review was to discuss the effects of CLA on the oocytes, sperm and embryos cryotolerance. Some studies have already demonstrated its use in cryopreservation of germline. Among those, it was observed that CLA supplementation during oocyte in vitro maturation can increase their viability post-freezing and developmental capacity. Regarding the use of CLA on sperm, there are few studies and their results are still inconclusive. Finally, studies about CLA supplementation on embryo culture media have shown promising results, indicating that this bioactive molecule is able to modulate lipid uptake on blastomeres. Altogether, these findings demonstrate the potential use of CLA as a bioactive molecule to improve germline and embryo cryotolerance and open new perspectives on human and animal reproduction field.(AU)

O ácido linoleico conjugado (CLA) é uma mistura de isômeros posicionais do ácido linoleico encontrado em carne e laticínios de ruminantes. É um tipo de gordura trans muito utilizada por atletas para como suplemento alimentar devido a um suposto efeito de maximizar a utilização das reservas de gordura corporal. O interesse na suplementação de dietas e meios de cultura com o CLA é uma área emergente, exigindo estudos para elucidar seus benefícios nos parâmetros reprodutivos e na criopreservação. Dessa forma, o objetivo dessa revisão foi discutir os efeitos do CLA na criotolerância de oócitos, espermatozóides e embriões. Alguns estudos já demonstraram seu uso na criopreservação da linhagem germinativa. Entre esses, foi observado que a suplementação de CLA durante a maturação in vitro de oócitos pode aumentar sua viabilidade pós-congelamento e capacidade de desenvolvimento. Em relação ao uso de CLA no esperma, existem poucos estudos e seus resultados ainda são inconclusivos. Por último, estudos sobre a suplementação de CLA em meios de cultura de embriões mostraram resultados promissores, indicando que essa molécula bioativa é capaz de modular a captação de lipídios em blastômeros. No total, essas descobertas demonstram o potencial uso do CLA como uma molécula bioativa para melhorar a linha germinativa e a criotolerância ao embrião e abrir novas perspectivas no campo da reprodução humana e animal.(AU)

Maturação in vitro de oócitos de cutias (Dasyprocta prymnolopha, Wagler 1831) seguida de fertilização in vitro e ativação partenogenética / In vitro maturation of agoutis (Dasyprocta prymnolopha) oocytes followed by in vitro fertilization and parthenogenetic activation

O objetivo foi avaliar protocolos de maturação in vitro (MIV) para oócitos de cutias, seguida de fertilização in vitro (FIV) e ativação partenogenética (AP). Os oócitos imaturos (CCOs) foram obtidos por fatiamento do ovário, após OSH, e submetidos a três grupos: MAT - 16 (16 horas de maturação), MAT - 20 (20 horas de maturação) e MAT - 24 (24 horas de maturação), em incubadora de cultivo a 38,8°C, com atmosfera de 5% de CO2 e 95% de umidade relativa. A maturação foi analisada pela presença do primeiro corpúsculo polar. Em seguida, os CCOs maduros foram submetidos à FIV, com período de coincubação dos CCOs e dos espermatozoides de 15h, a 38,8ºC e 5% de CO2, e AP com ionomicina. Os grupos de MIV foram analisados utilizando-se o teste qui-quadrado e, nos experimentos de FIV e AP, foram analisadas a taxa de clivagem e a proporção de desenvolvimento embrionário. A análise estatística foi realizada utilizando-se o programa SAS. Houve diferença significativa entre os grupos de maturação, tendo os grupos MAT - 20 e MAT - 24 apresentado maior porcentagem de oócitos maturados in vitro. As taxas de clivagem e de desenvolvimento embrionário foram de 8,6% e 2,9%, respectivamente, na FIV, e de 63,6% e 15,1%, na AP. Entretanto, nos dois casos, o embrião não passou do estágio de mórula.(AU)

The objective was to evaluate IVM protocols for agouti oocytes, followed by in vitro fertilization (IVF) and parthenogenetic activation (PA). The immature oocytes (CCOs) were obtained by slicing the ovary after OSH and submitted to three groups: MAT - 16 (16 hours maturation), MAT - 20 (20 hours maturation) and MAT - (24 hours maturation), in a culture incubator at 38.8°C, with an atmosphere of 5% CO2 and 95% relative humidity. The maturation was analyzed by the presence of the first polar corpuscle. Then, mature CCOs were submitted to IVF, with co-incubation period of CCOs and spermatozoa from 15h to 38.8°C and 5% of CO2, and PA with inomycin. The IVM groups were analyzed using the chi-square test and in the FIV and PA experiment the rate of cleavage and the rate of embryonic development were analyzed. Statistical analysis was performed using the SAS program. There was a significant difference between the maturation groups, and the MAT - 20 and MAT - 24 groups showed a higher percentage of matured oocytes in vitro. The rates of cleavage and embryonic development were 8.6% and 2.9%, respectively in FIV and 63.6% and 15.1% in PA. However, in both cases the embryo did not pass beyond the morula stage.(AU)

Maturação in vitro de oócitos de cutias (Dasyprocta prymnolopha, Wagler 1831) seguida de fertilização in vitro e ativação partenogenética / In vitro maturation of agoutis (Dasyprocta prymnolopha) oocytes followed by in vitro fertilization and parthenogenetic activation

O objetivo foi avaliar protocolos de maturação in vitro (MIV) para oócitos de cutias, seguida de fertilização in vitro (FIV) e ativação partenogenética (AP). Os oócitos imaturos (CCOs) foram obtidos por fatiamento do ovário, após OSH, e submetidos a três grupos: MAT - 16 (16 horas de maturação), MAT - 20 (20 horas de maturação) e MAT - 24 (24 horas de maturação), em incubadora de cultivo a 38,8°C, com atmosfera de 5% de CO2 e 95% de umidade relativa. A maturação foi analisada pela presença do primeiro corpúsculo polar. Em seguida, os CCOs maduros foram submetidos à FIV, com período de coincubação dos CCOs e dos espermatozoides de 15h, a 38,8ºC e 5% de CO2, e AP com ionomicina. Os grupos de MIV foram analisados utilizando-se o teste qui-quadrado e, nos experimentos de FIV e AP, foram analisadas a taxa de clivagem e a proporção de desenvolvimento embrionário. A análise estatística foi realizada utilizando-se o programa SAS. Houve diferença significativa entre os grupos de maturação, tendo os grupos MAT - 20 e MAT - 24 apresentado maior porcentagem de oócitos maturados in vitro. As taxas de clivagem e de desenvolvimento embrionário foram de 8,6% e 2,9%, respectivamente, na FIV, e de 63,6% e 15,1%, na AP. Entretanto, nos dois casos, o embrião não passou do estágio de mórula.(AU)

The objective was to evaluate IVM protocols for agouti oocytes, followed by in vitro fertilization (IVF) and parthenogenetic activation (PA). The immature oocytes (CCOs) were obtained by slicing the ovary after OSH and submitted to three groups: MAT - 16 (16 hours maturation), MAT - 20 (20 hours maturation) and MAT - (24 hours maturation), in a culture incubator at 38.8°C, with an atmosphere of 5% CO2 and 95% relative humidity. The maturation was analyzed by the presence of the first polar corpuscle. Then, mature CCOs were submitted to IVF, with co-incubation period of CCOs and spermatozoa from 15h to 38.8°C and 5% of CO2, and PA with inomycin. The IVM groups were analyzed using the chi-square test and in the FIV and PA experiment the rate of cleavage and the rate of embryonic development were analyzed. Statistical analysis was performed using the SAS program. There was a significant difference between the maturation groups, and the MAT - 20 and MAT - 24 groups showed a higher percentage of matured oocytes in vitro. The rates of cleavage and embryonic development were 8.6% and 2.9%, respectively in FIV and 63.6% and 15.1% in PA. However, in both cases the embryo did not pass beyond the morula stage.(AU)

Maturação in vitro de oócitos ovinos submetidos à congelação lenta / In vitro maturation of cryopreserved ovine oocytes subjected to slow freezing

A maturação in vitro de oócitos submetidos ao processo de criopreservação, ainda compreende um desafio para o sucesso da reprodução assistida na medicina veterinária. Devido a isso, estudos são desenvolvidos a fim de identificar, amenizar e superar as limitações encontradas. Nesse sentido, objetivou-se realizar a avaliação da maturação in vitro de oócitos ovinos após criopreservação pelo método de congelação lenta. Para tanto, foram colhidos 204 ovários oriundos de 102 ovelhas púberes (SPRD) pertencentes a abatedouros localizados no município de Teresina, Piauí. Os ovários foram transportados para o laboratório e, posteriormente, foram aspirados por meio de um aspirador cirúrgicoadaptado. Um total de 180 oócitos foram desnudados e, então, submetidos à congelação lenta em sistema automatizado (TK 3000®). Posteriormente foram descongelados, e submetidos à maturação in vitro(MIV). Em seguida, procedeu-se a avaliação da maturação nuclear. Os resultados foram avaliados por meio do teste de Qui-quadrado de Pearson (P ≤ 0,05). Após descongelação, 22,8% dos oócitos na avaliação em estereomicroscópio (45x) apresentavam lesões de zona pelúcida e de oolema. Dos 139 oócitos submetidos a MIV, oito maturaram (5,75%). Conclui-se que a congelação lenta de oócitos ovinos pode influenciar a maturação in vitro, devido a lesões de membrana plasmática e zona pelúcida.(AU)

The in vitro maturation of oocytes submitted to the cryopreservation process, still comprises a challenge for the success of assisted reproduction in veterinary medicine. Due to this, studies are developed in order to identify, ameliorate and overcome the limitations found. The objective of this study was to evaluate the in vitro maturation of ovine oocytes after cryopreservation by the slow freezing method. For that, 204 ovaries from 102 pubertal sheep (SPRD) belonging to slaughterhouses located in the city of Teresina, Piauí, were collected. The ovaries were transported to the laboratory and subsequently aspirated by means of an adapted surgical aspirator. A total of 180 CCO's were obtained, which were stripped and then subjected to slow freezing in an automated system (TK 3000®). Later they were thawed and submitted to in vitro maturation (IVM). Next, the nuclear maturation was evaluated. Results were evaluated using Pearson's chi-square test (P ≤ 0.05). After thawing, 22.8% of the oocytes in the stereomicroscope (45x) evaluation presented lesions of the zona pellucida and oolema. Of the 139 oocytes submitted to IVM, eight maturated (5.75%). It is concluded that slow freezing of sheep oocytesmay influence in vitro maturation due to plasma membrane and zona pellucida lesions.(AU)

Maturação in vitro de oócitos ovinos submetidos à congelação lenta / In vitro maturation of cryopreserved ovine oocytes subjected to slow freezing

A maturação in vitro de oócitos submetidos ao processo de criopreservação, ainda compreende um desafio para o sucesso da reprodução assistida na medicina veterinária. Devido a isso, estudos são desenvolvidos a fim de identificar, amenizar e superar as limitações encontradas. Nesse sentido, objetivou-se realizar a avaliação da maturação in vitro de oócitos ovinos após criopreservação pelo método de congelação lenta. Para tanto, foram colhidos 204 ovários oriundos de 102 ovelhas púberes (SPRD) pertencentes a abatedouros localizados no município de Teresina, Piauí. Os ovários foram transportados para o laboratório e, posteriormente, foram aspirados por meio de um aspirador cirúrgicoadaptado. Um total de 180 oócitos foram desnudados e, então, submetidos à congelação lenta em sistema automatizado (TK 3000®). Posteriormente foram descongelados, e submetidos à maturação in vitro(MIV). Em seguida, procedeu-se a avaliação da maturação nuclear. Os resultados foram avaliados por meio do teste de Qui-quadrado de Pearson (P ≤ 0,05). Após descongelação, 22,8% dos oócitos na avaliação em estereomicroscópio (45x) apresentavam lesões de zona pelúcida e de oolema. Dos 139 oócitos submetidos a MIV, oito maturaram (5,75%). Conclui-se que a congelação lenta de oócitos ovinos pode influenciar a maturação in vitro, devido a lesões de membrana plasmática e zona pelúcida.

The in vitro maturation of oocytes submitted to the cryopreservation process, still comprises a challenge for the success of assisted reproduction in veterinary medicine. Due to this, studies are developed in order to identify, ameliorate and overcome the limitations found. The objective of this study was to evaluate the in vitro maturation of ovine oocytes after cryopreservation by the slow freezing method. For that, 204 ovaries from 102 pubertal sheep (SPRD) belonging to slaughterhouses located in the city of Teresina, Piauí, were collected. The ovaries were transported to the laboratory and subsequently aspirated by means of an adapted surgical aspirator. A total of 180 CCO's were obtained, which were stripped and then subjected to slow freezing in an automated system (TK 3000®). Later they were thawed and submitted to in vitro maturation (IVM). Next, the nuclear maturation was evaluated. Results were evaluated using Pearson's chi-square test (P ≤ 0.05). After thawing, 22.8% of the oocytes in the stereomicroscope (45x) evaluation presented lesions of the zona pellucida and oolema. Of the 139 oocytes submitted to IVM, eight maturated (5.75%). It is concluded that slow freezing of sheep oocytesmay influence in vitro maturation due to plasma membrane and zona pellucida lesions.

Effect of Rolipram on in vitro maturation, gene expression and embryonic development in bovines / Efeito de rolipram na maturação in vitro, expressão gênica e desenvolvimento embrionário em bovinos

The aim of this work was to evaluate the effect of the Rolipram during the maturation of bovine oocytes and gene expression of embryos produced in vitro. Bovine ovaries were collected in slaughterhouse. The COCs were selected and divided into 5 groups: Control 0 time; Control: IVM for 24 hours; Rolipram treatments with IVM blocking for 24 hours in maturation medium containing (100, 150 and 200µM). After 24 hours all groups were reseated in IVM for another 24 hours. Subsequently COCs were subjected to the same IVM system and fertilized, being checked for cleavage post fertilization and for blastocyst. In addition, performed expression of the following genes: Mater, BMP15 and Bax. No difference was found in gene expression. Of oocytes evaluated shortly after follicular aspiration, 79.00% were in GV, GVBD, MI, while 13.40%, were in MII and 7.60%, D/NI. Significant difference was observed in different concentrations (T100, T200 and T150µM) in oocytes that have reached the MII phase compared to control treatments (P= 0.003). Differences were observed in cleavage rate (P< 0.05) between T150 and T200 when compared to the C/24 Group. A high difference was observed on blastocyst rate (P< 0.001) among treatments compared to the control group.(AU)

O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito do rolipram durante a maturação de oócitos bovinos, expressão gênica e embriões produzidos in vitro. Os ovários bovinos foram coletados no matadouro. Os COCs foram selecionados e divididos em cinco grupos: controle 0 tempo; controle: MIV por 24 horas; tratamentos rolipram com bloqueio MIV por 24 horas em meio de maturação contendo 100, 150 e 200µM. Após 24 horas, todos os grupos foram recolocados em MIV por mais 24 horas. Subsequentemente COCs foram submetidos ao mesmo sistema MIV e fertilizados, sendo avaliada a taxa de clivagem e de blastocisto, além da expressão dos seguintes genes: Mater, BMP15 e Bax. Nenhuma diferença foi observada na expressão gênica. Dos oócitos avaliados logo após a aspiração folicular, 79,0% estavam em GV, GVBD, MI, enquanto 13,40% estavam em MII, e 7,60% em D/NI. A diferença significativa foi observada em diferentes concentrações (T100, T200 e T150µM) em oócitos que atingiram a fase MII em comparação aos tratamentos de controle (P=0,3). Diferenças foram observadas nas taxas de clivagem (P<0,5) entre T150 e T200 quando comparadas com as taxas do grupo C/24. Uma grande diferença foi observada na taxa de blastocisto (P<0,1) entre os tratamentos em relação ao grupo controle.(AU)

Effect of Rolipram on in vitro maturation, gene expression and embryonic development in bovines / Efeito de rolipram na maturação in vitro, expressão gênica e desenvolvimento embrionário em bovinos

The aim of this work was to evaluate the effect of the Rolipram during the maturation of bovine oocytes and gene expression of embryos produced in vitro. Bovine ovaries were collected in slaughterhouse. The COCs were selected and divided into 5 groups: Control 0 time; Control: IVM for 24 hours; Rolipram treatments with IVM blocking for 24 hours in maturation medium containing (100, 150 and 200µM). After 24 hours all groups were reseated in IVM for another 24 hours. Subsequently COCs were subjected to the same IVM system and fertilized, being checked for cleavage post fertilization and for blastocyst. In addition, performed expression of the following genes: Mater, BMP15 and Bax. No difference was found in gene expression. Of oocytes evaluated shortly after follicular aspiration, 79.00% were in GV, GVBD, MI, while 13.40%, were in MII and 7.60%, D/NI. Significant difference was observed in different concentrations (T100, T200 and T150µM) in oocytes that have reached the MII phase compared to control treatments (P= 0.003). Differences were observed in cleavage rate (P< 0.05) between T150 and T200 when compared to the C/24 Group. A high difference was observed on blastocyst rate (P< 0.001) among treatments compared to the control group.(AU)

O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito do rolipram durante a maturação de oócitos bovinos, expressão gênica e embriões produzidos in vitro. Os ovários bovinos foram coletados no matadouro. Os COCs foram selecionados e divididos em cinco grupos: controle 0 tempo; controle: MIV por 24 horas; tratamentos rolipram com bloqueio MIV por 24 horas em meio de maturação contendo 100, 150 e 200µM. Após 24 horas, todos os grupos foram recolocados em MIV por mais 24 horas. Subsequentemente COCs foram submetidos ao mesmo sistema MIV e fertilizados, sendo avaliada a taxa de clivagem e de blastocisto, além da expressão dos seguintes genes: Mater, BMP15 e Bax. Nenhuma diferença foi observada na expressão gênica. Dos oócitos avaliados logo após a aspiração folicular, 79,0% estavam em GV, GVBD, MI, enquanto 13,40% estavam em MII, e 7,60% em D/NI. A diferença significativa foi observada em diferentes concentrações (T100, T200 e T150µM) em oócitos que atingiram a fase MII em comparação aos tratamentos de controle (P=0,3). Diferenças foram observadas nas taxas de clivagem (P<0,5) entre T150 e T200 quando comparadas com as taxas do grupo C/24. Uma grande diferença foi observada na taxa de blastocisto (P<0,1) entre os tratamentos em relação ao grupo controle.(AU)

Morfometria e população de folículos pré-antrais de vacas Nelore vazias, gestantes e de fetos nos terços inicial, médio e final da gestação / Morphometry and population of preantral follicles of not pregnant Nelore cows, pregnant and fetus in the initial, medium and final third of pregnancy

The aim of this study was to describe population and morphological characteristics of preantral follicles of not pregnant cows, pregnant cows and fetus. Ten ovaries of non-pregnant Nelore cows, eighteen ovaries of pregnant cows and eighteen ovaries of fetus were used. For pregnant cows, six ovaries from each third (initial, middle and final) were evaluated, acquired from a slaughterhouse. For fetus, the same methodology and proportion of ovaries were used. Ovaries were washed, fixed and embedded in paraffin. They were then sectioned in longitudinal sections and stained by the Hematoxylin-Eosin method. Preantral follicles were classified according to morphology (primordial, primary and secondary) and degree of viability (intact and in initial, moderate and marked atresia). Descriptive and statistical analyzes were performed through KS300 image analysis program and Tukey's test. A greater proportion of primordial follicles were found in all categories. Secondary follicles were not observed in ovaries of fetus and cows in the initial third of pregnancy. All the ovary dimensions were higher in non-pregnant cows and in the final third of cows' pregnancy, and lower in final third of pregnancy fetus. It was concluded that follicle isolation was effective in describing population and morphological characteristics of preantral follicles of cows and fetus.(AU)

Morfometria e população de folículos pré-antrais de vacas Nelore vazias, gestantes e de fetos nos terços inicial, médio e final da gestação / Morphometry and population of preantral follicles of not pregnant Nelore cows, pregnant and fetus in the initial, medium and final third of pregnancy

The aim of this study was to describe population and morphological characteristics of preantral follicles of not pregnant cows, pregnant cows and fetus. Ten ovaries of non-pregnant Nelore cows, eighteen ovaries of pregnant cows and eighteen ovaries of fetus were used. For pregnant cows, six ovaries from each third (initial, middle and final) were evaluated, acquired from a slaughterhouse. For fetus, the same methodology and proportion of ovaries were used. Ovaries were washed, fixed and embedded in paraffin. They were then sectioned in longitudinal sections and stained by the Hematoxylin-Eosin method. Preantral follicles were classified according to morphology (primordial, primary and secondary) and degree of viability (intact and in initial, moderate and marked atresia). Descriptive and statistical analyzes were performed through KS300 image analysis program and Tukey's test. A greater proportion of primordial follicles were found in all categories. Secondary follicles were not observed in ovaries of fetus and cows in the initial third of pregnancy. All the ovary dimensions were higher in non-pregnant cows and in the final third of cows' pregnancy, and lower in final third of pregnancy fetus. It was concluded that follicle isolation was effective in describing population and morphological characteristics of preantral follicles of cows and fetus.(AU)

Efeito da técnica de coleta e do estágio do ciclo estral na recuperação de oócitos de boa qualidade em felinos e caninos domésticos / The effect of recovery technique and stage of estrous cycle on the recovery of good quality oocytes in domestic felines and canines

A obtenção de oócitos de boa qualidade é essencial para o sucesso de diversas biotécnicas reprodutivas. Objetivou-se determinar o efeito de duas técnicas na recuperação de oócitos de boa qualidade em gatas e cadelas em diferentes estágios reprodutivos. Foram utilizados 43 pares de ovários de gata e 35 de cadela após realização da ovariosalpingohisterectomia eletiva. A fase do ciclo estral foi classificada em inativa, folicular ou luteal. Os ovários da fase folicular foram divididos em três grupos: PUN) punção dos folículos com agulha; PUN+FAT) fatiamento do mesmo ovário já puncionado; e FAT) fatiamento do segundo ovário. Os ovários das fêmeas em fase luteal e inativa foram submetidos ao FAT. Foram obtidos no total 974 oócitos (~23/animal) nas fêmeas felinas e 940 (~27/animal) nas caninas. O fatiamento recuperou número superior (P<0,05) de oócitos. Não houve diferença (P>0,05) entre as técnicas de coleta na qualidade de estruturas recuperadas. A quantidade de oócitos recuperados em cada fase foi similar (P>0,05). Contudo, a fase inativa foi superior à luteal (P<0,05) e semelhante à folicular na quantidade de oócitos de boa qualidade em gatas e não houve diferença em cadelas. Conclui-se que o fatiamento recupera maior quantidade de oócitos, não influenciando em sua qualidade. As fases inativa e folicular recuperam maior quantidade de oócitos de boa qualidade em gatas e não afetam a recuperação em cadelas. Portanto, para otimizar o uso das biotecnologias, deve-se levar em consideração o estágio do ciclo estral em fêmeas felinas e a técnica de coleta utilizada na recuperação de oócitos.

The recovery of good quality oocytes is essential for the success of various reproductive biotechniques. The aim of this study was to determine the effect of two techniques on the recovery of good quality oocytes in queens and bitches at different reproductive stages. A total of 43 pairs of ovaries of queens and 35 of bitches after elective ovariosalpingohisterectomy were performed. The estrous cycle phase was classified as inactive, follicular or luteal. The ovaries of the follicular phase were allocated into three groups: PUN) puncture of the follicles with a needle; PUN + SLI) slicing of the same ovary already punctured; and SLI) slicing of the second ovary. The ovaries of luteal and inactive females were submitted to SLI. A total of 974 oocytes (~23/animal) were obtained in feline females and 940 (~27/animal) in canines females. The SLI technique recovered superior number (P<0.05) of oocytes. There was no difference (P>0.05) between the collection techniques in the quality of recovered structures. The number of oocytes recovered in each phase was similar (P>0.05). However, the inactive phase was higher than luteal (P<0.05) and similar to the follicular phase in the quantity of good-quality oocytes in queens and there was no difference in bitches. In conclusion, it is preferable to perform the slicing technique to recover more oocytes in both species. Moreover, in queens it is possible to obtain good quality oocytes in the inactive phase and in bitches the estrous cycle phase does not influence the quality.

Efeito da técnica de coleta e do estágio do ciclo estral na recuperação de oócitos de boa qualidade em felinos e caninos domésticos / The effect of recovery technique and stage of estrous cycle on the recoveryof good quality oocytes in domestic felines and canines

A obtenção de oócitos de boa qualidade é essencial para o sucesso de diversas biotécnicas reprodutivas. Objetivou-se determinar o efeito de duas técnicas na recuperação de oócitos de boa qualidade em gatas e cadelas em diferentes estágios reprodutivos. Foram utilizados 43 pares de ovários de gata e 35 de cadela após realização da ovariosalpingohisterectomia eletiva. A fase do ciclo estral foi classificada em inativa, folicular ou luteal. Os ovários da fase folicular foram divididos em três grupos: PUN) punção dos folículos com agulha; PUN+FAT) fatiamento do mesmo ovário já puncionado; e FAT) fatiamento do segundo ovário. Os ovários das fêmeas em fase luteal e inativa foram submetidos ao FAT. Foram obtidos no total 974 oócitos (~23/animal) nas fêmeas felinas e 940 (~27/animal) nas caninas. O fatiamento recuperou número superior (P<0,05) de oócitos. Não houve diferença (P>0,05) entre as técnicas de coleta na qualidade de estruturas recuperadas. A quantidade de oócitos recuperados em cada fase foi similar (P>0,05). Contudo, a fase inativa foi superior à luteal (P<0,05) e semelhante à folicular na quantidade de oócitos de boa qualidade em gatas e não houve diferença em cadelas. Conclui-se que o fatiamento recupera maior quantidade de oócitos, não influenciando em sua qualidade. As fases inativa e folicular recuperam maior quantidade de oócitos de boa qualidade em gatas e não afetam a recuperação em cadelas. Portanto, para otimizar o uso das biotecnologias, deve-se levar em consideração o estágio do ciclo estral em fêmeas felinas e a técnica de coleta utilizada na recuperação de oócitos.(AU)

The recovery of good quality oocytes is essential for the success of various reproductive biotechniques. The aim of this study was to determine the effect of two techniques on the recovery of good quality oocytes in queens and bitches at different reproductive stages. A total of 43 pairs of ovaries of queens and 35 of bitches after elective ovariosalpingohisterectomy were performed. The estrous cycle phase was classified as inactive, follicular or luteal. The ovaries of the follicular phase were allocated into three groups: PUN) puncture of the follicles with a needle; PUN + SLI) slicing of the same ovary already punctured; and SLI) slicing of the second ovary. The ovaries of luteal and inactive females were submitted to SLI. A total of 974 oocytes (~23/animal) were obtained in feline females and 940 (~27/animal) in canines females. The SLI technique recovered superior number (P<0.05) of oocytes. There was no difference (P>0.05) between the collection techniques in the quality of recovered structures. The number of oocytes recovered in each phase was similar (P>0.05). However, the inactive phase was higher than luteal (P<0.05) and similar to the follicular phase in the quantity of good-quality oocytes in queens and there was no difference in bitches. In conclusion, it is preferable to perform the slicing technique to recover more oocytes in both species. Moreover, in queens it is possible to obtain good quality oocytes in the inactive phase and in bitches the estrous cycle phase does not influence the quality.(AU)

Efeito da técnica de coleta e do estágio do ciclo estral na recuperação de oócitos de boa qualidade em felinos e caninos domésticos / The effect of recovery technique and stage of estrous cycle on the recoveryof good quality oocytes in domestic felines and canines

A obtenção de oócitos de boa qualidade é essencial para o sucesso de diversas biotécnicas reprodutivas. Objetivou-se determinar o efeito de duas técnicas na recuperação de oócitos de boa qualidade em gatas e cadelas em diferentes estágios reprodutivos. Foram utilizados 43 pares de ovários de gata e 35 de cadela após realização da ovariosalpingohisterectomia eletiva. A fase do ciclo estral foi classificada em inativa, folicular ou luteal. Os ovários da fase folicular foram divididos em três grupos: PUN) punção dos folículos com agulha; PUN+FAT) fatiamento do mesmo ovário já puncionado; e FAT) fatiamento do segundo ovário. Os ovários das fêmeas em fase luteal e inativa foram submetidos ao FAT. Foram obtidos no total 974 oócitos (~23/animal) nas fêmeas felinas e 940 (~27/animal) nas caninas. O fatiamento recuperou número superior (P0,05) entre as técnicas de coleta na qualidade de estruturas recuperadas. A quantidade de oócitos recuperados em cada fase foi similar (P>0,05). Contudo, a fase inativa foi superior à luteal (P<0,05) e semelhante à folicular na quantidade de oócitos de boa qualidade em gatas e não houve diferença em cadelas. Conclui-se que o fatiamento recupera maior quantidade de oócitos, não influenciando em sua qualidade. As fases inativa e folicular recuperam maior quantidade de oócitos de boa qualidade em gatas e não afetam a recuperação em cadelas. Portanto, para otimizar o uso das biotecnologias, deve-se levar em consideração o estágio do ciclo estral em fêmeas felinas e a técnica de coleta utilizada na recuperação de oócitos.

The recovery of good quality oocytes is essential for the success of various reproductive biotechniques. The aim of this study was to determine the effect of two techniques on the recovery of good quality oocytes in queens and bitches at different reproductive stages. A total of 43 pairs of ovaries of queens and 35 of bitches after elective ovariosalpingohisterectomy were performed. The estrous cycle phase was classified as inactive, follicular or luteal. The ovaries of the follicular phase were allocated into three groups: PUN) puncture of the follicles with a needle; PUN + SLI) slicing of the same ovary already punctured; and SLI) slicing of the second ovary. The ovaries of luteal and inactive females were submitted to SLI. A total of 974 oocytes (~23/animal) were obtained in feline females and 940 (~27/animal) in canines females. The SLI technique recovered superior number (P0.05) between the collection techniques in the quality of recovered structures. The number of oocytes recovered in each phase was similar (P>0.05). However, the inactive phase was higher than luteal (P<0.05) and similar to the follicular phase in the quantity of good-quality oocytes in queens and there was no difference in bitches. In conclusion, it is preferable to perform the slicing technique to recover more oocytes in both species. Moreover, in queens it is possible to obtain good quality oocytes in the inactive phase and in bitches the estrous cycle phase does not influence the quality.

DNA damage and primordial follicle activation after in vitro culture of sheep ovarian cortex in Morus nigra leaf extract / Dano ao DNA e ativação do folículo primordial após a cultivo in vitro do córtex ovariano de ovelha em extrato de folha de Morus nigra

This study evaluated the effect of Morus nigra leaf extract, with or without supplementation, on morphology, activation and DNA damage of preantral follicles cultured within sheep ovarian tissue. Ovaries were collected and divided into fragments, being one fixed for histological and Terminal deoxynucleotidyl transferase (TdT) mediated dUTP nick-end labeling (TUNEL) analysis (fresh control). The remaining fragments were cultured for 7 days in alpha minimum essential media (α-MEM) supplemented with bovine serum albumin (BSA), insulin, transferrin, selenium, glutamine, hypoxanthine and ascorbic acid (α-MEM+; control medium) or into medium composed of M. nigra extract without supplements (0.1; 0.2 or 0.4mg/mL) or supplemented with the same substances described above for α-MEM+ (MN 0.1+; 0.2+ or 0.4+mg/mL). Then, tissues were destined to histological and TUNEL analysis. The α-MEM+ treatment had more morphologically normal follicles than all M. nigra extract treatments. However, α-MEM+ treatment also showed signs of atresia because the percentage of TUNEL positive cells was similar in α-MEM+ and in 0.1mg/mL M. nigra without and with supplements. Moreover, a reduction in the primordial follicles and an increase in the growing ones were observed in all treatments, except 0.2mg/mL M. nigra. In conclusion, the follicles cultured at 0.1mg/mL M. nigra extract were in good condition and able to continue their development, as demonstrated by the same rates of DNA damage and follicular activation as the control medium.(AU)

Este estudo avaliou o efeito do extrato das folhas de Morus nigra, com ou sem suplementos, sobre a morfologia, a ativação e o dano ao DNA de folículos pré-antrais cultivados inclusos em tecido ovariano. Os ovários foram coletados e divididos em fragmentos, sendo um fixado para análise histológica e ensaio de marcação de terminações dUTP mediada por desoxinucleotidil transferase terminal (TUNEL) (controle fresco). Os fragmentos restantes foram cultivados durante 7 dias em meio essencial mínimo alfa (α-MEM) suplementado com albumina sérica bovina (BSA), insulina, transferrina, selênio, glutamina, hipoxantina e ácido ascorbico (α-MEM+; meio controle) ou em meio composto de extrato de M. nigra sem suplementos (0,1; 0,2 or 0,4mg/mL) ou suplementado com as mesmas substâncias descritas para α-MEM+ (MN 0,1+; 0,2+ or 0,4+mg/mL). Então, os tecidos foram destinados à análise histológica e TUNEL. O tratamento do α-MEM+ apresentou mais folículos morfologicamente normais que todos os tratamentos do extrato de M. nigra. No entanto, o tratamento com α-MEM+ também mostrou sinais de atresia, pois a porcentagem de células TUNEL positivas foi semelhante em α-MEM+ e em 0,1mg/mL M. nigra sem e com suplementos. Além disso, observou-se uma redução nos folículos primordiais e um aumento nos folículos em crescimento em todos os tratamentos, exceto 0,2mg/mL M. nigra. Em conclusão, os folículos cultivados com 0,1mg/mL de extrato de M. nigra estavam em boas condições e aptos a continuar seu desenvolvimento, como demonstrado pelas taxas de dano ao DNA e de ativação folicular semelhantes ao meio controle.(AU)

DNA damage and primordial follicle activation after in vitro culture of sheep ovarian cortex in Morus nigra leaf extract / Dano ao DNA e ativação do folículo primordial após a cultivo in vitro do córtex ovariano de ovelha em extrato de folha de Morus nigra

This study evaluated the effect of Morus nigra leaf extract, with or without supplementation, on morphology, activation and DNA damage of preantral follicles cultured within sheep ovarian tissue. Ovaries were collected and divided into fragments, being one fixed for histological and Terminal deoxynucleotidyl transferase (TdT) mediated dUTP nick-end labeling (TUNEL) analysis (fresh control). The remaining fragments were cultured for 7 days in alpha minimum essential media (α-MEM) supplemented with bovine serum albumin (BSA), insulin, transferrin, selenium, glutamine, hypoxanthine and ascorbic acid (α-MEM+; control medium) or into medium composed of M. nigra extract without supplements (0.1; 0.2 or 0.4mg/mL) or supplemented with the same substances described above for α-MEM+ (MN 0.1+; 0.2+ or 0.4+mg/mL). Then, tissues were destined to histological and TUNEL analysis. The α-MEM+ treatment had more morphologically normal follicles than all M. nigra extract treatments. However, α-MEM+ treatment also showed signs of atresia because the percentage of TUNEL positive cells was similar in α-MEM+ and in 0.1mg/mL M. nigra without and with supplements. Moreover, a reduction in the primordial follicles and an increase in the growing ones were observed in all treatments, except 0.2mg/mL M. nigra. In conclusion, the follicles cultured at 0.1mg/mL M. nigra extract were in good condition and able to continue their development, as demonstrated by the same rates of DNA damage and follicular activation as the control medium.(AU)

Este estudo avaliou o efeito do extrato das folhas de Morus nigra, com ou sem suplementos, sobre a morfologia, a ativação e o dano ao DNA de folículos pré-antrais cultivados inclusos em tecido ovariano. Os ovários foram coletados e divididos em fragmentos, sendo um fixado para análise histológica e ensaio de marcação de terminações dUTP mediada por desoxinucleotidil transferase terminal (TUNEL) (controle fresco). Os fragmentos restantes foram cultivados durante 7 dias em meio essencial mínimo alfa (α-MEM) suplementado com albumina sérica bovina (BSA), insulina, transferrina, selênio, glutamina, hipoxantina e ácido ascorbico (α-MEM+; meio controle) ou em meio composto de extrato de M. nigra sem suplementos (0,1; 0,2 or 0,4mg/mL) ou suplementado com as mesmas substâncias descritas para α-MEM+ (MN 0,1+; 0,2+ or 0,4+mg/mL). Então, os tecidos foram destinados à análise histológica e TUNEL. O tratamento do α-MEM+ apresentou mais folículos morfologicamente normais que todos os tratamentos do extrato de M. nigra. No entanto, o tratamento com α-MEM+ também mostrou sinais de atresia, pois a porcentagem de células TUNEL positivas foi semelhante em α-MEM+ e em 0,1mg/mL M. nigra sem e com suplementos. Além disso, observou-se uma redução nos folículos primordiais e um aumento nos folículos em crescimento em todos os tratamentos, exceto 0,2mg/mL M. nigra. Em conclusão, os folículos cultivados com 0,1mg/mL de extrato de M. nigra estavam em boas condições e aptos a continuar seu desenvolvimento, como demonstrado pelas taxas de dano ao DNA e de ativação folicular semelhantes ao meio controle.(AU)

Efeito do estresse térmico calórico agudo e crônico sobre a qualidade oocitária de bovinos de raças adaptadas / Effect of acute and chronic caloric heat stress on oocyte quality of adapted breeds cattle

Nos trópicos, o uso de raças adaptadas tem sido uma estratégia para minimizar o efeito do estresse térmico calórico (ETC). No entanto, faltam informações que quantifiquem o estresse e o seu efeito sobre a reprodução dessas raças. O objetivo deste estudo foi avaliar a qualidade do oócito recuperado e alguns parâmetros fisiológicos indicadores de ETC em bovinos de raças adaptadas. Animais Bos taurus x Bos indicus (n=6) e Bos taurus (raça Pantaneira; n=12), localizados na região de transição entre o Cerrado e o Pantanal brasileiro, foram submetidos à aspiração folicular guiada por ultrassonografia (OPU) em diferentes condições climáticas. Foram realizadas oito sessões de OPU, com intervalo mínimo de sete dias e máximo de 54 dias entre as coletas. Para caracterização climática, foi realizado o cálculo do índice de temperatura e umidade (ITU). Foram quantificados os ITUs do dia da OPU, sete dias antes e 60 dias antes de cada sessão. Os parâmetros fisiológicos e a viabilidade oocitária de fêmeas das raças Girolando e Pantaneira não foram afetados negativamente por ITUs entre 72 e 78. O ETC crônico (60 dias) parece afetar a viabilidade oocitária de doadoras na raça Pantaneira quando ITU é superior a 75.(AU)

In tropical regions, the use of adapted breeds has been a strategy to minimize the effect of heat stress (HS) in cattle. However, information quantifying stress and its effect on reproduction of these breeds is lacking. The aim of this study was to evaluate the quality of the recovered oocyte and some physiological parameters that indicate HS in adapted breed. Bos taurus x Bos indicus (n=6) and Pantaneira (n=12) cows, located in the transition region between Cerrado and Brazilian Pantanal, underwent follicular aspiration guided by ultrasound (OPU) in different weather conditions. Eight sessions of OPU were carried out, with a minimum interval of 7 days and maximum 54 days between sessions. For weather characterization, the temperature and humidity index (THI) was calculated. THI of the day of OPU, 7 days before and 60 days before each session were calculated. The physiological parameters and oocyte viability of Girolando and Pantaneira cows were not negatively influenced under ITU between 72 and 78. The chronic HS (60 days)may affect the oocyte viability of Pantaneira donors when ITU is over 75.(AU)