Cattle tick differentiates between the odors of Holstein Friesian and Nelore cattle / Carrapato de bovinos diferencia o odor de bovinos da raça Holandesa e Nelore

Although Rhipicephalus microplus mainly parasitizes bovines, different breeds can have variable parasite burdens, with indian breeds being less susceptible to tick infestation than european breeds. These ticks use pasture questing to seek out their hosts in the open spaces of their grassland habitats. Using an olfactometer bioassay, where the larva could express questing, the authors aimed to answer whether R. microplus exhibit different behaviors depending on the bovine breed. Sixteen larvae were individually exposed to the odors of five holstein friesian cattle, five nelore cattle, hexane (negative control) and 2-nitrophenol (positive control). The highest questing responses were observed to 2-nitrophenol and holstein odors. The lowest response was observed to the solvent and was statistically similar to nelore odors. It is possible to conclude that R. microplus express different questing behaviors depending on the odor of the breed perceived. This behavior can help R. microplus to avoid parasitizing nelore bovines and is biologically advantageous for the tick because it is known that ticks that feed on this host have impaired development.(AU)

Embora Rhipicephalus microplus parasite principalmente bovinos, diferentes raças podem ter cargas parasitárias variáveis, sendo os bovinos indianos menos suscetíveis a esse carrapato que os bovinos europeus. Este carrapato usa um comportamento de procura conhecido como questing para encontrar seu hospedeiro nas pastagens. Utilizando um teste em olfatômetro, onde a larva podia expressar o questing, objetivou-se responder se a larva podia expressar diferentes comportamentos dependendo da raça de bovino envolvida. Dezesseis larvas foram expostas para os odores de cinco bovinos holandeses, cinco nelores, hexano (controle negativo) e 2-nitrofenol (controle positivo). As mais altas respostas foram observadas para o 2-nitrofenol e odor de holandês. A mais baixa resposta foi observada para o solvente e foi estatisticamente similar ao odor de nelore. É possível concluir que R. microplus expressa de forma diferente o comportamento de questing dependendo do odor da raça de bovinos percebido. Esse comportamento pode ajudar R. microplus a evitar parasitar bovinos nelore, o que é biologicamente vantajoso para o carrapato, uma vez que se sabe que carrapatos alimentados neste hospedeiro têm seu desenvolvimento comprometido.(AU)

Amblyomma sculptum: IDENTIFICAÇÃO DE ALOMÔNIO EM HOSPEDEIRO RESISTENTE (Equus asinus) E OLFATOMETRIA PARA CANDIDATOS À SEMIOQUÍMICOS Lorena

Amblyomma sculptum é um carrapato de importância médico-veterinária que parasita diversas espécies, principalmente capivaras, equinos e pode parasitar humanos. Atualmente o controle de carrapatos é um desafio visto as desvantagens do controle convencional, por isso, métodos alternativos são desejáveis. Os semioquímicos, que são substâncias capazes de modular o comportamento de carrapatos, podem ser utilizados para este fim. O uso de feromônios, cairomônios assim como a utilização de compostos de espécies não-hospedeiras (alomônios) para controlar carrapatos já foi evidenciado. Na literatura se tem descrito semioquímicos que poderiam atuar no comportamento de A. sculptum e sabe-se também que asininos (Equus asinus) são mais resistentes ao parasitismo por esta espécie que os equinos (Equus caballus). A partir disto foi proposto olfatometria com ninfas e adultos não alimentados de A. sculptum frente a 15 candidatos a semioquímicos (CO2 apenas a 5%, benzaldeído, ácido benzóico, ácido nonanóico, nonanal, ácido salicílico, 2,6 diclorofenol, R-limoneno, S-limoneno, metil salicilato, 1-octen-3-ol, acetona, hidróxido de amônio, ácido isobutírico e ácido lático) em quatro concentrações (10, 5, 2,5 e 1,25%) e teste a campo com os compostos que forem atraentes. Foi também investigado se os asininos (Equus asinus) produzem compostos que podem atuar como repelentes para A. sculptum e olfatometria com ninfas não alimentadas de A. sculptum utilizando os compostos identificados em diferentes concentrações (1,0, 0,5, 0,25 e 0,125M). Quanto aos candidatos a semioquímicos, o CO2 foi atraente para todos os estágios testados. As ninfas foram repelidas pelo benzaldeído e R-limoneno ambos a 10% e pelo ácido isobutírico a 10 e 5%. E foram atraídas pelo ácido benzóico, ácido salicílico e metil salicilato a 1,25% e pelo hidróxido de amônio a 2,5%. Machos foram atraídos pelo ácido benzóico na concentração de 2,5%, enquanto fêmeas foram repelidas pelo benzaldeído a 5%. Foram testadas quatro misturas (v/v) com os compostos atraentes para ninfas, porém nenhuma atividade foi observada. Os compostos que causaram atratividade no olfatômetro (CO2, metil salicilato, ácido benzóico, ácido salicílico e hidróxido de amônio) foram testados a campo. Armadilhas com estes compostos foram colocadas em uma pastagem naturalmente infestada por A. sculptum. O CO2 foi o composto que capturou mais carrapatos (p >0,05). Para verificar a produção de voláteis repelentes pelos animais resistentes ao A. sculptum foi feita uma colheita de sebo de equinos e asininos e foram identificados por meio de cromatografia gasosa e espectofotometria de massa nas duas espécies cinco principais compostos, sendo dois predominantes em cavalos: etil decanoato e etil octanoato, três predominantes em asininos: hexanal, heptanal e trans-2-decenal. Um composto, trans-2-octenal, foi identificado exclusivamente em asininos e os animais produzem uma média de 12,398 g.mg-1 deste composto. Na olfatometria apenas o trans-2-octenal foi repelente em todas as concentrações testadas (10, 5, 2,5 e 1,25M). E ao ser adicionado um composto atraente (hidróxido de amônio) a substância manteve-se repelente. Os resultados indicam que o ácido benzoico deve ser mais investigado visto seu desempenho em laboratório e a campo. O ácido isobutírico e R-limoneno devem ser melhor explorados devido a repelência causada no ensaio comportamental. E o semioquímico identificado aqui modula o comportamento do carrapato e, portanto, é um composto potencial a ser transformado em uma nova tecnologia para controlar A. sculptum.

Amblyomma sculptum is a tick that has medical-veterinary importance and parasites a variety of hosts like capybaras, horses and humans. The tick control is a challenge due the disadvantages caused by conventional control so an alternative is desirable. Semiochemicals are potencial tools to be used once they modulate tick behavior and the use of pheromones, kairomones as well as the use of non-host species (allomones) to control ticks has already been demonstrated. Some semiochemicals have already been described in the literature that could act in A. sculptum behavior. It is also known that donkeys (Equus asinus) are more resistant to the parasitism of this tick specie than horses (Equus caballus). For this, four concentrations (10, 5, 2.5 and 1.25%) of 15 semiochemical candidates (CO2 only at 5%, benzaldehyde, benzoic acid, nonanoic acid, nonanal, salicylic acid, 2.6 diclorophenol, R-limonene, S-limonene, methyl salicylate, 1-octen-3-ol, acetone, ammonium hydroxide, isobutyric acid and lactic acid) were tested in non fed A. sculptum nymphs and adults using a Y-tube olfactometer. And here we investigated if donkeys could produce compounds that can act as repellent to A. sculptum. The CO2 was attractive to all stages tested. Nymphs were repelled by benzaldehyde and R-limonene both at 10% and isobutyric acid at 10 and 5%. Were attracted by methyl salicylate, benzoic acid and salicylic acid all at 1.25% and ammonium hydroxide at 2.5%. Males were attracted by benzoic acid at 2.5%. Females were repelled by benzaldehyde at 5%. Mixtures with the attractive compounds were done but no attraction was observed. The compounds that caused attractiveness in the olfactometer assay (CO2, methyl salicylate, benzoic acid, salicylic acid and ammonium hydroxide) were taken to the field and traps with these compounds were placed in a pasture naturally infested with A. sculptum ticks. The dry ice (CO2) is still the best substance to attract ticks in the field (p>0.05). To verify if non hosts produce repellents volatiles, odors from donkeys and horses were extracted from the dry sebum extract. So the compounds were identified by gas chromatography (GC) and coupled GC-mass spectrometry. Five main compounds were identified in both species being two predominant on horses: ethyl decanoate and ethyl octanoate, three predominant on donkeys hexanal, heptanal and trans-2-decenal. One compound trans-2-octenal occurring almost exclusively on donkeys was also identified and donkeys produced an average of 12,398 g.mg-1. In olfactometer tests only the trans-2-octenal was repellent at different concentrations (10, 5, 2.5 and 1.25M). When an attractive substance (ammonium hydroxide) was added the compound still repellent. The results indicated that benzoic acid should be further investigated since their results as attractant in laboratory and field. The isobutyric acid and R-limonene should be better exploited because of the repellent role presented in the behavioral test. And that the semiochemical identified here could be used to interfere in tick behavior and is therefore a potential compound to be transformed in a new technology to control A. sculptum.

BIOLOGIA E INTERAÇÃO COM PLANTAS ASSOCIADAS DOS PERCEVEJOS BARRIGA-VERDE, Dichelops furcatus (F., 1775) e Dichelops melacanthus (Dallas, 1851) (Hemiptera: Heteroptera: Pentatomidae)

Estudos referentes à identificação, bioecologia e preferência alimentar dos percevejos barriga-verde Dichelops furcatus (F., 1775) e Dichelops melacanthus (Dallas, 1851) em diferentes plantas cultivadas [milho, Zea mays L., trigo, Triticum aestivum L., Poaceae, e soja, Glycine max (L.) Merrill, Fabaceae] e não-cultivadas (buva, Conyza bonariensis L., picão-preto, Bidens pilosa L., Asteraceae, e leiteiro, Euphorbia heterophylla L., Euphorbiaceae) foram realizados na região de Passo Fundo, RS. A identificação e diferenciação dos percevejos do gênero Dichelops Spinola, 1837 foram baseadas na genitália masculina e caracteres externos dos insetos (coloração do pronoto, tamanho do inseto). Em levantamento realizado durante o período de dois anos (2011/13), o percevejo barriga-verde encontrado na região de Passo Fundo, RS, foi identificado como D. furcatus; sendo observado com maior frequência durante o outono, inverno e primavera. A área em pousio, com presença de restos das culturas de soja e milho, assim como área com pastagem perene, contribuíram para a manutenção e o desenvolvimento do percevejo D. furcatus. Verificou-se que esse percevejo apresentou distribuição desuniforme no campo. D. melacanthus não foi encontrada. Em testes em laboratório, os melhores resultados quanto ao desempenho de ninfas de D. furcatus e D. melacanthus foram quando elas se alimentaram com vagem verde de soja (VVS); quando os alimentos foram oferecidos na forma de plântulas nenhuma das ninfas chegou à fase adulta. Ninfas de D. furcatus alimentadas com VVS tenderam a apresentar menor mortalidade (30%), em comparação com os demais alimentos [83,3% em sementes maduras de trigo (SMT); 93,3% em vagem verde de feijão (VVF); 100,0% em sementes maduras de soja (SMS), sementes maduras de milho (SMM), e plântulas de soja (PLS), de trigo (PLT) e de milho (PLM)]. Ninfas de D. melacanthus alimentadas com VVS tenderam a apresentar menor mortalidade (30,0%), em comparação aos outros alimentos [50,0% em VVF; 70,0% em SMT; 83,3% em SMS; 100% em PLS; PLT e PLM]. As ninfas de ambas as espécies, alimentadas com plantas não-cultivadas apresentaram alta mortalidade. Ninfas de D. furcatus alimentadas com sementes maduras de picão-preto B. pilosa (SMP) apresentaram mortalidade (93,3%), e 100,0% nos seguintes alimentos: sementes maduras de buva C. bonariensis (SMB); sementes maduras de leiteiro E. heterophylla (SML); plântulas de picão-preto B. pilosa (PLP); plântulas de buva C. bonariensis, (PLB); plântulas de leiteiro E. heterophylla (PLL). Ninfas de D. melacanthus tiveram mortalidade de 100,0% quando alimentadas com SMP, SMB, SML, PLP, PLB e PLL. Os adultos de D. furcatus apresentaram melhor desempenho ao se alimentarem de partes reprodutivas em comparação às vegetativas (plântulas). VVF e VVS proporcionaram um desempenho reprodutivo melhor para os adultos de D. furcatus, com maior percentagem de fêmeas em oviposição (70,0 e 55,0% respectivamente); nos alimentos SMS, SMT e SMM o desempenho reprodutivo variou de 15,0-35,0%; as fêmeas que foram alimentadas com plântulas não ovipositaram. Os adultos de D. melacanthus apresentaram melhor desempenho ao se alimentar com VVS e VVF, nos quais, 75,0% das fêmeas ovipositaram; nos alimentos SMM, SMT e SMS o desempenho variou de 45,0-55,0%; em plântulas, as fêmeas não ovipositaram. Em alimentos derivados de plantas não-cultivadas, fêmeas de ambas as espécies não ovipositaram. Em coletas realizadas a campo, o percevejo D. furcatus apresentou espinhos pronotais curtos e mais arredondados nos meses do outono/inverno, e mais longo nos meses da primavera/verão; a coloração abdominal variou durante o ano; na primavera/verão a coloração abdominal foi predominantemente verde, e parte da população no outono/inverno apresentaram abdômen marrom-acinzentado. Os machos e fêmeas das espécies D. furcatus e D. melacanthus apresentaram órgãos reprodutivos imaturos no outono/inverno. No teste de preferência com a utilização de olfatômetro, adultos de D. furcatus preferiram plântulas de trigo, soja e milho. Em gaiolas de criação, adultos de D. furcatus, preferiram plântulas de buva, C. bonariensis, picão-preto B. pilosa, e leiteiro E. heterophylla. Para D. melacanthus em teste de olfatometria os adultos preferiram plântulas de milho e trigo. Em gaiolas de criação adultos de D. melacanthus preferiram plântulas de buva C. bonariensis, picão-preto B. pilosa, e leiteiro E. heterophylla. Em geral, as plântulas de plantas cultivadas foram preferidas quando comparadas as plântulas de plantas não-cultivadas em teste de olfatometria, e, em gaiolas de criação, a preferência foi por plântulas de plantas não-cultivadas.

Studies referring to the identification, bioecology and feeding preference of the green-bellied stink bugs Dichelops furcatus (F., 1775) and Dichelops melacanthus (Dallas, 1851) in different cultivated plants [corn, Zea mays L., wheat, Triticum aestivum L., Poaceae, e soybean, Glycine max (L.) Merrill, Fabaceae] and non-cultivated (flax-leaf fleabane, Conyza bonariensis L., black-jack, Bidens pilosa L., Asteraceae, and fireplant, Euphorbia heterophylla L., Euphorbiaceae) have been carried out along the region of Passo Fundo, RS. The identification and differentiation of the Dichelops Spinola, 1837 stink bugs were based mainly on male genitalia and external features of the insects (pronotum coloration, insect size). On field surveys, realized during a period of two years (2011/13), the green-bellied bug found in the region of Passo Fundo, RS, was identified as D. furcatus being more frequently observed during autumn, winter and spring. The area of fallowing, with the presence of remaining of soybean and corn cultures, as well as in perennial pasture areas, contributed to the maintenance and development of the stink bug D. furcatus. It was verified that the distribution of the bug was not uniform. The species D. melacanthus was not found. In lab tests, the best results on nymphs performance D. furcatus and D. melacanthus was when the fed on soybean pod (VVS); when the food offered was in the form of seedlings no nymphs reached the adult phase. D. furcatus nymphs fed with VVS presented less mortality (30,0%), in comparison with other foods [83,3% in mature wheat seeds (SMT); 93,3% in green beans (VVF); 100,0% in mature soybean seeds (SMS), in mature corn seeds (SMM), and in soybean seedlings (PLS)]. D. melacanthus nymphs fed with VVS tended to presented less mortality (30,0%) in comparison with other foods [50,0% in VVF; 70,0% in SMT; 83,3% in SMS; 100% in PLS; PLT and PLM]. Nymphs of both species fed with non-cultivated plants presented high mortality rates. D. furcatus nymphs fed with mature seeds of black-jack B. pilosa (SMP) presented mortality (93,3%). Nymphs fed with mature seeds of black-jack showed mortality (93,3%), and 100,0% on the following foods: flax-leaf mature seeds C. bonariensis (SMB); fireplant mature seeds E. heterophylla (SML); black-jack seedlings B. pilosa (PLP); flax-leaf seedlings C. bonariensis, (PLB); fireplant seedlings E. heterophylla (PLL). D. melacanthus nymphs had a rate of 100,0% mortality when fed with SMP, SMB, SML, PLP, PLB and PLL. D. furcatus adults showed better performance when feeding on reproductive parts in comparison to vegetative (seedlings). VVF and VVS provided a better reproductive performance, with a higher percentage of females in oviposition (70,0% and 55,0%); in the SMS, SMT and SMM foods, the reproductive performance varied between 15,0 35,0%; the females fed with seedlings did not oviposit. Adults of D. melacanthus showed better performance when feeding with VVS and VVF, in which 75,0% of females oviposit; with the SMM, SMT and SMS foods the performance varied between 45,0-55,0%; with seedlings the females did not oviposit. In foods derived from non-cultivated plants, females of both species did not oviposit. In field collects, the D. furcatus stink bug presented shorter and rounder spines during the autumn/winter months, and longer spines during the spring/summer months; the abdominal coloration varied along the year; in spring/summer it was mainly green, and part of the population presented greyish brown abdominal coloration during the autumn/winter. Males and females of D. furcatus e D. melacanthus presented immature reproductive organs during autumn/winter. In the preference test with olfactometer, adults of D. furcatus preferred wheat, soybean and corn seedlings. In cages, D. furcatus preferred seedlings of flax-leaf, C. bonariensis, black-jack B. pilosa, and fireplant E. heterophylla. For D. melacanthus in the olfactometer tests, the adults preferred corn and wheat seedlings. In cages D. melacanthus preferred flax-leaf C. bonariensis, black-jack B. pilosa, and fireplant E. heterophylla. In general, in the olfactometer tests seedlings of cultivated plants where preferred in comparison to non-cultivated plants; in cages tests the opposite was observed.

FEROMÔNIO DE Conotrachelus humeropictus Fiedler, 1940 (COLEOPTERA: CURCULIONIDAE): IDENTIFICAÇÃO ESTRUTURAL E AVALIAÇÃO DA ATIVIDADE COMPORTAMENTAL

A broca-dos-frutos do cacau e do cupuaçu, Conotrachelus humeropictus é a principal praga destas culturas, pois suas larvas se desenvolvem dentro dos frutos, tornando-os impróprios para comercialização. O controle desta praga é problemático em função dos ovos e larvas estarem protegidos dentro dos frutos, tornando o controle químico pouco eficiente. Com o objetivo de identificar os componentes feromonais de C. humeropictus e testar sua atratividade em laboratório e no campo, aerações de machos e fêmeas foram realizadas e extratos de ambos os sexos foram coletados e analisados. As análises comparativas dos perfis de voláteis de machos e fêmeas indicaram a presença de quatro compostos macho-específicos (A, B, C e D). Os compostos A, C e D foram identificados através de comparações com espectros de massas e coinjeções com padrões sintéticos: (A) grandisol, (1R,2S)-1-metil-2-(1-metiletenil)-ciclobutanoetanol; (C) ácido grandisóico, (1R,2S)-1-metil-2-(1-metiletenil)-ciclobutanoacético e (D) uma lactona derivada do ácido grandisóico, 2,2,6-trimetil-3-oxabiciclo[4.2.0]octan-4-ona, um composto inédito nunca antes descrito na natureza, o composto B encontra-se em processo de identificação. A quantificação realizada com o composto majoritário revelou que um inseto produz em média 235 ± 73 ng de ácido grandisóico por dia. Através da coleta de voláteis durante a fotofase e escotofase foi possível observar que a emissão do feromônio ocorre com maior intensidade durante a escotofase (76 ± 3%). Os testes de atratividade em laboratório, realizados em olfatômetro em Y, permitiram avaliar o comportamento de C. humeropictus frente aos compostos sintéticos (A, C e D). Eles revelaram a atratividade de machos para a mistura grandisol (A) + ácido grandisóico (C). Já os testes com fêmeas demonstraram que a lactona influenciou na atratividade quando testada no conjunto, grandisol (A) + lactona (D) e ácido grandisóico (C) + lactona (D), no entanto, ambos os compostos isolados (A e C) não foram atrativos. Testes preliminares de campo realizados na estação experimental da CEPLAC, em Ouro Preto do Oeste, Rondônia (BR), avaliaram a atratividade de C. humeropictus ao ácido grandisóico (C) e à mistura ácido grandisóico (C) + lactona (D), e não se mostrou eficiente. A ausência do composto B, em processo de identificação, pode alterar os resultados de atratividade de C. humeropictus à mistura feromonal em laboratório e em campo.

The weevil, Conotrachelus humeropictus Fiedler, 1940 (Coleoptera: Curculionidae), a fruit borer of cocoa and cupuaçu fruits is the main pest of these cultures because it develops inside the fruits turning them inadequate for commercialization. The control of this pest is problematic because eggs and larvae are protected inside the fruits making the chemical control less effective. With the objective of identifying the pheromonal components of C. humeropictus and testing its attractiveness in laboratory and field tests, aerations of male and females were performed and extracts were collected and analyzed. Comparative analyses of males and females volatile profiles indicated the presence of four male specific compounds (A, B, C and D). The compounds A, C and D were identified through mass spectra comparisons and co-injections with standards: (A) grandisol, (1R,2S)-1-methyl-2-(1-methylethenyl)-cyclobutaneethanol; (C) grandisoic acid, (1R,2S)-1-methyl-2-(1-methylethenyl)-cyclobutaneacetic acid; and (D) a lactone derived from the grandisoic acid, 2,2,6-trimethyl-oxabicyclo[4.2.0]octan-4-one, a new compound, not yet described in nature. Compound B is still in process of identification. Quantification based on the major compound showed that one insect produces in average 235 ± 73 ng of grandisoic acid per day. Using volatile collections of both photophase and scotophase, it was observed that pheromone emission occurs mostly during scotophase (76 ± 3%). Attractiveness tests were conducted in the laboratory with a Y tube olfactometer to evaluate the behavior of C. humeropictus to synthetic compounds (A, C and D). They revealed the attractiveness of males to the mixture grandisol (A) + grandisoic acid (C). However, female tests revealed that the lactone influenced attractiveness when it was tested in the following combination grandisol (A) + lactone (D) and grandisoic acid (C) + lactone (D), since both compounds alone (A and C) were not attractive. Preliminary field tests that were performed on the experimental station of CEPLAC, in Ouro Preto do Oeste, Rondônia (BR) evaluated the attractiveness of C. humeropictus to grandisoic acid (C) and the blend grandisoic acid (C) + lactone (D), though it was not effective. The absence of compound B which is still in the process of identification might alter the attractiveness results of C. humeropictus to the pheromonal mixtures both in the laboratory and in the field.