Urea poisoning in cattle: a brief review and diagnostic approach / Intoxicação por ureia em bovinos: breve revisão e abordagem diagnóstica

Urea is an organic compound characterized as a white, solid, and hygroscopic substance. It is recognized as a source of non-protein nitrogen (NPN) and is widely used as a partial replacement for protein in cattle diets due to the ability of the ruminal microbiota to convert it into microbial protein. Despite the advantages of using urea, it also has limitations, particularly the proximity between metabolizable and toxic or fatal doses. Furthermore, for safe use, a period of adaptation is necessary for the animals. Poisoning is characterized by rapid and generally fatal development, which is frequent in non-adapted animals but can also occur in those with previous adaptations. The aim of this study was to characterize the clinical, epidemiological, and pathological aspects of urea poisoning through a brief review and a retrospective study. In addition, interviews were conducted with veterinarians who frequently send diagnostic material to the Laboratory of Anatomic Pathology of the "Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia" (LAP-FAMEZ) to assess their perception of the outbreaks of urea poisoning. The objective was to obtain a comparative scenario between published cases and those received by the laboratory while considering the real situation of this condition in the field. During this retrospective study, only four outbreaks were investigated; in one, the diagnosis was possible through experimental reproduction. Of 35 interviewees, 88.9% said they had seen more than one case compatible with urea poisoning, but 87.5% did not perform a necropsy and/or send material to confirm the diagnosis. The results show that the reality of urea poisoning may be very distant from that reported in previous studies due to the difficulty often observed in the diagnostic approach, so we developed a flowchart aiming to provide a useful guide for field veterinarians.

A ureia é um composto orgânico, que se apresenta como uma substância branca, sólida e higroscópica, e é reconhecida como fonte de nitrogênio não proteico (NNP), sendo amplamente utilizada como fertilizante e também como substituto parcial de proteína em bovinos devido à capacidade da microbiota ruminal de convertê-la em proteína microbiana. Apesar das vantagens que envolvem o uso da ureia, ela também apresenta limitações, a principal delas é a proximidade entre doses metabolizáveis e tóxicas ou fatais, e para que seja utilizada com segurança é necessário um período de adaptação dos animais. A intoxicação é caracterizada por evolução rápida e geralmente fatal, sendo frequente em animais não adaptados, mas pode ocorrer naqueles com adaptação prévia. O objetivo deste estudo é caracterizar os aspectos clínicos, epidemiológicos e patológicos da intoxicação por ureia por meio de uma breve revisão e um estudo retrospectivo. Adicionalmente foram realizadas entrevistas com médicos veterinários que frequentemente enviam material para diagnóstico no Laboratório de Anatomia Patológica da Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia (LAP-FAMEZ) com o objetivo de avaliar a percepção dos mesmos em relação aos surtos de intoxicação por ureia, na expectativa de se obter um quadro comparativo entre os casos recebidos pelo laboratório e levantamentos publicados e a real situação desta condição a campo. No período do estudo retrospectivo, foram acompanhados apenas quatro surtos, sendo que em um deles foi possível diagnosticar por reprodução experimental. Dos 35 entrevistados, 88,9% afirmaram ter atendido mais de um caso compatível com intoxicação por ureia, mas 87,5% deles não realizaram necropsia e/ou envio de material para confirmação do diagnóstico. Foi possível observar que a realidade da intoxicação por ureia pode estar muito distante daquela relatada em estudos anteriores, e devido à dificuldade muitas vezes observada na abordagem diagnóstica, desenvolvemos um fluxograma na expectativa de que ele constitua um guia útil para veterinários de campo.

Evaluation of actions of the official veterinary service to mitigate outbreaks of infectious laryngotracheitis and improve biosecurity on laying hen farms

ABSTRACT: Infectious laryngotracheitis (ILT), caused by an Alphaherpesvirus (Gallid herpesvirus-1; GaHV-1), has been noticed in the region of the Terras Altas da Mantiqueira, Minas Gerais. From 2010 to 2018, the Serviço Veterinário Oficial (SVO) of the Instituto Mineiro Agropecuário (IMA), implemented measures to prevent spread of the virus to other regions and control the disease in the area. Due to the close proximity and consequent epidemiological link among farms, the region was considered a unique epidemiological unit. To check the efficiency of the ILT control measures, we carried out: (1) a seroepidemiological survey, (2) questionnaires for evaluating biosecurity measures; and (3) an evaluation of the influence of farm population density on the occurrence of ILT. In 2016, 2017, and 2018, ILT was investigated using epidemiological and clinicopathological methods, along with GaHV-1 molecular detection. Serological survey was carried out on 24 farms in the quarantined region and on 13 farms from other regions of the state. In 2010 and 2018, questionnaires were applied to collect data and determine indicators of biosecurity practices in all farms of the quarantined area. The differences were then assessed (Wilcoxons p 0.05). The results indicated positive serology throughout the region, although only on four farms (16.6%) the chickens have clinical signs, macroscopic and histological lesions of ILT. The prevalence of viral infection increased from 2016 (27%) to 2017 (50%) and was higher in farms with a high stock density (p=0.033). No disease, virus or antibodies were detected in the farms outside of the quarantined area. Although the biosecurity indicators had improved on all farms in the quarantined area (p 0.05), the virus was active and circulating in the region. The contingency measures have contained the outbreak, but biosecurity practices are paramount in the control of new outbreaks. Official control will be maintained in the region, including surveillance of new cases and biosecurity procedures to mitigate the risk of the virus reaching other regions.

RESUMO: Laringotraqueíte infecciosa (LTI), causada por um alfaherpesvírus (herpesvírus Gallid-1; GaHV-1), foi observada na região das Terras Altas da Mantiqueira, Minas Gerais. De 2010 a 2018, o Serviço Veterinário Oficial (SVO) do Instituto Mineiro Agropecuário (IMA) implementou medidas para impedir a disseminação do vírus para outras regiões do estado e controlar a doença na região interditada. Devido à proximidade e consequente vínculo epidemiológico entre as granjas, a região foi considerada uma unidade epidemiológica única. Para verificar a eficiência das medidas de controle de LTI, foram realizados: (1) pesquisa soroepidemiológica, (2) questionários para avaliar medidas de biosseguridade; e (3) avaliação da influência da densidade populacional da granja na ocorrência de LTI. Em 2016, 2017 e 2018, a LTI foi investigada usando métodos epidemiológicos e clínico-patológicos, com a detecção molecular de GaHV-1. O levantamento sorológico foi realizado em 24 granjas da região interditada e em 13 granjas de outras regiões do estado. Em 2010 e 2018, foram aplicados questionários para coletar dados e determinar indicadores de medidas de biosseguridade em todas as granjas da área interditada. As diferenças foram avaliadas (p 0,05 de Wilcoxon). Os resultados indicaram sorologia positiva em toda a região, embora apenas em quatro granjas (16,6%) as galinhas apresentaram sinais clínicos, lesões macroscópicas e histológicas da LTI. A prevalência de infecção viral aumentou de 2016 (27%) para 2017 (50%) e foi maior em fazendas com alta densidade de alojamento (p=0,033). Presença da doença, vírus ou anticorpos foram detectados nas granjas fora da área interditada. Embora os indicadores de biosseguridade tenham melhorado em todas as fazendas da área interditada (p 0,05), o vírus está ativo e circulava na região. As medidas de contingência contiveram o surto, mas as práticas de biosseguridade são fundamentais para o controle de novos surtos. O controle oficial será mantido na região, incluindo a vigilância de novos casos e procedimentos de biosseguridade para mitigar o risco de transmissão do vírus para outras regiões.

Evaluation of actions of the official veterinary service to mitigate outbreaks of infectious laryngotracheitis and improve biosecurity on laying hen farms / Avaliação de ações do serviço veterinário oficial para bloqueio de foco de laringotraqueite infecciosa e melhoria da biosseguridade em granjas de postura

Infectious laryngotracheitis (ILT), caused by an Alphaherpesvirus (Gallid herpesvirus-1; GaHV-1), has been noticed in the region of the Terras Altas da Mantiqueira, Minas Gerais. From 2010 to 2018, the "Serviço Veterinário Oficial" (SVO) of the "Instituto Mineiro Agropecuário" (IMA), implemented measures to prevent spread of the virus to other regions and control the disease in the area. Due to the close proximity and consequent epidemiological link among farms, the region was considered a unique epidemiological unit. To check the efficiency of the ILT control measures, we carried out: (1) a seroepidemiological survey, (2) questionnaires for evaluating biosecurity measures; and (3) an evaluation of the influence of farm population density on the occurrence of ILT. In 2016, 2017, and 2018, ILT was investigated using epidemiological and clinicopathological methods, along with GaHV-1 molecular detection. Serological survey was carried out on 24 farms in the quarantined region and on 13 farms from other regions of the state. In 2010 and 2018, questionnaires were applied to collect data and determine indicators of biosecurity practices in all farms of the quarantined area. The differences were then assessed (Wilcoxon's p<0.05). The results indicated positive serology throughout the region, although only on four farms (16.6%) the chickens have clinical signs, macroscopic and histological lesions of ILT. The prevalence of viral infection increased from 2016 (27%) to 2017 (50%) and was higher in farms with a high stock density (p=0.033). No disease, virus or antibodies were detected in the farms outside of the quarantined area. Although the biosecurity indicators had improved on all farms in the quarantined area (p<0.05), the virus was active and circulating in the region. The contingency measures have contained the outbreak, but biosecurity practices are paramount in the control of new outbreaks. Official control will be maintained in the region, including surveillance of new cases and biosecurity procedures to mitigate the risk of the virus reaching other regions.(AU)

Laringotraqueíte infecciosa (LTI), causada por um alfaherpesvírus (herpesvírus Gallid-1; GaHV-1), foi observada na região das Terras Altas da Mantiqueira, Minas Gerais. De 2010 a 2018, o Serviço Veterinário Oficial (SVO) do Instituto Mineiro Agropecuário (IMA) implementou medidas para impedir a disseminação do vírus para outras regiões do estado e controlar a doença na região interditada. Devido à proximidade e consequente vínculo epidemiológico entre as granjas, a região foi considerada uma unidade epidemiológica única. Para verificar a eficiência das medidas de controle de LTI, foram realizados: (1) pesquisa soroepidemiológica, (2) questionários para avaliar medidas de biosseguridade; e (3) avaliação da influência da densidade populacional da granja na ocorrência de LTI. Em 2016, 2017 e 2018, a LTI foi investigada usando métodos epidemiológicos e clínico-patológicos, com a detecção molecular de GaHV-1. O levantamento sorológico foi realizado em 24 granjas da região interditada e em 13 granjas de outras regiões do estado. Em 2010 e 2018, foram aplicados questionários para coletar dados e determinar indicadores de medidas de biosseguridade em todas as granjas da área interditada. As diferenças foram avaliadas (p<0,05 de Wilcoxon). Os resultados indicaram sorologia positiva em toda a região, embora apenas em quatro granjas (16,6%) as galinhas apresentaram sinais clínicos, lesões macroscópicas e histológicas da LTI. A prevalência de infecção viral aumentou de 2016 (27%) para 2017 (50%) e foi maior em fazendas com alta densidade de alojamento (p=0,033). Presença da doença, vírus ou anticorpos foram detectados nas granjas fora da área interditada. Embora os indicadores de biosseguridade tenham melhorado em todas as fazendas da área interditada (p<0,05), o vírus está ativo e circulava na região. As medidas de contingência contiveram o surto, mas as práticas de biosseguridade são fundamentais para o controle de novos surtos. O controle oficial será mantido na região, incluindo a vigilância de novos casos e procedimentos de biosseguridade para mitigar o risco de transmissão do vírus para outras regiões.(AU)

Evaluation of actions of the official veterinary service to mitigate outbreaks of infectious laryngotracheitis and improve biosecurity on laying hen farms / Avaliação de ações do serviço veterinário oficial para bloqueio de foco de laringotraqueite infecciosa e melhoria da biosseguridade em granjas de postura

Infectious laryngotracheitis (ILT), caused by an Alphaherpesvirus (Gallid herpesvirus-1; GaHV-1), has been noticed in the region of the Terras Altas da Mantiqueira, Minas Gerais. From 2010 to 2018, the "Serviço Veterinário Oficial" (SVO) of the "Instituto Mineiro Agropecuário" (IMA), implemented measures to prevent spread of the virus to other regions and control the disease in the area. Due to the close proximity and consequent epidemiological link among farms, the region was considered a unique epidemiological unit. To check the efficiency of the ILT control measures, we carried out: (1) a seroepidemiological survey, (2) questionnaires for evaluating biosecurity measures; and (3) an evaluation of the influence of farm population density on the occurrence of ILT. In 2016, 2017, and 2018, ILT was investigated using epidemiological and clinicopathological methods, along with GaHV-1 molecular detection. Serological survey was carried out on 24 farms in the quarantined region and on 13 farms from other regions of the state. In 2010 and 2018, questionnaires were applied to collect data and determine indicators of biosecurity practices in all farms of the quarantined area. The differences were then assessed (Wilcoxon's p<0.05). The results indicated positive serology throughout the region, although only on four farms (16.6%) the chickens have clinical signs, macroscopic and histological lesions of ILT. The prevalence of viral infection increased from 2016 (27%) to 2017 (50%) and was higher in farms with a high stock density (p=0.033). No disease, virus or antibodies were detected in the farms outside of the quarantined area. Although the biosecurity indicators had improved on all farms in the quarantined area (p<0.05), the virus was active and circulating in the region. The contingency measures have contained the outbreak, but biosecurity practices are paramount in the control of new outbreaks. Official control will be maintained in the region, including surveillance of new cases and biosecurity procedures to mitigate the risk of the virus reaching other regions.(AU)

Laringotraqueíte infecciosa (LTI), causada por um alfaherpesvírus (herpesvírus Gallid-1; GaHV-1), foi observada na região das Terras Altas da Mantiqueira, Minas Gerais. De 2010 a 2018, o Serviço Veterinário Oficial (SVO) do Instituto Mineiro Agropecuário (IMA) implementou medidas para impedir a disseminação do vírus para outras regiões do estado e controlar a doença na região interditada. Devido à proximidade e consequente vínculo epidemiológico entre as granjas, a região foi considerada uma unidade epidemiológica única. Para verificar a eficiência das medidas de controle de LTI, foram realizados: (1) pesquisa soroepidemiológica, (2) questionários para avaliar medidas de biosseguridade; e (3) avaliação da influência da densidade populacional da granja na ocorrência de LTI. Em 2016, 2017 e 2018, a LTI foi investigada usando métodos epidemiológicos e clínico-patológicos, com a detecção molecular de GaHV-1. O levantamento sorológico foi realizado em 24 granjas da região interditada e em 13 granjas de outras regiões do estado. Em 2010 e 2018, foram aplicados questionários para coletar dados e determinar indicadores de medidas de biosseguridade em todas as granjas da área interditada. As diferenças foram avaliadas (p<0,05 de Wilcoxon). Os resultados indicaram sorologia positiva em toda a região, embora apenas em quatro granjas (16,6%) as galinhas apresentaram sinais clínicos, lesões macroscópicas e histológicas da LTI. A prevalência de infecção viral aumentou de 2016 (27%) para 2017 (50%) e foi maior em fazendas com alta densidade de alojamento (p=0,033). Presença da doença, vírus ou anticorpos foram detectados nas granjas fora da área interditada. Embora os indicadores de biosseguridade tenham melhorado em todas as fazendas da área interditada (p<0,05), o vírus está ativo e circulava na região. As medidas de contingência contiveram o surto, mas as práticas de biosseguridade são fundamentais para o controle de novos surtos. O controle oficial será mantido na região, incluindo a vigilância de novos casos e procedimentos de biosseguridade para mitigar o risco de transmissão do vírus para outras regiões.(AU)

Hiding in plain sight: an evolutionary approach to the South American Zika outbreak and its future consequences

Emerging Infectious Diseases (EID) pose a world-wide health and socio-economic threat. Accelerating climate change and globalization are exposing unforeseen ways that pathogens cope with their surroundings. The 2015 Zika virus (ZIKV) outbreak was an example of expansion into previously inaccessible fitness spaces, causing a sudden epidemic. Recent studies indicating the subsequent decrease in symptomatic cases means the virus is in remission, currently poses little threat, and therefore can be ignored. We present an evolutionary scenario derived from the Stockholm Paradigm, of oscillating phases of expansion and isolation, accompanied by changes in transmission, persistence, virulence, and pathology. Chief among these is the likelihood that asymptomatic strains are constantly transmitted sexually. This suggests that the currently quiescent virus retains capacities to reemerge abruptly and spread rapidly in an arena of changing opportunity.

Hiding in plain sight: an evolutionary approach to the South American Zika outbreak and its future consequences

Emerging Infectious Diseases (EID) pose a world-wide health and socio-economic threat. Accelerating climate change and globalization are exposing unforeseen ways that pathogens cope with their surroundings. The 2015 Zika virus (ZIKV) outbreak was an example of expansion into previously inaccessible fitness spaces, causing a sudden epidemic. Recent studies indicating the subsequent decrease in symptomatic cases means the virus is in remission, currently poses little threat, and therefore can be ignored. We present an evolutionary scenario derived from the Stockholm Paradigm, of oscillating phases of expansion and isolation, accompanied by changes in transmission, persistence, virulence, and pathology. Chief among these is the likelihood that asymptomatic strains are constantly transmitted sexually. This suggests that the currently quiescent virus retains capacities to reemerge abruptly and spread rapidly in an arena of changing opportunity.(AU)

Biofilm formation by Salmonella Enteritidis at different incubation temperatures

Background: The genus Salmonella, associated with poultry products, is considered the leading cause of foodborne outbreaks in humans in many countries. In Brazil, Salmonella Enteritidis (SE) is the serovar remains as one most frequentlyisolated from humans, and it is also a major serovar found in animals, food, animal feed, and environmental samples, despiteall the efforts to control this pathogen. Also, the bacterium is able to form biofilms on different surfaces, protecting cellsfrom both cleaning and sanitizing procedures in the food industries. This study aimed to verify the ability of SalmonellaEnteritidis isolates to form biofilm on polystyrene at different incubation temperatures.Materials, Methods & Results: A total of 171 SE samples were isolated from foodborne outbreaks (foods and stool cultures) and poultry products between 2003 and 2010. The biofilm-forming ability of samples was measured at four differenttemperatures (3°C, 9ºC, 25ºC, and 36ºC), for 24 h, simulating temperatures usually found in poultry slaughterhouses. Later,200 μL of each bacterial suspension was inoculated, in triplicate, onto 96-well, flat-bottomed sterile polystyrene microtiterplates, washed, after that, the biofilm was fixed with methanol. The plates were dried at ambient temperature, stained with2% Hucker’s crystal violet. Afterwards, absorbance was read using an ELISA plate reader and the optical density (OD)of each isolate was obtained by the arithmetic mean of the absorbance of three wells and this value was compared withthe mean absorbance of negative controls (ODnc). The following classification was used for the determination of biofilmformation: no biofilm production, weak biofilm production, moderate biofilm production and strong biofilm production.Results demonstrated all isolates from stool cultures and foods involved in foodborne outbreaks, at least one of the fourtemperatures tested, were able to form biofilm...

Biofilm formation by Salmonella Enteritidis at different incubation temperatures

Background: The genus Salmonella, associated with poultry products, is considered the leading cause of foodborne outbreaks in humans in many countries. In Brazil, Salmonella Enteritidis (SE) is the serovar remains as one most frequentlyisolated from humans, and it is also a major serovar found in animals, food, animal feed, and environmental samples, despiteall the efforts to control this pathogen. Also, the bacterium is able to form biofilms on different surfaces, protecting cellsfrom both cleaning and sanitizing procedures in the food industries. This study aimed to verify the ability of SalmonellaEnteritidis isolates to form biofilm on polystyrene at different incubation temperatures.Materials, Methods & Results: A total of 171 SE samples were isolated from foodborne outbreaks (foods and stool cultures) and poultry products between 2003 and 2010. The biofilm-forming ability of samples was measured at four differenttemperatures (3°C, 9ºC, 25ºC, and 36ºC), for 24 h, simulating temperatures usually found in poultry slaughterhouses. Later,200 μL of each bacterial suspension was inoculated, in triplicate, onto 96-well, flat-bottomed sterile polystyrene microtiterplates, washed, after that, the biofilm was fixed with methanol. The plates were dried at ambient temperature, stained with2% Huckers crystal violet. Afterwards, absorbance was read using an ELISA plate reader and the optical density (OD)of each isolate was obtained by the arithmetic mean of the absorbance of three wells and this value was compared withthe mean absorbance of negative controls (ODnc). The following classification was used for the determination of biofilmformation: no biofilm production, weak biofilm production, moderate biofilm production and strong biofilm production.Results demonstrated all isolates from stool cultures and foods involved in foodborne outbreaks, at least one of the fourtemperatures tested, were able to form biofilm...(AU)

Resistance of the stable fly, Stomoxys calcitrans (Diptera: Muscidae), to cypermethrin in outbreak areas in Midwestern Brazil / Resistência da mosca-dos-estábulos, Stomoxys calcitrans (Diptera: Muscidae), à cipermetrina em áreas de surtos no Centro-Oeste brasileiro

Population explosions of the stable fly (Stomoxys calcitrans) have become a serious concern for livestock producers near sugarcane mills in some regions of Brazil due to the insects massive reproduction on sugarcane byproducts and waste. Despite the limited efficiency of insecticides for controlling stable fly outbreaks, producers still rely on chemical control to mitigate the alarming infestations in affected areas. This study evaluated the susceptibility of S. calcitrans populations to cypermethrin in the state of Mato Grosso do Sul, Brazil. Stable flies were tested from three field populations and two colonies, established from flies previously collected at sugarcane mills. Wild flies were collected with Nzi traps in areas of sugarcane plantations. Both wild and colonized flies were exposed to eleven concentrations of cypermethrin in impregnated filter paper bioassays. All the populations proved to be resistant to cypermethrin, with resistance factors among field populations ranging from 6.8 to 38.6. The intensive use of insecticides has led to the development of pyrethroid resistance in stable fly populations in the proximities of sugarcane mills in the state of Mato Grosso do Sul.(AU)

Explosões populacionais da mosca-dos-estábulos (Stomoxys calcitrans) tornaram-se uma séria preocupação para a pecuária próxima a usinas de cana-de-açúcar em algumas regiões do Brasil, devido à massiva reprodução da mosca em resíduos e subprodutos do processamento da cana. Apesar da limitada eficiência dos inseticidas no controle dos surtos desta mosca, produtores dependem do controle químico para mitigar as alarmantes infestações nas áreas afetadas. Este estudo objetivou avaliar a suscetibilidade de populações de S. calcitrans a piretroides no estado de Mato Grosso do Sul, Brasil. Moscas-dos-estábulos de três populações de campo e duas colônias, estabelecidas a partir de moscas previamente coletadas em usinas de cana-de-açúcar, foram testadas. Moscas selvagens foram coletadas com armadilhas Nzi em áreas de cana. Moscas coletadas foram expostas a onze concentrações de cipermetrina em bioensaios com papel de filtro impregnado. Todas as populações testadas mostraram-se resistentes ao piretroide, com fatores de resistência variando de 6,8 a 38,6 nas populações de campo. O uso intensivo de inseticidas tem levado ao desenvolvimento de resistência da mosca-dos-estábulos a piretroides em populações próximas a usinas de cana-de-açúcar no estado do Mato Grosso do Sul.(AU)

Virus isolation in cell culture for confirmatory diagnostic of rabies in bovine specimens / Isolamento viral em cultivo celular para o diagnóstico confirmatório de raiva em amostras de bovinos

This study investigated the suitability of virus isolation (VI) in mouse neuroblastoma cells (N2A) and baby hamster kidney cells (BHK-21) as a confirmatory test for diagnosis of bovine rabies. Fourty-eight brain samples from cattle suspected of rabies were initially submitted to fluorescent antibody test (FAT) and mouse inoculation test (MIT) for routine diagnostic. Subsequently, these specimens were submitted to three protocols of VI in each cell line: a single 24h or 72h passage (T1, T2), or three 48h passages (T3). The FAT and MIT combined detected 32/48 positive samples, from which MIT detected 32 and FAT 31. The average time required for final MIT results was 12.3 days (8 - 21). VI in BHK-21 cells provided definitive, positive results in 100% of the samples in 72h (T2) and in 96.9% after three 48h passages (T3). VI in N2A cells yielded positive results in 100% in 72h (T2) and in 93.7% of samples after three 48h passages (T3). Sensitivity, specificity, positive and negative predictive values were 100% in T2 in N2A and BHK-21 cells, and the Kappa value was excellent in both cells (k=1). A single 24h passage (T1) in both cell lines performed poorly, detecting less than 40% of the positive samples. Taking together, these results indicate that VI in both cell lines, especially in BHK-21 cells that grow faster and are much easier to maintain, does represent an adequate alternative for MIT as a confirmatory test for rabies diagnostic in bovine specimens, yielding reliable results in reduced time.(AU)

Este estudo investigou a sensibilidade do isolamento viral (VI) em células de neuroblastoma murino (N2A) e células de rim de hamster (BHK-21) como um teste confirmatório para o diagnóstico de raiva bovina. Quarenta e oito amostras de cérebro de bovinos com suspeita de raiva foram inicialmente submetidas aos testes diagnósticos de rotina, imunofluorescência direta (FAT) e inoculação intracerebral em camundongos (MIT). Subsequentemente, essas amostras foram submetidas a três protocolos de VI em cada linhagem celular: uma única passagem de 24h ou 72h (T1, T2), ou três passagens de 48h (T3). Os testes FAT e MIT combinados detectaram 32/48 amostras positivas, das quais o MIT detectou 32 e a FAT 31. O tempo médio requerido para o resultado final no MIT foi 12,3 dias (8-21 dias). O teste de VI em células BHK-21 obteve resultados positivos em 100% das amostras em 72h (T2), e em 96,9% após três passagens de 48h (T3). O teste de VI em células N2A forneceu resultado positivo em 100% em 72h (T2), e em 30 das 32 amostras após três passagens de 48h (T3). Sensibilidade, especificidade, valores preditivos positivos e negativos foram de 100% tanto em N2A quanto em BHK-21 após 72h de incubação (T2). Além disso, o valor Kappa foi excelente em ambas as células (k=1). Uma única passagem de 24h (T1) em ambas as linhagens celulares não apresentou resultados satisfatórios, detectando menos de 40% das amostras positivas. Esses resultados indicam que o isolamento viral em ambas as linhagens celulares, especialmente em BHK-21 - que multiplica mais rápido e é de mais fácil manutenção - representa uma alternativa adequada para a substituição do MIT como um teste confirmatório para o diagnóstico da raiva em amostras de bovinos, fornecendo resultados confiáveis em tempo reduzido.(AU)

Descrição das ações de vigilância em focos da doença de Aujeszky / Description of surveillance actions in outbreaks of Aujeszky´s disease

Aujeszkys disease (AD) is known for causing huge productive and economical losses in the swine industry. This study focused on describing the actions of the official animal health protection used on identification of AD outbreaks. Two outbreaks that occurred in Cerqueira César city were selected, a case presenting only seropositive animals (outbreak 1) and  another one where there were animals with clinical signs of the disease (outbreak 2). The methods used to identify the outbreaks in surveillance actions and to diagnose the epidemiological situation were described. The measures implemented to eliminate the outbreaks in infected pig production systems were appointed in animal health protection laws and were able to eliminated all outbreaks identified. In conclusion, the official animal health protection measures and the appliance of the sanitary legislation were effective in eradicating AD, reassuring that notifications of suspicous cases of AD facilitate animal health surveillance activities.

A doença de Aujeszky (DA) é conhecida na suinocultura pelo seu grande impacto produtivo e econômico. Este trabalho teve como objetivo a descrição das ações de defesa sanitária animal utilizadas na identificação de focos dessa enfermidade. Foram selecionadas duas situações de foco de DA que ocorreram no Município de Cerqueira César, um caso apresentando somente animais sororreagentes (Foco 1) e outro em que havia animais com sinais clínicos da enfermidade (Foco 2). Estão descritos os métodos de identificação de focos utilizados nas ações de vigilância e o diagnóstico da situação epidemiológica encontrada. As medidas aplicadas na erradicação dos focos nos sistemas de produção de suínos infectados foram as prescritas na legislação de defesa sanitária animal e  todos os focos identificados foram eliminados. Ao final, concluiu-se que as ações de defesa sanitária e a legislação em vigor foram eficazes, demonstrando que os sistemas de notificações das suspeitas da enfermidade são facilitadores das ações de vigilância.

Descrição das ações de vigilância em focos da doença de Aujeszky / Description of surveillance actions in outbreaks of Aujeszky´s disease

Aujeszkys disease (AD) is known for causing huge productive and economical losses in the swine industry. This study focused on describing the actions of the official animal health protection used on identification of AD outbreaks. Two outbreaks that occurred in Cerqueira César city were selected, a case presenting only seropositive animals (outbreak 1) and  another one where there were animals with clinical signs of the disease (outbreak 2). The methods used to identify the outbreaks in surveillance actions and to diagnose the epidemiological situation were described. The measures implemented to eliminate the outbreaks in infected pig production systems were appointed in animal health protection laws and were able to eliminated all outbreaks identified. In conclusion, the official animal health protection measures and the appliance of the sanitary legislation were effective in eradicating AD, reassuring that notifications of suspicous cases of AD facilitate animal health surveillance activities.(AU)

A doença de Aujeszky (DA) é conhecida na suinocultura pelo seu grande impacto produtivo e econômico. Este trabalho teve como objetivo a descrição das ações de defesa sanitária animal utilizadas na identificação de focos dessa enfermidade. Foram selecionadas duas situações de foco de DA que ocorreram no Município de Cerqueira César, um caso apresentando somente animais sororreagentes (Foco 1) e outro em que havia animais com sinais clínicos da enfermidade (Foco 2). Estão descritos os métodos de identificação de focos utilizados nas ações de vigilância e o diagnóstico da situação epidemiológica encontrada. As medidas aplicadas na erradicação dos focos nos sistemas de produção de suínos infectados foram as prescritas na legislação de defesa sanitária animal e  todos os focos identificados foram eliminados. Ao final, concluiu-se que as ações de defesa sanitária e a legislação em vigor foram eficazes, demonstrando que os sistemas de notificações das suspeitas da enfermidade são facilitadores das ações de vigilância.(AU)

DESCRIÇÃO DAS AÇÕES DE VIGILÂNCIA EM FOCOS DA DOENÇA DE AUJESZKY

title>Abstract /title> p>Aujeszkys disease (AD) is known for causing huge productive and economical losses in the swine industry. This study focused on describing the actions of the official animal health protection used on identification of AD outbreaks. Two outbreaks that occurred in Cerqueira César city were selected, a case presenting only seropositive animals (outbreak 1) and another one where there were animals with clinical signs of the disease (outbreak 2). The methods used to identify the outbreaks in surveillance actions and to diagnose the epidemiological situation were described. The measures implemented to eliminate the outbreaks in infected pig production systems were appointed in animal health protection laws and were able to eliminated all outbreaks identified. In conclusion, the official animal health protection measures and the appliance of the sanitary legislation were effective in eradicating AD, reassuring that notifications of suspicous cases of AD facilitate animal health surveillance activities. /p>

title>Resumo /title> p>A doença de Aujeszky (DA) é conhecida na suinocultura pelo seu grande impacto produtivo e econômico. Este trabalho teve como objetivo a descrição das ações de defesa sanitária animal utilizadas na identificação de focos dessa enfermidade. Foram selecionadas duas situações de foco de DA que ocorreram no Município de Cerqueira César, um caso apresentando somente animais sororreagentes (Foco 1) e outro em que havia animais com sinais clínicos da enfermidade (Foco 2). Estão descritos os métodos de identificação de focos utilizados nas ações de vigilância e o diagnóstico da situação epidemiológica encontrada. As medidas aplicadas na erradicação dos focos nos sistemas de produção de suínos infectados foram as prescritas na legislação de defesa sanitária animal e todos os focos identificados foram eliminados. Ao final, concluiu-se que as ações de defesa sanitária e a legislação em vigor foram eficazes, demonstrando que os sistemas de notificações das suspeitas da enfermidade são facilitadores das ações de vigilância. /p>

Outbreak of anaplasmosis associated with the presence of different Anaplasma marginale strains in dairy cattle in the states of São Paulo and Goiás, Brazil / Surto de anaplasmose associado com a presença de diferentes cepas de Anaplasma marginale em gado leiteiro dos estados de São Paulo e Goiás, Brasil

The present study reports the genetic diversity of Anaplasma marginale during anaplasmosis outbreaks in rural properties of the states of Goiás and São Paulo, Brazil. Mortality rates of 3.5% (37/1,050) in calves, 4.7% (45/954) in heifers and 1.1% (25/2,200) in lactating cows were observed in a cattle herd of the municipality of Mambaí, state of Goiás, central-western Brazil. In a cattle herd from the municipality of Lins, state of São Paulo, in southeastern Brazil, none of the animals died, despite presenting clinical signs suggestive of bovine anaplasmosis and exhibiting a drastic decrease in milk production. Thus, blood samples were collected from 100 animals with clinical signs suggestive of bovine anaplasmosis in the municipalities of Mambaí and Lins. Based on the microsatellite structure of the MSP1a of A. marginale, the genotypes E and H were observed in Lins, and the C, D and E genotypes were found in Mambaí. The analysis of the tandem repeat structures of the MSP1a showed nine different strains (τ-10 -15, α-β2, α-β3-13, α-β2 192, τ-β-100, α-β2-Γ, 193-β-100, 191-13-Γ and 191-13-18) in Lins and two (α-β3-Γ and E-F-φ2-F2) in Mambaí. Three new tandem repeats of MSP1a (191, 192 and 193) were described. The τ-10-15 and α-β3-Γ strains were predominantly associated with the occurrence of clinical anaplasmosis and mortality in calves, heifers and lactating cows.(AU)

O presente estudo relata a diversidade genética de Anaplasma marginale durante surtos de anaplasmose bovina no Brasil em propriedades localizadas nos Estados de Goiás e São Paulo. No rebanho bovino de Mambaí, Estado de Goiás, Centro-oeste do Brasil, observaram-se taxas de mortalidade de 3,5% (37/1050) nos bezerros; 4,7% (45/954) nas novilhas e 1,1% (25/2200) nas vacas em lactação. No rebanho bovino de Lins, Estado de São Paulo, Sudeste do Brasil, embora os animais tenham apresentado sinais clínicos sugestivos de anaplasmose bovina, culminando em redução drástica da produção leiteira, nenhum animal veio a óbito. Assim, amostras de sangue de 100 bovinos com sinais clínicos sugestivos de anaplasmose foram coletadas em Mambaí-GO e Lins-SP. Baseando-se na estrutura do microssatélite da MSP1a de A. marginale, observou-se a presença dos genótipos E e H em Lins e C, D e E em Mambaí. A análise da estrutura em “tandem repeats” da MSP1a mostrou nove diferentes estirpes (τ-10 -15, α-β2, α-β3-13, α-β2 192, τ-β-100, α-β2-Γ, 193-β-100, 191-13-Γ e 191-13-18) em Lins e duas (α-β3-Γ e E-F-φ2-F2) em Mambaí. Três novos “tandem repeats” da MSP1a (191, 192 e 193) foram descritos. Foi observado predomínio das estirpes τ-10-15 e α-β3-Γ associado à ocorrência de anaplasmose clínica e mortalidade em bezerras, novilhas e vacas em lactação.(AU)

Epidemiologia molecular de surto de raiva bovina na região central do Rio Grande do Sul, 2012 / Molecular epidemiology of an outbreak of bovine rabies in central Rio Grande do Sul, Brazil, 2012

A raiva é uma doença infecciosa do sistema nervoso central de mamíferos causada pelo vírus da raiva (RabV), geralmente, transmitido pela mordedura de animais infectados. No Brasil, os morcegos hematófagos Desmodus rotundus são as principais fontes de infecção do RabV para bovinos e equinos. Este artigo descreve uma investigação epidemiológica e molecular de surtos de raiva ocorridos na região central do Rio Grande do Sul, entre maio e agosto de 2012. Nesse período, 45 casos suspeitos de raiva foram relatados em 22 pequenos rebanhos, localizados dentro de um raio de 4,7km, no município de Pinhal Grande. Desses, 32 amostras foram submetidas para diagnóstico da raiva, sendo que o RabV e/ou antígenos virais foram identificados em 27 amostras. Em um segundo momento, 11 amostras foram submetidas à transcrição reversa/reação em cadeia da polimerase (RT-PCR) para o gene da nucleoproteína (N) do RabV, seguido de sequenciamento nucleotídico e análise filogenética. Sete das 11 amostras apresentaram sequências nucleotídicas idênticas e uma apresentou mutação sinônima, não-codificante, indicando uma provável origem comum dos vírus. Por outro lado, três amostras apresentaram mutações que resultaram em alterações de aminoácidos, sugerindo uma origem diferente do vírus. Esses resultados sugerem que RabV de diferentes origens/linhagens co-circulam na região e foram envolvidos nos surtos descritos. Investigações sobre a circulação de ambos os genótipos em morcegos na região estão em andamento.(AU)

Rabies is an infectious disease of the central nervous system of mammals caused by rabies virus (RabV), generally transmitted by the bite of rabid animals. In Brazil, vampire bats Desmodus rotundus are the main reservoirs of RabV for livestock. The present study describes a molecular and epidemiological investigation of outbreaks of bovine rabies occurring in the central region of Rio Grande do Sul state, Brazil, between May and August 2012. In this period, 45 cases suspected of rabies were reported in 22 small herds, located within a 4.7km range, in the county of Pinhal Grande. From these, 32 samples were submitted to rabies diagnosis and RabV and/or viral antigens were identified in 27 samples. Subsequently, 11 brain samples were submitted to reverse transcription/polymerase chain reaction (RT-PCR) for the nucleoprotein gene (N) followed by nucleotide sequencing and phylogenetic analysis. Seven out of 11 samples yielded identical sequences; one presented a synonymous, non-coding mutation, indicating a likely common origin of the virus. However, three other samples presented nucleotide mutations which resulted in amino acid changes, suggesting a different origin of the virus. In summary, these results suggest that RabV strains of different origin/lineages co-circulate in the region and were involved in the outbreaks. Investigations on the circulation of both genotypes in bats in the region are currently underway.(AU)

Genotipificação de Salmonella Gallinarum isolada de casos de tifo aviário em Santa Catarina e associação à fatores predisponentes para ocorrência

Salmonella spp. é um importante patógeno bacteriano de aves e é responsável por significativas perdas econômicas da avicultura em muitas partes do mundo. Salmonella Gallinarum (SG) é um sorovar específico de aves que causa grandes prejuízos por causar o Tifo Aviário (TA), uma enfermidade de notificação obrigatória que pode se manifestar de forma aguda ou crônica e determinar septicemia em aves. No Estado de Santa Catarina (SC), a partir do ano de 2012, houveram 96 notificações ao Serviço Veterinário Oficial (SVO) de TA em SC. A caracterização destas cepas tem grande importância para avaliações de epidemiologia e associação de fatores de risco. Este estudo objetivou estudar a diversidade genética de SG oriundas de casos de TA em Santa Catarina, buscando identificar similaridade ou dissimilaridade entre as estirpes isoladas dos focos. Para este, estudo foram analisadas 56 cepas SG oriundas do Laboratório Nacional Agropecuário (LANAGRO) -Campinas, que, na Embrapa Suínos e Aves, foram submetidas a análises por PFGE segundo protocolo padronizado pelo pulsenet CDC (Centro de Controle e Prevenção de Doenças). Elaborou-se um questionário visando identificar fatores predisponentes para entrada e disseminação de SG em granjas. O questionário consistiu em 18 perguntas fechadas binárias (Sim ou Não) e foi encaminhado aos médicos veterinários do SVO responsáveis pelo atendimento das propriedades, onde houve os surtos de SG. Através da técnica de PFGE e posterior elaboração de um dendograma, identificou-se um perfil genotípico prevalente (57,1%) de SG nas amostras analisadas. Este resultado sugere que no estado de SC ocorra um clone endêmico, cuja disseminação seja possivelmente veiculada ao transporte de aves infectadas entre regiões, além de não ter sido possível identificar e associar fatores predisponentes analisados nos questionários à ocorrência de surtos de SG.

Salmonella spp. is an important bacterial pathogen of poultry and is responsible for significant economic losses of poultry in many parts of the world. Salmonella Gallinarum (SG) is a bird-specific serovar that causes great damage by causing Fowl Typhoid (FT), a notifiable disease that can manifest acutely or chronically and determine septicemia in poultry. In the State of Santa Catarina (SG), as of 2012, there were 96 notifications to the Official Veterinary Service (OVS) of FT in SC. The characterization of these strains is of great importance for evaluations of epidemiology and association of risk factors. The objective of this study was to study the genetic diversity of SG from TA cases in Santa Catarina, seeking to identify similarity or dissimilarity between strains isolated from foci. For this study, 56 SG strains from the Laboratório Nacional Agropecuário (LANAGRO) - Campinas, which at Embrapa Suínos e Aves were submitted to PFGE analysis according to the protocol standardized by the Pulsenet CDC (Centers for Disease Control and Prevention). A questionnaire was developed to identify predisposing factors for entry and dissemination of SG in farms. The questionnaire consisted of 18 closed binary questions (yes or no) and was referred to the veterinarians of the SVO responsible for the care of the properties, where there were outbreaks of SG. Through the PFGE technique and subsequent elaboration of a dendogram, a prevalent genotypic profile (57.1%) of SG was identified in the samples analyzed. This result suggests that in the state of SC, an endemic clone occurs, the dissemination of which is possibly conveyed to the transport of infected birds between regions, and it has not been possible to identify and associate predisposing factors analyzed in the questionnaires to the occurrence of SG outbreaks.

Genotipificação de Salmonella Gallinarum isolada de casos de tifo aviário em Santa Catarina e associação à fatores predisponentes para ocorrência

Salmonella spp. é um importante patógeno bacteriano de aves e é responsável por significativas perdas econômicas da avicultura em muitas partes do mundo. Salmonella Gallinarum (SG) é um sorovar específico de aves que causa grandes prejuízos por causar o Tifo Aviário (TA), uma enfermidade de notificação obrigatória que pode se manifestar de forma aguda ou crônica e determinar septicemia em aves. No Estado de Santa Catarina (SC), a partir do ano de 2012, houveram 96 notificações ao Serviço Veterinário Oficial (SVO) de TA em SC. A caracterização destas cepas tem grande importância para avaliações de epidemiologia e associação de fatores de risco. Este estudo objetivou estudar a diversidade genética de SG oriundas de casos de TA em Santa Catarina, buscando identificar similaridade ou dissimilaridade entre as estirpes isoladas dos focos. Para este, estudo foram analisadas 56 cepas SG oriundas do Laboratório Nacional Agropecuário (LANAGRO) -Campinas, que, na Embrapa Suínos e Aves, foram submetidas a análises por PFGE segundo protocolo padronizado pelo pulsenet CDC (Centro de Controle e Prevenção de Doenças). Elaborou-se um questionário visando identificar fatores predisponentes para entrada e disseminação de SG em granjas. O questionário consistiu em 18 perguntas fechadas binárias (Sim ou Não) e foi encaminhado aos médicos veterinários do SVO responsáveis pelo atendimento das propriedades, onde houve os surtos de SG. Através da técnica de PFGE e posterior elaboração de um dendograma, identificou-se um perfil genotípico prevalente (57,1%) de SG nas amostras analisadas. Este resultado sugere que no estado de SC ocorra um clone endêmico, cuja disseminação seja possivelmente veiculada ao transporte de aves infectadas entre regiões, além de não ter sido possível identificar e associar fatores predisponentes analisados nos questionários à ocorrência de surtos de S

Salmonella spp. is an important bacterial pathogen of poultry and is responsible for significant economic losses of poultry in many parts of the world. Salmonella Gallinarum (SG) is a bird-specific serovar that causes great damage by causing Fowl Typhoid (FT), a notifiable disease that can manifest acutely or chronically and determine septicemia in poultry. In the State of Santa Catarina (SG), as of 2012, there were 96 notifications to the Official Veterinary Service (OVS) of FT in SC. The characterization of these strains is of great importance for evaluations of epidemiology and association of risk factors. The objective of this study was to study the genetic diversity of SG from TA cases in Santa Catarina, seeking to identify similarity or dissimilarity between strains isolated from foci. For this study, 56 SG strains from the Laboratório Nacional Agropecuário (LANAGRO) - Campinas, which at Embrapa Suínos e Aves were submitted to PFGE analysis according to the protocol standardized by the Pulsenet CDC (Centers for Disease Control and Prevention). A questionnaire was developed to identify predisposing factors for entry and dissemination of SG in farms. The questionnaire consisted of 18 closed binary questions (yes or no) and was referred to the veterinarians of the SVO responsible for the care of the properties, where there were outbreaks of SG. Through the PFGE technique and subsequent elaboration of a dendogram, a prevalent genotypic profile (57.1%) of SG was identified in the samples analyzed. This result suggests that in the state of SC, an endemic clone occurs, the dissemination of which is possibly conveyed to the transport of infected birds between regions, and it has not been possible to identify and associate predisposing factors analyzed in the questionnaires to the occurrence of SG outbreaks.

Detecção de Salmonella em tomates (Lycopersicon esculentum Mill) pelos métodos FDA-BAM e Mini vidas-bioMérieux

Diversos surtos de Salmonella ocasionados pelo consumo de tomate contaminados com este micro -organismo têm sido relatados ultimamente, o que toma primordial a investigação sobre a presença desse patógeno nesse alimento. Métodos que permitam a avaliação rápida da presença de Salmonella em alimentos são de suma importância. O objetivo desse estudo foi comparar o método tradicional da Food and Drug Administration - Bacteriologycal Analytical Manual (FDA-BAM) com um método rápido da mini Vitek Immuno Diagnostic System Assay (Mini- Vidas-SLM)-bioMérieux, para detecção de Salmonella Brazil inoculada artificialmente na superfície de tomates. Foram analisadas 215 amostras de tomates inoculadas artificialmente com Salmonella Brazil com níveis de inóculos variando de 0,4 a 940 UFC/tomate. Os resultados obtidos mostraram que os métodos estudados apresentaram uma ótima concordância entre si, para todas as faixas de inóculo analisadas.(AU)

Several outbreaks caused by Salmonella due to consumption of tomato containing this microorganism has been reported lately, which makes essential the evaluation of this pathogen in this food. Methods for the rapid assessment of the presence of Salmonella in food, are of paramount importance. The aim of this study was to compare the traditional method of "Food and Drug Administration- Bacteriological Analytical Manual (FDA-BAM)" with a rapid method of mini Vitek Immuno Assay Diagnostic System (Mini- Vidas-SLM)-bioMérieux to detect Salmonella Brazil artificially inoculated on the surface of tomatoes. Two hundred fifteen (215) tomatoes samples artificially inoculated with Salmonella Brazil with inocula levels ranging from 0.4 to 940 CFU/tomato were analyzed. The results indicated that the studied methods showed an optimum agreement with each other, for ali inoculum levels analyzed.(AU)

Therapeutic efficacy of florfenicol against Streptococcus agalactiae infection in nile tilápia (Oreochromis nicoticus)

Streptococcus agalactiae (SA) é um dos mais importantes patógenos que afetam a tilapicultura mundial. A antibioticoterapia oral é a principal medida terapêutica aplicada em casos de surtos da doença. Diversos antimicrobianos têm sido empregados para o tratamento da estreptococose, sendo o florfenicol (FLO) uma das drogas mais utilizadas. No Brasil existem relatos de falhas terapêuticas e recidivas dos casos de estreptococose em lotes tratados com FLO na dose padrão de 10 mg/Kg de peso vivo. Apesar de licenciado em diferentes países, não existem estudos sobre a eficiência terapêutica e dose ideal do FLO para o tratamento de infecções por SA em tilápia do Nilo (Oreochromis niloticus L). O objetivo deste trabalho foi avaliar a eficiência terapêutica e dose ideal de FLO para o tratamento da infecção por SA em tilápia do Nilo (Oreochromis niloticus). A amostra de S. agalactiae SA 95-10 previamente isolada de tilápia doente no Brasil foi utilizada no presente estudo. A concentração inibitória mínima (CIM) do FLO para a amostra SA 95-10 foi determinada de acordo com manual VET04-A2 do CLSI. Para avaliação da eficiência terapêutica, juvenis de tilápia foram infectados experimentalmente com a SA 95-10 e medicados por via oral com FLO nas doses de 10, 20, 40 e 60mg/Kg por 10 dias consecutivos e observados por um período de 20 dias pós-tratamento. A CIM do FLO para SA 95-10 foi de 1g/mL. As doses de 20 e 40mg/Kg foram eficientes nos controle das mortalidades durante o período de tratamento, porém, mortalidades de 90% e 60% foram observadas no período de acompanhamento pós-tratamento. Após o fim do período experimental 44,4% dos peixes continuavam portadores da bactéria. A SA 95-10 foi submetida a teste de avaliação in vitro do fenômeno persistência induzida pelo FLO, sendo exposta a 100 vezes a concentração do CIM para FLO. Essa se manteve viva e viável após 12 horas de exposição ao FLO, com uma redução na concentração de 108 para 106 UFC/mL. Para avaliar a capacidade de transmissão da bactéria de animais portadores para saudáveis, foi realizado um ensaio de coabitação. Dois grupos de peixes foram desafiados com a SA 95-10, medicados com FLO nas doses de 20 e 40 mg/Kg de PV por 10 dias consecutivos e posteriormente transferidos para aquários contendo animais saudáveis. Mortalidades de 40 e 50% foram observadas nos animais saudáveis coabitados, denotando a manutenção da capacidade de transmissão e virulência da bactéria nos portadores induzidos pela terapia. O FLO é ineficaz no controle da infecção por S. agalactiae em tilápia do Nilo. Esse diminui a mortalidade durante o tratamento, porém, mortalidades elevadas e quadros de portador ocorrem imediatamente após o fim do tratamento. Esse é o primeiro relato do fenômeno de persistência induzida por antibióticos em S. agalactiae patogênico para peixes. Futuros estudos devem ser realizados para determinar os mecanismos fisiológicos e moleculares que possibilitam a bactéria resistir ao antibiótico

Streptococcus agalactiae is one of the most important pathogens affecting farm-raised tilapia worldwide. The oral therapy with antibiotics is the main therapeutic measure applied in outbreaks. Several antimicrobial agents have been used for the treatment of streptococcosis, being the florfenicol one of the most widely used drug. In Brazil, reports of treatment failures and recurrent mortality in herds treated with FLO have been done with the recommended dose of 10 mg/Kg of LW. Despite to being licensed in different countries, there arent studies about the therapeutic efficacy and optimal dosage of FLO for the treatment of SA infections in Nile tilapia (Oreochromis niloticus L.). The aim of this work was to evaluate the therapeutic efficiency and optimal dose of FLO for the treatment of SA infection in Nile tilapia (Oreochromis niloticus). The S. agalactiae strain SA 95-10, previously isolated from diseased tilapia in Brazil was used in this study. The minimum inhibitory concentration (MIC) of FLO for the SA 95-10 was determined according to VET04-A2 guidelines of CLSI. For the evaluation of therapeutic efficiency, Nile tilapia juveniles were experimentally infected with SA 95-10 and orally medicated with FLO in doses of 10, 20, 40 and 60mg/Kg of LW for 10 consecutive days and observed for a period of 20 days post-treatment. The MIC of FLO for SA 95-10 was 1 g/mL. The doses of 20 and 40mg/Kg were effective in the control of mortalities during the treatment period, however, mortality rates of 90% and 60% were observed at the observation period. After the end of experimental period 44.4% of the fish were shown to be carriers of bacteria. SA 95-10 was submitted to an, in vitro evaluation of persistence behavior induced by FLO, being exposed to 100 times the MIC value for FLO. The strain remained alive and viable after 12 hours of exposition, decreasing the bacterial counting from 108 CFU/mL to 106 CFU/mL. To evaluate the transmission of bacterium from carriers to healthy animals, a cohabitation assay was performed. Two groups of fish were challenged with the SA 95-10, medicated with FLO at 20 and 40 mg/Kg of LW for 10 consecutive days, and subsequently transferred to aquaria containing healthy animals. Mortalities of 40 to 50% and were observed in cohabitated animals. This might indicate that the ability of transmission and virulence is kept in FLO induced persistent S. agalactiae cells in carrier fish. The FLO was shown unable to control SA infection in Nile tilapia. It controls the disease during the treatment, however, mortalities are immediately verified when the administration ends. This is the first report of the persistence phenomenon induced by antibiotics in fish pathogenic S. agalactiae. Future studies should be carried out to determine the physiological and molecular mechanisms that allow the bacterium to resist to FLO

CARACTERIZAÇÃO GENÉTICA DE VÍRUS INFLUENZA ISOLADOS EM SUÍNOS NO RIO GRANDE DO SUL

O vírus influenza A (IAV) é um agente zoonótico de grande relevância tanto para saúde humana como animal. A influenza suína teve seu primeiro reconhecimento clínico em 1918, em suínos do Meio Oeste dos EUA, coincidindo com a pandemia de influenza em humanos. Desde então, o IAV permanece como um importante patógeno para a indústria suinícola em todo o mundo. A grande variabilidade genética destes vírus é causada por dois principais mecanismos genéticos: mutações pontuais e recombinações genéticas. A influenza é endêmica em muitos países e a emergências de recombinantes tem desafiado o controle e o diagnóstico desta enfermidade. No Brasil, a infecção pelo IAV em suínos (swIAV) não está bem caracterizada; poucos relatos evidenciam a prevalência deste agente antes do ano de 2009, especialmente no Estado do Rio Grande do Sul, que alberga um dos maiores rebanhos de suínos do Brasil. Em vista disso, este trabalho teve como objetivo investigar ocorrência de swIAV em alguns rebanhos suínos comerciais do Estado do Rio Grande do Sul, Brasil, no período de 2013-2014, e determinar os tipos e subtipos de vírus circulantesnaquelas propriedades. O primeiro capítulo deste estudo reporta os aspectos clínicos,patológicos e virológicos da ocorrência de influenza suína e co-infecções identificadas em seis propriedades suinícolas selecionadas na região do Vale do Taquari. Neste estudo foram analisados suabes nasais coletados de 66 animais e 6 amostras de tecido pulmonar de suínos com sinais de infecção respiratória. A detecção viral foi feita através de uma PCR de triagem e confirmada através do isolamento viral em célulasMDCK. A identificação dos subtipos virais foi feita através de uma PCR em Tempo Real (rRT-PCR) para o subtipo A(H1N1)pdm09 ou através de uma PCR multiplex(RT-PCR) para outros subtipos de swIAV. A detecção de agentes bacterianos foi realizada apenas nas amostras de tecido pulmonar, através da pesquisa de genomas bacterianos por PCR. O subtipo A(H1N1)pdm09 foi identificado em 4/6 granjas e o subtipo H1N2 em 2/6 granjas. Além disso, agentes envolvidos no complexo respiratório dos suínos foram identificados em todas as granjas; Pasteurella multocida foi identificada em 5/6 granjas e Mycoplasma hyopneumoniae em 3/6 granjas. Actinobacillus pleuropneumoniae (1/6), Haemophilus parasuis (1/6) e PCV2 (1/6) também foram detectados. O segundo capítulo deste estudo teve como objetivo o sequenciamento do genoma completo de um novo recombinante H1N2 de origem humana, detectado em suínos. O genoma completo foi gerado através de uma RT-PCR. Os produtos forampurificados e submetidos ao sequenciamento utilizando a plataforma MiSeq(illumina). A análise filogenética revelou que as sequencias dos genes HAe NA correspondem a genes de IAV de origem humana, enquanto que as sequencias dos genes que codificam as proteínas internas do vírus (PB1, PB2, PA, NP, M e NS) correspondem a genes de amostras do vírus A(H1N1)pdm09. O terceiro capítulo reporta o sequenciamento completo dos genomas de 8 amostras de vírus influenza identificados nas populações de suínos amostradas. Foram identificados dois subtipos virais de origem humana (H1N2 e H3N2), além do vírus A(H1N1)pdm09. Os subtipos de origem humana possuem os genes HAe NA similares a vírus sazonais de humanos e os genes internos são estreitamente relacionados com o vírus A(H1N1)pdm09.

Influenza A virus (IAV) is a zoonotic agent of great relevance to human and animal health. Swine influenza was first recognized clinically in pigs in the Midwestern U.S., in 1918, coinciding with the human influenza pandemic.Since that time swine influenza has remained of importance to the swine industry throughout the world. The great genetic variability of influenza viruses is caused by two main genetic mechanisms: point mutations (antigenic drift) and gene reassortment (antigenic shift). Influenza is endemic in pigs in many countries and the emergence of new viruses has been challenging its control and diagnostics. Influenza virus (swIAV) infection in Brazilian swine population is not well characterized, and little evidence existed of swIAV circulation before 2009, especially in Rio Grande do Sul State, which hosts one of the largest swine populations in Brazil. Thus, this study aimed to investigate the occurrence of IAV in commercial swine herds in the state of Rio Grande do Sul, Brazil, between 2013-2014 and to know the types and subtypes of swine influenza viruses that are circulating in these herd. The first chapter of this study reports the clinical, pathological and virological aspects of the occurrence of swine influenza and related co-infections in six pig properties of the Taquari Valley region. In this study were analyzed nasal swabs collected from 66 animals and six lung tissue samples from pigs showing clinical signs of respiratory disease. IAV detection was performed by PCR screening and confirmed by virus isolation in MDCK cells and hemagglutination (HA). Influenza A subtyping was performed by real-time reverse transcription PCR (rRT-PCR) to detect the 2009 H1N1pandemic A(H1N1)pdm09; other swIAV subtypes were identifieded by multiplex RT-PCR. Bacterial infections were identified through detection of bacterial genomes by PCR, only in lung samples. Influenza A was detected by screening PCR in 46/66 swab samples and from 5/6 lungs. Virus was recovered from pigs of the six herds. Subtype A(H1N1)pdm09 was detected in 4/6 herds and H1N2 in the other 2/6 herds. In lung tissues, further agents involved in porcine respiratory disease complex were detected in all cases; Pasteurella multocida was identified in 5/6 samples and Mycoplasma hyopneumoniae in 3/6. Actinobacillus pleuropneumoniae (1/6), Haemophilus parasuis (1/6) and PCV2 (1/6) were also detected. The aim ofthe second chapter was to sequence the whole-genome of a novel human-like H1N2 swine influenza virus. Whole-genome sequences were generated by RT-PCR. Amplicons were purified followed by sequencing in the MiSeq sequencing platform (Illumina). Phylogenetic analyses revealed that the HA and NA genes clustered with influenza viruses of human lineage, whereas the internal genes (PB1, PB2, PA, NP, M andNS) clustered with the A(H1N1)pdm09. The third chapter reports the geneticsequencing of the full genomes of eight swine influenza viruses circulating in the sampled pig population. Two swine human-like subtypes (H1N2 and H3N2) and the A(H1N1)pdm09 virus were identified. The human-like subtypes have the HA and NA genes similar to the human seasonal strains and the internal genes are closely related to the virus A(H1N1)pdm09.