Detecção da hipersensibilidade do tipo tardia (HTT) à maleína produzida no Brasil em equinos sensibilizados em Alagoas

O mormo é uma enfermidade infecto-contagiosa causada por uma bactéria denominada Burkholderia mallei, um bacilo Gram-negativo, aeróbio, imóvel e intracelular facultativo. Acomete principalmente os equinos, asininos e muares, e o homem é hospedeiro acidental, sendo, geralmente, uma doença ocupacional e fatal. Geralmente, a maleína e os testes sorológicos, são utilizados no diagnóstico da doença. A maleinização é similar à tuberculização, sendo a maleína uma glicoproteína extraída a partir de culturas de B. mallei que é utilizada como antígeno no teste intradermo-palpebral em equídeos. Objetivou-se detectar a Hipersensibilidade do Tipo Tardia (HTT) à PPD-maleína produzida no Brasil em equinos sensibilizados em uma propriedade no estado de Alagoas.

Teste intradérmico com proteínas recombinantes de Mycobacterium bovis como antígenos em Cavia porcellus / Skin test with recombinant protein of Mycobacterium bovis as antigen in Cavia porcellus

O teste intradérmico para o diagnóstico da tuberculose bovina utiliza derivados proteicos purificados (PPD) de Mycobacterium bovis que são capazes de induzir reações de hipersensibilidade em animais infectados. No entanto, apresenta baixa especificidade devido à ocorrência de reações cruzadas com outras micobactérias. Neste sentido, o objetivo desse trabalho foi produzir proteínas recombinantes (ESAT-6, PE13, PE5 e ESX-1) de Mycobacterium bovis e avaliá-las como antígenos em teste intradérmico utilizando Cavia porcellus como modelo, e verificar se as condições empregadas na purificação (nativa ou desnaturante) interferem no desempenho antigênico dessas proteínas. As proteínas foram testadas em Cavia porcellus previamente sensibilizados com cepa M. bovis AN5 inativada, individualmente (160 µg) ou combinadas na forma de um coquetel (40 µg cada). O coquetel de proteínas induziu reações de hipersensibilidade nos animais sensibilizados significativamente superiores (p=0,002) as observadas nos animais não sensibilizados, possibilitando diferenciação. No entanto, as proteínas isoladamente não foram capazes de promover essa diferenciação. As condições de solubilização e purificação influenciaram o desempenho antigênico da proteína ESAT-6, pois, quando produzida em condição desnaturante desencadeou reações inespecíficas nos animais não sensibilizados, enquanto que aquela produzida em condições nativas e aplicada em concentrações de 6, 12, 24 e 48µg induziu reações significativas apenas nos animais sensibilizados, confirmando o seu potencial como antígeno.(AU)

The intradermal skin test for diagnosis of bovine tuberculosis has been used the purified protein derivative (PPD) of Mycobacterium bovis, that is able to induce a hypersensitivity reaction in infected animals. However, shows low specificity due to the occurrence of cross reactions with other mycobacteria. Thus, the aim of this study was to produce recombinant proteins (ESAT-6, PE13, PE5 and ESX-1) of Mycobacterium bovis and assess them as antigens in skin test using guinea pigs (Cavia porcellus) as a model, and check if the conditions employed in the purification (native or denaturing condition) interfere in the antigenic performance of these proteins. The proteins were tested in guinea pigs previously sensitized with inactivated M. bovis strain AN5, individually (160 µg/µl), or as a mixed cocktail (40 µg each). The cocktail of proteins induced hypersensitivity reactions in sensitized animals significantly (p=0.002) higher than those observed in non-sensitized animals, allowing differentiation. On the other hand, the proteins individually were not able to promote this differentiation. The conditions of solubilization and purification influenced the antigenic performance of the protein ESAT-6, since, when produced in denaturing condition triggered nonspecific reaction in non-sensitized animals. Whereas when produced under native conditions and used at concentrations (6, 12, 24 and 48µg/µl) induced a significant response only in sensitized animals, confirming its potential as antigen.(AU)

Produção e purificação parcial de PPD-maleína para diagnóstico do mormo em equídeos / Partially purified malleo-proteins production for glanders diagnosis in Equidae

Objetivou-se com este estudo produzir e purificar parcialmente a PPD-maleína a partir de amostras de Burkholderia mallei isoladas de equídeos no Brasil com potencial para uso no diagnóstico do mormo. As linhagens de B. mallei fenotipicamente caracterizadas e de virulência comprovada foram inoculadas em caldo Dorset-Henley para crescer e metabolizar. Em seguida, as proteínas foram separadas por precipitação com ácido tricloroacético e precipitadas com sulfato de amônia. As PPDs-maleínas foram concentradas em 1,0mg/mL e na avaliação realizada em cobaios foi eficaz no desenvolvimento da hipersensibilidade do tipo tardia e consequentemente na identificação de animais verdadeiro positivos e exclusão dos verdadeiro negativos, sendo uma possibilidade em potencial para utilização no diagnóstico do mormo.(AU)

The objective of this study was to produce and partially purify Malleo-protein from Burkholderia mallei samples isolates from Equidae in Brazil with potential for use in the diagnosis of glanders. The strain B. mallei phenotypically characterized and proven virulent was inoculated into broth Dorset-Henley to grow and metabolize. The proteins were separated by trichloroacetic acid precipitation and amonium sulfate precipitation. The PPD mallein was concentrated 1.0mg/mL and biologically tested in guinea pigs. It was effective in the development of delayed-type hypersensitivity and consequently to identify true-positive animals and to exclude of true negatives. There is the possibility for potential use in the glanders diagnosis in Equidae.(AU)

Avaliação da região corpórea e dose da tuberculina no diagnóstico imunoalérgico em ovinos (Ovis aries) experimentalmente sensibilizados com inóculo inativado de Mycobacterium bovis

This study was aimed to investigate the best area for application of bovine purified protein derivative (PPD) for the imunoallergic test for tuberculosis, in 15 sheep (Ovis aries) experimentally sensitized with Mycobacterium bovis AN5. Based on the best response obtained in the previous phase, the dose of bovine PPD to be applied was evaluated. After 60 days of sensitization, the bovine PPD was applied at 5 distinct body regions to measure the skinfold thickness and reaction, at moments before (0h) and after injection (12h, 24h, 48h, 72h and 96h), with skinfold calipers. Statistical analysis showed significance for the best site of application: the dorsal thoracic region, followed by the middle cervical and dorsal abdominal, at 48 and 72 hours after injection of bovine PPD. The thoracic region was chosen as the best site for application. It is recommended that the reading of the tuberculin response in sheep should be made 72h after the PPD application, using a dose of 0.1 mL.

O objetivo foi a investigação do local de aplicação do derivado proteico purificado (PPD) bovino, empregado no teste imunoalérgico da tuberculose, em 15 ovinos (Ovis aries) experimentalmente sensibilizados com Mycobacterium bovis AN5. A partir da melhor resposta obtida na fase de identificação da região corpórea, avaliou-se a dose de PPD bovino a ser aplicada. Decorridos 60 dias da sensibilização, o PPD bovino foi aplicado em cinco distintas regiões corpóreas (cervical média, torácica dorsal, abdominal dorsal, prega da cauda e face medial proximal do membro pélvico - face interna da coxa) com a mensuração da espessura da dobra de pele e da reação através de cutímetro de mola, nos momentos antes (0h) e após aplicação (12h, 24h, 48h, 72h e 96h). A análise dos resultados obtidos foi significante, em ordem decrescente, para as regiões: torácica dorsal, cervical média e abdominal dorsal às 48 e 72h após aplicação do PPD bovino. Elegeu-se a região torácica dorsal como melhor local de aplicação. Recomenda-se que a leitura da reação tuberculínica em ovinos deve ser efetuada às 72h da aplicação do PPD, utilizando-se a dose de 0,1 mL.

Avaliação da região corpórea e dose da tuberculina no diagnóstico imunoalérgico em ovinos (Ovis aries) experimentalmente sensibilizados com inóculo inativado de Mycobacterium bovis / Evaluation of the body region and tuberculin dose in the diagnosis of the allergic response in sheep (Ovis aries) experimentally sensitized with inactivated inoculum from Mycobacterium bovis

O objetivo foi a investigação do local de aplicação do derivado proteico purificado (PPD) bovino, empregado no teste imunoalérgico da tuberculose, em 15 ovinos (Ovis aries) experimentalmente sensibilizados com Mycobacterium bovis AN5. A partir da melhor resposta obtida na fase de identificação da região corpórea, avaliou-se a dose de PPD bovino a ser aplicada. Decorridos 60 dias da sensibilização, o PPD bovino foi aplicado em cinco distintas regiões corpóreas (cervical média, torácica dorsal, abdominal dorsal, prega da cauda e face medial proximal do membro pélvico – face interna da coxa) com a mensuração da espessura da dobra de pele e da reação através de cutímetro de mola, nos momentos antes (0h) e após aplicação (12h, 24h, 48h, 72h e 96h). A análise dos resultados obtidos foi significante, em ordem decrescente, para as regiões: torácica dorsal, cervical média e abdominal dorsal às 48 e 72h após aplicação do PPD bovino. Elegeu-se a região torácica dorsal como melhor local de aplicação. Recomenda-se que a leitura da reação tuberculínica em ovinos deve ser efetuada às 72h da aplicação do PPD, utilizando-se a dose de 0,1 mL.

EVALUATION OF THE BODY REGION AND TUBERCULIN DOSE IN THE DIAGNOSIS OF THE ALLERGIC RESPONSE IN SHEEP (OVIS ARIES) EXPERIMENTALLY SENSITIZED WITH INACTIVATED INOCULUM FROM Mycobacterium BOVIS. This study was aimed to investigate the best area for application of bovine purified protein derivative (PPD) for the imunoallergic test for tuberculosis, in 15 sheep (Ovis aries) experimentally sensitized with Mycobacterium bovis AN5. Based on the best response obtained in the previous phase, the dose of bovine PPD to be applied was evaluated. After 60 days of sensitization, the bovine PPD was applied at 5 distinct body regions to measure the skinfold thickness and reaction, at moments before (0h) and after injection (12h, 24h, 48h, 72h and 96h), with skinfold calipers. Statistical analysis showed significance for the best site of application: the dorsal thoracic region, followed by the middle cervical and dorsal abdominal, at 48 and 72 hours after injection of bovine PPD. The thoracic region was chosen as the best site for application. It is recommended that the reading of the tuberculin response in sheep should be made 72h after the PPD application, using a dose of 0.1 mL.

Avaliação da região corpórea e dose da tuberculina no diagnóstico imunoalérgico em ovinos (Ovis aries) experimentalmente sensibilizados com inóculo inativado de Mycobacterium bovis / Evaluation of the body region and tuberculin dose in the diagnosis of the allergic response in sheep (Ovis aries) experimentally sensitized with inactivated inoculum from Mycobacterium bovis

O objetivo foi a investigação do local de aplicação do derivado proteico purificado (PPD) bovino, empregado no teste imunoalérgico da tuberculose, em 15 ovinos (Ovis aries) experimentalmente sensibilizados com Mycobacterium bovis AN5. A partir da melhor resposta obtida na fase de identificação da região corpórea, avaliou-se a dose de PPD bovino a ser aplicada. Decorridos 60 dias da sensibilização, o PPD bovino foi aplicado em cinco distintas regiões corpóreas (cervical média, torácica dorsal, abdominal dorsal, prega da cauda e face medial proximal do membro pélvico face interna da coxa) com a mensuração da espessura da dobra de pele e da reação através de cutímetro de mola, nos momentos antes (0h) e após aplicação (12h, 24h, 48h, 72h e 96h). A análise dos resultados obtidos foi significante, em ordem decrescente, para as regiões: torácica dorsal, cervical média e abdominal dorsal às 48 e 72h após aplicação do PPD bovino. Elegeu-se a região torácica dorsal como melhor local de aplicação. Recomenda-se que a leitura da reação tuberculínica em ovinos deve ser efetuada às 72h da aplicação do PPD, utilizando-se a dose de 0,1 mL. (AU)

EVALUATION OF THE BODY REGION AND TUBERCULIN DOSE IN THE DIAGNOSIS OF THE ALLERGIC RESPONSE IN SHEEP (OVIS ARIES) EXPERIMENTALLY SENSITIZED WITH INACTIVATED INOCULUM FROM Mycobacterium BOVIS. This study was aimed to investigate the best area for application of bovine purified protein derivative (PPD) for the imunoallergic test for tuberculosis, in 15 sheep (Ovis aries) experimentally sensitized with Mycobacterium bovis AN5. Based on the best response obtained in the previous phase, the dose of bovine PPD to be applied was evaluated. After 60 days of sensitization, the bovine PPD was applied at 5 distinct body regions to measure the skinfold thickness and reaction, at moments before (0h) and after injection (12h, 24h, 48h, 72h and 96h), with skinfold calipers. Statistical analysis showed significance for the best site of application: the dorsal thoracic region, followed by the middle cervical and dorsal abdominal, at 48 and 72 hours after injection of bovine PPD. The thoracic region was chosen as the best site for application. It is recommended that the reading of the tuberculin response in sheep should be made 72h after the PPD application, using a dose of 0.1 mL.(AU)

RESPOSTA À TUBERCULINIZAÇÃO EM BOVINOS SENSIBILIZADOS COM INÓCULOS INATIVADOS DE Mycobacterium avium E DE Mycobacterium bovis

A tuberculose causada pelo Mycobacterium bovis é uma importante doença dos bovinos e constitui um grande problema de saúde animal, podendo também atingir humanos. Para o diagnóstico da infecção, e para desencadear as medidas sanitárias decorrentes desse diagnóstico, o Programa Nacional de Controle e Erradicação de Brucelose e Tuberculose (PNCEBT) estabelece a utilização de testes intradérmicos de tuberculinização. O objetivo deste estudo foi avaliar as respostas à tuberculina (PPD) aviária e à tuberculina bovina apresentadas por animais sensibilizados com inóculos inativados de M. bovis e de M. avium, e comparar os resultados do teste da prega caudal (TPC), do teste cervical simples (TCS) e do teste cervical comparativo (TCC) para diagnóstico da tuberculose bovina nos animais sensibilizados e em animais não sensibilizados. Os resultados mostraram que: a repetição dos testes não influiu na proporção de resultados positivos; houve animais sensibilizados com M. bovis que apresentaram reação até 500 dias após a sensibilização; em animais sensibilizados com M. avium, a especificidade do TCC foi superior à do TCS e à do TPC, e o TCC mostrou-se efetivo para discriminar reações induzidas pelo inóculo desse microrganismo; em animais sensibilizados com M. bovis, o TCC apresentou menor sensibilidade do que os outros dois testes; o ponto de corte do TCS e do TCC com melhor combinação de sensibilidade e especificidade foi inferior ao ponto adotado pelo PNCEBT para diagnóstico em animais naturalmente infectados; o TCS apresentou boa concordância com os outros dois testes, mas a concordância entre o TCC e o TPC foi apenas regular; as frequências das repostas às tuberculinas não apresentaram distribuição gaussiana, a não ser em alguns períodos pós-sensibilização ou então após transformação radicial ou logarítmica dos dados.

Tuberculosis caused by Mycobacterium bovis is an important disease in cattle e a great problem for animal health that can reach humans. For the diagnosis of the infection and the consequent sanitary measures, the National Program for Control and Eradication of Brucellosis and Tuberculosis (PNCEBT) establish the use of intradermal tuberculin tests. The aim of this study was to analyze the response to the avian and bovine tuberculin (PPD) developed by cattle sensitized with inactivated inoculum of M. avium and M. bovis. Another aim was to compare the results of the caudal fold test (CFT), the comparative cervical test (CCT), and the simple cervical test (SCT) for tuberculosis diagnosis in the sensitize animals and in animals that have not been sensitized. Repetition of the tests did not influence the proportion of positive results. There were animals sensitized with M. bovis showing reaction up to more than 500 days post sensitization. In animals sensitized with M. avium, the specificity of the CCT was higher than that of CFT and SCT, and CCT was able to discriminate the unspecific reaction induced by M. avium inoculum. In animals sensitized with M. bovis, CCT had lower sensitivity than the other two tests. The SCT and CCT cut-off with the best combination of sensitivity and specificity was lower than that adopted by the PNCEBT for the tuberculosis diagnosis in naturally infected animals. SCT hat good agreement with the other two tests, but the agreement between CFT and CCT was only moderate. The frequency of the responses to tuberculin did not show Gaussian distribution, but in some post sensitization periods or after square root or logarithmic transformation of the data.

Estudo da resposta alérgica à tuberculina em ovinos (Ovis aries) experimentalmente sensibilizados, conforme a região corpórea e a dose de PPD utilizada / Study of the allergic response to tuberculin in sheep (Ovis aries) experimentally sensitized, according to body region and PPD\'s dose used

Diante da importância do tema, a pobreza de dados nacionais sobre a tuberculose em ovinos e a necessidade de aprofundamento de conhecimento sobre a aplicação das técnicas de diagnóstico pertinentes ao combate e erradicação da tuberculose animal, foi delineado o presente estudo. Esta pesquisa visou avaliar a melhor região corpórea e dose de derivado protéico purificado (PPD) bovino a ser aplicada em ovinos (Ovis aries) experimentalmente sensibilizados comMycobacterium bovis AN5 para diagnóstico de tuberculose. Utilizou-se 15 ovinos clinicamente sadios e negativos à prova de Tuberculina Cervical Comparativa (TCC), segundo os padrões estabelecidos por Cyrillo et al. (2007), em duas fases: primeira etapa avaliação do melhor local de aplicação do PPD bovino em ovinos; segunda etapa a partir do melhor local de aplicação, a dose de PPD bovino a ser aplicada. Imediatamente após a leitura do TCC de triagem inicial, os ovinos foram sensibilizados com o inóculo inativado de M. bovis estirpe AN5, e após um período de dessensibilização de 60 dias entre aplicações, realizou-se a avaliação de cinco regiões corpóreas, com a mensuração da espessura da dobra de pele efetuada nos momentos antes (0h) e após aplicação (12h, 24h, 48h, 72h e 96 horas). As análises estatísticas mostraram uma significância para os melhores locais de aplicação, a saber: regiões torácica dorsal, seguida da cervical média e abdominal dorsal em 48 e 72 horas após aplicação de PPD bovino. Eleita a região torácica dorsal (p=0,94) como o melhor local de aplicação, os resultados da reação frente às diferentes doses (0,05 mL; 0,1 mL e 0,2 mL), expressos em espessura da dobra de pele, indicaram que não houve diferenças significantes entre as doses e momentos de leitura, sendo recomendada a aplicação de 0,1 mL de PPD bovino e leitura com 72 horas após aplicação

Given the importance of the topic, the paucity by National data of tuberculosis in sheep, and the need to deepen knowledge about diagnostic techniques application relevant to combat and eradication of animal tuberculosis, the present study was designed. This study aimed to evaluate the best body region and dose of bovine purified protein derivative (PPD b) to be used in sheep (Ovis aries) experimentally sensitized to Mycobacterium bovis AN5 to tuberculosis diagnoses. It was used 15 clinically healthy sheep and negative to the Comparative Cervical skin Test (CCT), according to standards established by Cyrillo et al. (2007), in two phases: first part - assessment of the best application area of bovine PPD in sheep; second part - from the best sites for the application, the best dose of bovine PPD to be applied. Immediately after reading the initial screening CCT, the animals were sensitized with the inoculation of inactivated M. bovis strain AN5, and after a 60 days period of desensitization between applications, was carried out an assessment of five body regions, the skin fold thickness was measured before (0h) and after injection (12h, 24h, 48h, 72h and 96 hours). Statistical analysis showed significance to the best site of application: dorsal thoracic region, followed by middle cervical and dorsal abdominal, according to 48 and 72 hours after injection of bovine PPD. Chosen the thoracic region (p = 0.94) as the best site for the application, results of reaction from different doses (0.05 mL, 0.1 mL, and 0.2 mL), expressed as skin fold thickness showed no significant differences between doses and times of measurement, it was recommended the application of 0.1 mL of bovine PPD and measure at time 72 hours after injection

Estudo da resposta alérgica à tuberculina em caprinos (Capra hircus) experimentalmente sensibilizados, em diferentes regiões corpóreas / Study of the answer allergic to the tuberculin in caprine (Capra hircus) experimentally sensetized, in different corporal regions

Esta pesquisa visou determinar a resposta alérgica à aplicação do PPD bovino, em diferentes regiões da superfície corpórea de caprinos (Cabra hircus). Para tanto, foram utilizados caprinos adultos, clinicamente sadios e sensibilizados previamente com micobactéria bovina (M. bovis AN5). Para avaliar o local de melhor reação, foram usados 20 animais sensibilizados, distribuídos ao acaso, dos quais 14 animais para constituir o grupo experimental, que recebeu o PPD bovino, e seis animais para o grupo controle, que recebeu solução fisiológica, respectivamente em diferentes regiões do corpo. Os caprinos foram monitorados através de exame clínico com leituras da reação ao PPD realizadas nos seguintes momentos: 24h antes, 0h, 24h, 48h, 72h e 96h após a tuberculinização. Os resultados analisados estatisticamente mostraram uma significância para os melhores locais de aplicação, a saber: as regiões abdominal e torácica dorsais e cervical caudal tanto em 24, quanto em 48 horas e 72 horas pós-tuberculinização. A prega da cauda apresentou resultados menos evidentes que nos mencionados momentos, tendo as regiões torácica e a abdominal ventrais os resultados com menor magnitude de reação

This study aimed to determine the allergic response to the application of PPD cattle in different regions of the body surface of goats (Goat hircus). For both, were used adult goats, clinically healthy and aware beforehand with bovine mycobacteria (M. bovis AN5). To assess the place of better reaction, 20 animals were used aware, distributed at random, including 14 animals to be the experimental group, which received the PPD veal, and six animal control to group that received saline, respectively in different regions of the body. The goats were monitored by clinical examination with readings of the reaction to the PPD conducted in the following times: 24 hours before, 0h, 24h, 48h, 72h and 96h after tuberculinization. The results showed a statistically analysed significance to the best sites of application, namely: the abdominal and chest regions dorsal and cervical flow in both 24, as in 48 hours and 72 hours after tuberculinization. The results showed the tail fold less evident in the mentioned moments, and the regions thoracic and abdominal ventral results with smaller magnitude of reaction

Detecção da hipersensibilidade do tipo tardia (HTT) à maleína produzida no Brasil em equinos sensibilizados em Alagoas

O mormo é uma enfermidade infecto-contagiosa causada por uma bactéria denominada Burkholderia mallei, um bacilo Gram-negativo, aeróbio, imóvel e intracelular facultativo. Acomete principalmente os equinos, asininos e muares, e o homem é hospedeiro acidental, sendo, geralmente, uma doença ocupacional e fatal. Geralmente, a maleína e os testes sorológicos, são utilizados no diagnóstico da doença. A maleinização é similar à tuberculização, sendo a maleína uma glicoproteína extraída a partir de culturas de B. mallei que é utilizada como antígeno no teste intradermo-palpebral em equídeos. Objetivou-se detectar a Hipersensibilidade do Tipo Tardia (HTT) à PPD-maleína produzida no Brasil em equinos sensibilizados em uma propriedade no estado de Alagoas.

Padronização do alergoteste da tuberculina em ovinos (Ovis aries) / Standardization of tuberculin skin reaction in sheep (Ovis aries)

A inexistência de padrões nacionais para a realização e interpretação da prova de tuberculina em ovinos motivou o presente trabalho, pois apesar da tuberculose não estar incluída em Plano Nacional de Controle e Erradicação em pequenos ruminantes, estabelece a legislação vigente que é obrigatório o sacrifício de animais com essa zoonose, sendo o diagnóstico firmado nesses animais principalmente através do alergoteste tuberculínico. Assim, esta pesquisa visou além de avaliar reações clínicas provocadas pela resposta imuno-alérgica intradérmica à tuberculina, estabelecer valores de referência para a interpretação da reação em ovinos experimentalmente inoculados com antígenos de cepas padrões de Mycobacterium bovis e Mycobacterium avium. Utilizou-se 30 ovinos, clinicamente sadios, negativos à prova de tuberculina cervical comparativa (TCC), segundo critérios estabelecidos pelo Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento (MAPA) através do Plano Nacional de Controle e Erradicação da Brucelose e Tuberculose (PNCEBT) em bovinos e bubalinos, distribuídos por três grupos de 10 animais cada, a saber: A - sensibilizados com M. avium; B - sensibilizados com M. bovis e C (Controle) - que receberam injeção de solução fisiológica. Os ovinos foram monitorados através de exames físicos e complementares semanais. Após 45 dias da sensibilização, realizou-se a prova de TCC com reação medida pela variação da espessura da pele com cutímetro de mola, nos seguintes momentos: antes da aplicação das tuberculinas (PPDs); 12h, 24h, 48h, 72h e 96h após a aplicação das mesmas. Em relação à reação ao PPD bovino, no teste cervical simples, lido às 72 horas (± 6 horas) pós-tuberculinização (p. t.), considerou-se uma reação como positiva, quando o aumento da espessura da pele foi igual ou maior que 2,49 mm; como inconclusiva, com as medidas de aumento entre 1,00 e 2,48 mm, e como reação negativa, aumentos da espessura da pele inferiores a 1,00 mm, sendo estes valores propostos como padrão para o teste intradérmico simples na região cervical. A análise dos resultados da leitura do teste cervical comparativo, realizada às 72 horas (± 6 horas) p. t., permitiu concluir-se que o animal poderá ser considerado com resposta: positiva, quando a reação ao PPD bovino superar aquela ao aviário em pelo menos 2,00 mm; inconclusiva, quando a reação ao PPD bovino for maior que aquela ao aviário, com diferença entre 1,00 e 1,99 mm, e negativa quando a reação bovina for menor que a aviária ou > em até 0,99 mm. Na avaliação histológica das respostas tuberculínicas homólogas, 96 horas após a injeção do PPD, constatou-se a presença de moderado a intenso infiltrado inflamatória, constituído, preferencialmente, por células mononucleares

The inexistence of national patterns for the realization and interpretation of tuberculin test in sheep motivated this research. Although tuberculosis is not included in the National Plan for the Control and Eradication in small ruminants, the current legislation has made it mandatory the sacrifice of animals with this zoonosis, where diagnosis is confirmed principally by the usage of the tuberculin skin reaction. Therefore, this study evaluated the clinical manifestations induced by the intradermic immune-allergic response to tuberculin, and established the reference values for the interpretation of this reaction in sheep experimentally inoculated with antigens of recognized strains of Mycobacterium bovis and Mycobacterium avium. Thirty healthy sheep negative to the Comparative Cervical Tuberculin Test (CCT) based on criteria established by the Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento (MAPA) in the National Plan for the Control and Eradication of Brucellosis and Tuberculosis in cattle and buffalos were used during this experiment. Animals were separated in three groups: A) sensitized with M. avium, n=10; B) sensitized with M. bovis, n=10; and C) control, n=10, which were injected with saline solution. Sheep were monitored by weekly clinical and complementary exams. After 45 days of inoculation the CCT was evaluated by the variation of dermal thickness determined by a pakimeter realized in the following moments: before the administration of tuberculin (PPD); and 12, 48, 72, and 96 hours after administration of inoculation. Relative to the bovine PPD, the simple cervical test, observed at 72 hours (± 6 hours) post-tuberculinization (p.t.) was considered as: positive, when skin fold thickness was equal or greater than 2.49 mm; inconclusive, skin fold thickness between 1 and 2,48 mm; and negative, when thickness was lower than 1 mm; these values being proposed as reference values for the simple intradermic cervical test. Analyses of the results of the comparative cervical tests realized 72 hr (± 6 hr) p.t. concluded that the animal was considered as: positive, when the bovine PPD reaction was greater than that of the avian by at least 2 mm; and negative, when the bovine reaction was less than the avian or > by 0.99 mm. Histological evaluation of the homologous tuberculin response 96 hr after PPD injection, revealed a moderate to intense inflammatory cellular influx, constituted preferentially, of mononuclear cells