Análise ultraestrutural do colágeno de feridas cutâneas de coelhos tratadas com plasma rico em plaquetas de equino / Ultrastructural analysis of the collagen of rabbit skin wounds treated with platelet-rich equine plasma

O colágeno é sintetizado e segregado no espaço extracelular e organizados em fibrilas estriadas de acordo com o tipo de tecido. Utilizaram-se 24 coelhos brancos da raça Nova Zelândia, com idade de 12 meses e com 3,0kg de peso corporal, para avaliar a porcentagem de colágeno das feridas cutâneas tratadas com plasma rico em plaquetas de equino e pomada contendo gentamicina, sulfanilamida, sulfadiazina, ureia e vitamina A. Os animais foram separados em quatro grupos de igual número e submetidos à remoção de pele na região das linhas médias dorsal torácica (feridas tratadas) e lombar (feridas controle). As feridas torácicas foram tratadas com plasma rico em plaqueta de equino e pomada contendo gentamicina, sulfanilamida, sulfadiazina, ureia e vitamina A, e as do grupo controle somente com a pomada. Dos animais do grupo I, foi coletado tecido cutâneo, para a avaliação histológica e a ultraestrutural, com três dias de pós-operatório; dos animais do grupo II, com sete dias; do grupo III, com 14 dias; e do grupo IV, com 21 dias. Decorrido o período de avaliação de cada grupo, foi coletado fragmento de pele para avaliação da porcentagem de colágeno, bem como do diâmetro e da densidade da fibrila de colágeno por microscopia eletrônica de transmissão. O tratamento com PRP de equino associado à aplicação tópica da pomada mostrou-se eficaz na maturação das fibrilas colágenas e na antecipação do processo cicatricial.(AU)

Collagen is synthesized and secreted into the extracellular space and organized into striated fibrils according to the tissue type. This study evaluated the concentration of collagen in rabbit skin wounds treated with equine platelet-rich plasma (PRP) and ointment containing gentamicin, sulfanilamide, sulfadiazine, urea, and vitamin A. Twenty-four New Zealand white rabbits aged 2 to 12 months and weighing 3.0kg were included. The animals were allocated equally into four groups and the skin was removed from the thoracic dorsal midline (treated wound) and lumbar (control wound) regions. The thoracic wounds were treated with equine PRP and ointment containing gentamicin, sulfanilamide, sulfadiazine, urea, and vitamin A, and the control group was treated with the ointment alone. For histological and ultrastructural assessment, cutaneous tissue was collected on postoperative days 3 (group I), 7 (group II), 14 (group III), and 21 (group IV). After the evaluation period, in each group, a skin fragment was collected for analysis of the collagen concentration, as well as the collagen fibril diameter and density by transmission electron microscopy. The results indicated that treatment with equine PRP combined with topical application of the ointment was effective in facilitating the maturation of collagen fibrils and the wound healing process.(AU)

Análise ultraestrutural do colágeno de feridas cutâneas de coelhos tratadas com plasma rico em plaquetas de equino / Ultrastructural analysis of the collagen of rabbit skin wounds treated with platelet-rich equine plasma

O colágeno é sintetizado e segregado no espaço extracelular e organizados em fibrilas estriadas de acordo com o tipo de tecido. Utilizaram-se 24 coelhos brancos da raça Nova Zelândia, com idade de 12 meses e com 3,0kg de peso corporal, para avaliar a porcentagem de colágeno das feridas cutâneas tratadas com plasma rico em plaquetas de equino e pomada contendo gentamicina, sulfanilamida, sulfadiazina, ureia e vitamina A. Os animais foram separados em quatro grupos de igual número e submetidos à remoção de pele na região das linhas médias dorsal torácica (feridas tratadas) e lombar (feridas controle). As feridas torácicas foram tratadas com plasma rico em plaqueta de equino e pomada contendo gentamicina, sulfanilamida, sulfadiazina, ureia e vitamina A, e as do grupo controle somente com a pomada. Dos animais do grupo I, foi coletado tecido cutâneo, para a avaliação histológica e a ultraestrutural, com três dias de pós-operatório; dos animais do grupo II, com sete dias; do grupo III, com 14 dias; e do grupo IV, com 21 dias. Decorrido o período de avaliação de cada grupo, foi coletado fragmento de pele para avaliação da porcentagem de colágeno, bem como do diâmetro e da densidade da fibrila de colágeno por microscopia eletrônica de transmissão. O tratamento com PRP de equino associado à aplicação tópica da pomada mostrou-se eficaz na maturação das fibrilas colágenas e na antecipação do processo cicatricial.(AU)

Collagen is synthesized and secreted into the extracellular space and organized into striated fibrils according to the tissue type. This study evaluated the concentration of collagen in rabbit skin wounds treated with equine platelet-rich plasma (PRP) and ointment containing gentamicin, sulfanilamide, sulfadiazine, urea, and vitamin A. Twenty-four New Zealand white rabbits aged 2 to 12 months and weighing 3.0kg were included. The animals were allocated equally into four groups and the skin was removed from the thoracic dorsal midline (treated wound) and lumbar (control wound) regions. The thoracic wounds were treated with equine PRP and ointment containing gentamicin, sulfanilamide, sulfadiazine, urea, and vitamin A, and the control group was treated with the ointment alone. For histological and ultrastructural assessment, cutaneous tissue was collected on postoperative days 3 (group I), 7 (group II), 14 (group III), and 21 (group IV). After the evaluation period, in each group, a skin fragment was collected for analysis of the collagen concentration, as well as the collagen fibril diameter and density by transmission electron microscopy. The results indicated that treatment with equine PRP combined with topical application of the ointment was effective in facilitating the maturation of collagen fibrils and the wound healing process.(AU)

New approaches to studying morphological details of intramolluscan stages of Angiostrongylus vasorum / Novas abordagens para estudo morfológico dos estágios intramoluscos de Angiostrongylus vasorum

Angiostrongylus vasorum is a pulmonary artery parasite of domestic and wild canid. On molluscs, intermediate host, first stage larvae (L1) are found after the first day of infection, in the 8th L2 and in the 30 th L3. It was evaluated L1, L2 and L3 recovered by Baermann technique from Achatina fulica infected with 1000 L1. Fifty larvae/stage were incubated with antibodies anti-β-tubulin, anti-α-tubulin, anti- α-actin, anti-β-actin and anti-collagen, and then with Alexa 633. Fifty larvae/stage were observed with picrosirius red and Oil Red O. It was also observed in the anterior region of L1 the beginning of the chitinous stems development, in the initial portion of the intestine and genital primordium. In L2 anterior region, the papillae, chitinous canes juxtaposed to the mouth and intestines bigger than L1. The L3 musculature is well defined, next to the chitinous stems, there are two round distally arranged from each other. It was observed the whole extension of the intestine genital primordium and intense cellularity in the L3 distal portion. With the picrosirius red the L1, L2 and L3 musculature could be observed, as the nerve ganglia on L3. Oil Red O revealed that L1, L2 and L3 store energy on lipid droplets.(AU)

Angiostrongylus vasorum é um parasito de artérias pulmonares dos canídeos domésticos e silvestres. Nos moluscos, hospedeiros intermediários, encontram-se no primeiro dia após a infecção, larvas de primeiro estágio (L1), ao 8° L2 e ao 30° L3. Avaliou-se L1, L2 e L3 recuperadas pela técnica de Baermann de Achatina fulica infectada com 1.000 L1. Incubou-se 50 larvas/estádio com anticorpos anti-β-tubulina, anti-α-tubulina, anti-β-actina e anti-colágeno e, em seguida, com anticorpo Alexa 633. Observaram-se também 50 larvas/estádio com picrosirius red e Oil Red O, na região anterior da L1, o início do desenvolvimento de hastes quitinosas, a porção inicial do intestino e o primórdio genital. Na região anterior de L2, papilas, bastões quitinosos justapostos à boca e ao intestino maior que em L1. A musculatura de L3 é bem desenvolvida, próximo às hastes quitinosas, há duas estruturas redondas dispostas distalmente uma da outra. Observaram-se também toda a extensão do intestino, o primórdio genital e a intensa celularidade na porção distal da L3. Com o picrosirius red observou-se a musculatura de L1, L2 e L3, assim como, gânglios nervosos na L3. Oil Red O revelou que L1, L2 e L3 armazenam energia em gotículas lipídicas.(AU)

Picrosirius red and Masson’s Trichrome staining techniques as tools for detection of collagen fibers in the skin of dogs with endocrine dermatopathologies / Picrosirius red e Tricrômico de Masson como ferramentas para detecção de fibras colágenas em pele de cães com dermatopatologias endócrinas

Canine endocrinopathies, such as hypothyroidism and hyperadrenocortism,induce typical dermatological alterations. Collagen fibers are significant for the maintenance of structural integrity,as well as in the determination of tissue function. This study aimed at assessing the coloration caused by Picrosirius Red staining under circular polarization and Masson Trichrome staining, as tools to quantify the total collagen in the skin of dogs exhibiting endocrine dermatopathies. Skin samples taken from dogs with hypothyroidism and hyperadrenocorticism were stained using Hematoxylin and Eosin (HE), Masson’s Trichrome (MT) and Picrosirius Red (PSR). The animals with hyperadrenocorticism revealed a higher percentage of collagen area than did the animals with hypothyroidism PSRp (hypothyroidism = 43.76 ± 0.8255 and hyperadrenocorticism = 47.08 ± 0.8584). The percentage of the collagen area using MT between the groups is given in parenthesis (hypothyroidism = 52.06 ± 0.9371, hyperadrenocorticism = 61 ± 0.7529 and control = 56.88 ± 0.64) (p <0.05). It is therefore, evident that the special stains employed are useful in estimating the percentage of collagen area in the skin, as they revealed that dogs with hypothyroidism had lower collagen deposition whereas those animals with hyperadrenocorticism showed higher quantity of collagen in the dermis.

Endocrinopatias caninas como hipotireoidismo e o hiperadrenocortismo causam alterações dermatológicas características. As fibras de colágeno desempenham um papel vital na manutenção da integridade estrutural e também na determinação da função dos tecidos. O objetivo deste estudo foi avaliar as colorações de picrosirius red sob polarização circular e coloração tricômio de Masson como ferramentas para quantificar o colágeno total da pele de cães com dermatopatias endócrinas. Amostras de pele obtidas de cães com hipotireoidismo e hiperadrenocorticismo foram coradas por Hematoxilina e Eosina (HE), Tricrômio de Masson (MT) e Picrosirius red (PSR). A porcentagem de área de colágeno foi maior nos animais com hiperadrenocorticismo e menor nos animais com hipotireoidismo PSRp (hipotireoidismo = 43,76 ± 0.8255 e hiperadrenocorticismo = 47,08 ± 0.8584). Já a porcentagem de área de colágeno no MT entre os grupos (hipotireoidismo = 52,06 ± 0.9371, hiperadrenocorticismo = 61 ± 0,7529 e controle = 56,88 ± 0.64) (p <0.05). Concluiu-se que as colorações especiais utilizadas são úteis para avaliar a porcentagem de área de colágeno na pele, pois demonstraram que cães com hipotireoidismo demonstraram uma diminuição na deposição de colágeno e os animais com hiperadrenocorticismo apresentaram maior quantidade de colágeno na derme.

Picrosirius red and Massons Trichrome staining techniques as tools for detection of collagen fibers in the skin of dogs with endocrine dermatopathologies / Picrosirius red e Tricrômico de Masson como ferramentas para detecção de fibras colágenas em pele de cães com dermatopatologias endócrinas

Canine endocrinopathies, such as hypothyroidism and hyperadrenocortism,induce typical dermatological alterations. Collagen fibers are significant for the maintenance of structural integrity,as well as in the determination of tissue function. This study aimed at assessing the coloration caused by Picrosirius Red staining under circular polarization and Masson Trichrome staining, as tools to quantify the total collagen in the skin of dogs exhibiting endocrine dermatopathies. Skin samples taken from dogs with hypothyroidism and hyperadrenocorticism were stained using Hematoxylin and Eosin (HE), Massons Trichrome (MT) and Picrosirius Red (PSR). The animals with hyperadrenocorticism revealed a higher percentage of collagen area than did the animals with hypothyroidism PSRp (hypothyroidism = 43.76 ± 0.8255 and hyperadrenocorticism = 47.08 ± 0.8584). The percentage of the collagen area using MT between the groups is given in parenthesis (hypothyroidism = 52.06 ± 0.9371, hyperadrenocorticism = 61 ± 0.7529 and control = 56.88 ± 0.64) (p <0.05). It is therefore, evident that the special stains employed are useful in estimating the percentage of collagen area in the skin, as they revealed that dogs with hypothyroidism had lower collagen deposition whereas those animals with hyperadrenocorticism showed higher quantity of collagen in the dermis.(AU)

Endocrinopatias caninas como hipotireoidismo e o hiperadrenocortismo causam alterações dermatológicas características. As fibras de colágeno desempenham um papel vital na manutenção da integridade estrutural e também na determinação da função dos tecidos. O objetivo deste estudo foi avaliar as colorações de picrosirius red sob polarização circular e coloração tricômio de Masson como ferramentas para quantificar o colágeno total da pele de cães com dermatopatias endócrinas. Amostras de pele obtidas de cães com hipotireoidismo e hiperadrenocorticismo foram coradas por Hematoxilina e Eosina (HE), Tricrômio de Masson (MT) e Picrosirius red (PSR). A porcentagem de área de colágeno foi maior nos animais com hiperadrenocorticismo e menor nos animais com hipotireoidismo PSRp (hipotireoidismo = 43,76 ± 0.8255 e hiperadrenocorticismo = 47,08 ± 0.8584). Já a porcentagem de área de colágeno no MT entre os grupos (hipotireoidismo = 52,06 ± 0.9371, hiperadrenocorticismo = 61 ± 0,7529 e controle = 56,88 ± 0.64) (p <0.05). Concluiu-se que as colorações especiais utilizadas são úteis para avaliar a porcentagem de área de colágeno na pele, pois demonstraram que cães com hipotireoidismo demonstraram uma diminuição na deposição de colágeno e os animais com hiperadrenocorticismo apresentaram maior quantidade de colágeno na derme.(AU)

Triticum aestivum in open skin wounds: cytotoxicity and collagen histopathology / Triticum aestivum em feridas cutâneas abertas: citotoxicidade e histopatologia de colágeno

Phytoterapic compounds have been used in wound healing for many centuries. Nowadays, scientific evidences of phytotherapeutics is a requirement of the legislation. The scientific literature notes the need for healing topics yielding scars that are both aesthetically appealing and resistant. We aimed to evaluate the cytotoxicity of several doses of T. aestivum extract (2 mg mL-1, 4 mg mL-1, 6 mg mL-1, 8 mg mL-1 and 10 mg mL-1) in a fibroblast cell line and the healing process in an in vivo experimental model (New Zealand rabbits). For this, MTT test in 3T6 cells was performed in duplicates using MEM (0 mg ml-1) as negative control. Cell viability was calculated as: absorbance average in treatments/absorbance average in controls x 100. In vivo test was performed in 78 skin wounds in rabbits that were treated with 2 mg ml-1and 10 mg ml-1 of T. aestivum and non-ionic cream for 21 days. After this period, it was evaluated the histology using picrosorius and Gomoris trichrome staining. Statistical analysis was evaluated using T test (Graphpad) for cytotoxicity assay, Fischer test for the gomori trichrome test (Grahpad) and Kruskal-Wallis (Statistic 9.0) for picrosirius test. The in vitro test resulted in cytotoxicity observed at 2mg mL-1 whereas cells were viable at higher doses. On the other hand, it was observed that collagen formation of wounds was more uniform with this dose than with 10mg mL-1 extract in the in vivo study. Thus, we conclude that the 2mg mL-1 T. aestivum aqueous extract dose was more efficient in the in vivo wound healing study, despite its cytotoxic effects in vitro.(AU)

Os extratos vegetais têm sido utilizados na cicatrização de feridas a muitos séculos. No entanto nos dias atuais a comprovação científica dos fitoterápicos é uma exigência da legislação. Na literatura científica se observa a necessidade de cicatrizantes tópicos que proporcionem uma cicatriz estética e resistente. Devido a isso objetivou-se avaliar a citotoxicidade de diversas doses de T. aestivum (2 mg mL1, 4 mg mL-1, 6 mg mL-1, 8 mg mL-1 e 10 mg mL-1) em linhagem celular de fibroblasto, e o processo cicatricial em modelo experimental (New Zealand rabbits) in vivo. Para isso foi realizado o teste de MTT em linhagem celular 3T. Tests were performed in duplicates, using MEM (0 mg mL-1) as negative control. Cell viability was calculated as: absorbance average in treatments/absorbance average in controls x 100. No ensaio in vivo foram realizadas 78 feridas experimentais em coelhos que foram tratadas T. aestivum 2mg mL-1, T. aestivum 10 mg mL-1e creme não iônico por 21 dias, após foi avaliado a histologia do tricrômico de golmori e de picrosirius. Na análise estatística do ensaio de citotoxicidade foi realizado o teste de t (Graphpad), para avaliação do tricomico de golmori foi realizado o teste de fischer (Graphpad) e no picrosirius foi avaliado através de Kruskal - Wallis (Statistic 9.0). O resultado in vitro demonstrou que a dose de 2mg mL-1 foi citotóxica para as células e que doses maiores a essa apresentavam viabilidade celular. No entanto no estudo in vivo foi constatado que as feridas tratadas com essa dose apresentaram a formação de colágeno mais uniforme que as tratadas com 10 mg mL-1. Concluí-se que a dose de 2mg mL-1 do extrato aquoso de T. aestivum é eficiente no ensaio in vivo com as feridas experimentais, o que não foi observado no estudo in vitro.(AU)

Caracterização de colágenos tipos I e III no estroma do carcinoma de células escamosas cutâneo em cães / Characterization of types I and III collagen in the stroma of cutaneous squamous cell carcinoma in dogs

O carcinoma de células escamosas (CCE) é uma neoplasia epitelial maligna que acomete cães e diversas outras espécies, incluindo a humana. O CCE afeta vários sítios anatômicos e pode desenvolver metástase. O objetivo deste estudo foi a caracterização das fibras de colágenos tipos I e III no estroma do CCE cutâneo de cães. Para este trabalho, utilizaram-se 44 amostras de pele incluídas em parafina e que tiveram prévio diagnóstico de CCE. As amostras foram processadas histologicamente e coradas com hematoxilina/eosina para confirmação do diagnóstico e classificação do grau de diferenciação tumoral e com a coloração histoquímica de picrosirius para observação dos colágenos tipos I e III. O colágeno tipo III mostrou maior expressão nos CCEs cutâneos bem diferenciados. O papel do colágeno do tipo III nas neoplasias não está bem esclarecido, e outros fatores além do grau de diferenciação celular podem estar envolvidos em sua expressão e determinar sua importância na biologia tumoral.(AU)

Squamous cell carcinoma (SCC) is a malignant epithelial tumor that affects dogs and several other species, including humans. The SCC occurs in various anatomical sites and can develop metastasis. The aim of this study was to characterize types I and III collagen fibers in the stroma of cutaneous SCC in dogs. For this work 44 paraffin-embedded samples with previous diagnostic of SCC were used. Samples were processed and evaluated histologically with hematoxylin/eosin to confirm the diagnosis and classification of cell differentiation degree and with Picrosirius for observation of types I and III collagen. Type III collagen expression was higher in well-differentiated SCC. The role of type III collagen in cancer is not very clear and factors other than cell differentiation degree may be involved in its expression and determine its importance in tumor biology.(AU)

Quantification of collagen fibers in canine uteri treated with medroxyprogesterone acetate

Collagen plays essential roles in remodeling uterine tissue during decidualization, implantation, pregnancy and involution. To understand whether the progestational agent medroxyprogesterone acetate (MPA) can modify the organization and deposit of collagen in the uteri of normal bitches (Canis Tlupus familiaris), we assessed uterine tissues by histochemistry. Uteri were grouped as: nulliparous (n=11), multiparous (n=11) and treated with MPA (n=11; nulliparous with two treatments; 5mg/kg; i.m.). The amount, location and birefringence of interstitial collagen types I and III in the fold and base of the endometrial stroma and the myometrial muscular layers were studied on sections stained with Picrosirius Red by polarized light microscopy and evaluated by ANOVA. No differences were observed in the endometrium. In the myometrium, differences were observed in collagen type I between MPA-treated and nulliparous uteri vs. multiparous (p<0.05), and differences in collagen type III between nulliparous and multiparous uteri vs. MPA-treated (p=0.0001). In conclusion, two doses of MPA had no significant effect on the investigated collagens in the extracellular matrix.(AU)

Quantification of collagen fibers in canine uteri treated with medroxyprogesterone acetate

Collagen plays essential roles in remodeling uterine tissue during decidualization, implantation, pregnancy and involution. To understand whether the progestational agent medroxyprogesterone acetate (MPA) can modify the organization and deposit of collagen in the uteri of normal bitches (Canis Tlupus familiaris), we assessed uterine tissues by histochemistry. Uteri were grouped as: nulliparous (n=11), multiparous (n=11) and treated with MPA (n=11; nulliparous with two treatments; 5mg/kg; i.m.). The amount, location and birefringence of interstitial collagen types I and III in the fold and base of the endometrial stroma and the myometrial muscular layers were studied on sections stained with Picrosirius Red by polarized light microscopy and evaluated by ANOVA. No differences were observed in the endometrium. In the myometrium, differences were observed in collagen type I between MPA-treated and nulliparous uteri vs. multiparous (p<0.05), and differences in collagen type III between nulliparous and multiparous uteri vs. MPA-treated (p=0.0001). In conclusion, two doses of MPA had no significant effect on the investigated collagens in the extracellular matrix.(AU)

Caracterização histomorfométrica e quantificação do colágeno tipo I e III do carcinoma mamário canino

As neoplasias mamárias são comumente encontradas em cães. Nos carcinomas mamários o microambiente tumoral é intensamente alterado. A remodelação da matriz extracelular pode levar a uma interação entre os componentes da matriz e as células neoplásicas que influenciam na progressão, invasão e metástases. Objetivou-se caracterizar o carcinoma mamário canino com e sem metástases pulmonares. Foram selecionadas 26 amostras em blocos de parafina de cães com carcinoma mamário nos arquivos do Laboratório de Patologia Veterinária da UFV. Foram realizadas fotomicrografias e avaliações dos cortes histológicos em hematoxilina e eosina e Picrossirius red com luz polarizada. Em todas as lâminas foram realizadas análises histopatológicas com a realização da contagem mitótica, intensidade da necrose e do infiltrado inflamatório e análises morfométricas do núcleo, proporção das células carcinomatosas, necrose, células inflamatórias e vasos sanguíneos e quantificação do colágeno tipo I e III. A contagem mitótica e a intensidade da necrose foram maiores em carcinomas mamários de grau III. Na análise dos colágenos ocorreu um predomínio do colágeno tipo I, contudo a concentração dos colágenos tipo I e tipo III não foram influenciadas pelo grau e ocorrência de metástase. Nos carcinomas em tumor misto houve maior quantidade de colágeno tipo I nas neoplasias de grau I. A mensuração dos núcleos e as proporções de células carcinomatosas, necrose, células inflamatórias e vasos sanguíneos não foram significativas em relação aos graus e os grupos. Nos carcinomas em tumor misto houve uma relação significativa entre os núcleos com diâmetros maiores e a ausência de metástases. Os resultados demonstram que há maior relação entre o grau dos carcinomas mamários com as variáveis avaliadas, independente da presença ou ausência de metástase pulmonar.

Mamary neoplasms are commonly found in dogs. In mamary carcinomas, the tumor microenvironment is intensely altered. Extracellular matrix remodeling can lead to an interaction between matrix components and neoplastic cells that influence progression, invasion and metastasis. This study goal to characterize canine mammary carcinoma with and without lung metastases. Twenty-six samples were selected in paraffin blocks from dogs with mammary carcinoma in the files of the Veterinary Pathology Laboratory at UFV. Photomicrographs and evaluations of histological sections were taken in hematoxylin and eosin and Picrossirius red with polarized light. In all slides, histopathological analyzes were performed with mitotic counts, intensity of necrosis and inflammatory infiltrate and morphometric analyzes of the nucleus, proportion of carcinomatous cells, necrosis, inflammatory cells and blood vessels and quantification of collagen type I and III. Mitotic count and necrosis intensity were higher in grade III mamary carcinomas. In the analysis of collagens, there was a predominance of type I collagen, however the concentration of type I and type III collagens were not influenced by the degree and occurrence of metastasis. In mixed tumors carcinoma, there was a greater amount of collagen type I in grade I neoplasms. The measurement of nuclei and proportions of carcinoma cells, necrosis, inflammatory cells and blood vessels were not significant in relation to grades and groups. In mixed tumors carcinoma, there was a significant relationship between nuclei with larger diameters and the absence of metastases. The results demonstrate that there is a greater relationship between the degree of mamary carcinomas and the variables evaluated, regardless of the presence or absence of pulmonary metastasis.

COPAÍBA (Copaifera langsdorfii DESF.; CAESALPINIACEAE) EM ASSOCIAÇÃO AO LASER TERAPÊUTICO NO TRATAMENTO DE FERIDAS CUTÂNEAS EM RATOS WISTAR

Protocolos alternativos para o tratamento de feridas cutâneas vêm sendo desenvolvidos, com o uso de técnicas como a laserterapia de baixa potência e a fitoterapia, que objetivam otimizar esse processo. Nesse estudo avaliouse a eficácia da associação entre óleo-resina de Copaíba (Copaifera langsdorffii) e laserterapia de baixa potência, na cicatrização de feridas cutâneas, em comparação ao uso desses métodos separadamente. Foram utilizados 15 ratos Wistar (Rattus novergicus), nos quais confeccionaram-se cinco feridas de 8mm, através de punch de biopsia, sendo tratadas individualmente com os seguintes protocolos: grupo controle negativo, com solução fisiológica a 0,9% (T1); grupo controle positivo, com vaselina sólida (T2); grupo da laserterapia com AsGa (904nm), modo contínuo, focal, durante dez segundos, na dose de 4J/cm² (T3); grupo do óleo-resina de Copaíba, no qual aplicou-se uma gota do fitoterápico nas feridas (T4); e grupo de associação de óleoresina de Copaíba com a aplicação de laser de baixa potência (T5). A análise da eficácia de cada técnica se deu através da avaliação da taxa de cicatrização, análise histopatológica do infiltrado inflamatório das feridas, com coloração de Hematoxilina- Eosina, e expressão do colágeno, com o uso da coloração Picrosirius Red. Sendo os dados submetidos teste Kruskal-Wallis, dado que os resultados não se apresentaram paramétricos (P>0,05). A copaíba gerou vantagem na expressão de colágeno tipo III no tecido, dado que ambos os tratamentos com esse fitoterápico apresentaram os melhores resultados nesse parâmetro, enquanto a laserterapia demonstrou melhor capacidade de renovação tecidual, pois ambos os tratamentos com o uso da mesma tiveram os melhores resultados para fibroplasia no sétimo dia da cicatrização. Apesar de poucas vantagens da associação dessas duas técnicas, conclui-se que esse protocolo melhora o aspecto macroscópico das feridas, com menor formação de crostas.

Alternative protocols for the treatment of skin wounds have been developed, with the use of techniques such as low-level laser therapy and phytotherapy, aiming to optimize this process. This study evaluated the effectiveness of the association between Copaiba (Copaifera langsdorffii) oil-resin and low-power laser therapy, in the healing of cutaneous wounds, in comparison of these methods separately. Fifteen Wistar rats (Rattus novergicus) were used, in which five 8-mm wounds were made through a biopsy punch. They were treated individually with the following protocols: negative control group (T1); positive control group (T2); laser therapy with AsGa (904nm), continuous, focal mode, for ten seconds, dosage of 4J/cm² (T3); Copaiba oil-resin (T4); And group of associations between Copaiba and low-level laser (T5). The efficacy of each technique was evaluated with: wound healing rate, histopathological analysis of the inflammatory infiltrate of the wounds, with Hematoxylin-Eosin staining, and collagen expression, using Picrosirius Red staining. Statistical test used to analyze the data was Kruskal-Wallis (P> 0.05). Copaiba generated an advantage in the expression of type III collagen, because both treatments showed the best results in this parameter, whereas the laser therapy demonstrated a better ability of tissue renewal, since both treatments with this technique had the best results for fibroplasia in the middle of healing process. Although there are few advantages from the association of the two techniques, it is concluded that this protocol improves the macroscopic aspect of the wounds, with less crust formation.

Triticum aestivum in open skin wounds: cytotoxicity and collagen histopathology / Triticum aestivum em feridas cutâneas abertas: citotoxicidade e histopatologia de colágeno

Phytoterapic compounds have been used in wound healing for many centuries. Nowadays, scientific evidences of phytotherapeutics is a requirement of the legislation. The scientific literature notes the need for healing topics yielding scars that are both aesthetically appealing and resistant. We aimed to evaluate the cytotoxicity of several doses of T. aestivum extract (2 mg mL-1, 4 mg mL-1, 6 mg mL-1, 8 mg mL-1 and 10 mg mL-1) in a fibroblast cell line and the healing process in an in vivo experimental model (New Zealand rabbits). For this, MTT test in 3T6 cells was performed in duplicates using MEM (0 mg ml-1) as negative control. Cell viability was calculated as: absorbance average in treatments/absorbance average in controls x 100. In vivo test was performed in 78 skin wounds in rabbits that were treated with 2 mg ml-1and 10 mg ml-1 of T. aestivum and non-ionic cream for 21 days. After this period, it was evaluated the histology using picrosorius and Gomori’s trichrome staining. Statistical analysis was evaluated using T test (Graphpad) for cytotoxicity assay, Fischer test for the gomori trichrome test (Grahpad) and Kruskal-Wallis (Statistic 9.0) for picrosirius test. The in vitro test resulted in cytotoxicity observed at 2mg mL-1 whereas cells were viable at higher doses. On the other hand, it was observed that collagen formation of wounds was more uniform with this dose than with 10mg mL-1 extract in the in vivo study. Thus, we conclude that the 2mg mL-1 T. aestivum aqueous extract dose was more efficient in the in vivo wound healing study, despite its cytotoxic effects in vitro.

Os extratos vegetais têm sido utilizados na cicatrização de feridas a muitos séculos. No entanto nos dias atuais a comprovação científica dos fitoterápicos é uma exigência da legislação. Na literatura científica se observa a necessidade de cicatrizantes tópicos que proporcionem uma cicatriz estética e resistente. Devido a isso objetivou-se avaliar a citotoxicidade de diversas doses de T. aestivum (2 mg mL1, 4 mg mL-1, 6 mg mL-1, 8 mg mL-1 e 10 mg mL-1) em linhagem celular de fibroblasto, e o processo cicatricial em modelo experimental (New Zealand rabbits) in vivo. Para isso foi realizado o teste de MTT em linhagem celular 3T. Tests were performed in duplicates, using MEM (0 mg mL-1) as negative control. Cell viability was calculated as: absorbance average in treatments/absorbance average in controls x 100. No ensaio in vivo foram realizadas 78 feridas experimentais em coelhos que foram tratadas T. aestivum 2mg mL-1, T. aestivum 10 mg mL-1e creme não iônico por 21 dias, após foi avaliado a histologia do tricrômico de golmori e de picrosirius. Na análise estatística do ensaio de citotoxicidade foi realizado o teste de t (Graphpad), para avaliação do tricomico de golmori foi realizado o teste de fischer (Graphpad) e no picrosirius foi avaliado através de Kruskal - Wallis (Statistic 9.0). O resultado in vitro demonstrou que a dose de 2mg mL-1 foi citotóxica para as células e que doses maiores a essa apresentavam viabilidade celular. No entanto no estudo in vivo foi constatado que as feridas tratadas com essa dose apresentaram a formação de colágeno mais uniforme que as tratadas com 10 mg mL-1. Concluí-se que a dose de 2mg mL-1 do extrato aquoso de T. aestivum é eficiente no ensaio in vivo com as feridas experimentais, o que não foi observado no estudo in vitro.