Resumo
Rickettsia felis is an obligate intracellular bacterium capable of infecting ticks, fleas, lice, and other arthropods. This bacterium is classified as a member of the Transitional Group (TRG) Rickettsia. It is known the evidence of R. felis mutualistic and obligatory relationship with some eukaryote organisms. However, there arent scientific accounts of R. felis and moths of the order Lepidoptera association. The current work reports the first identification of the bacteria R. felis in Phereoeca sp. For that, a polymerase chain reaction (PCR) assay using gltA, ompA, and ompB genes was used. The nucleotide sequences showed 100% of identity with other Rickettsia felis sequences. The genus-level identification of the moth larvae was performed by morphological taxonomic keys and PCR analysis of the cytochrome oxidase I (COI) gene. The nucleotide sequenced showed 94.94% similarity with the species Phereoeca praecox. However, with the low number of sequences deposited in the databases, the species was classified as Phereoeca sp. The results suggest that R. felis may develop in an organism without blood-feeding behavior (Lepidoptera), as it has been demonstrated for booklice (Psocoptera). Further investigation is necessary in order to confirm pathogenic or mutualistic association with moths.(AU)
Rickettsia felis é uma bactéria intracelular obrigatória capaz de infectar carrapatos, pulgas, piolhos e outros artrópodes. Essa bactéria é classificada como um membro do Grupo de Transição (TRG). Há evidência de que R. felis está relacionada a alguns organismos eucariotos em um relacionamento mutualístico e obrigatório. No entanto, nenhum relato científico mostra alguma relação entre R. felis e traças da ordem Lepidoptera. O presente trabalho relata a primeira identificação da bactéria R. felis em Phereoeca sp. Para isso, empregou-se um ensaio de reação em cadeia da polimerase (PCR) utilizando-se os genes gltA, ompA e ompB. As sequências nucleotídicas mostraram 100% de identidade com outras sequências de Rickettsia felis. Utilizando-se chaves taxonômicas morfológicas e análise por PCR do gene da citocromo oxidase I (COI) foi feita a identificação em nível de espécie da forma jovem das traças. O nucleotídeo sequenciado mostrou 94,94% de similaridade com a espécie Phereoeca praecox. Entretanto, com o baixo número de sequências depositadas nos bancos de dados, a espécie foi classificada como Phereoeca sp. Os resultados sugerem que R. felis pode se desenvolver em um organismo sem alimentação de sangue (Lepidoptera), assim como tem sido demonstrado para a espécie Liposcelis bostrychophila (Psocoptera). Mais investigações são necessárias para confirmar uma possível associação patogênica ou mutualística com traças.(AU)
Assuntos
Rickettsia felis/genética , Lepidópteros/genética , Biologia Molecular , Reação em Cadeia da PolimeraseResumo
Os ectoparasitos são importantes invertebrados que acometem diferentes espécies de animais, incluindo o homem. Dentre os principais representantes destacam-se os carrapatos e pulgas que apresentam ampla distribuição geográfica, causam grandes prejuízos econômicos e atuam como vetores de diferentes agentes patogênicos. Desta forma, o objetivo desse estudo foi pesquisar ectoparasitos de animais domésticos e sua relação com patógenos de importância em saúde única na Microrregião de Garanhuns no Agreste Meridional do Estado de Pernambuco - Brasil. De janeiro de 2017 a abril de 2019, foram coletados ectoparasitos de animais domésticos (gatos, cães e cavalos), armazenados em frascos contendo etanol a 70% e posteriormente identificados morfologicamente utilizando chaves dicotômicas. Além disso, a pesquisa de patógenos foi realizada molecularmente por PCR e sequenciamento. Foram incluídos neste estudo 86 animais (gatos = 8; cães = 22; cavalos = 56) infestados com ectoparasitos provenientes de áreas urbanas (n = 37) e rurais (n = 49). Foram identificadas duas espécies de pulgas (Ctenocephalides canis e Ctenocephalides felis) e cinco espécies de carrapatos (Amblyomma ovale, Amblyomma sculptum, Dermacentor nitens, Rhipicephalus (Boophilus) microplus e Rhipicephalus sanguineus s.l.). Um total de 401 espécimes (344 carrapatos e 57 pulgas; 2 = 206,038; p = 0,0000) foram coletados, sendo 10 (2.49%), 96 (23.94%) e 295 (73.57%) de gatos, cães e cavalos, respectivamente. As sequências derivadas dos amplicons obtidos na PCR para Rickettsia spp. mostrou identidade > 99% com sequências de Rickettsia felis disponíveis no GenBank. O DNA de R. felis foi detectado em C. felis, D. nitens e R. sanguineus s.l.. As espécies de pulgas e carrapatos identificadas apresentam capacidade vetorial para transmissão de patógenos zoonóticos, o que reforça a importância de estudos sobre a ectoparasitofauna. Portanto, medidas preventivas para reduzir o risco de exposição dos animais domésticos e humanos a esses ectoparasitos e, consequentemente, aos patógenos por eles transmitidos, devem ser implementadas na área de estudo.
Ectoparasites are important invertebrates that affect different animal species, including humans. Ticks and fleas, the main representants of ectoparasites, have a wide geographical distribution, and cause relevant economic and sanitary losses. In addition, may act as vectors of pathogens of medical and veterinay concern. The aim of this study was to evaluate the diversity of ectoparasites of domestic animals (dogs, cats and horses) and their relationship with pathogens of importance in public health in the Microregion of Garanhuns, South Agreste, State of Pernambuco - Brazil. From January 2017 to April 2019, ectoparasites were collected from animals (cats, dogs and horses), stored in plastic vials containing 70% ethanol and then morphologically identified by using dichotomous keys. In addition, the search for pathogens was performed molecularly by PCR and sequencing. In this study were included 86 domestic animals (cats = 8; dogs = 22; horses = 56) infested with ectoparasites from urban (n = 37) and rural (n = 49) areas. Two species of fleas (Ctenocephalides canis and Ctenocephalides felis) and five tick species (Amblyomma ovale, Amblyomma sculptum, Dermacentor nitens, Rhipicephalus (Boophilus) microplus and Rhipicephalus sanguineus s.l.) were identified. A total of 401 specimens (344 ticks and 57 fleas; 2 = 206.038; p = 0.0000) were collected, being 10 (2.49%), 96 (23.95%) and 295 (73.57%) obtained from cats, dogs and horses, respectively. The sequences derived from the amplicons obtained in PCR to Rickettsia spp. showed identity > 99% with Rickettsia felis sequences available in GenBank. DNA of R. felis was detected in C. felis, D. nitens and R. sanguineus s.l.. Fleas and ticks species herein reported present vectorial ability to transmit zoonotic pathogens, wich reinforce the importance of the studies of ectofauna. Therefore, preventive measures should be implemented to reduce the infestation by ectoparasites in animals and humans, and decrease the risk of infection by the pathogens for them transmitted.
Resumo
The present study evaluated the rickettsial infection in a laboratory colony of cat fleas, Ctenocephalides felis felis (Bouche) in Brazil. All flea samples (30 eggs, 30 larvae, 30 cocoons, 30 males, and 30 females) tested by polymerase chain reaction (PCR) were shown to contain rickettsial DNA. PCR products, corresponding to the rickettsial gltA, htrA, ompA and ompB gene partial sequences were sequenced and showed to correspond to Rickettsia felis, indicating that the flea colony was 100% infected by R. felis. The immunofluorescence assay (IFA) showed the presence of R. felis-reactive antibodies in blood sera of 7 (87.5%) out of 8 cats that were regularly used to feed the flea colony. From 15 humans that used to work with the flea colony in the laboratory, 6 (40.0%) reacted positively to R. felis by IFA. Reactive feline and human sera showed low endpoint titers against R. felis, varying from 64 to 256. With the exception of one human serum, all R. felis-reactive sera were also reactive to Rickettsia rickettsii and/or Rickettsia parkeri antigens at similar titers to R. felis. The single human serum that was reactive solely to R. felis had an endpoint titer of 256, indicating that this person was infected by R. felis.
Resumo
Samples of 10 and 14 Ctenocephalides felis felis fleas were collected on dogs from Pedreira and Mogi das Cruzes municipalities, respectively, in the State of São Paulo, Brazil, for detection of Rickettsia spp. Individual fleas were submitted to Polymerase Chain Reaction targeting the 17-kDa and the 190-kDa (OmpA) genes of Rickettsiae. This later gene is specific for spotted fever group. Nine fleas from Pedreira (90%) and four fleas from Mogi das Cruzes (28%) were positive for the 17-kDa gene, and eight fleas from Pedreira (80%) and four from Mogi das Cruzes (28%) were positive for 190-kDa gene. The nucleotide sequence of the 190-kDa products of one flea from Pedreira and one flea from Mogi das Cruzes were 100% identical to each other, and when compared to the GenBank Data, they were 100% identical to the 190-kDa sequence of R. felis. This was the first report of its occurrence in the State of São Paulo.(AU)
Amostras de 10 e 14 pulgas Ctenocephalides felis felis foram coletadas de cães nos municípios de Pedreira e Mogi das Cruzes, respectivamente, no estado de São Paulo, para pesquisa de Rickettsia spp. As pulgas foram individualmente submetidas à reação em cadeia pela polimerase, tendo como alvo os genes 17-kDa e 190-kDa (OmpA) de Rickettsia, sendo esse último específico para o GFM. Nove pulgas de Pedreira (90%) e quatro pulgas de Mogi das Cruzes (28%) foram positivas para o gene 17-kDa, e oito pulgas de Pedreira (80%) e quatro de Mogi das Cruzes (28%) foram positivas para o gene 190-kDa. As seqüências de nucleotídeos do gene 190-kDa de uma pulga de Pedreira e de uma pulga de Mogi das Cruzes foram 100% idênticas; quando comparadas com dados existentes no GenBank, foram 100% idênticas com a seqüência parcial do gene 190-kDa de Rickettsia felis. Esse foi o primeiro relato de sua ocorrência no estado de São Paulo.(AU)
Assuntos
Sifonápteros/parasitologia , Rickettsia felis/isolamento & purificação , Reação em Cadeia da PolimeraseResumo
Estudos recentes demonstraram a existência de Rickettsia felis, riquétsia do Grupo da Febre Maculosa, em sangue de pacientes com quadro clínico compatível com a doença e em pulgas infectadas. Este projeto visa determinar a prevalência de R. felis em vetores (pulgas e carrapatos) e em potenciais reservatórios (gambás, cães, gatos, eqüinos e humanos), procedentes de áreas endêmicas (Mogi das Cruzes, Pedreira, Piracicaba e São Paulo), e não endêmicas (Pirassununga) para FM no Estado de São Paulo. Foram utilizados métodos moleculares (reação em cadeia pela polimerase e sequenciamento de DNA), diagnóstico sorológico e cultivo celular. Em gambás capturados (Didelphis aurita e Didelphis albiventris) foram colhidas 312 pulgas, pertencentes às Famílias Pulicidae (141), Rhopalopsyllidae (170) e Ctenophthalmidae (1) e 709 carrapatos (Amblyomma spp e Ixodes loricatus). Nos cães foram colhidos 212 pulgas (Ctenocephalides felis felis) e 115 carrapatos (Amblyomma cajennense, Amblyomma aureolatum e Rhipicephalus sanguineus). Nos gatos foram colhidos 66 pulgas (59 C. felis felis e 7 Rhopalopsyllus lutzi lutzi) e 10 carrapatos (R. sanguineus e Amblyomma spp). A colheita de sangue foi realizada em 94 gambás, 55 cães, 25 gatos, 85 eqüinos e 238 humanos. Rickettsia felis foi detectada em 42-45,8% das pulgas C. felis felis de gambás, cães e gatos; em 4% das pulgas Polygenis (N) atopus de gambás e em 1,8% e 0,7% de carrapatos I. loricatus e Amblyomma spp, respectivamente, colhidos de gambás. Rickettsia bellii foi detectada em carrapatos I. loricatus (59,1%), A. dubitatum (8,7%) e Amblyomma spp (0,9%) e em uma pulga P. (N.) atopus (1%). Não foi possível a detecção de infecção por Rickettsia spp em sangue dos animais e humanos. Contudo, constatou-se presença anticorpos frente aos antígenos de Rickettsia rickettsii, Rickttesia parkeri, R. felis e R. bellii nas áreas estudadas. A titulação obtida sugere infecção por R. rickettsii em gambás, cães, eqüinos e humanos e por R. parkeri em gambás, cães e eqüinos. R. felis e R. bellii foram isoladas e cultivadas com a utilização de células C6/36 e VERO, respectivamente
Recent studies have showed the presence of Rickettsia felis, a spotted fever group Rickettsiae, in human blood with clinical signs compatible with spotted fever and in infected fleas. This work aims to determine the prevalence of R. felis in potential vectors (fleas and ticks) and reservoirs (opossums, dogs, cats, equines and humans) from endemic (Mogi das Cruzes, Pedreira, Piracicaba e São Paulo), and non-endemic (Pirassununga) areas for spotted fever in the State of São Paulo. Molecular probes (polimerase chain reaction and DNA sequencing), serologic diagnoses and cell culture were used. From trapped opossums (Didelphis aurita and Didelphis albiventris) a total of 312 fleas, belonging to Family Pulicidae (141), Rhopalopsyllidae (170) and Ctenophthalmidae (1) and 709 ticks (Amblyomma spp and Ixodes loricatus) were collected. On dogs a total of 212 fleas (Ctenocephalides felis felis) and 115 ticks (Amblyomma cajennense, Amblyomma aureolatum and Rhipicephalus sanguineus) were collected. On cats, 66 fleas (59 C. felis felis and 7 Rhopalopsyllus lutzi lutzi) and 10 ticks (R. sanguineus and Amblyomma spp) were collected. Blood samples were collected from 94 opossums, 55 dogs, 25 cats, 85 equines and 238 humans. Rickettsia felis was detected in 42-45,8% of the C. felis felis collected on opossums, dogs and cats. This same Rickettsia species was detected in 4% of Polygenis (N.) atopus fleas, and 1,8% and 0,7% of I. loricatus and Amblyomma spp ticks, respectively, collected from opossums. Rickettsia bellii was found in ticks I. loricatus (59,1%), A. dubitatum (8,7%) and Amblyomma spp (0,9%) and in a flea P. (N.) atopus (1%). No Rickettsia DNA was detected in animal or human blood samples. However antibodies against Rickettsia rickettsii, Rickettsia parkeri, R. felis and R. bellii were detected in all locations. The titers suggest infection by R. rickettsii in opossums, dogs, equines and humans and by R. parkeri in opossums, dogs and equines. R. felis and R. bellii were isolated and cultivated with the C6/36 and VERO cells, respectively