Alterations in APC, BECN1, and TP53 gene expression levels in colon cancer cells caused by monosodium glutamate / Alterações nos níveis de expressão gênica APC, BECN1 e TP53 em células de câncer de cólon causadas por glutamato monossódico

Colorectal cancer (CRC) is a disease with high incidence worldwide. As of 2018, it is the second leading cause of cancer deaths in the world. In Saudi Arabia, the incidence of this disease has been increasing in the younger population. Both genetic and lifestyle factors may have contributed to its increased incidence and pathogenesis. Monosodium glutamate (MSG) is a food flavor enhancer that can be found in many commercial foods, and it can sometimes be used as a substitute to table salt. MSG has been investigated for its possible genotoxicity, yielding controversial results. In the present study, the effect of MSG on cell viability and its effect on expression of APC, BECN1, and TP53 genes in SW620 and SW480 colon cancer cell lines were studied. TP53 is a tumor suppressor gene that functions in modifying DNA errors and/or inducing apoptosis of damaged cells, and both APC and BECN1 genes are involved in CRC and are of importance in cellular growth and metastasis. Cancer cell viability was analyzed using MTT assay, and the results showed a significant increase in the number of viable cells after 24h of treatment with MSG with different concentrations (0.5, 1.0, 10, 50, and 100mM). Moreover, gene expression results showed a significant increase in the expression levels of APC and BECN1 under specified conditions in both cell lines; conversely, TP53 showed a significant decrease in expression in SW620 cells. Thus, it can be concluded that MSG possibly confers a pro-proliferative effect on CRC cells.

O câncer colorretal (CCR) é uma doença com alta incidência mundial. Desde 2018, é a segunda principal causa de mortes por câncer no mundo. Na Arábia Saudita, a incidência dessa doença vem aumentando na população mais jovem. Tanto fatores genéticos quanto de estilo de vida podem ter contribuído para o aumento da sua incidência e patogênese. O glutamato monossódico (MSG) é um intensificador de sabor de alimentos que pode ser encontrado em muitos alimentos comerciais e às vezes pode ser usado como um substituto do sal de cozinha. O MSG tem sido investigado por sua possível genotoxicidade, produzindo resultados controversos. Neste estudo, foram estudados o efeito do MSG na viabilidade celular e seu efeito na expressão dos genes APC, BECN1 e TP53 em linhas de células de câncer de cólon SW620 e SW480. TP53 é um gene supressor de tumor que atua modificando erros de DNA e/ou induzindo apoptose de células danificadas, estando os genes APC e BECN1 envolvidos no CRC e sendo importantes no crescimento celular e metástase. A viabilidade das células cancerosas foi analisada por meio do ensaio MTT, e os resultados mostraram um aumento significativo no número de células viáveis após 24 h de tratamento com MSG em diferentes concentrações (0,5; 1,0; 10; 50 e 100mM). Além disso, os resultados da expressão gênica mostraram um aumento significativo nos níveis de expressão de APC e BECN1 sob condições especificadas em ambas as linhagens celulares. Por outro lado, TP53 mostrou uma diminuição significativa na expressão em células SW620. Assim, pode-se concluir que, possivelmente, o MSG confere um efeito pró-proliferativo às células CRC.

Alterations in APC, BECN1, and TP53 gene expression levels in colon cancer cells caused by monosodium glutamate

Abstract Colorectal cancer (CRC) is a disease with high incidence worldwide. As of 2018, it is the second leading cause of cancer deaths in the world. In Saudi Arabia, the incidence of this disease has been increasing in the younger population. Both genetic and lifestyle factors may have contributed to its increased incidence and pathogenesis. Monosodium glutamate (MSG) is a food flavor enhancer that can be found in many commercial foods, and it can sometimes be used as a substitute to table salt. MSG has been investigated for its possible genotoxicity, yielding controversial results. In the present study, the effect of MSG on cell viability and its effect on expression of APC, BECN1, and TP53 genes in SW620 and SW480 colon cancer cell lines were studied. TP53 is a tumor suppressor gene that functions in modifying DNA errors and/or inducing apoptosis of damaged cells, and both APC and BECN1 genes are involved in CRC and are of importance in cellular growth and metastasis. Cancer cell viability was analyzed using MTT assay, and the results showed a significant increase in the number of viable cells after 24 h of treatment with MSG with different concentrations (0.5, 1.0, 10, 50, and 100mM). Moreover, gene expression results showed a significant increase in the expression levels of APC and BECN1 under specified conditions in both cell lines; conversely, TP53 showed a significant decrease in expression in SW620 cells. Thus, it can be concluded that MSG possibly confers a pro-proliferative effect on CRC cells.

Resumo O câncer colorretal (CCR) é uma doença com alta incidência mundial. Desde 2018, é a segunda principal causa de mortes por câncer no mundo. Na Arábia Saudita, a incidência dessa doença vem aumentando na população mais jovem. Tanto fatores genéticos quanto de estilo de vida podem ter contribuído para o aumento da sua incidência e patogênese. O glutamato monossódico (MSG) é um intensificador de sabor de alimentos que pode ser encontrado em muitos alimentos comerciais e às vezes pode ser usado como um substituto do sal de cozinha. O MSG tem sido investigado por sua possível genotoxicidade, produzindo resultados controversos. Neste estudo, foram estudados o efeito do MSG na viabilidade celular e seu efeito na expressão dos genes APC, BECN1 e TP53 em linhas de células de câncer de cólon SW620 e SW480. TP53 é um gene supressor de tumor que atua modificando erros de DNA e/ou induzindo apoptose de células danificadas, estando os genes APC e BECN1 envolvidos no CRC e sendo importantes no crescimento celular e metástase. A viabilidade das células cancerosas foi analisada por meio do ensaio MTT, e os resultados mostraram um aumento significativo no número de células viáveis após 24 h de tratamento com MSG em diferentes concentrações (0,5; 1,0; 10; 50 e 100mM). Além disso, os resultados da expressão gênica mostraram um aumento significativo nos níveis de expressão de APC e BECN1 sob condições especificadas em ambas as linhagens celulares. Por outro lado, TP53 mostrou uma diminuição significativa na expressão em células SW620. Assim, pode-se concluir que, possivelmente, o MSG confere um efeito pró-proliferativo às células CRC.

Alterations in APC, BECN1, and TP53 gene expression levels in colon cancer cells caused by monosodium glutamate / Alterações nos níveis de expressão gênica APC, BECN1 e TP53 em células de câncer de cólon causadas por glutamato monossódico

Colorectal cancer (CRC) is a disease with high incidence worldwide. As of 2018, it is the second leading cause of cancer deaths in the world. In Saudi Arabia, the incidence of this disease has been increasing in the younger population. Both genetic and lifestyle factors may have contributed to its increased incidence and pathogenesis. Monosodium glutamate (MSG) is a food flavor enhancer that can be found in many commercial foods, and it can sometimes be used as a substitute to table salt. MSG has been investigated for its possible genotoxicity, yielding controversial results. In the present study, the effect of MSG on cell viability and its effect on expression of APC, BECN1, and TP53 genes in SW620 and SW480 colon cancer cell lines were studied. TP53 is a tumor suppressor gene that functions in modifying DNA errors and/or inducing apoptosis of damaged cells, and both APC and BECN1 genes are involved in CRC and are of importance in cellular growth and metastasis. Cancer cell viability was analyzed using MTT assay, and the results showed a significant increase in the number of viable cells after 24h of treatment with MSG with different concentrations (0.5, 1.0, 10, 50, and 100mM). Moreover, gene expression results showed a significant increase in the expression levels of APC and BECN1 under specified conditions in both cell lines; conversely, TP53 showed a significant decrease in expression in SW620 cells. Thus, it can be concluded that MSG possibly confers a pro-proliferative effect on CRC cells.(AU)

O câncer colorretal (CCR) é uma doença com alta incidência mundial. Desde 2018, é a segunda principal causa de mortes por câncer no mundo. Na Arábia Saudita, a incidência dessa doença vem aumentando na população mais jovem. Tanto fatores genéticos quanto de estilo de vida podem ter contribuído para o aumento da sua incidência e patogênese. O glutamato monossódico (MSG) é um intensificador de sabor de alimentos que pode ser encontrado em muitos alimentos comerciais e às vezes pode ser usado como um substituto do sal de cozinha. O MSG tem sido investigado por sua possível genotoxicidade, produzindo resultados controversos. Neste estudo, foram estudados o efeito do MSG na viabilidade celular e seu efeito na expressão dos genes APC, BECN1 e TP53 em linhas de células de câncer de cólon SW620 e SW480. TP53 é um gene supressor de tumor que atua modificando erros de DNA e/ou induzindo apoptose de células danificadas, estando os genes APC e BECN1 envolvidos no CRC e sendo importantes no crescimento celular e metástase. A viabilidade das células cancerosas foi analisada por meio do ensaio MTT, e os resultados mostraram um aumento significativo no número de células viáveis após 24 h de tratamento com MSG em diferentes concentrações (0,5; 1,0; 10; 50 e 100mM). Além disso, os resultados da expressão gênica mostraram um aumento significativo nos níveis de expressão de APC e BECN1 sob condições especificadas em ambas as linhagens celulares. Por outro lado, TP53 mostrou uma diminuição significativa na expressão em células SW620. Assim, pode-se concluir que, possivelmente, o MSG confere um efeito pró-proliferativo às células CRC.(AU)

Mutational evaluation of TP53 gene in the canine hepatocellular carcinoma: a comparative approach

Os carcinomas hepatocelulares (CHC) representam uma parte importante das doenças hepáticas em cães, correspondendo a mais de 50% das neoplasias primárias do fígado nesta espécie. O CHC afeta, principalmente, cães machos com mais de 10 anos de idade, apresentando prognóstico ruim em pacientes não elegíveis para cirurgia. Nos últimos anos, os estudos em oncologia comparada têm adquirido grande importância, uma vez que cães e humanos compartilham diversas características celulares e moleculares. Em humanos, o CHC é associado às lesões hepáticas crônicas, causadas por infecções virais (hepatites C e B), doença hepática gordurosa (alcoólica e não alcoólica), intoxicações crônicas (medicamentos, micotoxinas, etc.), dentre outras. O consumo da aflatoxina B1 (AFB1) está associado a uma mutação especifica no códon 249 do gene TP53, ocasionando o CHC em uma parcela dos pacientes expostos à esta micotoxina. Como os cães não apresentam hepatites virais crônicas ou doenças gordurosas hepáticas, fatores ambientais e alimentares, como a possível presença de aflatoxina B1 nas rações, podem estar diretamente relacionados à etiologia do CHC nesta espécie. Assim, inicialmente este estudo realizou uma revisão de literatura comparada sobre os aspectos epidemiológicos, clinicopatológicos e anatomopatológicos do CHC em cães e humanos. Posteriormente, avaliou-se a presença de mutações no gene TP53 em amostras de CHC canino (n=24), com o objetivo de determinar uma possível associação da AFB1 na hepatocarcinogênese. Os dados clínico-epidemiológicos observados nos CHCs caninos apresentaram-se dentro do relatado na literatura. No entanto, não foram observadas mutações no gene TP53 ou imunoexpressão de p53. Assim, devido à ausência de mutações no gene TP53 nas amostras analisadas, a participação da AFB1 como fator etiológico no CHC permanece em aberto.

Hepatocellular carcinomas (HCC) represent an important part of hepatic diseases in dogs, correspond to more than 50% of primary neoplasms of the liver in this species. HCC affects, mainly, male dogs over 10-years-old, presenting poor prognosis in patients not suitable for surgery. Latest years, studies about comparative oncology have acquired great importance, since dogs and humans share diverse cellular and molecular features. In humans, HCC is associated with chronic liver injuries, caused by viral infections (hepatitis C and B), fatty liver disease (alcoholic and non-alcoholic), chronic intoxication (drugs, mycotoxins, etc.), among others. The consumption of aflatoxin B1 (AFB1) is associated with a specific mutation in codon 249 of the TP53 gene, causing HCC in part of the patients exposed to this mycotoxin. In case that dogs do not present chronic viral hepatitis or fatty liver diseases, environmental and feeding factors, such as the possible presence of aflatoxin B1 in pet food, may be directly related to the etiology of HCC in this species. Firstly, this study performed a comparative literature review of epidemiological, clinicopathological and anatomo-pathological aspects of HCC in dogs and humans. Subsequently, the presence of mutations in the TP53 gene were evaluated in canine HCC samples (n = 24), in order to determine a possible association of AFB1 in hepatocarcinogenesis. Clinical-epidemiological data observed in canine HCC are in agree with the literature reviewed. However, mutations in the TP53 gene or p53 immunoexpression were not observed. Thus, due to the absence of mutations in the TP53 gene in the analyzed samples, the participation of AFB1 as an etiological factor in HCC remains open.

Neoplasias diagnosticadas em caninos na região sul do Rio Grande do Sul entre 2000-2017: correlação histoquímica, imuno-histoquímica e variações genéticas

O aumento dos casos de neoplasias em animais domésticos é um problema crescente na prática veterinária e importante causa de morte em diversas espécies, principalmente caninos e felinos. Dentre estas neoplasias os tumores de mama e os tumores de células redondas como linfoma e tumor venéreo transmissível (TVT), são frequentemente diagnosticados na área de influência do Laboratório Regional de Diagnóstico da Faculdade de Veterinária da Universidade Federal de Pelotas (LRD / UFPel). São, portanto, incluídos nesta tese três trabalhos científicos. No primeiro foi realizado um estudo retrospectivo de linfomas caninos diagnosticados no LRD / UFPel entre 2000 e 2017, para determinar sua epidemiologia e distribuição anatômica, e avaliar os aspectos histopatológicos e imuno-histoquímicos de cada caso, de acordo com a classificação de Kiel adaptada. Linfoma foi diagnosticado em 77 cães. Em relação à classificação anatômica, a forma multicêntrica foi a mais prevalente, representando 71,4% (55/77) dos diagnósticos. Nos 40 casos em que a imunofenotipagem foi realizada, os linfomas de células B representaram 62,5% dos diagnósticos (25/40), enquanto os linfomas de células T corresponderam a 37,5% dos diagnósticos (15/40). O grau de malignidade de acordo com a classificação de Kiel modificada foi baixo em 35% dos linfomas (14/40) e alto em 65% dos casos (26/40). A forma multicêntrica foi mais frequente na região de influência do LRD / UFPel. No segundo trabalho foi realizado um estudo molecular para identificação de mutações nos éxons 7 e 8 no gene TP53 em tumores de mama em 20 cães fêmea de diferentes raças ou misturados não foram encontradas alterações na sequência dos mesmos e suas regiões intrônicas limítrofes. O sequenciamento dos demais éxons e regiões intrônicas bem como a ampliação do número de cães analisados podem revelar alterações não detectadas aqui, demonstrando a importância de expandir o presente estudo. No terceiro artigo foi demonstrado que a IHQ é uma ferramenta importante para diferenciar o TVT canino de outros tumores de células redondas.

The increase in the incidence of tumors in domestic animals is a growing concern in veterinary practice and an important cause of death in several species, mainly dogs and cats. Among these neoplasms, breast cancer and round cell tumors such as lymphoma and transmissible venereal tumor (TVT) are frequently diagnosed in the area of influence of the Regional Diagnostic Laboratory of the Faculty of Veterinary Medicine of the Federal University of Pelotas (LRD / UFPel). Therefore, three scientific papers were included in this thesis. In the first, a retrospective study of canine lymphomas diagnosed in the LRD / UFPel between 2000 and 2017 was carried out to determine their epidemiology and anatomical distribution, and to evaluate the histopathological and immunohistochemical aspects of these lymphomas, according to the modified Kiel classification. Lymphoma was observed in 77 dogs. The multicentric form was the most prevalent, representing 71.4% (55/77) of the diagnoses. In 40 cases immunophenotyping was performed, and B-cell lymphomas accounted for 62.5% of the diagnoses (25/40), while T-cell lymphomas corresponded to 37.5% of the diagnoses (15/40). The degree of malignancy according to the modified Kiel classification was low in 35% of lymphomas (14/40) and high in 65% of cases (26/40). The multicentric form was more frequent in the region of influence of the LRD / UFPel. In a second paper, a molecular study was carried out to identify mutations in exons 7 and 8 in the TP53 gene in canine mammary tumors. Twenty mammary tumors of mixed breed female dogs were analyzed.The sequencing of the other exons and intron regions as well as the increase in the number of dogs analyzed may reveal alterations not detected here, demonstrating the importance of expanding the present study. IHQ is an important tool for differentiating canine TVT from other round cell tumors.

Relationship between Helicobacter pylori detection and an increased risk of infection in childhood

The risk of developing gastric cancer is believed to be related to differences among Helicobacter pylori strains and the inflammatory responses mediated by host genetic factors. H. pylori infection is acquired at an early age and in the absence of appropriate antibiotic therapy, it generally persists for life. Tp53 gene regulates the transcription of several cytokines and chemokines involved in innate immunity and its action may be influenced by the presence of different H. pylori strains. The present study aimed to detect H. pylori in pediatric patients, to access Tp53 polymorphism at codon 72 and to correlate such findings with age and histopathological results. Three hundred and forty-two patients were analyzed. DNA from their gastric biopsies was extracted and the detection of H. pylori was performed through polymerase chain reaction assays, urease test and histopathologic examination. Allelic discrimination of SNP rs1042522 (Tp53) was performed by real-time polymerase chain reaction. Our results suggest a possible relationship between the presence of H. pylori and chronic gastritis in children and young patients, and showed a significant association between ageing and positivity for H. pylori. It was verified that patients aged < 10 years were 1.3 times more likely to have infection by H. pylori when compared with those aged > 10 years. Finally, no association was found between Tp53 polymorphisms and the presence of H. pylori.(AU)

BIOMARCADORES MOLECULARES PROGNÓSTICOS EM CADELAS COM NEOPLASIA MAMÁRIA: ESTUDO DOS GENES BRCA2, PGAM1 E ABCB1

O estudo comparativo de tumores mamários em cães e humanos é possível devido à similaridade compartilhada de processos biológicos e genética tumoral. Algumas proteínas, enzimas, RNAm e genes são utilizados como biomarcadores para diagnóstico precoce e para prognóstico do câncer. Assim, pesquisas de biomarcadores tumorais humanos com resultados promissores servem de base para o estudo de alvos moleculares em cães, visando a confirmação da importância destes biomarcadores também para o prognóstico na rotina clínica veterinária. Os genes BRCA2 e PGAM1 aparentam serem marcadores prognósticos promissores, assim como os genes ABCB1 e CBR1, marcadores terapêuticos de relevância para cadelas com neoplasias mamárias. O gene BRCA2 participa da manutenção da estabilidade do genoma, enquanto o gene PGAM1 atua na via glicolítica. O gene TP53 é sinalizado como regulador da via glicolítica atuando diretamente sobre o gene PGAM. O gene ABCB1 codifica a glicoproteína P (gp-P), associada a efeitos adversos e resistência a várias drogas, inclusive a quimioterápicos. Porém, além desta já conhecida característica, estudos também associam ABCB1 ao processo de carcinogênese. Outro gene associado à efeitos adversos ao tratamento é o CBR1, o qual codifica a enzima carbonil redutase 1, envolvida com a cardiotoxicidade associada ao quimioterápico doxorrubicina. O objetivo desse estudo é identificar mutações nos genes PGAM1, BRCA2, ABCB1 e CBR1, assim como a expressão do RNAm de PGAM1 e TP53 em neoplasias mamárias de cadelas, correlacionando com dados clínicos dos animais e características histopatológicas do tumor. Foram estudados 100 tumores mamários de 57 cadelas cujas cadeias mamárias extirpadas foram divididas em três amostras: uma para análise histopatológica; outra para identificação de mutações nos genes BRCA2, PGAM1, ABCB1; e a terceira para avaliação da expressão de RNAm de PGAM1 e TP53. Além disso, coletou-se amostra de sangue total de cada cadela para identificação de mutações nos genes BRCA2 e CBR1 no DNA constitutivo do indivíduo. Identificou-se uma alta frequência (97,9%, n = 47/48) de mutações germinativas no éxon 11 do BRCA2 de cadelas com tumores mamários. Um total de sete polimorfismos foi encontrado, dentre os quais três teriam potencial para alterar a função proteica. Em relação a PGAM1, nossos achados sustentam que a p53 regula negativamente via glicolítica através da interação com PGAM1, tendo em vista que a maioria dos carcinomas mamários caninos estudados (71,5%; n = 15/21) apresentaram níveis reduzidos de RNAm de PGAM1 e níveis normais de RNAm do TP53. Em relação ao gene ABCB1, cães da raça poodle com tumores mamários apresentaram uma frequência significativamente maior dos polimorfismos c.985T>A e c.3442A>G nos éxons 9 e 26, respectivamente, quando comparados as demais raças analisadas, tendo um risco 10 vezes maior de apresentar as variações encontradas. Considerando que cães da raça poodle estão predispostos ao desenvolvimento de tumores mamários, pode-se hipotetizar que os polimorfismos detectados neste estudo poderiam aumentar o risco de desenvolvimento de neoplasias mamárias em cães. Não foram encontradas variantes na região codificante do gene CBR1 nos animais analisados.

The comparative study of mammary tumors between dogs and humans is possible due a shared similarity of biological processes and tumor genetics. Some proteins, enzymes, mRNA and genes are used as biomarkers for early diagnosis and prognosis of cancer. Thus, human tumor biomarkers with promising results serve as the basis for the study of molecular targets also for dogs, aiming to confirm the importance of these biomarkers for prognosis in veterinary clinical routine. The BRCA2 and PGAM1 genes appear to be promising prognostic markers, as well as the ABCB1 and CBR1 genes, therapeutic markers for bitches with breast neoplasms. The BRCA2 gene plays a role in maintaining the stability of the genome, while the PGAM1 gene acts in the glycolytic pathway. The TP53 gene is a regulator of glycolytic pathway acting directly on PGAM gene. The ABCB1 gene encodes the P glycoprotein, associated with adverse effects and resistance to various drugs, including chemotherapeutic agents. However, in addition to this well-known feature, studies also associate ABCB1 with the carcinogenesis process. Another gene associated with adverse effects is CBR1, which encodes the enzyme carbonyl reductase 1, involved with the individual cardiotoxicity associated with some drugs, among them the chemotherapeutic doxorubicin. The aim of this study was to identify mutations in the genes PGAM1, BRCA2, ABCB1 and CBR1, as well as the expression of PGAM1 and TP53 mRNA in canine mammary tumors, correlating with animal clinic data and histopathological characteristics of the tumor. A total of 100 mammary tumors were studied from 57 bitches whose extirpated mammary chains. Samples were divided: one for histopathological analysis; other for identification of mutations in BRCA2, PGAM1, ABCB1 genes; and a third for evaluation of PGAM1 mRNA expression. In addition, whole blood samples were collected from each dog for identification of mutations in the BRCA2 and CBR1 genes in constitutive DNA. A high frequency (97.9%, n = 47/48) of germinative mutations in BRCA2 exon 11 from bitches with mammary tumors was identified. A total of seven polymorphisms were found, among which three would have potential to alter protein function. Regarding PGAM1, our findings support that p53 negatively regulates glycolytic pathway through the interaction with PGAM1, considering that the majority of canine mammary carcinomas studied (71.5%, n = 15/21) had reduced PGAM1 mRNA levels and normal TP53 mRNA levels. In relation to ABCB1 gene, poodle dogs with mammary tumors presented a significantly higher frequency of c.985T> A and c.3442A> G polymorphisms in exons 9 and 26, respectively, when compared to the other breeds analyzed, with a 10 times to present the variations found. Considering that poodle dogs are predisposed to the development of mammary tumors, it can be hypothesized that the polymorphisms detected in this study could increase the risk of developing mammary neoplasias in dogs. No variants were found in CBR1 coding region in the animals analyzed.

AVALIAÇÃO DOS MARCADORES MOLECULARES KRT19, CRYAB, EGFR E TP53 EM NEOPLASIAS MAMÁRIAS DE CADELAS E A UTILIZAÇÃO DESTES MARCADORES NA PESQUISA DE CÉLULAS TUMORAIS CIRCULANTES POR MEIO DE RT-PCR EM TEMPO REAL

A neoplasia mamária é a neoplasia mais comum em cadelas inteiras e apresenta elevado índice de metástase e mortalidade. Avanços nas técnicas de diagnóstico e na predição do prognóstico permitiram a detecção de células tumorais, disseminadas no sangue e em diferentes órgãos de pacientes oncológicos humanos. O objetivo deste estudo foi avaliar os marcadores KRT19, CRYAB, EGFR e TP53 como fatores preditivos de prognóstico em neoplasias mamárias caninas e avaliar a aplicabilidade da técnica de RT-PCR quantitativo e em tempo real na detecção de células tumorais circulantes, em sangue periférico de cadelas portadoras de carcinomas mamários em estudo clínico com amostras aleatórias e de conveniência, com o intuito de analisar o risco, precocemente, da ocorrência de metástases distantes. Foram utilizadas 47 amostras de neoplasias mamárias obtidas por biópsia excisional de 30 cadelas. Dentre os animais estudados, vinte e cinco foram avaliadas quanto à presença de células tumorais circulantes (CTC) no sangue, utilizandose os marcadores KRT19, CRYAB e EGFR. Na análise de amostras de tecido mamário neoplásico, a expressão do gene KRT19 apresentou correlação significativa e direta com o aumento da agressividade tumoral. A expressão do gene EGFR apresentou uma tendência à correlação inversa com o aumento da agressividade tumoral em amostras de carcinoma mamário de cadelas. A expressão dos genes CRYAB e TP53 não apresentou correlação significativa com o aumento da agressividade tumoral. Na amostragem de sangue, não foi possível detectar a presença de células tumorais circulantes com a utilização deste marcador. Portanto, estes resultados sugerem que o método utilizado não seja adequado para estudos clínicos com amostras de conveniência. Entretanto, mais estudos moleculares voltados para a Oncologia Veterinária são necessários para a confirmação dos achados deste estudo e para o aumento do conhecimento sobre as bases moleculares e os mecanismos chave associados aos tumores mamários caninos.

Breast cancer is the most common neoplasm in non-spayed female dogs showing a high rate of metastasis and mortality. Advances in diagnostic techniques and prognosis prediction enabled the detection of tumor cells scattered in blood and different organs of human cancer patients. The aim of this study was to evaluate the markers KRT19, CRYAB, EGFR and P53 as prognostic and predictive factors in canine mammary tumors; and evaluate the applicability of quantitative PCR and real-time to detect circulating tumor cells in peripheral blood of dogs with breast carcinoma in a clinical study with random and convenience samples in order to early detect the risk of distant metastasis development. Forty-seven samples of breast tumors obtained by excisional biopsy of 30 dogs were used. Twenty-five peripheral blood samples from the same animals were evaluated for the presence of circulating tumor cell (CTC) using the markers KRT19, CRYAB and EGFR. In the analysis of neoplastic breast tissues, KRT19 gene showed significant direct correlation with increasing tumor aggressiveness. The EGFR gene expression showed a tendency to an inverse correlation with increasing of tumor aggressiveness of canine mammary tumors. The expression of CRYAB and TP53 genes showed no significant correlation with increased tumor aggressiveness. In the blood sampling, was not possible to detect the presence of CTC. In this study, the method was considered was considered inadequate for a clinical study with convenience samples. However, more molecular studies focused on Veterinary Oncology are necessary in order to improve the knowledge on molecular basis of canine mammary tumors.