Qualidade de ovos comerciais oriundos de poedeiras tratadas com doxiciclina / Quality of commercial egg from laying hens treated with doxycycline / Calidad de huevos comerciales de gallinas ponedoras tratadas con doxiciclina

Doxiciclinaé um fármaco do grupo das tetraciclinas indicado para tratamento de diferentes doenças, em principal a coriza infecciosa. Entretanto, antimicrobianos do grupo das tetraciclinas tem capacidade de se ligarem e indisponibilizar minerais importantes para a formação dos ovos. O objetivo do projeto foi de avaliar a interferência da doxiciclina na qualidade de ovos comerciais. Realizou-se um estudo com 100 poedeiras Dekalb Brown®onde se avaliou a cor da gema, unidade Haugh, cor da casca, peso e espessura da casca. O delineamento adotado foi o inteiramente casualizadosem um esquema fatorial 2x2, resultando nos tratamentos: sem doxiciclina ao 5° dia; com doxiciclina ao 5° dia; sem doxiciclina ao 10° dia; com doxiciclina ao 10° dia. Coletou-se 4 ovos por repetição,totalizando 48 ovos analisado por tratamento em cada um dos períodos analisados. Não foram encontradas diferenças significativas entre os tratamentos para as variáveis de qualidade interna dos ovos (cor da gema e unidade Haugh). Para as variáveis de qualidade de casca, houve uma redução significativa dos níveis de amarelo com o uso de doxiciclina por 10 dias, além da redução do peso da casca e da espessura apical e equatorial da casca, principalmente no 10º dia e com o uso de doxiciclina. Conclui-se que o uso da doxiciclina não interfere na qualidade interna dos ovos, porém confere tonalidade acinzentada as cascas, e redução de peso e espessura das mesmas.(AU)

Doxycycline is a drug from the tetracycline group indicated for the treatment of different diseases, mainly infectious coryza. However, antimicrobials from the tetracycline group can bind and make minerals important for egg formation unavailable. The aim of this project is evaluated interference of doxycycline in quality of commercial egg. A study had carried out with 100 Dekalb Brown®laying hens where evaluated the yolk color, Haugh unit,color eggshell, weight and thickness eggshell. The delimitation had completely randomized in a 2x2 factorial scheme, resulting in treatments: without doxycycline at day 5; with doxycycline a day 5; without doxycycline at day 10; with doxycycline at day 10. Four eggs had gathered per replicate, totaling 48 eggs analyzed per treatment in each of the analyzed periods. No significant differences were found between treatments for internal egg quality variables (yolk color and Haugh unit). For the shell quality variables, there was a significant reduction in yellow levels with the use of doxycycline for 10 days, in addition to a reduction in shell weight and apical and equatorial shell thickness, mainly on the 10th day and with the use of doxycycline. It is concluded that the use of the doxycycline does not interfere in the internal quality of the eggs, but it gives a greyish tonality to the eggshells, and reduces their weight and thickness.(AU)

La doxiciclina es un fármaco del grupo de las tetraciclinas indicado para el tratamiento de diferentes enfermedades, principalmente el coriza infeccioso. Sin embargo, los antimicrobianos del grupo de las tetraciclinas tienen la capacidad de unirse y hacer que minerales importantes para la formación de huevos no estén disponibles. El objetivo de este proyecto es evaluar la interferencia de la doxiciclina en la calidad del huevo comercial. Se realizó un estudio con 100 gallinas ponedoras Dekalb Brown®donde se evaluó el color de la yema, unidad Haugh, color del cascarón, peso y grosor del cascarón. La delimitación tuvo completamente al azar en un esquema factorial 2x2,resultando tratamientos: sin doxiciclina en el día 5; con doxiciclina al día 5; sin doxiciclina el día 10; con doxiciclina el día 10. Se habían recolectado cuatro huevos por réplica, totalizando 48 huevos analizados por tratamiento en cada uno de los períodos analizados. No se encontraron diferencias significativas entre tratamientos para las variables de calidad interna del huevo (color de la yema y unidad Haugh). Para las variables de calidad de la cáscara, hubo una reducción significativa de los nivelesde amarillo con el uso de doxiciclina durante 10 días, además de una reducción del peso de la cáscara y del espesor apical y ecuatorial de la cáscara, principalmente al décimo día y con el uso de doxiciclina. Se concluye que el uso de la doxiciclina no interfiere en la calidad interna de los huevos, pero da una tonalidad grisácea a las cáscaras, y reduce su peso y grosor.(AU)

Atovaquone, chloroquine, primaquine, quinine and tetracycline: antiproliferative effects of relevant antimalarials on Neospora caninum / Atovaquona, cloroquina, primaquina, quinino e tetraciclina: efeitos antiproliferativos de antimaláricos relevantes em Neospora caninum

Neospora caninum is an apicomplexan parasite that causes abortion in cattle, resulting in significant economic losses. There is no commercial treatment for neosporosis, and drug repositioning is a fast strategy to test possible candidates against N. caninum. In this article, we describe the effects of atovaquone, chloroquine, quinine, primaquine and tetracycline on N. caninum proliferation. The IC50 concentrations in N. caninum were compared to the current information based on previous studies for Plasmodium and Toxoplasma gondii, correlating to the described mechanisms of action of each tested drug. The inhibitory patterns indicate similarities and differences among N. caninum, Plasmodium and T. gondii. For example, atovaquone demonstrates high antiparasitic activity in all the analyzed models, while chloroquine does not inhibit N. caninum. On the other hand, tetracycline is effective against Plasmodium and N. caninum, despite its low activity in T. gondii models. The repurposing of antimalarial drugs in N. caninum is a fast and inexpensive way to develop novel formulations using well-established compounds.(AU)

Neospora caninum é um parasita Apicomplexa relacionado a abortos no gado bovino, que resultam em impactos econômicos. Não há tratamento comercial para neosporosis e o reposicionamento de drogas indica uma estratégia rápida para testar candidatos anti-N. caninum. Neste artigo, são descritos os efeitos da atovaquona, cloroquina, quinino, primaquine e tetraciclina na proliferação de N. caninum. As concentrações IC50 em N. caninum foram comparadas com a informação disponível, baseada em estudos publicados previamente para Plasmodium e Toxoplasma gondii, incluindo a correlação com os mecanismos de ação descritos para cada droga testada. Os padrões de inibição indicam pontos de similaridades e diferenças entre N. caninum, Plasmodium e T. gondii. Por exemplo, a atovaquona demonstra uma alta atividade antiparasitária em todos os modelos testados, enquanto a cloroquina não inibe N. caninum. Por outro lado, a tetraciclina é efetiva contra Plasmodium e N. caninum, em contraste com a baixa atividade em modelos de T. gondii. O reposicionamento de drogas antimaláricas em N. caninum é uma forma rápida e de baixo custo para o desenvolvimento de novas formulações que usam compostos bem estabelecidos.(AU)

Anti-Ehrlichia properties of the dichloromethane fraction of Ageratum conyzoides associated with doxycycline: In vitro study / Propriedades anti-Ehrlichia da fração diclorometânica de Ageratum conyzoides associada com doxiciclina: estudo in vitro

The increasing number of cases of canine ehrlichiosis caused by Ehrlichia canis in hospitals and veterinary clinics has demonstrated the need for a new drug protocol for this disease. Doxycycline is used to treat ehrlichiosis, but the resistance of the microorganism to this treatment protocol, as well as the various side effects to the animals, has become a concern. Several studies have shown a positive interaction with extracts of plants and drugs, which allow for the reduction of the concentration necessary to produce the desired effect, minimizing adverse effects. This study determined the efficiency of the combination of the dichloromethane (DCM) fraction of Ageratum conyzoides L. with anti-Ehrlichia activity and doxycycline by using the checkerboard assay. Plant material was collected in São Luís, northeastern Brazil, followed by extraction in MeOH: H2O (8:2) and partitioning of the DCM fraction. After determining the Minimum Inhibitory Concentration (MIC) of the fraction under study against DH82 cells infected with Ehrlichia canis, it was combined with doxycycline to derive the Fractional Inhibitory Concentration Index (CIF Index). A reduction of 5.83 times the doxycycline minimum inhibitory concentration was observed, showing that this fraction of A. conyzoides composed predominantly by the class of lignans, identified by mass spectrometry notably intensified the activity of doxycycline against E. canis, resulting in a synergistic effect.

O crescente número de casos de erliquiose canina por Ehrlichia canis em hospitais e clínicas veterinárias tem demonstrado a necessidade de um novo protocolo de medicamentos para essa doença. A doxiciclina é usada para tratar a erliquiose, mas a resistência do microrganismo a esse protocolo de tratamento, bem como os diversos efeitos colaterais para os animais, tornou-se uma preocupação. Vários estudos têm demonstrado interação positiva com extratos de plantas e fármacos, que permitem a redução da concentração necessária para produzir o efeito desejado, minimizando os efeitos adversos. Este estudo determinou a eficiência da combinação da fração diclorometânica (DCM) de Ageratum conyzoides L. com atividade anti-Ehrlichia canis associada com doxiciclina por meio do ensaio de Checkerboard. O material vegetal foi coletado em São Luís, Maranhão, nordeste do Brasil, seguido pela extração em MeOH:H2O (8:2) e partição da fração diclorometânica. Após a determinação da Concentração Inibitória Mínima (CIM) da fração em estudo frente às células DH82 infectadas com Ehrlichia canis, a mesma foi combinada com a doxiciclina para derivação do Índice de Concentração Inibitória da Fração (Índice CIF). Observou-se uma redução de 5,83 vezes a concentração inibitória mínima da doxiciclina mostrando que esta fração de A. conyzoides, composta predominantemente por lignanas identificadas por espectrometria de massas, notavelmente intensificou a atividade desse fármaco contra E. canis, resultando em um efeito sinérgico.

Anti-Ehrlichia properties of the dichloromethane fraction of Ageratum conyzoides associated with doxycycline: In vitro study / Propriedades anti-Ehrlichia da fração diclorometânica de Ageratum conyzoides associada com doxiciclina: estudo in vitro

ABSTRACT: The increasing number of cases of canine ehrlichiosis caused by Ehrlichia canis in hospitals and veterinary clinics has demonstrated the need for a new drug protocol for this disease. Doxycycline is used to treat ehrlichiosis, but the resistance of the microorganism to this treatment protocol, as well as the various side effects to the animals, has become a concern. Several studies have shown a positive interaction with extracts of plants and drugs, which allow for the reduction of the concentration necessary to produce the desired effect, minimizing adverse effects. This study determined the efficiency of the combination of the dichloromethane (DCM) fraction of Ageratum conyzoides L. with anti-Ehrlichia activity and doxycycline by using the checkerboard assay. Plant material was collected in São Luís, northeastern Brazil, followed by extraction in MeOH: H2O (8:2) and partitioning of the DCM fraction. After determining the Minimum Inhibitory Concentration (MIC) of the fraction under study against DH82 cells infected with Ehrlichia canis, it was combined with doxycycline to derive the Fractional Inhibitory Concentration Index (CIF Index). A reduction of 5.83 times the doxycycline minimum inhibitory concentration was observed, showing that this fraction of A. conyzoides composed predominantly by the class of lignans, identified by mass spectrometry notably intensified the activity of doxycycline against E. canis, resulting in a synergistic effect.

RESUMO: O crescente número de casos de erliquiose canina por Ehrlichia canis em hospitais e clínicas veterinárias tem demonstrado a necessidade de um novo protocolo de medicamentos para essa doença. A doxiciclina é usada para tratar a erliquiose, mas a resistência do microrganismo a esse protocolo de tratamento, bem como os diversos efeitos colaterais para os animais, tornou-se uma preocupação. Vários estudos têm demonstrado interação positiva com extratos de plantas e fármacos, que permitem a redução da concentração necessária para produzir o efeito desejado, minimizando os efeitos adversos. Este estudo determinou a eficiência da combinação da fração diclorometânica (DCM) de Ageratum conyzoides L. com atividade anti-Ehrlichia canis associada com doxiciclina por meio do ensaio de Checkerboard. O material vegetal foi coletado em São Luís, Maranhão, nordeste do Brasil, seguido pela extração em MeOH:H2O (8:2) e partição da fração diclorometânica. Após a determinação da Concentração Inibitória Mínima (CIM) da fração em estudo frente às células DH82 infectadas com Ehrlichia canis, a mesma foi combinada com a doxiciclina para derivação do Índice de Concentração Inibitória da Fração (Índice CIF). Observou-se uma redução de 5,83 vezes a concentração inibitória mínima da doxiciclina mostrando que esta fração de A. conyzoides, composta predominantemente por lignanas identificadas por espectrometria de massas, notavelmente intensificou a atividade desse fármaco contra E. canis, resultando em um efeito sinérgico.

Anti-Ehrlichia properties of the dichloromethane fraction of Ageratum conyzoides associated with doxycycline: In vitro study / Propriedades anti-Ehrlichia da fração diclorometânica de Ageratum conyzoides associada com doxiciclina: estudo in vitro

The increasing number of cases of canine ehrlichiosis caused by Ehrlichia canis in hospitals and veterinary clinics has demonstrated the need for a new drug protocol for this disease. Doxycycline is used to treat ehrlichiosis, but the resistance of the microorganism to this treatment protocol, as well as the various side effects to the animals, has become a concern. Several studies have shown a positive interaction with extracts of plants and drugs, which allow for the reduction of the concentration necessary to produce the desired effect, minimizing adverse effects. This study determined the efficiency of the combination of the dichloromethane (DCM) fraction of Ageratum conyzoides L. with anti-Ehrlichia activity and doxycycline by using the checkerboard assay. Plant material was collected in São Luís, northeastern Brazil, followed by extraction in MeOH: H2O (8:2) and partitioning of the DCM fraction. After determining the Minimum Inhibitory Concentration (MIC) of the fraction under study against DH82 cells infected with Ehrlichia canis, it was combined with doxycycline to derive the Fractional Inhibitory Concentration Index (CIF Index). A reduction of 5.83 times the doxycycline minimum inhibitory concentration was observed, showing that this fraction of A. conyzoides composed predominantly by the class of lignans, identified by mass spectrometry notably intensified the activity of doxycycline against E. canis, resulting in a synergistic effect.(AU)

O crescente número de casos de erliquiose canina por Ehrlichia canis em hospitais e clínicas veterinárias tem demonstrado a necessidade de um novo protocolo de medicamentos para essa doença. A doxiciclina é usada para tratar a erliquiose, mas a resistência do microrganismo a esse protocolo de tratamento, bem como os diversos efeitos colaterais para os animais, tornou-se uma preocupação. Vários estudos têm demonstrado interação positiva com extratos de plantas e fármacos, que permitem a redução da concentração necessária para produzir o efeito desejado, minimizando os efeitos adversos. Este estudo determinou a eficiência da combinação da fração diclorometânica (DCM) de Ageratum conyzoides L. com atividade anti-Ehrlichia canis associada com doxiciclina por meio do ensaio de Checkerboard. O material vegetal foi coletado em São Luís, Maranhão, nordeste do Brasil, seguido pela extração em MeOH:H2O (8:2) e partição da fração diclorometânica. Após a determinação da Concentração Inibitória Mínima (CIM) da fração em estudo frente às células DH82 infectadas com Ehrlichia canis, a mesma foi combinada com a doxiciclina para derivação do Índice de Concentração Inibitória da Fração (Índice CIF). Observou-se uma redução de 5,83 vezes a concentração inibitória mínima da doxiciclina mostrando que esta fração de A. conyzoides, composta predominantemente por lignanas identificadas por espectrometria de massas, notavelmente intensificou a atividade desse fármaco contra E. canis, resultando em um efeito sinérgico.(AU)

In-house validation for multi-residue analysis of tetracycline in cow milk by HPLC with UV detection / Validação intralaboratorial para análise múltipla dos resíduos de tetraciclina em leite bovino por cromatografia líquida de alta eficiência com detecção UV

The indiscriminate use of antibiotics in dairy cattle without complying with the waiting period results in residual contamination, whose effective control in produced milk requires validated methods toensure analytical results. The aim of this study was to optimize and validate the HPLC-UV/VIS method at 365 nm for analyzingthe tetracycline in pasteurized cow milk in accordance with the European Community (2002/657/EC). Spiked milk with analytes (oxytetracycline, tetracycline, doxycycline, and chlortetracycline) was submitted to deproteinization and cleaning by a C18 solid-phase column and analyzed by HPLC using a gradient system with 0.01 mol L?1 oxalic acid-acetonitrile-triethylamine (90:9.9:0.1) and acetonitrile on a reverse phase (C18) column. Accuracy and precision were assessed by adding analytes to levels of 0.5, 1, and 1.5 times the permissible maximum limit allowed in Brazil. The method presented selectivity with a decision limit (CC?) and detection capability (CC?) ranging from 114.2 to 143.7 and from 129.3 to 188.7 µg kg?1, respectively. The recovery of tetracyclines was higher than 82.5% with a precision of 7.1%, demonstrating theefficiency in determining tetracycline residues in cow milk.

O uso indiscriminado de antibiótico em gado leiteiro, sem cumprimento do período de carência, resulta em contaminação residual, cujo controle efetivo no leite produzido requer métodos validados que garantam os resultados analíticos. O estudo visou otimizar e validar o método de CLAE-UV/VIS a 365 nm para análise de tetraciclina em leite bovino pasteurizado em conformidade com a Comunidade Europeia (2002/657/EC). O leite fortificado com analitos (oxitetraciclina, tetraciclina, doxiciclina e clortetraciclina) foi submetido à extração por desproteinização e limpeza por coluna de fase sólida C18 e submetido à análise por CLAE empregando sistema gradiente com 0,01 mol L-1 de ácido oxálico-acetonitrila-trietilamina (90:9,9:0,1) e acetonitrila, em coluna de fase reversa (C18). A exatidão e precisão foram avaliadas adicionando o analitos em níveis de 0,5, 1 e 1,5 vezes o limite máximo permitido no Brasil. O método apresentou seletividade com limite de decisão (CC?) e capacidade de detecção (CC?) variando de 114,2 a 143,7 e 129,3 a 188,7 µg kg-1, respectivamente. A recuperação de tetraciclinas foi superior a 82,5% e a precisão de 7,1%, demonstrando eficiência para a determinação de resíduos de tetraciclina em leite bovino.

In-house validation for multi-residue analysis of tetracycline in cow milk by HPLC with UV detection / Validação intralaboratorial para análise múltipla dos resíduos de tetraciclina em leite bovino por cromatografia líquida de alta eficiência com detecção UV

The indiscriminate use of antibiotics in dairy cattle without complying with the waiting period results in residual contamination, whose effective control in produced milk requires validated methods toensure analytical results. The aim of this study was to optimize and validate the HPLC-UV/VIS method at 365 nm for analyzingthe tetracycline in pasteurized cow milk in accordance with the European Community (2002/657/EC). Spiked milk with analytes (oxytetracycline, tetracycline, doxycycline, and chlortetracycline) was submitted to deproteinization and cleaning by a C18 solid-phase column and analyzed by HPLC using a gradient system with 0.01 mol L?1 oxalic acid-acetonitrile-triethylamine (90:9.9:0.1) and acetonitrile on a reverse phase (C18) column. Accuracy and precision were assessed by adding analytes to levels of 0.5, 1, and 1.5 times the permissible maximum limit allowed in Brazil. The method presented selectivity with a decision limit (CC?) and detection capability (CC?) ranging from 114.2 to 143.7 and from 129.3 to 188.7 µg kg?1, respectively. The recovery of tetracyclines was higher than 82.5% with a precision of 7.1%, demonstrating theefficiency in determining tetracycline residues in cow milk.(AU)

O uso indiscriminado de antibiótico em gado leiteiro, sem cumprimento do período de carência, resulta em contaminação residual, cujo controle efetivo no leite produzido requer métodos validados que garantam os resultados analíticos. O estudo visou otimizar e validar o método de CLAE-UV/VIS a 365 nm para análise de tetraciclina em leite bovino pasteurizado em conformidade com a Comunidade Europeia (2002/657/EC). O leite fortificado com analitos (oxitetraciclina, tetraciclina, doxiciclina e clortetraciclina) foi submetido à extração por desproteinização e limpeza por coluna de fase sólida C18 e submetido à análise por CLAE empregando sistema gradiente com 0,01 mol L-1 de ácido oxálico-acetonitrila-trietilamina (90:9,9:0,1) e acetonitrila, em coluna de fase reversa (C18). A exatidão e precisão foram avaliadas adicionando o analitos em níveis de 0,5, 1 e 1,5 vezes o limite máximo permitido no Brasil. O método apresentou seletividade com limite de decisão (CC?) e capacidade de detecção (CC?) variando de 114,2 a 143,7 e 129,3 a 188,7 µg kg-1, respectivamente. A recuperação de tetraciclinas foi superior a 82,5% e a precisão de 7,1%, demonstrando eficiência para a determinação de resíduos de tetraciclina em leite bovino.(AU)

Resistência antimicrobiana em Enterococcus faecalis e Enterococcus faecium isolados de carcaças de frango / Antimicrobial Resistance of Enterococcus faecalis and Enterococcus faecium isolated from poultry carcasses

O objetivo deste trabalho foi realizar o isolamento e analisar o perfil de resistência antimicrobiana de Enterococcus de carcaças de frango resfriadas e congeladas comercializadas no Distrito Federal, detectando genes de resistência antimicrobiana e identificando as espécies Enterococcus faecalis e Enterococcus faecium por reação polimerase em cadeia. Foram analisadas 100 carcaças de frangos, das quais foram isoladas 50 cepas de Enterococcus spp., sendo 42% de E. faecalis e 2% de E. faecium. O teste de susceptibilidade antimicrobiana demonstrou que todas as cepas isoladas apresentaram resistência a pelo menos um antimicrobiano, dos quais 90,47% das cepas de E. faecalis, 100% das cepas de E. Faecium e 82,14% dos Enterococcus spp. apresentaram resistência à Tetraciclina; 80,95% das cepas de E. faecalis e 35,71% das cepas de Enterococcus spp. foram resistentes à Eritromicina; 39,28% dos Enterococcus spp. e 23,80% dos E. faecalis à Ciprofloxacina e 28,57% dos E. faecalis apresentaram resistência ao Cloranfenicol. Foram detectados os genes de resistência antimicrobiana erm(B), vanC-1, aph(3')-llla, ant(6)-la, vanB, vanA, aac(6')-le-aph(2'')-la, erm(A) e tet(M) - este último mais frequente. Estes resultados sugerem sérios problemas para a Saúde Pública, uma vez que esses microrganismos podem possuir a capacidade de transmitir genes de resistência antimicrobiana para outros microrganismos presentes na microbiota intestinal de humanos e animais, podendo inviabilizar o uso destas drogas para tratamentos clínicos.(AU)

The aim of this study was to isolate and analyze the antimicrobial profile resistance of Enterococcus from cooled and frozen poultry carcasses commercialized at the Federal District area, detecting the antimicrobial resistance genes and identifying Enterococcus faecalis and Enterococcus faecium by polymerase chain reaction. One hundred poultry carcasses were analyzed and 50 strains of Enterococcus spp. were isolated, of which 42% were E. faecalis and 2% E. faecium. The antimicrobial susceptibility test showed that all isolates were resistant to at least one antibiotic; 90,47% of E. faecalis, 100% of E. faecium and 82,14% of Enterococcus spp. were resistant to Tetracycline; 80,95% of E. faecalis and 35,71% of Enterococcus spp. strains were resistant to Erythromycin; 39,28% of Enterococcus spp. and 23,80% of E. faecalis to Ciprofloxacin, and 28,57% of E. faecalis were resistant to Chloramphenicol. There were detected erm(B), vanC-1, aph(3')-llla, ant(6)-la, vanB, vanA, aac(6')-le-aph(2'')-la, erm(A) and tet(M) resistance genes, the last one most often verified. The results might suggest problems for public health due the high resistance, since these microorganisms have ability to transmit genes for antimicrobial resistance to others in the intestinal tract of humans and animals. Thus, the use of these drugs for clinical treatment could be hindered.(AU)

Tratamento Eletroquímico do Antibiótico Cloridrato de Tetraciclina em Efluente Sintético

A acumulação de determinados poluentes orgânicos no meio ambiente tem se tornado um aspecto ambiental mundialmente relevante, isto em virtude da ampla utilização destes compostos e de sua persistência a biodegradação. O fato de muitos destes poluentes orgânicos apresentarem resistência à degradação bioquímica leva à procura de técnicas alternativas. Neste contexto, os tratamentos eletroquímicos, em particular a oxidação anódica, podem ser uma alternativa promissora para a degradação de tais compostos. O presente trabalho teve como principal objetivo avaliar o tratamento de efluente sintético quanto a degradação do fármaco cloridrato de tetraciclina, antibiótico, muito utilizado na medicina humana e veterinária, por meio do sistema de oxidação anódica, aplicando como ânodo o eletrodo de Ti/Ru0,3Ti0,7O2. Os ensaios de degradação eletroquímica do cloridrato de tetraciclina foram realizados em sistema com agitação, numa célula eletroquímica que contém um eletrodo dimensionalmente estável, como ânodo, como cátodo uma placa de titânio porosa e um eletrodo de Ag/AgCl saturado como referência, com capacidade de 1000 mL de solução. O delineamento estatístico aplicado aos ensaios de degradação do fármaco foi o Delineamento Composto Central Rotacional. As variáveis independentes aplicadas foram: corrente, pH do efluente bruto e tempo de eletrooxidação. Para caracterização do efluente e averiguar a degradação do composto foram efetuadas análises de demanda química de oxigênio (DQO), pH, condutividade elétrica, espectrofotometria de absorção do ultravioleta-visível e de cromatografia líquida de alta eficiência. O efluente bruto apresentou DQO média de 122 mg O2 L-1, pH de 4,02, condutividade elétrica de 30,72 mS cm -1 e concentração de cloridrato de tetraciclina de 87,20 mg L-1. Após o tratamento do efluente observou-se que não houve variação do pH e da condutividade elétrica. O tratamento eletroquímico apresentou uma baixa remoção da DQO, porém em determinados ensaios o cloridrato de tetraciclina não foi detectado pela análise de cromatografia líquida de alta eficiência caracterizando a formação de fragmentos sem mineralização do fármaco. Os pontos de melhor eficiência do tratamento foram E4, E8 e E12, que apresentam altas correntes e tempo de eletrooxidação, sendo que o pH do efluente não influenciou na eficiência de remoção do cloridrato de tetraciclina. Para avaliar a toxicidade dos fragmentos de degradação foram realizados ensaios de toxicidade frente ao microcrustáceo Artemia salina, verificando que o efluente não apresentava toxicidade e sua diminuição foi pouco acentuada após o tratamento. Por fim para identificar a atividade bacteriana do cloridrato de tetraciclina e seus produtos de degradação após o tratamento, testes de sensibilidade bacteriana com as bactérias Escherichia coli e Staphylococcus aureus foram realizados, constatando que os efluentes após o tratamento eletroquímico não apresentaram atividades antibióticas para as bactérias selecionadas.

The accumulation of certain organic pollutants in the environment has become a globally relevant environmental aspect, due to the wide use of these compounds and their persistence to biodegradation. The fact that many of these organic pollutants are resistant to biochemical degradation leads to the search for alternative techniques. In this context, electrochemical treatments, in particular anodic oxidation, may be a promising alternative for the degradation of such compounds. The present work had as main objective to evaluate the treatment of synthetic effluent in the degradation of the tetracycline hydrochloride drug, antibiotic, widely used in human and veterinary medicine, by means of the anodic oxidation system, applying as anode the electrode, Ti/Ru0,3Ti0,7O2. The electrochemical degradation assays of tetracycline hydrochloride were carried out in a shaking system in an electrochemical cell containing a dimensionally stable electrode, as an anode, as a cathode a porous titanium plate and a saturated Ag / AgCl electrode as reference, capable of 1000 mL of solution. The statistical design applied to the drug degradation assays was the Central Rotational Compound Design. The independent variables applied were: current, crude effluent pH and electrooxidation time. For characterization of the effluent and to verify the degradation of the compound, chemical oxygen demand (COD), pH, electrical conductivity, ultraviolet-visible absorption spectrophotometry and high performance liquid chromatography were performed. The crude effluent had a mean COD of 122 mg O2 L-1, a pH of 4.02, an electrical conductivity of 30.72 mS cm-1 and a tetracycline hydrochloride concentration of 87.20 mg L-1. After treatment of the effluent it was observed that there was no variation of pH and electrical conductivity. The electrochemical treatment showed a low removal of COD, but in certain tests the tetracycline hydrochloride was not detected by the high performance liquid chromatography analysis characterizing the formation of fragments without mineralization of the drug. The best treatment efficiency points were E4, E8 and E12, which present high currents and electrooxidation time, and the pH of the effluent did not influence the removal efficiency of tetracycline hydrochloride. In order to evaluate the toxicity of the degradation fragments, toxicity tests were carried out against the microcrack Artemia salina, verifying that the effluent showed no toxicity and its decrease was not accentuated after the treatment. Finally, to identify the bacterial activity of tetracycline hydrochloride and its degradation products after treatment, bacterial sensitivity tests with the bacteria Escherichia coli and Staphylococcus aureus were performed, noting that the effluents after the electrochemical treatment did not present antibiotic activities for the bacteria Selected.

Síntese de novos materiais à base de grafeno para aplicação em microextração por sorvente empacotado MEPS na extração de tetraciclinas presentes no leite com posterior análise por cromatografia líquida acoplada a espectrometria de massas sequencial HPLC-M

O crescimento da população mundial e a expansão industrial são fatores que atualmente desencadeiam um aumento no consumo de produtos e geração de resíduos. Frequentemente utilizados na medicina tradicional e veterinária, os antibióticos são classificados como uma classe emergente de poluentes, pois, devido à sua baixa taxa de degradação e à ineficácia dos sistemas de tratamentos de água, encontram-se disseminados no meio ambiente e nos alimentos. Em consequência desse fato, estudos para o desenvolvimento de novos materiais e métodos que removam estes contaminantes utilizando menor quantidade de consumíveis químicos e a baixo custo, têm sido um campo em desenvolvimento na química analítica. Inserido nesse contexto encontra-se o grafeno, que devido à sua estrutura de anéis aromáticos com elétrons deslocalizados e elevada área superficial (3600 m2/g), pode favorecer fenômenos de sorção, elevando a eficiência na extração de contaminantes presentes em matrizes complexas. O objetivo do projeto foi sintetizar e caracterizar novas fases sorventes à base de grafeno para atuar no preparo da amostra avaliando a eficácia destas na remoção de tetraciclinas presentes em leite. Para isso, utilizou-se da microextração por sorvente empacotado MEPS como método de preparo de amostra com posterior análise por cromatografia líquida acoplada a espectrometria de massas HPLC-MS/MS. A caracterização dos materiais foi feita através de microscopia eletrônica de varredura MEV e espectroscopia vibracional na região do infravermelho IV revelando eficácia na síntese das folhas de óxido de grafeno, assim como, no recobrimento das partículas de sílica com os novos materiais. Foram avaliadas as fases extratoras: G, GO-SIL, G-Sil e C18-G-Sil com relação a eficiência na extração das tetraciclinas. A fase G-Sil mostrou-se a mais apropriada para continuidade do estudo, pois apresentou os melhores resultados. Com o objetivo de otimizar a etapa de preparo de amostra, foi feito um planejamento fatorial fracionário 24-1¬ avaliando as variáveis químicas: solvente de eluição, força iônica, pH da solução de lavagem e inclusão de EDTA na solução tampão de Mcllvaine (pH 4.2). Posteriormente foi feito um planejamento fatorial completo 23 visando a otimização dos ciclos de extração da MEPS, possibilitando determinar a condição ótima de extração do método. Baseando-se no documento: ICH Q2 (R1) guideline, a metodologia foi submetida a testes para avaliar as figuras de mérito referentes a validação analítica. O método apresentou faixa linear de 15 110 µg/L, LQ entre 0,05 e 0,9 µg/L e boa seletividade. A precisão foi avaliada intra e inter-dia apresentando desvio padrão relativo - RSD abaixo de 18%. Ao final do desenvolvimento do estudo foram analisadas onze amostras reais incluindo leite bovino, caprino, ovino e leite em pó. A aplicação em amostras de diferentes espécies reforça a versatilidade do método desenvolvido, além de evidenciar o elevado potencial dos novos materiais de grafeno para atuar como sorvente no preparo da amostra.

Nowadays, the rise of world population and industrial expansion are leading to an increase in consumption and consequently waste generation. Large quantities of chemical residues are released into the environment affecting humans and wildlife. Among these residues, antibiotics used in medicine and veterinary are classified as an emerging contaminant due to their low degradation rate, ineffectiveness of wastewater treatment and consequently water and food contamination. An effort has been made to develop microextraction techniques to remove these drugs using reduce volume of solvent and chemical consumable and researches of new sorbent phases are increasing due the high potential to improve these microextraction techniques. Recent studies pinpoint graphene (G) as an effectively sorbent phase to act in sample preparation. G has a structure composed by carbon nanosheets arranged in a honeycomb pattern with large surface area (3600 m2/g) and delocalized -electrons system that suggests good interaction between them and contaminants compounds such as veterinary drugs, pesticides, personal care products etc. This study focuses to evaluate sorbent phases based upon graphene particle supported on silica to analyze Tetracycline residues present in milk. For this purpose, was used microextraction by packed sorbent - MEPS as sample preparation method with analysis by liquid chromatography and mass spectrometry. The characterization of synthesized materials was performed by scanning electron microscopy - SEM and vibrational spectroscopy in infrared region - FTIR. The results suggest that synthesis of graphenes particles as well as the coating of silica surface with these materials were both performed. To evaluate extraction efficiency each sorbent material: GO-Sil, G-Sil, G, C18-GO-Sil were tested in MEPS and confronted to commercial phases: C8 and C18. By the results, G-Sil was choose to application as sorbent phase. MEPS extractions were optimized and the effect of some factors was investigated by application of experimental design. Firstly, a factorial experimental design 2(4-1) was executed to evaluate chemistry variables such as elution solvent, washing solution, media ionic strength and inclusion of EDTA salt in Mcllvaine solution. After, an experimental design 23 was made in order to estimate the cycles of MEPS extraction like sampling, washing and elution steps. By the results, an optimized extraction conditional was achieved and evaluation of validation parameters was carried out on sequence based on the ICH Q2 (R1) guide. The method showed linearity ranging from 15 110 µg/L, LOQ values from 0,05 to 0,9 µg/L and good selectivity. Precision showed relative standard deviation RSD less than 18% to intra and inter-day analysis. The developed method was applied in analysis of eleven milk samples including bovine, caprine and ovine milk and milk powder. Application in samples from different species enhances the versatility of this analytical method and show the great potential for graphenes particles to act as sorbent phase in sample preparation.

Perfil de resistência a antimicrobianos e avaliação da presença de grupos clonais em isolados de Salmonella Bredeney de linfonodos submandibulares de suínos e matéria-prima para fabricação de embutidos / Antimicrobial resistance profile and assessment of clonal groups in Salmonella Bredeney isolated from pig submandibular lymph nodes and minced meat for sausage production

Background: Salmonella is an important agent of the foodborne disease and can be vehiculated by products of animal origin. In recent years, the risk that pathogenic bacteria resistant to antimicrobial enter the food production chain and be transmitted to consumer is a growing concern. Salmonella Bredeney is one of the most prevalent serovar isolated from lymph nodes of slaughter pigs, and the contamination of pork with this serovar has been reported. Therefore, the purpose of this study was to determine the resistance profile and clonality of Salmonella Bredeney isolates from submandibular lymph nodes and minced meat originated from common slaughter pig batches. Materials, Methods & Results: Fifty three isolates of Salmonella enterica serovar Bredeney from submandibular lymph nodes (n = 14) and minced meat used for fresh sausage production (n = 39) originated from five slaughter batch were evaluated. Antimicrobial resistance was determined by the agar disk diffusion tests using disks with the following antimicrobials: nalidixic acid (Na, 30 µg), ciprofloxacin (Cip, 5 µg), gentamicin (Cn, 10 µg), sulphonamide (S3, 300 µg) and tetracycline (Te, 30µg). Later on, isolates that presented the most common resistance profile were submitted to Xba I macrorestrition and analyzed by pulsed-field gel electrophoresis (PFGE). Among the S. Bredeney isolates, 40 (75.5%) were resistant to at least one of the tested antimicrobials. Resistance against tetracycline was the most frequent (32 isolates, 61.5%), followed by resistance to sulphonamide (n = 21, 39.6%), gentamicin (n = 5, 9.4%) and nalidixic acid (n = 3, 5.6%). All strains were susceptible to ciprofloxacin. The profile resistance to tetracycline-sulphonamide (TeS3) was detected in 16 isolates from minced meat and two isolated from lymph nodes. PFGE analysis of these isolates showed six different pulsotypes. The pulsotypeA1 was the most frequent among the isolates, and pulsotype A2 was present in isolates from submandibular lymph nodes and minced meat originated from a common slaughter batch. Discussion: The analyzed isolated of Salmonella Bredeney showed lower multiresistance frequency when compared with previous reports. Resistance to tetracycline and sulphonamide were the most prevalent in line with other studies conducted with porcine Salmonella isolates. Overall, the resistance pattern TeS3 was the most common among the isolates, and was present in 16 isolates from minced meat and in two isolates from submandibular lymph nodes. This pattern is possibly related to the frequent prophylactic and therapeutic use of these antimicrobials in pigs. Strains presenting the resistance pattern TeS3 showed a high diversity of XbaI-pulsotypes. Nonetheless, it was possible to identify a common pulsotype between strains from lymph nodes and minced meat. Fresh pork sausage is not submitted to a thermal treatment step in its manufacturing process. Moreover, the survival of Salmonella strains at the refrigeration temperatures used during the shelf life of fresh pork sausages has been reported. In spite of the fact that pork sausages are mainly consumed after cooking, the hazard of cross-contamination during preparation and the insufficient thermal treatment leading to Salmonella-transmission to consumers, still remains. It leads to the conclusion that resistant Salmonella strains originated from slaughter pig can be present in pork products consumed by the population.(AU)

Perfil de resistência a antimicrobianos e avaliação da presença de grupos clonais em isolados de Salmonella Bredeney de linfonodos submandibulares de suínos e matéria-prima para fabricação de embutidos / Antimicrobial resistance profile and assessment of clonal groups in Salmonella Bredeney isolated from pig submandibular lymph nodes and minced meat for sausage production

Background: Salmonella is an important agent of the foodborne disease and can be vehiculated by products of animal origin. In recent years, the risk that pathogenic bacteria resistant to antimicrobial enter the food production chain and be transmitted to consumer is a growing concern. Salmonella Bredeney is one of the most prevalent serovar isolated from lymph nodes of slaughter pigs, and the contamination of pork with this serovar has been reported. Therefore, the purpose of this study was to determine the resistance profile and clonality of Salmonella Bredeney isolates from submandibular lymph nodes and minced meat originated from common slaughter pig batches. Materials, Methods & Results: Fifty three isolates of Salmonella enterica serovar Bredeney from submandibular lymph nodes (n = 14) and minced meat used for fresh sausage production (n = 39) originated from five slaughter batch were evaluated. Antimicrobial resistance was determined by the agar disk diffusion tests using disks with the following antimicrobials: nalidixic acid (Na, 30 µg), ciprofloxacin (Cip, 5 µg), gentamicin (Cn, 10 µg), sulphonamide (S3, 300 µg) and tetracycline (Te, 30µg). Later on, isolates that presented the most common resistance profile were submitted to Xba I macrorestrition and analyzed by pulsed-field gel electrophoresis (PFGE). Among the S. Bredeney isolates, 40 (75.5%) were resistant to at least one of the tested antimicrobials. Resistance against tetracycline was the most frequent (32 isolates, 61.5%), followed by resistance to sulphonamide (n = 21, 39.6%), gentamicin (n = 5, 9.4%) and nalidixic acid (n = 3, 5.6%). All strains were susceptible to ciprofloxacin. The profile resistance to tetracycline-sulphonamide (TeS3) was detected in 16 isolates from minced meat and two isolated from lymph nodes. PFGE analysis of these isolates showed six different pulsotypes. The pulsotypeA1 was the most frequent among the isolates, and pulsotype A2 was present in isolates from submandibular lymph nodes and minced meat originated from a common slaughter batch. Discussion: The analyzed isolated of Salmonella Bredeney showed lower multiresistance frequency when compared with previous reports. Resistance to tetracycline and sulphonamide were the most prevalent in line with other studies conducted with porcine Salmonella isolates. Overall, the resistance pattern TeS3 was the most common among the isolates, and was present in 16 isolates from minced meat and in two isolates from submandibular lymph nodes. This pattern is possibly related to the frequent prophylactic and therapeutic use of these antimicrobials in pigs. Strains presenting the resistance pattern TeS3 showed a high diversity of XbaI-pulsotypes. Nonetheless, it was possible to identify a common pulsotype between strains from lymph nodes and minced meat. Fresh pork sausage is not submitted to a thermal treatment step in its manufacturing process. Moreover, the survival of Salmonella strains at the refrigeration temperatures used during the shelf life of fresh pork sausages has been reported. In spite of the fact that pork sausages are mainly consumed after cooking, the hazard of cross-contamination during preparation and the insufficient thermal treatment leading to Salmonella-transmission to consumers, still remains. It leads to the conclusion that resistant Salmonella strains originated from slaughter pig can be present in pork products consumed by the population.

Construção de vetor oriC de Mycoplasma hyopneumoniae uma ferramenta para estudos genéticos do agente da pneumonia enzoótica suína

Mycoplasma hyopneumoniae  é o agente etiológico da pneumonia enzoótica, enfermidade distribuída mundialmente em rebanhos suínos nas fases de crescimento e terminação. A pneumonia enzoótica tem sido considerada uma das mais importantes causas de perdas econômicas na suinocultura mundial. Tendo em vista a disponibilidade dos genomas completos de três linhagens diferentes de M. pneumoniae, sendo duas patogênicas (linhagens 7448 e 232) e outra não patogênica (linhagem J) e a ausência de sistemas genéticos adequados para o estudo destes genomas, é necessidade emergente o desenvolvimento de ferramentas genéticas funcionais neste organismo. Atualmente, cinco espécies de micoplasmas possuem vetores replicativos disponíveis para transformação. No entanto nenhum deles possui a oriC de M. hyopneumoniae, e estudos sugerem que estes vetores são espécie-específicos e não seriam replicados em M. hyopneumoniae. Este trabalho teve como objetivos a construção de um vetor replicativo e o desenvolvimento de um sistema para transformação de M. hyopneumoniae. Os resultados alcançados constituem uma etapa prévia e imprescindível para o estudo de supostas regiões promotoras nesta espécie. O plasmídio replicativo pOSTM construído neste trabalho foi obtido a partir do vetor pUC18, adicionando-se a origem de replicação de M. hyopneumoniae e o cassete de expressão do gene de resistência à tetraciclina (te

Construção de vetor oriC de Mycoplasma hyopneumoniae uma ferramenta para estudos genéticos do agente da pneumonia enzoótica suína

Mycoplasma hyopneumoniae   é o agente etiológico da pneumonia enzoótica, enfermidade distribuída mundialmente em rebanhos suínos nas fases de crescimento e terminação. A pneumonia enzoótica tem sido considerada uma das mais importantes causas de perdas econômicas na suinocultura mundial. Tendo em vista a disponibilidade dos genomas completos de três linhagens diferentes de M. pneumoniae, sendo duas patogênicas (linhagens 7448 e 232) e outra não patogênica (linhagem J) e a ausência de sistemas genéticos adequados para o estudo destes genomas, é necessidade emergente o desenvolvimento de ferramentas genéticas funcionais neste organismo. Atualmente, cinco espécies de micoplasmas possuem vetores replicativos para transformação. No entanto nenhum deles possui a oriC de M. hyopneumoniae, e estudos sugerem que estes vetores são espécie-específicos e não seriam replicados em M. hyopneumoniae. Este trabalho teve como objetivos a construção de um vetor replicativo e o desenvolvimento de um sistema para transformação de M. hyopneumoniae. Os resultados alcançados constituem uma etapa prévia e imprescindível para o estudo de supostas regiões promotoras nesta espécie. O plasmídio replicativo pOSTM construído neste trabalho foi obtido a partir do vetor pUC18, adicionando-se a origem de replicação de M. hyopneumoniae e o cassete de expressão do gene de resistência à tetraciclina (tetM), contro

Construção de vetor oriC de Mycoplasma hyopneumoniae uma ferramenta para estudos genéticos do agente da pneumonia enzoótica suína

Mycoplasma hyopneumoniae  é o agente etiológico da pneumonia enzoótica, enfermidade distribuída mundialmente em rebanhos suínos nas fases de crescimento e terminação. A pneumonia enzoótica tem sido considerada uma das mais importantes causas de perdas econômicas na suinocultura mundial. Tendo em vista a disponibilidade dos genomas completos de três linhagens diferentes de M. pneumoniae, sendo duas patogênicas (linhagens 7448 e 232) e outra não patogênica (linhagem J) e a ausência de sistemas genéticos adequados para o estudo destes genomas, é necessidade emergente o desenvolvimento de ferramentas genéticas funcionais neste organismo. Atualmente, cinco espécies de micoplasmas possuem vetores replicativos disponíveis para transformação. No entanto nenhum deles possui a oriC de M. hyopneumoniae, e estudos sugerem que estes vetores são espécie-específicos e não seriam replicados em M. hyopneumoniae. Este trabalho teve como objetivos a construção de um vetor replicativo e o desenvolvimento de um sistema para transformação de M. hyopneumoniae. Os resultados alcançados constituem uma etapa prévia e imprescindível para o estudo de supostas regiões promotoras nesta espécie. O plasmídio replicativo pOSTM construído neste trabalho foi obtido a partir do vetor pUC18, adicionando-se a origem de replicação de M. hyopneumoniae e o cassete de expressão do gene de resistência à tetraciclina (te

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Mycoplasma hyopneumoniae   é o agente etiológico da pneumonia enzoótica, enfermidade distribuída mundialmente em rebanhos suínos nas fases de crescimento e terminação. A pneumonia enzoótica tem sido considerada uma das mais importantes causas de perdas econômicas na suinocultura mundial. Tendo em vista a disponibilidade dos genomas completos de três linhagens diferentes de M. pneumoniae, sendo duas patogênicas (linhagens 7448 e 232) e outra não patogênica (linhagem J) e a ausência de sistemas genéticos adequados para o estudo destes genomas, é necessidade emergente o desenvolvimento de ferramentas genéticas funcionais neste organismo. Atualmente, cinco espécies de micoplasmas possuem vetores replicativos para transformação. No entanto nenhum deles possui a oriC de M. hyopneumoniae, e estudos sugerem que estes vetores são espécie-específicos e não seriam replicados em M. hyopneumoniae. Este trabalho teve como objetivos a construção de um vetor replicativo e o desenvolvimento de um sistema para transformação de M. hyopneumoniae. Os resultados alcançados constituem uma etapa prévia e imprescindível para o estudo de supostas regiões promotoras nesta espécie. O plasmídio replicativo pOSTM construído neste trabalho foi obtido a partir do vetor pUC18, adicionando-se a origem de replicação de M. hyopneumoniae e o cassete de expressão do gene de resistência à tetraciclina (tetM), contro

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Mycoplasma hyopneumoniae  é o agente etiológico da pneumonia enzoótica, enfermidade distribuída mundialmente em rebanhos suínos nas fases de crescimento e terminação. A pneumonia enzoótica tem sido considerada uma das mais importantes causas de perdas econômicas na suinocultura mundial. Tendo em vista a disponibilidade dos genomas completos de três linhagens diferentes de M. pneumoniae, sendo duas patogênicas (linhagens 7448 e 232) e outra não patogênica (linhagem J) e a ausência de sistemas genéticos adequados para o estudo destes genomas, é necessidade emergente o desenvolvimento de ferramentas genéticas funcionais neste organismo. Atualmente, cinco espécies de micoplasmas possuem vetores replicativos disponíveis para transformação. No entanto nenhum deles possui a oriC de M. hyopneumoniae, e estudos sugerem que estes vetores são espécie-específicos e não seriam replicados em M. hyopneumoniae. Este trabalho teve como objetivos a construção de um vetor replicativo e o desenvolvimento de um sistema para transformação de M. hyopneumoniae. Os resultados alcançados constituem uma etapa prévia e imprescindível para o estudo de supostas regiões promotoras nesta espécie. O plasmídio replicativo pOSTM construído neste trabalho foi obtido a partir do vetor pUC18, adicionando-se a origem de replicação de M. hyopneumoniae e o cassete de expressão do gene de resistência à tetraciclina (te

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Mycoplasma hyopneumoniae   é o agente etiológico da pneumonia enzoótica, enfermidade distribuída mundialmente em rebanhos suínos nas fases de crescimento e terminação. A pneumonia enzoótica tem sido considerada uma das mais importantes causas de perdas econômicas na suinocultura mundial. Tendo em vista a disponibilidade dos genomas completos de três linhagens diferentes de M. pneumoniae, sendo duas patogênicas (linhagens 7448 e 232) e outra não patogênica (linhagem J) e a ausência de sistemas genéticos adequados para o estudo destes genomas, é necessidade emergente o desenvolvimento de ferramentas genéticas funcionais neste organismo. Atualmente, cinco espécies de micoplasmas possuem vetores replicativos para transformação. No entanto nenhum deles possui a oriC de M. hyopneumoniae, e estudos sugerem que estes vetores são espécie-específicos e não seriam replicados em M. hyopneumoniae. Este trabalho teve como objetivos a construção de um vetor replicativo e o desenvolvimento de um sistema para transformação de M. hyopneumoniae. Os resultados alcançados constituem uma etapa prévia e imprescindível para o estudo de supostas regiões promotoras nesta espécie. O plasmídio replicativo pOSTM construído neste trabalho foi obtido a partir do vetor pUC18, adicionando-se a origem de replicação de M. hyopneumoniae e o cassete de expressão do gene de resistência à tetraciclina (tetM), contro

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Mycoplasma hyopneumoniae  é o agente etiológico da pneumonia enzoótica, enfermidade distribuída mundialmente em rebanhos suínos nas fases de crescimento e terminação. A pneumonia enzoótica tem sido considerada uma das mais importantes causas de perdas econômicas na suinocultura mundial. Tendo em vista a disponibilidade dos genomas completos de três linhagens diferentes de M. pneumoniae, sendo duas patogênicas (linhagens 7448 e 232) e outra não patogênica (linhagem J) e a ausência de sistemas genéticos adequados para o estudo destes genomas, é necessidade emergente o desenvolvimento de ferramentas genéticas funcionais neste organismo. Atualmente, cinco espécies de micoplasmas possuem vetores replicativos disponíveis para transformação. No entanto nenhum deles possui a oriC de M. hyopneumoniae, e estudos sugerem que estes vetores são espécie-específicos e não seriam replicados em M. hyopneumoniae. Este trabalho teve como objetivos a construção de um vetor replicativo e o desenvolvimento de um sistema para transformação de M. hyopneumoniae. Os resultados alcançados constituem uma etapa prévia e imprescindível para o estudo de supostas regiões promotoras nesta espécie. O plasmídio replicativo pOSTM construído neste trabalho foi obtido a partir do vetor pUC18, adicionando-se a origem de replicação de M. hyopneumoniae e o cassete de expressão do gene de resistência à tetraciclina (te

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