Pregnancy success in bitches - evaluation of interactions between artificial insemination method, serum progesterone concentration and vaginal cytology parameters

Background: The artificial insemination has become a well-established method in the breeding of bitches, and evaluation of the factors that may potentially affect pregnancy success is essential. For this reason, it is essential to evaluate the factors that may affect fertility of the bitch when artificial insemination is performed. Serum progesterone concentrations and vaginal cytology have been used to determine the time of ovulation and stage of the estrus cycle. This study aimed to evaluate the artificial insemination method, the serum progesterone concentration, the breed size, age, the whelping number, vaginal cytology parameters, and their interactions on pregnancy success in bitches. Materials, Methods & Results: A total of 607 bitches that had undergone reproductive consultation with the Mexican Canine Federation from January to December 2016 were enrolled in the present study and assigned to one of 2 artificial insemination methods (intravaginal and transcervical) using fresh semen. Determination of the estrus cycle phase and the time of Artificial insemination was based on vaginal cytology and serum progesterone concentrations. Bitches inseminated by the transcervical technique had a higher pregnancy rate with respect to females inseminated by the intravaginal technique (P < 0.05). Moreover, females with a serum progesterone concentration of 5-10 ng/mL had a greater probability (> 4 times) of getting pregnant than animals with lower or higher progesterone concentrations (P < 0.05). Bitches inseminated by the intravaginal technique and with serum progesterone concentrations >10 ng/mL had a considerable reduction in pregnancy (P < 0.05) compared with females with < 10 ng/mL serum progesterone or with bitches inseminated by the transcervical technique. Discusion: Serum progesterone concentration, the artificial insemination method, and superficial cells without a nucleus modified the pregnancy rate in bitches. Females inseminated by transcervical semen deposition had a higher pregnancy rate than females inseminated by the intravaginal technique. Using fresh or frozen-thawed semen produced a higher pregnancy rate in bitches inseminated by transcervical semen deposition than females inseminated by the intravaginal technique. Differences in the pregnancy rate between transcervical and intravaginal insemination could be associated with the correct semen disposition, the distance that the sperm must travel to reach the oocyte, as well as the number of sperm that reach the oviduct ampulla. Exist evidences that after ovulation, as progesterone rises, the cervix is closed, which may compromise the passage of the sperm deposited into the vagina. Therefore, it is likely that in females with a serum progesterone concentration > 10 ng/mL, the cervix was closed, compromising the ability of the sperm to access the oviduct. Thus, the use of intravaginal insemination should be done in bitches with a serum progesterone concentrations < 11 ng/mL to reduce the possibility of cervical closure and to increase the odds of pregnancy. It is well documented that the serum progesterone concentration and vaginal cytology parameters have a great influence on pregnancy success, and the results confirm these findings. In the present study, 96% of the bitches inseminated with a serum progesterone concentration of 5-10 ng/mL got pregnant and had higher odds of pregnancy than bitches with lower or higher serum progesterone concentrations.

Reproductive performance and luteal function of Santa Ines ewes inseminated by cervical retraction with fresh or frozen semen / Desempenho reprodutivo e função luteal de ovelhas Santa Inês inseminadas por retração cervical com sêmen fresco ou congelado

The artificial insemination (AI) by cervical retraction using fresh or commercially available frozen semen was evaluated. Santa Inês ewes (n=151) were assigned in five groups. Natural mating (NM) composed the control group. Four groups were submitted to hormonal treatment and timed insemination by cervical retraction (CRI) or laparoscopy (LAI), using fresh or frozen semen. To perform CRI, the ewes were kept in standing position. The time required to penetrate the cervical canal and to perform CRI were recorded; local deposition of semen and the reaction intensity of the ewe (weak, moderate or strong) were measured. Blood samples were collected to perform the progesterone dosage at days 0, 3, 5, 12 and 17 (day 0 = AI/NM). Non-return to estrus rate (NRE), pregnancy (at D35) and fertility (birth / mated ewes) were evaluated. Mean time for cervical penetration and CRI were 52.8 ± 21.2s and 3:26min ± 47s, respectively. Reaction intensity to CRI was weak or moderate in 92.3% of the ewes. Serum levels of progesterone after CRI, LAI or NM were similar. NRE of the inseminated ewes were similar, except for CRI with frozen semen, which was lower (P<0.05). Fertility rates were similar between CRI and LAI (35.4% and 42.2%, respectively). Artificial insemination by cervical retraction with ewes in a standing position is practical, and does not change the progesterone profile, providing reproductive rates similar to laparoscopy. However, the use of this technique along with commercial frozen semen presents low fertility rate.(AU)

Avaliou-se a inseminação artificial por retração cervical usando sêmen fresco ou congelado disponível comercialmente. Ovelhas Santa Inês foram divididas em cinco grupos. A monta natural (MN) correspondeu ao grupo controle. Quatro grupos foram submetidos a um tratamento hormonal e inseminação artificial por retração cervical (CRI) ou laparoscopia (LAI) usando sêmen fresco ou congelado. Para a CRI, ovelhas foram mantidas em estação. O tempo para penetrar o canal cervical e realizar a CRI foi mensurado, bem como o local de deposição do sêmen e intensidade de reação da ovelha (fraca, moderada, forte). Amostras de sangue foram coletadas para dosagem de progesterona aos dias 0, 3, 5, 12 e 17 (dia 0 = inseminação ou monta). Foram avaliadas as taxas de não retorno ao estro (NRE), gestação (ao dia 35) e fertilidade (nascimento / ovelhas acasaladas). O tempo médio para penetração cervical foi de 52,8 ± 21,2s e para a CRI foi de 3:26min ± 47s. A intensidade de reação à CRI foi fraca ou moderada em 92,3% das ovelhas. Os níveis séricos de progesterona após CRI, LAI e MN foram similares. NRE das ovelhas inseminadas foi similar, exceto em ovelhas com CRI e sêmen congelado, que foi inferior (P<0,05). As taxas de fertilidade foram semelhantes entre CRI e LAI (35,4% e 42,2%, respectivamente). A inseminação artificial por retração cervical com ovelhas em estação se mostrou prática e não alterou o perfil de progesterona, possibilitando índices reprodutivos similares à laparoscopia. No entanto, o uso desta técnica com sêmen disponível comercialmente apresentou baixa taxa de fertilidade.(AU)

Reproductive performance and luteal function of Santa Ines ewes inseminated by cervical retraction with fresh or frozen semen / Desempenho reprodutivo e função luteal de ovelhas Santa Inês inseminadas por retração cervical com sêmen fresco ou congelado

The artificial insemination (AI) by cervical retraction using fresh or commercially available frozen semen was evaluated. Santa Inês ewes (n=151) were assigned in five groups. Natural mating (NM) composed the control group. Four groups were submitted to hormonal treatment and timed insemination by cervical retraction (CRI) or laparoscopy (LAI), using fresh or frozen semen. To perform CRI, the ewes were kept in standing position. The time required to penetrate the cervical canal and to perform CRI were recorded; local deposition of semen and the reaction intensity of the ewe (weak, moderate or strong) were measured. Blood samples were collected to perform the progesterone dosage at days 0, 3, 5, 12 and 17 (day 0 = AI/NM). Non-return to estrus rate (NRE), pregnancy (at D35) and fertility (birth / mated ewes) were evaluated. Mean time for cervical penetration and CRI were 52.8 ± 21.2s and 3:26min ± 47s, respectively. Reaction intensity to CRI was weak or moderate in 92.3% of the ewes. Serum levels of progesterone after CRI, LAI or NM were similar. NRE of the inseminated ewes were similar, except for CRI with frozen semen, which was lower (P<0.05). Fertility rates were similar between CRI and LAI (35.4% and 42.2%, respectively). Artificial insemination by cervical retraction with ewes in a standing position is practical, and does not change the progesterone profile, providing reproductive rates similar to laparoscopy. However, the use of this technique along with commercial frozen semen presents low fertility rate.

Avaliou-se a inseminação artificial por retração cervical usando sêmen fresco ou congelado disponível comercialmente. Ovelhas Santa Inês foram divididas em cinco grupos. A monta natural (MN) correspondeu ao grupo controle. Quatro grupos foram submetidos a um tratamento hormonal e inseminação artificial por retração cervical (CRI) ou laparoscopia (LAI) usando sêmen fresco ou congelado. Para a CRI, ovelhas foram mantidas em estação. O tempo para penetrar o canal cervical e realizar a CRI foi mensurado, bem como o local de deposição do sêmen e intensidade de reação da ovelha (fraca, moderada, forte). Amostras de sangue foram coletadas para dosagem de progesterona aos dias 0, 3, 5, 12 e 17 (dia 0 = inseminação ou monta). Foram avaliadas as taxas de não retorno ao estro (NRE), gestação (ao dia 35) e fertilidade (nascimento / ovelhas acasaladas). O tempo médio para penetração cervical foi de 52,8 ± 21,2s e para a CRI foi de 3:26min ± 47s. A intensidade de reação à CRI foi fraca ou moderada em 92,3% das ovelhas. Os níveis séricos de progesterona após CRI, LAI e MN foram similares. NRE das ovelhas inseminadas foi similar, exceto em ovelhas com CRI e sêmen congelado, que foi inferior (P<0,05). As taxas de fertilidade foram semelhantes entre CRI e LAI (35,4% e 42,2%, respectivamente). A inseminação artificial por retração cervical com ovelhas em estação se mostrou prática e não alterou o perfil de progesterona, possibilitando índices reprodutivos similares à laparoscopia. No entanto, o uso desta técnica com sêmen disponível comercialmente apresentou baixa taxa de fertilidade.

Technical recommendations for artificial insemination in sheep

Artificial insemination (AI) was the first important biotechnology applied to improve the genetics of farm animals. It allows the rapid and massive diffusion of desirable characteristics of males with high productive potential. We describe the different types of estrus induction and synchronization techniques and the use of the AI with fresh, chilled or frozen semen. Through the adequacy of the protocols of estrus synchronization and AI to the different production systems, the efficient use of reproductive techniques is possible, reaching acceptable pregnancy rates. Summary of reproductive results obtained using cervical and laparoscopic AI are presented.(AU)

Technical recommendations for artificial insemination in sheep

Artificial insemination (AI) was the first important biotechnology applied to improve the genetics of farm animals. It allows the rapid and massive diffusion of desirable characteristics of males with high productive potential. We describe the different types of estrus induction and synchronization techniques and the use of the AI with fresh, chilled or frozen semen. Through the adequacy of the protocols of estrus synchronization and AI to the different production systems, the efficient use of reproductive techniques is possible, reaching acceptable pregnancy rates. Summary of reproductive results obtained using cervical and laparoscopic AI are presented.

Recent advances in superovulation in sheep / Recentes avanços na superovulação de ovelhas

Nearly three years ago our research team published a review of intrinsic determinants and predictors of superovulatory responses in ewes (18th International Congress on Animal Reproduction, Tours, France; 26-30 June 2016; Theriogenology 2016;86:130-143). Heres a summary of major advances in superovulatory treatments of ewes reported over the last three years and of some most anticipated future directions. The rate of genetic improvement within a synthetic population of animals is significantly enhanced by an application of superovulation and embryo transfer. However, the sheep industry has progressed rather slowly in terms of implementing these technologies in comparison to other species although sheep have been used in many studies that paved the way to the development of modern assisted reproductive technologies (ARTs). Recently, several improvements in determining ovarian responses and non-invasively collecting/transferring embryos have been reported but some most frustrating problems associated with hormonal ovarian superstimulation (e.g., unpredictable and highly variable individual responses) remain unresolved. This warrants continued studies of both the physiological basis of and novel approaches to superovulatory treatments in sheep.(AU)

Recent advances in superovulation in sheep / Recentes avanços na superovulação de ovelhas

Nearly three years ago our research team published a review of intrinsic determinants and predictors of superovulatory responses in ewes (18th International Congress on Animal Reproduction, Tours, France; 26-30 June 2016; Theriogenology 2016;86:130-143). Here’s a summary of major advances in superovulatory treatments of ewes reported over the last three years and of some most anticipated future directions. The rate of genetic improvement within a synthetic population of animals is significantly enhanced by an application of superovulation and embryo transfer. However, the sheep industry has progressed rather slowly in terms of implementing these technologies in comparison to other species although sheep have been used in many studies that paved the way to the development of modern assisted reproductive technologies (ARTs). Recently, several improvements in determining ovarian responses and non-invasively collecting/transferring embryos have been reported but some most frustrating problems associated with hormonal ovarian superstimulation (e.g., unpredictable and highly variable individual responses) remain unresolved. This warrants continued studies of both the physiological basis of and novel approaches to superovulatory treatments in sheep.

Estudo vídeoassistido via vaginal com tentativa de histeroscopia para inseminação artificial em ovinos / Vaginal video-assisted study with attempt to hysteroscopy for artificial insemination in sheep

Whereas intrauterine deposition of semen is essential to obtain high rates of fertilization, the aim of thisstudy was to develop a new technique of video-assisted transcervical artificial insemination. It was used a rigidendoscope with 17.5 cm by 2.5 mm of diameter to facilitate the passage of cervical rings and allow intrauterinedeposition of semen. The frequency of types of cervical ostium was 40%, 30%, 20% and 10%, beeing papilla,smooth, flap and rosettes respectively. The average penetration was 1.4 ± 0.96 cervical rings, and the access tothe uterus was impossible in 100% of animals, semen was deposited on superficial cervical region in 90% ofanimals and 10% in the mean cervical region, average time of passage was 4' and 10'', obtaining 10% ofpregnancy rate. It was concluded that the studied technique requires adaptations as semi-flexible and smaller indiameter optics to provide better results.(AU)

Estudo vídeoassistido via vaginal com tentativa de histeroscopia para inseminação artificial em ovinos / Vaginal video-assisted study with attempt to hysteroscopy for artificial insemination in sheep

Whereas intrauterine deposition of semen is essential to obtain high rates of fertilization, the aim of thisstudy was to develop a new technique of video-assisted transcervical artificial insemination. It was used a rigidendoscope with 17.5 cm by 2.5 mm of diameter to facilitate the passage of cervical rings and allow intrauterinedeposition of semen. The frequency of types of cervical ostium was 40%, 30%, 20% and 10%, beeing papilla,smooth, flap and rosettes respectively. The average penetration was 1.4 ± 0.96 cervical rings, and the access tothe uterus was impossible in 100% of animals, semen was deposited on superficial cervical region in 90% ofanimals and 10% in the mean cervical region, average time of passage was 4' and 10'', obtaining 10% ofpregnancy rate. It was concluded that the studied technique requires adaptations as semi-flexible and smaller indiameter optics to provide better results.

EFEITOS DE DIFERENTES FÁRMACOS NA TRANSPOSIÇÃO CERVICAL DE OVELHAS DA RAÇA SANTA INÊS

O presente estudo teve como objetivo avaliar técnicas de relaxamento cervical para o desenvolvimento de um método não cirúrgico para o acesso ao útero de ovelhas da raça Santa Inês. Foram conduzidos dois ensaios sendo que no primeiro foram testados três diferentes protocolos de anestesia epidural (GC=cetamina 2,0mg.kg-1, GCM=cetamina 2,0 mg.kg-1 + morfina 0,1 mg.kg-1 e GCX=cetamina 2,0 mg.kg-1 + xilazina 0,05 mg.kg-1) além de um tratamento controle (GS =solução salina no volume de 1mL para 7,5kg de peso vivo) na tentativa de dilatar o canal cervical para a passagem de uma sonda. Foram estudados 30 animais em modelo crossover e avaliados os seguintes parâmetros: frequência cardíaca, frequência respiratória, temperatura auricular, pressão arterial não invasiva, parâmetros hemogasométricos, além do grau de sedação, respostas sensitiva e motora, tempo de decúbito, relaxamento anal, relaxamento de vulva e vagina, dilatação cervical, analgesia e taxa de transposição cervical. Foram também dosadas as concentrações plasmáticas dos hormônios cortisol e progesterona. No segundo ensaio, foram estudados 30 animais, em modelo crossover, testando a associação da epidural com cetamina (2,0 mg.kg-1) aos seguintes protocolos hormonais: GMi = misoprostol (200g) via cervical, GOE = ocitocina (100UI) + estradiol (100g) via intravenosa e GMiOE= misoprostol (200g) via cervical + ocitocina (100UI) + estradiol (100g) via intravenosa. O tratamento controle neste ensaio foi a injeção epidural de cetamina (GC). Foram avaliados nesta etapa os parâmetros: relaxamento anal, relaxamento de vulva e vagina, dilatação cervical, analgesia e taxa de transposição cervical. A influência da ordem de passagem e do momento em que a transposição ocorreu também foram avaliados. No ensaio I, embora tenham promovido relaxamento e analgesia adequados, nenhum dos protocolos de anestesia epidural foi eficaz em facilitar a transposição cervical nas ovelhas, pois não diferiram (p>0,05) do tratamento controle (GS = 50,0%, GC = 53,3%, GCM = 46,6%, GCX = 53,3%). Todos os protocolos se mostraram seguros do ponto de vista cardiovascular e hemogasométrico, embora o grupo que recebeu xilazina tenha apresentado leve depressão respiratória, com discreta redução da PO2 e sO2 (p<0,05). No ensaio II, a analgesia, relaxamentos e dilatação cervical não variaram entre os grupos. Houve diferença (p<0,05) na taxa de transposição, sendo que o GOE foi o grupo que apresentou maior taxa (90%), não diferindo deGMiOE (86,2% ). As taxas alcançadas peloGMi (68,9%) e GC (62,1%) diferiram de GOE, mas foram equivalentes entre si, além de que GMinão diferiu de GMiOE. O estudo desenvolveu um protocolo capaz de aumentar a taxa de transposição da cérvix de ovelhas da raça Santa Inês.

This study aimed to evaluate cervical relaxation techniques for the development of a nonsurgical method to access the uterus of Santa Ines breed sheep. Two assays were conducted and in Trial I, three different epidural anesthesia protocols (GK = 2.0 mg.kg-1 ketamine, GKM = 2.0 mg.kg-1 ketamine + morphine 0.1 mg.kg-1 and GKX = 2.0 mg.kg-1 ketamine + xylazine 0.05 mg.kg-1) and a control treatment (GS = saline volume of 1mL for 7.5kg of body weight) in an attempt to dilate the cervical canal for the passage of a rod were tested. Thirty animals were studied in crossover model and the following parameters were evaluated: heart rate, respiratory rate, ear temperature, noninvasive blood pressure, blood gas parameters, besides the degree of sedation, sensory and motor responses, decubitus time, anal relaxation, vulvar and vaginal relaxation, cervical dilation, analgesia and cervical transposition rate. Plasma concentrations of cortisol and progesterone were also measured. In Trial II, 30 animals were studied in crossover model, testing the association of epidural ketamine (2.0 mg.kg-1) with the following hormonal protocols: GMi = cervical misoprostol (200g), GOE = oxytocin (100 IU) + estradiol (100g) intravenously and GMiOE = cervical misoprostol (200g) + oxytocin (100 IU) + estradiol (100g) intravenously. The control treatment in this trial was the epidural injection of ketamine (GK). At this stage the parameters evaluated were: anal relaxation, vulva and vaginal relaxation, cervical dilation, analgesia and cervical transposition rate. The influence of passing order and the moment when transposition occurred were also evaluated. In Trial I, although promoted appropriate relaxation and analgesia, none of the epidural anesthesia protocols were effective in facilitating the cervical transposition in sheep, but did not differ (p>0.05) from control treatment (GS = 50.0%, GK = 53.3% = 46.6% GKM, GKX = 53.3%). All protocols have proven safe from the cardiovascular and blood gas parameters aspect, although the group receiving xylazine has presented mild respiratory depression, with a slight reduction in PO2 and SO2 (p<0.05). In trial II, analgesia, relaxation and cervical dilation did not differ between groups. There were differences (p<0.05) in the transposition rate, and the GOE was the group with the highest rate (90%) but did not differ from GMiOE (86.2%). The rates achieved by GMi (68.9%) and GK (62.1%) differed from GOE, but were equivalent to each other, and also GMi did not differ GMiOE. The study developed an efficient protocol to increase cervix transposition rate of Santa Ines sheep.

Transferência de embriões em caprinos: protocolos e ferramentasvisando uma maximização reprodutiva / Caprine embryo transfer: tools and protocols for a maximum reproductive performance

A caprinocultura apresenta-se em franca expansão demonstrando um grande potencial para o desenvolvimento sócio-econômico dos Países em desenvolvimento. Para isso, é necessária uma organização da cadeia produtiva. A boa adaptação dos animais a um clima adverso, associado ao baixo nível de colesterol na carne faz dessa espécie um atrativo econômico bastante interessante para os produtores do semi-árido. Para que haja um aumento da produtividade, urge-se a utilização de biotecnologias agregadas ao melhoramento genético. A popularização de biotécnicas como sincronização de estro e ovulação, inseminação artificial (IA) com sêmen fresco ou congelado e transferência de embriões (TE) pode proporcionar esse ganho genético em um curto espaço de tempo. A colheita e inovulação de embriões pela técnica transcervical trata-se de metodologias não invasivas que apresenta resultados altamente favoráveis. Dispensa a utilização de aparato cirúrgico e pode representar uma forma exeqüível de maximização do potencial genético da fêmea caprina sem a necessidade de grandes investimentos, aumentando dessa forma a eficiência produtiva e incrementando o desenvolvimento de regiões desfavorecidas. (AU)

The goat business is in expansion, particularly in developing countries. To reach this goal, it is necessary an organization of the agribusiness. The easy adaptation to unfavorable weather associated to low cholesterol profile in the goat meet makes this segment an economic atraction for the agribusiness in semi-arid areas. The increase in productivity demands the use of biotechnology. The popularization of byotechniques such as estrous synchronization, artificial insemination (AI) with fresh or frozen semen and Embryo Trasnfer (ET) can offer this genetic improvement in a short time. The embryo collection and transfer using the transcervical technique, without necessity of surgery apparatus, gives an opportunity to generate a genetic gain by a non-invasive methodology with good results. The use of these techniques can accelerate the production and technological advances in this specie with a low budget, increasing therefore the productivity and the development of unfavorable regions. (AU)

Transferência de embriões em caprinos: protocolos e ferramentasvisando uma maximização reprodutiva / Caprine embryo transfer: tools and protocols for a maximum reproductive performance

A caprinocultura apresenta-se em franca expansão demonstrando um grande potencial para o desenvolvimento sócio-econômico dos Países em desenvolvimento. Para isso, é necessária uma organização da cadeia produtiva. A boa adaptação dos animais a um clima adverso, associado ao baixo nível de colesterol na carne faz dessa espécie um atrativo econômico bastante interessante para os produtores do semi-árido. Para que haja um aumento da produtividade, urge-se a utilização de biotecnologias agregadas ao melhoramento genético. A popularização de biotécnicas como sincronização de estro e ovulação, inseminação artificial (IA) com sêmen fresco ou congelado e transferência de embriões (TE) pode proporcionar esse ganho genético em um curto espaço de tempo. A colheita e inovulação de embriões pela técnica transcervical trata-se de metodologias não invasivas que apresenta resultados altamente favoráveis. Dispensa a utilização de aparato cirúrgico e pode representar uma forma exeqüível de maximização do potencial genético da fêmea caprina sem a necessidade de grandes investimentos, aumentando dessa forma a eficiência produtiva e incrementando o desenvolvimento de regiões desfavorecidas.

The goat business is in expansion, particularly in developing countries. To reach this goal, it is necessary an organization of the agribusiness. The easy adaptation to unfavorable weather associated to low cholesterol profile in the goat meet makes this segment an economic atraction for the agribusiness in semi-arid areas. The increase in productivity demands the use of biotechnology. The popularization of byotechniques such as estrous synchronization, artificial insemination (AI) with fresh or frozen semen and Embryo Trasnfer (ET) can offer this genetic improvement in a short time. The embryo collection and transfer using the transcervical technique, without necessity of surgery apparatus, gives an opportunity to generate a genetic gain by a non-invasive methodology with good results. The use of these techniques can accelerate the production and technological advances in this specie with a low budget, increasing therefore the productivity and the development of unfavorable regions.

Coleta transcervical de embriões em ovinos da raça Dorper no semiárido do nordeste brasileiro / Transcervical embryo recovery in Dorper ewes in the Brazilian semi-arid Northeast

Estudou-se o efeito da aplicação de misoprostol intravaginal, na dilatação cervical de ovelhas Dorper, com o objetivo de se viabilizar a coleta transcervical de embriões. Para isso, 68 fêmeas foram sincronizadas com dispositivo intravaginal de progesterona, superovuladas com FSHp, inseminadas por laparoscopia com sêmen fresco, 36 horas após a remoção do dispositivo intravaginal, e submetidas à coleta transcervical de embriões. Os animais foram distribuídos em dois tratamentos: tratamento 1 (n=10), controle, sem aplicação de misoprostol intravaginal antes da coleta de embriões, e tratamento 2 (n=58), com aplicação prévia de 200µ g de misoprostol no fundo do saco vaginal, cinco horas antes da coleta dos embriões. Não foi possível realizar a transposição cervical em nenhum dos animais do tratamento 1, o que inviabilizou as coletas dos embriões, diferentemente do tratamento 2, em que foi possível a transposição cervical em 94,8 por cento dos animais (P<0,05). A técnica de coleta descrita foi realizada no tempo médio de 30,14±9,00 minutos, com recuperação média de 6,02±3,61 embriões/animal. Conclui-se que a técnica transcervical, com administração prévia vaginal de misoprostol, mostrou-se viável para coleta de embriões em ovelhas Dorper.(AU)

The effect of intravaginal misoprostol application on the cervical expansion in Dorper ewes was evaluated to make feasible the transcervical embryo recovery. Sixty-eight female donors were synchronized with an impregnated vaginal device of progesterone; superovulated with FSHp; inseminated by laparoscopy technique with fresh semen, 36 hours after the removal of impregnated vaginal device; and submitted to transcervical embryo recovery. The ewes were arranged in two treatments: treatment 1 (n=10), representing the control group, without intravaginal misoprostol application before embryo recovery; and treatment 2 (n=58), with application of 200µ g of misoprostol in the vagine, five hours before the embryo recovery. The control group did not allow the cervical transposition, making unfeasible the recovery. Animals from treatment 2 reached 94.8 percent of cervical transposition, resulting in significant (P<0.05) difference between treatments. The described recovery technique was accomplished in a mean time of 30.14±9.00 minutes, allowing a mean recovery of 6.02±3.61 of embryos per animal. It was concluded that the transcervical technique, with previous intravaginal misoprostol application, was a feasible method to recover embryos of Dorper ewes.(AU)

Efeito da glutationa reduzida (GSH) na criopreservação de espermatozóides da espécie canina: avaliação in vitro e in vivo / Effect of reduced glutathione (GSH) in the cryopreservation of canine spermatozoa: in vitro and in vivo evaluation

O presente experimento teve por objetivos comparar a adição de diferentes concentrações de glutationa reduzida (GSH) no diluidor para criopreservação do sêmen de cães, considerando-se as características morfofuncionais pós-descongelação; e verificar os índices de gestação e número de filhotes por ninhada obtidos a partir da inseminação artificial intra-uterina, por cateterização cervical endoscópica, com sêmen criopreservado contendo diferentes concentrações de glutationa. Na primeira fase do experimento, foram realizadas duas colheitas seminais de 11 reprodutores com intervalo mínimo de uma semana entre os procedimentos. Foram empregadas três concentrações diferentes de glutationa reduzida (0, 10 e 20 mM) ao meio de congelação tris-gema-citrato. O sêmen fresco, refrigerado, glicerolizado e descongelado foram avaliados por citometria de fluxo com uso de sondas específicas para determinar a integridade das membranas plasmática e acrossomal, potencial de membrana mitocondrial e fragmentação de DNA. Também foi realizada dosagem de substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS) para avaliar os níveis de estresse oxidativo. Na segunda fase do experimento, foram inseminadas 6 fêmeas, alocadas em dois grupos: inseminação intra-uterina com sêmen congelado em diluidor contendo 10 mM (IA-GSH10, n=3) e sem a adição de glutationa (IA-GSH0, n=3). O acompanhamento do ciclo estral foi realizado por citologia vaginal, vaginoscopia, dosagem de progesterona e LH. Foram realizadas duas inseminações no 5o e 6o dias após pico de LH e a gestação diagnosticada aos 30 dias. A adição de 10 e 20 mM de GSH ao diluidor para criopreservação promoveu queda na motilidade espermática nas amostras descongeladas, sendo o maior prejuízo observado na concentração de 20 mM. Foi detectada maior porcentagem de acrossomos íntegros nos grupos tratados. A glicerolização e, principalmente, a exposição do espermatozóide ao nitrogênio líquido e posterior descongelação foram responsáveis pela diminuição da motilidade espermática, em consequência ao prejuízo da função mitocondrial promovida pela produção de radicais livres durante o processamento seminal. A gestação foi diagnosticada em duas fêmeas do grupo IA-GSH10 e duas do grupo IA-GSH0. Em conclusão, a adição de 10 e 20 mM de GSH ao diluidor para criopreservação seminal não promoveu os efeitos protetores esperados na espécie canina, sendo a concentração de 20 mM responsável por maiores prejuízos à amostra seminal. A adição de 10 mM de GSH ao diluidor para criopreservação seminal na espécie canina manteve o índice de fertilidade semelhante ao obtido com sêmen criopreservado sem a suplementação antioxidante

The present experiment aimed to compare the addition of different concentrations of reduced glutathione (GSH) on frozen-thawed canine semen, considering the morphofunctional characteristics; and to verify the pregnancy rate and number of puppies per litter obtained from intrauterine insemination by endoscopic catheterization of the cervix, with frozen-thawed semen containing different concentrations of glutathione. During the first phase of the experiment, two seminal samples collected weekly from 11 mature dogs were used. Three different concentrations of reduced glutathione (0, 10 and 20 mM) were supplemented in a tris-citrate egg yolk extender. The fresh, chilled, glycerolized and post-thawed semen were assessed by flow cytometry using specific probes to determine plasma membrane and acrosomal integrity, mitochondrial membrane potential and DNA fragmentation. Thiobarbituric acid reactive substances (TBARS) assay was also performed to assess the occurrence of oxidative stress. In the second phase of the experiment, six canine females were allocated into two groups: intrauterine insemination with frozen-thawed semen containing 10 mM GSH (IA-GSH10, n = 3) and without the addition of glutathione (IA-GSH0, n = 3). Bitches were monitored by vaginal cytology, vaginoscopy, progesterone and LH assays. Two inseminations were performed on days 5 and 6 post LH peak. We verified that the addition of 10 and 20 mM of GSH to semen extender promoted a decrease in post-thaw sperm motility, as well as a higher damage degree at the 20 mM concentration. We also detected a higher percentage of acrossomal integrity in treated groups. At glycerolization and moreover, the sperm exposure to liquid nitrogen and further thawing, were responsible for the decrease in sperm motility, due to the loss of mitochondrial function through the free radicals production. Gestation was diagnosed in two female from IA-GSH10 group and two bitches of the IA-GSH0 group. In conclusion, we did not observe the expected protective effects of the addition of 10 and 20 mM GSH to semen extender. Furthermore, the concentration of 20 mM was responsible for the more extreme damage to semen sample. The supplementation of 10 mM GSH to semen extender for cryopreservation maintained the fertility rates similar to the ones observed for cryopreservation without antioxidant supplementation in dogs

Efeito da glutationa reduzida (GSH) na criopreservação de espermatozóides da espécie canina: avaliação in vitro e in vivo / Effect of reduced glutathione (GSH) in the cryopreservation of canine spermatozoa: in vitro and in vivo evaluation

O presente experimento teve por objetivos comparar a adição de diferentes concentrações de glutationa reduzida (GSH) no diluidor para criopreservação do sêmen de cães, considerando-se as características morfofuncionais pós-descongelação; e verificar os índices de gestação e número de filhotes por ninhada obtidos a partir da inseminação artificial intra-uterina, por cateterização cervical endoscópica, com sêmen criopreservado contendo diferentes concentrações de glutationa. Na primeira fase do experimento, foram realizadas duas colheitas seminais de 11 reprodutores com intervalo mínimo de uma semana entre os procedimentos. Foram empregadas três concentrações diferentes de glutationa reduzida (0, 10 e 20 mM) ao meio de congelação tris-gema-citrato. O sêmen fresco, refrigerado, glicerolizado e descongelado foram avaliados por citometria de fluxo com uso de sondas específicas para determinar a integridade das membranas plasmática e acrossomal, potencial de membrana mitocondrial e fragmentação de DNA. Também foi realizada dosagem de substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS) para avaliar os níveis de estresse oxidativo. Na segunda fase do experimento, foram inseminadas 6 fêmeas, alocadas em dois grupos: inseminação intra-uterina com sêmen congelado em diluidor contendo 10 mM (IA-GSH10, n=3) e sem a adição de glutationa (IA-GSH0, n=3). O acompanhamento do ciclo estral foi realizado por citologia vaginal, vaginoscopia, dosagem de progesterona e LH. Foram realizadas duas inseminações no 5o e 6o dias após pico de LH e a gestação diagnosticada aos 30 dias. A adição de 10 e 20 mM de GSH ao diluidor para criopreservação promoveu queda na motilidade espermática nas amostras descongeladas, sendo o maior prejuízo observado na concentração de 20 mM. Foi detectada maior porcentagem de acrossomos íntegros nos grupos tratados. A glicerolização e, principalmente, a exposição do espermatozóide ao nitrogênio líquido e posterior descongelação foram responsáveis pela diminuição da motilidade espermática, em consequência ao prejuízo da função mitocondrial promovida pela produção de radicais livres durante o processamento seminal. A gestação foi diagnosticada em duas fêmeas do grupo IA-GSH10 e duas do grupo IA-GSH0. Em conclusão, a adição de 10 e 20 mM de GSH ao diluidor para criopreservação seminal não promoveu os efeitos protetores esperados na espécie canina, sendo a concentração de 20 mM responsável por maiores prejuízos à amostra seminal. A adição de 10 mM de GSH ao diluidor para criopreservação seminal na espécie canina manteve o índice de fertilidade semelhante ao obtido com sêmen criopreservado sem a suplementação antioxidante (AU)

The present experiment aimed to compare the addition of different concentrations of reduced glutathione (GSH) on frozen-thawed canine semen, considering the morphofunctional characteristics; and to verify the pregnancy rate and number of puppies per litter obtained from intrauterine insemination by endoscopic catheterization of the cervix, with frozen-thawed semen containing different concentrations of glutathione. During the first phase of the experiment, two seminal samples collected weekly from 11 mature dogs were used. Three different concentrations of reduced glutathione (0, 10 and 20 mM) were supplemented in a tris-citrate egg yolk extender. The fresh, chilled, glycerolized and post-thawed semen were assessed by flow cytometry using specific probes to determine plasma membrane and acrosomal integrity, mitochondrial membrane potential and DNA fragmentation. Thiobarbituric acid reactive substances (TBARS) assay was also performed to assess the occurrence of oxidative stress. In the second phase of the experiment, six canine females were allocated into two groups: intrauterine insemination with frozen-thawed semen containing 10 mM GSH (IA-GSH10, n = 3) and without the addition of glutathione (IA-GSH0, n = 3). Bitches were monitored by vaginal cytology, vaginoscopy, progesterone and LH assays. Two inseminations were performed on days 5 and 6 post LH peak. We verified that the addition of 10 and 20 mM of GSH to semen extender promoted a decrease in post-thaw sperm motility, as well as a higher damage degree at the 20 mM concentration. We also detected a higher percentage of acrossomal integrity in treated groups. At glycerolization and moreover, the sperm exposure to liquid nitrogen and further thawing, were responsible for the decrease in sperm motility, due to the loss of mitochondrial function through the free radicals production. Gestation was diagnosed in two female from IA-GSH10 group and two bitches of the IA-GSH0 group. In conclusion, we did not observe the expected protective effects of the addition of 10 and 20 mM GSH to semen extender. Furthermore, the concentration of 20 mM was responsible for the more extreme damage to semen sample. The supplementation of 10 mM GSH to semen extender for cryopreservation maintained the fertility rates similar to the ones observed for cryopreservation without antioxidant supplementation in dogs (AU)

Avaliação de Diferentes Fármacos para a Dilatação Cervical em Ovinos da Raça Santa Inês e Dorper na Colheita Transcervical de Embriões

Com o objetivo de promover um programa satisfatório de colheita transcervical de embriões em circuito fechado em fêmeas ovinas da raça Dorper e Santa Inês em condições de fazenda, 49 ovelhas da raça Santana Inês e 68 ovelhas da raça Dorper foram sincronizadas com um dispositivo vaginal impregnado de progesterona (CIDR-G, Interag, Nova Zelândia) durante 13 dias e superovulados com 200mg NIH-FSH-S1 de FSHp (Folltropin-V, Vetrepharm Inc., Canadá) durante três dias consecutivos em doses intervaladas por 12 horas, a partir do 11º dia do programa; receberam ainda 200 UI de eCG (Novormon, Syntex, Argentina) juntamente com a última aplicação de FSHp, quando também foi retirada a fonte progesterônica. As doadoras foram inseminadas laparoscopicamente com sêmen fresco 36 horas após a remoção do CIDR. Foram conduzidos dois experimentos separando as diferentes raças citadas. No experimento I, as ovelhas foram divididas em dois grupos, o grupo controle não recebeu tratamento pré-colheita (n=10) e, em 58 ovelhas foi instilada uma solução contendo 200 ?g de misorprostol (Cytotec, Searle, Brasil) no fundo do saco vaginal, 5 horas antes das colheitas Dorper foram encaminhadas à colheita não cirúrgica. No experimento II, as 49 ovelhas Santa Inês superovuladas forma divididas em três grupos. O grupo controle (I) não recebeu tratamento pré-colheita (n=13); o GII (n=17), foi tratado com uma aplicação de 50 ?g de cloprostenol (Ciosim, Coopers, Brasil) 12 horas antes dos procedimentos e, no GIII (n=19) foi instilado 200 ?g de misoprostol (Cytotec, Searle, Brasil) no fundo do saco vaginal 5 horas antes das colheitas. No experimento I realizado com ovinos da raça Dorper o grupo controle não permitiu a transposição cervical inviabilizando o método não cirúrgico, porém foi alcançada uma penetrabilidade cervical na ordem de 94,8% das doadoras tratadas conduzidas à colheita não cirúrgica (p< 0,05). A técnica descrita foi realizada em um tempo médio de 30,14+ 9,00 min., mostrando-se um procedimento rápido. A produção média embrionária foi de 6,02+ 3,61; 3,50+ 3,18 e 2,52+ 3,43 de embriões totais, viáveis e não transferíveis, respectivamente. No experimento II, realizado com ovelhas Santa Inês, o grupo controle (GI) não permitiu a passagem do cateter e foi assim encaminhado à colheita cirúrgica juntamente com as fêmeas que receberam dilatadores cervicais, e que mesmo assim não foi possível a transposição cervical. No grupo II, 59% das doadoras foram colhidas transcervicalmente enquanto 63% das fêmeas do GIII permitiram este procedimento. Quanto a resposta superovulatória, a relação de embriões viáveis nos grupos foi de 3,70+ 4,56; 3,30+ 3,47 e 4,00+ 4,33 e a quantidade de estruturas totais colhidas por doadoras foi de 6,15+ 7,02; 6,50+ 2,01 e 6,50+ 4,6, respectivamente para os grupos GI, GII e GIII, mostrando não ter uma diferença significativa entre os grupos trabalhos de acordo com o programa estatístico SPSS 11.0 (p>0,05). Conclui-se com os trabalhos realizados que o protocolo superovulatório foi efetivo para a produção de embriões em ovinos e que a técnica de colheita transcervical de embriões ovinos da raça Dorper e Santa Inês é possível em ovelhas pluríparas, mas que existe uma grande variação individual no grau de complexidade na transposição transcervical em um mesmo grupo racial mesmo utilizando para isso um dilatador cervical farmacológico e, que o resultado da colheita entre os grupos, em relação a embriões encontrados não diferiu mostrando ser exeqüível a