Sêmen ovino e caprino imunossexado e diluído em meio de conservação à base de água de coco em pó (ACP101/102c) / Ram and goat semen immunosexed and diluted in powdered coconut water-based preservation medium (ACP101/102c)

Sperm sexing aims to separate sperm populations in carriers of the "X" or "Y" chromosome. Currently, flow cytometry is a technique that allows greater accuracy; however, it causes structural changes in sperm, reduces viability, and has a high cost. As a result, other methods have been researched, including immunosexing, which uses monoclonal antibodies to detect sex-specific surface antigens. Thus, the objective of this study was to evaluate the immunosexing technique using a monoclonal antibody against sex-specific protein (HY) in the conservation of ram and goat semen in ACP101/102c. Ejaculates from five rams and five goats were collected with the aid of an artificial vagina; they were evaluated and submitted to the immunosexing protocol, according to the manufacturer's recommendations, using the Monoclonal Antibody Kit specific for mammalian sperm with "Y" chromosomes (HY; HY Biotechnology, Rio de Janeiro, RJ, Brazil). After sexing, the supernatant was resuspended in the cryopreservation diluent: ACP ram (ACP101/102c + 20% egg yolk + 7% glycerol) and ACP goat (ACP101/102c + 2.5% egg yolk + 7% glycerol), packaged in 0.25 mL straws, refrigerated at 4°C, stabilized for 30 min, frozen in liquid nitrogen vapor (-60°C) for 15 min, immersed in liquid nitrogen, and stored in cryogenic cylinders. The samples were evaluated in natura (T1), after immunosexing (T2) and after thawing (T3) for sperm motility subjectively using conventional microscopy (40x). Plasma membrane integrity (IMP) and sperm cell morphology were evaluated by the smear staining technique using eosin-nigrosine dye, and the percentages of healthy and morphologically defect spermatozoa were determined. In the evaluation of ram semen regarding sperm motility and IMP, no statistically significant differences were observed between treatments after sexing in the evaluation of absolute data (P > 0.05), with the difference being observed only between T1 and T2, and T3 (P < 0.05). Regarding the relative percentage and sperm morphology, no statistically significant differences were observed (P > 0.05). Regarding the evaluation of goat semen samples, the motility parameters were consistent with the technique submitted; however, the IMP data did not appear as expected, requiring further evaluation for a better assessment of the technique for this species. The data obtained from ram semen submitted to the immunosexing protocol, regarding the absolute evaluation of motility and IMP, demonstrated that the non-sexed semen (T1) was superior to the sexed treatments (T2 and T3); however, it is noteworthy that freezing started with approximately 50% of the cells, since the immunosexing technique results in a loss of viability of approximately 50% of the sperm, which corresponds to the ratio of sperm carrying the X chromosome. In addition, when the data in this study were transformed into relative values, no statistical differences were observed, indicating that the immunosexing protocol, as well as the freezing protocol, did not significantly affect the quality of ram sperm cells. In relation to the immunosexing of goat semen, future studies should be conducted in vitro to define a more appropriate protocol for the species and, in addition, in vivo studies should be performed to prove the quality of the technique. It was concluded that the immunosexing process using a monoclonal antibody against sex-specific protein (HY) associated with the use of powdered coconut water diluent (ACP101/102c) in the cryopreservation of semen proved to be efficient in the in vitro evaluation of ovine species.(AU)

Caracterização da População Canina com Dermatite Atópica e Correlação Entre a Gravidade da Doença e Nível Sérico de Interleucina-31 Antes e Após Aplicação de Lokivetmab

A dermatite atópica canina é uma doença cutânea pruriginosa, inflamatória e crônica, associada a anticorpos IgE alérgeno-específicos, principalmente contra alérgenos ambientais. O prurido é o principal sinal clínico e afeta diretamente a qualidade de vida dos cães e de seus tutores. Sua patogênese ainda não é totalmente elucidada, mas sabe-se que é bastante complexa, envolvendo fatores genéticos, ambientais, alimentares, defeitos de barreira cutânea e disfunção imunológica. Atualmente tem sido descrito o importante papel da interleucina-31 (IL-31) na indução do prurido, e a terapia mais direcionada para controle deste sinal clínico é o lokivetmab, que objetiva bloquear seletivamente essa citocina, impedindo-a de se ligar ao seu receptor e desencadear a cascata pruriginosa. Por ser uma das dermatopatias mais frequentemente diagnosticadas em cães a nível mundial, dados de literatura sobre os aspectos epidemiológicos e terapêuticos da doença são encontrados facilmente. Entretanto, no âmbito nacional e de acordo com região geográfica, os dados de prevalência e das características na espécie ainda são escassos. Desta forma, o presente estudo foi dividido em duas partes. Na primeira parte, objetivou-se determinar a prevalência da dermatite atópica canina no serviço de dermatologia do Hospital Veterinário da UFMG através de um estudo retrospectivo do período de 2015 a 2020. Para tanto, foram analisados 761 prontuários de cães, em que 34,51% (291) dos casos representaram alergopatias e destas, 73,56% (214) dos casos foram de cães com dermatite atópica, sendo a alergopatia mais prevalente. A raça é a característica mais variável da doença em termos epidemiológicos, sendo que neste estudo as raças Shih Tzu, Lhasa Apso e Buldogue Francês foram as raças puras mais prevalentes. Na segunda parte, objetivou-se selecionar prospectivamente dez cães com dermatite atópica provenientes do serviço de dermatologia do Hospital Veterinário da UFMG para avaliar a gravidade da doença, através das pontuações do índice de extensão e gravidade da dermatite atópica canina (CADESI-04) e escala analógica visual de prurido (pVAS), correlacionando com os níveis séricos de IL-31, antes e após terapia com o anticorpo monoclonal (mAb) lokivetmab. Ainda são escassos os estudos sobre os níveis séricos de IL-31, sua correlação com a gravidade da doença e seus níveis circulantes após aplicação deste imunoterapêutico. Houve redução significativa da pVAS e da IL-31 sérica após duas administrações do mAb, existindo correlação positiva significativa entre as duas variáveis. No entanto, não houve diferença nas pontuações CADESI-04, nem correlação entre a gravidade da doença e níveis séricos desta citocina em cães atópicos de diferentes idades e pesos. Observou-se correlação negativa significativa entre dose de lokivetmab e a pVAS, mostrando que quanto maior a dose utilizada, menor a pVAS. Não houve correlação entre a redução do prurido com o nível sérico basal da IL-31, e, portanto, não foi possível inferir se os cães com níveis séricos mais altos seriam os melhores candidatos à terapia. Os resultados são relevantes e promissores, pois reforçam o papel dessa citocina no envolvimento do prurido em cães com dermatite atópica e permitem abrir portas para novos estudos com populações maiores de cães, para investigar se a IL-31 poderá ser um biomarcador de resposta terapêutica ao lokivetmab.

Canine atopic dermatitis is a chronic, pruritic and inflammatory skin disease, associated with allergen-specific IgE antibodies primarily against environmental allergens. Pruritus is the main clinical sign and directly affects the quality of life of dogs and their owners. Pathogenesis is not yet fully elucidated, but it is known to be quite complex, involving genetic and environmental factors, food allergens, skin barrier defects and immune dysfunction. Currently, the important role of interleukin-31 (IL-31) in the induction of pruritus has been described, and the most targeted therapy to control this clinical sign is lokivetmab, which aims to selectively block this cytokine, preventing it from binding to its receptors and trigger the pruritic cascade. As it is one of the most frequently diagnosed dermatopathies in dogs worldwide, literature data on the epidemiological and therapeutic aspects of the disease are easily found. However, at the national level and according to geographic region, data on prevalence and characteristics in the species are still scarce. Thus, the present study was divided into two parts. The first part aimed to determine the prevalence of canine atopic dermatitis in the dermatology service of the Veterinary Hospital of UFMG through a retrospective study in the period from 2015 to 2020. Therefore, 761 medical records of dogs were analyzed, in which 34,51% (291) of the cases represented allergies and of these, 73,56% (214) of the cases were from dogs with atopic dermatitis, being the most prevalent allergy. Breed is the most variable characteristic of the disease in epidemiological terms, and in this study Shih Tzu, Lhasa Apso and French Bulldog were the most prevalent pure breeds. In the second part, the objective was to prospectively select tem dogs with atopic dermatitis from the dermatology service of the Veterinary Hospital of UFMG to assess the severity of the disease, through the scores of the canine atopic dermatitis extent and severity index (CADESI-04) and visual analog scale of pruritus (pVAS), correlating with serum levels of IL-31, before and after therapy with the monoclonal antibody (mAb) lokivetmab. Studies about serum levels of IL-31, its correlation with the severity of the disease and its circulating levels after application of the immunotherapeutic are still scarce. There was a significant reduction in pVAS and serum IL-31 after two administrations of the mAb, with a significant correlation between these two variables. However, there was no difference in CADESI-04 scores, neither correlation between sevetiry of the disease and serum levels of this cytokine in atopic dogs of different ages and weights. A significant correlation was also observed between dose of lokivetmab and pVAS, showing that the higher the dose used, the lower the pVAS. There was no correlation between the pruritus reduction and baseline IL-31 level, so, therefore, it was not possible to infer whether dogs with higher serum levels would be the best candidates for this therapy. The results are relevant and promising, as they reinforce the role of this cytokine in the involvement of pruritus in dogs with atopic dermatitis and open doors for new studies with larger populations of dogs to investigate whether IL-31 could be a biomarker of therapeutic response to lokivetmab.

Associação do Cortisol Piloso, Gravidade e Qualidade de Vida em Cães com Dermatite Atópica Após Terapia com Lokivetmab

A dermatite atópica canina (DAC) é uma doença inflamatória e pruriginosa da pele, com características clínicas associadas aos anticorpos IgE, mais comumente direcionados contra alérgenos ambientais e que impacta na qualidade de vida dos animais acometidos e de seus tutores. O tratamento é multifacetado e deve ser adaptado a cada paciente. Atualmente, uma medicação baseada em anticorpo monoclonal (mAb) caninizado, denominada lokivetmab, tem se mostrado promissora para o controle dos sinais da doença, pois neutraliza a interleucina (IL)-31, citocina que desempenha papel importante na patogênese da DAC. O impacto das doenças dermatológicas na vida do cão afetado e de seus tutores tem sido estudado apenas nos últimos anos, por meio de questionários validados. Essa ferramenta de medição adicional tem se mostrado importante para a avaliação do sucesso terapêutico das intervenções na dermatite atópica, já que a melhora clínica pode não se correlacionar com o aumento da qualidade de vida. Um método não invasivo e objetivo, atualmente considerado um indicador promissor da qualidade de vida dos pacientes atópicos, é a mensuração do cortisol incorporado ao folículo piloso. Este trabalho teve como objetivo avaliar e comparar a gravidade clínica da doença, qualidade de vida e níveis de cortisol piloso de cães com dermatite atópica após terapia com lokivetmab. Foram selecionados 10 cães atópicos atendidos no serviço de dermatologia do Hospital Veterinário da Escola de Veterinária da UFMG. Os pacientes foram avaliados quanto a gravidade da doença, através das pontuações do índice de extensão e gravidade da dermatite atópica canina (CADESI)-04 e escala visual analógica de prurido (pVAS); qualidade de vida, por meio de um questionário validado; e níveis de cortisol piloso, antes e após terapia com lokivetmab. Pode-se concluir que o tratamento com lokivetmab não foi capaz de reduzir a extensão e a gravidade das lesões dérmicas, mas melhorou de forma significativa o prurido e a qualidade de vida dos cães com dermatite atópica e de seus tutores; e que o impacto na qualidade de vida de ambos é pior quanto maior o prurido do paciente. Não houve correlação observada entre níveis de cortisol piloso, gravidade da doença e qualidade de vida dos cães com dermatite atópica após uso do lokivetmab. No entanto, concentrações menores foram encontradas após a segunda aplicação da medicação. Mais estudos são necessários acerca dos níveis de cortisol piloso nesses pacientes, seu papel como biomarcador de estresse e qualidade de vida e, mais ainda, sua contribuição para a perpetuação da doença.

Canine atopic dermatitis is an inflammatory and pruritic skin disease, with clinical characteristics associated to IgE antibodies, most commonly directed against environmental allergens which impacts the quality of life in affected animals and their owners. Treatment is multifaceted and must be adapted to each patient individually. Currently, a medication based on caninized monoclonal antibody (mAb), called lokivetmab, has shown promise for controlling of the signs of the disease, as it neutralizes interleukin (IL)-31, a cytokine that plays an important role in the pathogenesis of atopy. The impact of dermatological diseases on the affected dogs life and its owners has only been studied in recent years through validated questionnaires. This additional measurement tool has been shown to be important for evaluating the therapeutic success of interventions in atopic dermatitis, as clinical improvement may not correlate with an increased quality of life. A non-invasive and objective method, currently considered a promising indicator of the quality of life in atopic patients, is the measurement of cortisol incorporated into the hair follicle. This study aimed to evaluate and compare the clinical severity of the disease, quality of life and hair cortisol levels in atopic dogs after lokivetmab therapy. Ten atopic dogs treated at the dermatology service of the Veterinary Hospital of the Veterinary School from UFMG were selected. Severity of the disease was assessed using the canine atopic dermatitis extent and severity index (CADESI)-04 and pruritus visual analog scale (pVAS) scores, quality of life using a validated questionnaire, and hair cortisol levels in these patients, before and after lokivetmab therapy. It conclues that treatment with lokivetmab was not able to reduce the extent and severity of dermal lesions in atopic patients, but it significantly improved the pruritus and quality of life of dogs and their owners; and the impact on the quality of life of both is worse the more itchy the patient were. There was no correlation observed between hair cortisol levels, severity of the disease and quality of life of atopic dogs after lokivetmab. However, lower concentrations were found after the second application of the medication. More studies are needed on the levels of hair cortisol in these patients and its role as a biomarker of stress and quality of life, and even more, its contribution to the perpetuation of the disease

ANTICORPOS CONTRA Toxoplasma gondii E Sarcocystis spp. PRODUZIDOS POR INFECÇÃO EXPERIMENTAL EM ROEDORES: CARACTERIZAÇÃO E AVALIAÇÃO DE REATIVIDADE CRUZADA COM PROTOZOÁRIOS CORRELATOS

Toxoplasma gondii e Sarcocystis spp. são parasitos do filo Apicomplexa, formadores de cistos teciduais e excretados por Didelphis spp. Toxoplasma gondii apresenta-se amplamente difundido em todas as regiões do planeta, infectando diversas espécies de mamíferos e aves, enquanto que Sarcocystis spp. excretadas por gambás encontram-se limitadas às Américas, acompanhando a área de distribuição dos seus hospedeiros definitivos. O aprimoramento do diagnóstico sorológico para ambos os gêneros de parasitos é essencial, visando tanto identificar a forma infectante envolvida nos casos de toxoplasmose humana, quanto avaliar a possibilidade de reatividade sorológica cruzada entre Sarcocystis spp. filogeneticamente correlatas. Objetivou-se com este estudo caracterizar anticorpos monoclonais desenvolvidos contra esporozoítos de T. gondii testando-os contra diferentes estágios do parasito e de outros coccídios correlatos pelas técnicas de imunofluorescência indireta e Imunoblot, assim como avaliar o uso do gerbil como hospedeiro experimental de uma cepa de Sarcocystis falcatula-like isolada na Bahia e investigar a possível reatividade dos seus anticorpos contra antígeno de Sarcocystis neurona na imunofluorescência indireta e no Imunoblot. Um dos anticorpos monoclonais (G1/19) reconheceu apenas antígeno de esporozoítos de T. gondii, enquanto que o outro (K3/7-13) identificou proteínas de taquizoítos e esporozoítos. Os gerbis não se mostraram susceptíveis à infecção por S. falcatula-like, mas soroconverteram e apresentaram reatividade sorológica cruzada com antígeno de S. neurona no Imunoblot. Estes achados indicam que o monoclonal G1/19 é promissor para o desenvolvimento de um diagnóstico específico para exposição a oocistos de T. gondii, bem como existe reação sorológica cruzada entre S. falcatula-like e S. neurona no Imunoblot, impactando na interpretação dos resultados sorológicos para este último parasito.

Toxoplasma gondii and Sarcocystis spp. are cyst-forming parasites of the Apicomplexa phylum excreted by Didelphis spp. While T. gondii is widespread in all regions of the world, infecting several species of mammals and birds, Sarcocystis spp. excreted by opossums are limited to the Americas, accompanying the distribution area of their definitive hosts. Improvement of the serological diagnosis for both parasite genera is essential, aiming both to identify the infective stage involved in cases of human toxoplasmosis, and to evaluate the possibility of cross-reactivity between Sarcocystis spp. phylogenetically correlated. The aims of this study were to characterize monoclonal antibodies against sporozoites of T. gondii with antigen of different stages of the parasite and other related-coccidia; to evaluate the use of gerbil as an experimental host of Sarcocystis falcatula-like strain isolated in Bahia, and to investigate the possible serologic cross-reactivity using Sarcocystis neurona and S. falcatula-like antigens. One of the monoclonal antibodies (G1/19) recognized only T. gondii sporozoite antigen, while the other (K3/7-13) identified tachyzoite and sporozoite proteins. The gerbils were not susceptible to infection by S. falcatula-like, but seroconverted and showed cross-reactivity with S. neurona antigen on Immunoblot. These findings indicate that the monoclonal G1/19 is promising for the development of a specific diagnosis for exposure to T. gondii oocysts, as well that cross-reactive occurs between S. falcatula-like and S. neurona in Immunoblot, impacting the interpretation of serological results for this last parasite.

DESENVOLVIMENTO DE UM TESTE SOROLÓGICO BASEADO EM UM ANTÍGENO ORIENTADO POR ANTICORPO MONOCLONAL PARA DIAGNÓSTICO DE Mycoplasma hyopneumoniae

Autor: Rafaela Luiza Klein Orientador: Rafael Frandoloso A pneumonia enzoótica suína (PES) é uma doença infectocontagiosa que há longa data é destaque na cadeia suinícola. A PES é causada pelo Mycoplasma hyopneumoniae (Mhyo), uma bactéria específica de suínos que pode ser transmitida através de contato direto e indireto. A doença acomete suínos de todas as idades, porém a clínica é comumente observada na fase de crescimento e terminação de suínos. Mhyo pode produzir doença pulmonar de forma independente, no entanto, sua infecção facilita a ocorrência de inúmeras outras infecções secundárias causadoras de pneumonias e de doenças sistêmicas. O diagnóstico da circulação de Mhyo é realizada através de testes sorológicos em combinação com técnicas moleculares, e a prevenção, mediante o uso de vacinas clássicas aplicadas pela via intramuscular ou intradérmica. Em razão do diagnóstico sorológico ser de vital importância para o posicionamento correto de vacinas a partir do entendimento da cinética de anticorpos naturais adquiridos através do colostro, ou mesmo, desenvolvidos após um processo de infecção, desenvolver insumos imunológicos genuínos e capazes de detectar indiretamente ou diretamente o Mhyo são indispensáveis para o Brasil. Nesta dissertação, apresentamos o desenvolvimento e a caracterização de um anticorpo monoclonal (AcMo) contra Mycoplasma hyopneumoniae. Posteriormente, o AcMo foi utilizado para desenvolver um ELISA moderno, baseado em células inteiras de M. hyopneumoniae corretamente orientadas no interior da placa de ELISA pelo AcMo. Brevemente, células de mieloma murino P3x63Ag8.653 foram fusionadas com esplenócitos obtidos de camundongos BALB/c imunizados com uma suspensão de M. hyopneumoniae cepa ATCC25095. O AcMo obtido, nomeado de MAb 4A2, foi caracterizado por meio de Western Blot, Dot Assay, Citometria de Fluxo e Teste de Avidez. O MAb 4A2 é uma imunoglobulina da subclasse IgG1 com duas cadeias leves do tipo lambda que reconhece um epitopo linear comum presente na estrutura de duas proteínas superficiais de M. hyopnuemoniae, as quais possuem pesos moleculares de 46 e 100 kDa. O índice de avidez do MAb 4A2 foi de 0.5 M de tiocionato de amônia e reações cruzadas com Glaesserella parasuis não foram evidenciadas pelo ensaio de Dot Assay. A análise de citometria de fluxo mostrou a capacidade do MAb 4A2 de reconhecer três diferentes cepas de M. hyopneumoniae, no entanto, a cepa ATCC®25617TM foi significativamente (p<0.01) menos reconhecidas que as cepas ATCC®25095TM e ATCC 25088. Posteriormente, utilizamos o MAb 4A2 para desenhar um moderno ELISA baseado em antígenos corretamente orientados para detectar IgG de suínos contra M. hyopneumoniae. Nossos resultados preliminares monstraram que este ELISA tem maior sensibilidade em comparação com um ELISA comercial globalmente utilizado para a detecção sorológia de IgGs anti M. hyopneumoniae; consequentemente, nosso ELISA possui melhor capacidade de detectar animais com baixos niveis de IgG reativas ao microrganismo. Este novo ELISA consiste numa promissora plataforma de diagnóstico ultra-sensível para detectar anticorpos contra Mycoplasma hyopneumoniae.

Development of a novel antigen-oriented ELISA for Mycoplasma hyopneumoniae diagnosis Author: Rafaela Luiza Klein Advisor: Rafael Frandoloso Swine enzootic pneumonia (EP) is an infectious disease globally disseminated in the pig industry. EP is caused by Mycoplasma hyopneumoniae, a pig-specific bacterium that can be transmitted through direct and indirect. The disease affects pigs of all ages, but the clinical manifestation is commonly observed in the pig growth and finishing phase. M. hyopnuemoniae can produce pulmonary disease independently, however, its infection facilitates the occurrence of other secondary infections that can causing pneumonia and systemic diseases. The diagnosis of M. hyopneumoniae circulation is performed through serological tests in combination with molecular techniques, and the its prevention is carrying out mainly by the use of classic vaccines applied by the intramuscular or intradermal route. Serological diagnosis has a pivotal role for the correct positioning of vaccines based on the understanding of the kinetics of natural antibodies acquired through colostrum, or even, developed after an infection process. So, develop a genuine immunological test capable of detecting M. hyopenumoniae is essential for Brazil. In this dissertation, we present the development, characterization and use of a new monoclonal antibody to design a novel ELISA based on oriented-antigen to detect antibodies reactive to Mycoplasma hyopneumoniae. Monoclonal antibody (MAb) against Mycoplasma hyopneumoniae was obtained by the fusion of P3x63Ag8.653 murine myeloma cells and spleen cells from BALB/c mice immunized with a suspension of M. hyopneumoniae strain ATCC®25095TM. One MAb showed strong reactivity in ELISA and was further characterized using Western blot, Dot Assay, Flow Cytometry and Avidity test. MAb 4A2 is an IgG1 paired with a lambda light chain molecule that recognize a common linear epitope displayed on the structure of two proteins with a molecular mass of 46 and 100 kDa expressed on the surface of M. hyopneumoniae. The avidity index of MAb 4A2 was 0.5 M of ammonium thiocyanate and cross-reactivity with Glaesserella parasuis by Dot Assay was not observed. Flow cytometry analysis showed the capacity of MAb to recognize three different strains of M. hyopneumoniae, however, the strain ATCC®25617TM was significantly less recognized than ATCC®25095TM and ATCC 25088. Further we used the MAb 4A2 to designing a novel antigen-oriented ELISA to detect pig IgG against M. hyopneumoniae. Our preliminary results showed that this ELISA has higher sensitivity than a current commercial ELISA Kit and consequently, better capacity to detect animals with low level of IgG against this microorganism. This novel ELISA is a promising and reliable serological diagnostic for M. hyopneumoniae.

Lokivetmab: uma nova opção para o tratamento e o controle da dermatite atópica canina: revisão / Lokivetmab: a new option for the treatment and control of canine atopic dermatitis: review / Lokivetmab: una alternativa para el tratamiento y control de la dermatitis atópica canina: revisión

Os anticorpos monoclonais são tema de pesquisa na medicina humana. Eles têm como alvo receptores específicos ou determinadas citocinas e são altamente específicos e eficazes no bloqueio de sua molécula-alvo. O lokivetmab é um anticorpo monoclonal caninizado anti-IL-31 que se liga especificamente à IL-31 circulante, e foi recentemente aprovado para o tratamento da dermatite atópica canina. Atualmente, o lokivetmab é o primeiro anticorpo monoclonal terapêutico utilizado na medicina veterinária. Este trabalho teve como objetivo revisar e atualizar os clínicos sobre esse novo anticorpo monoclonal que está disponível para tratamento da dermatite atópica canina.

Monoclonal antibodies have been studied in human medicine for a while. They target specific receptors and cytokines, and are highly specific and effective in blocking their target molecule. Lokivetmab is a monoclonal caninised anti-IL-31 antibody that was recently approved for the treatment of atopic dermatitis in dogs. Currently, no other therapeutic monoclonal antibody is used in veterinary medicine. The goal of this review of literature is to update clinicians on this new biological option for the treatment of canine atopic dermatitis.

Los anticuerpos monoclonales son tema de investigación en la medicina humana, y tienen como blancos receptores específicos o determinadas citoquinas. Son muy específicos y eficientes en el bloqueo de su molécula blanco. El lokivetmab es un anticuerpo monoclonal caninizado anti-IL-31 que se une específicamente a la IL-31 circulante, que fue aprobado recientemente para el tratamiento de la dermatitis atópica canina. Actualmente este fármaco representa el primer anticuerpo monoclonal terapéutico que se utiliza en medicina veterinaria. Este trabajo tiene como objetivo revisar y actualizar las informaciones científicas sobre este nuevo anticuerpo monoclonal que se encuentra disponible para el tratamiento de la dermatitis atópica en perros.

Lokivetmab: uma nova opção para o tratamento e o controle da dermatite atópica canina: revisão / Lokivetmab: a new option for the treatment and control of canine atopic dermatitis: review / Lokivetmab: una alternativa para el tratamiento y control de la dermatitis atópica canina: revisión

Os anticorpos monoclonais são tema de pesquisa na medicina humana. Eles têm como alvo receptores específicos ou determinadas citocinas e são altamente específicos e eficazes no bloqueio de sua molécula-alvo. O lokivetmab é um anticorpo monoclonal caninizado anti-IL-31 que se liga especificamente à IL-31 circulante, e foi recentemente aprovado para o tratamento da dermatite atópica canina. Atualmente, o lokivetmab é o primeiro anticorpo monoclonal terapêutico utilizado na medicina veterinária. Este trabalho teve como objetivo revisar e atualizar os clínicos sobre esse novo anticorpo monoclonal que está disponível para tratamento da dermatite atópica canina.(AU)

Monoclonal antibodies have been studied in human medicine for a while. They target specific receptors and cytokines, and are highly specific and effective in blocking their target molecule. Lokivetmab is a monoclonal caninised anti-IL-31 antibody that was recently approved for the treatment of atopic dermatitis in dogs. Currently, no other therapeutic monoclonal antibody is used in veterinary medicine. The goal of this review of literature is to update clinicians on this new biological option for the treatment of canine atopic dermatitis.(AU)

Los anticuerpos monoclonales son tema de investigación en la medicina humana, y tienen como blancos receptores específicos o determinadas citoquinas. Son muy específicos y eficientes en el bloqueo de su molécula blanco. El lokivetmab es un anticuerpo monoclonal caninizado anti-IL-31 que se une específicamente a la IL-31 circulante, que fue aprobado recientemente para el tratamiento de la dermatitis atópica canina. Actualmente este fármaco representa el primer anticuerpo monoclonal terapéutico que se utiliza en medicina veterinaria. Este trabajo tiene como objetivo revisar y actualizar las informaciones científicas sobre este nuevo anticuerpo monoclonal que se encuentra disponible para el tratamiento de la dermatitis atópica en perros.(AU)

PD-1 regula a atividade microbicida de leucócitos esplênicos na leishmaniose visceral canina

A leishmaniose é uma doença imunossupressora causada por protozoários do gênero Leishmania, tendo os cães como reservatório doméstico. A molécula Programmed Cell Death 1 (PD-1) é altamente expressa em células leucocitárias de cães com leishmaniose visceral e promove a exaustão dos linfócitos T e a supressão da secreção de citocinas. Como o PD-1 tem função supressiva em relação à imunidade celular, avaliamos o efeito de anticorpos bloqueadores de PD-1 na produção de NO, ROS, interleucina 17 (IL-17) e na carga parasitária em cultura de leucócitos esplênicos de cães naturalmente infectados. In vitro, o bloqueio de PD-1 promoveu aumento dos níveis de NO intracelular e reduziu os de IL-17 no sobrenadante da cultura, além de reduzir a carga parasitária, más não alterou os níveis de ROS. Concluímos que a PD-1 participa na regulação da resposta imune e que o anticorpo bloqueador é efetivo na restauração da atividade microbicida do hospedeiro. Isso pode ser investigado em estudos imuno-terapêuticos no futuro.

Leishmaniasis is an immunosuppressive disease caused by protozoa of the genus Leishmania for which dogs are the domestic reservoir. The programmed cell death 1 molecule (PD-1) is highly expressed in leukocyte cells of dogs with visceral leishmaniasis, and it promotes T lymphocyte exhaustion and suppression of cytokine secretion. Because PD-1 has a suppressive function regarding cell immunity, we evaluated the effect of PD-1 blocking antibodies on NO, ROS and interleukin 17 (IL-17) production and on parasite load in spleen leukocyte cultures from naturally infected dogs. In vitro, PD-1 blocking promoted increased levels of intracellular NO and reduced the levels of IL-17 in the culture supernatant, in addition to reducing the parasite load, but do not change ROS levels. We conclude that PD-1 participates in regulation of the immune response and that the blocking antibody is effective in restoring host microbicidal activity. This can be investigated in an immuno -therapeutic study in the future.

Construção de uma biblioteca de fragmentos de anticorpos monoclonais de galinhas com cadeia única (scFv) por phage display com reatividade cruzada para estirpes heterólogas do vírus da bronquite infecciosa aviária

Monoclonal antibodies are the basis of various techniques used for antigen detection or characterization, and their use is specially recommended for the identification of viral strains involved in the etiology of infectious bronchitis outbreaks. These antibodies are homogeneous, highly specific and fully characterizable, allowing the improvement of immunological techniques detection and antigenic characterization of avian infectious bronchitis virus strains (IBV). A phage display library was used, which was prepared previously against the IBV vaccine strain (H120) for the selection of new scFv antibody fragments specific for heterologous IBV strains isolated from outbreaks in Brazil (IBVPR01, IBVPR05) and USA (SE-17). After three cycles of panning, a set of 15 scFv antibodies were expressed in phages and cross-reacted in ELISA with these three viral strains. Western-blotting analysis showed that two of the clones were expressing scFv specific for the nucleoprotein of these IBV strains, as well as to the recombinant form of this protein derived from M41. In conclusion, the recombinant fragments of monoclonal antibodies expressed in phage have a great potential for future use in immunodiagnostic techniques and to study the evolution of infectious bronchitis virus.

Anticorpos monoclonais constituem a base de vários testes usados na detecção e na identificação de antígenos. Nesse contexto, tais imuno-reagentes têm sido extensivamente empregados na identificação de estirpes virais envolvidas na etiologia de surtos de bronquite infecciosa a campo, permitindo o aperfeiçoamento das técnicas de detecção e caracterização antigênica do vírus da bronquite infecciosa das galinhas (VBI). No presente estudo, uma biblioteca de fragmentos de anticorpos de galinha originalmente preparada por phage display contra a estirpe vacinal (H120) do VBI foi usada para a seleção de fragmentos de anticorpos recombinantes com reatividade cruzada para as estirpes heterólogas IBVPR01 e IBVPR05, isoladas de surtos a campo no Brasil e a estirpe SE-17, isolada nos Estados Unidos. Após três ciclos de panning, foi identificado, pelo ELISA, um conjunto de 15 anticorpos scFv expressos em fagos e com reatividade cruzada para essas mesmas estirpes do VBI. A análise por Western-blotting revelou que dois desses clones apresentavam fagos expressando fragmentos de anticorpos monoclonais com reatividade cruzada para a nucleoproteína N das três estirpes do VBI e também para a forma recombinante dessa nucleoproteína derivada da estirpe M41. Concluindo, os fragmentos de anticorpos monoclonais recombinantes scFv-N produzidos em fagos interagem com um epítopo mais conservado da proteína N do VBI e apresentam um grande potencial para utilização na detecção e no diagnóstico direto desse vírus.

Construção de uma biblioteca de fragmentos de anticorpos monoclonais de galinhas com cadeia única (scFv) por phage display com reatividade cruzada para estirpes heterólogas do vírus da bronquite infecciosa aviária

Monoclonal antibodies are the basis of various techniques used for antigen detection or characterization, and their use is specially recommended for the identification of viral strains involved in the etiology of infectious bronchitis outbreaks. These antibodies are homogeneous, highly specific and fully characterizable, allowing the improvement of immunological techniques detection and antigenic characterization of avian infectious bronchitis virus strains (IBV). A phage display library was used, which was prepared previously against the IBV vaccine strain (H120) for the selection of new scFv antibody fragments specific for heterologous IBV strains isolated from outbreaks in Brazil (IBVPR01, IBVPR05) and USA (SE-17). After three cycles of panning, a set of 15 scFv antibodies were expressed in phages and cross-reacted in ELISA with these three viral strains. Western-blotting analysis showed that two of the clones were expressing scFv specific for the nucleoprotein of these IBV strains, as well as to the recombinant form of this protein derived from M41. In conclusion, the recombinant fragments of monoclonal antibodies expressed in phage have a great potential for future use in immunodiagnostic techniques and to study the evolution of infectious bronchitis virus.

Anticorpos monoclonais constituem a base de vários testes usados na detecção e na identificação de antígenos. Nesse contexto, tais imuno-reagentes têm sido extensivamente empregados na identificação de estirpes virais envolvidas na etiologia de surtos de bronquite infecciosa a campo, permitindo o aperfeiçoamento das técnicas de detecção e caracterização antigênica do vírus da bronquite infecciosa das galinhas (VBI). No presente estudo, uma biblioteca de fragmentos de anticorpos de galinha originalmente preparada por phage display contra a estirpe vacinal (H120) do VBI foi usada para a seleção de fragmentos de anticorpos recombinantes com reatividade cruzada para as estirpes heterólogas IBVPR01 e IBVPR05, isoladas de surtos a campo no Brasil e a estirpe SE-17, isolada nos Estados Unidos. Após três ciclos de panning, foi identificado, pelo ELISA, um conjunto de 15 anticorpos scFv expressos em fagos e com reatividade cruzada para essas mesmas estirpes do VBI. A análise por Western-blotting revelou que dois desses clones apresentavam fagos expressando fragmentos de anticorpos monoclonais com reatividade cruzada para a nucleoproteína N das três estirpes do VBI e também para a forma recombinante dessa nucleoproteína derivada da estirpe M41. Concluindo, os fragmentos de anticorpos monoclonais recombinantes scFv-N produzidos em fagos interagem com um epítopo mais conservado da proteína N do VBI e apresentam um grande potencial para utilização na detecção e no diagnóstico direto desse vírus.

Influence of rearing temperature changes on thrombocytes aggregation in rainbow trout / Influência de alterações de temperatura na agregação de trombócitos emtruta arco-íris

Fish, as poikilotherms, are subjected to the influence of the environmental temperature. It has been already reported that fish immune system is influenced by temperature; however, no information is available concerning if temperature has any effect on thrombocytes. Thrombocytes from fish reared at 6°C, 10oC and 20oC were assessed for alteration in their aggregation capacity. Thrombocyte percentages were altered by the water temperature at which the fish was reared, decreasing from 19% (at 10°C) to 13% (at 6°C) and increasing to 24% (at 20°C). However, the aggregation capacity was not significantly compromised by these temperature changes in an individual cell basis, which would suggest a capability of this cell, to maintain this indispensable function at different temperatures.(AU)

Os peixes, por serem animais pecilotermos, estão sujeitos à influências da temperatura do ambiente. Vários trabalhos já descreveram que o sistema imune é influenciado pela temperatura, contudo não existem informações concernentes à influencia desta sobre os trombócitos. Trombócitos provenientes de trutas arco-íris (Oncorrhynchus mykiss) mantidas a 6°C, 10ºC e 20ºC foram testados quanto à sua capacidade de agregação. A porcentagem de trombócitos sofreu alteração dependendo da temperatura da água em que os animais foram mantidos, diminuindo de 19% (a 10°C), para 13% (a 6°C) e aumentando para 24% (a 20°C). Entretanto, a capacidade de agregação individual de cada célula não foi significativamente afetada por essas mudanças de temperatura, o que sugere a qualidade dessa célula em manter essa função indispensável independente da temperatura.(AU)

Evaluation of an indirect ELISA for the detection of Salmonella in chicken meat

In this work, an indirect ELISA based on a monoclonal antibody (MAb) specific for an outer membrane protein of Salmonellaenterica serovar Enteritidis was used for detection of Salmonella in 154 samples of chicken meat. Its efficiency was determined through comparison with the results obtained from the conventional method. The prevalence of samples contaminated with Salmonella was 23% with the conventional culture method, and 26% with the ELISA. From thirty-five samples positive for Salmonella by the conventional method, 33 were also positive by ELISA. Seven other samples were only positive in the ELISA. Comparison of the results obtained in the two methods showed an ELISA sensitivity and specificity of 94%, and positive and negative predictive values of 82% and 98% respectively. The serotyping of the isolates revealed 31 Salmonella enterica serovar Enteritidis, 2 Salmonella enterica serovar Heidelberg, 1 Salmonella enterica serovar Choleraesuis and 1 Salmonella enterica sorovar 6,7:-:-.

Neste trabalho, um ELISA indireto baseado em um anticorpo monoclonal (MAb) especifico para proteína de membrane externa de Salmonellaenterica serovar Enteritidis foi usado para detecção de Salmonella em 154 amostras de carne de frango. Sua eficiência foi determinada através de comparação com os resultados obtidos pela metodologia convencional. A prevalência de amostras contaminadas com Salmonella foi de 23% pelo método de cultivo convencional, e 26% pelo ELISA. De 35 amostras positivas para Salmonella pela metodologia convencional, 32 também foram positivas no ELISA. Outras sete amostras foram positivas somente no ELISA. Comparando os resultados obtidos nos dois métodos, o ELISA demonstrou sensibilidade e especificidade de 94%, e valor preditivo positivo e negativo de 82% e 98% respectivamente. A sorotipagem dos isolados revelou 31 Salmonella enterica serovar Enteritidis, 2 Salmonella enterica serovar Heidelberg, 1 Salmonella enterica serovar Choleraesuis e 1 Salmonella enterica sorovar 6,7:-:-.

Influence of essential fatty acid deprivation on thrombocyte aggregation in rainbow trout / Influência da privação dos ácidos graxos essenciais na agregação de trombócitos em trutas arco-íris

Many reports have indicated that differences in blood cells formation and function in fish could be of dietary origino Essential fatty acids are certainly connected with these cells by virtue of being a source of important compounds like eicosanoids, platelet activating factor in mammals, as well as the cell membrane phospholipids. The thrombocytes from fish fed the commercial diet containing adequate amount of essential fatty acids exhibited greater capacity for aggregation when induced by Collagen Type I(56%), however, this capacity was reduced when fish were fed the essential fatty acids deficient diet (37%). The results obtained in this study demonstrated that EFA exert influence in thrombocytes by affecting their aggregation capacity.(AU)

Indicações sobre alterações na formação das células sanguíneas e em suas funções nos peixes têm sido relatadas em diversos trabalhos. Os ácidos graxos essenciais (EFA) certamente estão ligados a essas células devido ao fato de constituírem fonte de componentes importantes, como os eicosanoides, fatores de ativação de plaquetas nos mamíferos, bem como de fosfolipídios de membrana. Trombócitos oriundos de peixes alimentados com uma dieta comercial contendo quantidades adequadas de EFA mostraram uma grande capacidade de agregação quando induzidos por colágeno do tipo I (56%), contudo, essa capacidade encontrou-se reduzida quando os peixes foram alimentados com uma dieta deficiente em EFA (37%). Os resultados obtidos nesse estudo demonstraram que os ácidos graxos essenciais exercem influência nos trombócitos afetando sua capacidade de agregação.(AU)

Bovine respiratory syncytial virus: immunohistochemichal detection in mouse and bovine tissues using a Mab against human respiratory syncytial virus / Vírus respiratório sincicial bovino: detecção por imunoistoquímica em tecidos de camundongos e bovinos usando AcM contra o vírus respiratório sincicial humano

An immunoistochemical (IHC) test was developed to detect bovine respiratory syncytial virus (BRSV) in cell cultures and tissues of experimentally infected mice and calves, using a commercial monoclonal antibody (Mab) against human respiratory syncytial virus (HRSV), as a less expensive alternative, instead of producing specific monoclonal antibodies to BRSV. Clinical samples from calves suffering respiratory disease were also submitted to this test. IHC detected BRSV antigens in mouse tracheas (3, 5 and 7 days post-infection) and lungs (5 and 7 days post-infection), and in one of three lungs from experimentally infected calves. Lungs samples from two naturally infected calves were tested and resulted positive for BRSV by the IHC test. These results suggest that this test may be used in the future for diagnosis as well as a useful tool to assess the distribution of BRSV infections in Brazilian herds.(AU)

Desenvolveu-se um teste de imunohistoquímica (IHQ) para detecção do vírus respiratório sincicial bovino (BRSV) multiplicado em cultivo celular e em tecidos de camundongos e bezerros infectados experimentalmente, utilizando um anticorpo monoclonal comercial contra o vírus respiratório sincicial humano (HRSV), como uma alternativa para eliminar os custos de produção de anticorpos monoclonais específicos para o BRSV. Amostras clínicas de bezerros com sintomatologia respiratória foram analisadas. A técnica mostrou-se eficiente na detecção de antígenos do BRSV em traquéias (3, 5 e 7 dias pós-infecção) e pulmões (5 e 7 dias pós-infecção) dos camundongos infectados e em uma das três amostras de pulmões dos bezerros infectados experimentalmente. Amostras de pulmões de dois animais com infecção natural foram positivas para BRSV. Conclui-se que o teste de IHQ pode ser usado no diagnóstico das infecções por BRSV e na avaliação da distribuição dessas infecções nos rebanhos bovinos brasileiros.(AU)

Identificação do vírus do mosaico do tomateiro (ToMV) Tobamovirus, por meio de anticorpos monoclonais

Tomato is a highly important crop for the world economy, and very susceptible to virus diseases, among them the tomato mosaic tobamovirus (ToMV), which causes light and dark green mosaic in the leaves, decreases yield, among other symptoms. With the aim of early identifying ToMV in biological material, harvested from crop fields, monoclonal antibodies (MAbs) were produced against ToMV. The MAb 10.H1 tested through PTA-ELISA (Plate Trapped Antigen--Enzyme-Linked immunosorbent assay), does not cross-react with TMV (tobacco mosaic tobamovirus) or with proteins extracted from plant sap. The MAb was able to identify ToMV from infected plants. The ToMV was isolated, purified and used to re-inoculate tobacco and tomato plants to confirm the symptoms. In immunoblotting assays the MAb recognizes only the band corresponding to the coat protein of the ToMV (17.5 kDa). The MAb 10.H1 opens the possibility to identify ToMV in tomato seedlings avoiding its dissemination in cropped fields.

O tomateiro é uma olerícola de grande importância econômica e uma das mais suscetíveis a viroses, dentre as quais, a causada pelo vírus do mosaico do tomateiro (ToMV), gênero Tobamovirus, que tem como sintomas mosaico verde claro-escuro nas folhas, afilamento dos folíolos e diminuição da produção, entre outros sintomas. Visando a identificação do ToMV, foram produzidos anticorpos monoclonais (MAbs), testados através de PTA- ELISA ("plate trapped antigen- enzyme linked immunoassay"). O MAb (10.H1) foi utilizado para avaliar a capacidade de identificação do ToMV em testes no campo em plantas de tomate infectadas. O MAb não apresentou reação cruzada com TMV (tobamovirus do mosaico do tabaco) nem com extrato de plantas sadias. O ToMV das amostras foi isolado, purificado e re-inoculado em plantas de tomateiro e de tabaco, para confirmação dos sintomas. Em "immunobloting" o MAb 10.H1 reconheceu somente a proteína referente à capa protéica do ToMV (de 17,5 kDa). A especificidade do MAb 10.H1 pode permitir o diagnóstico precoce desta doença na fase de plântulas, ainda em casa de vegetação, evitando assim a disseminação desta virose no campo.

Identificação do vírus do mosaico do tomateiro (ToMV) Tobamovirus, por meio de anticorpos monoclonais

Tomato is a highly important crop for the world economy, and very susceptible to virus diseases, among them the tomato mosaic tobamovirus (ToMV), which causes light and dark green mosaic in the leaves, decreases yield, among other symptoms. With the aim of early identifying ToMV in biological material, harvested from crop fields, monoclonal antibodies (MAbs) were produced against ToMV. The MAb 10.H1 tested through PTA-ELISA (Plate Trapped Antigen--Enzyme-Linked immunosorbent assay), does not cross-react with TMV (tobacco mosaic tobamovirus) or with proteins extracted from plant sap. The MAb was able to identify ToMV from infected plants. The ToMV was isolated, purified and used to re-inoculate tobacco and tomato plants to confirm the symptoms. In immunoblotting assays the MAb recognizes only the band corresponding to the coat protein of the ToMV (17.5 kDa). The MAb 10.H1 opens the possibility to identify ToMV in tomato seedlings avoiding its dissemination in cropped fields.

O tomateiro é uma olerícola de grande importância econômica e uma das mais suscetíveis a viroses, dentre as quais, a causada pelo vírus do mosaico do tomateiro (ToMV), gênero Tobamovirus, que tem como sintomas mosaico verde claro-escuro nas folhas, afilamento dos folíolos e diminuição da produção, entre outros sintomas. Visando a identificação do ToMV, foram produzidos anticorpos monoclonais (MAbs), testados através de PTA- ELISA ("plate trapped antigen- enzyme linked immunoassay"). O MAb (10.H1) foi utilizado para avaliar a capacidade de identificação do ToMV em testes no campo em plantas de tomate infectadas. O MAb não apresentou reação cruzada com TMV (tobamovirus do mosaico do tabaco) nem com extrato de plantas sadias. O ToMV das amostras foi isolado, purificado e re-inoculado em plantas de tomateiro e de tabaco, para confirmação dos sintomas. Em "immunobloting" o MAb 10.H1 reconheceu somente a proteína referente à capa protéica do ToMV (de 17,5 kDa). A especificidade do MAb 10.H1 pode permitir o diagnóstico precoce desta doença na fase de plântulas, ainda em casa de vegetação, evitando assim a disseminação desta virose no campo.

Use of monoclonal antibody for detecting Vibrio cholerae O1 in oysters by means of agglutination test / Detecção de Vibrio cholerae O1 em ostras utilizando anticorpo monoclonal em ensaio de aglutinação

V. cholerae serovar O1 is the etiologic agent responsible for pandemic cholera, and it is considered the most important human pathogenic Vibrio. The symptoms presented by patients affected by this bacterium vary from mild diarrhea to severe disease, and may even lead to death. Among the diverse types of seafood, the oysters pose as an important means for cholera transmission. Traditional methods used to detect V. cholerae are laborious and time-consuming, and there is an urgent need to establish a rapid, sensitive, specific, simple, and low-cost testing . The objective of this trial was, therefore, to assess the performance of a slide agglutination test using latex particles sensitized with specific monoclonal antibodies (MAb) for detecting V. cholerae O1 in experimentally-contaminated oysters. The slide agglutination test based on sensitized latex detected 1.2X102 CFU of bacteria (dilution 1:32). Oyster samples used in the present study, for being experimentally contaminated, were originally free of V. cholerae, but other bacteria were found, such as: Proteus mirabilis, Pseudomonas spp, and other vibrios. The present study demonstrated that the period of time needed to verify the food contamination with V. cholerae is 18 hours, taking in consideration that traditional methods require an average of 7-day period for getting the final results. The produced MAb presented 100% of s

O V. cholerae sorogrupo O1 é o agente etiológico da cólera pandêmica, sendo considerado dentre os víbrios patogênicos ao homem, o mais importante. Os sintomas das infecções por esta bactéria variam de diarréia branda a doença grave podendo até levar a óbito. Dentre os alimentos marinhos, as ostras representam uma das principais vias na transmissão de cólera. Os métodos convencionais para detecção do V. cholerae O1 são laboriosos e demorados havendo, portando, a necessidade de implantar métodos rápidos, sensíveis, específicos, simples e de baixo custo. O objetivo deste estudo foi avaliar a técnica de aglutinação de partículas de látex sensibilizadas com anticorpo monoclonal (AcMo) na detecção de V. cholerae O1 em ostras, contaminadas laboratorialmente. A técnica de aglutinação com látex sensibilizado detectou 1,2x102 UFC da bactéria (diluição 1/32). As amostras de ostras utilizadas para contaminação originalmente não continham V. cholerae, mas outras bactérias foram detectadas, tais como: Proteus mirabilis, Pseudomonas spp. e outros víbrios. O presente estudo demonstrou que a detecção de V. cholerae em alimentos foi reduzida para 18 horas, considerando que pela metodologia convencional a análise é finalizada, em média, em 7 dias. O AcMo produzido apresentou uma sensibilidade e especificidade de 100% para V. cholerae.

Produção e caracterização de anticorpos monoclonais contra o vírus da bronquite infecciosa das galinhas

Monoclonal antibodies (Mab) specific to IBV Massachusetts M41 were produced aiming to the development of assays for IBV diagnosis and research, such as for rapidly detecting or typing IBV isolates. Mabs were detected by ELISA and characterized based on the isotype (ELISA) or IBV structural specificity (western blotting) respectively as IgA, IgG1, IgG2a, IgG2b or IgM or as specific to S1 (42), S2 (34, 43 and 71), M (7 and 22), N (15 and 50) and S whole molecule (3, 18, 52 and 57), the major IBV structural proteins

Um painel de anticorpos monoclonais (AcM) específicos contra o vírus da bronquite infecciosa das galinhas (VBIG) amostra Massachusetts M41 foi desenvolvido com a finalidade de possibilitar ferramentas para futuros estudos de amostras locais de VBIG. Os clones produtores de AcM foram detectados e caracterizados por ELISA, e para a determinação quanto à especificidade ao componente de VBIG foi utilizado western blotting (WB). Os híbridos produtivos foram clonados por diluição limitante, expandidos in vitro e mantidos em nitrogênio líquido. As bandas protéicas reconhecidas em WB pelos AcM apresentaram pesos moleculares que variaram de 180 a 30 kDa. Oito AcM reconheceram apenas um polipeptídeo e quatro ligaram-se ao polipeptídeo S (3, 18, 52 e 57) inteiro, com a banda de peso molecular aproximado de 180 kDa. Cinco AcM (5, 12, 41, 70 e 72) ligaram-se em mais de uma banda de VBIG. Outros sete AcM não se ligaram a nenhum polipeptídeo de VBIG. Entre os AcM que apresentam perspectivas de utilização em pesquisa e diagnóstico de VBIG incluem-se os produzidos pelo clone 42, dirigido contra S1, os produzidos pelos clones 34, 43 e 71, dirigidos contra S2, pelos clones 7 e 22, dirigidos contra M e pelos clones 15 e 50, cujos AcM reagiram contra a nucleoproteína N.

Capture immunoassay for LT detection produced by enterotoxigenic Escherichia coli in bacterial isolates

A capture enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), which detects LT-I toxin produced by enterotoxigenic Escherichia coli strains, has beendeveloped. This capture assay was performed using the IgG enriched fraction of anti-LT-I antiserum and IgG2b anti-LT-I monoclonal antibody and allowed a clear distinction between E. coli LT-I - producing and non-producing strains. The estimated accuracy of the assay is 78% for sensitivity, 94% for specificity and 92% for efficiency. Thus, the capture immunoassayis a sensitive tool for detection of E. coli, which produces heat-labile enterotoxin, and is suitable for use in clinical laboratories and epidemiological surveys in developing world.

O objetivo do presente trabalho foi a padronização de um imunoensaio de captura para detecção de amostras de E. coli produtoras da toxina LT-I. Este ensaio de captura foi desenvolvido utilizando-se a fração enriquecida em IgG do anticorpo policlonal anti-LT e um anticorpo monoclonal caracterizado como IgG2b. Através deste método verificou-se uma clara distinção entre cepas de E. coli produtoras e não produtoras da toxina (p 0,0001), sendo a sensibilidade do método de 78%, a especificidade de 94% e a eficiência de 92%. Assim, o imunoensaio de captura mostrou-se como uma ferramenta sensível para a detecção de amostras de E. coli que produzem a enterotoxina termo-lábil, podendo ser aplicado em laboratórios clínicos e inquéritos epidemiológicos em paises em desenvolvimento.

Capture immunoassay for LT detection produced by enterotoxigenic Escherichia coli in bacterial isolates

A capture enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), which detects LT-I toxin produced by enterotoxigenic Escherichia coli strains, has beendeveloped. This capture assay was performed using the IgG enriched fraction of anti-LT-I antiserum and IgG2b anti-LT-I monoclonal antibody and allowed a clear distinction between E. coli LT-I - producing and non-producing strains. The estimated accuracy of the assay is 78% for sensitivity, 94% for specificity and 92% for efficiency. Thus, the capture immunoassayis a sensitive tool for detection of E. coli, which produces heat-labile enterotoxin, and is suitable for use in clinical laboratories and epidemiological surveys in developing world.

O objetivo do presente trabalho foi a padronização de um imunoensaio de captura para detecção de amostras de E. coli produtoras da toxina LT-I. Este ensaio de captura foi desenvolvido utilizando-se a fração enriquecida em IgG do anticorpo policlonal anti-LT e um anticorpo monoclonal caracterizado como IgG2b. Através deste método verificou-se uma clara distinção entre cepas de E. coli produtoras e não produtoras da toxina (p 0,0001), sendo a sensibilidade do método de 78%, a especificidade de 94% e a eficiência de 92%. Assim, o imunoensaio de captura mostrou-se como uma ferramenta sensível para a detecção de amostras de E. coli que produzem a enterotoxina termo-lábil, podendo ser aplicado em laboratórios clínicos e inquéritos epidemiológicos em paises em desenvolvimento.