GENETIC VARIABILITY OF NEW BRAZILIAN PCV2D STRAINS AND THEIR RELATION TO COMMERCIAL VACCINES

No presente estudo 246 amostras clínicas oriundas de granjas de suínos comerciais nas regiões sul, sudeste e centr-oeste do Brasil, previamente vacinadas contra PCV2 e que apresentavam sinais clínicos compatíveis com PCVD foram submetidas para genotipagem de PCV2. O tipo de material enviado para diagnóstico foram amostras de fluido oral, soro e pool de órgãos linfoides. Das amostras analisadas, 106 (43.09% - 106/246) foram genotipadas, sendo 75.47% (80/106) identificadas como PCV2d e 22.64% (24/106) identificadas como PCV2b. Em 2/106 (1.89%) amostras foram verificadas co-infecção de PCV2b e PCV2d. Não houve detecção do genótipo PCV2a nas amostras analisadas. Dentre as amostras clínicas analisadas, o fluido oral obteve um maior número de amostras genotipadas (40/106-37.74%), seguido de pool de órgãos linfóides e soro, com o mesmo número de amostras genotipadas (33/106- 31.13%). Adicionalmente, 51 amostras clínicas brasileiras coletadas em 2019 foram enviadas para sequenciamento genético do gene ORF2, que codifica a proteína do capsídeo viral (Cap). Destas, 25 apresentaram boa qualidade para análise, sendo 8 genotipadas como PCV2b e 17 como PCV2d, confirmando que no Brasil, como descrito mundialmente, houve o aumento do genótipo PCV2d. Para analisar a distribuição temporal dos genótipos e flutuação mundial dos genótipos desde 1993 à 2019, 3,544 sequencias disponíveis no GenBank foram analisadas, demonstrando um considerável aumento do genótipo PCV2d a partir de 2006, sendo hoje, o genótipo mais prevalente no mundo. Para estimar a variabilidade da Cap protein de nossas sequencias de PCV2d, comparamos nossas amostras com outras 1,300 sequencias de PCV2d disponíveis no GenBank. Com o objetivo de avaliar a possível pressão vacinal sobre o o genótipo PCV2d, separamos as sequencias em 4 grupos: (1) Pre vacinação (PreVacD) - sequencias de amostras coletadas antes de 2006; (2) Pós vacinação (PosVacD) - sequencias de amostras coletadas entre 2007 e 2020; (3) sequencias de suínos selvagens ou de vida livre(WboarD) que não sofreram pressão vacinal; e (4) nossas sequencias de PCV2d (TestD), analisadas no presente estudo.. Devido às possíveis falhas vacinais observadas nas granjas de suínos comerciais no Brasil, as amostras de PCV2d sequenciadas no presente estudo foram comparadas com as sequencias da ORF2 disponíveis de três vacinas comercias utilizadas no Brasil, uma contendo o genótipo PCV2b e duas contendo o genótipo PCV2a. Grande parte dos resíduos de aminoácidos que se encontram dentro de regiões de epítopo são conservadas, sugerindo uma boa reação cruzada entre as amostras vacinais e as amostras de PCV2d analisadas. Contudo, em alguns resíduos de aminoácidos em sítios antigênicos, essencias para ligação de anticorpos e, consequentemente, neutralização viral, foram detectadas mutações entre as sequencias de PCV2d e as sequencias vacinais. Este resultado sugere que estas mutações possam ter importancia em relação à resposta. Porém, mais estudos devem ser realizados para elucidar essas questões, principalmente a implementação de processos de vigilância de genótipos de Circovirus suínos tipo 2 circulantes no Brasil.

In the present study, 246 clinical samples from commercial pig farms located in the south, southeast and central-west regions of Brazil previously vaccinated against PCV2 and showing clinical signs compatible with PCVD were submitted for PCV2 genotyping. The type of material sent for diagnosis were samples of oral fluid, serum and lymphoid organs pool. Of the analyzed samples, 106 (43.09% - 106/246) were genotyped, with 75.47% (80/106) identified as PCV2d and 22.64% (24/106) as PCV2b. In 2/106 (1.89%) samples, coinfection of PCV2b and PCV2d was observed. There was no detection of the PCV2a genotype in the analyzed samples. Among the analyzed clinical samples, oral fluid obtained the greater number of genotyped samples (40/106- 37.74%), followed by pool of lymphoid organs and serum, with the same number of genotyped samples (33/106-31.13%) . Additionally, 51 Brazilian clinical samples collected in 2019 were sent for genetic sequencing of the ORF2 gene, widely used for genomic/protein analysis, which encodes for the viral capsid protein (Cap). Of these, 25 had good quality for analysis, and 8 were genotyped as PCV2b and 17 as PCV2d, corroborating many other publications around the world that demonstrated the increase of the PCV2d genotype. To analyze the temporal distribution of genotypes and fluctuation of genotypes from 1993 to 2019 worldwide, 3,544 sequences available in GenBank were analyzed, demonstrating a considerable increase in the PCV2d genotype since 2006, today the most prevalent genotype in the world. To estimate the Cap protein variability of our PCV2d sequences, our results were compared to other 1,300 PCV2d sequences available in GenBank. In order to assess the possible pressure of the vaccine against the PCV2d genotype population infection, four groups of samples were defined: (1) Prevaccination (PreVacD) - sequences from samples collected before 2006; (2) Post-vaccination (PosVacD) - sequences of samples collected between 2007 and 2020; (3) sequences from wild or feral pigs (WboarD) that were not vaccinated, and (4) our PCV2d sequences (TestD) analyzed in the present study. Due to possible vaccine failures observed in commercial pig farms in Brazil, the PCV2d sequenced samples in the present study were compared to the ORF2 amino acid sequences available from three commercial vaccines used in Brazil, one containing the PCV2b genotype and 2 containing the PCV2a genotype. Most of the amino acid residues found within epitope regions were conserved, suggesting a good cross-reaction between vaccines and the analyzed PCV2d samples. However, in some amino acid residues in antigenic sites essential for antibody binding and consequently viral neutralization, mutations were detected in PCV2d sequences and in vaccine sequences. This result may suggest that these mutations might be involved in the vaccine immune response. However, further studies must be carried out to elucidate these aspects, especially the implementation of surveillance processes of Porcine Circovirus type 2 genotypes circulating in Brazil.

A double-antibody sandwich ELISA based on the porcine circovirus type 2 (PCV2) propagated in cell culture for antibody detection / Sandwich ELISA com duplo anticorpo baseado no circovirus suíno tipo 2 (PCV2) produzido em cultivo celular para detecção de anticorpos

Few studies have described enzyme-linked immunosorbent assays (ELISAs) for the detection of antibodies against porcine circovirus type 2 (PCV2) based on antigens produced in cell culture. Furthermore, few articles have described viral purification techniques for members of the family Circoviridae. This occurs because circoviruses are difficult to isolate, noncytopathogenic, and produce low viral titres in cell culture. Thus, for overcoming these difficulties in the cultivation of PCV2, this study aimed to develop a double-antibody sandwich ELISA based on the cell culture antigen PCV2b for the quantification of anti-PCV2 antibodies. A 20% and 50% discontinuous sucrose cushion was used for viral purification, which enabled the separation of cell culture proteins in the 20% sucrose cushion and a greater viral concentration in the 50% sucrose cushion. Following isopycnic centrifugation, PCV2 was concentrated in the band with density values from 1.330 to 1.395g/cm3. Viral purification was assessed using SDS-PAGE, indirect ELISA and electron microscopy. The standardised ELISA revealed a strong linear correlation (r= 0.826, p<0.001) when compared with a commercial ELISA kit. The assay exhibited low variability (inter-assay coefficient of variation of 4.24% and intra-assay of 1.80%) and excellent analytical specificity conferred by the capture antibody produced in rabbit. Thus, this ELISA is a rapid, specific and convenient method for the detection of antibodies against PCV2 in studies of experimental and natural infection, and in monitoring the response to vaccination on commercial farms.(AU)

Há poucos relatos na literatura de métodos de ELISA (Enzyme-linked immunosorbent assay), para a detecção de anticorpos contra o circovírus suíno tipo 2 (PCV2), baseados em antígenos produzidos em cultivo celular, bem como uma escassez de trabalhos descrevendo técnicas de purificação viral para os membros da família Circoviridae. Isso ocorre, pois os circovírus são de difícil isolamento, não causam efeito citopático e produzem um baixo título viral em cultivo celular. Assim, para superar essas dificuldades encontradas no cultivo do PCV2, este estudo objetivou desenvolver um sandwich ELISA com duplo anticorpo, baseado no antígeno de PCV2 produzido em cultivo celular, para a quantificação de anticorpos anti-PCV2. Um colchão de sacarose descontínuo a 20% e 50% foi utilizado para a purificação viral, o qual possibilitou a separação das proteínas oriundas do cultivo celular no colchão de sacarose a 20% e uma maior concentração viral no colchão de sacarose a 50%. Com a ultracentrifugação isopícnica, o PCV2 ficou mais concentrado na banda com valores de densidade de 1,330 a 1,395g/cm3. A purificação viral foi avaliada pelas técnicas de SDS-PAGE, ELISA indireto e microscopia eletrônica. Assim, o método de ELISA padronizado revelou uma forte correlação linear (r = 0,826, p <0,001) quando comparado com um kit de ELISA comercial. O ensaio demonstrou baixa variabilidade (coeficientes de variação inter-teste de 4,24% e intra-teste de 1,80%) e uma excelente especificidade analítica conferida pelo anticorpo de captura produzido em coelho. Portanto, o método de ELISA demonstrou ser rápido, específico e conveniente para a detecção de anticorpos contra o PCV2 em estudos de infecção natural e experimental, além da monitoria da resposta à vacinação contra o PCV2 em granjas comerciais.(AU)

A double-antibody sandwich ELISA based on the porcine circovirus type 2 (PCV2) propagated in cell culture for antibody detection / Sandwich ELISA com duplo anticorpo baseado no circovirus suíno tipo 2 (PCV2) produzido em cultivo celular para detecção de anticorpos

Few studies have described enzyme-linked immunosorbent assays (ELISAs) for the detection of antibodies against porcine circovirus type 2 (PCV2) based on antigens produced in cell culture. Furthermore, few articles have described viral purification techniques for members of the family Circoviridae. This occurs because circoviruses are difficult to isolate, noncytopathogenic, and produce low viral titres in cell culture. Thus, for overcoming these difficulties in the cultivation of PCV2, this study aimed to develop a double-antibody sandwich ELISA based on the cell culture antigen PCV2b for the quantification of anti-PCV2 antibodies. A 20% and 50% discontinuous sucrose cushion was used for viral purification, which enabled the separation of cell culture proteins in the 20% sucrose cushion and a greater viral concentration in the 50% sucrose cushion. Following isopycnic centrifugation, PCV2 was concentrated in the band with density values from 1.330 to 1.395g/cm3. Viral purification was assessed using SDS-PAGE, indirect ELISA and electron microscopy. The standardised ELISA revealed a strong linear correlation (r= 0.826, p < 0.001) when compared with a commercial ELISA kit. The assay exhibited low variability (inter-assay coefficient of variation of 4.24% and intra-assay of 1.80%) and excellent analytical specificity conferred by the capture antibody produced in rabbit. Thus, this ELISA is a rapid, specific and convenient method for the detection of antibodies against PCV2 in studies of experimental and natural infection, and in monitoring the response to vaccination on commercial farms.(AU)

Há poucos relatos na literatura de métodos de ELISA (Enzyme-linked immunosorbent assay), para a detecção de anticorpos contra o circovírus suíno tipo 2 (PCV2), baseados em antígenos produzidos em cultivo celular, bem como uma escassez de trabalhos descrevendo técnicas de purificação viral para os membros da família Circoviridae. Isso ocorre, pois os circovírus são de difícil isolamento, não causam efeito citopático e produzem um baixo título viral em cultivo celular. Assim, para superar essas dificuldades encontradas no cultivo do PCV2, este estudo objetivou desenvolver um sandwich ELISA com duplo anticorpo, baseado no antígeno de PCV2 produzido em cultivo celular, para a quantificação de anticorpos anti-PCV2. Um colchão de sacarose descontínuo a 20% e 50% foi utilizado para a purificação viral, o qual possibilitou a separação das proteínas oriundas do cultivo celular no colchão de sacarose a 20% e uma maior concentração viral no colchão de sacarose a 50%. Com a ultracentrifugação isopícnica, o PCV2 ficou mais concentrado na banda com valores de densidade de 1,330 a 1,395g/cm3. A purificação viral foi avaliada pelas técnicas de SDS-PAGE, ELISA indireto e microscopia eletrônica. Assim, o método de ELISA padronizado revelou uma forte correlação linear (r = 0,826, p < 0,001) quando comparado com um kit de ELISA comercial. O ensaio demonstrou baixa variabilidade (coeficientes de variação inter-teste de 4,24% e intra-teste de 1,80%) e uma excelente especificidade analítica conferida pelo anticorpo de captura produzido em coelho. Portanto, o método de ELISA demonstrou ser rápido, específico e conveniente para a detecção de anticorpos contra o PCV2 em estudos de infecção natural e experimental, além da monitoria da resposta à vacinação contra o PCV2 em granjas comerciais.(AU)

Interstitial nephritis of slaughtered pigs in the State of Mato Grosso, Brazil / Nefrite intersticial em suínos abatidos no Estado de Mato Grosso

This study evaluated histological lesions in kidney samples from pigs with nephritis in two slaughterhouses in the State of Mato Grosso, Brazil. Four hundred samples were subjected to histology, anti-porcine circovirus type 2 (PCV2) immunohistochemistry (IHC), anti-Leptospira sp. immunofluorescence (IF), and polymerase chain reaction (PCR) for PCV2, porcine parvovirus (PPV), and Torque teno virus type 1 and 2 (TTV1, TTV2) detection. Histological lesions were found in 81% of the samples, and mononuclear interstitial nephritis was the most frequent lesion (77.50%). A follicular pattern was observed in 40.97% of the interstitial nephritis lesions. PCV2, PPV, TTV1, and TTV2 were identified in the kidneys by PCR in 27.25%, 28.50%, 94%, and 87.5% of the samples, respectively. Leptospira sp. was not detected through IF. Infection by PCV2 (PCR) and the presence of histological lesions (P=0.008) and giant cells (P=0.0016) were significantly associated. An association was observed between the TTV2-TTV1 co-infection (P<0.0001) and the risk for pathogenesis. These findings indicated that PCV2, PPV, TTV1, and TTV2 were widely distributed among pigs in the local farms and that the presence of these agents should be considered in the differential diagnosis of kidneys with interstitial nephritis in pigs.(AU)

O propósito desse estudo foi avaliar as lesões histológicas observadas em rins condenados por nefrite pelo Serviço de Inspeção Federal, em dois frigoríficos de Mato Grosso, Brasil. Foram coletados 400 rins condenados por nefrite e submetidos aos exames de histologia, imuno-histoquímica (IHC) para Circovirus suíno Tipo 2 (PCV2), imunofluorescência direta (IF) para Leptospira sp. e reação em cadeia pela polimerase (PCR) para detecção de PCV2, Parvovirus suíno (PPV) e Torque teno vírus Tipo 1 e 2 (TTV1 e TTV2). Foram observadas lesões histológicas em 81% das amostras, sendo nefrite intersticial mononuclear a mais freqüente (77,50%). Das lesões de nefrite intersticial encontradas, 40,97% apresentaram padrão folicular. Através da PCR foi observada ampla distribuição dos agentes (PCV2, PPV, TTV1 e TTV2) nas propriedades e municípios, com ocorrência de 27,25%, 28,50%, 94% e 87,50%, respectivamente. Leptospira sp. não foi detectada através da IF. Houve associação significativa da infecção do PCV2 com presença de lesão histológica (P=0,008) e de células gigantes (P=0,0016). Também houve associação entre a co-infecção TTV2 e TTV1 (P<0,0001). Esses achados indicam que os vírus PCV2, PPV, TTV1 e TTV2 devem ser considerados no diagnóstico diferencial de rins com nefrite intersticial em suínos.(AU)

Pesquisa de antígenos e anticorpos contra Circovírus Suíno II em suínos com e sem sintomatologia da síndrome multisistêmica do definhamento em granjas comerciais mineiras / Research of antigen and antibodies against Porcine Circovirus Type - 2 in pigs with and without postweaning multsystemic wasting syndrome from commercial farms of Minas Gerais state

Circovirus Suíno Tipo-2 (CSV-2) é um vírus não-envelopado, DNA fita única circular, classificado na família de Circoviridae, relacionado à Síndrome Multisistêmica do Definhamento de Suínos (SMDS) de leitões. A técnica de Imuno-Histoquímica (IHQ) é aplicada na detecção de antígenos do (CSV-2) em tecido lesionados. Entretanto, suínos infectados com CSV-2 assintomáticos ou com infecções subclínicas podem disseminar o vírus no plantel. A pesquisa de anticorpos contra o CVS-2 em porcos aparentemente saudáveis pode sugerir o risco de ingresso de vírus. Neste trabalho foram investigados antígenos e anticorpos contra CVS-2 de porcos de granjas comerciais de sete e oito mesorregiões de Estado de Gerais de Minas (MG). 32 porcos com idades de cinco a onze semanas que apresentaram sinais clínicos de SMDS foram necropsiados. Antígenos do CVS-2 foram investigados nos porcos sacrificados (grupo I) e amostras de demanda de diagnóstico (grupo II) pela IHQ. 7.60% e mais de 60%do primeiro e segundo grupo, respectivamente, foram positivos para antígeno viral. Em todos, marcação intensa de macrófagos e histiócitos, especialmente nos linfonodos e pulmão, evidenciou antígenos a CVS-2. Em paralelo, 955 amostras de soros de porcos de 35 granjas comerciais de ciclo completo sem sintomatologia clínica de SMDS foram investigadas para a detecção de anticorpos contra o CVS-2 aplicando a técnica de Imunoperoxidase em Monocamada de Células (IPMC). Todos os rebanhos de suínos (100%) apresentaram animais positivos (nível de confiança 90% a 100%) com freqüência de 96,6% de porcos reagentes (nível de confiança 94.7% a 98,6%). Os títulos de anticorpos contra o CVS-2 variou 1:320 (médio) a 1:10.240 (alto). Os resultados sugerem que pelo menos 2,66% e 9% dos porcos das regiões Triângulo Mineiro e Zona da Mata, respectivamente, nesta amostragem poderiam desenvolver SMDS clínica e esta porcentagem alcança 3,35% no total dos soros.

Porcine Circovirus Type 2 (PCV-2) is a non-enveloped circular single stranded DNA virus classified in the Circoviridae family related to post weaning multi systemic wasting syndrome (PMWS) in piglets.Immune-Histochemical (IHC) techniques are applied to detected PCV-2 antigen in the animal tissue injuries. Although, asymptomatic or sub clinic PCV-2 infected pigs could disseminate the virus in the flock. Serologic survey on apparently health pigs could suggest the virus ingression risk. In this work, antigens and antibodies against PCVS-2 in swine from commercial farms of seven and eight mesorregions of Minas Gerais State (MG) were investigated. 32 pigs with ages from five to eleven weeks which presented SMDS clinical signs were submitted to necropsy. PCV-2 antigens were investigated either from sacrificed pigs (Group I) and diagnosis demand samples (Group II) by IHC. 7,60% and more than 60% of the first and second groups, respectively, were positive for viral antigen. In both of them, intense marking of macrophages and histiocytes, especially in the lymph nodes and lung, evidenced antigens to CVS-2. In parallel, Immunoperoxidase Monolayer Assay (IPMA) was applied to antibody against PCV-2 screened in 955 pigs from 35 complete cycle commercial farms from same mesorregions. All pig flocks (100%) presented positive animals (confidence level 90% to 100%) and the frequency of reacting pigs varied 96.6% (confidence level 94,7% to 98,6%). PCV-2 antibody titers ranged 1:320 (medium) to 1:10.240 (high). The results suggest that 2.66% and 9% of pigs from Triângulo Mineiro and Zona da Mata regions respectively, would be able to develop clinical SMDS and that percentage reach 3.35% in the total serum.

Perfil sorológico, viremia e eliminação do circovírus suíno tipo 2 em animais naturalmente infectados pertencentes a granjas com ou sem a síndrome da refugagem multissistêmica / Serological profile, viremia and PCV2 shedding in naturally infected pigs of herds with or without postweaning multisystemic wasting syndrome

Um estudo virológico e sorológico seccional (E1) e outro longitudinal (E2) foram realizados em granjas com (G2 e G3) e sem (G1) a síndrome de refugagem multissitêmica (SRM) no Brasil. Foram coletadas amostras de sangue, soro, swabs nasal e retal de animais de cada categoria do ciclo produtivo: porcas, leitões maternidade, creche, recria e terminação. Em E1, nas granjas G1a e G2, foram amostrados 40 animais de cada categoria. Em E2, nas granjas G1b e G3, 35 leitões na maternidade foram identificados e amostrados ao longo do ciclo produtivo. O soro foi avaliado para presença de anticorpos contra circovírus suíno tipo 2 (CVS2) e sangue e swabs para presença do ácido nucléico viral. Em E1, a categoria porcas possuía altas taxas de animais virêmicos e soropositivos, com porcentagem de porcas com títulos altos superior a G2. Em G1a a queda de imunidade passiva ocorreu entre o final da fase de creche e início da recria com aumento da eliminação viral em swabs e subsequente soroconversão. Em G2 a queda ocorreu entre a fase final da maternidade e início da creche, com diminuição da eliminação viral. Em E2, a queda da imunidade materna ocorreu entre a 1ª e 2ª coleta em G1b; e em G3, entre a 2ª e 3ª coleta. Em ambas as granjas, a queda de imunidade passiva coincidiu com o aumento da viremia e eliminação viral e a soroconversão ocorreu entre a 3ª e 4a coleta em ambas as granjas com aumento da média de título de anticorpos e declínio da viremia. Viremia e eliminação viral foram detectadas em todas as coletas realizadas; 42% dos animais amostrados em E2 foram virêmicos em todas as coletas e todas as amostras de tecido coletadas no abate foram positivas para o CVS2. Este estudo confirma a persistência da viremia mesmo em presença de altos títulos de anticorpos e que o perfil sorológico em um rebanho com e sem a presença da síndrome pode ser diferente, principalmente em relação à duração da imunidade passiva.(AU)

A virological and serological cross-sectional study (E1) and a longitudinal study (E2) were performed on herds with (G2 and G3) and without (G1) post weaning multisystemic syndrome (PMWS) in Brazil. Blood, serum, nasal and rectal swabs samples were collected of sows, farrowing piglets, nursery, growing and finishing pigs. In E1, were sampled 40 animals in each category (G1a and G2). In E2, (G1b and G3), 35 farrowing piglets were identified and sampled along the production cycle. Porcine circovirus type 2 (PCV2) antibodies were assayed. A PCR was used to detected PCV2 genome in blood and swabs. In E1, sows had high rates of viremic and seropositives animals, with percentage of sows with high antibodies titers greater than G2. Passive antibodies decline occurred between nursery and growing area with increased viral shedding in swabs and subsequent seroconversion in G1. In G2, the passive antibodies decay occurred in nursery, with a reduction in viral shedding. In E2, the decline of maternal immunity occurred between the 1st and 2nd collection in G1b, and between 2nd and 3rd collections in G3. In both herds, the decay of passive immunity coincided with increased viremia and viral shedding; and seroconversion occurred between the 3rd and 4th collection in both herds with decline of viremia. Viremia and viral shedding was detected in all samples days, 42% of animals sampled in E2 were viremic and all tissue samples collected at slaughterwere positive for PCV2. This study confirms the persistence of viremia even in the presence of high titers of antibodies and the serological profile in a herd with or without PMWS may be different, especially with regard to the passive immunity duration.(AU)

ETIOPATOLOGIA DO COMPLEXO DE DOENÇAS RESPIRATÓRIAS EM SUÍNOS VACINADOS PARA O VÍRUS INFLUENZA A

O complexo de doenças respiratórias dos suínos (CRDS) resulta de uma miscelânea de fatores e é um dos maiores e mais frequentes desafios na produção e sanidade de suínos. Este estudo testou a efetividade de uma vacina monovalente para o vírus A(H1N1)pdm09 quanto à resposta humoral, ocorrência de lesões e interação entre a patologia e patógenos no CDRS. Para tanto, foram avaliados entre os meses de Janeiro a Junho, quatrocentos e vinte suínos foram divididos em quatro grupos (n= 105 cada grupo): Grupo 1 (G1) controle com aplicação de PBS; Grupo 2 (G2) vacinado com duas doses de vacina com adjuvante Emulsigen - D®; Grupo 3 (G3) vacinado com duas doses de vacina com adjuvante hidróxido de alumínio; Grupo 4 (G4) vacinado com uma dose de vacina contendo adjuvante Emulsigen - D®. A vacina foi produzida na Embrapa Suínos e Aves (Concórdia-SC) a partir do vírus A(H1N1)pdm09 oriundo de uma granja em Santa Catarina com caso de doença respiratória. A vacinação deu-se pela via intramuscular na fase de creche, aos 35 e 55 dias de idade. Durante o período experimental foram realizadas avaliações zootécnicas (ganho de peso, conversão alimentar, consumo de ração) e clínicas (contagem de tosse e espirro) semanais e colheitas de sangue aos 21, 35, 56, 77 e 98 dias de idade. Uma amostragem dos animais foi necropsiada aos 70 e 126 dias e o restante foi avaliado por ocasião do abate (156 dias de idade). Amostras pulmonares foram colhidas para avaliação histológica, imuno-histoquímica e molecular. Os suínos do G2 foram os que apresentaram melhor resposta humoral à vacinação. A consolidação pulmonar crânio-ventral, especialmente no lobo cardíaco, foi o padrão de lesão macroscópica mais frequente nos grupos testados. Na microscopia a pneumonia broncointersticial associada à hiperplasia de BALT foi observada na maioria dos pulmões e teve relação com a detecção do Mycoplasma hyopneumoniae por técnicas moleculares e imuno-histoquímica. O vírus influenza circulou no rebanho em pelo menos dois momentos ocasionando uma infecção sub-clínica. Foi possível identificar o vírus em pequenas quantidades no pulmão com o uso de técnicas moleculares, entretanto, sem lesão compatível com infecção na histopatologia. Outro agente frequentemente identificado foi o PCV2, e, na maior parte dos casos associado com M. hyopneumoniae. A partir das observações conclui-se que duas doses da vacina com o adjuvante Emulsigen - D® apresentou melhor capacidade de induzir a resposta humoral, e, pela frequência de lesões macroscópicas e histológicas, as pneumonias são altamente prevalentes, mesmo em um rebanho com controle ambiental, bom manejo e com protocolo de vacinação que inclui M. hyopneumoniae, PCV2 e influenza A.

Porcine respiratory disease complex (PRDC) is one of the most important health concern for swine producers. This study tested the effectiveness of a monovalent A(H1N1)pdm09 vaccine, evaluating the humoral response, lesions occurrence and the interaction between pathology and pathogens in the PRDC. Therefore, four hundred and twenty pigs were divided in four groups, (n= 105): Group 1 (G1) PBS control; Group 2 (G2) vaccinated with two vaccine doses with an Emulsigen - D® adjuvant; Group 3 (G3) vaccinated with two vaccine doses with aluminum hydroxide adjuvant; Group 4 (G4) vaccinated with one vaccine dose with Emulsigen - D® adjuvant and evaluated between January to June. The vaccine was produced at Embrapa Swine and Poultry (Concórdia SC) with A(H1N1)pdm09 virus isolated from a clinical case of respiratory disease in a farm in Santa Catarina. The vaccination was done by intrammuscular route at nursery stage, at 35 and 55 days of age. During the experimental period, zootecnic evaluations (weight gain, feed conversion ratio and feed intake) and clinical monitoring (number of cough and sneeze) were performed weekly. Blood samples were collected at 21, 35, 56, 77 and 98 days-old. Some animals were necropsied at 70 and 126 days and the remaining pigs were evaluated at slaughter (156 days of age). Lungs were macroscopically evaluated and samples were taken for histological, immunohistochemical and molecular analysis. Pigs from G2 showed better humoral response to vaccination. The cranio-ventral lung consolidation, particularly in cardiac lobe, was the most frequent macroscopic lesion observed, except for G1 that showed lower incidence of gross lesions. In microscopy, broncointersticial pneumonia associated to BALT hyperplasia was observed in most lungs and was related to M. hyopneumoniae detection by molecular and immunohistochemical techniques. Influenza A virus circulated in the herd for at least two times, but resulting in a subclinical infection. It was possible to identify the virus in small amount in the lung by molecular techniques, however no lesion were observed in the histopathology. Another frequently agent identified was PCV2, and in the most cases it was associated with M. hyopneumoniae. Based on that, the use of two vaccine doses with an Emulsigen - D® adjuvant showed better humoral response. The frequency of macroscopic and histological lesions demonstrated that pneumonia are highly prevalent even in a herd with environmental control, good management and with a vaccination protocol including M. hyopneumoniae, PCV2 and influenza A virus.

Detection and dynamics of porcine circovirus 2 shedding in semen using conventional and real-time PCR / Deteccão e dinâmica de excreção do circo vírus porcino tipo 2 no semen pelo PCR convencional e PCR em tempo real

The dynamics of porcine circovirus type 2 (PCV2) shedding in semen of naturally infected boars was studied. Semen was collected serially each 15 or 20 days during 62 days from 5 boars from a herd and from 11 boars from an artificial insemination center. All boars were positive for PCV2 DNA by nested polymerase chain reaction of raw semen in at least two sampling dates, and most of them had detectable shedding in all sampling dates. Real-time quantitative PCR was performed in 23 samples. All samples showed low amounts of PCV2 DNA, ranging from 98 to 652 PCV2 copies/mL. No differences between the frequencies of PCV2 DNA shed in semen were found considering herds and age of boars. PCV2 shedding in the semen can occur continuously or intermittently up to 60 days in naturally infected boars at 12 to 42 months old in absence of PCV2 clinical signs. These results demonstrate sporadic and long-term shedding patterns of low amounts of PCV2 DNA in semen from naturally infected boars.(AU)

A dinâmica da excreção do circovírus suíno tipo 2 (CVS2) em sêmen de machos naturalmente infectados foi estudada. Amostras de sêmen de cinco machos de um plantel e de 11 machos de um centro de inseminação artificial foram coletadas a cada 15 ou 20 dias durante 62 dias. Todos os machos testados foram positivos para a presença do DNA viral no sêmen em pelo menos duas coletas, sendo que a maioria deles eliminou o CVS2 em todas as coletas. O teste de PCR quantitativa em tempo real foi aplicado em 23 amostras. Todas as amostras tinham baixa quantidade de DNA viral, variando de 98 a 652 cópias de CVS2/ml. Não houve diferença na freqüência de eliminação do DNA viral levando em conta os plantéis e idade dos machos. A excreção do CVS2 no sêmen pode ocorrer de forma contínua ou intermitente por mais de 60 dias em machos de 12 a 42 meses de idade naturalmente infectados na ausência de sinais clínicos de CVS2. Estes resultados demonstram padrões esporádico e de longa duração de excreção viral em pequenas quantidades no sêmen de varrões naturalmente infectados.(AU)

Identificação do circovírus suíno tipo 2 e do parvovírus suíno em fetos suínos natimortos e mumificados provenientes de granjas no Brasil / Identification of porcine circovirus type 2 and porcine parvovirus in porcine stillbirths and mummified fetuses from swine farms in Brazil

Investigou-se a presença de sequências genômicas do circovírus suíno tipo 2 (PCV2) e do parvovírus suíno (PPV) em 147 fetos suínos natimortos e mumificados. Estas amostras, provenientes de 39 granjas localizadas em oito estados brasileiros, foram coletadas entre os anos de 2006 e 2008. Utilizaram-se fragmentos de coração e pulmão para extração do DNA total e posterior amplificação de fragmentos correspondentes aos patógenos virais pela técnica de reação em cadeia da polimerase (PCR). Entre as 147 amostras, 74 (50,3%) foram positivas ao PCV2 enquanto nove amostras (6,2%) apresentaram coinfecção com o PCV2 e o PPV. Nenhuma amostra foi positiva apenas para PPV. Entre as 39 granjas estudadas, 21 (53,8%) apresentaram fetos positivos ao PCV2, sendo detectada coinfecção com o PCV2 e o PPV em três (7,7%). Esses resultados indicam que o PCV2 pode ser um importante agente infeccioso causador de morte embrionária e fetal em suínos no Brasil e deve ser incluído na lista de diagnóstico diferencial.

This study investigated the presence of genome sequences of the porcine circovirus type 2 (PCV2) and porcine parvovirus (PPV) in 147 porcine stillbirths and mummified fetuses. These samples, originated from 39 farms located in eight Brazilian states, were collected between 2006 and 2008. Heart and lung fragments were used for extraction of total DNA and later amplification of correspondent fragments of the virus pathogens through polymerase chain reaction (PCR) technique. Out of 147 samples, 74 (50.3%) were positive for PCV2 while nine samples (6.2%) were positive for PCV2 and PPV. None of the samples were positive just for PPV. Out of 39 investigated farms, 21 (53.8%) had fetuses positive for PCV2 while co-infection with PCV2 and PPV was detected in 3 farms (7.7%). These results indicate that PCV2 could be an important infection agent in cases of porcine stillbirths and mummified fetuses in Brazil and must be included at differential diagnostic list.

Identificação do circovírus suíno tipo 2 e do parvovírus suíno em fetos suínos natimortos e mumificados provenientes de granjas no Brasil / Identification of porcine circovirus type 2 and porcine parvovirus in porcine stillbirths and mummified fetuses from swine farms in Brazil

Investigou-se a presença de sequências genômicas do circovírus suíno tipo 2 (PCV2) e do parvovírus suíno (PPV) em 147 fetos suínos natimortos e mumificados. Estas amostras, provenientes de 39 granjas localizadas em oito estados brasileiros, foram coletadas entre os anos de 2006 e 2008. Utilizaram-se fragmentos de coração e pulmão para extração do DNA total e posterior amplificação de fragmentos correspondentes aos patógenos virais pela técnica de reação em cadeia da polimerase (PCR). Entre as 147 amostras, 74 (50,3%) foram positivas ao PCV2 enquanto nove amostras (6,2%) apresentaram coinfecção com o PCV2 e o PPV. Nenhuma amostra foi positiva apenas para PPV. Entre as 39 granjas estudadas, 21 (53,8%) apresentaram fetos positivos ao PCV2, sendo detectada coinfecção com o PCV2 e o PPV em três (7,7%). Esses resultados indicam que o PCV2 pode ser um importante agente infeccioso causador de morte embrionária e fetal em suínos no Brasil e deve ser incluído na lista de diagnóstico diferencial.(AU)

This study investigated the presence of genome sequences of the porcine circovirus type 2 (PCV2) and porcine parvovirus (PPV) in 147 porcine stillbirths and mummified fetuses. These samples, originated from 39 farms located in eight Brazilian states, were collected between 2006 and 2008. Heart and lung fragments were used for extraction of total DNA and later amplification of correspondent fragments of the virus pathogens through polymerase chain reaction (PCR) technique. Out of 147 samples, 74 (50.3%) were positive for PCV2 while nine samples (6.2%) were positive for PCV2 and PPV. None of the samples were positive just for PPV. Out of 39 investigated farms, 21 (53.8%) had fetuses positive for PCV2 while co-infection with PCV2 and PPV was detected in 3 farms (7.7%). These results indicate that PCV2 could be an important infection agent in cases of porcine stillbirths and mummified fetuses in Brazil and must be included at differential diagnostic list.(AU)

Amplificação do genoma de circovírus suíno tipo 2 (PCV2) por círculo rolante e produção de um clone viral

O circovírus suíno tipo 2 (PCV2) é o principal agente envolvido na Síndrome Multissistêmica do Definhamento dos Suínos (SMDS). Na maioria dos países onde a suinocultura tem expressiva importância econômica, a SMDS vem causando sérios prejuízos. Com o objetivo de contribuir para a caracterização genética de isolados brasileiros de PCV2, duas amostras autóctones foram clonadas e seqüenciadas na íntegra. Para tanto, o genoma viral foi extraído de tecidos de animais com SMDS e amplificado pelo método denominado amplificação em círculo rolante com múltiplos primers (ACRMP). Ambas seqüências apresentaram 1.767 nucleotídeos e diferiram entre si em apenas um nucleotídeo. A análise filogenética destas duas seqüências mostrou maior identidade com o grupo (1A) formado por isolados holandeses, franceses e chineses. Um  isolado brasileiro previamente sequenciado, de Minas Gerais, foi classificado em outro grupo e a seqüência diferiu em até 16 nucleotídeos em relação aos isolados do Rio Grande do Sul. Na etapa seguinte desses estudos, visando o futuro desenvolvimento de vacinas, um dos genomas aqui seqüenciados foi transfectado em células de testículo de suíno (ST). Antígenos virais nas células transfectadas foram detectados por imunoperoxidase, demonstrando assim a infecciosidade do clone produzido. Entretanto, o clone infeccioso obtido não foi capaz de multiplicar-se a ponto de fornecer

Perfil sorológico para circovírus suíno tipo 2 em granjas comerciais de suínos no Brasil / Serological profiles to porcine circovirus type 2 antibodies in Brazil

A técnica de imunoperoxidase em monocamada de células (IPMC) para demonstração de anticorpos contra o circovírus suíno tipo 2 (CVS2) foi empregada para a investigação sorológica em oito granjas de suínos destinadas à produção comercial. Das 240 amostras de soros testadas, 229 (95,4%) foram reagentes com títulos que variaram de 20 até 10.240. Títulos de anticorpos foram detectados nas faixas etárias de duas a três semanas até animais acima de 24 semanas e encontrados em granjas com e sem a síndrome multissistêmica do definhamento (SMD). A média dos títulos de anticorpos revelou diferenças estatísticas (P<0,05) nas faixas etárias de 11 a 13 e 14 a 22 semanas nos animais oriundos de granjas com e sem a SMD. Os resultados refletem a importância de conhecer o perfil sorológico do rebanho e assegurar a implantação de um efetivo cronograma de vacinação contra o CVS2.(AU)

The immunoperoxidase in monolayer cells (IPMC) technique for the demonstration of antibodies against type 2 porcine circovirus (PCV2) was used for the serological investigation in eight industrial swine farms. Out of the 240 tested sera, 229 (95,4%) were reactive with titers which varied from 20 up to 10.240. Titers of antibodies were detected in pigs from two to three weeks of age up to above 24 weeks of age, and were observed in farms with and without clinical signs indicative of the post-weaning multisystemic wasting syndrome (PMWS). Analysing the mean titers, statistical differences (P<0.05) were evidentiated in two age intervals, of 11 to 13 and 14 to 22 weeks of age. The results indicate the importance of determining the serological profiles of commercial swine herds, in order to enable the implantation of effective hygiene and vaccination protocols for PCV2 prevention.(AU)

Uso do plasma suíno ultrafiltrado na recuperação de leitões com sinais clínicos de circovirose / The use of ultra-filtered swine plasma in the recovery of pigs with clinical signs of porcine circovirus infection

Testou-se o efeito do plasma suíno ultrafiltrado spray-dried, associado a um acidificante comercial na água de bebida para a recuperação de leitões com sinais clínicos da síndrome multissistêmica do definhamento dos suínos (SMDS). Utilizaram-se 40 leitões com sinais clínicos da SMDS, selecionados 20 dias após o alojamento em uma unidade de terminação, distribuídos em quatro tratamentos (T) de 10 leitões cada. No T1, os animais receberam água clorada à vontade (controle); no T2, solução com 2,5 por cento do plasma sangüíneo diluído em água; no T3, acidificante (Selko®) diluído em água na dosagem de 12ml/10l e, no T4, solução com 2,5 por cento do plasma sangüíneo e o acidificante na dose de 12ml/10l, diluídos em água. Os leitões não foram medicados e foram sacrificados aos 28 ou 40 dias de experimento para avaliação sorológica e patológica. Não houve diferença no ganho de peso e na situação clínica-patológica entre os tratamentos. Entretanto, os leitões do T4 estavam em melhor situação clínica-patológica. Os leitões dos quatro tratamentos tiveram boa recuperação, sem terem sido medicados. Observou-se alta freqüência de lesões compatíveis com a SMDS nos pulmões, rins e linfonodos. Concluiu-se que o plasma spray dried associado ao ácido não melhoraram o desempenho e a situação clínica-patológica de leitões com sintomas da SMDS(AU)

The effect of the ultra-filtered spray-dried porcine plasma, associated to a commercial acid in the drinking water was tested for recovering pigs with clinical signs of the porcine postweaning multisystemic wasting syndrome (PMWS). Forty piglets with clinical signs of the PMWS were used following a selection at 20 days after their housing in one finishing facility. They were divided in four treatment groups (T) of 10 pigs each: T1 - chlorine treated water ad libitum (control); T2 - solution prepared with 2.5 percent of plasma diluted in water; T3 - acid (Selko® ) diluted in water at the concentration of 12 ml/10l; T4 - solution prepared with 2.5 percent of plasma diluted and the acid (Selko® ) diluted in water at the concentration of 12 ml/10l. The pigs received no medication and were euthanized at 28 or 40 days after the beginning of the experiment for serological and pathological tests. Differences at the weight gain and in the clinical-pathological situation were not observed among the treatments. However, pigs from T4 were in better clinical-pathological situation. The pigs of all four treatments showed a good recovery, although they were not medicated. Even though, it was observed a high frequency of lesions compatible to PMWS in the lungs, kidneys and lymph nodes. It was concluded that the plasma spray-dried associated to the acid did not improve the performance and the clinical-pathological situation of pigs with clinical signs of PMWS(AU)

Coinfecção experimental de circovírus suíno tipo 2 isolado no Brasil e parvovírus suíno em suínos SPF / Experimental coinfection of SPF pigs with porcine circovirus type 2 isolated in Brazil and porcine parvovirus

Avaliou-se a patogenicidade do circovírus suíno tipo 2 (PCV2) isolado no estado de Santa Catarina mediante coinfecção experimental com parvovírus suíno (PPV). Foram utilizados 24 leitões specific pathogen free (SPF) com cinco dias de idade, distribuídos em quatro grupos (G), alojados em salas independentes e inoculados por via intranasal: G1 - controle (n=4); G2 - inoculados com PCV2 (n=7); G3 - inoculados com PPV (n=6); G4 - inoculados com PCV2 e PPV (n=7). Os animais foram monitorados diariamente para avaliação clínica e necropsiados 48 dias após a infecção. As principais lesões anatomopatológicas observadas nos suínos do G2 e G4 foram: aumento do volume dos linfonodos, depleção linfocitária com redução dos folículos linfóides nos órgãos linfocitários e presença de infiltrado eosinofílico nos linfonodos. A técnica de nested-PCR para PCV2 foi utilizada detectando DNA viral em órgãos de todos os animais do G2 e G4. O PCV2 infectou suínos SPF por via intranasal e foi detectado em outros órgãos, com mais lesões histopatológicas e em maior proporção nos animais coinfectados com PPV (G4), quando comparados aos infectados somente com PCV2 (G2).(AU)

The virulence of porcine circovirus type 2 (PCV2) isolated in Santa Catarina State by coinfection with porcine parvovirus (PPV) was investigated. Twenty-four, 5-day-old SPF pigs were distributed into four groups, housed in separate rooms and inoculated by intranasal route: G1 - control (n=4); G2 - inoculated with PCV2 (n=7); G3 - inoculated with PPV (n=6); G4 - inoculated with PCV2 and PPV (n=7). The animals were monitored daily for clinical evaluation and were necropsied 48 days after the infection. The pathological lesions seen in G2 and G4 pigs were: enlargement of lymph nodes, mild to moderate lymphoid cell depletion, affecting lymphoid follicles in lymphoid organs and presence of infiltration by eosinophils in lymph nodes. PCV2 DNA was detected by a nested-PCR in all pigs of G2 and G4. These findings confirmed that pigs were successfully infected intranasally with PCV2. The presence of PCV2 DNA in tissue samples and the pathological lesions were more evident in pigs infected with both PCV2 and PPV than in pigs infected with PCV2 alone.(AU)

Identificação do circovírus suíno tipo 2 por reação em cadeia da polimerase e por imunoistoquímica em tecidos suínos arquivados desde 1988 no Brasil

Postweaning multisystemic wasting syndrome (PMWS) is of economical importance a disease caused by porcine circovirus type 2 (PCV2). A retrospective investigation was performed on paraffin-embedded organs samples from swine submitted to Embrapa Swine and Poultry Research Center between 1985 and 1998 for histopathologic diagnosis. A total of 25 cases were chosen from the archival collection of the Animal Health Laboratory at Embrapa Swine and Poultry based on characteristic pathological lesions of PMWS, such as lymphadenopathy, interstitial pneumonia, hepatitis and interstitial nephritis. The sections were investigated by nested-PCR (polymerase chain reaction) which used specific primers for the ORF2 sequence of the PCV2 and by immunohistochemistry using a monoclonal antibody specific for PCV2 capsid antigen. Virus specific DNA and antigen were detected in tissue samples of two out of 25 analyzed cases. The earliest positive sample originated from 1988. These results indicate that PCV2 is present in Brazil since 1988.

A síndrome multissistêmica do definhamento dos suínos (SMDS) é uma doença de importância econômica causada pelo circovírus suíno tipo 2 (PCV2). Uma pesquisa retrospectiva foi realizada em amostras de órgãos de suínos fixados em blocos de parafina arquivados, que haviam sido submetidos à Embrapa Suínos e Aves entre 1985 e 1998 para o diagnóstico histopatológico. Vinte e cinco casos foram selecionados com base nas lesões histológicas características da SMDS, tais como linfoadenopatia, pneumonia intersticial, hepatite e nefrite intersticial. A presença de PCV2 nos cortes histológicos foi pesquisada por reação em cadeia da polimerase interna (nested-PCR), na qual utilizou-se primers específicos para a seqüência da ORF2 do PCV2 e também por imunoistoquímica, utilizando um anticorpo monoclonal específico para o capsídeo do PCV2. O DNA viral e os antígenos específicos do PCV2 foram detectados em amostras de tecidos de dois dos 25 casos analisados, sendo um desses datado de 1988. Esses resultados indicam que o PCV2 já estava presente no Brasil desde 1988.

Identificação do circovírus suíno tipo 2 por reação em cadeia da polimerase e por imunoistoquímica em tecidos suínos arquivados desde 1988 no Brasil

Postweaning multisystemic wasting syndrome (PMWS) is of economical importance a disease caused by porcine circovirus type 2 (PCV2). A retrospective investigation was performed on paraffin-embedded organs samples from swine submitted to Embrapa Swine and Poultry Research Center between 1985 and 1998 for histopathologic diagnosis. A total of 25 cases were chosen from the archival collection of the Animal Health Laboratory at Embrapa Swine and Poultry based on characteristic pathological lesions of PMWS, such as lymphadenopathy, interstitial pneumonia, hepatitis and interstitial nephritis. The sections were investigated by nested-PCR (polymerase chain reaction) which used specific primers for the ORF2 sequence of the PCV2 and by immunohistochemistry using a monoclonal antibody specific for PCV2 capsid antigen. Virus specific DNA and antigen were detected in tissue samples of two out of 25 analyzed cases. The earliest positive sample originated from 1988. These results indicate that PCV2 is present in Brazil since 1988.

A síndrome multissistêmica do definhamento dos suínos (SMDS) é uma doença de importância econômica causada pelo circovírus suíno tipo 2 (PCV2). Uma pesquisa retrospectiva foi realizada em amostras de órgãos de suínos fixados em blocos de parafina arquivados, que haviam sido submetidos à Embrapa Suínos e Aves entre 1985 e 1998 para o diagnóstico histopatológico. Vinte e cinco casos foram selecionados com base nas lesões histológicas características da SMDS, tais como linfoadenopatia, pneumonia intersticial, hepatite e nefrite intersticial. A presença de PCV2 nos cortes histológicos foi pesquisada por reação em cadeia da polimerase interna (nested-PCR), na qual utilizou-se primers específicos para a seqüência da ORF2 do PCV2 e também por imunoistoquímica, utilizando um anticorpo monoclonal específico para o capsídeo do PCV2. O DNA viral e os antígenos específicos do PCV2 foram detectados em amostras de tecidos de dois dos 25 casos analisados, sendo um desses datado de 1988. Esses resultados indicam que o PCV2 já estava presente no Brasil desde 1988.

Amplificação do genoma de circovírus suíno tipo 2 (PCV2) por círculo rolante e produção de um clone viral

O circovírus suíno tipo 2 (PCV2) é o principal agente envolvido na Síndrome Multissistêmica do Definhamento dos Suínos (SMDS). Na maioria dos países onde a suinocultura tem expressiva importância econômica, a SMDS vem causando sérios prejuízos. Com o objetivo de contribuir para a caracterização genética de isolados brasileiros de PCV2, duas amostras autóctones foram clonadas e seqüenciadas na íntegra. Para tanto, o genoma viral foi extraído de tecidos de animais com SMDS e amplificado pelo método denominado amplificação em círculo rolante com múltiplos primers (ACRMP). Ambas seqüências apresentaram 1.767 nucleotídeos e diferiram entre si em apenas um nucleotídeo. A análise filogenética destas duas seqüências mostrou maior identidade com o grupo (1A) formado por isolados holandeses, franceses e chineses. Um  isolado brasileiro previamente sequenciado, de Minas Gerais, foi classificado em outro grupo e a seqüência diferiu em até 16 nucleotídeos em relação aos isolados do Rio Grande do Sul. Na etapa seguinte desses estudos, visando o futuro desenvolvimento de vacinas, um dos genomas aqui seqüenciados foi transfectado em células de testículo de suíno (ST). Antígenos virais nas células transfectadas foram detectados por imunoperoxidase, demonstrando assim a infecciosidade do clone produzido. Entretanto, o clone infeccioso obtido não foi capaz de multiplicar-se a ponto de fornecer

Amplificação do genoma de circovírus suíno tipo 2 (PCV2) por círculo rolante e produção de um clone viral

O circovírus suíno tipo 2 (PCV2) é o principal agente envolvido na Síndrome Multissistêmica do Definhamento dos Suínos (SMDS). Na maioria dos países onde a suinocultura tem expressiva importância econômica, a SMDS vem causando sérios prejuízos. Com o objetivo de contribuir para a caracterização genética de isolados brasileiros de PCV2, duas amostras autóctones foram clonadas e seqüenciadas na íntegra. Para tanto, o genoma viral foi extraído de tecidos de animais com SMDS e amplificado pelo método denominado amplificação em círculo rolante com múltiplos primers (ACRMP). Ambas seqüências apresentaram 1.767 nucleotídeos e diferiram entre si em apenas um nucleotídeo. A análise filogenética destas duas seqüências mostrou maior identidade com o grupo (1A) formado por isolados holandeses, franceses e chineses. Um  isolado brasileiro previamente sequenciado, de Minas Gerais, foi classificado em outro grupo e a seqüência diferiu em até 16 nucleotídeos em relação aos isolados do Rio Grande do Sul. Na etapa seguinte desses estudos, visando o futuro desenvolvimento de vacinas, um dos genomas aqui seqüenciados foi transfectado em células de testículo de suíno (ST). Antígenos virais nas células transfectadas foram detectados por imunoperoxidase, demonstrando assim a infecciosidade do clone produzido. Entretanto, o clone infeccioso obtido não foi capaz de multiplicar-se a ponto de fornecer

Amplificação do genoma de circovírus suíno tipo 2 (PCV2) por círculo rolante e produção de um clone viral

O circovírus suíno tipo 2 (PCV2) é o principal agente envolvido na Síndrome Multissistêmica do Definhamento dos Suínos (SMDS). Na maioria dos países onde a suinocultura tem expressiva importância econômica, a SMDS vem causando sérios prejuízos. Com o objetivo de contribuir para a caracterização genética de isolados brasileiros de PCV2, duas amostras autóctones foram clonadas e seqüenciadas na íntegra. Para tanto, o genoma viral foi extraído de tecidos de animais com SMDS e amplificado pelo método denominado amplificação em círculo rolante com múltiplos primers (ACRMP). Ambas seqüências apresentaram 1.767 nucleotídeos e diferiram entre si em apenas um nucleotídeo. A análise filogenética destas duas seqüências mostrou maior identidade com o grupo (1A) formado por isolados holandeses, franceses e chineses. Um  isolado brasileiro previamente sequenciado, de Minas Gerais, foi classificado em outro grupo e a seqüência diferiu em até 16 nucleotídeos em relação aos isolados do Rio Grande do Sul. Na etapa seguinte desses estudos, visando o futuro desenvolvimento de vacinas, um dos genomas aqui seqüenciados foi transfectado em células de testículo de suíno (ST). Antígenos virais nas células transfectadas foram detectados por imunoperoxidase, demonstrando assim a infecciosidade do clone produzido. Entretanto, o clone infeccioso obtido não foi capaz de multiplicar-se a ponto de fornecer

Amplificação do genoma de circovírus suíno tipo 2 (PCV2) por círculo rolante e produção de um clone viral

O circovírus suíno tipo 2 (PCV2) é o principal agente envolvido na Síndrome Multissistêmica do Definhamento dos Suínos (SMDS). Na maioria dos países onde a suinocultura tem expressiva importância econômica, a SMDS vem causando sérios prejuízos. Com o objetivo de contribuir para a caracterização genética de isolados brasileiros de PCV2, duas amostras autóctones foram clonadas e seqüenciadas na íntegra. Para tanto, o genoma viral foi extraído de tecidos de animais com SMDS e amplificado pelo método denominado amplificação em círculo rolante com múltiplos primers (ACRMP). Ambas seqüências apresentaram 1.767 nucleotídeos e diferiram entre si em apenas um nucleotídeo. A análise filogenética destas duas seqüências mostrou maior identidade com o grupo (1A) formado por isolados holandeses, franceses e chineses. Um  isolado brasileiro previamente sequenciado, de Minas Gerais, foi classificado em outro grupo e a seqüência diferiu em até 16 nucleotídeos em relação aos isolados do Rio Grande do Sul. Na etapa seguinte desses estudos, visando o futuro desenvolvimento de vacinas, um dos genomas aqui seqüenciados foi transfectado em células de testículo de suíno (ST). Antígenos virais nas células transfectadas foram detectados por imunoperoxidase, demonstrando assim a infecciosidade do clone produzido. Entretanto, o clone infeccioso obtido não foi capaz de multiplicar-se a ponto de fornecer