Exposure to Pfaffia glomerata causes oxidative stress and triggers hepatic changes / Exposição a Pfaffia glomerata causa estresse oxidativo e desencadeia alterações hepáticas

Medicinal plant species are genetically engineered to obtain higher production of biomass and specific secondary metabolites, which can be used in the pharmaceutical industry. The aim of the present study was to evaluate the effect of Pfaffia glomerata (Spreng.) Pedersen tetraploid hydroalcoholic extract on the liver of adult Swiss mice. The extract was prepared from the plant roots and given to the animals by gavage, for 42 days. The experimental groups were treated with water (control), Pfaffia glomerata tetraploid hydroalcoholic extract (100, 200 and 400 mg/kg) and Pfaffia glomerata tetraploid hydroalcoholic extract discontinuously (200 mg/kg). The last group received the extract every 3 days, for 42 days. The oxidative status, mineral dynamics, and cell viability were analysed. The liver weight and the number of viable hepatocytes were reduced, despite the increased cell's number. Increased levels of malondialdehyde and nitric oxide, and changes in iron, copper, zinc, potassium, manganese and sodium levels were observed. aspartate aminotransferase levels were increased while alanine aminotransferase levels were decreased due to BGEt intake. Our results showed that BGEt induced alterations of oxidative stress biomarkers leading to liver injury, which was associated with a reduction in the number of hepatocytes.

Espécies de plantas medicinais são geneticamente modificadas para obter maior produção de biomassa e metabólitos secundários específicos, que podem ser utilizados na indústria farmacêutica. O objetivo do presente estudo foi avaliar o efeito do extrato hidroalcoólico tetraploide de Pfaffia glomerata no fígado de camundongos suíços adultos. O extrato foi preparado a partir das raízes das plantas e administrado aos animais por gavagem, por 42 dias. Os grupos experimentais foram tratados com água (controle), extrato hidroalcoólico de Pfaffia glomerata tetraploide (100, 200 e 400 mg/kg) e extrato hidroalcoólico de Pfaffia glomerata tetraploide de forma descontinua (200 mg/kg). O último grupo recebeu o extrato a cada 3 dias, durante 42 dias. O estado oxidativo, a dinâmica mineral e a viabilidade celular foram analisados. O peso do fígado e o número de hepatócitos foram reduzidos, apesar do aumento do número de células. Observou-se aumento dos níveis de malondialdeído e óxido nítrico e alterações nos níveis de Ferro, Cobre, Zinco, potássio, Magnésio e sódio. Os níveis de aspartato aminotransferase aumentaram, enquanto os níveis de alanina aminotransferase diminuíram devido à ingestão do extrato. Nossos resultados mostraram que BGEt induziu alterações de biomarcadores de estresse oxidativo levando a lesão hepática, que foi associada a uma redução no número de hepatócitos.

Estudo do efeito isolado ou combinado da melatonina e pentoxifilina na neutralização da ação da afaltoxina B1 sobre o parênquima hepático de ratos Wistar

Este estudo, teve como objetivo, avaliar a ação da pentoxifilina e melatonina sobre o estresse oxidativo em lesões hepáticas ocasionado por Aflatoxina B1 em Ratos Wistar. Foram utilizados 40 ratos Wistar machos com 70 dias de idade. Os animais receberam DMSO 3%, 1 mg/ kg AFB1, 1 mg/kg AFB1 + 5 mg / kg de MEL, 1 mg/kg AFB1 + 100 mg /kg de PTX + 5 mg / kg e 1 mg/kg AFB1 + 100 mg/kg de PTX. Nos níveis de enzimas oxidantes e antioxidantes, a mensuração em nível sérico, o NO reduziu em todos grupos, o MDA tecidual elevou nos grupos PTX e MEL+PTX. A GST tecidual reduziu 0,47% para AFB1 e a CAT elevou no grupo AFB1; MEL e PTX. A nível sérico SOD reduziu em todos grupos e a PTN reduziu em PTX e PTX+MEL. Não foram observadas diferenças significativas entre AST, ALT, FA e GGT, bem como, em área de glicogênio hepático. Microscopicamente os animais que receberam AFB1 observamos proliferação e ativação de células de Kupffer, necrose de hepatócitos periportais e binucleação dos hepatócitos. No grupo MEL foi observado, proliferação de ductos biliares, hepatócitos binucleares e discreta necrose hepática. Os animais tratados com PTX tiveram congestão moderada, necrose discreta, proliferação de células de Kupffer, hiperplasia de ductos com pleomorfismo celular, binucleação. Os animais que recebram MEL+PTX proliferação e ativação de ductos biliares, necrose de hepatócitos periportais A histomorfométria hepática, revelou que os animais que receberam AFB1, PTX e MEL+PTX tiveram redução de núcleo; o grupo AFB1 e PTX tiveram aumento de citoplasma de hepatócitos. As células de Kupffer reduziram nos grupos AFB1, PTX e MEL+PTX; o espaço porta reduziu em MEL e MEL+PTX . O capilar sinusóide reduziu em todos grupos. Adicionalmente a ánalise imunohistoquímica evidenciou marcação de arginase-1 em todos grupos experimentais, não havendo diferenças estatísticas na quantificação em pixel desta imunomarcação. Observou-se com os resultados expostos que a aflatoxina induziu a lesões hepatobiliares na dose e períodos de exposição, entretanto, a utilização de melatonina e pentoxifilina e sua associação, demonstrou que a melatonina minimizou lesões no parênquima hepático e o fígado mesmo após intoxicação a micotoxina expressou a arginase-1.

This study aimed to evaluate the action of pentoxifylline and melatonin on oxidative stress in liver systems by Aflatoxin B1 in Wistar Rats. Forty male Wistar rats with 70 days of age were used. Animals received DMSO 3%, 1 mg/kg AFB1, 1 mg/kg AFB1 + 5 mg/kg MEL, 1 mg/kg AFB1 + 100 mg/kg PTX + 5 mg/kg and 1 mg/kg AFB1 + 100 mg/kg PTX. In the levels of oxidants and antioxidants, measured at serum level, NO enzyme levels in all groups, cidual MDA increased in PTX and M+PTX groups. GST Tissue Corrector 0.47% for AFB1 and CAT increased in the AFB1 group; MEL and PTX. Serum SOD in all groups and PTN+ in PTX and PTXMEL. No significant differences were observed between AST, ALT FA and GGT, as well as in the liver area. Microscopically, the animals that received AFB1 observed and offered Kup necrosis cells, periportal cells and hepatocytes binucleation. In the MEL group, binuclear hepatocytes and mild hepatic necrosis were observed. Animals treated with PTX had moderate management, mild necrosis, Kup cell hyperplasia, ducts with pleomorphism, binucleation and cell hyperplasia. Animals that received reduced hepatocytes were bred for animals that received reduced AFB1, PTX and MEL+PTX from animals that received AFB1, PTX and animals that received reduced AFB1, PTX and MEL+PTX from animals that received AFB1, PTX and reduced MEL+PTX of animals that received the animals that received AFB1, PTX and MEL+PTX. the AFB1 and PTX group had increased hepatocyte cytoplasm. Kupffer cells will reduce in AFB1, PTX and MEL+PTX groups; the transport space in MEL and MEL+PTX . The sinusoid capillary in all groups. Additionally, an immunohistochemical analysis showed arginase-1 labeling in all experimental groups, with no statistical differences in pixel quantification of unlabeling. Observe with the results that exposure to flatoxin induced hepatobiliary treatments at the dose and exposure periods, however, the use of melatonin and pentoxifylline and their association, that melatonin aflatoxin minimized treatments in the liver parenchyma and even after intoxication the toxin expressed an arginase -1.

Short-term effects of a spinosyn's family insecticide on energy metabolism and liver morphology in frugivorous bats Artibeus lituratus (Olfers, 1818)

A new class of insecticide derived from fermentation of Sacharopolyspora spinosa - spinosad, has been indicated as being of low toxicity and a natural alternative to classical pesticides. In order to elucidate several aspects related to the morphophysiological changes induced by spinosad in Artibeus lituratus, the effects of a seven-day administration on plasma glucose, glycogen, protein and lipid concentrations were evaluated, and possible changes in liver cells were examined by histological analysis. Animals were fed with spinosyn-contaminated fruit through immersion in a solution. Data reporting on metabolism revealed a decrease in hind limb muscle lipid concentration in the treated group. Morphological analysis indicated a significant increase in liver cell diameter in treated animals compared to the control group. This study indicates that spinosyn, used at its recommended dose, does not affect general energy metabolism in A. lituratus but may affect some ultrastructural characteristics of liver cells.

Uma nova classe de inseticida derivado da fermentação de Sacharopolyspora spinosa - espinosade - tem sido indicada como uma alternativa natural de baixa toxicidade aos agrotóxicos clássicos. A fim de elucidar diversos aspectos relacionados às mudanças morfofisiológicas induzidas por espinosade Artibeus lituratus, os efeitos da administração durante sete dias sobre a glicose plasmática, proteína de glicogênio, e as concentrações de lipídios foram avaliados, assim como possíveis alterações nas células do fígado foram examinadas por análise histológica. Os animais foram alimentados com frutas contaminadas com espinosade por meio de imersão em uma solução. Os dados sobre o metabolismo revelaram um decréscimo na concentração de lipídios dos músculos das patas posteriores dos animais do grupo tratado. A análise morfológica indicou um aumento significativo no diâmetro das células do fígado dos animais tratados em relação ao controle. Este estudo indica que o espinosade, utilizado na dose recomendada, não afeta o metabolismo energético em geral de A. lituratus, mas pode afetar algumas características ultraestruturais das células hepáticas.

L-ARGININA PARA ALEVINOS DE TILÁPIA DO NILO E PACU

Foram conduzidos dois experimentos, com dois ensaios cada, para avaliar a deposição e os efeitos do fornecimento de L-arginina em dietas para tilápia-do-nilo (Oreochromis niloticus) e pacu (Piaractus mesopotamicus). O experimento 1, teve como objetivo de avaliar os efeitos da L-arginina sobre o perfil de ácidos graxos, histologia intestinal e de hepatopâncreas e parâmetros zootécnico, além de averiguar possíveis alterações da taxa de deposição de ácidos graxos em alevinos de tilápia do Nilo. A condução deste foi feita em duas etapas que foram realizadas concomitantemente. Na etapa 1, foram utilizadas 150 tilápias do Nilo, com peso médio de 10 gramas, distribuídas em 10 caixas de 50 litros de volume útil, com 15 peixes em um delineamento inteiramente casualizado com dois tratamentos e cinco repetições. Os tratamentos foram: (A) ração comercial (suplementada com 1% de alanina), (B) ração comercial suplementada com 1% de arginina. O experimento teve duração de 30 dias. Foram realizadas análises físico-químicas da água, análises bromatológicas, hematológicas e histológicas do hepatopâncreas, intestino e musculatura. Na etapa 2 foram utilizadas 150 tilápias do Nilo, com peso médio de 10 gramas, distribuídas em 10 caixas de 50 litros de volume útil, com 10 peixes em um delineamento inteiramente casualizado com dois tratamentos e cinco repetições. Os tratamentos foram: (A) ração comercial (suplementada com 1% de alanina), (B) ração comercial suplementada com 1% de L-arginina. Foram realizadas coletas semanais (0, 7, 14, 21 e 28 dias), nas quais três indivíduos foram capturados ao acaso e substituídos por outros três indivíduos identificados (150 peixes que só foram utilizados para manter a densidade de estocagem). Neste ensaio foram determinadas as alterações nas taxas de deposição dos ácidos graxos na carcaça de alevinos de tilápia do Nilo durante o período de alimentação. Os resultados obtidos foram submetidos a análise de variância em nível de 5% de probabilidade (ANOVA) em caso de diferença foi aplicado o teste Tukey através do programa estatístico Statistica 7.0. Os dados de perfil de ácidos graxos avaliados no tempo foram analisados com medidas repetidas no tempo em modelos mistos (PROC MIXED), nos quais foram considerados os efeitos fixos de uso de arginina na ração (1 grau de liberdade GL); fases de crescimento (4 GL), que foram caracterizadas pelos tempos de abate; e suas interações. Dentre as estruturas de erros investigadas, a Componentes de Variância (VC) foi a mais adequada aos conjuntos de dados analisados, conforme os critérios de informação de Akaike corrigido (AICC) e bayesiano (BICC). As médias que apresentaram diferença significativa (P<0,05) para os efeitos fixos isolados e para as suas interações foram comparadas pelo teste de Fischer. As análises foram realizadas no programa Statistical Analysis System, versão 9.0. A suplementação com 1% de L-arginina não afetou o desempenho, composição química e o perfil de ácidos graxos de alevinos de tilápia do Nilo. Os peixes que receberam arginina tiveram maior desenvolvimento das vilosidades e apresentaram inclusões lipídicas nos hepatócitos. No experimento 2, o objetivo foi avaliar os efeitos da L-arginina sobre o perfil de ácidos graxos, composição química da carcaça e parâmetros zootécnico, além de averiguar possíveis alterações da taxa de deposição de ácidos graxos em alevinos de Piaractus mesopotamicus. A condução deste foi feita em dois ensaios, realizados concomitantemente. No ensaio 1, foram utilizadas 100 Piaractus mesopotamicus, com peso médio de 15,65 gramas, distribuídas em 10 caixas de 50 litros de volume útil, com 10 peixes em um delineamento inteiramente casualizado com dois tratamentos e cinco repetições. Os tratamentos foram: (A) ração comercial (suplementada com 1% de alanina), (B) ração comercial suplementada com 1% de arginina. O experimento teve duração de 42 dias. Foram realizadas análises físico-químicas da água, análises bromatológicas. No ensaio 2, foram utilizadas 120 Piaractus mesopotamicus, com peso médio de 15,65 gramas, distribuídos em 10 caixas de 50 litros de volume útil, com 12 peixes em um delineamento inteiramente casualizado com dois tratamentos e cinco repetições. Os tratamentos foram: (A) ração comercial (suplementada com 1% de alanina) e (B) ração comercial suplementada com 1% de L-arginina. Foram realizadas coletas a cada 10 dias (0, 10, 20 e 30 dias), nas quais três indivíduos foram capturados ao acaso e substituídos por outros três indivíduos identificados (90 peixes que só foram utilizados para manter a densidade de estocagem). Neste ensaio foram determinadas as alterações nas taxas de deposição dos ácidos graxos na carcaça de alevinos de pacu. Os resultados obtidos foram submetidos a análise de variância em nível de 5% de probabilidade (ANOVA) em caso de diferença foi aplicado o teste Tukey através do programa estatístico Statistica 7.0. Os dados de perfil de ácidos graxos avaliados no tempo foram analisados com medidas repetidas no tempo em modelos mistos (PROC MIXED), nos quais foram considerados os efeitos fixos de uso de arginina na ração (1 grau de liberdade GL); fases de crescimento (3 GL), que foram caracterizadas pelos tempos de abate; e suas interações. Dentre as estruturas de erros investigadas, a Componentes de Variância (VC) foi a mais adequada aos conjuntos de dados analisados, conforme os critérios de informação de Akaike corrigido (AICC) e bayesiano (BICC). As médias que apresentaram diferença significativa (P<0,05) para os efeitos fixos isolados e para as suas interações foram comparadas pelo teste de Fischer. As análises foram realizadas no programa Statistical Analysis System, versão 9.0. No ensaio 1, indivíduos alimentados com dietas suplementadas por arginina apresentaram maior peso final e maiores teores de matéria mineral. Para as outras determinações não houve efeito da arginina. No ensaio 2, não houve diferença entre os tratamentos no desempenho zootécnico, entretanto a suplementação com 1% de arginina na dieta durante 30 dias reduziu os teores do ácidos graxos: 16:1, 20:4 n-6, 24:0, DHA, dos AGMI e da relação AGPI/AGS e aumentou os níveis de 16:0, 18:0 e dessa forma, aumentando a soma dos AGS, além de aumentar a relação dos ácidos graxos n-6/n-3. Para alevinos de pacu a suplementação com 1% de arginina na dieta acarretou em piora no perfil geral de ácidos graxos, mas acarretou em melhora no ganho de peso. Já para alevinos de tilápia-do-nilo as melhoras encontradas na histologia no indica os efeitos importantes e a influência desse aminoácido em todo o metabolismo dessa espécie.

Two experiments were conducted and two assays each to assess the deposition and the effects of the supply of L-arginine in diets for Nile tilapia (Oreochromis niloticus) and pacu (Piaractus mesopotamicus). The experiment 1 was to evaluate the effects of L-arginine on the fatty acid profile, intestinal histology and hepatopancreas and productive parameters, and determine possible changes in the rate of deposition of fatty acids in tilapia Nile. This experiment was done in two steps that were carried out concomitantly. In step 1, 150 Nile tilapia with average weight of 10 grams were used and distributed in 10 boxes of 50 liters of useful volume, with 15 fish in a completely randomized design with two treatments and five replications. The treatments were: (A) commercial diet (supplemented with 1% alanine), (B) commercial diet supplemented with 1% arginine. The experiment lasted 30 days. Physical and chemical analyzes of water, bromatological, hematological and histological analysis of the hepatopancreas, intestines and muscles were performed. In step 2, 150 Nile tilapia with average weight of 10 grams were used and distributed in 10 boxes of 50 liters of useful volume, with 10 fish in a completely randomized design with two treatments and five replications. The treatments were: (A) commercial diet (supplemented with 1% alanine), (B) commercial diet supplemented with 1% L-arginine. Weekly collections were performed (0, 7, 14, 21 and 28 days), in which three individuals were captured at random and replaced by three other individuals identified (150 fish that were only used to keep the stocking density). In this trial were determinated changes in deposition rates of fatty acids in the fingerlings carcass of Nile tilapia during the feeding period. The results obtained with the results of a variance analysis at 5% of probability (ANOVA) in case of difference were applied or tested Tukey through the statistical program 7.0. The degree profile data were not analyzed with repeated measures without time in models (PROC MIXED), which were fixed for the use of arginine in the region (1 degree of freedom - GL); Phases of growth (4 GL), which were characterized by the times of slaughter; And their interactions. Among the error structures investigated, the Variance Components (VC) for a set of analyzed data sets, according to the Corrected Akaike (AICC) and Bayesian (BICC) evaluation criteria. Supplementation with 1% L-arginine did not affect performance, chemical composition and the fatty acid profile of the Nile tilapia fingerlings. Fish that received arginine had further development of villi and presented lipid inclusions in hepatocytes. In experiment 2, the objective was to evaluate the effects of Larginine on the profile of fatty acids, chemical composition, productive parameters, and determine possible changes in the rate of deposition of fatty acids in Piaractus mesopotamicus fingerlings. The second experiment was done in two steps that were performed concurrently. In step 1, 100 Piaractus mesopotamicus with an average weight of 15.65 grams were used and distributed in 10 boxes of 50 liters of useful volume, with 10 fish in a completely randomized design with two treatments and five replications. The treatments were: (A) commercial diet (supplemented with 1% alanine), (B) commercial diet supplemented with 1% arginine. The experiment lasted 42 days. Physical and chemical analyzes of water and chemical composition analysis were carried out. In step 2, 120 Piaractus mesopotamicus, with an average weight of 15.65 grams were used and distributed in 10 boxes of 50 liters of useful volume, with 12 fish in a completely randomized design with two treatments and five replications. The treatments were: (A) commercial diet (supplemented with 1% alanine) and (B) commercial diet supplemented with 1% L-arginine. Samples were taken every 10 days (0, 10, 20 and 30 days), in which three individuals were captured at random and replaced by three other individuals identified (90 fish that were only used to keep the stocking density). In this trial were observed changes in deposition rates of fatty acids in body pacu fingerlings. The results obtained with the results of a variance analysis at 5% of probability (ANOVA) in case of difference were applied or tested Tukey through the statistical program 7.0. The degree profile data were not analyzed with repeated measures without time in models (PROC MIXED), which were fixed for the use of arginine in the region (1 degree of freedom - GL); Phases of growth (3 GL), which were characterized by the times of slaughter; And their interactions. Among the error structures investigated, the Variance Components (VC) for a set of analyzed data sets, according to the Corrected Akaike (AICC) and Bayesian (BICC) evaluation criteria. In step 1, fish fed diets supplemented with arginine had higher final weight and higher levels of mineral matter. For other determinations there was no effect of arginine. In step 2, there was no difference between treatments on the performance, however supplementation with 1% of arginine in the diet for 30 days reduced the fatty acid content 16:1, 20: 4 n-6, 24: 0, DHA, the ratio of MUFA and PUFA/SFA and increased levels of 16:0, 18:0 and thereby increasing the sum of the AGS, while increasing the ratio of fatty acids of the n-6 / n-3. For pacu fingerlings, the supplementation with 1% of arginine in the diet resulted in deterioration in the overall fatty acid profile, but resulted in improved weight gain after 45 days. As for fingerlings of Nile tilapia improvements found in the histology indicates the important effects and the influence of this amino acid in whole metabolism of this species.

Fatores hepatotróficos modulam a capacidade proliferativa em cultura primária de hepatócitos de ratos normais / Hepatotrophic factors modulate the proliferative potential in primary hepatocyte cultures of normal rats

A utilização de fatores hepatotróficos (FH) tem trazido importantes avanços no tratamento de algumas doenças hepáticas. A avaliação dos efeitos dessas substâncias pode ser feita com o uso de modelos in vivo, como a regeneração hepática após a hepatectomia parcial ou in vitro, como a cultura de hepatócitos, células estreladas ou outros tipos celulares do fígado. O modelo de cultura demonstra ser útil por possibilitar a análise individualizada de determinadas substâncias ou soluções diretamente nas células-alvo, facilitando o delineamento de seu mecanismo de ação. Dessa forma, o presente trabalho estudou in vitro os efeitos da administração de fatores hepatotróficos (FH) em hepatócitos isolados de fígados de ratos, avaliando seu metabolismo e proliferação celular. Trinta ratos Wistar fêmeas foram utilizados, o fígado retirado e, por digestão enzimática in situ, suas células foram dissociadas e os hepatócitos separados em gradiente de Percoll 45%; cultivados em meio DMEM/F12, tratadas com diferentes concentrações dos FH (1X, 5X e 10X) e analisadas em intervalos de 24, 48 e 72 horas. A viabilidade e a proliferação celular foram avaliadas pelo método colorimétrico MTT, a toxicidade pelo iodeto de propídeo, o potencial elétrico da membrana mitocondrial pela Rodamina 123 e a expressão da citoqueratina 8, 18 e desmina como marcadores do citoesqueleto. O metabolismo hepático foi avaliado pela depuração do verde de indocianina (VIC), pela quantificação de colágeno tipo I e pela formação de radicais lipídicos poliinsaturados peroxidados. A técnica utilizada para a obtenção de hepatócitos mostrou-se eficaz com viabilidade superior a 90%, sem apresentar toxicidade, com manutenção do potencial mitocondrial e com marcação positiva para citoqueratinas 8, 18 e desmina. A adição dos FH aumentou a proliferação dos hepatócitos nos três períodos analisados em relação ao grupo controle. Os FH não demonstraram toxicidade em cultura primária de hepatócitos em nenhuma das concentrações avaliadas ao longo de todos os períodos experimentais. A adição dos FH na concentração de 10X evitou a formação de radicais livres, protegendo os hepatócitos da lipoperoxidação. Por outro lado, a avaliação funcional das culturas primárias pelo teste VIC mostrou-se eficaz na determinação do metabolismo dos hepatócitos, como a manutenção dos níveis das transaminases e amilase. Os hepatócitos mantidos em cultura primária após a adição dos FH em todos os períodos analisados aumentaram a produção de colágeno, e também foram capazes de modificar a distribuição da população de células nas fases quiescentes, aumentando sua capacidade de síntese. A adição dos FH nas concentrações estudadas nas culturas de hepatócitos mostrou-se eficaz na manutenção dessas células, mantendo-se funcionalmente ativos, com a expressão dos marcadores de seu metabolismo e diferenciação

The use of hepatrotophic hic factors (HF) has provided important advances in the treatment of several hepatic disorders. The evaluation of this treatment may be carried out by in vivo models, as experiments on hepatic regeneration after partial hepatectomy; or in vitro models as culture of hepatocytes, stellate cells or any other hepatic cell. This last model allows an individual analysis of the studied substances on their target cells, providing the possibility of further investigation on the mechanisms involved. Therefore, the present study evaluated the in vitro effects of the hepatotrophic factors administration on the metabolism and proliferation of cultured hepatocytes from normal rat liver. Liver from 30 Wistar rats were used, and after in situ enzimatic dissociation, hepatocytes were collected and separated by 45% Percoll density gradient, cultivated in DMEN/F12 media supplemented with different HF concentrations (1×, 5× and 10×) and finally analyzed at 24, 48 and 72hs intervals. Cell viability and proliferation were assessed by MTT colorimetric assay, cell toxicity by propidium iodide, mitochondrial membrane electrical potential by 123 rodamine test and cytokeratin 8, 18 and desmin as cytoskeleton markers. Hepatic metabolism was evaluated by infusion of indocianine green (ICG), by type I collagen quantification and by peroxided polyunsaturated lipid radicals production. The techniques used in order to collect hepatocytes proved to be efficient, with a viability higher than 90%, no toxicity, and the maintenance of the mitochondrial membrane potential and positive labeling for cytokeratins (CK) 8, 18 and desmin. The HF addition increased the proliferation of hepatocytes in the three periods analyzed, when compared to the control group. The HF did not show any toxicity in primary hepatocytes culture regardless of the concentration evaluated along the experimental periods. The HF addition impaired the production of free radicals, protecting the hepatocytes from the lipid peroxidation. On the other hand, the functional evaluation of primary hepatocytes cultures using the ICG test proved to be efficient in the determination of the hepatocytes metabolism, as the maintenance of the transaminase and amylase levels. The hepatocytes kept in primary culture after HF addition in all the analyzed periods increased the collagen production and were also able to shift the distribution of quiescent cells population of, thus increasing their synthesis capacity. The HF addition in the studied concentrations in hepatocytes cultures proved to be efficient in the maintenance of these cells, that remain functionally active and expressing their metabolism and differentiation characteristic markers

Efeito do maracujá (Passiflora incarnata) sobre a morfometria de hepatócitos da tilápia do Nilo (Oreochromis niloticus) / Effect of Passion fruit (Passiflora incarnata) on the hepatocytes morphometry of Nile tilapia (Oreochromis niloticus)

Avaliaram-se os efeitos da administração do extrato seco de maracujá (Passiflora incarnata), veiculado na dieta, sobre a morfologia dos hepatócitos de juvenis de tilápias do Nilo (Oreochromis niloticus). Peixes isolados (86,50 ± 10,17 g) receberam durante 28 dias ração comercial extrusada (32% PB - 2% biomassa) contendo o extrato diluído em alginato de sódio nas doses 0 (controle), 50, 100 e 200 mg/Kg, (n = 6 peixes/tratamento), registrando-se diariamente o consumo. No início e ao final do experimento cada indivíduo foi exposto (30 minutos) à reflexão da própria imagem em espelho (presença virtual de um coespecífico - estresse social), sendo a seguir anestesiado (2-fenoxietanol 0,5 mL/L) para realização de biometria e coleta de sangue (veia caudal) para determinação dos níveis plasmáticos de glicose e cortisol. Após 28 dias todos os animais foram sacrificados para remoção do fígado e obtenção de fragmentos utilizados na contagem de células e avaliação da morfometria do citoplasma dos hepatócitos (H/E), observando-se também as reservas de glicogênio hepático (PAS). Visando a comparação dos efeitos do estresse social natural com aquele empregado no experimento, seis peixes provenientes de um grupo de 30 indivíduos foram também sacrificados e utilizados como referência (valores basais) para avaliação dos parâmetros histológicos. Os dados foram submetidos a ANOVA, utilizando-se o proc mixed SAS 8.0 (p<0,05) para os parâmetros consumo de alimento, ganho em peso e bioquímica sangüínea (cortisol e glicose) e GLM SAS 8.0 (p<0,01) para a contagem de células e morfometria dos hepatócitos. Verificou-se que os pesos e os comprimentos iniciais não diferiram, que o consumo de alimento não foi alterado pela adição do extrato e que todos os peixes, independentemente do tratamento, cresceram significativamente. Os níveis de cortisol e de glicose também não diferiram inicialmente entre os grupos e não foram alterados pela presença do agente ou pela adição do extrato. Porém, observou-se um aumento significativo da glicose e redução dos níveis de cortisol em todos os peixes. A adição do extrato nas diferentes doses provocou aumento crescente e significativo da área citoplasmática e redução do número de células em todos os animais, com destaque para a dose 100 mg/Kg. O mesmo não ocorreu nos peixes do grupo controle, cujas áreas citoplasmáticas foram significativamente menores, em decorrência de um menor acúmulo de glicogênio hepático. Embora os efeitos do agente estressor empregado não tenham sido detectados pela análise dos parâmetros bioquímicos sangüíneos, verificou-se que este procedimento provocou alterações metabólicas que contribuíram para a depleção dos estoques de glicogênio no fígado. Este efeito parece ter sido revertido nos peixes que receberam a dieta contendo o extrato de maracujá que, por meio de mecanismos não elucidados neste trabalho, contribuiu para a manutenção ou aumento dos estoques de glicogênio hepático. Concluiu-se que o extrato de maracujá veiculado na dieta, na dose de 100 mg/Kg, protege juvenis de tilápia da depleção dos estoques de glicogênio hepático causada pelo estresse social

Effects of Passion fruit (Passiflora incarnata) dry extract administration on hepatocyte morphometry of juveniles Nile tilapias (Oreochromis niloticus) were investigated. Male isolated fish (86,50 ± 10,17 g) were daily fed (28 days) with extruded commercial ration (32% crude protein - 2% biomass) containing the extract diluted in sodium alginate in graded doses 0 (control), 50, 100 and 200 mg/Kg (n= 6 animals/treatment), registering daily consumption. At the start and after 28 days of experiment each fish was displayed to the reflection of own mirror image (30 minutes) in order to simulate the virtual presence of a coespecific (social stress). Then the animals were anesthetized (2-fenoxietanol) for biometric measures and blood collection (caudal vein) for determination of the plasmatic levels of glucose and cortisol. After 28 days the animals were sacrificed for removal of liver fragments samples used to histological examination (cytoplasmic area and number of cells - HE stained; hepatic glycogen supplies - PAS stained). Aiming the comparison of the natural social stress with that utilized in this experiment, six fish from a group of 30 individuals were also sacrificed and used as reference (basal values) for the histological parameters evaluation. Food consumption, weight gain and sanguine biochemist parameters (cortisol and glucose) were submitted to ANOVA, SAS 8.0 proc mixed (p<0,05) and data of cells counting and hepatocyte morfometry to the same test, using SAS 8.0 GLM (p<0,01). The initial weights and lengths were similar, the food consumption was not modified by the addition of the extract and all the fish grew significantly during the experiment. Initial levels of cortisol and glucose were also similar between groups and did not modify by the stressor agent or treatments with the extract. However, a significant increase of glucose and reduction of cortisol levels were observed for all the fish. The addition of different extract doses provoked significant and noticeable increase of the cytoplasmic area and reduction of the cells number, mainly for 100 mg/Kg dose. In the control group cytoplasmatic area was significantly minor due to lesser hepatic glycogen accumulation. The stressor agent did not affect sanguine biochemists parameters but seems to lead metabolic alterations that had collaborated with the depletion of liver glycogen supplies. This effect seems to have been reverted in the fish that received the diet contend Passion fruit extract that, by means of a mechanism not elucidated in this experiment, contributed for the maintenance or increase of hepatic glycogen supplies. It was conclude that Passion fruit extract diet inclusion at 100 mg/Kg dose protects the tilapia against the hepatic glycogen depletion caused by social stress

A regeneração hepática e os inibidores da enzima conversora da angiotensina

No presente estudo, o autor aborda conceitos fundamentais acerca do fenômeno regenerativo hepático, seguido de alguns aspectos importantes relacionados ao sistema calicreína-cininas. A associação entre os inibidores da enzima conversora da angiotensina, a bradicinina e a regeneração hepática é discutida à luz de estudos recentes, que revelam um papel estimulante das cininas sobre a proliferação hepatocelular. Os inibidores da enzima conversora da angiotensina, extremamente utilizados no tratamento clínico da hipertensão arterial sistêmica, da insuficiência cardíaca congestiva e da nefropatia diabética, também são capazes de favorecer a regeneração hepática.

A regeneração hepática e os inibidores da enzima conversora da angiotensina

No presente estudo, o autor aborda conceitos fundamentais acerca do fenômeno regenerativo hepático, seguido de alguns aspectos importantes relacionados ao sistema calicreína-cininas. A associação entre os inibidores da enzima conversora da angiotensina, a bradicinina e a regeneração hepática é discutida à luz de estudos recentes, que revelam um papel estimulante das cininas sobre a proliferação hepatocelular. Os inibidores da enzima conversora da angiotensina, extremamente utilizados no tratamento clínico da hipertensão arterial sistêmica, da insuficiência cardíaca congestiva e da nefropatia diabética, também são capazes de favorecer a regeneração hepática.