Aspectos da hemoplasmose em búfalos: revisão bibliográfica / Aspects of hemoplasmosis in buffaloes: literature review / Aspectos de la hemoplasmosis en búfalos: revisión de la literatura

Búfalos são animais rústicos que podem ser explorados para a produção de carne ou leite. Estes animais são susceptíveis a enfermidades que também acometem outras espécies de ruminantes, principalmente os bovinos. Entretanto, acredita-se que os bubalinos sejam mais resistentes a algumas doenças, mas ainda há poucos estudos epidemiológicos abrangendo doenças infecciosas como a hemoplasmose em búfalos. A hemoplasmose é causada por micoplasmas hemotrópicos ou hemoplasmas, que são bactérias gram-negativas causadoras de anemia hemolítica em hospedeiros imunocomprometidos. Mycoplasma wenyonii e 'Candidatus Mycoplasma haemobos' são as principais espécies de hemoplasmas que podem infectar búfalos. A transmissão da doença ocorre principalmente por meio de vetores artrópodes hematófagos ou por via iatrogênica. O diagnóstico de animais infectados é realizado por meio da Reação em Cadeia da Polimerase (PCR). Medidas de prevenção e controle são essenciais para o controle desta enfermidade nos rebanhos bubalinos.

Buffalo are rustic animals that can be exploited for meat or milk production. These animals are susceptible to diseases that also affect other species of ruminants, especially cattle. However, it is believed that buffalo are more resistant to some diseases, but there are still few epidemiological studies covering infectious diseases such as hemoplasmosis in buffaloes. Hemoplasmosis is caused by hemotropic mycoplasmas or hemoplasmas, which are gram-negative bacteria that cause hemolytic anemia in immunocompromised hosts. Mycoplasma wenyonii and 'Candidatus Mycoplasma haemobos' are the main hemoplasma species that can infect buffaloes. Transmission of the disease occurs mainly via hematophagous arthropod vectors or iatrogenically. The diagnosis of infected animals is made by Polymerase Chain Reaction (PCR). Prevention and control measures are essential for the control of this disease in buffalo herds.

Los búfalos son animales rústicos que pueden ser explotados para la producción de carne o leche. Estos animales son susceptibles de contraer enfermedades que también afectan a otras especies de rumiantes, especialmente al ganado vacuno. Sin embargo, se cree que los búfalos son más resistentes a algunas enfermedades, pero todavía hay pocos estudios epidemiológicos sobre enfermedades infecciosas como la hemoplasmosis en búfalos. La hemoplasmosis está causada por micoplasmas hemotrópicos o hemoplasmas, que son bacterias gram negativas que causan anemia hemolítica en huéspedes inmunodeprimidos. Mycoplasma wenyonii y 'Candidatus Mycoplasma haemobos' son las principales especies de hemoplasma que pueden infectar a los búfalos. La transmisión de la enfermedad se produce principalmente a través de vectores artrópodos hematófagos o de forma iatrogénica. El diagnóstico de los animales infectados se realiza mediante la reacción en cadena de la polimerasa (PCR). Las medidas de prevención y control son esenciales para controlar esta enfermedad en los rebaños de búfalos.

Hemotropic mycoplasmas in bats from forest fragments, state of Paraná, southern Brazil / Detecção e caracterização de micoplasmas hemotrópicos em morcegos de fragmentos florestais, Paraná, Sul do Brasil

The order Chiroptera is the second largest group of mammals with bats being identified as reservoir of several viral zoonoses, although, little is known about their role in other groups of pathogens, including hemotropic Mycoplasma spp. To date, hemoplasma species have been found infecting several species of bats with high genetic diversity between 16S rRNA gene sequences. On this study, we aimed to identify the occurrence and characterize 16S and 23S rRNA genes of hemoplasma species in four bats species (Artibeus lituratus, Carollia perspicillata, Sturnira lilium and Sturnira tildae) from forest fragments in Paraná State, southern Brazil, using PCR-based assays. Spleen tissue samples were collected, DNA extracted and further screened by a pan hemoplasma PCR assay. All samples consistently amplified the mammal endogenous gapdh gene. One out of 15 (6.66%; 95% CI: 0.2-31%) bats tested positive for hemotropic Mycoplasma sp. by the PCR assay targeting the 16S rRNA gene. Sequencing of the 16S rRNA gene fragment from the hemoplasma-positive bat showed 99.14% identity with hemotropic Mycoplasma sp. detected in Sturnira parvidens from Belize. Sequencing of the 23S rRNA gene fragment from the hemoplasma-positive bat showed 86.17% identity with 'Candidatus Mycoplasma haemosphiggurus' detected in orange-spined hairy dwarf porcupines (Sphiggurus villosus) from Southern Brazil.(AU)

A ordem Chiroptera é considerada a segunda maior ordem de mamíferos do mundo, sendo os morcegos identificados como reservatórios de diversas zoonoses de origem viral, contudo, pouco se sabe sobre seu papel em outros grupos de patógenos, incluindo Mycoplasma spp. Até o momento, Mycoplasma sp., foi encontrado infectando várias espécies de morcegos ao redor do mundo, com alta diversidade genética entre sequências de genes 16S rRNA. O objetivo do presente estudo foi detectar a infecção por hemoplasmas em quinze morcegos insetívoros de quatro diferentes espécies (Artibeus lituratus, Carollia perspicillata, Sturnira lilium and Sturnira tildae) provenientes de fragmentos florestais dos municípios de Mandaguaçu, Maringá e Paiçandu, no Estado do Paraná, sul do Brasil. Amostras de tecido foram coletadas e o DNA extraído, para posterior análise por PCR para detecção de hemoplasmas. Todas as amostras amplificaram o gene gapdh. Um morcego, do total de 15 (6.66%; 95% CI: 0.2-31%), foi positivo para Mycoplasma sp. na análise do gene16S rRNA. O sequenciamento deste fragmento genético mostrou 99,14% de identidade com Mycoplasma sp. detectado em Sturnira parvidens em Belize. O sequenciamento do fragmento do gene 23S rRNA do morcego positivo mostrou 86,17% de identidade com 'Candidatus Mycoplasma haemosphiggurus' detectado em ouriço-cacheiro (Sphiggurus villosus) no sul do Brasil.(AU)

Prevalência e estudo genético de Mycoplasma gallisepticum e M. synoviae em poedeiras comerciais, na região centro-oeste do estado de São Paulo, Brasil / [Prevalence and genetic study of Mycoplasma gallisepticum and M. synoviae strains from commercial laying hens in the Midwest region of Sao Paulo state, Brazil]

O objetivo deste trabalho foi estudar a prevalência de MG e MS e a filogenia das cepas circulantes, comparando-as com outras já descritas em poedeiras comerciais no Brasil. Foram coletados 140 suabes traqueais de poedeiras comerciais com sinais respiratórios em seis granjas da região centro-oeste de São Paulo. As amostras foram avaliadas por PCR, com posterior sequenciamento e análise filogenética das cepas identificadas. Das 140 amostras, 16,4% foram positivas para MG e 68,6% para MS. Houve diferença significativa nas frequências de MG e MS por granja, segundo o teste G de independência (P<0,05). Todas as cepas identificadas de MG e MS de granjas distintas apresentaram similaridade tanto pela lipoproteína para MG quanto pela região 16s rRNA para MS. Neste estudo, foi possível observar altas prevalências dos agentes estudados, sendo a de MS maior que a de MG. Foi detectada infecção mista por MG e MS em 11,4% das amostras e sabe-se que esses micoplasmas podem agir de forma sinérgica, agravando o quadro respiratório. As cepas circulantes identificadas, pela análise das regiões gênicas da lipoproteína para MG e 16S rRNA para MS, são similares em todas as granjas estudadas.(AU)

The aim of this study was to evaluate the prevalence of MG and MS and the phylogeny of the circulating strains, comparing them with others already described in commercial laying hens from Brazil. A total of 140 tracheal swabs were collected from commercial laying hens with respiratory signs in six farms from the western region of São Paulo state. The samples were analyzed by PCR with subsequent sequencing and phylogenetic analysis of the identified strains. From the 140 samples, 68.6% were positive for MS and 16.4% for MG. There was a significant difference in the frequencies of MG and MS per farm according to G Test of independence (P<0.05). All strains identified as MG and MS from distinct farms presented similarity both by lipoprotein to MG and by 16s rRNA region to MS. In this study, it was possible to observe a high prevalence of MS compared to MG. Mixed MG and MS infection was detected in 11.4% of the samples. These mycoplasmas may act synergistically, worsening the respiratory signs. The circulating strains identified by analysis of the lipoprotein for MG and 16S rRNA for MS are similar on all poultry farms studied.(AU)

Prevalência e estudo genético de Mycoplasma gallisepticum e M. synoviae em poedeiras comerciais, na região centro-oeste do estado de São Paulo, Brasil / [Prevalence and genetic study of Mycoplasma gallisepticum and M. synoviae strains from commercial laying hens in the Midwest region of Sao Paulo state, Brazil]

O objetivo deste trabalho foi estudar a prevalência de MG e MS e a filogenia das cepas circulantes, comparando-as com outras já descritas em poedeiras comerciais no Brasil. Foram coletados 140 suabes traqueais de poedeiras comerciais com sinais respiratórios em seis granjas da região centro-oeste de São Paulo. As amostras foram avaliadas por PCR, com posterior sequenciamento e análise filogenética das cepas identificadas. Das 140 amostras, 16,4% foram positivas para MG e 68,6% para MS. Houve diferença significativa nas frequências de MG e MS por granja, segundo o teste G de independência (P<0,05). Todas as cepas identificadas de MG e MS de granjas distintas apresentaram similaridade tanto pela lipoproteína para MG quanto pela região 16s rRNA para MS. Neste estudo, foi possível observar altas prevalências dos agentes estudados, sendo a de MS maior que a de MG. Foi detectada infecção mista por MG e MS em 11,4% das amostras e sabe-se que esses micoplasmas podem agir de forma sinérgica, agravando o quadro respiratório. As cepas circulantes identificadas, pela análise das regiões gênicas da lipoproteína para MG e 16S rRNA para MS, são similares em todas as granjas estudadas.(AU)

The aim of this study was to evaluate the prevalence of MG and MS and the phylogeny of the circulating strains, comparing them with others already described in commercial laying hens from Brazil. A total of 140 tracheal swabs were collected from commercial laying hens with respiratory signs in six farms from the western region of São Paulo state. The samples were analyzed by PCR with subsequent sequencing and phylogenetic analysis of the identified strains. From the 140 samples, 68.6% were positive for MS and 16.4% for MG. There was a significant difference in the frequencies of MG and MS per farm according to G Test of independence (P<0.05). All strains identified as MG and MS from distinct farms presented similarity both by lipoprotein to MG and by 16s rRNA region to MS. In this study, it was possible to observe a high prevalence of MS compared to MG. Mixed MG and MS infection was detected in 11.4% of the samples. These mycoplasmas may act synergistically, worsening the respiratory signs. The circulating strains identified by analysis of the lipoprotein for MG and 16S rRNA for MS are similar on all poultry farms studied.(AU)

Hemoplasma infection in wild captive carnivores / Infecção por hemoplasmas em carnívoros selvagens cativos

Hemoplasmas are bacteria able to adhere themselves loosely to the plasma membrane of erythrocytes and may parasitize several species of mammals. There are three known species of hemoplasmas that parasitize domestic and wild cats: Mycoplasma haemofelis, 'Candidatus Mycoplasma haemominutum' and 'Candidatus Mycoplasma turicensis'. Dogs are infected by at least two species of hemoplasmas: 'Candidatus Mycoplasma haematoparvum' and Mycoplasma haemocanis. The hemoplasmoses are very important in veterinary clinics, either because of its worldwide distribution and severity of clinical signs, depending on parasite species and host immune competence, or due to its zoonotic potential and capability of infecting endangered species. This study set out to investigate which hemoplasmas species parasitize different captive wild carnivores in order to clarify the epidemiology of hemoplasmoses in wild animals. Furthermore, the research intended to characterize the hematological changes caused by different species of hemotropic mycoplasmas infection in order to establish their clinical importance to wild species and the capacity of these species to become a reservoir of studied agents. Samples of 33 wild felids and 18 wild canids were investigated using polymerase chain reaction (PCR) to detect hemoplasmas DNA and it was observed that the occurrence of infection in these species is 45.5% and 83.3%, respectively. Factors such as age, gender or anaemia are not more frequent in animals positive for the infection. Therefore, it is concluded that infection caused by hemoplasmas in wild carnivores has high prevalence, and either agent pathogenicity is low, or chronic stage is more frequent, resulting in a low rate of diagnosis.(AU)

Hemoplasmas são bactérias capazes de aderir frouxamente à membrana plasmática de eritrócitos e que podem parasitar diversas espécies de mamíferos. São conhecidas três espécies de hemoplasmas que parasitam felídeos domésticos e selvagens: Mycoplasma haemofelis, 'Candidatus Mycoplasma haemominutum' and 'Candidatus Mycoplasma turicensis'. Cães são infectados por ao menos duas espécies de hemoplasmas: Candidatus Mycoplasma haematoparvum' and Mycoplasma haemocanis. As hemoplasmoses são de grande importância na clínica veterinária, tanto pela sua distribuição ubíqua e severidade dos sinais clínicos, a depender da espécie do parasita e imunocompetência do hospedeiro, quanto pelo seu potencial zoonótico e capacidade de infectar espécies ameaçadas. Este estudo visa investigar quais espécies de hemoplasmas parasitam diferentes carnívoros selvagens de cativeiro, a fim de esclarecer a epidemiologia das hemoplasmoses em animais selvagens. Além disso, o trabalho objetivou caracterizar as alterações hematológicas causadas pela infecção por diferentes espécies de micoplasmas hemotrópicos visando estabelecer sua importância clínica para espécies selvagens e a capacidade destas espécies de se tornar reservatórios dos agentes estudados. Amostras de 33 felídeos selvagens e de 18 canídeos selvagens foram investigadas por meio da reação em cadeia da polimerase (RCP) para detectar o DNA dos agentes e foi observado que a ocorrência da infecção por hemoplasmas nestas espécies é de 45,5% e 83,3%, respectivamente. Fatores como idade, sexo ou anemia não são mais frequentes em animais positivos para a infecção. Dessa forma, conclui-se que a infecção causada por hemoplasmas em carnívoros selvagens possui alta prevalência, no entanto ou a patogenicidade dos agentes é baixa ou o estágio crônico da infecção é mais frequente, resultando em uma baixa frequência diagnóstica.(AU)

Detection of Hemotropic Mycoplasma sp. in white-eared opossums (Didelphis albiventris) from Southern Brazil / Detecção de Mycoplasma sp. hemotrópico em gambás-de-orelha-branca (Didelphis albiventris) no Sul do Brasil

Opossums are marsupials from the New World of the genus Didelphis and known as synanthropic animals due to their proximity with human beings. To date, Candidatus Mycoplasma haemodidelphis has been solely found infecting the North American opossum (Didelphis virginiana). Accordingly, the aim of this study was to screen eight white-eared opossums (Didelphis albiventris) from a public park in Maringa city, Paraná State, southern Brazil, for hemoplasma infection. Blood samples were taken from caudal venipuncture, and DNA was extracted and further screened by a pan-hemoplasma PCR assay. Seven out of eight (87.50%; CI 95%: 47.35-99.68%) white-eared opossums were positive for Mycoplasma spp. Sequencing of the 16S rRNA fragment showed 98,97% identity with Ca. M. haemodidelphis detected in the USA. Three out of eight (37.50%; CI 95%: 8.52-75.51%) white-eared opossums were infested by Amblyomma dubitatum ticks. This is the first report on detection of a potentially novel hemotropic Mycoplasma sp. infecting opossums from South America.(AU)

Gambás são marsupiais do Novo Mundo, pertencentes ao gênero Didelphis, e considerados animais sinantrópicos devido à sua proximidade com seres humanos. Atualmente, a espécie Candidatus Mycoplasma haemodidelphis só foi encontrada infectando gambá norte americano (Didelphis virginiana). O objetivo do presente estudo foi detectar a infecção por hemoplasmas em oito gambás-de-orelha-branca (Didelphis albiventris) capturados em um parque público da cidade de Maringá, no Estado do Paraná, sul do Brasil. Amostras de sangue foram coletadas por venopunção caudal para a extração do DNA e posterior análise pela PCR para espécies de hemoplasmas. Sete de oito animais (87,50%; CI 95%: 47,35-99,68%) foram considerados positivos para Mycoplasma spp. O sequenciamento do fragmento do gene 16S rRNA obtido apresentou 98.97% de similaridade com sequências de Ca. M. haemodidelphis detectadas nos Estados Unidos. Três gambás (37,50%; CI 95%: 8,52-75,51%) estavam infestados por carrapatos da espécie Amblyomma dubitatum. Esse é o primeiro relato de detecção de uma potencial nova espécie de Mycoplasma hemotrópico infectando gambás na América do Sul.(AU)

Prevalence of 'Candidatus Mycoplasma haemobos' detected by PCR, in dairy cattle from Ji-Paraná in the north region of Brazil

ABSTRACT: The municipality of Ji-Paraná, Rondônia, is one of the major dairy production areas in the north region of Brazil. Thus, it is important to evaluate infectious agents that have the potential to negatively affect productivity in the industry. The objective of this study was to investigate the prevalence of ' Candidatus Mycoplasma haemobos' by using a PCR-based detection method and correlate this with dairy herd variables (abortion frequency, weak calf birth rate, total cattle number, >24-month-old cow number, farm size, and production system) in family farms of the Ji-Paraná municipality, north region, Brazil. Blood samples were collected from 320 dairy cows located across 64 farms (i.e., five animals per farm) from September 2012 to November 2013. Overall prevalence of 'Ca. M. haemobos' was 64.2% and prevalence per herd was 95.3%; the number of >24-month-old cows in the farms studied correlated with ' Ca. M. haemobos' infection rates. Considering the importance of the dairy industry to the study area, additional investigations are necessary to evaluate the effect of chronic infection in these animals on milk production and herd health.

RESUMO: O município de Ji-Paraná, Rondônia, é uma das principais áreas de produção leiteira na região norte do Brasil. Assim, é importante avaliar agentes infecciosos que apresentam potencial para afetar negativamente a produtividade na indústria. O objetivo deste estudo foi investigar a prevalência de ' Candidatus Mycoplasma haemobos' usando um método de detecção baseado na PCR e relacionar com variáveis do rebanho leiteiro (frequência de aborto, nascimento de bezerros fracos, número total de vacas, número de vacas >24 meses de idade, tamanho da propriedade e, sistema de produção) na agricultura familiar do município de Ji-Paraná, região norte, Brasil. Amostras de sangue foram coletadas de 320 vacas leiteiras localizadas em 64 fazendas (ou seja, cinco animais por exploração) de setembro de 2012 a novembro de 2013. A prevalência total de ' Ca. M. haemobos' foi de 64,2% e a prevalência por rebanho foi de 95,3%; o número de vacas >24 meses de idade nas propriedades estudadas correlacionou-se com as taxas de infecção por ' Ca. M. haemobos'. Considerando a importância da indústria de laticínios para a área de estudo, investigações adicionais são necessárias para avaliar o efeito da infecção crônica nestes animais na produção de leite e saúde do rebanho.

Prevalence of "Candidatus Mycoplasma haemobos" detected by PCR, in dairy cattle from Ji-Paraná in the north region of Brazil / Prevalência de Candidatus Mycoplasma haemobos pela PCR, em bovinos leiteiros de Ji-Paraná na região norte do Brasil

The municipality of Ji-Paraná, Rondônia, is one of the major dairy production areas in the north region of Brazil. Thus, it is important to evaluate infectious agents that have the potential to negatively affect productivity in the industry. The objective of this study was to investigate the prevalence of " Candidatus Mycoplasma haemobos" by using a PCR-based detection method and correlate this with dairy herd variables (abortion frequency, weak calf birth rate, total cattle number, >24-month-old cow number, farm size, and production system) in family farms of the Ji-Paraná municipality, north region, Brazil. Blood samples were collected from 320 dairy cows located across 64 farms (i.e., five animals per farm) from September 2012 to November 2013. Overall prevalence of "Ca. M. haemobos" was 64.2% and prevalence per herd was 95.3%; the number of >24-month-old cows in the farms studied correlated with " Ca. M. haemobos" infection rates. Considering the importance of the dairy industry to the study area, additional investigations are necessary to evaluate the effect of chronic infection in these animals on milk production and herd health.

O município de Ji-Paraná, Rondônia, é uma das principais áreas de produção leiteira na região norte do Brasil. Assim, é importante avaliar agentes infecciosos que apresentam potencial para afetar negativamente a produtividade na indústria. O objetivo deste estudo foi investigar a prevalência de " Candidatus Mycoplasma haemobos" usando um método de detecção baseado na PCR e relacionar com variáveis do rebanho leiteiro (frequência de aborto, nascimento de bezerros fracos, número total de vacas, número de vacas >24 meses de idade, tamanho da propriedade e, sistema de produção) na agricultura familiar do município de Ji-Paraná, região norte, Brasil. Amostras de sangue foram coletadas de 320 vacas leiteiras localizadas em 64 fazendas (ou seja, cinco animais por exploração) de setembro de 2012 a novembro de 2013. A prevalência total de " Ca. M. haemobos" foi de 64,2% e a prevalência por rebanho foi de 95,3%; o número de vacas >24 meses de idade nas propriedades estudadas correlacionou-se com as taxas de infecção por " Ca. M. haemobos". Considerando a importância da indústria de laticínios para a área de estudo, investigações adicionais são necessárias para avaliar o efeito da infecção crônica nestes animais na produção de leite e saúde do rebanho.

Prevalence of "Candidatus Mycoplasma haemobos" detected by PCR, in dairy cattle from Ji-Paraná in the north region of Brazil / Prevalência de Candidatus Mycoplasma haemobos pela PCR, em bovinos leiteiros de Ji-Paraná na região norte do Brasil

The municipality of Ji-Paraná, Rondônia, is one of the major dairy production areas in the north region of Brazil. Thus, it is important to evaluate infectious agents that have the potential to negatively affect productivity in the industry. The objective of this study was to investigate the prevalence of " Candidatus Mycoplasma haemobos" by using a PCR-based detection method and correlate this with dairy herd variables (abortion frequency, weak calf birth rate, total cattle number, >24-month-old cow number, farm size, and production system) in family farms of the Ji-Paraná municipality, north region, Brazil. Blood samples were collected from 320 dairy cows located across 64 farms (i.e., five animals per farm) from September 2012 to November 2013. Overall prevalence of "Ca. M. haemobos" was 64.2% and prevalence per herd was 95.3%; the number of >24-month-old cows in the farms studied correlated with " Ca. M. haemobos" infection rates. Considering the importance of the dairy industry to the study area, additional investigations are necessary to evaluate the effect of chronic infection in these animals on milk production and herd health. (AU)

O município de Ji-Paraná, Rondônia, é uma das principais áreas de produção leiteira na região norte do Brasil. Assim, é importante avaliar agentes infecciosos que apresentam potencial para afetar negativamente a produtividade na indústria. O objetivo deste estudo foi investigar a prevalência de " Candidatus Mycoplasma haemobos" usando um método de detecção baseado na PCR e relacionar com variáveis do rebanho leiteiro (frequência de aborto, nascimento de bezerros fracos, número total de vacas, número de vacas >24 meses de idade, tamanho da propriedade e, sistema de produção) na agricultura familiar do município de Ji-Paraná, região norte, Brasil. Amostras de sangue foram coletadas de 320 vacas leiteiras localizadas em 64 fazendas (ou seja, cinco animais por exploração) de setembro de 2012 a novembro de 2013. A prevalência total de " Ca. M. haemobos" foi de 64,2% e a prevalência por rebanho foi de 95,3%; o número de vacas >24 meses de idade nas propriedades estudadas correlacionou-se com as taxas de infecção por " Ca. M. haemobos". Considerando a importância da indústria de laticínios para a área de estudo, investigações adicionais são necessárias para avaliar o efeito da infecção crônica nestes animais na produção de leite e saúde do rebanho. (AU)

Validation of PCR method for mycoplasma detection in the Yellow Fever-vaccine quality control / Validação de método de PCR para detecção de micoplasmas no controle de qualidade da vacina de Febre Amarela

Among the vaccines produced by Bio-Manguinhos, a major centre for manufacturing the immunobiological products in Latin America, stands out the yellow fever (YF) vaccine. To guarantee the excellence and safety of the YF vaccine, the quality control tests has to be performed throughout its production. The World Health Organization (WHO) demands the producers to guarantee the absence of Mycoplasma orale, M. pneumoniae, M. gallisepticum and M. synoviae in the biological products. Mycoplasma is a fastidious microorganism, requiring about 35 days for attaining the conclusive culturing test. In this study PCR methods were selected for amplifying 16S rRNA gene fragments for detecting mycoplasma in the intermediate products of YF vaccine. This standardized methodology was specific and sensitive to detect the low concentrations of mycoplasma in spiked intermediary vaccine products; and the absence of unspecific amplification was also demonstrated. The detection rates ranged from 3.1 to 12.5 colony forming units and showed 100 % of sensitivity and specificity in the tested samples. The PCR protocol for detecting mycoplasmal DNA in YF vaccine was validated by analysing 286 samples. Bio-Manguinhos produces annually 10,000,000 YF vaccine doses, and this method has been successfully employed, complementing the traditional approach in the mycoplasma detection since 2008.

Dentre as vacinas produzidas por Bio-Manguinhos, um importante centro de produção de imunobiológicos da América Latina, destaca-se a vacina de febre amarela (FA) que é produzida em ovos embrionados. Para garantir a excelência e a segurança da vacina, testes de controle de qualidade são realizados durante a produção. A Organização Mundial de Saúde (OMS) exige dos produtores a ausência de Mycoplasma orale, M. pneumoniae, M. gallisepticum e M. synoviae em produtos biológicos. Micoplasmas são micro-organismos fastidiosos, sendo necessários 35 dias para que os testes de cultura sejam conclusivos. Neste estudo foram selecionados métodos de amplificação de fragmentos do gene 16S rRNA para detecção de micoplasmas em produtos intermediários da vacina de FA. Esta metodologia padronizada foi capaz de detectar baixas concentrações de micoplasmas nos produtos intermediários e a ausência de amplificação inespecífica foi demonstrada. O limite de detecção variou entre 3,1 e 12,5 unidades formadoras de colônia; e nas amostras testadas a sensibilidade e a especificidade foram de 100 %. O protocolo de PCR para detecção de micoplasmas na vacina foi validado pela análise de 286 amostras. Bio-Manguinhos produz 10.000.000 doses de vacina de febre amarela por ano e, desde 2008, este método tem sido empregado com sucesso, complementando-se a abordagem tradicional.

Validation of PCR method for mycoplasma detection in the Yellow Fever-vaccine quality control / Validação de método de PCR para detecção de micoplasmas no controle de qualidade da vacina de Febre Amarela

Among the vaccines produced by Bio-Manguinhos, a major centre for manufacturing the immunobiological products in Latin America, stands out the yellow fever (YF) vaccine. To guarantee the excellence and safety of the YF vaccine, the quality control tests has to be performed throughout its production. The World Health Organization (WHO) demands the producers to guarantee the absence of Mycoplasma orale, M. pneumoniae, M. gallisepticum and M. synoviae in the biological products. Mycoplasma is a fastidious microorganism, requiring about 35 days for attaining the conclusive culturing test. In this study PCR methods were selected for amplifying 16S rRNA gene fragments for detecting mycoplasma in the intermediate products of YF vaccine. This standardized methodology was specific and sensitive to detect the low concentrations of mycoplasma in spiked intermediary vaccine products; and the absence of unspecific amplification was also demonstrated. The detection rates ranged from 3.1 to 12.5 colony forming units and showed 100 % of sensitivity and specificity in the tested samples. The PCR protocol for detecting mycoplasmal DNA in YF vaccine was validated by analysing 286 samples. Bio-Manguinhos produces annually 10,000,000 YF vaccine doses, and this method has been successfully employed, complementing the traditional approach in the mycoplasma detection since 2008.(AU)

Dentre as vacinas produzidas por Bio-Manguinhos, um importante centro de produção de imunobiológicos da América Latina, destaca-se a vacina de febre amarela (FA) que é produzida em ovos embrionados. Para garantir a excelência e a segurança da vacina, testes de controle de qualidade são realizados durante a produção. A Organização Mundial de Saúde (OMS) exige dos produtores a ausência de Mycoplasma orale, M. pneumoniae, M. gallisepticum e M. synoviae em produtos biológicos. Micoplasmas são micro-organismos fastidiosos, sendo necessários 35 dias para que os testes de cultura sejam conclusivos. Neste estudo foram selecionados métodos de amplificação de fragmentos do gene 16S rRNA para detecção de micoplasmas em produtos intermediários da vacina de FA. Esta metodologia padronizada foi capaz de detectar baixas concentrações de micoplasmas nos produtos intermediários e a ausência de amplificação inespecífica foi demonstrada. O limite de detecção variou entre 3,1 e 12,5 unidades formadoras de colônia; e nas amostras testadas a sensibilidade e a especificidade foram de 100 %. O protocolo de PCR para detecção de micoplasmas na vacina foi validado pela análise de 286 amostras. Bio-Manguinhos produz 10.000.000 doses de vacina de febre amarela por ano e, desde 2008, este método tem sido empregado com sucesso, complementando-se a abordagem tradicional.(AU)

High occurrence of Mycoplasma suis infection in swine herds from non-technified farms in Mossoró, state of Rio Grande do Norte, Northeastern Brazil / Alta ocorrência de infecção por Mycoplasma suis em suínos de criações não tecnificadas de Mossoró, estado do Rio Grande do Norte, Nordeste brasileiro

Abstract Mycoplasma suis, the etiological agent of swine hemoplasmosis, has been neglected in swine herds around the world. Swine hemoplasmosis is frequently associated with hemolytic anemia, disgalacty, infertility and immunosuppression, and it results in significant economic losses. This study investigates the occurrence of M. suis in non-technified swine herds in the northeastern region of Brazil using quantitative PCR (qPCR) based on the 16S rRNA gene. Between March and August 2013, blood samples from 147 swine were collected during slaughter in the city of Mossoró, state of Rio Grande do Norte, northeastern Brazil. One hundred and twelve samples (76.19%) were positive for M. suis by qPCR assays. The range of Cqs and quantification (copies of a M. suis-16S rRNA gene fragment/µL) was 20.8637.89 and 1.64×1016.64×107, respectively. One can conclude that M. suis infection have high occurrence (76,19%) in non-technified swine-rearing systems in Mossoró in the state of Rio Grande do Norte, Brazil.(AU)

Resumo Mycoplasma suis, agente etiológico da hemoplasmose suína, tem sido negligenciado nas criações de suínos ao redor do mundo. A hemoplasmose suína é frequentemente associada à anemia hemolítica, disgalactia, infertilidade e imunossupressão, acarretando em perdas econômicas. O objetivo do presente trabalho foi investigar, por meio da PCR quantitativa (qPCR) baseada no gene rRNA 16S, a ocorrência de M. suis em amostras de sangue de suínos de criações não tecnificadas na cidade de Mossoró, Estado do Rio Grande do Norte. Entre março a agosto de 2013, foram colhidas amostras de sangue de 147 suínos de criações não tecnificadas da referida região. Cento e doze amostras (76,19%) amostras mostraram-se positivas na qPCR para M. suis. A média dos Cqs e da quantificação (número de cópias do gene 16S rRNA de M. suis por microlitro) foi de 20,86 37,89 e 1,64 x 101 a 6,64 x 107, respectivamente. Conclui-se que a infecção por M. suis apresenta alta ocorrência (76,19%) em criações de suínos não tecnificadas na cidade de Mossoró, estado do Rio Grande do Norte.(AU)

Development and evaluation of a novel subunit vaccine for Mycoplasma gallisepticum / Desenvolvimento e avaliação de uma nova vacina para Mycoplasma gallisepticum

Adhesion proteins from Mycoplasma gallisepticum (MG) encoded by cytadhesion genes mgc1 and mgc2 were cloned into plasmid vectors and transformed into E. coli. Seventeen groups of specific-pathogen free (SPF), birds at four weeks of age were used to inoculate these two proteins (MGC1 and MGC2) mixed into an oil emulsion creating a novel MG vaccine. Six different protein concentrations (50, 100, 200, 400, 800, and 1000µg/bird) were tested with two equal concentration doses at four and seven weeks of age. In addition, many control groups were needed such as bacterin, membrane, no vaccine or challenge, oil emulsion alone, and no vaccine but challenged. Three weeks following the second vaccination, 50% of the birds in each treatment group were challenged with MG strain S6. The remaining birds were left as contacts to verify protection against horizontal transmission. All birds were bled before vaccinations, challenge and euthanasia. Birds were negative for MG at the first vaccination, as shown by serum plate agglutination test. At necropsy, tissue samples (trachea, lungs, and air sacs) were collected for histopathological examination. Swabs from trachea were used for PCR analysis. ELISA results showed a strong immune response to both protein preparations and almost the same response level for different doses tested, proving the immunogenic features of MGC1 and MGC2. However, humoral responses failed to prevent MG infection and disease when challenged as demonstrated by PCR and histopathology. MGC1 contact birds showed some degree of infection by PCR analysis. In addition, histopathological and ELISA results suggest that contact birds did not have enough time to develop lesions and to mount an immune response.(AU)

Os genes mgc1 e mgc2, codificadores de duas proteínas de adesão (MGC1 e MGC2) da bactéria Mycoplasma gallisepticum, foram clonados em E. coli. Dezessete grupos de aves livres de patógenos específicos (SPF), com quatro semanas de idade, foram inoculados com uma emulsão oleosa contendo as proteínas MGC1 e MGC2 purificadas. Seis concentrações (50, 100, 200, 400, 800, e 1000µg/ave) foram testadas com duas doses idênticas, às quatro e sete semanas de vida, respectivamente. Além disso, grupos controles foram avaliados com uma vacina comercial contra micoplasmose aviária, membrana de MG, grupo sem vacina/sem desafio, grupo vacina oleosa de MGC1 sem desafio, grupo com vacina oleosa de MGC2 sem desafio, grupo desafiado mas sem vacina. Três semanas após a segunda e a última vacinação, 50% dos animais dos grupos tratamentos foram desafiados com a cepa S6 de MG. O restante dos animais foi deixado como contato para averiguar proteção contra a transmissão horizontal da doença. Amostras de sangue de todas as aves foram coletadas antes das vacinações, do desafio e da eutanásia. As aves eram negativas para MG às quatro semanas de vida, conforme visto na aglutinação em placa. Na necropsia, tecidos (traqueia, pulmão e sacos aéreos) foram coletados para exame histopatológico. Suabes da traqueia foram utilizados para a PCR. Os resultados do ELISA demonstraram forte resposta imune contra as duas proteínas testadas e resposta similar independentemente do número de doses, provando a sua capacidade imunogênica. Porém, esta resposta humoral gerada foi incapaz de prevenir a infecção e a doença após desafio, conforme demonstrado pelos exames PCR e histopatológico. Aves-contato, inoculadas com MGC1, demonstraram estar infectadas nas análises de PCR. Além disso, os resultados do histopatológico e ELISA sugerem que os animais-contato não tiveram tempo suficiente para demonstrar lesões ou resposta imune.(AU)

Detecção molecular de Mollicutes em caprinos do sudoeste da Bahia, Brasil: um estudo transversal

O Brasil possui cerca de 8,6 milhões de caprinos e mais de 90% estão localizados na região nordeste do país. A caprinocultura, devido sua grande adaptabilidade ao diferentes ecossistemas, possui importância social e econômica na região. Nesse contexto inserem-se os micoplasmas que colonizam os caprinos. As micoplasmoses caprinas são amplamente disseminadas mundialmente e possuem relevância socioeconômica na sua criação. A baixa tecnificação das propriedades, falhas na detecção de Mollicutes e a baixa produção cientifica demonstram um cenário preocupante quanto à sanidade do rebanho dessa região. Visto isso, o presente estudo objetivou a pesquisa de micoplasmas em caprinos, por meio da detecção molecular, na região sudoeste do Estado da Bahia, Brasil. Foram aplicados questionários em 12 propriedades e obtenção de amostras por swab da conjuntiva ocular, nasal e vaginal de 132 caprinos. As metodologias da PCR e qPCR foram aplicadas em swabs para a detecção dos Mollicutes de importância na caprinocultura. Foram realizadas análises estatísticas para a identificação de associações entre a presença dos Mollicutes e o manejo dos animais. Observou-se que 70% das propriedades são de criações para corte, 80% eram propriedades comerciais e 90% utilizavam o sistema intensivo de criação. Nas avaliações clínicas 22,7% (30/132), 13,6% (18/132) e 6,8% (9/132) dos animais respectivamente apresentavam linfonodos pré escapular, iguinal e submandibulares alterados. Mucosa genital e ocular hiperêmica foram observadas em 9,8% (13/132) dos animais. Identificou-se por PCR convencional, 67,4% (89/132), 20,8% (26/125) e 6,8% (9/132) das amostras nasais, genitais e oculares respectivamente, presença do DNA de microrganismos da classe Mollicutes. M. agalactiae foi detectado em 4,5% (6/132) das amostras nasais e M. conjunctivae em 1,5% (2/132) das amostras oculares. Não foi detectado DNA por PCR convencional M. mycoides subsp. capri, M. capricolum subsp. capricolum, assim como por qPCR M. capricolum subsp. capripneumoniae. Constatou-se relação positiva entre animais provenientes de sistema intensivo de criação e a PCR convencional positiva para classe Mollicutes em amostras nasais (OR: 6,417; IC: 1,551 26,546). Relação positiva também foi observada entre animais oriundos de propriedades com exploração leiteira e a PCR convencional positiva para classe Mollicutes em amostras oculares (OR: 6,441; IC: 1,235-33,581). Assim como entre animais provenientes de sistema extensivo de criação e a PCR convencional positiva para classe Mollicutes em amostras genitais (OR: 3,900; IC: 1,028 14,796). Não foi observada associação estatisticamente significante na correlação entre as variáveis de interesse e o resultado das PCR convencionais para M. agalactiae em amostras nasais e para M. conjunctivae em amostras oculares. Conclui-se que os micoplasmas estão presentes nas criações de caprinos da região sudoeste da Bahia. A identificação de M. conjunctivae, descrito uma única vez na literatura nacional, que apesar da baixa ocorrência possui caráter endêmico; reforçam ainda mais a necessidade de estudos mais enfatizados na identificação dos micoplasmas assim como a elaboração de um perfil sanitário desse tipo de criação na região nordeste do Brasil.

Brazil has about 8.6 million goats and more than 90% are located in the northeast region of the country. The goat breeding, due to its great adaptability to the different ecosystems, has social and economic importance in the region. In this context, the mycoplasmas that colonize the goats are inserted. Caprine mycoplasmosis is widely disseminated worldwide and has socioeconomic relevance in its creation. The low technification of the properties, failure to detect Mollicutes and the low scientific production demonstrate a worrying scenario regarding the sanity of the herd of this region. Considering this, the present study aimed at the research of mycoplasmas in goats, through molecular detection, in the southwest region of the State of Bahia, Brazil. Questionnaires were applied on 12 properties and swab samples were obtained from the ocular, nasal and vaginal conjunctiva of 132 goats. The PCR and qPCR methodologies were applied in the swabs for the detection of Mollicutes of importance in goat breeding. Statistical analyzes were performed to identify associations between the presence of Mollicutes and the management of the animals. It was observed that 70% of the properties are meat farms, 80% were commercial properties and 90% used the intensive breed system. In the clinical evaluations, 22.7% (30/132), 13.6% (18/132) and 6.8% (9/132) of the animals respectively presented pre-scapular, equine and altered submandibular lymph nodes. Genital and ocular hyperemic mucosa were observed in 9.8% (13/132) of the animals. From the analised swabs, 67.4% (89/132), 20.8% (26/125) and 6.8% (9/132) of the nasal, genital and ocular samples respectively, were identified by PCR, positive for the presence of DNA from microorganisms of the Mollicutes class. M. agalactiae was detected in 4.5% (6/132) of the nasal samples and M. conjunctivae in 1.5% (2/132) of the ocular samples. No DNA was detected by conventional PCR of M. mycoides subsp. capri, M. capricolum subsp. capricolum, as well as by qPCR of M. capricolum subsp. capripneumoniae. A positive correlation was observed between animals from intensive breeding system and conventional PCR positive for Mollicutes class in nasal samples (OR: 6,417; CI: 1,551 - 26,546). Positive correlation was also observed between animals from dairy farms and conventional PCR positive for Mollicutes class in ocular samples (OR: 6,441; CI: 1,235-33,581). As well as between animals from the extensive breeding system and conventional Mollicutes positive PCR in genital samples (OR: 3,900; CI: 1,028 - 14,796). No statistically significant association was observed in the correlation between the variables of interest and the results of conventional PCR for M. agalactiae in nasal samples and for M. conjunctivae in ocular samples. It is concluded that mycoplasmas are present in goat breeding in the southwestern region of Bahia. The identification of M.conjunctivae, described only once in the national literature, which despite the low occurrence has an endemic character; reinforces the need for more focused studies in the identification of mycoplasmas as well as the elaboration of a health profile of this type of breeding in northeastern Brazil.

OCORRÊNCIA E CARACTERIZAÇÃO MOLECULAR DE Bartonella spp. E Mycoplasma spp. EM QUIRÓPTEROS AMOSTRADOS NO BRASIL

Doenças transmitidas por vetores artrópodes tem se tornado cada vez mais importantes para a saúde humana e animal. Neste sentido, o papel dos animais selvagens como reservatórios na transmissão destas enfermidades vem sendo investigado. A ordem Chiroptera é considerada o segundo maior grupo de mamíferos no mundo, hospedando importantes patógenos zoonóticos, tais como vírus e bactérias. Bartonella spp. e Mycoplasma spp. são bactérias que parasitam eritrócitos de diferentes espécies de mamíferos, incluindo humanos, podendo causar manifestações clínicas diversas. O presente estudo objetivou pesquisar a ocorrência e analisar filogeneticamente Bartonella spp. e Mycoplasma spp. em quirópteros amostrados no Brasil. Para tal, foram colhidas 325 amostras de sangue e/ou tecidos (fígado, coração e baço) de 162 quirópteros pertencentes a 19 espécies distribuídas em quatro famílias distintas de cinco estados: Mato Grosso, Pará, Paraná, São Paulo e Tocantins. Destas, três amostras mostraram-se negativas para o gene endógeno de referência (GAPDH), sendo excluídas das análises. Portanto, do total de 322 amostras, 17 (5,28%) mostraram-se positivas para Bartonella spp. por meio da PCR em tempo real baseada no gene nuoG. A quantificação de um fragmento do gene nuoG de Bartonella spp. por microlitro variou de 4,4 x 10 a 6,95 x10³ cópias/µL nas amostras de sangue e teciduais dos quirópteros. Ainda, 45 amostras (13,97%) mostraram-se positivas para hemoplasmas por meio da PCR convencional baseada no gene 16S rRNA. Destas amostras foram obtidas sete sequências para Bartonella (nuoG [n=3], gltA [n=2], rpoB [n=1], ftsZ [n=1]), e cinco sequências de um fragmento do gene 16S rRNA de Mycoplasma spp. Nas análises filogenéticas, as sequências de Bartonella spp. posicionaram-se proximamente a genótipos de Bartonella spp. detectados em quirópteros amostrados em países da América Latina. Todas as cinco sequências de hemoplasmas formaram um grupo monofilético, tanto pela análise de Máxima Verossimilhança quanto pela Inferência Bayesiana, mostrando-se filogeneticamente relacionadas a Mycoplasma coccoides. As amostras positivas para Bartonella spp. foram provenientes das espécies Phyllostomus hastatus, Carollia perspicillata, Sturnira lilium, Glossophaga soricina e Natalus espiritosantensis. Trata-se da primeira descrição de Bartonella spp. na última espécie de quiróptero elencada. Os quirópteros positivos para hemoplasmas pertenciam às espécies Artibeus planirostris, Eptesicus sp., Eumops auripendulus, Glossophaga soricina, Molossus molossus, Molossus rufus, Myotis nigricans e Sturnira lilium, sendo a primeira evidência da circulação deste patógeno nestas espécies. Os genótipos de Bartonella spp. obtidos mostraram-se filogeneticamente próximos a genótipos detectados em quirópteros amostrados em outras regiões do mundo. Ainda, evidenciou-se a presença de genótipos filogeneticamente díspares entre si em diferentes regiões do Brasil. Já os genótipos de Mycoplasma spp. obtidos mostraram-se próximos entre si como um grupo monofilético, mas distantes dos previamente detectados em quirópteros dos Estados Unidos da América e Espanha. Portanto, o presente trabalho evidenciou, pela primeira vez, a circulação de Bartonella spp. e hemoplasmas entre quirópteros amostrados no Brasil e identificou novas espécies de quirópteros como hospedeiros das bactérias estudadas.

Vector-borne diseases have become increasingly important to human and animal health. The role of wild animals as reservoirs in the transmission of these diseases has been investigated. The Chiroptera Order is considered the second largest group of mammals in the world, hosting important zoonotic virus and bacteria. Bartonella spp. and Mycoplasma spp. are bacteria that parasites different mammals species' erythrocytes, including humans, causing different clinic manifestations. The present work aimed at investigating the occurrence and assessing the phylogenetic positioning of Bartonella spp. and Mycoplasma spp. in bats sampled in Brazil. A total of 325 blood and/or tissue (liver, spleen and heart) samples were collected from 162 bats belonging to 19 species distributed in four different families from five states: Mato Grosso, Pará, Paraná, São Paulo and Tocantins. Three samples showed negative results in the conventional PCR based on GAPDH gene and excluded from analysis. Seventeen (5,28%) out of 322 bats' samples were positive to qPCR for Bartonella spp. based on nuoG gene. The quantification of a Bartonella spp. nuoG gene fragment per microlitro in bats´ blood and tissues ranged from 4,4 x 10 a 6,95 x10³ copies/µL. On the other hand, 45 (13,97%) samples were positive to cPCR assays for hemoplasmas based on 16S rRNA gene. Seven sequences were obtained for Bartonella spp. (nuoG [n=3], gltA [n=2], rpoB [n=1], ftsZ [n=1]), and five 16S rRNA sequences were obtained for Mycoplasma spp. In the phylogenetic analysis, the found Bartonella spp. sequences clustered with Bartonella spp. genotypes previously detected in bats sampled in Latin America countries. All five hemoplasmas sequences clustered together as a monophyletic group and closely related to Mycoplasma coccoides, by Maximum Likelihood and Bayesian Inference analyses. The biological samples positive for Bartonella spp. were collected from Phyllostomus hastatus, Carollia perspicillata, Sturnira lilium, Glossophaga soricina and Natalus espiritosantensis bats species. This is the first report of occurrence of Bartonella spp. in Natalus espiritosantensis. The positive biological samples for hemoplasmas were collected from animals belonging to the species Artibeus planirostris, Eptesicus sp., Eumops auripendulus, Glossophaga soricina, Molossus molossus, Molossus rufus, Myotis nigricans and Sturnira lilium, which represented the first evidence of the circulation of this pathogen in these species. The Bartonella spp. genotypes showed a phylogenetic relation with genotypes detected in bats sampled in other regions in the world; additionally, genotypes detected in bats from different regions of Brazil were phylogenetic distant from each other. However, Mycoplasma spp. genotypes obtained from bats biological samples from Brazil showed a closely relation among each other, comprising a monophyletic group, but distant from genotypes obtained in bats from the United States of America and Spain. Therefore, this is the first record of circulation of Bartonella spp. and Mycoplasma spp. among bats from Brazil, describing new species of bats as hosts of the studied bacteria.

DETECÇÃO SOROLÓGICA E CARACTERIZAÇÃO MOLECULAR DE AGENTES TRANSMITIDOS POR ARTRÓPODES EM ANIMAIS SELVAGENS E DOMÉSTICOS NA REGIÃO DO PANTANAL SUL MATOGROSSENSE

As enfermidades transmitidas por artrópodes vêm sendo recentemente estudadas em animais selvagens brasileiros, os quais podem atuar como hospedeiros tanto para os vetores quanto para os patógenos, muitos dos quais apresentam potencial zoonótico. O presente estudo tem como objetivo investigar a ocorrência de agentes transmitidos por artrópodes (agentes Anaplasmataceae, Bartonella spp., mycoplasmas hemotróficos, Rickettsia spp., Hepatozoon spp. e piroplasmideos) em animais selvagens, cães domésticos e seus respectivos ectoparasitos, amostrados na região do Pantanal sul matogrossense, por meio de métodos sorológicos e moleculares. Para tal, 31 Nasua nasua, 78 Cerdocyon thous, sete L. pardalis, 42 cães, 110 roedores e 30 marsupiais foram capturados. Os carrapatos recolhidos (1582) dos animais pertenciam às espécies Amblyomma sculptum, Amblyomma parvum, Amblyomma ovale, Amblyomma tigrinum, Rhipicephalus microplus, Rhipicephalus sanguineus sensu lato e Amblyomma auricularium. Adicionalmente, 80 pulgas Polygenis (Polygenis) bohlsi bohlsi foram recolhidas. Quatorze (17,9%) C. thous, sete (16,6%) cães e um (3,2%) N. nasua mostraram-se soropositivos (títulos80) para Ehrlichia canis, com títulos de anticorpos variando de 80 a 1280. Nenhum animal mostrou-se soropositivo Anaplasma phagocytophilum. Nove cães, dois C. thous, um N. nasua, oito roedores, cinco marsupiais e um pool de pulgas P. (P.) b. bohlsi mostram-se positivos para Ehrlichia spp. Todos os cães e o pool de pulgas P. (P.) b. bohlsi positivos para Ehrlichia spp. foram também positivos em para o ensaio em tempo real quantitativo (qPCR) para E. canis, baseado no gene dsb. Sete N. nasua, dois C. thous, um L. pardalis, quatro roedores, três marsupiais, 15 carrapatos A. sculptum, dois A. ovale, dois A. parvum e um pool de larvas de Amblyomma spp. foram positivos para Anaplasma spp. Co-positividade ou co-soropositividade para Ehrlichia spp. e Anaplasma spp. foi observada em dois cães, um N. nasua, um C. thous e dois marsupiais. Trinta e cinco roedores selvagens e três pools de pulgas P. (P.) b. bohlsi, mostraram-se positivos nos ensaios moleculares para Bartonella spp. A análise filogética revelou que pelo menos dois genótipos diferentes estão circulando entre os roedores amostrados no bioma Pantanal. Os resultados parciais sugerem que a pulga P. (P.) b. bohlsi possa estar atuando como um possível vetor de Bartonella nesta região. Vinte e quatro N. nasua, três C. thous, dois cães e um roedor mostraram-se positivos para Mycoplasma spp. A análise filogenética apontou que os cães, C. thous e N. nasua aparentam estar sendo parasitados pela mesma espécie de Mycoplasma spp., filogenéticamente relacionada a M. haemocanis/M. haemofelis e que provavelmente um novo genótipo de Mycoplasma spp. está circulando entre os N. nasua e C. thous amostrados no bioma Pantanal. Vinte e sete (64,2%) cães, 59 (7,6%) C. thous e seis (85,7%) L. pardalis mostraram-se soropositivas para pelo menos uma espécie de Rickettsia. Para 17 (40,4%) cães, 33 (42,3%) C. thous e dois (33,3%) L. pardalis, foram observadas reações homólogas para Rickettsia amblyommatis. Cento e dezesseis carrapatos (93 A. parvum, 14 A. sculptum, três A. auricularim e seis pools de larvas de Amblyomma) e uma amostra de sangue obtida de C. thous, mostraram-se postivas nos ensaios para as espécies de Rickettsia do grupo da febre maculosa. As amostras seqüenciadas obtidas dos carrapatos A. parvum, mostraram-se filogenéticamente relacionadas com 'Candidatus Rickettsia andeanae'. Uma alta ocorrência de Hepatozoon foi encontrada nos carnívoros amostrados (C. thous [91,02%], cães [45,23%], N. nasua [41,9%] e L. pardalis [71,4%]), porém nenhum artrópode mostrou-se positivo. Adicionalmente, 24 roedores e um marsupial também mostraram-se positivos para Hepatozoon spp. Com base na análise filogenética, os C. thous, L. pardalis, N. nasua, cães, roedores e marsupiais aparentam não estar sendo parasitados pela mesma espécie de Hepatozoon spp. Sete cães, um C. thous, cinco L. pardalis, três N. nasua, seis roedores, oito carrapatos A. parvum, dois A. sculptum e um A. ovale mostraram-se positivos para os ensaios PCR de piroplasmídeos. Genótipos filogeneticamente relacionados com Babesia canis vogeli foram detectados em seis cães e cinco roedores. Genótipos filogeneticamente relacionados com Babesia caballi foram detectados em um C. thous, um cão, um carrapato A. ovale e um A. sculptum e genótipos relacionados com Babesia bigemina e Babesia bovis foram detectados em quatro carrapatos A. parvum. Quatro sequências obtidas de A. parvum, três N. nasua e um roedor mostraram-se filogeneticamente relacionadas com Theileria equi. Por fim, Cytauxzoon spp. foi detectado em quatro L. pardalis .O presente trabalho mostra, portanto, a ocorrência de agentes transmitidos por artrópodes vetores em animais selvagens e domésticos no Panatanal sul matogrossense.

The diseases transmitted by arthropods have been recently studied in Brazilian wildlife, which can act as hosts for vectors and pathogens, many of which have zoonotic potential. The present work aimed to investigate the occurrence of tick-borne agents (Anaplasmataceae agents, Bartonella spp., hemotropic mycoplasmas, Rickettsia spp., Hepatozoon spp. and piroplasms) in wild animals, domestic dogs and their respective ectoparasites, in southern Pantanal region, central-western Brazil, by serological and molecular assays. For this reason, 31 Nasua nasua, 78 Cerdocyon thous, seven L. pardalis, 42 dogs, 110 rodents and 30 marsupials were captured. The ticks collected (1582) from animals belonged to the species Amblyomma sculptum, Amblyomma parvum, Amblyomma ovale, Amblyomma tigrinum, Rhipicephalus microplus, Rhipicephalus sanguineus sensu lato and Amblyomma auricularium. Additionally, 80 Polygenis (Polygenis) bohlsi bohlsi fleas were collected. Overall, 14 (17.9%) C. thous, seven (16.6%) dogs and one (3.2%) N. nasua were seroreactive (titer80) to Ehrlichia canis, with titers ranging from 80 to 1280. No animal showed to be seroreactive for A. phagocytophilum antigen. Nine dogs, two C. thous, one N. nasua, eight rodents, five marsupials and one P. (P.) b. bohlsi pool were positive for Ehrlichia spp. All positive dogs and the only P. (P.) b. bohlsi pool positive for Ehrlichia spp. were also positive in specific E. canis-qPCR based on dsb gene. Seven N. nasua, two dogs, one C. thous, one L. pardalis, four rodents, three marsupials, 15 A. sculptum, two A. ovale, two A. parvum and one Amblyomma larvae pool were positive for Anaplasma spp. Co-positivity or co-seropositivity for Ehrlichia spp. and Anaplasma spp. was observed in two dogs, one N. nasua, one C. thous and two marsupials. Thirty-five rodents and three P. (P.) b. bohlsi flea pools, showed to be positive to Bartonella spp. in the molecular assays. The phylogenetic analysis revealed that at least two different genotypes are circulating among the rodents sampled in the Pantanal biome. Partial results suggest that the flea P. (P.) b. bohlsi may be acting as a possible Bartonella vector in this region. Twenty-four N. nasua, three C. thous, two dogs and one rodent, were positive for Mycoplasma spp. Phylogenetic analysis indicated that dogs, C. thous and N. nasua appear to share the same Mycoplasma spp. species, closely related to M. haemocanis / M. haemofelis and probably a new genotype of Mycoplasma spp. is circulating among the N. nasua and C. thous sampled in the Pantanal biome. Overall, 27 (64.2%) dogs, 59 (75.6%) C. thous and six (85.7%) L. pardalis were seroreactive to at least one Rickettsia species. For 17 (40.4%) dogs, 33 (42.3%) C. thous, and two (33.3%) L. pardalis, homologous reactions to Rickettsia amblyommatis were suggested. One hundred and sixteen ticks (93 A. parvum, 14 A. sculptum, three A. auricularim and six Amblyomma larvae pools) and one blood sample obtained from C. thous showed positive results for Rickettsia spotted fever group species. The sequenced samples obtained from A. parvum ticks showed to be closely related to 'Candidatus Rickettsia andeanae'. A high occurrence of Hepatozoon was found in carnivores (C. thous [91.02%], dogs [45.23%], N. nasua [41.9%] and L. pardalis [71.4%]), however no arthropod showed positive results. Additionally, twenty-four rodents and a marsupial also showed positivity to Hepatozoon spp. Based on phylogenetic analysis, C. thous, L. pardalis, N . nasua, dogs, rodents and marsupials appear not to share the same of Hepatozoon species. Seven dogs, one C. thous, five L. pardalis, three N. nasua, six rodents, eight A. parvum, two A. sculptum and one A. ovale were positive for piroplasmids-PCR assays. Genotypes closely related to Babesia vogeli were detected in six dogs and five rodents. While genotypes closely related to Babesia caballi were detected in one C. thous, one dog, one A. ovale and one A. sculptum, genotypes closely related to Babesia bigemina and Babesia bovis were detected in four A. parvum ticks. Four sequences obtained from A. parvum, three N. nasua and one wild rodent were closely related to Theileria equi. Lastly, Cytauxzoon spp. was detected in four L. pardalis. The present work shows the occurrence of vector-borne agents in wild and domestic animals in southern mato grosso Pantanal.

Detection of hemoplasma and Bartonella species and co-infection with retroviruses in cats subjected to a spaying/neutering program in Jaboticabal, SP, Brazil / Detecção de hemoplasmas e Bartonella sp. e co-infecção com retrovírus em gatos submetidos a um programa de castração/esterilização em Jaboticabal, SP, Brasil

Hemotrophic mycoplasmas and Bartonella species are important pathogens that circulate between cats and invertebrate hosts, occasionally causing diseases in humans. Nevertheless, there are few reports on occurrences of these agents in cats in Brazil. The present study aimed to detect the presence of hemoplasma and Bartonella DNA by means of PCR and sequencing. FIV antigens and anti-FeLV antibodies, were studied by using a commercial kit on blood and serum samples, respectively, among 46 cats that were sampled during a spaying/neutering campaign conducted in Jaboticabal, SP. Three (6.5%) cats were positive for hemoplasmas: two (4.3%) for 'Candidatus M. haemominutum' and one (2.2%) for both M. haemofelis and 'Candidatus M. turicensis'. One of the two 'Candidatus M. haemominutum'-infected cats was also positive for FeLV antigens and showed antibodies for FIV. Two cats (4.3%) were positive for B. henselae. One of them was also positive for FeLV antigens. Eight cats (17.4%) were positive for FeLV, and just one (2.2%) showed anti-FIV antibodies. Bartonella species and hemoplasmas associated with infection due to retroviruses can circulate among apparently healthy cats.(AU)

Micoplasmas hemotróficos e espécies de Bartonella são importantes patógenos que circulam entre gatos e hospedeiros invertebrados, causando ocasionalmente doenças no homem. Apesar disto, poucos são os estudos acerca da ocorrência destes agentes entre gatos no Brasil. O presente estudo objetivou detectar o DNA de hemoplasmas e Bartonella sp. pela PCR e sequenciamento. Antígeno de FIV e anticorpos anti-FeLV foram estudados utilizando um "kit" comercial, em amostras de sangue e soro, respectivamente, de 46 gatos amostrados em uma campanha de castração em Jaboticabal, SP. Três gatos (6,5%) foram positivos para hemoplasmas: dois (4,3%) para 'Candidatus M. haemominutum' e um (2,2%) para M. haemofelis and 'Candidatus M. turicensis'. Um dos gatos positivos para 'Candidatus M. haemominutum' mostrou-se também positivo na detecção de antígeno de FeLV e de anticorpos para FIV. Dois (4,3%) gatos mostraram-se positivos para B. henselae, sendo que um deles também se mostrou positivo para antígeno de FeLV. Oito gatos (17,4%) foram positivos para FeLV, e apenas um gato mostrou anticorpos anti-FIV. Bartonella sp. e hemoplasmas associados à infecção por retrovírus podem circular entre gatos aparentemente saudáveis.(AU)

Associação entre Mycoplasma spp. e ácaros do conduto auditivo de bovinos

This study was carried out to assess the association between of mycoplasmas species with ear mites Raillietia auris and R. flechtmanni in the external ear canal of 60 bovines at slaughter time from the State of Rio de Janeiro, Brazil. Steril syringes (60ml) loaded with buffer solution (PBS, pH 7.2) were used for the ear canal flushing. Were processed 218 mites for mycoplasma isolation. A pool of mites from each sampled bovine was washed five times sucessively in 1mL of liquid modified Hayflick´s medium. The washed mites obtained were diluted up to 10-1 at 10-5, inoculated in liquid and solid Hayflick´s media and incubated at 37ºC for 2-3 days, being the plates put into jar for the obtention of microaerofilia condition. The Typical colonies were typified by the indirect imunoperoxidase test (IPI) with paper discs satured with hyperimmune rabbit sera. In the studied bovine high prevalence was verified Raillietia spp. 76.7% (46/60). The parasitism by mycoplasmas and mites was verified in 40 animals (74.1%), this association was significant (p 0.001). Among the mites processed for isolation mycoplasmas 193 were female and 25 males. The frequency of Mycoplasma in Raillietia spp. was of 81.2% (177/218) (p 0.001). Of the females identified 52.3% (101/193) were R. auris and 47.7% (92/193) were R. flechtmanni. The frequency of Mycoplasma in the females of R. auris was of 75.2% (76/101) and 88% (81/92) in R. flechtmanni (P 0.05). The mycoplasmas species typified by IPI in the Raillietia auris mites were M. alkalescens 6.9%, M. arginini 3.4%, M. bovirhinis 9.2%, M. conjunctivae 18.4%, M. mycoides mycoides LC 8.0%, M. capricolum 5.7%. In the R. flechtmanni mites mycoplasmas species typified were M. alkalescens 12.2%, M. arginini 1.0%, M. bovirhinis 18.9%, M. bovis 2.2%, M. conjunctivae 21.0%, M. mycoides mycoides LC 11.0% e M. capricolum 4.4%. The species of identified mycoplasmas in the external ear canal bovine and mites were exactly the same. The results confirm that the external ear canal cattle's ear canal is also a mycoplasmas source, including potentially pathogenic species for cattle, and these mollicutes are closely related with mites Raillietia spp. that is carrier and this agent in your organism.

Esse estudo foi realizado com o objetivo de verificar a associação entre micoplasmas e ácaros (Raillietia auris e R. flechtmanni) no conduto auditivo de bovinos. Foram realizadas lavagens no conduto auditivo externo de 60 bovinos abatidos no Estado do Rio de Janeiro, Brasil. Para a lavagem dos condutos auditivos foi utilizada solução salina tamponada (PBS, pH 7.2) em seringas estéreis de 60mL. Para o isolamento de micoplasmas foram utilizados pools de ácaros por animal, lavados sucessivamente em 1mL de meio Hayflick modificado. Os lavados dos ácaros foram diluídos de 10-1 até 10-5 e repicados em meio Hayflick modificado, sólido e líquido e incubados a 37°C por 48-72 horas em microaerofilia. A identificação das espécies de micoplasmas foi realizada pelo teste da imunoperoxidase indireta (IPI). Verificou-se alta prevalência de ácaros do gênero Raillietia spp. 76,7% (46/60). O parasitismo por ácaros e micoplasmas foi verificado em 40 animais (74,1%), sendo esta associação significativa (p 0,001). Dos ácaros processados para isolamento de micoplasmas, 193 foram fêmeas e 25 machos. A frequência de Mycoplasma em Raillietia spp. foi de 81,2% (177/218) (p 0.001). Das fêmeas identificadas, 52,3% (101/193) foram R. auris e 47,7% (92/193) R. flechtmanni. A frequência de Mycoplasma nas fêmeas de R. auris foi de 75,2% (76/101) e na espécie R. flechtmanni foi de 88% (81/92) (P 0.05). As espécies de micoplasmas tipificadas pela IPI nos ácaros Raillietia auris foram: M. alkalescens 6,9%, M. arginini 3,4%, M. bovirhinis 9,2%, M. conjunctivae 18,4%, M. mycoides mycoides LC 8,0%, M. capricolum 5,7%. Em R. flechtmanni as espécies de micoplasmas identificadas foram: M. alkalescens 12,2%, M. arginini 1,0%, M. bovirhinis 18,9%, M. bovis 2,2%, M. conjunctivae 21,0%, M. mycoides mycoides LC 11,0% e M. capricolum 4,4%. As espécies de micoplasmas identificadas no conduto auditivo externo dos bovinos foram as mesmas presentes nos ácaros R. auris e R. flechtmanni. Os resultados confirmam que o conduto auditivo externo de bovinos é um habitat de Mycoplasma spp., incluindo espécies potencialmente patogênicas para os rebanhos, além dos ácaros R. auris e R. flechtmanni estarem associados com esses molicutes carreando-os em seu organismo.

Isolamento e PCR para detecção de Mollicutes em muco vaginal e sua associação com problemas reprodutivos em ovinos criados na região de Piedade, São Paulo, Brasil

It was evaluated the presence of Mycoplasma spp, Ureaplasma spp and Acholeplasma laidlawiii in 60 samples of ovine vaginal mucous with the presence or absence of vulvovaginitis in the specific exam of the reproductive tract. The microorganisms were characterized based on bacteriological culture and DNA detection by Polymerase Chain Reaction (PCR) with specific primers to Mollicutes (GPO and MGSO), Ureaplasma (UGPF and UGPS) and Acholeplasma laidlawii (UNI and ACH3). The presence of mycoplasmas could not be associated with reproductive disorders in animals. The PCR to Acholeplasma laidlawii detected only one positive sample. However, all isolations of Ureaplasma spp were from animals presenting reproductive disorders, suggesting a possible involvement of this agent in reproductive diseases.

Pesquisou-se Mycoplasma spp, Ureaplasma spp e Acholeplasma laidlawiii em amostras de muco vaginal de 60 ovinos, criados na região de Piedade no Estado de São Paulo, Brasil, que apresentavam ou não vulvovaginite no exame específico do sistema genital. A caracterização desses microrganismos baseou-se no cultivo e detecção do respectivo DNA pela Reação da Polimerase em Cadeia (PCR) com os primers para classe Mollicutes (GPO e MGSO), para o gênero Ureaplasma (UGPF e UGPS) e a espécie Acholeplasma laidlawii (UNI e ACH3). A presença de micoplasmas não foi associada com distúrbios do trato reprodutivo dos animais, entretanto todos os isolados obtidos de Ureaplasma spp foram provenientes de animais com distúrbios reprodutivos, sugerindo o possível envolvimento desse agente nas enfermidades da reprodução. A PCR para a espécie Acholeplasma laidlawii detectou somente uma amostra positiva.

Isolamento e PCR para detecção de Mollicutes em muco vaginal e sua associação com problemas reprodutivos em ovinos criados na região de Piedade, São Paulo, Brasil

It was evaluated the presence of Mycoplasma spp, Ureaplasma spp and Acholeplasma laidlawiii in 60 samples of ovine vaginal mucous with the presence or absence of vulvovaginitis in the specific exam of the reproductive tract. The microorganisms were characterized based on bacteriological culture and DNA detection by Polymerase Chain Reaction (PCR) with specific primers to Mollicutes (GPO and MGSO), Ureaplasma (UGPF and UGPS) and Acholeplasma laidlawii (UNI and ACH3). The presence of mycoplasmas could not be associated with reproductive disorders in animals. The PCR to Acholeplasma laidlawii detected only one positive sample. However, all isolations of Ureaplasma spp were from animals presenting reproductive disorders, suggesting a possible involvement of this agent in reproductive diseases.

Pesquisou-se Mycoplasma spp, Ureaplasma spp e Acholeplasma laidlawiii em amostras de muco vaginal de 60 ovinos, criados na região de Piedade no Estado de São Paulo, Brasil, que apresentavam ou não vulvovaginite no exame específico do sistema genital. A caracterização desses microrganismos baseou-se no cultivo e detecção do respectivo DNA pela Reação da Polimerase em Cadeia (PCR) com os primers para classe Mollicutes (GPO e MGSO), para o gênero Ureaplasma (UGPF e UGPS) e a espécie Acholeplasma laidlawii (UNI e ACH3). A presença de micoplasmas não foi associada com distúrbios do trato reprodutivo dos animais, entretanto todos os isolados obtidos de Ureaplasma spp foram provenientes de animais com distúrbios reprodutivos, sugerindo o possível envolvimento desse agente nas enfermidades da reprodução. A PCR para a espécie Acholeplasma laidlawii detectou somente uma amostra positiva.