Sensitization with Eustrongylides sp. (Nematoda: Dioctophymatidae) antigens induce production of specific IgG and IgE in murine model / Sensibilização com antígenos de Eustrongylides sp. (Nematoda: Dioctophymatidae) induzindo a produção de IgG e IgE em modelo murino

Fish consumption plays an important role in human diet. Hoplias malabaricus, commonly known as traíra, is a freshwater fish widely appreciated in several Brazilian states and frequently infected by Eustrongylides sp. fourth-instar larvae (L4). The aim of the present study was to evaluate allergenic potential of Eustrongylides sp. L4 crude extract (CEE). BALB/c mice were immunized intraperitoneally (IP) by 10 g CEE with 2 mg of aluminum hydroxide on days 0 and 35. Specific IgG and IgE antibody levels were determined after immunization and cellular immunity was evaluated by assessing intradermal reaction in ear pavilion. Epicutaneous sensitization was performed in dorsal region by antigen exposure using a Finn-type chamber containing 50 g of CEE or saline solution, followed by evaluation of specific antibody levels. IP immunization resulted in a gradual increase in IgG antibody levels and transitory IgE production. Significant increase in ear thickness was observed in cellular hypersensitivity reaction. In case of antigen exposure by epicutaneous route, CEE was able to induce meaningfully increased levels of specific IgG and IgE antibodies as well as heightened cellular immunity. Both intraperitoneal immunization and epicutaneous contact with Eustrongylides sp. larval antigens were observed for first time to be capable of inducing immunological sensitization in mice.(AU)

Consumir peixe constitui papel importante na dieta humana. Hoplias malabaricus, comumente chamado de traíra, peixe de água doce largamente apreciado no Brasil, é frequentemente infectado com larvas de quarto estágio (L4) de Eustrongylides sp. O presente estudo objetivou avaliar o potencial alergênico do Extrato Bruto de L4 de Eustrongylides sp. (EBE). Camundongos BALB/c foram imunizados intraperitonealmente (IP) por 10 g de EBE com 2 mg de hidróxido de alumínio nos dias 0 e 35. Após imunização, determinaram-se níveis específicos de anticorpos IgG e IgE e avaliou-se a imunidade celular pela reação intradérmica no pavilhão auricular. Realizou-se sensibilização epicutânea na região dorsal pela exposição ao antígeno, utilizando-se câmara tipo Finn, contendo 50 g de CEE ou solução salina. Após exposições, foram avaliados níveis específicos de anticorpos. Na imunização via IP, houve aumento gradual nos níveis de anticorpos IgG e produção de IgE transitória. Foi observado aumento significativo na espessura do pavilhão auricular na reação de hipersensibilidade celular. Na exposição ao antígeno pela via epicutânea, o EBE induziu aumento significante nos níveis de anticorpos IgG e IgE específicos e induziu imunidade celular. Pela primeira vez, observou-se que a imunização intraperitoneal e contato epicutâneo com antígenos larvares de Eustrongylides sp. são capazes de induzir sensibilização imunológica em camundongos.(AU)

Resposta imunológica a antígenos de Hysterothylacium deardorffoverstreetorum de peixes teleósteos / Imunne response against Hysterothylacium deardorffoverestreetorum from teleost fish

Anisaquidose é uma doença provocada por parasitos da família Anisakidae e se caracteriza por manifestações gastrointestinais e alérgicas. O Anisakis simplex é o parasito mais patogênico ao homem e altamente alergênico. Porém, outros anisaquídeos também são danosos aos humanos, mas é desconhecida a imunogenicidade dessas larvas. O objetivo deste trabalho foi avaliar o potencial imunogênico do parasito Hysterothylacium deardorffoverestreetorum (HD) em modelo murino. Camundongos da linhagem BALB/c foram divididos em três grupos experimentais e receberam as preparações antigênicas obtidas de larvas de HD: extrato bruto de larvas (EBH), extrato secretado/ excretado de larvas (ESH) e extrato bruto de larvas após excreção/secreção (EEH). Amostras séricas foram obtidas em diferentes dias após imunização para determinação dos níveis de anticorpos específicos pelo ensaio imunoenzimático (ELISA). Os resultados demonstram aumento na produção de imunoglobulina (Ig) G após a segunda imunização, com aumento progressivo após a terceira imunização. Já em relação à IgE, a reatividade foi mais tardia, demonstrando aumento progressivo após a terceira imunização. Foi avaliada a imunidade celular por meio da intradermorreação, como resultado estatisticamente significativo em relação ao controle utilizado. Este experimento é a primeira descrição da potencialidade patogênica desse parasito em mamíferos e representa um avanço no diagnóstico da anisaquidose humana.(AU)

Anisaquidosis is a disease caused by parasites of Anisakidae family and is characterized by gastrointestinal and allergic reactions. The Anisakis simplex is a more pathogenic Anisakidae to humans and is highly allergenic. However, other species of this family also have characteristics that are harmful to humans, but little is known about the immunogenicity this parasites. The objective of this study was to experimentally assess the immunogenic potential of the parasite Hysterothylacium deardorffoverestreetorum (H.D) in mice. Mice of inbred BALB/c strain were divided into three groups and received three immunizations of the following antigenic preparations obtained from L3 larvae H.D: Crude larval extract of H.D (CEH) Extract secreted / excreted larvae H.D. (ESH) and crude extract of larvae after excretion / secretion (EEH). Serum samples were obtained on different days after immunization to determine the levels of circulating specific antibodies by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). The results show increased production of immunoglobulin (Ig) G after the second immunization with a gradual increase after the third immunization. Regarding IgE reactivity, this occurred later, demonstrating a progressive increase only after the third immunization. Cellular immunity was evaluated by intradermal, and showed statistically significant result compared to the control used. This experiment is the first description of the pathogenic potential of this parasite in mammals and represents a breakthrough in the diagnosis of human Anisakidosis.(AU)

Resposta imunológica a antígenos de Hysterothylacium deardorffoverstreetorum de peixes teleósteos / Imunne response against Hysterothylacium deardorffoverestreetorum from teleost fish

Anisaquidose é uma doença provocada por parasitos da família Anisakidae e se caracteriza por manifestações gastrointestinais e alérgicas. O Anisakis simplex é o parasito mais patogênico ao homem e altamente alergênico. Porém, outros anisaquídeos também são danosos aos humanos, mas é desconhecida a imunogenicidade dessas larvas. O objetivo deste trabalho foi avaliar o potencial imunogênico do parasito Hysterothylacium deardorffoverestreetorum (HD) em modelo murino. Camundongos da linhagem BALB/c foram divididos em três grupos experimentais e receberam as preparações antigênicas obtidas de larvas de HD: extrato bruto de larvas (EBH), extrato secretado/ excretado de larvas (ESH) e extrato bruto de larvas após excreção/secreção (EEH). Amostras séricas foram obtidas em diferentes dias após imunização para determinação dos níveis de anticorpos específicos pelo ensaio imunoenzimático (ELISA). Os resultados demonstram aumento na produção de imunoglobulina (Ig) G após a segunda imunização, com aumento progressivo após a terceira imunização. Já em relação à IgE, a reatividade foi mais tardia, demonstrando aumento progressivo após a terceira imunização. Foi avaliada a imunidade celular por meio da intradermorreação, como resultado estatisticamente significativo em relação ao controle utilizado. Este experimento é a primeira descrição da potencialidade patogênica desse parasito em mamíferos e representa um avanço no diagnóstico da anisaquidose humana.(AU)

Anisaquidosis is a disease caused by parasites of Anisakidae family and is characterized by gastrointestinal and allergic reactions. The Anisakis simplex is a more pathogenic Anisakidae to humans and is highly allergenic. However, other species of this family also have characteristics that are harmful to humans, but little is known about the immunogenicity this parasites. The objective of this study was to experimentally assess the immunogenic potential of the parasite Hysterothylacium deardorffoverestreetorum (H.D) in mice. Mice of inbred BALB/c strain were divided into three groups and received three immunizations of the following antigenic preparations obtained from L3 larvae H.D: Crude larval extract of H.D (CEH) Extract secreted / excreted larvae H.D. (ESH) and crude extract of larvae after excretion / secretion (EEH). Serum samples were obtained on different days after immunization to determine the levels of circulating specific antibodies by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). The results show increased production of immunoglobulin (Ig) G after the second immunization with a gradual increase after the third immunization. Regarding IgE reactivity, this occurred later, demonstrating a progressive increase only after the third immunization. Cellular immunity was evaluated by intradermal, and showed statistically significant result compared to the control used. This experiment is the first description of the pathogenic potential of this parasite in mammals and represents a breakthrough in the diagnosis of human Anisakidosis.(AU)

Potencial vacinal da Brucella ovis abcBA encapsulada com alginato contra a infecção por Brucella canis e sua inocuidade em cães

A brucelose canina é uma doença infectocontagiosa e zoonótica com distribuição mundial. A infecção é causada por Brucella canis, bactéria Gram-negativo que resulta em sinais clínicos inespecíficos nos cães e doença crônica debilitante em humanos. A vacinação é principal ferramenta para o controle da brucelose, no entanto, atualmente não existe vacina comercial disponível para o controle da brucelose canina. Este estudo teve como objetivo avaliar a proteção e a resposta imunológica induzida por Brucella ovis abcBA (BoabcBA) encapsulada com alginato contra o desafio por B. canis em camundongos e avaliar a segurança dessa cepa em cães. A cinética intracelular em macrófagos primários caninos e ovinos foi similar, sendo que as cepas selvagens B. ovis e B. canis foram capazes de multiplicar no meio intracelular, enquanto a cepa vacinal BoabcBA apresentou perfil atenuado nestas células. A imunização de camundongos BALB/C com BoabcBA (108 UFC unidades formadoras de colônia) encapsulada em alginato induziu proliferação de linfócitos, produção de IL-10 e IFN- e protegeu contra o desafio experimental com B. canis. Cães imunizados com BoabcBA (109 UFC) encapsulada em alginato soroconverteram e não apresentaram alterações hematológicas, bioquímicas ou clínicas. Além disso, BoabcBA não foi detectada por isolamento ou PCR em amostras de sangue, sêmen, urina ou swab vaginal em nenhum momento no decorrer deste estudo. BoabcBA foi isolado a partir de linfonodos próximos ao local da inoculação em dois cães 22 semanas após a imunização. Desta forma, os resultados mostram que BoabcBA encapsulada em alginato protege camundongos contra o desafio experimental por B. canis, e é segura para cães.

Canine brucellosis is an infectious and zoonotic disease with worldwide distribution and is considered neglected. The infection is caused by Brucella canis, a Gram-negative bacterium that results in unspecific clinical signs in dogs and chronic disease in humans. Vaccination is most important tool for controlling brucellosis, but currently there is no vaccine available for canine brucellosis. This study aimed to evaluate protection and immune response induced by Brucella ovis abcBA (BoabcBA) encapsulated with alginate against the challenge with B. canis in mice and to assess the safety of this strain for dogs. The intracellular kinetics in primary canine and sheep macrophages was similar, with the wild strains B. ovis and B. canis being able to multiply in the intracellular medium, while the BoabcBA vaccine strain showed an attenuated profile in these cells. Immunization of BALB/C mice with alginate-encapsulated BoabcBA (108 CFU colony forming units) induced lymphocyte proliferation, production of IL10 and IFN-, and protected against experimental challenge with B. canis. Dogs immunized with alginate-encapsulated BoabcBA (109 CFU) seroconverted, and had no hematologic, biochemic or clinical changes. Furthermore, BoabcBA was not detected by isolation or PCR with blood, semen, urine samples or vaginal swabs at any time point over the course of this study. BoabcBA was isolated from lymph nodes near to the site of inoculation in two dogs at 22 weeks post immunization. In conclusion, encapsulated BoabcBA protected mice against experimental B. canis infection, and it is safe for dogs

Inflamação cutânea em modelo animal de dermatite atópica canina

A dermatite atópica (DA) é a forma mais comum de alergia que afeta cães causando prurido e inflamação na pele. O objetivo desse estudo foi avaliar um modelo murino similar à doença nos cães, para possibilitar futuros estudos de tratamento da atopia. Três grupos de 3 camundongos da linhagen C57Bl/6 receberam 0,1ml de extrato do ácaro Dermatophagoides farinae pela via percutânea em até 4 ciclos de indução e posteriormente a pele foi coletada por biópsia para avaliação histopatológica. Cada ciclo consistiu em duas aplicações de alérgeno que foi mantido aderido a pele com bandagem, sendo grupo G2 (2 ciclos), G3 (3 ciclos) e G4 (4 ciclos) e um grupo controle Gc que não recebeu alérgeno, somente bandagem. Não foram observadas alterações cutâneas clínica como eritema e escoriação em nenhum grupo. Houve diferença estatística significante no grupo que recebeu 4 ciclos de indução de alérgenos quanto à hiperplasia de epiderme e quantidade de mastócitos. O infiltrado perivascular foi maior em todos os grupos em relação ao controle. Sobretudo deverão ser realizados mais estudos para obter um modelo animal murino reprodutível para avaliação dos tratamentos da dermatite atópica canina

The atopic dermatitis (AD) is a common allergic disease in dogs that cause itching and skin inflammation. This study aimed to test a murine model comparable to the dogs disease, to enable future atopic disease treatment studies. Three groups of 3 mice C57Bl/6 received 0.1ml of Dermatophagoides farinae mite extract percutaneously in up to 4 cycles of induction and subsequently the skin was collected by biopsy for histopathological evaluation. Each cycles were two allergen applying that kept fixed onto the skin with a bandage, being thus group G2 (2 cycles), G3 (3 cycles) and G4 (4 cycles) and a control group Gc that did not received allergen, only bandage. No clinical symptoms such as erythema and excoriations were observed in any group. There was a significant statistical difference in group G4 regarding epidermal hyperplasia and mast cell numbers. The perivascular infiltrate was higher in all groups than the control group. Therefore, further studies should be performed to obtain a reproducible murine animal model of canine atopic dermatitis treatments.

Transmissão de vaccínia vírus pelo leite em modelo murino, detecção e viabilidade de poxivírus no queijo e leite

A vaccínia bovina (VB) é uma zoonose causada pelo Vaccinia virus (VACV) que afeta principalmente vacas leiteiras e humanos. Estudos prévios têm detectado partículas virais viáveis de VACV em amostras de leite de vacas natural e experimentalmente infectadas. Porém, ainda não se sabe se o leite contaminado pode transmitir VACV após o consumo. Por outro lado, há um estudo que mostra que humanos, inclusive crianças, que vivem em áreas endêmicas de VB, mas que nunca tiveram contato com vacas doentes, apresentaram anticorpos anti-OPXV, sugerindo que o VACV pode ser transmitido por outras vias. Levando em consideração o previamente exposto, esta tese teve como objetivo estudar a transmissão de VACV pelo leite em modelo murino e a detecção e viabilidade de poxvirus no queijo e leite. No capítulo 1, 30 camundongos receberam 100 µl de leite, por via oral, contendo 106 UFP de VACV-GP2. Amostras de suabe oral (SO), fezes, tecidos e sangue foram coletadas e analisadas. Nenhuma alteração clínica foi observada nos camundongos. DNA viral foi detectado, de forma intermitente, nas amostras de SO e de tecidos a partir do 2º d.p.i., enquanto em amostras de sangue e fezes a partir do 5º d.p.i. A detecção ocorreu até o 10ºd.p.i. em SOs e, nas demais amostras, até o 30º d.p.i. Em todos os tecidos dos animais infectados, exceto coração, tonsila, língua, estômago and duodeno, foram observados imunomarcação intracitoplasmática na técnica de IHQ em todos os tempos analisados. Anticorpos neutralizantes (AN) foram detectados no 20º e no 30º d.p.i. em 50% dos camundongos infectados. No capítulo 2, 12 L de leite foram contaminados com 105 UFP/ml de VACV-GP2 e seis queijos foram produzidos. Os queijos foram submetidos ao processo de maturação durante 1, 7, 14, 21, 45 e 60 dias a 25ºC. As amostras de queijo foram quantificadas na qPCR e tituladas em células VERO. A quantificação e a titulação viral apresentaram redução no decorrer do tempo de maturação, porém, não apresentaram diferença estatística. O 3º capítulo refere-se à detecção de VACV em amostras de queijos de campo provenientes de propriedades com e sem surto de VB. Cinquenta e nove queijos frescos e maturados foram coletados e analisados, sendo que dez queijos foram produzidos em propriedades com casos de VB e 49, oriundos de fazendas sem histórico da doença. A técnica de PCR-nested foi utilizada na detecção de DNA viral. As amostras de queijo positivas na PCR-nested foram inoculadas em cultivo celular ou membrana corioalantóide de ovos embrionados (MCA) de galinha. A confirmação do efeito citopático (ECP) foi realizadapelas técnicas de imunoperoxidase em monocamada celular (IPMC) e qPCR, respectivamente. O DNA viral foi detectado em 43 das 59 amostras testadas. Destas, 11 tinham partículas infecciosas do VACV, sendo quatro amostras oriundas de propriedades sem casos de VB. No último capítulo, seis propriedades leiteiras em Minas Gerais, com surtos de doenças vesiculares acometendo vacas em lactação, bezerros e humanos, foram visitadas. Aleatoriamente, foram selecionadas, por propriedade, dez vacas com lesões e amostras de leite foram coletadas, totalizando 60 amostras de leite. Além disso, duas crostas das lesões nos tetos das vacas também foram coletadas em cada fazenda, totalizando 12 crostas. Das seis propriedades estudadas, em todas foi confirmada a presença de OPXV nas amostras de crosta. A existência de coinfecção de PPV e de OPXV foi confirmada em quatro delas. Como duas propriedades foram negativas para PPV, as amostras de leite, provenientes das vacas destas propriedades, não foram analisadas. Com relação aos leites testados, foi observada amplificação para o gene B2L em 12 amostras das 40 analisadas, indicando a presença de PPV em 30% dos leites testados. Destas 12, oito estavam contaminadas tanto com PPV quanto com OPXV. Os resultados mostraram que leite contaminado pode ser fonte de infecçãode VACV em modelo murino, sendo que os animais apresentaram infecção subclínica com distribuição sistêmica e eliminação pelas fezes e mucosa oral. Além disso, o processo de maturação do queijo reduz o número de partículas virais viáveis, mas não foi capaz de inativar o vírus durante os 60 dias testados. Por outro lado, a detecção de VACV em amostras de queijos Minas artesanais mostrou que o VACV pode circular de forma silenciosa, uma vez que houve detecção em amostras de queijos de propriedades sem surto de VB. Além disso, foi possível detectar coinfecção de PPV e VACV em amostras de leite de propriedades com surto de doenças vesiculares. Desta forma, o consumo de leite e queijos contaminados com VACV pode ser um risco para a saúde pública. Porém, mais estudos são necessários para determinar o possível risco de transmissão do vírus para humanos associado ao consumo de leite e queijos artesanais contaminados com VACV.

Bovine vaccinia (BV) is a zoonotic disease caused by Vaccinia virus (VACV) and affect mainly dairy cows and humans. Previous studies have detect viral viable particles of VACV in milk samples of natural and experimentally infectious cows. But, is unknown if the contaminated milk can transmit VACV after consumption. On the other hand, there is a study that detected neutralizing antibodies (NA) against VACV in humans, including children. These people lived in BV endemic áreas, but they never had contact with sick cows what suggesting that VACV can be transmited by others routes. Thus, it becomes important to study the possible transmission of VACV by milk and detection and viability of the vírus in artisan cheeses. This thesis was divided in four chapters and the aims were to study the transmission of VACV by milk in murine model and detection and viability of poxvirus in artisan cheeses and milk. In the chapter 1, thirty mice were inoculated orally with 100 µl of milk containing 106 PFU of VACV-GP2 (infected group). Oral swab (OS), faeces, blood and tissues samples were collected and analised. The mice showed not clinical signs. Viral DNA was detected, intermittently, in OS from 2nd d.p.i. to 10th d.p.i. while in blood and faeces samples from 5th d.p.i. to 30th d.p.i. At all times, viral DNA was detected in tissues samples, except stomach and duodenum. In immunohistochemistry test was observed intracytoplasmic immunostaining in all tissues, except heart, tonsil, tongue, stomach and duodenum. NA were detected on the 20th and 30th d.p.i. in 50% of mice infected. In the chapter 2, 12 litres of milk were contaminated with 105 PFU/ml of VACV-GP2 and six contaminated cheeses were produced. The cheeses were subjected to the process maturation during 1,7,14,21,45 and 60 days to 25ºC. Real time PCR and titration VERO cells were performed. The viral quantification and titration reduced during the maturation process, but there was not statistical difference. The chapter 3 refers to the detection of VACV in artisan cheeses commercial from properties with and without BV outbreaks. Fifty nine fresh and matured artisan cheeses were collected and analyzed, of which 10 and 49 artisan cheeses were produced in properties with and without BV outbreaks, respectively. PCR-nested technique was perfomed for detection viral DNA. Positive samples were inoculated in VERO cells or chorioallantoic membrane of embryonated chicken eggs and immunoperoxidase in monolayer cell assay (IPMA) and real time PCR were used to confirm the cytopathic effect, respectively. Viral DNA was detected in 43 of 59 samples. These, 11 samples had viral infectious particles, of which four artisan cheeses produced in properties without BV outbreaks. In the last chapter, six dairy properties in Minas Gerais state with outbreaks vesicular diseases in dairy cows, calves and human were visited. Ten dairy cows with lesions in teats were selected, randomly, in each property. Milk and crust samples were collected, totalizing 60 and 12 samples, respectively. These six properties were detected VACV in samples crusts. The coinfection between PPV and VACV was confirm in four properties by convencional PCR for gene B2L amplification. Milk samples were analyzed only the four positive farms for PPV, totalizing 40 samples. PPV DNA was detected in 12 samples, accounting for 30% of samples tested. These 12, eight samples had coinfection between PPV and VACV, accounting for 66,7%. The results showed that contaminated milk can be source of transmission of VACV in murine model and mice infected do not present clinical signs and can eliminate vírus by faeces and oral mucosa. Moreover, the maturation processo is able to reduce viral load in cheeses, but it does not inactived VACV at least 60 days. The detection de VACV in commercial artisan cheeses samples, mainly produced in properties without BV outbreaks, suggest that VACV can circular silently between properties. Futhermore, milk samples can be contaminated with two or more poxvirus species. Thus, the consumption of contaminated milk and artisan cheeses with VACV can be public health risk. But, more studies are necessary to determine the possible risk of vírus transmission to humans associated to consumption of milk and artisan cheeses contaminated with VACV.

Avaliação da resposta inflamatória no sistema nervoso central causada pelo herpesvírus equino tipo 1 utilizando um modelo murino de neuroinfecção

O herpesvirus equino tipo 1 (EHV-1) é um importante patógeno que causa doença respiratória, abortamento e desordens neurológicas em equinos. O presente estudo foi realizado visando avaliar a resposta inflamatória causada pelo EHV-1 por meio da análise das manifestações clínicas, alterações histopatológicas e resposta imune do hospedeiro no sistema nervoso central (SNC). Camundongos das linhagens BALB/c (H2d), C57BL/6 (H2b) e C3H/HeJ (H2k) foram inoculados por via intranasal com as estirpes brasileiras A4/72 e A9/92 do EHV-1. Nesse estudo, associou-se a histopatologia, a resposta de citocinas pró-inflamatórias no SNC de camundongos das diferentes linhagens e o método de transcrição reversa seguida pela reação em cadeia da polimerase quantitativa em tempo real (RT-qPCR) para investigar a relação entre a infecção pelo EHV-1 e a resposta inflamatória com o desenvolvimento de lesões. As estirpes brasileiras A4/72 e A9/92 do EHV-1 causaram infecção aguda e letal nas diferentes linhagens de camundongos isogênicos. Os sinais clínicos e neurológicos, tais como perda de peso, pelos arrepiados, postura arqueada, apatia, dispneia, desidratação e sialorreia apareceram entre o 2º e 3º dia pós-infecção (dpi). Essas manifestações foram acompanhadas pelo aumento da sensibilidade a estímulos externos, convulsões, recumbência e morte. As alterações histopatológicas consistiram em necrose neuronal, edema, necrose de liquefação, leptomeningite neutrofílica, manguito perivascular, hemorragia focal, inflamação não supurativa, gliose multifocal e infiltração perivascular de células polimorfonucleares e mononucleares. As características e a extensão das lesões variaram entre as linhagens de camundongos. Animais inoculados com a estirpe A4/72 apresentaram lesões histopatológicas de maior grau de severidade quando comparados com aqueles inoculados com a estirpe A9/92. Observou-se aumento da concentração plasmática de TNF-, IL-6, CCL2 e IFN-g nos camundongos infectados pelo EHV-1 no 2º dpi. Detectou-se aumento da concentração plasmática e da expressão de mRNA para TNF-, IL-6 e CCL2 no SNC dos camundongos infectados pelo EHV-1 no 3º dpi; entretanto, não houve aumento da concentração plasmática nem da expressão de mRNA para IFN-g no 3º dpi. Evidenciou-se que a estirpe A4/72 do EHV-1 induz uma resposta imune sistêmica mais efetiva, enquanto que o vírus A9/92 culmina em uma resposta imunológica mais efetiva no SNC. Os camundongos com o fundo genético C57BL/6 e BALB/c mostraram níveis mais altos de expressão de mRNA para TNF-, IL-6 e CCL2, quando comparados com os C3H/HeJ. A gravidade dos sinais clínicos observados em camundongos infectados pode ser correlacionada com o pico dessas citocinas pró-inflamatórias (TNF- e IL-6) e da quimiocina CCL2, que são produzidas logo após a infecção viral por células residentes da glia e/ou infiltrativas no SNC. Esses achados indicam que as diferentes linhagens de camundongos isogênicos são susceptíveis à infecção por estirpes neuropatogênicas do EHV-1; as diferenças no padrão de alterações histopatológicas mostram que elas dependem do hospedeiro infectado, da estirpe viral e da resposta imunológica; e a supressão do interferon (IFN) tipo 1 sugere ser um mecanismo de escape do EHV-1 frente ao sistema imune. A baixa expressão de IL-6, TNF- e da quimiocina CCL2 em camundongos C3H/HeJ se explica pela mutação no gene toll-like receptor 4 (TLR-4) existente nessa linhagem de camundongo. Adicionalmente, os camundongos C3H/HeJ apresentaram lesões histopatológicas mais severas no SNC quando comparados com BALB/c e C57BL/6. Sugere-se que o IFN tipo I e o gene TLR-4 apresentam importante papel na patogênese do EHV-1 bem como proteínas do agente viral responsáveis pela supressão do IFN e partículas virais que sejam reconhecidas pelo TLR-4 podem ser alvos para o desenvolvimento de novas abordagens para o tratamento da doença viral e para a eficiência de imunógenos.

The equine herpesvirus type 1 (EHV-1) is an important pathogen that causes respiratory disease, abortion and neurological disorders in horses. This study was conducted to evaluate the inflammatory response caused by EHV-1 by the analysis of clinical manifestations, histopathological changes and the host immune response in the central nervous system (CNS). BALB/c (H2d), C57BL/6 (H2b) and C3H/HeJ (H2k) mice were inoculated intranasally with Brazilian EHV-1 strains A4/72 and A9/92. In this study, joined histopathology, the response of proinflammatory cytokines in the CNS of mice of different strains and reverse transcription method followed by quantitative polymerase chain reaction in real time (RT-qPCR) to investigate the relationship between infection by EHV-1 and inflammatory response in the development of lesions. Brazilian strains A4/72 and A9/92 EHV-1 caused acute lethal infection in different strains of inbred mice. Clinical and neurological signs such as weight loss, the bristly hair, hunched posture, apathy, dyspnoea, dehydration and salivary hypersecretion appeared between 2nd and 3rd day after infection (dpi). These events were accompanied by increase in the sensitivity to external stimuli, convulsions, recumbency and death. Histopathological changes were neuronal necrosis, edema, liquefaction necrosis, neutrophilic leptomeningitis, perivascular cuff, focal hemorrhage, non-suppurative inflammation, multifocal gliosis and perivascular infiltration of polymorphonuclear and mononuclear cells. The characteristics and the extent of the injuries varied between strains of mice. Animals inoculated with the A4/72 strain showed histopathological lesions of greater severity when compared with those inoculated with the A9/92 strain. There was an increase in plasma concentrations of TNF-, IL-6, CCL2 and IFN-g in mice infected by EHV-1 in 2nd dpi. Plasma concentrations and the expression of mRNA for TNF-, IL-6 and CCL2 in the CNS of mice infected with EHV-1 at 3rd dpi were increased; however, there was no increase in plasma concentration or expression for the mRNA of IFN-g at 3rd dpi. It was evident that the EHV-1 strain A4/72 induces a more effective systemic immune response, whereas the A9/92 virus culminates in a more effective immune response in the CNS. The C57BL/6 and BALB/c mice showed higher levels of mRNA expression for TNF-, IL-6 and CCL2, compared to C3H/HeJ mice. The severity of clinical signs observed in infected mice can be correlated with the peak of these proinflammatory cytokines (TNF- and IL-6) and CCL2 chemokine, which are then produced after viral infection by resident glial cells and/or infiltrative cells in the CNS. These findings indicate that different strains of inbred mice are susceptible to infection neuropathogenic EHV-1 strains; the differences in the pattern of pathological changes show that they depend on the infected host, the EHV-1 strain and the immune response; and the suppression of interferon (IFN) type I suggested to be an escape mechanism for the EHV-1 against the immune system. The low expression of IL-6, TNF- and chemokine CCL2 in C3H/HeJ mice can be explained by a mutation in toll-like receptor 4 (TLR-4) gene existing in this mouse strain. Additionally, C3H/HeJ mice exhibited more severe histopathological lesions in the CNS as compared to BALB/c and C57BL/6. It is suggested that type I IFN and TLR-4 gene have important role in the pathogenesis of EHV-1 and viral agent proteins responsible for the suppression of IFN and the viral particles that are recognized by TLR-4 can be targets for the development of new approaches for the treatment of viral disease and the efficiency of immunogens.

Avaliação da etiopagenia da encefalite causada pelo herpesvírus equino tipo 1 utilizando um modelo murino de neuroinfecção / Evaluation of the encephalitis etiopathogenesis caused by equine herpesvirus type 1 using a mouse model of neuroinfection

O herpesvirus equino tipo 1 (EHV-1) é um importante patógeno que causa doença respiratória, abortamento e desordens neurológicas em equinos. O presente estudo foi realizado visando estabelecer um modelo murino de infecção pelo EHV-1 para investigar a resposta do hospedeiro frente à infecção viral e as alterações neurológicas causadas por esse agente. [...] A gravidade dos sinais observados em camundongos infectados pode ser correlacionada com o pico destas citocinas pró-inflamatórias (TNF-α e IL-6) e da quimiocina CCL2, que são produzidas logo após a infecção viral por células residentes da glia e/ou infiltrativas no SNC. Esses achados indicam que as diferentes linhagens de camundongos isogênicos são susceptíveis a infecção por estirpes neuropatogênicas do EHV-1 e poderiam servir como modelo para o estudo da patogênese e dos mecanismos que contribuem no desenvolvimento da mieloencefalopatia herpética equina

Equid herpesvirus type 1 (EHV-1) is a major pathogen which causes respiratory disease, abortions and neurological disorders in horses. The present study was carried out to establish a murine model of EHV-1 infection and investigate host response against the virus and neurological disorders caused by this pathogen. [...] Mice with the background C57BL/6, which exhibit predominantly Th1-type responses, showed the highest levels of TNF-α, IL-6 and CCL-2 mRNA in the CNS, when compared to BALB/c mice. The severity of signs observed in infected mice could be correlated with the peak of these proinflammatory cytokines (TNF-α and IL-6) and the chemokine CCL2, which are produced early after viral infection by both cells infiltrating into the CNS from the periphery and/or glial resident cells. These findings indicate that several inbred mouse strains are susceptible to neuopathogenic EHV-1 strains and should be useful models for studying the pathogenesis and mechanisms contributing to equine herpes myeloencephalopathy in horses

Avaliação da etiopagenia da encefalite causada pelo herpesvírus equino tipo 1 utilizando um modelo murino de neuroinfecção / Evaluation of the encephalitis etiopathogenesis caused by equine herpesvirus type 1 using a mouse model of neuroinfection

O herpesvirus equino tipo 1 (EHV-1) é um importante patógeno que causa doença respiratória, abortamento e desordens neurológicas em equinos. O presente estudo foi realizado visando estabelecer um modelo murino de infecção pelo EHV-1 para investigar a resposta do hospedeiro frente à infecção viral e as alterações neurológicas causadas por esse agente. [...] A gravidade dos sinais observados em camundongos infectados pode ser correlacionada com o pico destas citocinas pró-inflamatórias (TNF-α e IL-6) e da quimiocina CCL2, que são produzidas logo após a infecção viral por células residentes da glia e/ou infiltrativas no SNC. Esses achados indicam que as diferentes linhagens de camundongos isogênicos são susceptíveis a infecção por estirpes neuropatogênicas do EHV-1 e poderiam servir como modelo para o estudo da patogênese e dos mecanismos que contribuem no desenvolvimento da mieloencefalopatia herpética equina (AU)

Equid herpesvirus type 1 (EHV-1) is a major pathogen which causes respiratory disease, abortions and neurological disorders in horses. The present study was carried out to establish a murine model of EHV-1 infection and investigate host response against the virus and neurological disorders caused by this pathogen. [...] Mice with the background C57BL/6, which exhibit predominantly Th1-type responses, showed the highest levels of TNF-α, IL-6 and CCL-2 mRNA in the CNS, when compared to BALB/c mice. The severity of signs observed in infected mice could be correlated with the peak of these proinflammatory cytokines (TNF-α and IL-6) and the chemokine CCL2, which are produced early after viral infection by both cells infiltrating into the CNS from the periphery and/or glial resident cells. These findings indicate that several inbred mouse strains are susceptible to neuopathogenic EHV-1 strains and should be useful models for studying the pathogenesis and mechanisms contributing to equine herpes myeloencephalopathy in horses (AU)

Development of experimental sporothrichosis in a murine model with yeast and mycelial forms of Sporothrix schenkii

Sporotrichosis is a subcutaneous disease that affects both men and a variety of animals caused by the dimorphic fungus Sporothrix schenckii. The aims of this study were to observe differences in virulence between inocula containing the yeast (Y) or mycelial (M) forms, to compare the reactions induced by the two inocula injected in different anatomical sites, and to verify the possibility of horizontal transmission of the disease by contact between infected and healthy animals. All animals were observed during a period of nine weeks. Mice were inoculated subcutaneously in the paw pads and in the regions of the hip and shoulder joints. Another group of non-inoculated healthy mice was kept in direct contact with mice developing the subcutaneous lesions. Animals of groups Y and M developed lesions due to infections and clinical symptoms very characteristic of sporothrichosis. Lesions were more prominent and with longer duration when occurring in the pads than in any other site of inoculation. Non-inoculated mice remained healthy as it occurred to animals in the control group. The development of typical clinical symptoms for sporothrichosis in all inoculated groups suggests that no difference exists in virulence between the yeast and mycelial forms of the same isolated of S. schenckii. Moreover, the paw pads appear to be the site of choice for the inoculation for experimental sporot

Development of experimental sporothrichosis in a murine model with yeast and mycelial forms of Sporothrix schenkii

Sporotrichosis is a subcutaneous disease that affects both men and a variety of animals caused by the dimorphic fungus Sporothrix schenckii. The aims of this study were to observe differences in virulence between inocula containing the yeast (Y) or mycelial (M) forms, to compare the reactions induced by the two inocula injected in different anatomical sites, and to verify the possibility of horizontal transmission of the disease by contact between infected and healthy animals. All animals were observed during a period of nine weeks. Mice were inoculated subcutaneously in the paw pads and in the regions of the hip and shoulder joints. Another group of non-inoculated healthy mice was kept in direct contact with mice developing the subcutaneous lesions. Animals of groups Y and M developed lesions due to infections and clinical symptoms very characteristic of sporothrichosis. Lesions were more prominent and with longer duration when occurring in the pads than in any other site of inoculation. Non-inoculated mice remained healthy as it occurred to animals in the control group. The development of typical clinical symptoms for sporothrichosis in all inoculated groups suggests that no difference exists in virulence between the yeast and mycelial forms of the same isolated of S. schenckii. Moreover, the paw pads appear to be the site of choice for the inoculation for experimental sporot

Development of experimental sporothrichosis in a murine model with yeast and mycelial forms of Sporothrix schenkii

Sporotrichosis is a subcutaneous disease that affects both men and a variety of animals caused by the dimorphic fungus Sporothrix schenckii. The aims of this study were to observe differences in virulence between inocula containing the yeast (Y) or mycelial (M) forms, to compare the reactions induced by the two inocula injected in different anatomical sites, and to verify the possibility of horizontal transmission of the disease by contact between infected and healthy animals. All animals were observed during a period of nine weeks. Mice were inoculated subcutaneously in the paw pads and in the regions of the hip and shoulder joints. Another group of non-inoculated healthy mice was kept in direct contact with mice developing the subcutaneous lesions. Animals of groups Y and M developed lesions due to infections and clinical symptoms very characteristic of sporothrichosis. Lesions were more prominent and with longer duration when occurring in the pads than in any other site of inoculation. Non-inoculated mice remained healthy as it occurred to animals in the control group. The development of typical clinical symptoms for sporothrichosis in all inoculated groups suggests that no difference exists in virulence between the yeast and mycelial forms of the same isolated of S. schenckii. Moreover, the paw pads appear to be the site of choice for the inoculation for experimental sporot

In vivo studies could not confirm in vitro prophylactic synergism between Moringa essential oil and Lactobacillus reuteri (MT180537)

Abstract Aerobic vaginitis (AV) is a recently defined vaginal recurring infection, which is treated with antibiotics. However, excessive and prolonged use of antibiotics disrupts healthy vaginal microflora and leads to the emergence of antibiotic resistance among pathogens. This situation has directed researchers to explore alternative antimicrobials. The current study describes in vitro and in vivo antimicrobial efficacy and pharmaceutical interactions between plant essential oils (EOs) and five lactic acid bacteria (LABs), isolated from the healthy vagina, against E. faecalis, one of the major etiological agents of AV. In vitro experiments confirm good antimicrobial activity of both plant EOs and cell free supernatant (CFS) from LABs. Based on high antimicrobial efficacy, Moringa essential oil (MO) was selected to determine its nature of interaction with CFS of five LAB strains. Synergism was recorded between MO and CFS of L. reuteri (MT180537). To validate in vitro findings, prophylactic responses of individual and synergistic application of MO and L. reuteri (MT180537) were evaluated in an E. faecalis (MW051601) induced AV murine model. The prophylactic efficacy was evidenced by a reduction in intensity of clinical symptoms, E. faecalis (MW051601) count per vaginal tissue along with a reduction in AV associated changes in histological markers of infection in animals receiving Moringa essential oil and L. reuteri (MT180537) alone or in combination. However, significant synergism between Moringa essential oil and L. reuteri (MT180537) could not be observed. Our data confirms the importance of in vivo experiments in deducing pharmacological interactions.

Resumo Vaginite aeróbica (VA) é uma infecção vaginal recorrente definida recentemente, que é tratada com antibióticos. No entanto, o uso excessivo e prolongado de antibióticos perturba a microflora vaginal saudável e leva ao surgimento de resistência aos antibióticos entre os patógenos. Esta situação levou os pesquisadores a explorar antimicrobianos alternativos. O presente estudo descreve a eficácia antimicrobiana in vitro e in vivo e as interações farmacêuticas entre óleos essenciais vegetais (OE) e cinco bactérias lácticas (BAL), isoladas de vagina sã, contra E. faecalis, um dos principais agentes etiológicos da AV. Os experimentos in vitro confirmam a boa atividade antimicrobiana de ambos os EOs de plantas e sobrenadante livre de células (CFS) de LABs. Com base na alta eficácia antimicrobiana, o óleo essencial de Moringa (MO) foi selecionado para determinar sua natureza de interação com o sobrenadante livre de células (CFS) de cinco cepas de LAB. Sinergismo foi registrado entre MO e CFS de L. reuteri (MT180537). Para validar os resultados in vitro, as respostas profiláticas da aplicação individual e sinérgica de MO e L. reuteri (MT180537) foram avaliadas em um modelo murino AV induzido por E. faecalis (MW051601). A eficácia profilática foi evidenciada por uma redução na intensidade dos sintomas clínicos, contagem de E. faecalis (MW051601) por tecido vaginal, juntamente com uma redução nas alterações associadas a AV nos marcadores histológicos de infecção em animais que receberam óleo essencial de Moringa e L. reuteri (MT180537) sozinho ou em combinação. No entanto, não foi possível observar sinergismo significativo entre o óleo essencial de Moringa e L. reuteri (MT180537). Nossos dados confirmam a importância dos experimentos in vivo na dedução de interações farmacológicas.

In vivo studies could not confirm in vitro prophylactic synergism between Moringa essential oil and Lactobacillus reuteri (MT180537) / Estudos in vivo não puderam confirmar o sinergismo profilático in vitro entre o óleo essencial de Moringa e Lactobacillus reuteri (MT180537)

Aerobic vaginitis (AV) is a recently defined vaginal recurring infection, which is treated with antibiotics. However, excessive and prolonged use of antibiotics disrupts healthy vaginal microflora and leads to the emergence of antibiotic resistance among pathogens. This situation has directed researchers to explore alternative antimicrobials. The current study describes in vitro and in vivo antimicrobial efficacy and pharmaceutical interactions between plant essential oils (EOs) and five lactic acid bacteria (LABs), isolated from the healthy vagina, against E. faecalis, one of the major etiological agents of AV. In vitro experiments confirm good antimicrobial activity of both plant EOs and cell free supernatant (CFS) from LABs. Based on high antimicrobial efficacy, Moringa essential oil (MO) was selected to determine its nature of interaction with CFS of five LAB strains. Synergism was recorded between MO and CFS of L. reuteri (MT180537). To validate in vitro findings, prophylactic responses of individual and synergistic application of MO and L. reuteri (MT180537) were evaluated in an E. faecalis (MW051601) induced AV murine model. The prophylactic efficacy was evidenced by a reduction in intensity of clinical symptoms, E. faecalis (MW051601) count per vaginal tissue along with a reduction in AV associated changes in histological markers of infection in animals receiving Moringa essential oil and L. reuteri (MT180537) alone or in combination. However, significant synergism between Moringa essential oil and L. reuteri (MT180537) could not be observed. Our data confirms the importance of in vivo experiments in deducing pharmacological interactions.

Vaginite aeróbica (VA) é uma infecção vaginal recorrente definida recentemente, que é tratada com antibióticos. No entanto, o uso excessivo e prolongado de antibióticos perturba a microflora vaginal saudável e leva ao surgimento de resistência aos antibióticos entre os patógenos. Esta situação levou os pesquisadores a explorar antimicrobianos alternativos. O presente estudo descreve a eficácia antimicrobiana in vitro e in vivo e as interações farmacêuticas entre óleos essenciais vegetais (OE) e cinco bactérias lácticas (BAL), isoladas de vagina sã, contra E. faecalis, um dos principais agentes etiológicos da AV. Os experimentos in vitro confirmam a boa atividade antimicrobiana de ambos os EOs de plantas e sobrenadante livre de células (CFS) de LABs. Com base na alta eficácia antimicrobiana, o óleo essencial de Moringa (MO) foi selecionado para determinar sua natureza de interação com o sobrenadante livre de células (CFS) de cinco cepas de LAB. Sinergismo foi registrado entre MO e CFS de L. reuteri (MT180537). Para validar os resultados in vitro, as respostas profiláticas da aplicação individual e sinérgica de MO e L. reuteri (MT180537) foram avaliadas em um modelo murino AV induzido por E. faecalis (MW051601). A eficácia profilática foi evidenciada por uma redução na intensidade dos sintomas clínicos, contagem de E. faecalis (MW051601) por tecido vaginal, juntamente com uma redução nas alterações associadas a AV nos marcadores histológicos de infecção em animais que receberam óleo essencial de Moringa e L. reuteri (MT180537) sozinho ou em combinação. No entanto, não foi possível observar sinergismo significativo entre o óleo essencial de Moringa e L. reuteri (MT180537). Nossos dados confirmam a importância dos experimentos in vivo na dedução de interações farmacológicas.