Termografia infravermelha da superfície ocular como indicador de estresse em suínos na fase de creche / Infrared thermography of the ocular surface as stress indicator for piglets postweaning

Desmama é uma fase crítica na vida do suíno devido a separação materna e a introdução de uma dieta seca. A termografia infravermelha medida na região ocular se mostra como um indicador confiável para a condição de estresse pontual de suínos. O objetivo deste estudo foi determinar a relação entre medidas de termografia infravermelha da superfície ocular e de cortisol em situações de estresse em leitões na pós desmama. Foram avaliados 66 leitões, uma vez por semana, durante sete semanas, em dois períodos do dia (7h e 15h) com medidas de temperatura superficial ocular, temperatura superficial do dorso e amostras de saliva para determinação de cortisol salivar. A análise estatística contemplou os efeitos fixos de semana e período do dia e sua interação e correlações de Pearson para relação entre termografia ocular, temperatura superficial e cortisol a 5% de significância. Cortisol salivar não diferiu entre os períodos, mas foi superior nas três primeiras semanas após o desmame (P<0,05). Nas duas primeiras semanas após a desmama o cortisol apresentou correlação alta e positiva (P<0,05) com a temperatura ocular máxima (0,89) e a temperatura superficial do dorso (0,80). As duas temperaturas superficiais apresentaram uma associação moderada positiva (r=0,41; P<0,0001) durante todo o período experimental. Este estudo destaca que a temperatura de superfície ocular obtida por meio da termografia infravermelha pode ser um indicador de temperatura de superfície corporal e estado de bem-estar de leitões em fase de creche, além de ser um método não invasivo e de rápida mensuração. Entretanto, mais pesquisas são necessárias para aprofundar a relação entre temperatura ocular e cortisol durante estresse crônico.(AU)

Weaning is a critical phase in pigs' life due to maternal separation and the introduction of a new diet. Infrared thermography measurement taken in the ocular region appears to be a reliable indicator of the stress condition of the pig. The aim of this study was to evaluate the relationship between ocular surface temperature by infrared thermography and cortisol in piglets post weaning. Sixty-six piglets were evaluated once a week, during 7 weeks, in two periods of the day (7am and 15pm) and ocular surface temperature and dorsal surface temperature were collected using a thermographic camera and a laser surface thermometer, respectively. Saliva was also collected to determine salivary cortisol. Statistical analysis included fixed effects of week and period of the day and their interaction, and relationship between thermography, dorsal surface temperature and cortisol were done by Pearson's correlations with 5% significance level. Salivary cortisol did not differ between periods, but it was higher in the first three weeks after weaning (P<0.05). During the first two weeks after weaning cortisol presented high and positive correlation (P<0.05) between ocular surface temperature (0.89) and dorsal surface temperature (0.80). The two superficial temperatures had a moderate and positive association (r=0.41; P<0.0001) during all experiment. This study highlights that the ocular surface temperature obtained through infrared thermography can be a superficial body temperature indicators, besides being a non-invasive and fast method of measurement. However, more research is needed to deepen the relationship between ocular surface temperature and cortisol during chronic stress.(AU)

Termografia infravermelha da superfície ocular como indicador de estresse em suínos na fase de creche / Infrared thermography of the ocular surface as stress indicator for piglets postweaning

Desmama é uma fase crítica na vida do suíno devido a separação materna e a introdução de uma dieta seca. A termografia infravermelha medida na região ocular se mostra como um indicador confiável para a condição de estresse pontual de suínos. O objetivo deste estudo foi determinar a relação entre medidas de termografia infravermelha da superfície ocular e de cortisol em situações de estresse em leitões na pós desmama. Foram avaliados 66 leitões, uma vez por semana, durante sete semanas, em dois períodos do dia (7h e 15h) com medidas de temperatura superficial ocular, temperatura superficial do dorso e amostras de saliva para determinação de cortisol salivar. A análise estatística contemplou os efeitos fixos de semana e período do dia e sua interação e correlações de Pearson para relação entre termografia ocular, temperatura superficial e cortisol a 5% de significância. Cortisol salivar não diferiu entre os períodos, mas foi superior nas três primeiras semanas após o desmame (P<0,05). Nas duas primeiras semanas após a desmama, o cortisol apresentou correlação alta e positiva (P<0,05) com a temperatura ocular máxima (0,89) e a temperatura superficial do dorso (0,80). As duas temperaturas superficiais apresentaram uma associação moderada positiva (r=0,41; P<0,0001) durante todo o período experimental. Este estudo destaca que a temperatura de superfície ocular obtida por meio da termografia infravermelha pode ser um indicador de temperatura de superfície corporal e estado de bem-estar de leitões em fase de creche, além de ser um método não invasivo e de rápida mensuração. Entretanto, mais pesquisas são necessárias para aprofundar a relação entre temperatura ocular e cortisol durante estresse crônico.(AU)

Weaning is a critical phase in pigs life due to maternal separation and the introduction of a new diet. Infrared thermography measurement taken in the ocular region appears to be a reliable indicator of the stress condition of the pig. The aim of this study was to evaluate the relationship between ocular surface temperature by infrared thermography and cortisol in piglets post weaning. Sixty-six piglets were evaluated once a week, during 7 weeks, in two periods of the day (7am and 15pm) and ocular surface temperature and dorsal surface temperature were collected using a thermographic camera and a laser surface thermometer, respectively. Saliva was also collected to determine salivary cortisol. Statistical analysis included fixed effects of week and period of the day and their interaction, and relationship between thermography, dorsal surface temperature and cortisol were done by Pearsons correlations with 5% significance level. Salivary cortisol did not differ between periods, but it was higher in the first three weeks after weaning (P<0.05). During the first two weeks after weaning cortisol presented high and positive correlation (P<0.05) between ocular surface temperature (0.89) and dorsal surface temperature (0.80). The two superficial temperatures had a moderate and positive association (r=0.41; P<0.0001) during all experiment. This study highlights that the ocular surface temperature obtained through infrared thermography can be a superficial body temperature indicators, besides being a non-invasive and fast method of measurement. However, more research is needed to deepen the relationship between ocular surface temperature and cortisol during chronic stress.(AU)

Diversidade microbiana de cães com úlcera corneana: uma análise metagenômica

Objetivo: Descrever o microbioma bacteriano da superfície ocular de cães com olhos saudáveis e com ceratite ulcerativa através de análise do gene rRNA 16S. Materiais e Métodos: Os animais foram divididos em grupo 1 (G1), constituído por 12 cães com olhos saudáveis e sem doenças oculares pré-existentes; e grupo 2 (G2), composto por 08 indivíduos com úlcera corneana. Foram coletados swabs da superfície ocular para isolamento bacteriano, avaliação morfotintorial e para extração de DNA total. A região V4 do gene rRNA 16S foi amplificada por PCR e submetida a sequenciamento de alto desempenho. Resultados: A análise do rRNA 16S identificou maior quantidade de microrganismos do que a cultura bacteriana. Em olhos saudáveis verificou-se predominância de Pseudomonas (51,98%), Staphylococcus(10,08%) e Acinetobacter (9,84%), e nos olhos ulcerados Pseudomonas (44,21%), Acinetobacter (11,77%) e Bacillus (8,92%). Quinhentos e cinquenta e sete ASVs foram identificados, dentre eles 237 no G1, 108 no G2 e 212 foram encontrados em ambos os grupos. Houve uma maior diversidade bacteriana em G1, embora sem diferença estatística entre os grupos. Conclusão: Descreveu-se, de forma inédita, o microbioma de cães com ceratite ulcerativa comparativamente ao microbioma da superfície ocular hígida. Constatou-se, ainda maior quantidade de espécies bacterianas através de método metagenômico comparativamente aos métodos dependentes de cultura. Salienta-se a falta de homogeneidade das bactérias encontradas nos olhos ulcerados, dificultando a escolha de uma terapêutica empírica

Purpose: Describe the bacterial microbiome from the ocular surface of dogs with healthy eyes na ucerative keratitis through analysis of 16 rRNA. Methods: The animals were divided into group 1 (G1), consisting of 12 dogs with healthy eyes and without pre-existing eye diseases; and group 2 (G2), composed of 08 dogs with corneal ulcer. Ocular surface swabs were collected for bacterial isolation, morphotintorial evaluation and for total DNA extraction. The V4 region of the rRNA 16S gene was amplified by PCR and subjected to high performance sequencing. Results: The analysis of rRNA 16S identified a higher number of microorganisms than bacterial culture. In healthy eyes, pseudomonas (51.98%), Staphylococcus (10.08%) and Acinetobacter (9.84%), and in ulcerated eyes Pseudomonas (44.21%), Acinetobacter (11.77%) and Bacillus (8.92%). Five hundred and fifty-seven ASVs were identified, among them 237 in G1, 108 in G2 and 212 were found in both groups. There was a higher bacterial diversity in G1, although there was no statistical difference between the groups. Conclusions: The microbiome of dogs with ulcerative ceratitis compared to the microbiome of the healthy ocular surface was described in an unprecedented way. It was found, even higher amount of bacterial species through metagenomic method compared to the culture-dependent methods. It is notelike the lack of homogeneity of bacteria found in ulcerated eyes, which difficult the choose of an empirical therapy

Descrição de Parâmetros Oftálmicos e morfofisiológicos em cachorros-do-mato e coelhos

A compreensão dos parâmetros morfométricos e fisiológicos do sistema visual das diferentes espécies é crucial para o desenvolvimento de ferramentas diagnósticas e terapêuticas para animais domésticos e silvestres mantidos sob cuidados humanos, além do auxílio nas ações de conservação específicas para cada espécie. Assim, objetivou-se com o presente trabalho descrever as características anatômicas, histológicas e por tomografia computadorizada (TC) do olho e anexos do cachorro-do-mato (Cerdocyon thous), em comparação ao cão doméstico. A partir das similaridades estruturais entre ambas as espécies, demonstradas através da TC e avaliação macroscópica e histológica do olho e anexos, pode-se sugerir o cão doméstico como modelo de estudos para montagem de ações preventivas e terapêuticas para conservação de canídeos silvestres mantidos sob cuidados humanos. Em contrapartida, o desenvolvimento e padronização de técnicas diagnósticas específicas para exame da superfície ocular permitem a identificação precoce de doenças que afetam o filme lacrimal e requerem uso de modelos animais utilizados em testes de produtos oftálmicos para uso humano. Desta forma, objetivou-se determinar o perfil bioquímico e osmolaridade da lágrima de coelhos, além de descrever o teste de cristalização da lágrima (TCL) para esta espécie. A mediana ± intervalo semi-interquartil para a osmolaridade da lágrima foi de 283,5 ± 7,50 mOsm / L. O tipo I e o grau 1 foram as classificações mais observadas (60% e 50%, respectivamente) para o TCL nas lágrimas dos coelhos. O TCL, osmolaridade e análise bioquímica aqui descritos podem servir de base para pesquisas que utilizam os coelhos como modelo de doenças oftálmicas e no desenvolvimento e realização de testes de produtos utilizados para a saúde ocular.

An understanding of species' morphological and physiological parameters of the visual system is crucial to developing diagnostic and therapeutic strategies for domestic and wild animals kept in human care, besides aid in species-specific conservation actions. Therefore, the aim of this study was to describe anatomical, histological and computed tomography (CT) features of the eye and adnexa in crab-eating fox (Cerdocyon thous), compared to domestic dogs. The structural similarities between the crab-eating fox and domestic dog, demonstrated using CT and macroscopic and histological evaluation of the eye and adnexa may suggest the domestic dog as a study model for the preventive and therapeutic management of wild dogs kept in human care. In contrast, the development and standardization of specific diagnostic methods for ocular surface examination may enable an early diagnosis of diseases affecting the tear film and require the use of animal models used in human eye testing of ophthalmic products. Thus, the aim of the present study was to determine the rabbit tear biochemical profile and osmolarity, and to describe the tear ferning test (TFT) in this species. Median ± semi-interquartile range for tear osmolarity was 283.5 ± 7.50 mOsm/L. Type I and Grade 1 were the most commonly observed (60% and 50%, respectively) ferning classifications in rabbits tears. The TFT assay, osmolarity and biochemistry analysis herein described may serve as a basis for researches using rabbits as ophthalmic disease model and in the development and testing of products used for ocular health.

Avaliação qualitativa da lágrima dos tetrápodes.

A lágrima é um fluido complexo que desempenha papel na nutrição, estabilidade, proteção e remoção de sujidades da superfície ocular. Existem estudos sobre seus componentes e dinâmica para mamíferos, contudo o conhecimento sobre este fluído em outras espécies é limitado. Os processos evolutivos de adaptação e influências ambientais podem ter induzido modificações sobre a lágrima dos vertebrados, e diferenças quali-quantitativas podem ocorrer, mesmo entre animais filogeneticamente próximos. A partir deste cenário, objetivou-se com esta pesquisa avaliar qualitativamente a lágrima dos tetrápodes (répteis, aves e mamíferos), com o emprego de metodologias inéditas para animais selvagens. O perfil proteico e a composição bioquímica da lágrima de répteis, aves e mamíferos, presentes em diferentes nichos ecológicos, foram avaliados comparativamente com o soro sanguíneo e a lágrima de humanos (fluidos que possuem parâmetros já estabelecidos), e foi obtido que a lágrima dos animais continham os mesmos compostos presentes na lágrima do humano e do soro sanguíneo, em diferentes proporções. Atribuiu-se que a proximidade filogenética, dieta e o ambiente, este último significativamente, influenciam sobre os componentes da lágrima. A partir destes resultados, algumas espécies foram selecionadas, por suas notórias diferenças no perfil eletroforético, para a investigação proteômica da lágrima, sendo elas o gaviões-carijó (Rupornis magnirostris), jacarés (Caiman latirostris) e tartarugas-marinhas (Caretta caretta). As proteínas encontradas, tal como suas características ontogênicas, demonstraram que a composição da lágrima pode ser derivada de condições ambientais e estilos de vida dos animais, mostrando-se apta a complexa adaptação das espécies. Ademais, foi realizada a descrição das glicoproteínas presentes na lágrima do gavião e jacaré, onde os resultados mostram maior frequência deste composto para aves, e que possivelmente as glicoproteínas possibilitam maior diversidade ao fluido lacrimal. Mesmo perante a processos metabólicos mais primitivos, percebe-se que são mantidos diferentes mecanismos de estabilização da lágrima. Desta forma, o fluído lacrimal perpassa o que é descrito para os mamíferos e trata-se de um fluido com alto poder de adaptação com a função de manter a homeostase da superfície ocular e consequente função visual.

Tear is a complex fluid involved in nourishment, stability, protection and removal of foreign bodies from ocular surface. There are studies regarding its components and dynamics for mammalian species; however, the knowledge about this fluid in other species is limited. The evolutive process for adaptation and environmental influences may inducted changes on vertebrate tears. In addition, qualitative and quantitative differences can occur, even in animals phylogenetically related. Therefore, the objective of this research was to perform qualitative- quantitative evaluation of tetrapod tears (reptiles, birds and mammals), using unpublished methodologies for wild animals. The protein profile and biochemical composition of the tear of reptiles, birds and mammals, present in different ecological niches, were evaluated comparatively with blood serum and human tear, and it was obtained that the tear of the animals contained the same compounds present in the tear human and blood serum in different proportions. Together with this finding, it was attributed that the phylogenetic proximity, diet and environment, the latter in a significant way, influence on the tear components. From these results, some species were selected because of their notorious differences in the electrophoretic profile for the proteomic investigation of the tear, as hawk (Rupornis magnirostris), caiman (Caiman latirostris) and sea turtle (Caretta caretta). In addition, the glycoproteins present in the tear of the hawk and alligator were described, where the results show a higher frequency of this compound for birds, and that possibly the glycoproteins allow greater diversity to the lacrimal fluid. The proteins found, as well as their ontogenic characteristics, have demonstrated that the tear composition can be derived from the environmental conditions and lifestyles of the animals, being able to adapt to the complex adaptation of the species. Besides, even before the most primitive metabolic processes, there is an maintenance in the stability mechanisms of tears. So, the tear fluid pervades what is described for mammals and is a fluid with high adaptation power. It has roles in maintaining ocular surface homeostasis and consequently visual function.

Morfologia ultraestrutural de células caliciformes da conjuntiva palpebral de cães

Objetivo Descrever a morfologia de células caliciformes da conjuntiva palpebral de cães por microscopia eletrônica de transmissão e varredura. Animais estudados Dez cães (20 olhos), machos e fêmeas, de diferentes raças, sem alterações oculares. Procedimentos Dez amostras da conjuntiva palpebral de cães foram coletadas e processadas para as microscopias eletrônicas de varredura (MEV) e transmissão (MET) e outras10 amostras foram coradas com PAS e Alcian blue, pH 2,5 e analisadas por microscopia de luz. Resultados Através da MEV foram observados vários pontos de extrusão de muco na porção apical livre das células caliciformes, além de ampla distribuição de folículos linfoides e de macrófagos entremeando microvilosidades das células do epitélio palpebral. Por MET foram visualizadas células caliciformes normais, predominantemente ovaladas com citoplasma amplo de diferentes diâmetros, podendo-se observar grandes vesículas com grânulos heterogêneos e bordas livres sugerindo liberação de conteúdo mucoso na superfície conjuntival. Foram observadas, ainda, organelas citoplasmáticas como o aparelho de Golgi, retículo endoplasmático e uma alta concentração de mitocôndrias. Todas as amostras foram positivas para PAS e Alcian blue. Conclusão Este estudo descreveu as células caliciformes da conjuntiva palpebral de cães saudáveis através de técnicas de microscopia eletrônica de forma pioneira. Estes resultados poderão ser utilizados para descrição comparativa com animais que cursem com alterações oculares, bem como com outras espécies.

Objective To describe the morphology of goblet cells of the palpebral conjunctiva of dogs by transmission and scanning electron microscopy. Studied animals Ten dogs (20 eyes), male and female, from different breeds, without ocular alterations. Procedures Ten samples of the palpebral conjunctiva of dogs were collected and processed for scanning electron microscopy (SEM) and transmission (MET) and another 10 samples were stained with PAS and Alcian blue, pH 2.5 and analyzed by light microscopy. Results Through the SEM, several mucus extrusion points were observed in the free apical portion of the goblet cells, as well as a wide distribution of lymphoid follicles and macrophages interspersed with microvilli of the palpebral epithelial cells. By MET, normal goblet cells were seen, predominantly oval with broad cytoplasm of different diameters, being possible to observe large vesicles with heterogeneous granules and free borders suggesting the release of mucous contents on the conjunctival surface. Cytoplasmic organelles such as the Golgi apparatus, endoplasmic reticulum and a high concentration of mitochondria were also observed. All samples were positive for PAS and Alcian blue. Conclusion This study described the goblet cells of the palpebral conjunctiva of healthy dogs using electron microscopy techniques in a pioneering way. These results may be used for comparative description of animals with ocular changes as well as other species.

ORGANIZAÇÃO ESTRUTURAL DA CROMATINA EM CÉLULAS EPITELIAIS DA CONJUNTIVA PALPEBRAL DE CÃES COM CERATOCONJUNTIVITE SECA, ANTES E APÓS TRATAMENTO LOCAL COM CICLOSPORINA A

Alterações na organização estrutural da cromatina estão sendo associadas ao desenvolvimento e à fisiopatologia de diversas afecções oftálmicas. Com o advento da epigenética, emergiu o conceito de que parte dessas alterações pode ser revertida por fármacos. Visando-se avaliar a organização estrutural da cromatina em células da conjuntiva palpebral de cães com ceratoconjuntivite seca (CCS), antes e após tratamento com pomada de ciclosporina A (CsA) 0,2%, a presente pesquisa foi dividida em duas fases. Na fase I estudaram-se núcleos de células epiteliais e de linfócitos colhidos da conjuntiva palpebral de cães com e sem CCS. Foram incluídos na pesquisa 64 olhos de 32 cães domésticos, distribuídos em dois grupos: grupo controle, composto por 16 cães saudáveis (32 olhos, valores de Schirmer 15 mm/min); grupo CCS, abrangendo 16 cães (32 olhos, valores de Schirmer 10 mm/min) com CCS bilateral nunca antes tratados com imunomoduladores, sem oftalmopatias concorrentes e livres de alterações sistêmicas. As células foram colhidas por citologia esfoliativa e coradas pela reação de Feulgen. Os seguintes parâmetros foram estudados por vídeo-análise de imagens: área nuclear, perímetro nuclear, fator de circularidade relativa do núcleo (RNRF), densidade óptica integrada (IOD = conteúdo de DNA), densidade óptica (OD = compactação de cromatina); e desvio padrão de valores densitométricos (SDtd = textura de cromatina). Os resultados mostraram que a CCS enseja alterações nos parâmetros nucleares das células epiteliais e dos linfócitos da conjuntiva palpebral. Comparativamente aos controles, as células epiteliais foram mais afetadas pela CCS (alterações em área, perímetro, RNRF, IOD, e OD) do que os linfócitos (alterações em OD, apenas). Tanto as células epiteliais quanto os linfócitos do grupo CCS apresentaram cromatina mais descompactada do que as células do grupo controle. Padrões aberrantes de cromatina, como a snake-like-chromatin, comumente vistos em pacientes humanos, não foram detectados. Na fase II estudou-se se as alterações nucleares detectadas na fase I regrediriam após tratamento local com pomada de CsA 0,2% a intervalos regulares de 12 horas e lacrimomimético a base de ácido poliacrílico 0,2%, instilado localmente a cada 4 horas. O mesmo grupo controle composto por cães hígidos foi adotado e as células também foram colhidas por citologia esfoliativa aos 30 e 60 dias de tratamento. As preparações citológicas foram coradas pela reação de Feulgen ou submetidas ao bandamento AgNOR. Estudaram-se parâmetros de video-análise de imagens relacionados com a funcionalidade da cromatina, notadamente a fração de área nuclear coberta pela cromatina mais condensada (Sc%), a taxa média de absorbância (AAR), e a entropia. Após bandamento AgNOR, estudaram-se os tamanhos das regiões organizadores de nucléolo e as frações de áreas nucleares ocupadas por elas. Os resultados mostraram que o tratamento com CsA e lacrimomimético (30/60 dias) enseja remodelação cromatínica e desfaz parcialmente as alterações associadas à CCS.

Changes in the structural organization of chromatin are being associated with the development and pathophysiology of various ophthalmic conditions. With the advent of epigenetics, the concept emerged that part of these alterations can be reversed by drugs. To evaluate the structural organization of chromatin in palpebral conjunctival cells of dogs with keratoconjunctivitissicca (KCS), before and after treatment with 0.2% cyclosporine A (CsA) ophthalmic ointment, the present research was divided into two phases. In stage I, epithelial cells and lymphocyte from the palpebral conjunctiva of dogs with and without KCS were studied. The study included 64 eyes of 32 domestic dogs, distributed into two groups: control group, composed of 16 healthy dogs (32 eyes, Schirmer values 15 mm / min); KCS group, formed of 16 dogs (32 eyes, Schirmer values 10 mm / min) with bilateral CCS never previously treated with immunomodulatory drugs, and without concurrent ophthalmic or systemic disorders. Cells were collected by brush cytology and stained by the Feulgen reaction. The following parameters were studied by video image analysis: nuclear area, nuclear perimeter, relative nuclear roundness factor (RNRF), integrated optical density (IOD = DNA content), optical density (OD = chromatin compaction). The results showed that KCS causes alterations in the nuclear parameters of the epithelial cells and the lymphocytes from the palpebral conjunctiva.Compared with the control, the epithelial cells were more affected by the disease (alterations in area, perimeter, RNRF, IOD, and OD) than lymphocytes (changes in OD only.) Both epithelial cells and lymphocytes from the KCS group showed more decompressed chromatin than cells from the control group. "Snake-like-chromatin commonly seen in human patients was not detected. In phase II it was studied whether the nuclear detected in stage I, regress after treatment with 0.2% CsA at regular intervals of 12 h and 0.2% polyacrylic acid-based artificial tears at regular intervals of 4h. The same control group composed of healthy dogs was adopted and cells were collected by brush cytology after 30 and 60 days of treatment. Cytological preparations were stained by the Feulgen reaction or submitted to the AgNOR banding. We studied video image analysis parameters related to the functionality of chromatin, notably the fraction of nuclear area covered by more condensed chromatin (Sc%), the average absorption ratio (AAR), and entropy. After AgNOR banding, the samples were studied for the sizes of the nucleolar organizer regions and the fractions of nuclear areas occupied by them. Results show that treatment with CsA and lacrimomimetic(30/60 days) leads to chromatin remodeling and partially reverses the chromatin changes elicited by KCS.

Descrição da microbiota fungica conjuntival de equinos saudáveis do Distrito Fedral - DF

Os organismos fúngicos de importância oftálmica são classificados em fungos filamentosos e leveduras. Esses fungos estão envolvidos na invasão e infecção da córnea de equinos, e são os mesmos presentes na superfície ocular saudável, que varia com a região geográfica e estação climática. O objetivo desse estudo é identificar e descrever a incidência de fungos na conjuntiva ocular de equinos saudáveis do Distrito Federal, e correlacionar com a estação do ano, gênero de animal e meios de cultura utilizados, bem como avaliar a relação entre o meio de cultura utilizado e o crescimento de isolados fúngicos. Foram utilizados cinquenta cavalos (100 olhos), machos e fêmeas, com idade entre sete e 31 anos, provenientes do Regimento de Polícia Montada do Distrito Federal, Brasil. Swabs do fórnix conjuntival foram coletados e transportados em meio Stuart e solução salina, para semeadura em Ágar Sabouraud e Ágar Mycosel. O efeito da estação climática, gênero e meio de cultura, na frequência de fungos isolados foi avaliada. Culturas positivas foram obtidas em 220 amostras de um total de 300. Os cultivos apresentaram 33,67% de crescimento de bactérias e 55,97% de crescimento fúngico. O Aspergillus spp. foi o gênero mais incidente, encontrado em 26,33% das amostras, mais presente no verão, seguido pelo Cladosporium spp. 9%, Rhodotorula spp. 7,33%, Candida spp. 2,33%, Malassezia spp. 5,66%, Penicillium spp. 2,33%, Scopulariopsis spp. 2%, Fusarium spp. 0,66% e Exophiola jeanselmei 0,33%. Os fungos filamentosos foram mais prevalentes que as leveduras. A maior frequência foi do gênero Aspergillus spp. no verão, seguido do Cladosporium e Rhodotorula, caracterizados como fungos ambientais e agentes de infecções oportunistas. Bactérias, Aspergillus spp e Cladosporium spp. tiveram maior crescimento no meio Sabouraud, devido a seletividade do meio Mycosel.

Fungal organisms of ophthalmic importance are classified as filamentous fungi and yeasts. These fungi are involved in the invasion and infection of the cornea of horses, and are the same present on the healthy ocular surface, which varies with geographic region and climatic season. The aim of this study is to identify and describe the incidence of fungi in the ocular conjunctiva of healthy horses of the Federal District, and to correlate with the season of the year, animal genus and culture media used, as well as to evaluate the relationship between the culture medium used and the growth of fungal isolates. Fifty horses (100 eyes), males and females, aged between seven and 31 years old, coming from the Mounted Police Regiment of the Federal District, Brazil. Swabs of conjunctival fornix were collected and transported in Stuart medium and saline solution for sowing in Sabouraud Agar and Mycosel Agar. The effect of climatic season, genus and culture medium, on the frequency of isolated fungi was evaluated. Positive cultures were obtained in 220 samples of a total of 300. The cultures had 33.67% of bacterial growth and 55.97% of fungal growth. Aspergillus spp. was the most incident genus, found in 26.33% of the samples, most present in the summer, followed by Cladosporium spp. 9%, Rhodotorula spp. 7.33%, Candida spp. 2.33%, Malassezia spp. 5.66%, Penicillium spp. 2.33%, Scopulariopsis spp. 2%, Fusarium spp. 0.66% and Exophiola jeanselmei 0.33%. Filamentous fungi were more prevalent than yeasts. The highest frequency was of the genus Aspergillus spp. in the summer, followed by Cladosporium and Rhodotorula, characterized as environmental fungi and agents of opportunistic infections. Bacteria, Aspergillus spp and Cladosporium spp. had greater growth in the Sabouraud medium, due to the selectivity of Mycosel medium.

EFEITOS DA SERICINA DO BICHO DA SEDA (Bombyx mori) SOBRE OS FENÓTIPOS NUCLEARES E NA REPARACAO DA LESAO ULCERATIVA EM CÉLULAS DO EPITÉLIO CORNEAL DE RATOS DIABÉTICOS

A córnea de pacientes diabéticos pode desenvolver defeitos epiteliais que comprometem a visão e causam dor. Os efeitos do diabetes sobre algumas características das células epiteliais corneais, notadamente os fenótipos nucleares, são ainda desconhecidos. A sericina é um polímero extraído do casulo do bicho-da-seda, que, aparentemente, promove reparação corneal em ratos. Com esta pesquisa estudou-se a produção lacrimal, o limiar de sensibilidade corneal (Cochet-Bonnet) e a pressão dos olhos de ratos com três semanas de diabetes induzido por aloxana (glicemia sérica 400 mg/dL). Os efeitos da instilação diária (a cada 6 horas, por quatro dias) de sericina 10% sobre a cinética de reepitelização de córneas cauterizadas (com álcali), em ratos diabéticos, foram estudados e comparados aos efeitos de placebo (solução salina balanceada) e de soro equino (uma opção terapêutica vigente). A pesquisa traz, também, informações sobre o tamanho dos núcleos (área e perímetro), o estado de compactação e a textura da cromatina, o conteúdo de DNA (ploidia) e a distribuição das regiões organizadoras de nucléolos impregnadas por íons prata (AgNORs) em células epiteliais corneais de ratos diabéticos (hiperglicêmicos) e de não diabéticos (normoglicêmicos). Os núcleos das células que reepitelizaram as córneas cauterizadas, após tratamento com sericina 10%, solução salina balanceada ou soro, foram avaliados. Os resultados mostraram que os olhos dos ratos diabéticos diferiram dos de não diabéticos quanto ao limiar de sensibilidade corneal ao toque (2,07 ± 0,52 cm nas córneas de diabéticos vs. 4,00 ± 0,56 cm nas de não diabéticos; p = 0,01). Relativamente à cinética de reepitelização, os tempos de fechamento das úlceras foram de 30 horas para as córneas tratadas com sericina 10% ou com soro e de 36 horas para as que receberam solução salina balanceada. Os núcleos das células epiteliais das córneas dos diabéticos, exceto em amostras que receberam sericina 10%, apresentaram cromatina compactada, em comparação aos núcleos das células do epitélio corneal dos ratos não diabéticos. Núcleos com tendência à tetraploidia só não foram observados no epitélio corneal dos ratos não diabéticos. Todos os epitélios apresentaram frequências reduzidas de núcleos sub-diploides. As córneas dos ratos diabéticos apresentaram núcleos com frações reduzidas de áreas AgNOR positivas. Em conclusão, o diabetes alterou a supra-organização cromatínica e a ploidia em células epiteliais corneais em ratos diabéticos aloxênicos com três semanas de hiperglicemia. A sericina 10%, aparentemente, reduz ou inibe estímulos que alteram a funcionalidade da cromatina das células epiteliais corneais em ratos diabéticos. Ademais, mostrou-se tão efetiva quanto o soro na promoção da reepitelização corneal

The cornea of diabetic patients can develop epithelial defects that promote vision deficit and pain. The effects of diabetes/hyperglycemia on some characteristics of corneal epithelial cells, notably the nuclear phenotypes are still unknown. The sericin is a polymer extracted from the cocoons of the silkworm, which seems to promote reepithelization of burned cornea in rats. In this study, tear production, corneal touch threshold (Cochet-Bonnet) and intraocular pressure of alloxan-induced diabetes rats with three weeks of hyperglycemia (serum glucose 400 mg/dL) were studied. In addition, the effects of daily instillation (every 6 hours for 4 days) of 10% sericin over re-epithelization kinetics of burned corneas from diabetic were also studied and compared to the effects of placebo (balanced salt solution) and horse serum (an actual therapeutic option). The research also brings information about the size of the nuclei (area and perimeter), the state of compactation and the texture of chromatin, the DNA content (ploidy) and the distribution of silver-stained nucleolar organizing regions (AgNORs) of epithelial cells in corneas of diabetic (hyperglycemic) and non-diabetic rats (normoglycemic). Nuclear phenotypes of cells that participated of the re-epithelization of the burned corneas after treatment with 10%sericin, balanced salt solution or serum were studied. Results showed that the eyes of diabetic rats did not differ from the ones from non-diabetic ones, just like the tear production and intraocular pressure, but differences regarding the corneal touch threshold (2.07 ± 0.52 cm in the corneas of diabetic vs. 4.00 ± 0.56 cm in non-diabetics; p = 0.01) were found. Regarding re-epithelization kinetics, the healing time of the burns were 30 hours for corneas treated with 10% sericin or serum and 36 hours in those receiving 0balanced salt solution. The nuclei of epithelial cells in the corneas of diabetic patients, except in samples that received 10% sericin, showed more condensed chromatin than the cell nuclei from the corneal epithelium of non-diabetic rats. Nuclei with trend to the tetraploidy were not observed only in the corneal epithelium of non-diabetic rats. All epithelia showed reduced frequency of sub-diploid nuclei. The corneas of the diabetic rats showed nuclei with reduced fractions of positive AgNOR areas. As conclusion, diabetes altered chromatin supra-organization and ploidy levels in corneal epithelial cells of rats with 3 weeks of hyperglycemia. Instillation of 10% sericin seems reduce or block stimulus that affect DNA/chromatin during diabetes, while it promotes re-epithelization

Avaliação da cristalização da lágrima de cães: métodos de colheita e comparação entre duas escalas de classificação

O filme lacrimal pré-corneano (FLPC) é de importância vital para manutenção da saúde da superfície ocular, entretanto, trata-se de uma estrutura complexa e de baixo volume o que por vezes dificulta a sua avaliação, portanto, é importante entender de forma completa a fisiologia do filme lacrimal. Testes para a avaliação quantitativa do FLPC são utilizados de forma rotineira em Medicina Veterinária, contudo, testes que avaliem a qualidade da lágrima são desafiadores, por possuírem técnicas complexas ou que demandem alto custo de aparelhagem. O teste de cristalização da lágrima apesar de ser um teste classificado como laboratorial, possui aplicabilidade na rotina clínica, e pode trazer informações indiretas importantes em relação a composição bioquímica bruta do FLPC. Diversos estudos atestam a sua aplicabilidade e reprodutibilidade, o teste consiste em deixar uma gota de lágrima secar sobre uma lâmina de microscopia e avaliar o padrão de cristalização assumido pela amostra, padrão similar a folhas de samambaia. A classificação dos padrões de cristalização se dá de acordo com a densidade das formações dos cristais, e é comumente realizada a partir da escala proposta por Rolando, todavia, mais recentemente uma nova escala, a escala de Masmali, Murphy e Purslow, foi desenvolvida a fim de melhorar sua aplicação na rotina clínica. Não há um consenso na literatura em relação a metologia a ser empregada para a obtenção de lágrima, e não existem relatos na literatura em relação ao uso do TC em cães. Foram avaliadas três metodologias de colheita de lágrima (schirmer, microcapilar e micropipeta) e aplicada duas escalas de classificação da cristalização em cães hígidos. A colheita de lágrima para o TC demonstrou-se possível e é factível a utilização de ambas escalas na classificação do fenômeno de cristalização em cães.

The pre-corneal tear film (PCTF) is vitally important for the ocular surface health maintenance. However, this is a complex structure and of low volume that, sometimes, makes it difficult to evaluate. Therefore, the complete understand of the tear film physiology is important. Tests for quantitative assessment of PCTF are routinelly used in veterinary medicine; however, tests for qualitative evaluation of tear are challenging, due to the complex techniques and the expensive equipments requirements. Despite the tear ferning test is considered a laboratorial technique, the results demonstrate that its applicability in the clinical routine can indirectly suggest important informations about the gross biochemistry composition of PCTF. Several studies describe its applicability and reproductibility, that consist in put a tear drop over a microscope slide and wait for drying to evaluate the ferning pattern assumed by the sample, similar to fern leaves. The classification of ferning pattern is performed according to the density of cristal formation, and is commonly performed by the grading proposed by Rolando. Recently, a new ferning grading was proposed by Masmali, Murphy and Puslow in order to improve the applicability of the test in the clinical routine. There is no consensus in the literature regarding the methodology for tear sampling, and there are no reports in the literature of ferning test use in dogs. Three tear sampling methodologies were assessed (schirmer, microcapillary tubes and micro-pipette) and applied to two ferning grading in healthy dogs. The tear sampling for ferning test was possible and the use of both ferning grading was feasible in dogs.

VALORES DA PRODUÇÃO LACRIMAL, DA PRESSÃO INTRAOCULAR E DA MICROBIOTA DA SUPERFÍCIE OCULAR DE BOVINOS DA RAÇA GIR LEITEIRO EM BIOMA DE CERRADO

O objetivo deste estudo foi estabelecer valores de referência para testes diagnósticos oftalmológicos e a microbiologia ocular em bovinos adultos em lactação da raça gir leiteiro (Bos taurus indicus) em bioma de cerrado. Um total de 48 animais foi utilizado para mensurar a produção lacrimal através do teste lacrimal de Schirmer (STT1), 33 para determinar a pressão intraocular utilizando a tonometria por aplanação e 31 para amostras e cultivo microbiológico da superfície ocular e teste de sensibilidade a antimicrobianos nas amostras positivas. Os resultados para produção de lágrima e pressão intraocular foram comparados entre diferentes grupos etários. A média e o desvio padrão do STT1 e pressão intraocular foram 21,47±4,61 mm/min, 23,81±3,61 mmHg, respectivamente. Os resultados de crescimento bacteriano das amostras oculares demostraram o gênero Staphylococcus sp. predominante em 73% do total, com a presença também dos gêneros Enterobacter sp. e Enterococcus sp. As amostras positivas resistentes para mais de um antimicrobiano somaram 22,2%, e a Tilmicosina e Estreptomicina apresentaram resistência bacteriana em mais de 25% das amostras. Os antibióticos com total eficácia terapêutica foram Amoxicilina/Ác., Clavulanico, Ceftiofur e Flofenicol. Os achados desse estudo podem ser utilizados para pesquisa ou fins terapêuticos.

The aim of this study was to estabilish reference values for selected ophtalmic diagnostic tests in Gir leiteiro lactating breeders (Bos taurus indicus) on cerrado byoma. A total of 48 animals were used to evaluate tear production using Schirmer tear test (STT1), 33 animals to determine intraocular pressure using apllanation tonometry and 31 animals for bacterial samples of the ocular surface, and antibiotics suceptibility tests were. Different age groups were compared in STT1 and intraocular pressure. Mean and standart deviation for STT1 and intraocular pressure were 21,47±4,61 mm/min, 23,81±3,61 mmHg, respectively. In positive bacterial culture Staphylococcus sp. was predominant (73%), Enterobacter sp and Enterococcus sp. were also isolated. Positive cultures were 22,2% resistant to 2 or more antibiotic, tilmicosin and estreptomicin had bacterial resistence on more than 25% of samples. Amoxicilyn/Clavulanic acid, Ceftiofur and Florfenicol were 100% efficient. The reported data can be used for therapeutic or experimental purposes.

REGULAÇÃO MICROAMBIENTAL DE CÉLULAS EPITELIAIS LÍMBICAS CORNEAIS DE COELHO EXPANDIDAS SOBRE MEMBRANA AMNIÓTICA HUMANA DESEPITELIZADA: ÊNFASE PARA A ORGANIZAÇÃO SUPRAMOLECULAR DOS MAIORES BIOPOLÍMEROS EXTRACELULARES

Por objetivos, estudaram-se procedimentos em cultivo celular e se eles alteram a supraorganização da matriz extracelular (MEC) amniótica e da límbica, considerando-se propriedades anisotrópicas dos biopolímeros em comum, isto é, colágenos fibrilares e proteoglicanos. Explantes límbicos de coelhos foram cultivados sobre fragmentos de membrana amniótica (MA) desepitelizada humana, por dois, sete e 15 dias. Fragmentos não cultivados de MA e de limbo foram usados como controles. Avaliaram-se parâmetros de birrefringência em fibras colágenas e de absorção e de dicroísmo linear (LD) em proteoglicanos, da MEC amniótica e da límbica. Todas as análises foram conduzidas em microscópio óptico munido de luz polarizada, filtros monocromadores com diferentes comprimentos de onda e vídeo-câmera. Empregaram-se procedimentos em análise digital de imagens (software Image J®, NIH, USA). Parâmetros de birrefringência revelaram que os graus de paralelismo das fibras colágenas amnióticas foram de 1,02 nos controles, 1,17 nas amostras cultivadas por dois dias, 1,26 nas amostras cultivadas por sete dias e de 1,17 nas amostras cultivadas por 15 dias. Relativamente às fibras límbicas, foram de 1,33, 1,17, 1,25 e 1,44. Os contrastes dos brilhos das birrefringências das fibras amnióticas foram de 2,0 nos controles, 13,25 nas amostras cultivadas por dois dias, 19,26 nas amostras cultivadas por sete dias e de 13,23 nas amostras cultivadas por 15 dias. Relativamente às fibras límbicas, foram de 23,01, 13,39, 19,90 e 30,31. Cores de interferência causadas por dispersão anômala de birrefringência foram detectadas. Procedimentos em cultivo celular alteraram parâmetros absorciométricos relacionados à supraorganização dos proteoglicanos da MEC amniótica e da límbica. As MAs de todas as amostras, exceto as cultivadas por 15 dias, apresentaram-se com valores negativos de DL. Os valores de DL dos limbos de todas as amostras, exceto as cultivadas por dois dias, oscilaram entre números negativos e positivos.

The goal of this study was to evaluate whether procedures on cell culture alter the supraorganization of amniotic and limbal extracellular matrix (ECM). Anisotropic properties of fibrillar collagen and proteoglycans were studied, since they correspond to major extracellular biopolymers. Rabbit limbal explants were cultured on denuded human amniotic membrane (AM) for two, seven, and 15 days. Uncultured AM and limbus were used as controls. Birefringence parameters related to the supraorganization of collagen fibers, and spectral absorption and linear dichroism (LD) related to the supraorganization of proteoglycans were evaluated. All samples were evaluated on microscope equipped with polarized light, monochromatic filters with varying wavelengths, and digital video camera. Birefringence, absorbances and LD were quantified by using image analyses software (Image J®, NIH, USA). Studies on birefringence showed that parallelism degrees of amniotic collagen fibers were of 1.02 for the control group, 1.17 for the two days culture, 1.26 for the seven days culture, and 1.17 for the 15 days culture. In relation to limbal collagen fibers, parallelism degrees were of 1.33, 1.17, 1.25, and 1.44. Birefringence brightness contrasts of amniotic collagen fibers were of 2.0 for the control group, 13.25 for the two days culture, 19.26 for the seven days culture, and 13.23 for the 15 days culture. In relation to limbal collagen fibers, birefringence brightnesses were of 23.01, 13.39, 19.90, and 30.31. Interference colors due to anomalous birefringence dispersion were observed. Procedures on cell culture induced alterations in absorbance values related to proteoglycans from amniotic and limbal ECM. In all samples, except on those cultured for 15 days, the amniotic ECM showed negative DL values. The DL of limbal ECM varied between negative and positive values for all, except on two days culture.