Congelação do sêmen de pequenos ruminantes sem uso de gema de ovo utilizando bases vegetais em substituição à gema de ovo / Small ruminants sperm freezing without egg yolk using vegetable bases instead of egg yolk

Na conservação seminal é necessária a utilização de diluentes que forneçam nutrientes e protejam as células espermáticas contra o choque térmico. Os aditivos de origem animal, como a gema de ovo e o leite, amplamente empregados na preservação do sêmen, representam um risco potencial de contaminação. Com o intuito de reduzir esses impactos quanto ao uso de substâncias de origem animal, esta revisão teve como objetivo abordar os principais pontos acerca da utilização de diluentes para congelação do sêmen de pequenos ruminantes livres de gema de ovo, um diluente constituído 100% por produtos de origem vegetal.(AU)

For semen conservation, it is necessary to use extenders that provide nutrients and protect the spermatozoa against thermal shock. Animal source additives, such as egg yolk and milk, widely used in semen preservation, represent a potential contamination risk. To reduce impacts related to the use of animal origin substances, this review aimed to address the main points about the use of extenders for small ruminant sperm freezing free of egg yolk, an extender composed by 100% vegetable origin products.(AU)

Congelação do sêmen de pequenos ruminantes sem uso de gema de ovo utilizando bases vegetais em substituição à gema de ovo / Small ruminant’s sperm freezing without egg yolk using vegetable bases instead of egg yolk

Na conservação seminal é necessária a utilização de diluentes que forneçam nutrientes e protejam as células espermáticas contra o choque térmico. Os aditivos de origem animal, como a gema de ovo e o leite, amplamente empregados na preservação do sêmen, representam um risco potencial de contaminação. Com o intuito de reduzir esses impactos quanto ao uso de substâncias de origem animal, esta revisão teve como objetivo abordar os principais pontos acerca da utilização de diluentes para congelação do sêmen de pequenos ruminantes livres de gema de ovo, um diluente constituído 100% por produtos de origem vegetal.

For semen conservation, it is necessary to use extenders that provide nutrients and protect the spermatozoa against thermal shock. Animal source additives, such as egg yolk and milk, widely used in semen preservation, represent a potential contamination risk. To reduce impacts related to the use of animal origin substances, this review aimed to address the main points about the use of extenders for small ruminant sperm freezing free of egg yolk, an extender composed by 100% vegetable origin products.

Comparative evaluation between the extenders TES-TRIS and ACP-112® and the association of Sálva Marajó oil (Lippia origanoides) in the quality of cryopreserved buffalo sperm / Avaliação comparativa entre os diluidores TES-TRIS e ACP-112® e a associação com o óleo da Sálva do Marajó (Lippia origanoides) na qualidade do sêmen bubalino criopreservado

For artificial insemination, it is essential to use frozen semen, however the freezing process causes deleterious changes to the structure and integrity of sperm membranes that compromise the function of sperm. To avoid this cellular damage, extenders and suitable substrates must be used to recover the highest possible number of viable cells post-thaw. To this end, in the first experiment, we evaluated three different extenders: TES-TRIS, which is widely used for buffaloes; and an extender composed of powdered coconut water-based (ACP-112®) with or without milk (ACP-112®-milk) for buffalo semen freezing. In the second experiment, we evaluated the effect of Lippia origanoides oil extract on protecting buffalo sperm against cryoinjury arising from freezing semen. Semen was collected from ten buffalo bulls (10 ejaculates/bull) and diluted in TES-TRIS (control), ACP-112® or ACP-112®-Milk in the first experiment. In the second experiment, the samples were diluted in the diluent with the best results for sperm quality obtained in experiment I, and 2.5 μg mL-1, 5 μg mL-1 or 10 μg mL-1 of the plant extract was added to treatments; and a control group containing only the diluent was also included. The fresh semen was analyzed for conventional features such as motility, concentration, morphology and viability. After thawing, the samples were evaluated again for motility, vigor and supra-vital staining, and then, were performed the of thermal-resistance test, hypoosmotic test and evaluated sperm membrane integrity with the fluorescent probes PI, FITC-PSA and JC-1 using flow cytometry. The data were submitted to ANOVA, and the results were compared by Tukey’s test at a significance of 5%.

Para a implantação da inseminação artificial é indispensável à utilização de sêmen congelado, que pode provocar mudanças deletérias na estrutura e na integridade das membranas espermáticas, comprometendo sua função. Para evitar estes danos celulares, há a necessidade de se utilizar meios diluidores e substratos adequados que recuperem o maior número possível de células viáveis pós-descongelação. Para isso, foram avaliados, no experimento I, três diferentes diluidores, o diluidor TES-TRIS, bastante utilizado para bubalinos, e um diluidor a base de água de coco em pó (ACP-112), associado ou não ao leite (ACP-112-Leite), na congelação do sêmen de bubalinos; e no experimento II, foi avaliado o efeito do óleo extraído da Lippia origanoides na proteção dos espermatozóides contra as crioinjúrias decorrentes da congelação do sêmen bubalino. Foram utilizados 10 touros bubalinos para as colheitas de sêmen (10 ejaculados/touro), sendo os ejaculados diluídos em TES-TRIS (controle), ACP-112 e ACP-112-Leite no experimento I; e no experimento II, os ejaculados foram diluídos no melhor diluidor obtido no experimento I, acrescido de 2.5 μg mL-1, 5 μg mL-1 e 10 μg mL-1 da planta e o grupo controle, constituído somente do diluidor. O sêmen recém colhido foi analisado quanto as características convencionais, tais como, motilidade, concentração, morfologia e viabilidade. Após a descongelação das amostras foram avaliados novamente, motilidade e viabilidade espermática, e posteriormente, foram realizados os testes de termo-resistência, hiposmótico e de avaliação das membranas dos espermatozóides, através das sondas fluorescentes PI, FITC-PSA e JC-1, utilizando a citometria de fluxo. Os dados obtidos foram submetidos à ANOVA e ao Teste de Tukey a 5%.

Comparative evaluation between the extenders TES-TRIS and ACP-112® and the association of Sálva Marajó oil (Lippia origanoides) in the quality of cryopreserved buffalo sperm / Avaliação comparativa entre os diluidores TES-TRIS e ACP-112® e a associação com o óleo da Sálva do Marajó (Lippia origanoides) na qualidade do sêmen bubalino criopreservado

For artificial insemination, it is essential to use frozen semen, however the freezing process causes deleterious changes to the structure and integrity of sperm membranes that compromise the function of sperm. To avoid this cellular damage, extenders and suitable substrates must be used to recover the highest possible number of viable cells post-thaw. To this end, in the first experiment, we evaluated three different extenders: TES-TRIS, which is widely used for buffaloes; and an extender composed of powdered coconut water-based (ACP-112®) with or without milk (ACP-112®-milk) for buffalo semen freezing. In the second experiment, we evaluated the effect of Lippia origanoides oil extract on protecting buffalo sperm against cryoinjury arising from freezing semen. Semen was collected from ten buffalo bulls (10 ejaculates/bull) and diluted in TES-TRIS (control), ACP-112® or ACP-112®-Milk in the first experiment. In the second experiment, the samples were diluted in the diluent with the best results for sperm quality obtained in experiment I, and 2.5 μg mL-1, 5 μg mL-1 or 10 μg mL-1 of the plant extract was added to treatments; and a control group containing only the diluent was also included. The fresh semen was analyzed for conventional features such as motility, concentration, morphology and viability. After thawing, the samples were evaluated again for motility, vigor and supra-vital staining, and then, were performed the of thermal-resistance test, hypoosmotic test and evaluated sperm membrane integrity with the fluorescent probes PI, FITC-PSA and JC-1 using flow cytometry. The data were submitted to ANOVA, and the results were compared by Tukeys test at a significance of 5%.(AU)

Para a implantação da inseminação artificial é indispensável à utilização de sêmen congelado, que pode provocar mudanças deletérias na estrutura e na integridade das membranas espermáticas, comprometendo sua função. Para evitar estes danos celulares, há a necessidade de se utilizar meios diluidores e substratos adequados que recuperem o maior número possível de células viáveis pós-descongelação. Para isso, foram avaliados, no experimento I, três diferentes diluidores, o diluidor TES-TRIS, bastante utilizado para bubalinos, e um diluidor a base de água de coco em pó (ACP-112), associado ou não ao leite (ACP-112-Leite), na congelação do sêmen de bubalinos; e no experimento II, foi avaliado o efeito do óleo extraído da Lippia origanoides na proteção dos espermatozóides contra as crioinjúrias decorrentes da congelação do sêmen bubalino. Foram utilizados 10 touros bubalinos para as colheitas de sêmen (10 ejaculados/touro), sendo os ejaculados diluídos em TES-TRIS (controle), ACP-112 e ACP-112-Leite no experimento I; e no experimento II, os ejaculados foram diluídos no melhor diluidor obtido no experimento I, acrescido de 2.5 μg mL-1, 5 μg mL-1 e 10 μg mL-1 da planta e o grupo controle, constituído somente do diluidor. O sêmen recém colhido foi analisado quanto as características convencionais, tais como, motilidade, concentração, morfologia e viabilidade. Após a descongelação das amostras foram avaliados novamente, motilidade e viabilidade espermática, e posteriormente, foram realizados os testes de termo-resistência, hiposmótico e de avaliação das membranas dos espermatozóides, através das sondas fluorescentes PI, FITC-PSA e JC-1, utilizando a citometria de fluxo. Os dados obtidos foram submetidos à ANOVA e ao Teste de Tukey a 5%.(AU)

Recovery of sperm after epididymal refrigeration from domestic cats using ACP-117c and Tris extenders / Recuperação de espermatozoides após refrigeração do epidídimo de gatos domésticos utilizando os diluidores ACP-117c e Tris

We aimed to compare fresh sperm and sperm cooled to 4ºC that had been recovered from the epididymides of cats using powdered coconut water (ACP-117c) and Tris extenders. Sixty epididymides were divided into 6 groups: 10 fresh epididymides were recovered using Tris (T0h); 10 were kept at 4°C/2h and recovered using Tris (T2h); 10 were kept at 4°C/4h and recovered using Tris (T4h); 10 fresh were recovered using ACP-117c (A0h); 10 were kept at 4°C/2h and recovered using ACP-117c (A2h), and 10 were kept at 4°C/4h and recovered using ACP-117c (A4h). The testis-epididymis complexes (TEC) control were not cooled. The others were cooled at 4°C for 2 or 4h. The epididymis was separated and the sperm was recovered by the modified flotation method. Sperm kinetic parameters were evaluated by a computer-system analysis, and vigor, viability, concentration, membrane function and morphology of the sperm were assessed under a light microscope. The progressive motility with ACP-117c declined after 2h of cooling, but did not differ between fresh and 4h. The vigor and membrane function were higher in A4h than A0h. The vigor at T2h and T4h were decreased compared to T0h. T0h was higher than A0h for vigor and sperm membrane function. However, after 4h of cooling, ACP-117c maintained a higher percentage of living cells. Feline epididymal sperm quality can be maintained to the degree necessary for artificial breeding programs following cooling and ACP-117c may be successfully used to recover cat sperm that have been cooled for up to 4h.(AU)

Objetivou-se comparar a qualidade de espermatozoides recuperados a fresco e após refrigeração a 4ºC do epidídimo de gatos domésticos utilizando-se os diluidores ACP-117c e Tris. Sessenta epidídimos foram distribuídos em seis grupos: 10 epidídimos a fresco com o Tris (T0h), 10 a 4°C/2h e recuperados com Tris (T2h), 10 a 4°C/4h e recuperados com Tris (T4h), 10 epidídimos a fresco com o ACP-117c (A0h), 10 a 4 °C/2h e recuperados com ACP-117c (A2h), 10 a 4°C/4h e recuperados com ACP-117c (A4h). Os complexos testículo-epidídimo (CTE) do controle não foram refrigerados. Os outros foram refrigerados a 4°C durante duas e quatro horas. Os epidídimos foram separados das demais estruturas, e os espermatozoides recuperados pela técnica de flutuação modificada. Os parâmetros cinéticos foram avaliados em um sistema computadorizado, e o vigor, a viabilidade, a concentração, a funcionalidade de membrana e a morfologia celular foram avaliados em microscopia de luz. A motilidade progressiva com ACP-117c declinou após duas horas de refrigeração, mas não diferiu entre a recuperação a fresco e após refrigeração por quatro horas. Vigor e integridade funcional da membrana celular foram significativamente superiores no grupo A4h em comparação ao A0h. O vigor espermático em T2h e T4h reduziu significativamente em comparação com T0h. T0h foi significativamente superior ao A0h quanto aos parâmetros de vigor e integridade funcional da membrana espermática, entretanto, após quatro horas de refrigeração, o ACP-117c apresentou um maior percentual de células vivas. Os espermatozoides epididimários de felinos domésticos conseguem manter a qualidade necessária para serem utilizados em programas de reprodução artificial após serem refrigerados e recuperados por meio da técnica de flutuação modificada, e o diluidor ACP-117c pode ser utilizado com sucesso para recuperação de células espermáticas refrigeradas de gatos por até quatro horas.(AU)

Recovery of sperm after epididymal refrigeration from domestic cats using ACP-117c and Tris extenders / Recuperação de espermatozoides após refrigeração do epidídimo de gatos domésticos utilizando os diluidores ACP-117c e Tris

We aimed to compare fresh sperm and sperm cooled to 4ºC that had been recovered from the epididymides of cats using powdered coconut water (ACP-117c) and Tris extenders. Sixty epididymides were divided into 6 groups: 10 fresh epididymides were recovered using Tris (T0h); 10 were kept at 4°C/2h and recovered using Tris (T2h); 10 were kept at 4°C/4h and recovered using Tris (T4h); 10 fresh were recovered using ACP-117c (A0h); 10 were kept at 4°C/2h and recovered using ACP-117c (A2h), and 10 were kept at 4°C/4h and recovered using ACP-117c (A4h). The testis-epididymis complexes (TEC) control were not cooled. The others were cooled at 4°C for 2 or 4h. The epididymis was separated and the sperm was recovered by the modified flotation method. Sperm kinetic parameters were evaluated by a computer-system analysis, and vigor, viability, concentration, membrane function and morphology of the sperm were assessed under a light microscope. The progressive motility with ACP-117c declined after 2h of cooling, but did not differ between fresh and 4h. The vigor and membrane function were higher in A4h than A0h. The vigor at T2h and T4h were decreased compared to T0h. T0h was higher than A0h for vigor and sperm membrane function. However, after 4h of cooling, ACP-117c maintained a higher percentage of living cells. Feline epididymal sperm quality can be maintained to the degree necessary for artificial breeding programs following cooling and ACP-117c may be successfully used to recover cat sperm that have been cooled for up to 4h.(AU)

Objetivou-se comparar a qualidade de espermatozoides recuperados a fresco e após refrigeração a 4ºC do epidídimo de gatos domésticos utilizando-se os diluidores ACP-117c e Tris. Sessenta epidídimos foram distribuídos em seis grupos: 10 epidídimos a fresco com o Tris (T0h), 10 a 4°C/2h e recuperados com Tris (T2h), 10 a 4°C/4h e recuperados com Tris (T4h), 10 epidídimos a fresco com o ACP-117c (A0h), 10 a 4 °C/2h e recuperados com ACP-117c (A2h), 10 a 4°C/4h e recuperados com ACP-117c (A4h). Os complexos testículo-epidídimo (CTE) do controle não foram refrigerados. Os outros foram refrigerados a 4°C durante duas e quatro horas. Os epidídimos foram separados das demais estruturas, e os espermatozoides recuperados pela técnica de flutuação modificada. Os parâmetros cinéticos foram avaliados em um sistema computadorizado, e o vigor, a viabilidade, a concentração, a funcionalidade de membrana e a morfologia celular foram avaliados em microscopia de luz. A motilidade progressiva com ACP-117c declinou após duas horas de refrigeração, mas não diferiu entre a recuperação a fresco e após refrigeração por quatro horas. Vigor e integridade funcional da membrana celular foram significativamente superiores no grupo A4h em comparação ao A0h. O vigor espermático em T2h e T4h reduziu significativamente em comparação com T0h. T0h foi significativamente superior ao A0h quanto aos parâmetros de vigor e integridade funcional da membrana espermática, entretanto, após quatro horas de refrigeração, o ACP-117c apresentou um maior percentual de células vivas. Os espermatozoides epididimários de felinos domésticos conseguem manter a qualidade necessária para serem utilizados em programas de reprodução artificial após serem refrigerados e recuperados por meio da técnica de flutuação modificada, e o diluidor ACP-117c pode ser utilizado com sucesso para recuperação de células espermáticas refrigeradas de gatos por até quatro horas.(AU)

Resfriamento de espermatóforos e inseminação assistida em camarão marinho Penaeus vannamei (Boone, 1931).

O resfriamento de espermatóforos do camarão Penaeus vannamei com fins de inseminação assistida pode permitir o trânsito de gametas entre laboratórios de reprodução, facilitando a troca de material genético e o uso de linhagens melhoradas geneticamente. O presente trabalho realizou o resfriamento de espermatóforos de P. vannamei a 15 °C durante 24 e 48 horas. Foram avaliados três meios diluidores: Água de Coco em Pó (ACP), Óleo Mineral (OM) e Água do Mar Esterilizada (AME). Foram realizadas análises microscópicas para verificar a viabilidade aparente, através da análise de integridade de membrana com eosina-nigrosina e morfologia espermática. A inseminação assistida foi realizada após os dois períodos de resfriamento. Não foi observada interação estatística entre os tempos de 24 e 48 horas de resfriamento. Para viabilidade aparente e morfologia, as porcentagens de células viáveis e morfologicamente normais mantiveram-se acima de 60% e 70%, respectivamente, em todos os tratamentos e em ambos os tempos de resfriamento avaliados. Ao se avaliar os meios diluentes, observaram-se 74,9±9,20, 77,3±9,40 e 78,1±6,35% de células normais nos tratamentos OM, AME e ACP, respectivamente. A maior média da taxa de eclosão foi de 80,67±12,01%, observada no tratamento AME, que foi superior ao observado para o tratamento ACP, com 50,15±20,75%. A taxa de eclosão obtida pelo tratamento OM foi de 71,47±18,83%. Os espermatóforos de P. vannamei são capazes de manter boas taxas de viabilidade aparente, morfologia normal e eclosão após 48 horas de estocagem a 15 °C em óleo mineral, água do mar ou ACP®. Sendo a água do mar esterilizada o meio diluente mais eficiente, pois resultou em maior taxa de eclosão após inseminação artificial.

The cooling storage of spermatophores of the shrimp Penaeus vannamei for the purpose of assisted insemination may make feasible the transit of gametes between breeding laboratories, without transporting the animal, facilitating the exchange of genetic material and the use of genetically improved strains. The present work performed the cooling of P. vannamei spermatophores to 15 ° C for 24 and 48 hours. Three extenders were evaluated: Coconut Water Powder (ACP), Mineral Oil (OM) and Sterilized Sea Water (AME). Microscopic analyzes were performed to verify the apparent viability, through the analysis of membrane integrity with eosin-nigrosine and sperm morphology. Assisted insemination was performed after both periods of cooling. No statistical interaction was observed between the 24- and 48-hour cooling times. For apparent viability and morphology, the percentages of viable and morphologically normal cells remained above 60% and 70%, respectively, in all treatments and in both evaluated cooling times. When evaluating the extender, 74.9 ± 9.20, 77.3 ± 9.40 and 78.1 ± 6.35% of normal cells were observed in the OM, AME and ACP treatments, respectively. The highest average hatching rate was 80.67 ± 12.01%, observed in the AME treatment, which was higher than that observed for the ACP treatment, with 50.15 ± 20.75%. The hatching rate obtained by OM treatment was 71.47 ± 18.83%. The spermatophores of P. vannamei are capable of maintaining good rates of apparent viability, normal morphology and hatching after 48 hours of storage at 15 ° C in mineral oil, sea water or ACP®. Sterilized sea water is the most efficient diluent, as it resulted in a higher hatching rate after artificial insemination.

Água de coco em pó em biotécnica da reprodução de caprinos / Powdered coconut water in biotechnologies of reproduction in goats

O uso de biotecnologias reprodutivas objetiva a obtenção do melhoramento genético dos animais de interesse econômico. A utilização dessas biotecnologias, como o uso de diluentes seminais associados a processos de preservação por refrigeração ou congelação, seguidos de inseminação artificial, visa aumentar o número de animais disponíveis para seleção, diminuindo o intervalo entre gerações e obtendo-se ganho genético pelo aumento da eficiência reprodutiva de machos e fêmeas caprinas. Dentre os diluentes seminais, estudos vêm sendo realizados com o uso da água de coco in natura desde a década de 80 e, mais recentemente, com a água de coco em pó desde 2002, apresentando resultados satisfatórios quanto à preservação espermática.(AU)

The use of reproductive biotechnologies search breeding of animals of economic interest. The use of these biotechnologies, such as the use of sperm extenders associated with the processes of preservation by cooling or freezing, followed by artificial insemination, aimed to increasing the number of animals available for selection, reducing the generation interval and obtaining genetic gain by increasing reproductive performance of bucks and dams. Among the sperm extenders, studies are being conducted with the use of fresh coconut water since the 80s and, more recently, with the powdered coconut water since 2002, with satisfactory results related to sperm preservation.(AU)

Água de coco em pó em biotécnica da reprodução de caprinos / Powdered coconut water in biotechnologies of reproduction in goats

O uso de biotecnologias reprodutivas objetiva a obtenção do melhoramento genético dos animais de interesse econômico. A utilização dessas biotecnologias, como o uso de diluentes seminais associados a processos de preservação por refrigeração ou congelação, seguidos de inseminação artificial, visa aumentar o número de animais disponíveis para seleção, diminuindo o intervalo entre gerações e obtendo-se ganho genético pelo aumento da eficiência reprodutiva de machos e fêmeas caprinas. Dentre os diluentes seminais, estudos vêm sendo realizados com o uso da água de coco in natura desde a década de 80 e, mais recentemente, com a água de coco em pó desde 2002, apresentando resultados satisfatórios quanto à preservação espermática.

The use of reproductive biotechnologies search breeding of animals of economic interest. The use of these biotechnologies, such as the use of sperm extenders associated with the processes of preservation by cooling or freezing, followed by artificial insemination, aimed to increasing the number of animals available for selection, reducing the generation interval and obtaining genetic gain by increasing reproductive performance of bucks and dams. Among the sperm extenders, studies are being conducted with the use of fresh coconut water since the 80’s and, more recently, with the powdered coconut water since 2002, with satisfactory results related to sperm preservation.

Conservação do sêmen e liquefação do coágulo seminal de macaco-prego (Cebus apella) em água de coco em pó (ACP-118®), em diferentes temperaturas

The aim of this study was to evaluate the powdered coconut water (PCW) in the semen conservation and seminal clot liquefaction. The semen of six adult male Cebus apella was collected by electroejaculation (EEJ), diluted in ACP-118® extender and stayed in water bath at 33, 35 and 37°C for 24 hours. The sperm integrity was evaluated by eosin-nigrosine staining every one hour during the six initial hours and after 24 hours of incubation. The average volumes and sperm concentrations of clotted and liquid fractions were 0.20±0.02 and 0.20±0.10mL, 1.1±0.3x108 and 1.3±0.9x107 sperm mL-1, respectively. Immediately after collection, only in a sample of liquid fraction was observed 20% motility and vigor 4, which stopped after 40 minutes. Most of the clot was liquefied in ACP-118® after 12 hours of incubation. The best observed treatment was 33°C, because it kept 47±12.8% of sperm integrity after 24 hours. It was concluded that the PCW extender is effective in the liquefaction of seminal clot and maintenance of sperm viability 24 hours after the EEJ at 33, 35 and 37°C.

O objetivo do estudo foi avaliar a água de coco em pó (ACP) na conservação do sêmen e liquefação do coágulo seminal de Cebus apella. O sêmen de seis machos adultos foi coletado por eletroejaculação (EEJ), diluído em solução à base de ACP-118® e submetido à incubação em banho-maria a 33, 35 e 37°C, por 24 horas. Avaliou-se a integridade espermática por meio da coloração eosina-nigrosina a cada uma hora durante as seis horas iniciais e após 24 horas de incubação. Os volumes médios e as concentrações espermáticas das frações coagulada e líquida foram de 0,20±0,02 e 0,20±0,10mL; 1,1±0,3x10(8) e 1,3±0,9x10(7) espermatozoides mL-1, respectivamente. Somente em uma amostra da fração líquida foram verificados espermatozoides com motilidade (20%) e vigor (4), perdurando por 40 minutos. A maior parte do coágulo liquefez em ACP-118® após 12 horas de incubação. O melhor tratamento observado foi sob 33°C, por manter até 47±12,8% de espermatozoides vivos após 24 horas. Conclui-se que o diluente à base de ACP é eficiente na liquefação do coágulo seminal e na manutenção da integridade espermática até 24 horas após a EEJ, nas temperaturas de 33, 35 e 37°C.

Conservação do sêmen e liquefação do coágulo seminal de macaco-prego (Cebus apella) em água de coco em pó (ACP-118®), em diferentes temperaturas

The aim of this study was to evaluate the powdered coconut water (PCW) in the semen conservation and seminal clot liquefaction. The semen of six adult male Cebus apella was collected by electroejaculation (EEJ), diluted in ACP-118® extender and stayed in water bath at 33, 35 and 37°C for 24 hours. The sperm integrity was evaluated by eosin-nigrosine staining every one hour during the six initial hours and after 24 hours of incubation. The average volumes and sperm concentrations of clotted and liquid fractions were 0.20±0.02 and 0.20±0.10mL, 1.1±0.3x108 and 1.3±0.9x107 sperm mL-1, respectively. Immediately after collection, only in a sample of liquid fraction was observed 20% motility and vigor 4, which stopped after 40 minutes. Most of the clot was liquefied in ACP-118® after 12 hours of incubation. The best observed treatment was 33°C, because it kept 47±12.8% of sperm integrity after 24 hours. It was concluded that the PCW extender is effective in the liquefaction of seminal clot and maintenance of sperm viability 24 hours after the EEJ at 33, 35 and 37°C.

O objetivo do estudo foi avaliar a água de coco em pó (ACP) na conservação do sêmen e liquefação do coágulo seminal de Cebus apella. O sêmen de seis machos adultos foi coletado por eletroejaculação (EEJ), diluído em solução à base de ACP-118® e submetido à incubação em banho-maria a 33, 35 e 37°C, por 24 horas. Avaliou-se a integridade espermática por meio da coloração eosina-nigrosina a cada uma hora durante as seis horas iniciais e após 24 horas de incubação. Os volumes médios e as concentrações espermáticas das frações coagulada e líquida foram de 0,20±0,02 e 0,20±0,10mL; 1,1±0,3x10(8) e 1,3±0,9x10(7) espermatozoides mL-1, respectivamente. Somente em uma amostra da fração líquida foram verificados espermatozoides com motilidade (20%) e vigor (4), perdurando por 40 minutos. A maior parte do coágulo liquefez em ACP-118® após 12 horas de incubação. O melhor tratamento observado foi sob 33°C, por manter até 47±12,8% de espermatozoides vivos após 24 horas. Conclui-se que o diluente à base de ACP é eficiente na liquefação do coágulo seminal e na manutenção da integridade espermática até 24 horas após a EEJ, nas temperaturas de 33, 35 e 37°C.

AVALIAÇÃO DO SÊMEN EQUINO REFRIGERADO EM DILUENTE A BASE DE ÁGUA DE COCO EM PÓ (ACP®-105) COM E SEM GEMA DE OVO

O objetivo deste estudo foi avaliar a eficiência de dois diluentes, sendo um a base de água de coco (ACP®-105) e outro a base de leite desnatado (BotuSêmen®) na refrigeração de sêmen equino. Durante a estação reprodutiva, o sêmen de quatorze equinos foram coletados e diluidos em três diluentes ACP-105®, ACP105® + 2,5% de gema de ovo (ACP-105 2,5%) e BotuSêmen® em uma concentração de 50 × 106 espermatozoides/mL. As amostras de sêmen foram submetidas à refrigeração em container de transporte e refrigeração Botu-Flex® a 15ºC e 5ºC. Os parâmetros cinéticos foram avaliados em sistema de análise de sêmen computadorizada após 24 h de resfriamento. A integridade da membrana foi avaliada por meio de sondas fluorescentes. Os dados não paramétricos foram avaliados pelo teste de Kruskal-Wallis seguido por comparações múltiplas de Dunn. As variáveis com distribuição normal foram avaliadas por ANOVA seguido pelo teste de Tukey. As diferenças foram consideradas estatisticamente significativas quando P<0,05. Os resultados demonstraram que MT, MP, VSL e VCL foram similares na analise do sêmen fresco. No entanto, houve diferenças no VAP e RAP entre ACP-105® 2,5% e BotuSêmen® sendo o BotuSêmen superior. Após 24 h de incubação, diferenças significativas foram observadas no VAP, RAP, VSL e VCL entre os diluentes BotuSêmen e ACP-105®. A motilidade total e progressiva foi maior nos diluentes ACP-105® 2,5% e BotuSêmen®. Não houve diferença nos parâmetros cinéticos MT, MP, VCL e RAP obtidas no sêmen resfriado a 15ºC e 5ºC por 24h nos diluentes ACP 2,5% e BotuSêmen. Também Não houve diferença significativa na análise da integridade de membrana plasmática entre os diluentes ACP-105 2,5% e BotuSêmen®. O estudo demonstrou que o diluidor ACP-105® associada a baixa concentração de gema de ovo (2.5%) foi efetivo na preservação de espermatozoides de equino por 24 h. Estes resultados são úteis para melhorias no processo de preservação espermática estabelecendo bases para o desenvolvimento de novos diluentes inclusive para outras espécies de equideos destacando-se o jumento nordestino e outras espécies em risco de extinção.

The objective of this study was to evaluate the efficacy of equine sperm cooled in ACP®-105 and BotuSemen®. During the breeding season, ejaculates from fourteen stallions were collected and ejaculates were diluted to 50 × 106 sperm/mL in extenders including ACP®-105, ACP®105+ 2,5% egg yolk (ACP-105 2,5% EY), BotuSemen®. Extended semen was then cooled in cooling device at 15ºC and 5ºC. Sperm kinetics was evaluated by computer assisted sperm analyser after 24h of cooling. The integrity of sperm membrane was assessed by fluorescence staining. Kruskal-Wallis test followed by Dunn test were used to evaluate sperm parameters of non-parametric data. Variables of normally distributed populations were examined through one way ANOVA followed by Tukey's test. The level of statistical significance was set at P < 0.05.Results showed that MT, MP, VSL and VCL were similar in fresh semen. However, there were differences in VAP and RAP between ACP-105 2.5% EY and BotuSemen®. After 24h of incubation, significant differences were observed in VAP, RAP, VSL and VCL between BotuSemen and ACP-105®. Total and progressive motility were found greater in ACP 2.5% EY and BotuSemen. There were no differences in the sperm kinetics including MT, MP, VCL and RAP obtained from cooled semen samples at 15ºC and 5ºC for 24h in ACP 2.5% EY and BotuSemen. No significant differences were observed in PMI between ACP-105 2.5% EY and BotuSemen® extenders. In summary, we demonstrate that a ACP-105® associated with low concentration (2.5%) egg yolk was effective for preservation of stallion spermatozoa for 24 hours. These findings are useful for the improvement of sperm preservation procedures and set a foundation for the development of novel extenders for the preservation of semen from other equine species as well as endangered species.

ESPERMATOZOIDES EPIDIDIMÁRIOS DE GATOS DOMÉSTICOS: AVALIAÇÃO APÓS REFRIGERAÇÃO E DILUIÇÃO EM ÁGUA DE COCO EM PÓ (ACP-117c)

Os espermatozoides epididimários de gatos domésticos podem ser refrigerados e utilizados em programas de reprodução assistida. Entretanto, os protocolos de refrigeração, adição de diluidores e protetores de membrana celular ainda não foram completamente estabelecidos. Dessa forma, os objetivos deste estudo foram: 1) comparar a qualidade de espermatozoides recuperados a fresco e após refrigeração a 4 ºC do epidídimo de gatos domésticos, utilizando os diluidores ACP-117c e Tris; 2) avaliar a qualidade de espermatozoides epididimários felinos utilizando os diluidores ACP-117c ou Tris adicionados de gema de ovo e refrigerados a 4 ºC/24h. Para o objetivo 1, 60 epidídimos foram distribuídos em 6 grupos: 10 epidídimos recuperados a fresco com o Tris (T0h), 10 refrigerados a 4 °C/2h e recuperados com Tris (T2h), 10 refrigerados a 4 °C/4h e recuperados com Tris (T4h), 10 epidídimos recuperados a fresco com o ACP-117c (A0h), 10 refrigerados a 4 °C/2h e recuperados com ACP-117c (A2h), 10 refrigerados a 4 °C/4h e recuperados com ACP-117c (A4h). Foram obtidos os complexos testículo-epidídimo (CTE) esquerdo e direito. Após refrigeração, as células foram recuperadas pela técnica de flutuação modificada. Em seguida, os espermatozoides foram avaliados em um sistema computadorizado (CASA) quanto aos parâmetros cinéticos, e subjetivamente acerca do vigor, viabilidade, concentração, funcionalidade de membrana e morfologia. Para o objetivo 2, foram utilizados 8 epidídimos. Os CTE foram refrigerados a 4 °C durante 2h. Em seguida, os espermatozoides foram recuperados com ACP-117c ou Tris e avaliados quanto à motilidade subjetiva e ao vigor. Após avaliação, 80l da diluição foram adicionados de 20l de gema de ovo e os espermatozoides foram reavaliados. Em seguida, uma alíquota foi refrigerada a 4 ºC/24h e reavaliada. Na primeira etapa (objetivo 1), ao avaliar o efeito do processo de refrigeração sobre os espermatozoides, a motilidade progressiva com ACP-117c declinou após 2h de refrigeração e não diferiu entre o grupo a fresco e após refrigeração por 4h. Vigor e integridade funcional da membrana foram superiores no grupo A4h em comparação ao A0h. O vigor espermático em T2h e T4h reduziu em comparação com T0h. Ao se avaliar o efeito do diluidor, T0h foi superior ao A0h quanto ao vigor e integridade funcional da membrana, entretanto, após 4h de refrigeração, o ACP-117c apresentou um maior percentual de células vivas. Na segunda etapa (objetivo 2), a motilidade total e o vigor espermático com o ACP-117c foram inferiores no grupo refrigerado por 24h em comparação ao grupo fresco. Também declinaram no grupo refrigerado com o Tris por 24h em comparação aos outros grupos. A motilidade com Tris foi superior a com ACP-117c após 24h de refrigeração. Conclui-se que os espermatozoides epididimários de gatos mantêm a qualidade necessária para utilização após serem refrigerados. O ACP-117c possibilitou um maior percentual de células vivas após refrigeração por 4 h, porém, o Tris continua sendo o diluidor de eleição para recuperação de espermatozoides a fresco. O ACP-117c adicionado de gema de ovo pode ser utilizado com sucesso para recuperação de células espermáticas, entretanto, após refrigeração por 24h, a qualidade dessas células reduz consideravelmente.

The epididymal sperm of domestic cats can be refrigerated and used in assisted reproduction programs. However, cooling protocols, extenders addition and cell membrane protectors have not been fully established. Thus, the objectives of this study were: 1) to compare the quality of fresh sperm and sperm cooled at 4 ºC that had been recovered from the epididymides of domestic cats using ACP-117c and Tris extenders; 2) to evaluate the quality of feline epididymal sperm using the ACP-117c or Tris extenders added by egg yolk and cooled at 4 °C/24h. For the objective 1, 60 epididymides were divided into 6 groups: 10 fresh epididymides were recovered using Tris (T0h); 10 were kept at 4 °C/2h and recovered using Tris (T2h); 10 were kept at 4 °C/4h and recovered using Tris (T4h); 10 fresh were recovered using ACP-117c (A0h); 10 were kept at 4 °C/2h and recovered using ACP-117c (A2h), and 10 were kept at 4 °C/4h and recovered using ACP-117c (A4h). The left and right testis-epididymis complexes (TEC) were obtained. After cooling, the cells were recovered by the modified flotation technique. Then, the sperm kinetic parameters were evaluated in a computerized system (CASA), and the vigor, viability, concentration, membrane function and morphology of the sperm were subjectively assessed. For the objective 2, 8 epididymides were used. The TEC were cooled at 4 °C/2h. Then the spermatozoa were recovered with ACP-117c or Tris and evaluated for motility and vigor. Subsequently, 80l of the dilution were added 20l of egg yolk and the cells were reassessed. Soon after, an aliquot was stored in a refrigerator at 4 °C/24 hours and then reassessed. In the first stage (aim 1), to evaluate the effect of chilling process on spermatozoa, the progressive motility with ACP-117c declined after 2h of cooling, but did not differ between the fresh and 4h. The vigor and membrane function were higher in A4h than A0h. The vigor at T2h and T4h were decreased compared to T0h. When evaluating the effect of extender, T0h was higher than A0h for vigor and sperm membrane functional. However, after 4h of cooling, ACP-117c maintained a higher percentage of living cells. In the second stage (aim 2), the total motility and sperm vigor using the ACP-117c extender were significantly lower in the group refrigerated for 24h when compared to the fresh group. The motility and vigor declined in the refrigerated group with Tris for 24h as compared to other groups. The motility with Tris was higher than the motility with ACP-117c after 24h of cooling. It was concluded that feline epididymal sperm maintain the quality required for use after cooling. ACP-117c allowed a higher percentage of living cells recovery after cooling for 4 h, however, Tris remains the extender of choice for fresh sperm recovery. ACP-117c added by egg yolk can be successfully used for sperm cells recovery, however, after cooling for 24 hours, the quality of these cells decreases considerably.

Resfriamento do sêmen de Colossoma macropomum em água de coco em pó (acp-104) associada à crioprotetores - estudo de toxicidade

Os peixes da espécie Colossoma macropomum (tambaqui) tem um alto valor econômico e ecológico. Uma tecnologia que vêm se destacando nos últimos anos é a conservação de sêmen realizada por resfriamento. Dessa forma, o estudo tem como objetivo avaliar a qualidade do sêmen de tambaqui em solução de água de coco em pó específico para peixes (ACP-104) com ou sem crioprotetores durante os seguintes períodos de refrigeração: zero, três, 24, 48 e 72 horas. [...] As amostras de sêmen diluído nos diferentes tratamentos apresentaram maiores velocidades cinéticas (VCL, VSL e VAP), em todos os tempos de conservação avaliados quando comparado ao sêmen não diluído. No início do resfriamento, H0, poucas patologias foram observadas, mas ao passar do período de avaliação, as anormalidades espermáticas foram aumentando em todas as amostras resfriadas. O sêmen fresco, após 72 horas de resfriamento, apresentou baixa taxa de motilidade (6,210,38%), aumento na porcentagem de espermatozoides com anormalidades (48,07%) e muitos espermatozoide aglutinados quando comparado com sémen diluído. Em ACP-104 sem crioprotetor, pois este apresentou 21,291,37% de espermatozoides móveis e 26,75% de anormalidades espermáticas em ACP-104 + DMSO os valores encontrados foram 27,672,56%; 25,79%, e ACP-104 + MG foi de 16,680,57%; 26,42% para porcentagem móveis e patologias espermáticas, respectivamente. Assim, conclui-se que o sêmen tambaqui pode ser resfriado a 4 C, mantendo parâmetros aceitáveis de velocidade e morfologia até 24 horas, mas, quando diluídas em água de coco em pó específico para peixes (ACP-104), este tempo de armazenamento pode ser expandida até a 72 horas.

The fish species Colossoma macropomum (tambaqui) has a high economic and ecological value. A technology that has been highlighted in recent years is the sperm conservation carried out by cooling. The study aims to evaluate the main seminal parameters of diluted semen in a solution of powdered coconut water specific for fish (ACP TM -104) with or without cryoprotectants during the following times of cooling: zero, three, 24, 48, and 72 hours. [...] Semen samples diluted in the different treatments showed higher speeds kinetics (VCL, VSL and VAP) in all storage times evaluated from the undiluted semen. At the beginning of cooling, H0, little pathology has been observed, but over the evaluation period, the abnormal sperm were increased in all samples refrigerated. The fresh semen, after 72 hours of cooling, showed low motility rate (6.21 0.38%) increase in the percentage of sperm with abnormalities (48.07%) and many agglutinated sperm compared with semen diluted in ACPTM -104 without cryoprotectants, because it showed 21.29 1.37% of mobile spermatozoa and 26.75% of abnormal sperm in ACPTM-104 + DMSO the values were 27.67 2.56%, 25.79 %, and ACP TM-104 + MG was 16.68 0.57%, 26.42% for percentage and mobile sperm pathologies, respectively. Thus, it is concluded that semen can be tambaqui cooled to 4 C, maintaining acceptable parameters of speed and morphology to 24 hours, but when diluted with coconut water for specific fish powder (PCW- 104TM), this time storage can be expanded up to 72 hours.

Resfriamento do sêmen de Colossoma macropomum em água de coco em pó (acp-104) associada à crioprotetores - estudo de toxicidade

Os peixes da espécie Colossoma macropomum (tambaqui) tem um alto valor econômico e ecológico. Uma tecnologia que vêm se destacando nos últimos anos é a conservação de sêmen realizada por resfriamento. Dessa forma, o estudo tem como objetivo avaliar a qualidade do sêmen de tambaqui em solução de água de coco em pó específico para peixes (ACP-104) com ou sem crioprotetores durante os seguintes períodos de refrigeração: zero, três, 24, 48 e 72 horas. [...] As amostras de sêmen diluído nos diferentes tratamentos apresentaram maiores velocidades cinéticas (VCL, VSL e VAP), em todos os tempos de conservação avaliados quando comparado ao sêmen não diluído. No início do resfriamento, H0, poucas patologias foram observadas, mas ao passar do período de avaliação, as anormalidades espermáticas foram aumentando em todas as amostras resfriadas. O sêmen fresco, após 72 horas de resfriamento, apresentou baixa taxa de motilidade (6,210,38%), aumento na porcentagem de espermatozoides com anormalidades (48,07%) e muitos espermatozoide aglutinados quando comparado com sémen diluído. Em ACP-104 sem crioprotetor, pois este apresentou 21,291,37% de espermatozoides móveis e 26,75% de anormalidades espermáticas em ACP-104 + DMSO os valores encontrados foram 27,672,56%; 25,79%, e ACP-104 + MG foi de 16,680,57%; 26,42% para porcentagem móveis e patologias espermáticas, respectivamente. Assim, conclui-se que o sêmen tambaqui pode ser resfriado a 4 C, mantendo parâmetros aceitáveis de velocidade e morfologia até 24 horas, mas, quando diluídas em água de coco em pó específico para peixes (ACP-104), este tempo de armazenamento pode ser expandida até a 72 horas.(AU)

The fish species Colossoma macropomum (tambaqui) has a high economic and ecological value. A technology that has been highlighted in recent years is the sperm conservation carried out by cooling. The study aims to evaluate the main seminal parameters of diluted semen in a solution of powdered coconut water specific for fish (ACP TM -104) with or without cryoprotectants during the following times of cooling: zero, three, 24, 48, and 72 hours. [...] Semen samples diluted in the different treatments showed higher speeds kinetics (VCL, VSL and VAP) in all storage times evaluated from the undiluted semen. At the beginning of cooling, H0, little pathology has been observed, but over the evaluation period, the abnormal sperm were increased in all samples refrigerated. The fresh semen, after 72 hours of cooling, showed low motility rate (6.21 0.38%) increase in the percentage of sperm with abnormalities (48.07%) and many agglutinated sperm compared with semen diluted in ACPTM -104 without cryoprotectants, because it showed 21.29 1.37% of mobile spermatozoa and 26.75% of abnormal sperm in ACPTM-104 + DMSO the values were 27.67 2.56%, 25.79 %, and ACP TM-104 + MG was 16.68 0.57%, 26.42% for percentage and mobile sperm pathologies, respectively. Thus, it is concluded that semen can be tambaqui cooled to 4 C, maintaining acceptable parameters of speed and morphology to 24 hours, but when diluted with coconut water for specific fish powder (PCW- 104TM), this time storage can be expanded up to 72 hours.(AU)