Antimicrobial susceptibility and minimal inhibitory concentration of bacteria isolated from the eyes of dogs with keratoconjunctivitis sicca / Susceptibilidade antimicrobiana e concentração inibitória mínima de bactérias isoladas dos olhos de cães com ceratoconjuntivite seca

The objective of this study was to evaluate the antimicrobial susceptibility profile of bacteria isolated from the eyes of dogs with keratoconjunctivitis sicca (KCS). We evaluated 65 dogs diagnosed with KCS and 30 healthy dogs (Control Group). Conjunctival swab samples were collected after KCS was diagnosed. Microbiological examinations were performed, including aerobic culture, antimicrobial susceptibility testing and minimum inhibitory concentration (MIC) determination for chloramphenicol, tobramycin, ofloxacin and moxifloxacin. MICs of the fifteen most resistant strains of Staphylococcus pseudintermedius (Staphylococcus intermedius Group, SIG) and the fifteen most resistant strains of gram-negative bacteria were determined. By percentage, the microorganisms exhibited the highest susceptibility to polymyxin B, tobramycin and chloramphenicol and the lowest to tetracycline. Three multi-drug-resistant strains of SIG were detected: one displayed isolated susceptibility to cefazolin, another to vancomycin, and another to polymyxin B and amikacin. The species of bacteria isolated from the eyes of dogs with KCS presented variable susceptibility to the antibiotics tested. We found evidence of the emergence of quinolone-resistant strains of SIG and further evidence of increased ocular prevalence. These findings reinforce the need to identify the bacteria involved and their antimicrobial susceptibility profile, as secondary infections can serve as exacerbating and perpetuating factors in KCS.(AU)

O objetivo deste estudo foi avaliar o perfil de susceptibilidade antimicrobiana de bactérias isoladas de olhos de cães com ceratoconjuntivite seca (CCS). Foram avaliados 65 cães com diagnóstico de CCS e 30 cães saudáveis ​​(Grupo Controle). Depois do diagnosticado de CCS, suabes conjuntivais foram coletados. Exames microbiológicos foram realizados, incluindo cultura aeróbia, teste de susceptibilidade antimicrobiana e determinação da concentração inibitória mínima (CIM) para cloranfenicol, tobramicina, ofloxacina e moxifloxacina. Para determinar a CIM, foram selecionadas as quinze cepas mais resistentes de Staphylococcus pseudintermedius (Staphylococcus intermedius Group-SIG) e as quinze cepas mais resistentes de bactérias gram-negativas. Os microrganismos apresentaram maior suscetibilidade percentual à polimixina B, tobramicina e cloranfenicol e menor suscetibilidade à tetraciclina. Três cepas de SIG resistentes a múltiplos medicamentos foram detectadas, do quais um demonstrou suscetibilidade isolada à cefazolina, outro à vancomicina e outro à polimixina B e à amicacina. As espécies de bactérias isoladas dos olhos de cães com CCS apresentaram suscetibilidade variável aos antibióticos testados. Encontramos evidências do surgimento de cepas resistentes à quinolona de S. pseudintermedius e outras evidências de aumento da prevalência ocular. Esses achados reforçam a necessidade de identificar as bactérias envolvidas e seu perfil de susceptibilidade aos antimicrobianos, pois as infecções secundárias podem servir como fatores exacerbantes e perpetuantes na CCS.(AU)

Antimicrobial susceptibility and minimal inhibitory concentration of bacteria isolated from the eyes of dogs with keratoconjunctivitis sicca / Susceptibilidade antimicrobiana e concentração inibitória mínima de bactérias isoladas dos olhos de cães com ceratoconjuntivite seca

The objective of this study was to evaluate the antimicrobial susceptibility profile of bacteria isolated from the eyes of dogs with keratoconjunctivitis sicca (KCS). We evaluated 65 dogs diagnosed with KCS and 30 healthy dogs (Control Group). Conjunctival swab samples were collected after KCS was diagnosed. Microbiological examinations were performed, including aerobic culture, antimicrobial susceptibility testing and minimum inhibitory concentration (MIC) determination for chloramphenicol, tobramycin, ofloxacin and moxifloxacin. MICs of the fifteen most resistant strains of Staphylococcus pseudintermedius (Staphylococcus intermedius Group, SIG) and the fifteen most resistant strains of gram-negative bacteria were determined. By percentage, the microorganisms exhibited the highest susceptibility to polymyxin B, tobramycin and chloramphenicol and the lowest to tetracycline. Three multi-drug-resistant strains of SIG were detected: one displayed isolated susceptibility to cefazolin, another to vancomycin, and another to polymyxin B and amikacin. The species of bacteria isolated from the eyes of dogs with KCS presented variable susceptibility to the antibiotics tested. We found evidence of the emergence of quinolone-resistant strains of SIG and further evidence of increased ocular prevalence. These findings reinforce the need to identify the bacteria involved and their antimicrobial susceptibility profile, as secondary infections can serve as exacerbating and perpetuating factors in KCS.(AU)

O objetivo deste estudo foi avaliar o perfil de susceptibilidade antimicrobiana de bactérias isoladas de olhos de cães com ceratoconjuntivite seca (CCS). Foram avaliados 65 cães com diagnóstico de CCS e 30 cães saudáveis ​​(Grupo Controle). Depois do diagnosticado de CCS, suabes conjuntivais foram coletados. Exames microbiológicos foram realizados, incluindo cultura aeróbia, teste de susceptibilidade antimicrobiana e determinação da concentração inibitória mínima (CIM) para cloranfenicol, tobramicina, ofloxacina e moxifloxacina. Para determinar a CIM, foram selecionadas as quinze cepas mais resistentes de Staphylococcus pseudintermedius (Staphylococcus intermedius Group-SIG) e as quinze cepas mais resistentes de bactérias gram-negativas. Os microrganismos apresentaram maior suscetibilidade percentual à polimixina B, tobramicina e cloranfenicol e menor suscetibilidade à tetraciclina. Três cepas de SIG resistentes a múltiplos medicamentos foram detectadas, do quais um demonstrou suscetibilidade isolada à cefazolina, outro à vancomicina e outro à polimixina B e à amicacina. As espécies de bactérias isoladas dos olhos de cães com CCS apresentaram suscetibilidade variável aos antibióticos testados. Encontramos evidências do surgimento de cepas resistentes à quinolona de S. pseudintermedius e outras evidências de aumento da prevalência ocular. Esses achados reforçam a necessidade de identificar as bactérias envolvidas e seu perfil de susceptibilidade aos antimicrobianos, pois as infecções secundárias podem servir como fatores exacerbantes e perpetuantes na CCS.(AU)

Antimicrobial susceptibility and minimal inhibitory concentration of bacteria isolated from the eyes of dogs with keratoconjunctivitis sicca

ABSTRACT: The objective of this study was to evaluate the antimicrobial susceptibility profile of bacteria isolated from the eyes of dogs with keratoconjunctivitis sicca (KCS). We evaluated 65 dogs diagnosed with KCS and 30 healthy dogs (Control Group). Conjunctival swab samples were collected after KCS was diagnosed. Microbiological examinations were performed, including aerobic culture, antimicrobial susceptibility testing and minimum inhibitory concentration (MIC) determination for chloramphenicol, tobramycin, ofloxacin and moxifloxacin. MICs of the fifteen most resistant strains of Staphylococcus pseudintermedius (Staphylococcus intermedius Group, SIG) and the fifteen most resistant strains of gram-negative bacteria were determined. By percentage, the microorganisms exhibited the highest susceptibility to polymyxin B, tobramycin and chloramphenicol and the lowest to tetracycline. Three multi-drug-resistant strains of SIG were detected: one displayed isolated susceptibility to cefazolin, another to vancomycin, and another to polymyxin B and amikacin. The species of bacteria isolated from the eyes of dogs with KCS presented variable susceptibility to the antibiotics tested. We found evidence of the emergence of quinolone-resistant strains of SIG and further evidence of increased ocular prevalence. These findings reinforce the need to identify the bacteria involved and their antimicrobial susceptibility profile, as secondary infections can serve as exacerbating and perpetuating factors in KCS.

RESUMO: O objetivo deste estudo foi avaliar o perfil de susceptibilidade antimicrobiana de bactérias isoladas de olhos de cães com ceratoconjuntivite seca (CCS). Foram avaliados 65 cães com diagnóstico de CCS e 30 cães saudáveis (Grupo Controle). Depois do diagnosticado de CCS, suabes conjuntivais foram coletados. Exames microbiológicos foram realizados, incluindo cultura aeróbia, teste de susceptibilidade antimicrobiana e determinação da concentração inibitória mínima (CIM) para cloranfenicol, tobramicina, ofloxacina e moxifloxacina. Para determinar a CIM, foram selecionadas as quinze cepas mais resistentes de Staphylococcus pseudintermedius (Staphylococcus intermedius Group-SIG) e as quinze cepas mais resistentes de bactérias gram-negativas. Os microrganismos apresentaram maior suscetibilidade percentual à polimixina B, tobramicina e cloranfenicol e menor suscetibilidade à tetraciclina. Três cepas de SIG resistentes a múltiplos medicamentos foram detectadas, do quais um demonstrou suscetibilidade isolada à cefazolina, outro à vancomicina e outro à polimixina B e à amicacina. As espécies de bactérias isoladas dos olhos de cães com CCS apresentaram suscetibilidade variável aos antibióticos testados. Encontramos evidências do surgimento de cepas resistentes à quinolona de S. pseudintermedius e outras evidências de aumento da prevalência ocular. Esses achados reforçam a necessidade de identificar as bactérias envolvidas e seu perfil de susceptibilidade aos antimicrobianos, pois as infecções secundárias podem servir como fatores exacerbantes e perpetuantes na CCS.

Perfil de susceptibilidade antimicrobiana e identificação de patotipos diarreiogênicos entre amostras de Escherichia coli isoladas de alimentos / Antimicrobial susceptibility profile and identification of pathotypesdiarrheagenic between Escherichia coli strains isolated from food

O presente estudo objetivou avaliar o perfil de susceptibilidade antimicrobiana e a   ocorrência de patotipos diarreiogênicos (E. coli entoropatogênica/EPEC, E. coli enterotoxigênica/ETEC, E. coli produtora de shiga toxina/STEC, E. coli enteroinvasiva/EIEC e E. coli enteroagregativa/EAEC) em amostras  de Escherichia coli, isoladas de diversos alimentos destinados ao consumo humano e naqueles envolvidos em surtos de Doença de Transmissão Alimentar (DTA), em Minas Gerais, Brasil.  O perfil de susceptibilidade antimicrobiana das amostras de E. coli foi avaliado por meio da técnica de Concentração Mínima Inibitória e os patotipos de E. coli diarreiogênica pela Reação em Cadeia de Polimerase, utilizando-se os marcadores de virulência eae, bfpA, eltB, estA, st1, stx1, stx2, ipaH e aatA. Dentre as 220 amostras de E. coli analisadas, 60 (27,3%) apresentaram-se resistentes ou com resistência intermediária. Entre estas, oito (13,3%) foram consideradas multirresistentes. Os fármacos amicacina e gentamicina foram os mais eficazes, diferentemente da ampicilina, que apresentou o maior percentual de amostras resistentes (10,9%). Não foram identificados os patotipos de EPEC, STEC, EIEC e EAEC. Duas amostras de E. coli (0,9%), isoladas de um salgado (pão de queijo) e de uma refeição mista (galinhada), foram classificadas como ETEC. Ambas albergavam os marcadores de virulência eltB, estA e st1.(AU)

This study aimed to evaluate the profile of antimicrobial susceptibility and the occurrence of diarrheagenic pathotypes (E. colientoropatogênic/EPEC, E. coli enterotoxigenic/ETEC, E. coli producing shiga toxin/STEC, E. coli enteroinvasive/EIEC and E. colienteroaggregative/EAEC) in Escherichia coli isolated from different foods intended for human consumption and those involvedin foodborne disease outbreaks, in Minas Gerais, Brazil. The antimicrobial susceptibility of strains of E. coli was evaluated by theMinimum Inhibitory Concentration technique and pathotypes of E. coli diarrheagenic by polymerase chain reaction, using the virulencemarkers eae, bfpA, eltB, st1, stx1, stx2, ipaH and aatA. Among the 220 strains of E. coli analyzed, 60 (27.3%) were resistant orintermediate resistance. Among these, eight (13.3%) were considered multiresistant. The amikacin and gentamicin drugs were themost effective, unlike ampicillin, which had the highest percentage of resistant strains (10.9%). Pathotypes of EPEC, STEC, EIECand EAEC were not identified. Two strains of E. coli (0.9%) isolated from a salty (cheese bread) and a mixed meal (chicken meal)were classified as ETEC. Both harbored the virulence markers eltB, estA and st1. These were characterized as serotypes O9:H10and O9:H33. We conclude that among samples of E. coli, isolated from foods for human consumption in Minas Gerais and thoseinvolved in outbreaks of DTA, there are samples considered multiresistant and diarrheogenic.(AU)

Antimicrobial susceptibility patterns of Brazilian Haemophilus parasuis field isolates / Perfil de susceptibilidade antimicrobiana de isolados clínicos brasileiros de Haemophilus parasuis

Haemophilus parasuis is the etiological agent of Glässer's disease (GD), an ubiquitous infection of swine characterized by systemic fibrinous polyserositis, polyarthritis and meningitis. Intensive use of antimicrobial agents in swine husbandries during the last years triggered the development of antibiotic resistances in bacterial pathogens. Thus, regular susceptibility testing is crucial to ensure efficacy of different antimicrobial agents to this porcine pathogen. In this study, 50 clinical isolates from South Brazilian pig herds were characterized and analyzed for their susceptibility to commonly used antibiotic. The identification and typing of clinical isolates was carried out by a modified indirect hemagglutination assay combined with a multiplex PCR. The susceptibility of each isolate was analyzed by broth microdilution method against a panel of 21 antimicrobial compounds. We found that field isolates are highly resistance to gentamycin, bacitracin, lincomycin and tiamulin, but sensitive to ampicillin, clindamycin, neomycin, penicillin, danofloxacin and enrofloxacin. Furthermore, an individual susceptibility analysis indicated that enrofloxacin is effective to treat clinical isolates with the exception of those classified as serovar 1. The results presented here firstly demonstrate the susceptibility of Brazilian clinical isolates of H. parasuis to antimicrobials widely used by swine veterinary practitioners and strengthen the need to perform susceptibility test prior to antibiotic therapy during GD outbreaks. In addition, because only six antimicrobial drugs (28.6%) were found effective against field isolates, a continuous surveillance of the susceptibility profile should be of major concern to the swine industry.(AU)

Haemophilus parasuis é o agente etiológico da doença de Glässer (GD), um processo infeccioso que acomete suínos e que se caracteriza por poliserosites fibrinosas sistêmicas, poliartrites e meningites. O uso intensivo de agentes antimicrobianos na produção de suínos, durante os últimos anos, tem disparado a seleção de cepas bacterianas resistentes a antibióticos. Desta maneira, a avaliação rotineira de susceptibilidade torna-se crucial para assegurar a correta seleção de um antimicrobiano eficaz contra este patógeno. Neste estudo, analisou-se a susceptibilidade antimicrobiana de 50 isolados clínicos de H. parasuis procedentes de granjas localizadas na região sul do Brasil. A identificação e tipificação dos isolados clínicos foi realizada através de uma PCR multiplex combinada com o teste de hemaglutinação indireta modificada. A susceptibilidade de cada isolado foi analisada pelo método de microdiluição em caldo utilizando-se um painel composto por 21 agentes antimicrobianos. Os resultados deste estudo indicam que as cepas clínicas de H. parasuis apresentam alta resistência à gentamicina, bacitracina, lincomicina e tiamulina, no entanto, são susceptíveis a ampicilina, clindamicina, neomicina, penicilina, enrofloxacina e danofloxacina. A análise de susceptibilidade realizada dentro de cada grupo de cepas de um mesmo sorovar indicou que a enrofloxacina é o antibiótico mais efetivo para tratar todos isolados clínicos com exceção daqueles pertencentes ao sorovar 1. Em termos gerais, neste trabalho, demonstra-se o perfil de susceptibilidade de isolados clínicos de H. parasuis aos antimicrobianos comumente utilizados pelos médicos veterinários especialistas em suínos, e reforça-se a necessidade da realização de testes de susceptibilidade antes do início da terapia com antibióticos durante surtos de DG. Além disso, como somente seis antimicrobianos (28.6%) foram efetivos contra os isolados clínicos, uma vigilância contínua do perfil de susceptibilidade aos antimicrobianos deve ser de grande preocupação para a indústria de suínos.(AU)

Antimicrobial susceptibility patterns of Brazilian Haemophilus parasuis field isolates / Perfil de susceptibilidade antimicrobiana de isolados clínicos brasileiros de Haemophilus parasuis

Haemophilus parasuis is the etiological agent of Glãsser's disease (GD), an ubiquitous infection of swine characterized by systemic fibrinous polyserositis, polyarthritis and meningitis. Intensive use of antimicrobial agents in swine husbandries during the last years triggered the development of antibiotic resistances in bacterial pathogens. Thus, regular susceptibility testing is crucial to ensure efficacy of different antimicrobial agents to this porcine pathogen. In this study, 50 clinical isolates from South Brazilian pig herds were characterized and analyzed for their susceptibility to commonly used antibiotic. The identification and typing of clinical isolates was carried out by a modified indirect hemagglutination assay combined with a multiplex PCR. The susceptibility of each isolate was analyzed by broth microdilution method against a panel of 21 antimicrobial compounds. We found that field isolates are highly resistance to gentamycin, bacitracin, lincomycin and tiamulin, but sensitive to ampicillin, clindamycin, neomycin, penicillin, danofloxacin and enrofloxacin. Furthermore, an individual susceptibility analysis indicated that enrofloxacin is effective to treat clinical isolates with the exception of those classified as serovar 1. The results presented here firstly demonstrate the susceptibility of Brazilian clinical isolates of H. parasuis to antimicrobials widely used by swine veterinary practitioners and strengthen the need to perform susceptibility test prior to antibiotic therapy during GD outbreaks. In addition, because only six antimicrobial drugs (28.6%) were found effective against field isolates, a continuous surveillance of the susceptibility profile should be of major concern to the swine industry.(AU)

Haemophilus parasuis é o agente etiológico da doença de Glãsser (GD), um processo infeccioso que acomete suínos e que se caracteriza por poliserosites fibrinosas sistêmicas, poliartrites e meningites. O uso intensivo de agentes antimicrobianos na produção de suínos, durante os últimos anos, tem disparado a seleção de cepas bacterianas resistentes a antibióticos. Desta maneira, a avaliação rotineira de susceptibilidade torna-se crucial para assegurar a correta seleção de um antimicrobiano eficaz contra este patógeno. Neste estudo, analisou-se a susceptibilidade antimicrobiana de 50 isolados clínicos de H. parasuis procedentes de granjas localizadas na região sul do Brasil. A identificação e tipificação dos isolados clínicos foi realizada através de uma PCR multiplex combinada com o teste de hemaglutinação indireta modificada. A susceptibilidade de cada isolado foi analisada pelo método de microdiluição em caldo utilizando-se um painel composto por 21 agentes antimicrobianos. Os resultados deste estudo indicam que as cepas clínicas de H. parasuis apresentam alta resistência à gentamicina, bacitracina, lincomicina e tiamulina, no entanto, são susceptíveis a ampicilina, clindamicina, neomicina, penicilina, enrofloxacina e danofloxacina. A análise de susceptibilidade realizada dentro de cada grupo de cepas de um mesmo sorovar indicou que a enrofloxacina é o antibiótico mais efetivo para tratar todos isolados clínicos com exceção daqueles pertencentes ao sorovar 1. Em termos gerais, neste trabalho, demonstra-se o perfil de susceptibilidade de isolados clínicos de H. parasuis aos antimicrobianos comumente utilizados pelos médicos veterinários especialistas em suínos, e reforça-se a necessidade da realização de testes de susceptibilidade antes do início da terapia com antibióticos durante surtos de DG. Além disso, como somente seis antimicrobianos (28.6%) foram efetivos contra os isolados clínicos, uma vigilância contínua do perfil de susceptibilidade aos antimicrobianos deve ser de grande preocupação para a indústria de suínos.(AU)

Susceptibility profile of Brazilian Rhodococcus equi isolates against azithromycin, clarithromycin and erythromycin / Perfil de susceptibilidade de isolados brasileiros de Rhodococcus equi frente à azitromicina, claritromicina e eritromicina

Rhodococcus equi infection treatment is usually a macrolide (azithromycin - AZM, clarithromycin - CLR and erythromycin - ERY) and rifampicin combination. However, resistance cases have been reported, especially for ERY. In view of the need of a study about Brazilian isolates susceptibility profile, this study aimed to characterize the minimum inhibitory concentration (MIC) of the macrolides - AZM, CLR and ERY - against 44 R. equi isolates. It was found all isolates CLR and AZM sensitive; however, for ERY, 27% (12/44) were classified as intermediate sensitivity. R. equi Brazilian isolates used here showed a large susceptibility profile, except against ERY, for which it was observed some resistance evidence. In order to avoid failures in the equine rhodococcosis therapy it was highlighted the importance of microbiological culture and antimicrobial susceptibility testing in vitro before beginning treatment.(AU)

No tratamento de infecções por R. equi, usualmente emprega-se uma combinação de macrolídeos (azitromicina - AZI, claritromicina - CLARI e eritromicina - ERI) e rifampicina. Todavia, casos de resistência frente a esses antimicrobianos vêm sendo reportados, especialmente à ERI. Tendo em vista a necessidade de um estudo sobre o perfil de susceptibilidade de isolados brasileiros, buscou-se verificar a concentração inibitória mínima (CIM) de AZI, CLARI e ERI frente a 44 isolados de R. equi de diferentes origens. Todos os isolados analisados demonstraram perfil de sensibilidade à AZI e CLARI; em contraste, frente à ERI, 27% (12/44) apresentaram sensibilidade intermediária. A fim de evitar falhas no tratamento da rodococcse equina, destaca-se a importância da cultura microbiológica e a realização de testes in vitro de susceptibilidade antimicrobiana de R .equi antes do início do tratamento.(AU)

ATIVIDADE ANTIMICROBIANA DE ÓLEOS ESSENCIAIS E BACTERIÓFAGOS SOBRE SALMONELLA HEIDELBERG MULTIRRESISTENTES E FORMADORAS DE BIOFILMES

A constante busca pelo aperfeiçoamento nos processos que garantam a segurança dos alimentos impulsionam estudos com o intuito de conhecer melhor as características de patógenos, que, quando presentes, causam impactos negativos ao setor avícola. Salmonella Heidelberg (SH) é o sorovar que se destacou nos últimos anos devido sua alta prevalência e multirresistência aos antimicrobianos. Buscou-se nesse trabalho informações quanto à formação de biofilmes, à suscetibilidade antimicrobiana, e à detecção de genes de virulência, permitindo, assim, melhor entendimento e maneiras alternativas de eliminação da SH. Encontramos variados perfis genotípicos (56), diferentes graus de formação de biofilme e altas taxas de multirresistência (125/126 - 99,2%), sugerindo que há uma diversidade de isolados de SH em produtos avícolas, o que pode indicar a existência de fontes de contaminação variáveis na indústria de alimentos. Atualmente, o mundo está enfrentando um crescente surgimento de bactérias resistentes aos antibióticos e a necessidade de reduzir o seu uso indiscriminado é fundamental. A procura de novos compostos antimicrobianos a partir de espécies vegetais, como óleos essenciais (OEs), e o uso de bacteriófagos (fagos), tem se mostrado bastante expressiva. Os fagos são predadores naturais de bactérias, onipresentes no ambiente e com alta especificidade ao hospedeiro, inofensivo para homens e animais. Os OEs são utilizados desde a idade média nos mais diferentes ramos das indústrias farmacêutica, sanitária, agrícola e de alimentos, e sua atividade bactericida também é tida como destaque. Nesse contexto, ambos são considerados alternativas valiosas e uma oportunidade de reduzir o uso de antimicrobianos. Avaliou-se a capacidade de biocontrole com o uso de três bacteriófagos (UPF_BP1, UPF_BP2, UPF_BP3) isolados ou combinados (pool) para prevenção e remoção de biofilmes de SH em superfície de poliestireno, em tempos de 3, 6 e 9 horas de ação. Os fagos individuais e em combinação demonstraram reduções na adesão de SH em até 83,4%, e remoção do biofilme pré-formado de até 64,0%. Ressalta-se que o uso de combinações sinérgicas entre os fagos é a mais indicada por potencializar a redução, bem como o uso no condicionamento de superfícies ser mais eficaz do que em biofilmes pré-formados. No teste com os OEs, avaliou-se a ação in vitro de cinco óleos (orégano, canela, tomilho, cravo e gengibre) sobre os isolados de SH, avaliando atividade antimicrobiana em ágar difusão e concentração inibitória mínima (CIM). O orégano e a canela obtiveram ação antimicrobiana em baixas concentrações sobre os isolados. Além disso, o efeito do OE de orégano foi testado em matriz cárnea nas temperaturas de 12±1ºC e a 4±1ºC por 0, 1, 3 e 5 dias, sendo eficiente para redução da carga microbiana em diferentes temperaturas e tempo de contato com a matriz confrontada, enfatizando a importância da associação à baixas temperaturas. Com esses resultados temos disponíveis métodos naturais que podem ser alternativas para o controle desse patógeno, e contribuem para o futuro uso de bacteriófagos como medida de condicionamento de superfícies no biocontrole de biofilmes de SH.

The constant search for improvement in processes that guarantee food safety, stimulate studies in order to better understand pathogens characteristics, if present, causes negative impacts to poultry sector. Salmonella Heidelberg (SH) is the sorovar that has stood out in recent years due to its high prevalence and antimicrobials resistence. The objective of this research was to find information regarding the biofilm formation, antimicrobial susceptibility, and virulence genes detection, thus allowing a better understanding and alternative ways to eliminate SH. We found varied genotypic profiles (56), different biofilm formation degrees and high multi-resistance rates (125/126 -99.2%), suggesting that there is a diversity of SH isolates in poultry products, which may indicate existence of sources contamination at food industry. Currently, the world is facing an increasing emergence of antibiotic resistant bacteria and the need to reduce their indiscriminate use is fundamental. The search for new antimicrobial compounds from plant species, such as: the essential oils (EOs) and also the use of bacteriophages (phages), has been shown to be expressive. Phages are natural predators of bacteria, they are ubiquitous in environment and with high specificity to the host, harmless to man and animals. EOs have been used since middle ages in most different branches of pharmaceutical, sanitary, agricultural and food industries, and their bactericidal activity is also highlighted. In this context, both are considered valuable antimicrobial alternatives and an opportunity to reduce the use of antimicrobials. The biocontrol ability was evaluated using three bacteriophages (UPF_BP1, UPF_BP2, UPF_BP3) isolated or combined (pool) to prevent and remove SH biofilms on polystyrene surfaces, in 3, 6 and 9 h of action. Individual and combined phages showed reductions in SH adherence up to 83.4%, and preformed biofilm removal up to 64.0%. It´s noteworthy that the use of synergistic combinations between phages is most indicated, since it has enhanced reduction, as well as use in surface conditioning to be more effective than in preformed biofilms. In test with EOs, in vitro action of five oils (oregano, cinnamon, thyme, cloves and ginger) on SH isolates was evaluated, evaluating antimicrobial activity in diffusion agar, minimum inhibitory concentration (MIC). Oregano and cinnamon obtained antimicrobial action in low concentrations on isolates. In addition, the effect of EO of oregano was tested in a meat matrix at temperatures of 12±1ºC and at 4±1ºC for 0, 1, 3 and 5 days, being efficient for reducing the microbial load at different temperatures and time of contact with the confronted matrix, emphasizing the importance of association with low temperatures. With these results we have available natural methods that can be alternatives for pathogen control and contribute to future use of bacteriophages as a measure of surface conditioning in SH biofilms biocontrol. With these results we have available natural methods that can be alternatives for pathogen control and contribute to future use of bacteriophages as a measure of surface conditioning in SH biofilms biocontrol.

FATORES DE RISCO PARA MASTITE BOVINA E AVALIAÇÃO FENOTÍPICA DE RESISTÊNCIA ANTIMICROBIANA

A mastite bovina é a doença mais comum e que mais causa prejuízos econômicos em rebanhos leiteiros de todo o mundo. Objetivou-se com o presente estudo avaliar os fatores de risco para mastite subclínica em rebanhos leiteiros do Estado de Goiás, identificar os micro-organismos gram-positivos causadores de mastite, bem como a sua resistência antimicrobiana. Foram coletadas amostras de leite de 1.034 vacas em lactação de 27 propriedades leiteiras localizadas no Estado de Goiás e realizadas análises de contagem de células somáticas (CCS), exame bacteriológico e teste de sensibilidade a antimicrobianos. Foi aplicado um checklist em cada propriedade participante para obtenção de dados sobre os animais, as propriedades e o manejo higiênico e sanitário dos rebanhos. Os fatores de risco para mastite foram avaliados em modelo linear generalizado misto. Das 27 propriedades, 11 (40,74%) tinham CCS do tanque acima de 500.000 células/mL, portanto acima do limite máximo estabelecido pela legislação brasileira. A prevalência de mastite subclínica nos rebanhos (CCS > 200.000 células/mL) foi de 54,93%. Os principais fatores de risco associados à ocorrência de mastite subclínica em vacas leiteiras foram idade avançada, úbere penduloso e estágio de lactação avançado. Foram identificados 216 micro-organismos, cocos gram-positivos. Staphylococcus spp. (53,10%), particularmente S. aureus (30,09%), destacou-se como um dos agentes mais comuns envolvidos na etiologia da mastite subclínica bovina, seguido de Streptococcus spp. (22,12%) e Enterococcus sp. (16,81%). As maiores taxas de resistência antimicrobiana foram de Staphylococcus aureus à penicilina (76%) e ampicilina (74%), Streptococcus spp. à neomicina (65,08%), gentamicina (46,03) e tetraciclina (43,66%) e Enterococcus spp. à tetraciclina (52,38%). Foram encontrados isolados de Streptococcus spp. multirresistentes (18,06%).

Bovine mastitis is the most common disease that causes the most economic losses in dairy herds around the world. The objective of this study was to evaluate the risk factors for subclinical mastitis in dairy herds in the State of Goiás, to identify the gram-positive microorganisms that cause mastitis, as well as their antimicrobial resistance. Milk samples were collected from 1,034 lactating cows from 27 dairy farms located in the State of Goiás and analyzes of somatic cell count (SCC), bacterial examination and antimicrobial sensitivity test were performed. A research checklist was applied to each participating property to obtain data on the animals, the properties and the hygienic and sanitary management of the herds. Risk factors for mastitis were assessed using a mixed generalized linear model. Of the 27 properties, 11 (40.74%) had SCC of the tank above 500,000 cells/mL, therefore above the maximum limit established by Brazilian legislation. The prevalence of subclinical mastitis in herds (SCC> 200,000 cells / mL) was 54.93%. The main risk factors associated with the occurrence of subclinical mastitis in dairy cows were old age, pendulous udder and advanced lactation stage. 216 microorganisms were identified, gram-positive cocci. Staphylococcus spp. (53.10%), particularly S. aureus (30.09%), stood out as one of the most common agents involved in the etiology of bovine subclinical mastitis, followed by Streptococcus spp. (22.12%) and Enterococcus sp. (16.81%). The highest rates of antimicrobial resistance were Staphylococcus aureus to penicillin (76%) and ampicillin (74%), Streptococcus spp. to neomycin (65.08%), gentamicin (46.03) and tetracycline (43.66%) and Enterococcus spp. tetracycline (52.38%). Isolates of Streptococcus spp. multiresistant (18.06%).

PERFIL DE RESISTÊNCIA AOS ANTIMICROBIANOS DE COCOS GRAM-POSITIVOS E BACILOS GRAM-NEGATIVOS ISOLADOS DO AMBIENTE E SÍTIO CIRÚRGICO SUPERFICIAL DE CÃES

As infecções causadas por organismos resistentes a múltiplos fármacos (multi-drug resistance MDR) estão associadas à maior morbidade, mortalidade e aumento significativos nos custos com cuidados da saúde. Cocos Gram-positivos e bastonetes Gram-negativos são os grupos de bactérias mais frequentemente relacionadas a infecção do sítio cirúrgico em cães. Dentro do contexto de saúde única, é imperativo o aprimoramento contínuo de métodos de avaliação de contaminação e infecção bacteriana no ambiente hospitalar veterinário. O presente estudo objetivou avaliar o perfil de resistência de cocos Gram-positivos e bastonetes Gram-negativos isolados nas mãos do cirurgião, antes e após a desinquinação, no ambiente e sítio cirúrgico, durante o transoperatório de cirurgias limpas/limpas-contaminadas (G1;n=20) e cirurgias contaminadas (G2;n=10). Das 150 amostras coletadas, as do ambiente (n=30) foram obtidas pela exposição de placa com ágar Brain Heart Infusion na sala cirúrgica durante o procedimento, enquanto as do sítio cirúrgico (n=60) e as das mãos do cirurgião (n=60) foram coletadas por cotonete estéril e semeadas em ágar sangue e MacConkey. Todas as placas foram incubadas a 37ºC por 24h em estufa bacteriológica sob condições anaeróbias. Colônias sugestivas de cocos Gram-positivos e bastonetes Gram-negativos foram submetidas a testes bioquímicos para identificação dos gêneros. Por fim, foi realizado o teste de susceptibilidade aos antimicrobianos por disco difusão em ágar Müller-Hinton. Foram obtidos 43 isolados com características morfológicas e bioquímicas de Staphylococcus spp. e 13 de bastonetes Gram-negativos. No G1 foram isoladas cepas de Staphylococcus spp. coagulase negativa (SCoN) (18/21), Staphylococcus spp. coagulase positiva (SCoP) (2/21) e Pseudomonas spp. (1/21), e no G2 foram isolados SCoN (14/35), SCoP (7/35), Proteus spp. (6/35), E. coli (3/35), Pseudomonas spp. (1/35) e Salmonella spp. (1/35). A proporção de resistência a antimicrobianos das bactérias isoladas variou de 27 a 100%, e a prevalência de MDR foi de 88% em SCoN, 100% em SCoP e 77% em bastonetes Gram-negativos. Dois pacientes do G2 apresentaram infecção do sítio cirúrgico superficial pós-operatório, sendo isoladas cepas de SCoP resistente à meticilina, quinolonas e MDR, Proteus spp. resistente à enrofloxacina e MDR, e Pseudomonas spp. resistente à enrofloxacina. O alto índice de resistência de bactérias comensais encontradas na pele de cães no nosso estudo é alarmante. SCoN são patógenos comunitários relacionadas a infecções hospitalares em hospitais humanos e veterinários, sua presença em pacientes hígidos e em profissionais veterinários representam importante fonte de infecção no contexto de saúde única. Vigilância contínua e aplicação de programas de gestão de antimicrobianos são essenciais na luta contra essa ameaça.

Infections caused by multidrug-resistant (MDR) organisms are associated with increased morbidity, mortality and health care spending. Gram-positive cocci and Gram-negative bacilli are bacterial species frenquently related with surgical site infections in dogs. In the context of one health, become necessary the continuous improvement of evaluation methods of bacterial infection and contamination in the veterinary hospital environment. The present project aims to evaluate the antimicrobial profile of Gram-positive cocci and Gram-negative bacilli isolated of the surgical site and room during the intraoperative period and of the surgeons hands, before and after antisepsis. All samples were obtained during intraoperative of clean/clean-contaminated (G1) and contaminated surgery (G2). A total of 153 samples were collected, of which the environmental samples were obtained by exposure of Brain Heart Infusion agar plate in the surgical room during the procedure and samples from the surgical site and surgeons hands were collected by swabs and seeded on blood and Macconkey agar. The plates were incubated at 37ºC for 24h. Suggestive bacterial colonies for Gram-positive cocci and Gram-negative bacilli were submitted to biochemical test for genus differentiation. Finally, antimicrobial susceptibility testing was performed by disk diffusion method. Forty-three isolates with morphological and biochemical characteristics of Staphylococcus spp. and 13 of Gram-negative bacilli were obtained. Were isolated coagulase-negative staphylococci (CoNS) (18/21), coagulase-positive staphylococci (CoPS) (2/21) and Pseudomonas spp. (1/21) in G1, and CoNS (14/35), CoPS (7/35), Proteus spp. (6/35), E. coli (3/35), Pseudomonas spp. (1/35) and Salmonella spp. (1/35) in G2. Multiple drug resistance rate was 88% in CoNS, 100% in CoPS and 77% in Gram-negative bacilli. The high rate of resistance of commensal bacteria found on the skin of dogs in our study is worrying. SCoN are community pathogens related to nosocomial infections in human and veterinary hospitals, their presence in healthy patients and in veterinary professionals represent an important source of infection in the one health context. Continuous surveillance and application of antimicrobial stewardship programs are essential in the fight against this threat.

Determinação da concentração inibitória mínima (CIM) in vitro de cepas de Lawsonia intracellularis isolados no Brasil

O objetivo deste estudo foi avaliar a atividade antimicrobiana in vitro contra isolados brasileiros e uma cepa vacinal de Lawsonia intracellularis. Os antimicrobianos testados foram a gamitromicina, a tilvalosina e a espectinomicina. A concentração inibitória mínima (CIM) foi determinada pela atividade antimicrobiana que inibiu 90% do crescimento de L. intracellularis em cultura de células em comparação com o controle, nas concentrações finais de 0,125 a 128 g/mL. Foram testados para todos os antimicrobianos às atividades intracelulares e extracelulares. A tilvalosina foi o princípio mais ativo contra os isolados de L. intracellularis, apresentando uma concentração inibitória de 16g/ml, enquanto que a gamitromicina e espectinomicina apresentaram uma atividade intermediária com uma concentração inibitória variando de 64 a 32g/ml para os mesmos isolados. Em relação à cepa vacinal, houve ação da gamitromicina, que apresentou inibição na menor concentração, 0,125ug/ml. Portanto, todos os antimicrobianos testados neste estudo in vitro apresentaram eficácia na inibição de crescimento dos isolados brasileiros e a gamitromicina também sobre a cepa vacinal.

The objective of this study was to evaluate the antimicrobial activity in vitro against Brazilian isolates and a vaccine strain of Lawsonia intracellularis. The antimicrobials tested were gamithromycin, tylvalosin and spectinomycin. The minimum inhibitory concentration (MIC) was determined by the antimicrobial activity that inhibited 90% growth of L. intracellularis in cell culture compared to the control at final concentrations of 0.125 to 128 g/ml. All antimicrobials were tested by intracellular and extracellular activity. Tylvalosin was the most active principle against L. intracellularis isolates, presenting an inhibitory concentration of 16 g/ml, whereas gamithromycin and spectinomycin had an intermediate activity with an inhibitory concentration varying from 64 to 32 g/ml for the same isolates. The vaccine strain exhibited an important inactivation against gamithromycin, showing inhibition at the lowest concentration, 0.125 g/ml. Therefore, all three antimicrobials tested in this study showed efficacy in the inhibition of growth of the Brazilian isolates and gamithromycin also on the vaccine strain.

Perfil de susceptibilidade antimicrobiana de bactérias isoladas de queijos coalho / Profile of susceptibility of bacteria, isolated from curdle cheese

A susceptibilidade antimicrobiana de isolados de Escherichia coli, (36), Staphyloccocus coagulase positiva(15) e Salmonella spp. (16) provenientes de queijos coalho comercializados na orla de Salvador (BA) foi avaliada pelo método de difusão. Os antibióticos testados foram amplicilina (AMP), amoxicilina/ácido clavulânico (AMC), cefalotina (CFL), cefotaxima (CTX), levofloxacina (LVX), ciproflaxina (CIP), norfloxacina (NOR), clorafenicol (CLO), tetraciclina (TET), nitrofurantoína (NIT), gentamicina (GEN), sulfametoxazol-trimetropim (SUT), eritromicina (ERI) e oxacilina (OXA). Todos os isolados de E. coli apresentaram susceptibilidade aos antibióticos CIP, CTX, LVX, NOR, TET e SUT, enquanto 10 mostraram-se resistentes a AMP, GEN, AMC, CLO, NIT e CFL, sendo um deles resistente a quatro antibióticos. Os isolados de Salmonella entérica subsp. enterica, sorovares: Hadar (7), Newport (6), Ohio (2) e Oranienburg(1) foram susceptíveis aos antibióticos CLO, CIP, LVX, CTX, SUT, GEN e NOR. S. Oranienburg mostrou-se multirresistente a quatro antibióticos. Para Staphyloccocus coagulase positiva NIT, TET, CLO e SUT foram eficazes; no entanto, verificou-se resistência a GEN, OXA (13,3%) e a ERI (26,7%). Os resultados apontam que os antibióticos de uso comum em terapêutica humana e veterinária não foram eficazes contra os micro-organismos testados, tornando essencial a adoção de medidas para controlar o uso indiscriminado na terapêutica humana e animal e, consequentemente, reduzir o aparecimento de resistência. (AU)

CITOMETRIA DE FLUXO COMO FERRAMENTA NA DETERMINAÇÃO DA SUSCEPTIBILIDADE ANTIMICROBIANA

A resistência antimicrobiana é uma preocupação constante. Para evitar o surgimento de novas cepas bacterianas multirresistentes é necessário investir em pesquisas e tecnologias de avaliação da atividade antimicrobiana. Diversos métodos laboratoriais estão disponíveis para avaliação da susceptibilidade antimicrobiana in vitro, permitindo a escolha terapêutica correta em aproximadamente 20 h após cultura positiva. Nesse contexto, o desenvolvimento de novas metodologias para avaliar o perfil de susceptibilidade antimicrobiana, de forma rápida e precisa, irá contribuir para a utilização racional dos fármacos e, consequente, redução e/ou controle da resistência bacteriana, e aumento na sobrevida dos pacientes. O objetivo do nosso trabalho foi desenvolver um protocolo rápido de determinação de susceptibilidade aos antimicrobianos por meio da técnica de citometria de fluxo. Para padronização desse procedimento utilizamos 6 antimicrobianos, uma cepa bacteriana de Escherichia coli (ATCC 25922) sensível a todos os antimicrobianos, além de isolados clínicos de E. coli resistentes aos mesmos antimicrobianos. Os isolados foram submetidos previamente ao método de disco-difusão para avaliação do perfil de susceptibilidade. As cepas selecionadas foram cultivadas em caldo LB, lavadas e quantificadas por citometria de fluxo. Concentrações padrões dos antimicrobianos foram adicionadas à 104 E.coli e incubadas por 1, 2 ou 3 h à 37°C. Em seguida, as amostras foram marcadas com iodeto de propídeo (PI) e analisadas por citometria de fluxo. A determinação da viabilidade bacteriana baseou-se no conceito de que o marcador de ácido nucléico PI é capaz de penetrar membranas celulares danificadas, marcando o DNA celular e assim, diferenciando as populações viáveis e inviáveis. Para validação da técnica, cada amostra, em seus respectivos tempos de tratamento foram submetidas também a contagem bacteriana por meio de plaqueamento em meio LB, e a taxa de sobrevivência/crescimento foi determinada após incubação à 36°C por 18-24 h. A utilização da técnica de citometria de fluxo permitiu avaliar a susceptibilidade antimicrobiana em poucas horas. Porém ao compararmos a técnica com a contagem em placas, não foi possível estabelecer uma correlação positiva, pois a citometria apresentou um percentual de viabilidade superior ao método tradicional. Isso pode ser explicado pela presença de subpopulações viáveis, porém não cultiváveis, incapazes de formar colônias em ágar. Por outro lado, se considerarmos os isolados resistentes, a citometria de fluxo possibilitou determinar a resistência antimicrobiana com precisão, fator determinante para o sucesso no tratamento de infecções por microrganismos multirresistentes. A citometria de fluxo pode ser aprimorada como uma alternativa na detecção de cepas multirresistentes.

Antimicrobial resistance is a relevant matter to public health. Investments on research and new technologies to evaluate antimicrobial activity are much needed to avoid the surge of new multiresistant strains. Several techniques are available to evaluate antimicrobial activity in vitro in less than 24 h after a positive isolation, allowing to properly choosing the right antibiotic to be used. In this scenario, the development of new methods to quickly and precisely evaluate the antimicrobial susceptibility profile of bacterial isolates would be invaluable for the rational use of antibiotics and, as a consequence, to reduce or even control the surge of bacterial resistance and to prolong patients life expectation. Thus, in this study our main goal was to develop a quick protocol to evaluate antimicrobial susceptibility using flow cytometry. We used six antimicrobial drugs, a strain of Escherichia coli (ATCC 25922) susceptible to all antimicrobials, and clinical isolates of E. coli resistant to the same antimicrobial drugs. Prior to testing, the susceptibility profile of all isolates was tested by the disc-diffusion method. The isolates were then cultivated in liquid LB, washed and quantitated by flow cytometry. Standard concentration of antimicrobial drugs were added to 104 E. coli cells and incubated for 1, 2 or 3 h at 37ºC. After that, the samples were mixed with propidium iodine (PI) and analyzed by flow cytometry. Viable bacteria were differentiated from unviable in that PI penetrates damaged membranes staining the DNA of death bacteria. As controls to validate this procedure, each bacterial isolate at each indicated time was also collected and seeded on LB agar plate to enumerate the number of viable cells by the classical method and the growing/survival rate was also evaluated in the same samples after incubating for 20h at 36ºC. By using flow cytometry we were able estimate antimicrobial susceptibility in few hours. However, it was not possible to set a positive correlation with plaque counting in that we found a higher percentile of viable cells by flow cytometry. This phenomenon might be explained by the presence of viable but non-cultivable bacterial subpopulations unable to form colonies in agar plates. In the other hand, by using flow cytometry and considering the resistant isolates, we were able to define precisely the resistant characteristics of a given isolate, and this is invaluable for treating infection by multidrug resistant isolates. Thus, we conclude that flow cytometry should be optimized and used as an alternative tool to detect multiresistant bacterial isolates.

AVALIAÇÃO DA ATIVIDADE ANTIMICROBIANA DOS EXTRATOS DE Hamamelis virginiana L.

Diversas plantas possuem efeitos antimicrobianos, podendo representar uma alternativa terapêutica para variadas doenças infeciosas. O objetivo do trabalho foi avaliar in vitro a atividade antibacteriana dos extratos glicólicos de própolis e de Hamamelis virginiana L. frente a cepas padrões de Staphylococcus aureus (ATCC 25923) e Escherichia coli (ATCC 25922). A Concentração Inibitória Mínima (CIM) e a Concentração Bactericida Mínima (CBM) foram determinadas através de testes de microdiluição em caldo Muller Hinton, sendo as drogas preparadas em dimetilsulfóxido (DMSO) e o inóculo padronizado para corresponder a 0,5 da escala de McFarland (106 UFC/ml). As Concentrações Inibitórias Mínimas e as Concentrações Bactericidas Mínima do extrato de Hamamelis virginiana L. foram, respectivamente, para S. aureus 100 g/ml e 200 g/ml, e para E. coli 200 g/ml e 250 g/ml. Nas condições experimentais do estudo, os extratos apresentaram atividade antibacteriana sobre as cepas S. aureus e E. coli.

Several plants have antimicrobial effects, which may represent an alternative therapy for various infectious diseases. The objective was to evaluate the in vitro antibacterial activity of glycolic extracts of propolis and Hamamelis virginiana L. against strains patterns of Staphylococcus aureus (ATCC 25923) and Escherichia coli (ATCC 25922). The Minimum Inhibitory Concentration (MIC) and Minimum Bactericidal Concentration (MBC) were determined by broth microdilution tests on Müller Hinton broth, and the drugs prepared in dimethylsulfoxide (DMSO) and standardized inoculum to be 0.5 of the McFarland scale (106 CFU / ml). The Minimum Inhibitory Concentrations and Minimum Bactericidal Concentrations Hamamelis virginiana L. extract were respectively for S. aureus 100 ug / ml and 200 ug / ml and E. coli 200 ug / ml and 250 ug / ml. In the tested experimental conditions, the extracts showed antibacterial activity against the strains S. aureus and E. coli.

Fatores de virulência, sorotipos e susceptibilidade antimicrobiana de amostras de Escherichia coli isoladas de alimentos no estado de Minas Gerais, Brasil

Escherichia coli destaca-se com um dos principais contaminantes microbiológicos de alimentos. Além de ser empregada como indicador sanitário, pode também ocasionar toxinfecções devido aos diferentes patotipos diarreiogênicos. Em Minas Gerais, 396 alimentos diversos foram avaliados quanto a presença de E. coli e esta quanto a suscetibilidade antimicrobiana, a presença dos fatores de virulência eae, bfpA, eltB, estA, st1, stx1, stx2, ipaH e aatA, típicos de E. coli diarreiogênica, e quanto a seus sorotipos. A presença de E. coli foi identificada entre 41 (10,3%) alimentos, principalmente entre os produtos lácteos e as refeições de pronto consumo. Dentre as 220 amostras de E. coli analisadas quanto a suscetibilidade antimicrobiana, observou-se 60 (27,3%) resistentes e/ou com perfil de resistência intermediária. Os fármacos da classe aminoglicosídeos (amicacina e gentamicina) mostraram-se mais eficazes, já os lactâmicos, em especial a ampicilina, apresentaram o maior percentual de amostras resistentes, 10,9%. A resistência a mais de um antimicrobiano e a mais de uma classe terapêutica foi observada entre 25 (41,7%) e oito (13,3%) amostras de E. coli, respectivamente. Quanto aos fatores de virulência, não foi identificado genes característicos dos patotipos de EPEC, STEC, EAEC e EIEC. A presença do patotipo ETEC limitou-se a duas amostras (0,9%) de E. coli, ambas contendo dos genes eltB, estA, st1, responsáveis pela produção das enterotoxinas LT, STp e STh, respectivamente, e caracterizadas como sorotipos O9:H10 e O9:H33. Até o momento, estes sorotipos não haviam sido descritos em E. coli isoladas de alimentos.

Occurrence of foodborne diseases, relevant public health problem, has increased significantly not only in Brazil but also in several countries. In order to ensure food quality and safety, many institutional initiatives, legal and community, have been developed in our country. Among these, we highlight the Food Quality Monitoring Program (called PROGVISA-MG), an important instrument for planning and structuring actions of Health Surveillance in Minas Gerais state and, in addition, compliance with national and state guidelines in as regarding the prevention and investigation of foodborne disease outbreaks. Among the main microbial foods contaminants highlight to Escherichia coli, bacterium that is part of the humans intestinal tract and warm-blooded animals, being constantly eliminated in the environment, polluting the soil, water and food. These bacteria, beises being used as a health indicator, may also cause foodborne diseases, since there are many strains of diarrheagenic E. coli to humans and animals. In this context, we aimed to identify the presence of E. coli in food collected by Food Quality Monitoring Program and foodborne diseases outbreaks in Minas Gerais state, and evalute them for antimicrobial susceptibility, the presence of virulence factors (eae, bfpA, eltB, estA, st1, stx1, stx2, ipaH e aatA) and serotypes of diarrheagenic E. coli. In 51 (12.9%) of 396 foods analyzed, was detected the presence of the coliform group 45ºC and 41 (10.3%) of the presence of E. coli, mainly among dairy products and meals ready to consumption. By analysis of 220 strains on the antimicrobial susceptibility profile, it was observed that 60 (27.3%) showed resistance or intermediate resistance profile of at least one antimicrobial agent. The drugs of the class of aminoglycosides (amikacin and gentamicin) were more effective, those of the -lactam class, especially ampicillin, showed the highest percentage of resistant strains, 10.9%. The resistance to more than one antimicrobial agent and more than one therapeutic group was observed in 25 (41,7%) 8 (13,3%) strains, respectively. The multidrug resistance, measured by index MAR (Multiple Antibiotic Restistence) was observed in 6 (10%) sample. Only one strain was producing EBSL (extended spectrum -lactamase). For virulence factors, it was not identified characteristic genes of EPEC, STEC, EAEC and EIEC pathotypes. The presence of ETEC characteristic pathotype was limited to two strains (0.9%), isolated from a meal made by chicken (from a foodborne diseases outbreaks) and the other a cheese bread (from the the Food Quality Monitoring Program), both containing the genes eltB, estA, st1, responsible for the production of enterotoxin LT, STp and STh, respectively, and characterized as serotypes O9: H10 and O9: H33, not seen in E. coli isolated from food samples yet.

Susceptibilidade antimicrobiana e detecção de genes relacionados à virulência de Escherichia coli isolada em insumos alimentares utilizados na avicultura

A contaminação da alimentação animal por organismos patogênicos é uma preocupação crescente visto que esta etapa é o início da cadeia de um dos principais segmentos que é a pecuária para alimentação humana. Este estudo teve como objetivo verificar a presença de Escherichia coli em insumos utilizados na alimentação de aves, bem como analisar a susceptibilidade a diferentes classes de antimicrobianos e a presença genes de virulência nestes isolados. Um total de 320 insumos alimentares para aves (farinhas de origem animal n=252, farelos vegetais n=31 e rações n=37) provenientes de cinco empresas do Rio Grande do Sul foram analisados quanto à presença de E. coli. Os isolados foram avaliados quanto à susceptibilidade a 19 antimicrobianos pelo método de disco difusão; e quanto à presença de genes de virulência de E. coli patogênica aviária (iroN, ompT, hlyF, iss e iutA) e de E. coli Diarreiogênica (elt, ipaH, ehxA, eaeA, stx1 e 2, aggR, aap e AAprobe). As amostras positivas para os genes de virulência foram classificadas filogeneticamente. A presença de E.coli foi encontrada em 33/252 (13,09%) das amostras de farinhas de origem animal; em 13/31 (41,94%) das amostras de farelos vegetais e em 3/37(8,11%) das amostras de rações. Foram isoladas 115 amostras de E. coli de farinhas de origem animal, 33 de farelos vegetais e 12 de rações. Dos isolados de farinha de origem animal, dois apresentaram apenas um gene (iutA ou iss), três apresentaram dois genes (iroN e iss) e cinco o gene elt, sendo classificados como E. coli enterotoxigênica (ETEC termo lábil). Um isolado de farinha de carne bovina apresentou quatro dos cinco genes de APEC (iroN, ompT, hlyF e iutA) e o gene eaeA, sendo classificado como E. coli enteropatogênica (EPEC atípica). Dos isolados de ração, dois também apresentaram o gene elt. Os isolados das amostras de farelos vegetais não apresentaram nenhum dos genes de virulência avaliados. Pela classificação filogenética os isolados com fatores de virulência pertencem aos grupos A e B1. Isolados das rações foram resistentes a um maior número antimicrobianos em relação aos isolados das farinhas animais e dos farelos. Entretanto, altos valores de resistência foram observados nos isolados de todos os insumos para os antimicrobianos sulfonamida (60% nas farinhas de origem animal, 75,75% nos farelos vegetais e 33,33% nas rações); cefazolina (64% nas farinhas de origem animal, 81,81% nos farelos vegetais e 41,66% nas rações) e ampicilina (16,52% nas farinhas de origem animal, 33,33% nos farelos vegetais e 58,33% nas rações). Isolados com perfil multirresistente, com resistência a três ou mais classes de antimicrobianos, também foram encontrados em todos os insumos. Os resultados encontrados neste trabalho destacam o potencial risco à segurança de alimentos que são a base da nutrição avícola. E. coli possui natureza ubíqua e pode ser agente patogênico intestinal e extraintestinal, além de servir como reservatório de genes de virulência e apresentar resistência aos antimicrobianos utilizados para os animais e para o homem. Parâmetros de contaminação para E. coli nos insumos alimentares para animais devem ser estabelecidos como estratégia de controle.

Microbiological contamination of animal feed by pathogenic organisms is a growing concern since this is the beginning of the chain of one of the main segments that are livestock for human consumption. The aim of our study was to analyze the frequency of antimicrobial susceptibility and virulence genes among E. coli strains isolated from food ingredients and animal feed used in poultry production. A total of 320 poultry food samples (animal meal n = 252, vegetables meal n = 31 and feed n = 37) from five companies were analyzed for the presence of E. coli. Isolates were evaluated for susceptibility to 19 antimicrobials by disk diffusion method; and for the presence of virulence genes described for APEC, avian pathogenic E. coli (iroN, ompT, hlyF, iss and iutA) and DEC, diarrheagenic E. coli (elt, ipah, ehxA, eaeA, stx1 and 2, aggR, aap and AAprobe). The positive samples for virulence genes were phylogenetically classified. E. coli occurred in 33/252 (13.09%) from animal meal samples; in 13/31 (41.94%) from plant meal samples and 3/37 (8.11%) from feed samples. A total of 115 E. coli were isolated from animal meal, 33 E. coli were isolated from vegetal meal and 12 E. coli were isolated from feed. From animal meal isolates, two had only one gene (iutA or iss), three presented two genes (iron and iss) and five presented the elt gene, being classified as enterotoxigenic E. coli (ETEC heat labile). A meat meal isolate showed four from five genes of APEC (iroN, ompT, hlyF and iutA) and the eae gene, being classified as enteropathogenic E. coli (EPEC atypical). Two isolates from feed also had the gene elt. The isolated from vegetal ingredients did not have any virulence genes evaluated. By phylogenetic classification isolates with virulence factors belonging to groups A and B1. Feed Isolates were resistant to an increased amount of antimicrobial compared to the isolates of animal and vegetal meal. However, high resistance rates were observed in isolated from all inputs to sulfonamides (60% on animal meal, 75.75% in vegetal meal and 33.33% in feed); cefazolin (64% on animal meal, 81.81% in vegetables vegetal meal and 58.33% in feed). Isolates with multidrug-resistant profile, resistant to three or more classes of antimicrobials, were also found in animal feed and food ingredients. The findings of this study highlight the potential risk to food safety that is the base of poultry nutrition. E. coli has ubiquitous nature and can be intestinal and extraintestinal pathogen, besides serving as virulence genes reservoir and present resistance to antimicrobials used in animals and humans. Contamination parameters for E. coli in food supplies for animals should be established as a control strategy.

Caracterização fenotípica e molecular de cepas de Pasteurella multocida

Entre as bactérias que habitam a cavidade oral e nasal dos animais, os constituintes da família Pasteurellaceae estão entre os microrganismos comensais ou oportunistas mais prevalentes. Apesar do número de doenças associadas e da diversidade de hospedeiros acometidos, o conhecimento sobre a patogenia desta bactéria ainda é restrito. Além disto, a análise da virulência de Pasteurella multocida, que ocasiona casos agudos e crônicos de cólera aviária, não é comum. Tais estudos são ainda mais raros para cepas circulantes no Brasil. O objetivo deste trabalho foi a caracterização fenotípica e molecular de 96 cepas de P. multocida isoladas de aves e de suínos no país. As subespécies e os biovares foram determinados através de testes bioquímicos, e os sorogrupos foram classificados pelo emprego de testes fenotípicos não sorológicos. A susceptibilidade in vitro a nove antimicrobianos também foi avaliada. Para os estudos genotípicos, foi realizada a pesquisa de 22 genes de virulência por multiplex-PCR, incluindo-se aqueles determinantes dos sorogrupos, a comparação dos perfis genéticos e a diferenciação molecular através de PCR-RFLP a partir dos genes ompH e oma87. Por último, os testes fenotípicos e moleculares para classificação dos sorogrupos foram comparados, e a distribuição dos genes foi relacionada com índices de patogenicidade in vivo das cepas para a identificação de marcadores moleculares. Um total de 87,5% (84/96) das cepas foi classificado na subespécie multocida. O biovar 3 foi o mais comum entre as cepas aviárias e suínas, sendo identificado respectivamente em 35,7% (20/56) e 25% (10/40) dos casos. Entre as cepas aviárias, 90,7% (49/54) foram classificadas no sorogrupo A através do multiplex-PCR, e 3,7% (2/54) não foram classificados em um dos dois sorogrupos. Em contraste, somente 75,9% (41/54) das cepas aviárias foram identificadas no tipo capsular A através do teste fenotípico e 20,4% (11/54) não foram tipificadas. Resultados semelhantes foram observados entre os isolados suínos. As taxas de susceptibilidade das cepas aviárias foram superiores a 80% para os antimicrobianos testados, com exceção à enrofloxacina e ao sulfafurazol. Somente amoxicilina, ciprofloxacina e gentamicina inibiram o crescimento de mais de 80% das cepas suínas. 8,9% (5/56) dos isolados de origem aviária e 37,5% (15/40) das cepas suínas foram multirresistentes. A maioria dos genes (ompH, oma87, psl, plpB, exbD-tonB, fur, hgbA, nanH, nanB, sodA, sodC, pmHAS, ptfA) apresentou uma frequência superior a 90% e distribuição regular, independentemente da origem. As cepas foram agrupadas em 33 perfis, sendo o perfil 1 (toxA-; pfhA-; dcbF-; bcbD-; hsf-1-) o mais frequente, identificado em 16,7% (16/96) dos casos. O PCR-RFLP a partir do gene ompH permitiu a classificação das cepas aviárias em sete grupos moleculares, sendo predominante o grupo II, identificado em 42,9% (24/56) das situações. A detecção do gene pfhA indica a presença de cepas de alta patogenicidade em aves, e em segundo lugar, de cepas intermediárias. Este estudo proveu a caracterização fenotípica e molecular de cepas de P. multocida isoladas de aves e de suínos no Brasil e os seus resultados possibilitam a distinção futura dos isolados aviários quanto à patogenicidade.

The constituents of the Pasteurellaceae family are among the most prevalent commensal microorganisms or opportunistic pathogens that inhabit the oral and nasal cavity of the animals. The knowledge of the pathogenesis of this bacterium is still restricted, despite the number of related diseases and diversity of affected hosts. Similarly, analysis of the virulence of Pasteurella multocida, that causes acute and chronic cases of fowl cholera, is not common. Such studies are even rarer for the circulating strains in Brazil. The present work aimed to the phenotypic and molecular characterization of ninety-six P. multocida strains isolated from poultry and swine in the country. The subspecies and biovars were determined through biochemical scheme and the serogroups or capsular types were classified by employing non-serologic phenotypic tests. Furthermore, the susceptbility to nine antimicrobial agents was evaluated. For genotypic studies, the investigation of twenty-two virulence genes by multiplex-PCR, including those that are serogroups determinants, the comparing of the genetic profiles and the molecular differentiation by PCR-RFLP from ompH e oma87 were performed. Finally, the results of phenotypic and molecular tests for classification of serogroups were compared and the distribution of genes was related to in vivo pathogenic indices of strains for identification of molecular markers. 87.5% (84/96) of the strains were classified in multocida subspecies. The biovar 3 was more common among avian and swine strains, identified respectively in 35.7% (20/56) and 25% (10/40) of cases. Among avian strains, 90.7% (49/54) were classified in serogroup A by multiplex-PCR and 3.7% (2/54) were not classified in one of two serogroups. In contrast, only 75.9% (41/54) of avian strains were identified in the capsular type A through phenotypic test and 20.4% (11/54) were not typed. Similar results were observed among swine isolates. The susceptibility rates of avian strains were above 80% for the tested antimicrobials, except to enrofloxacin and sulfafurazol. Only amoxicillin, gentamicin and ciprofloxacin inhibited the growth of more than 80% of the swine strains. 8.9% (5/56) of avian isolates and 37.5% (15/40) of swine strains were multidrug-resistant. The majority of genes (ompH, oma87, psl, plpB, exbD-tonB, fur, hgbA, nanH, nanB, sodA, sodC, pmHAS, ptfA) had a frequency higher than 90% and regular distribution, regardless of source. The strains were grouped in 33 profiles and profile 1 (toxA-; pfhA-; dcbF-; bcbD-; hsf-1-) was most frequent, identified in 16.7% (16/96) of cases. The PCR-RFLP from ompH gene allowed the classification of avian strains in seven molecular groups. The predominant group II was identified in 42.9% (24/56) of cases. The detection of pfhA gene indicates the presence of highly pathogenic avian strains, and secondly, of intermediate strains. This study provided the phenotypic and molecular characterization of P. multocida isolated from poultry and swine in Brazil and its results enable future distinction of avian strains according the pathogenicity.

Comparison of wildlife and captivity rattlesnakes (Crotalus durissus terrificus) microbiota / Comparação da microbiota de cascavéis (Crotalus durissus terrificus) de vida-livre e cativeiro

The study evaluated and compared the aerobic microbiota from the oral cavity, cloaca and venom of Crotalus durissus terrificus snakes, recently caught from the wild and kept under quarantine (WQ), individual captivity (IC) and collective captivity (CC). Antimicrobial drug effectiveness on isolated agents also was assayed. From group I, II and III were isolated, respectively, 29 (63.04 percent), 38 (90.48 percent) and 21 (42.86 percent) microorganisms from the cloaca; 15 (32.61 percent), 3 (7.14 percent) and 25 (51.02 percent) microorganisms from the oral cavity; and, 2 (4.35 percent), 1 (2.38 percent) and 3 (6.12 percent) microorganisms from venom. The most frequent bacteria were Pseudomonas aeruginosa, Proteus vulgaris and Morganella morganii, with sensitivity to amikacin, gentamicin, norfloxacin, sulfazotrin and tobramycin. Snakes kept in semi-open captivity exhibited the fewest microorganisms in oral cavities, perhaps due to the environment in captivity, with different temperature gradients, running water, absence of daily handling, circulating air, possibility of moving around, daily cleaning, and sunlight access.(AU)

Este estudo avaliou e comparou a microflora aeróbica da cavidade oral, cloaca e veneno de serpentes Crotalus durissus terrificus recém-capturadas da natureza e mantidas sob quarentena (WQ), mantidas em cativeiro coletivo (CC) e em cativeiro individual (IC). A eficácia de drogas antimicrobianas de agentes isolados foi também avaliada. Foram isolados microorganismos dos grupos I, II e III respectivamente: 29 (63.04 por cento), 38 (90.48 por cento) e 21 (42.86 por cento) da cloaca; 15 (32.61 por cento), 3 (7.14 por cento) e 25 (51.02 por cento) da cavidade oral, e finalmente 2 (4.35 por cento), 1 (2.38 por cento) e 3 (6.12 por cento) do veneno. As bactérias mais frequentes foram Pseudomonas aeruginosa, Proteus vulgaris e Morganella morganii, com sensibilidade para amikacina, gentamicina, norfloxacina, sulfazotrina e tobramicina. Serpentes mantidas no cativeiro semi-aberto mostraram menor número de agentes infecciosos em cavidade oral, talvez devido ao ambiente de cativeiro com diferentes gradientes de temperatura, água corrente, ausência de manejo diário, ampla circulação de ar, possibilidade de movimentação pelos animais, limpeza diária e acesso ao Sol.(AU)

Prevalência e Susceptibilidade Antimicrobiana de Patógenos Causadores de Mastite em Rebanhos Leiteiros / Prevalence and antimicrobial susceptibility of pathogens causing mastitis in dairy herds

Os objetivos do presente estudo foram: a) avaliar a frequência de isolamentos de patógenos causadores de mastite em rebanhos leiteiros comerciais; b) determinar a susceptibilidade antimicrobiana de Staphylococcus spp. e Streptococcus spp. isolados de casos de mastite subclínica c) avaliar o perfil de multirresistência de Staphylococcus spp. e Streptococcus spp. d) Detectar o gene mecA em Staphylococcus spp. resistentes a oxacilina/meticilina; e) avaliar a associação entre as práticas de manejo e tratamento de mastite e a susceptibilidade antimicrobiana de Staphylococcus aureus isolados de rebanhos leiteiros. Foram selecionados para o presente estudo 13 rebanhos leiteiros a partir de um total de 60 rebanhos vinculados a um laticínio da região de Pirassununga/SP. Questionários previamente formulados foram respondidos pelos responsáveis do rebanho para avaliar a associação entre as práticas de manejo e tratamento de mastite e a susceptibilidade antimicrobiana de S. aureus. [...] Os testes de susceptibilidade realizados para as espécies de Staphylococcus spp. e Streptococcus spp. apresentaram alta susceptibilidade para a maioria dos antimicrobianos testados. Com exceção de Streptococcus agalactiae para ampicilina e sulfatrimetropin e os isolados de S. dysgalactiae para tetraciclina e clindamicina. A maioria dos Staphylococcus spp. e Streptococcus spp. não apresentaram perfil de multirresistência. Nenhum dos isolados de Staphylococcus spp. fenotipicamente resistentes a oxacilina/meticilina apresentaram o gene mecA. O maior fator de risco associado à susceptibilidade de S. aureus foi em relação à tetraciclina, penicilina, eritromicina e ampicilina para o não envio de amostras para cultura e antibiograma. Dois fatores de risco importantes identificados foram relacionados à ampicilina, ceftiofur, gentamicina, oxacilina e penicilina para o tratamento de mastite clínica e à enrofloxacina e tetraciclina para o tratamento de vaca seca

The aims of this study were: a) to evaluate the frequency of mastitis pathogens in commercial dairy herds, b) to determine the antimicrobial susceptibility of Staphylococcus spp. and Streptococcus spp. isolated from subclinical mastitis c) to evaluate the profile of multidrug resistance of Staphylococcus spp. and Streptococcus spp. d) to detect the mecA gene in Staphylococcus spp. resistant to oxacillin / methicillin, e) to evaluate the association between management practices and treatment of mastitis, and antimicrobial susceptibility of Staphylococcus aureus isolates from dairy herds. Thirteen dairy herds were selected from a total of 60 dairy farms in the region of Pirassununga / SP. Questionnaires formulated previously were answered by dairy farmers to evaluate the association between mastitis treatment practices and antimicrobial susceptibility. [...] The susceptibility tests performed for the species of Staphylococcus spp. and Streptococcus spp. showed high susceptibility to most antimicrobials tested. With the exception of Streptococcus agalactiae to ampicillin and sulfatrimetropin and isolates of S. dysgalactiae to tetracycline and clindamycin. Most Staphylococcus spp. and Streptococcus spp. did not show multidrug resistance profile. None of Staphylococcus spp. phenotypically resistant to oxacillin / methicillin showed the mecA gene. The major risk factor associated with susceptibility of S. aureus to tetracycline, penicillin, erythromycin and ampicillin was not sending samples for culture and sensitivity. Two important risk factors have been identified related to ampicillin, ceftiofur, gentamicin, penicillin and oxacillin for treatment of clinical mastitis and enrofloxacin and tetracycline for the treatment of dry cow dry cow therapy

Prevalência e Susceptibilidade Antimicrobiana de Patógenos Causadores de Mastite em Rebanhos Leiteiros / Prevalence and antimicrobial susceptibility of pathogens causing mastitis in dairy herds

Os objetivos do presente estudo foram: a) avaliar a frequência de isolamentos de patógenos causadores de mastite em rebanhos leiteiros comerciais; b) determinar a susceptibilidade antimicrobiana de Staphylococcus spp. e Streptococcus spp. isolados de casos de mastite subclínica c) avaliar o perfil de multirresistência de Staphylococcus spp. e Streptococcus spp. d) Detectar o gene mecA em Staphylococcus spp. resistentes a oxacilina/meticilina; e) avaliar a associação entre as práticas de manejo e tratamento de mastite e a susceptibilidade antimicrobiana de Staphylococcus aureus isolados de rebanhos leiteiros. Foram selecionados para o presente estudo 13 rebanhos leiteiros a partir de um total de 60 rebanhos vinculados a um laticínio da região de Pirassununga/SP. Questionários previamente formulados foram respondidos pelos responsáveis do rebanho para avaliar a associação entre as práticas de manejo e tratamento de mastite e a susceptibilidade antimicrobiana de S. aureus. [...] Os testes de susceptibilidade realizados para as espécies de Staphylococcus spp. e Streptococcus spp. apresentaram alta susceptibilidade para a maioria dos antimicrobianos testados. Com exceção de Streptococcus agalactiae para ampicilina e sulfatrimetropin e os isolados de S. dysgalactiae para tetraciclina e clindamicina. A maioria dos Staphylococcus spp. e Streptococcus spp. não apresentaram perfil de multirresistência. Nenhum dos isolados de Staphylococcus spp. fenotipicamente resistentes a oxacilina/meticilina apresentaram o gene mecA. O maior fator de risco associado à susceptibilidade de S. aureus foi em relação à tetraciclina, penicilina, eritromicina e ampicilina para o não envio de amostras para cultura e antibiograma. Dois fatores de risco importantes identificados foram relacionados à ampicilina, ceftiofur, gentamicina, oxacilina e penicilina para o tratamento de mastite clínica e à enrofloxacina e tetraciclina para o tratamento de vaca seca (AU)

The aims of this study were: a) to evaluate the frequency of mastitis pathogens in commercial dairy herds, b) to determine the antimicrobial susceptibility of Staphylococcus spp. and Streptococcus spp. isolated from subclinical mastitis c) to evaluate the profile of multidrug resistance of Staphylococcus spp. and Streptococcus spp. d) to detect the mecA gene in Staphylococcus spp. resistant to oxacillin / methicillin, e) to evaluate the association between management practices and treatment of mastitis, and antimicrobial susceptibility of Staphylococcus aureus isolates from dairy herds. Thirteen dairy herds were selected from a total of 60 dairy farms in the region of Pirassununga / SP. Questionnaires formulated previously were answered by dairy farmers to evaluate the association between mastitis treatment practices and antimicrobial susceptibility. [...] The susceptibility tests performed for the species of Staphylococcus spp. and Streptococcus spp. showed high susceptibility to most antimicrobials tested. With the exception of Streptococcus agalactiae to ampicillin and sulfatrimetropin and isolates of S. dysgalactiae to tetracycline and clindamycin. Most Staphylococcus spp. and Streptococcus spp. did not show multidrug resistance profile. None of Staphylococcus spp. phenotypically resistant to oxacillin / methicillin showed the mecA gene. The major risk factor associated with susceptibility of S. aureus to tetracycline, penicillin, erythromycin and ampicillin was not sending samples for culture and sensitivity. Two important risk factors have been identified related to ampicillin, ceftiofur, gentamicin, penicillin and oxacillin for treatment of clinical mastitis and enrofloxacin and tetracycline for the treatment of dry cow dry cow therapy (AU)