Vitrificação de embriões equinos: alternativas para melhorar as taxas de sobrevivência embrionária / Vitrification of equine embryos: alternatives to improve embryonic survival rates

A criopreservação de embriões permite a criação de um banco genético de alto valor zootécnico, aproveitando-se do melhor momento reprodutivo das doadoras, facilitando a comercialização de material genético. Os crioprotetores utilizados durante o processo de vitrificação, afetam o equilíbrio osmótico, evitando a formação de cristais de gelo durante a diminuição de temperatura. Além da escolha adequada dos crioprotetores, o sistema de envase utilizado e a característica de manipulação prévia a vitrificação, impactam a viabilidade embrionária pós aquecimento. Apesar dos protocolos de vitrificação para embriões pequenos (300 µm), que apresentam maior taxa de recuperação, os mesmos protocolos não apresentam sucesso. A eficiência do processo de vitrificação em estruturas maiores está relacionada a redução do tamanho da blastocele, exigindo equipamentos de maior custo. O objetivo dessa revisão é descrever o “estado da arte” da vitrificação de embriões equinos, descrevendo diferentes protocolos de vitrificação, manipulação prévia e sistema de envase.(AU)

Embryo cryopreservation allows the formation of a genetic bank from high genetical value animals, taking advantage of the best reproductive moment of the mares, facilitating its genetic material commercialization. Cryoprotectants used during the vitrification process act in osmotic equilibrium, preventing ice crystals formation during the temperature decrease. In addition to the appropriate choice of cryoprotectants, the characteristic of support/packaging used and the type of manipulation prior to vitrification impact the embryonic viability after heating. Although vitrification protocols for small embryos ( 300 µm) have higher recovery rates but low survival rates when the same protocols are used. Vitrification efficiency in larger structures is related to the reduction of blastocele size, requiring equipment with higher cost. The purpose of this review is to describe the state of the art of equine embryo vitrification by describing different vitrification protocols, previous manipulation and different storage systems.(AU)

Vitrificação de embriões equinos: alternativas para melhorar as taxas de sobrevivência embrionária / Vitrification of equine embryos: alternatives to improve embryonic survival rates

A criopreservação de embriões permite a criação de um banco genético de alto valor zootécnico, aproveitando-se do melhor momento reprodutivo das doadoras, facilitando a comercialização de material genético. Os crioprotetores utilizados durante o processo de vitrificação, afetam o equilíbrio osmótico, evitando a formação de cristais de gelo durante a diminuição de temperatura. Além da escolha adequada dos crioprotetores, o sistema de envase utilizado e a característica de manipulação prévia a vitrificação, impactam a viabilidade embrionária pós aquecimento. Apesar dos protocolos de vitrificação para embriões pequenos (300 µm), que apresentam maior taxa de recuperação, os mesmos protocolos não apresentam sucesso. A eficiência do processo de vitrificação em estruturas maiores está relacionada a redução do tamanho da blastocele, exigindo equipamentos de maior custo. O objetivo dessa revisão é descrever o “estado da arte” da vitrificação de embriões equinos, descrevendo diferentes protocolos de vitrificação, manipulação prévia e sistema de envase.

Embryo cryopreservation allows the formation of a genetic bank from high genetical value animals, taking advantage of the best reproductive moment of the mares, facilitating its genetic material commercialization. Cryoprotectants used during the vitrification process act in osmotic equilibrium, preventing ice crystals formation during the temperature decrease. In addition to the appropriate choice of cryoprotectants, the characteristic of support/packaging used and the type of manipulation prior to vitrification impact the embryonic viability after heating. Although vitrification protocols for small embryos ( 300 µm) have higher recovery rates but low survival rates when the same protocols are used. Vitrification efficiency in larger structures is related to the reduction of blastocele size, requiring equipment with higher cost. The purpose of this review is to describe the state of the art of equine embryo vitrification by describing different vitrification protocols, previous manipulation and different storage systems.

Comparação de métodos in vitro para a quantificação da digestibilidade da matéria seca e da fibra em detergente neutro de forragens e concentrados / Comparison of in vitro methods to quantify the dry matter and neutral detergent fiber digestibility of forages and concentrates

Objetivou-se comparar a digestibilidade in vitro da matéria seca (DIVMS) e da fibra em detergente neutro (DIVFDN) de forragens e concentrados obtidos por intermédio das incubadoras DaisyII e TE-150, combinadas com filter bags tipo F57 (Ankon®) ou tecido não-tecido (TNT, 100g/m²), em relação aos valores obtidos utilizando-se o método de Tilley e Terry (1963). Foram utilizadas 25 amostras de alimentos concentrados e 25 de forragens. Não houve diferenças entre filter bags (P>0,39) para a DIVMS de forragens. Maiores valores de DIVMS (P<0,01) foram verificados para a incubadora TE-150 em relação à DaisyII. As estimativas de DIVMS obtidas com incubadoras e filter bags foram superiores (P<0,01) àquelas obtidas com o método Tilley e Terry (1963). Observaram-se maiores valores de DIVFDN de forragens (P<0,01) com filter bags F57 em relação ao TNT e com a incubadora TE-150 em relação à DaisyII. Todos os valores de DIVFDN obtidos com incubadoras e filter bags foram superiores (P<0,01) aos obtidos com o método Tilley e Terry (1963). Todos os métodos apresentaram-se positiva e fortemente correlacionados (P<0,01), tanto para DIVMS como para DIVFDN. As repetibilidades e variâncias entre amostras para DIVMS e DIVFDN foram similares entre os métodos. Portanto, conclui-se que, em se tratando de avaliações comparativas entre alimentos, todos os métodos avaliados possuem capacidade similar de discriminação.(AU)

The objective was to compare in vitro digestibility of dry matter (IVDMD) and neutral detergent fiber (IVNDFD) of forages and concentrates obtained using the incubators DaisyII and TE-150, and filter bags F57 (Ankon®) or non-woven textile (NWT - 100g/m²) in comparison with the values obtained using the Tilley and Terry (1963) method. Twenty-five samples of concentrates and 25 samples of forages were used. There were no differences between filter bags (P>0.39) for IVDMD of forages. Higher IVDMD (P<0.01) were observed for TE-150 compared to DaisyII. Estimates of IVDMD obtained with incubators and filter bags were higher (P<0.01) than those obtained with the Tilley and Terry (1963) method. Higher IVNDFD (P<0.01) were obtained with filter bags F57 regarding to NWT and TE-150 when compared to DaisyII. All values of the IVNDFD obtained with incubators and filter bags were higher (P<0.01) than those obtained with the Tilley and Terry (1963) method. Both IVDMD and IVNDFD variables were greater using TE-150 incubator than using DaisyII (P<0.04). Estimates obtained using NWT filter bags were higher (P<0.01) than F57 filter bags. All methods were positively and strongly correlated (P<0.01) to each other for IVDMD and IVNDFD. The repeatability and variances among samples for IVDMD and IVNDFD were similar among methods. In conclusion, all methods were similarly able to discriminate samples.(AU)

Comparação de métodos in vitro para a quantificação da digestibilidade da matéria seca e da fibra em detergente neutro de forragens e concentrados

ABSTRACT The objective was to compare in vitro digestibility of dry matter (IVDMD) and neutral detergent fiber (IVNDFD) of forages and concentrates obtained using the incubators DaisyII and TE-150, and filter bags F57 (Ankon®) or non-woven textile (NWT - 100g/m²) in comparison with the values obtained using the Tilley and Terry (1963) method. Twenty-five samples of concentrates and 25 samples of forages were used. There were no differences between filter bags (P>0.39) for IVDMD of forages. Higher IVDMD (P 0.01) were observed for TE-150 compared to DaisyII. Estimates of IVDMD obtained with incubators and filter bags were higher (P 0.01) than those obtained with the Tilley and Terry (1963) method. Higher IVNDFD (P 0.01) were obtained with filter bags F57 regarding to NWT and TE-150 when compared to DaisyII. All values of the IVNDFD obtained with incubators and filter bags were higher (P 0.01) than those obtained with the Tilley and Terry (1963) method. Both IVDMD and IVNDFD variables were greater using TE-150 incubator than using DaisyII (P 0.04). Estimates obtained using NWT filter bags were higher (P 0.01) than F57 filter bags. All methods were positively and strongly correlated (P 0.01) to each other for IVDMD and IVNDFD. The repeatability and variances among samples for IVDMD and IVNDFD were similar among methods. In conclusion, all methods were similarly able to discriminate samples.

RESUMO Objetivou-se comparar a digestibilidade in vitro da matéria seca (DIVMS) e da fibra em detergente neutro (DIVFDN) de forragens e concentrados obtidos por intermédio das incubadoras DaisyII e TE-150, combinadas com filter bags tipo F57 (Ankon®) ou tecido não-tecido (TNT, 100g/m²), em relação aos valores obtidos utilizando-se o método de Tilley e Terry (1963). Foram utilizadas 25 amostras de alimentos concentrados e 25 de forragens. Não houve diferenças entre filter bags (P>0,39) para a DIVMS de forragens. Maiores valores de DIVMS (P 0,01) foram verificados para a incubadora TE-150 em relação à DaisyII. As estimativas de DIVMS obtidas com incubadoras e filter bags foram superiores (P 0,01) àquelas obtidas com o método Tilley e Terry (1963). Observaram-se maiores valores de DIVFDN de forragens (P 0,01) com filter bags F57 em relação ao TNT e com a incubadora TE-150 em relação à DaisyII. Todos os valores de DIVFDN obtidos com incubadoras e filter bags foram superiores (P 0,01) aos obtidos com o método Tilley e Terry (1963). Todos os métodos apresentaram-se positiva e fortemente correlacionados (P 0,01), tanto para DIVMS como para DIVFDN. As repetibilidades e variâncias entre amostras para DIVMS e DIVFDN foram similares entre os métodos. Portanto, conclui-se que, em se tratando de avaliações comparativas entre alimentos, todos os métodos avaliados possuem capacidade similar de discriminação.

Comparação de métodos in vitro para a quantificação da digestibilidade da matéria seca e da fibra em detergente neutro de forragens e concentrados / Comparison of in vitro methods to quantify the dry matter and neutral detergent fiber digestibility of forages and concentrates

Objetivou-se comparar a digestibilidade in vitro da matéria seca (DIVMS) e da fibra em detergente neutro (DIVFDN) de forragens e concentrados obtidos por intermédio das incubadoras DaisyII e TE-150, combinadas com filter bags tipo F57 (Ankon®) ou tecido não-tecido (TNT, 100g/m²), em relação aos valores obtidos utilizando-se o método de Tilley e Terry (1963). Foram utilizadas 25 amostras de alimentos concentrados e 25 de forragens. Não houve diferenças entre filter bags (P>0,39) para a DIVMS de forragens. Maiores valores de DIVMS (P<0,01) foram verificados para a incubadora TE-150 em relação à DaisyII. As estimativas de DIVMS obtidas com incubadoras e filter bags foram superiores (P<0,01) àquelas obtidas com o método Tilley e Terry (1963). Observaram-se maiores valores de DIVFDN de forragens (P<0,01) com filter bags F57 em relação ao TNT e com a incubadora TE-150 em relação à DaisyII. Todos os valores de DIVFDN obtidos com incubadoras e filter bags foram superiores (P<0,01) aos obtidos com o método Tilley e Terry (1963). Todos os métodos apresentaram-se positiva e fortemente correlacionados (P<0,01), tanto para DIVMS como para DIVFDN. As repetibilidades e variâncias entre amostras para DIVMS e DIVFDN foram similares entre os métodos. Portanto, conclui-se que, em se tratando de avaliações comparativas entre alimentos, todos os métodos avaliados possuem capacidade similar de discriminação.(AU)

The objective was to compare in vitro digestibility of dry matter (IVDMD) and neutral detergent fiber (IVNDFD) of forages and concentrates obtained using the incubators DaisyII and TE-150, and filter bags F57 (Ankon®) or non-woven textile (NWT - 100g/m²) in comparison with the values obtained using the Tilley and Terry (1963) method. Twenty-five samples of concentrates and 25 samples of forages were used. There were no differences between filter bags (P>0.39) for IVDMD of forages. Higher IVDMD (P<0.01) were observed for TE-150 compared to DaisyII. Estimates of IVDMD obtained with incubators and filter bags were higher (P<0.01) than those obtained with the Tilley and Terry (1963) method. Higher IVNDFD (P<0.01) were obtained with filter bags F57 regarding to NWT and TE-150 when compared to DaisyII. All values of the IVNDFD obtained with incubators and filter bags were higher (P<0.01) than those obtained with the Tilley and Terry (1963) method. Both IVDMD and IVNDFD variables were greater using TE-150 incubator than using DaisyII (P<0.04). Estimates obtained using NWT filter bags were higher (P<0.01) than F57 filter bags. All methods were positively and strongly correlated (P<0.01) to each other for IVDMD and IVNDFD. The repeatability and variances among samples for IVDMD and IVNDFD were similar among methods. In conclusion, all methods were similarly able to discriminate samples.(AU)

Tratamentos hormonais e seus efeitos sobre a produção de embriões bovinos in vivo e in vitro

A transferência de embriões (TE) permite a multiplicação de fêmeas geneticamente superiores, contribuindo com o aumento da eficiência na produção de alimentos. Porém, tanto a produção in vivo quando a in vitro ainda necessitam de melhorias. No primeiro estudo, o objetivo foi identificar se a administração de PGF na inseminação artificial (IA) após a superovulação (SOV) melhora as taxas de fecundação e produção embrionária. Vacas doadoras de embriões (n=35) participaram de duas SOV (n=70 procedimentos) sendo que, em cada ciclo, a metade não foi tratada (controle; n=35) e as demais receberam PGF (482g de cloprostenol; n=35) no momento da primeira IA. No dia da coleta de embriões, registrou-se o número, estágio de desenvolvimento e qualidade das estruturas. As medianas (IC 95%) dos grupos controle e PGF foram, respectivamente, 12 (10-18) e 15 (12-18) estruturas totais; 9 (7-11) e 7 (6-10) embriões viáveis; 1 (0-1) e 1 (1-3) embriões degenerados; e 1 (0-3) e 2 (0-5) oócitos não fecundados (P>0,05). Conclui-se que a administração de PGF no momento da primeira IA não afeta o desempenho de vacas superovuladas. No segundo estudo, o objetivo foi avaliar o efeito de um tratamento hormonal injetável para sincronização da onda folicular de doadoras Bos taurus, sobre a concentração de progesterona (P4), número e qualidade dos complexos cumulus oócitos (CCOs) recuperados por aspiração folicular (OPU) e eficiência da PIVE. Vacas Bos taurus (n=11) foram submetidas a quatro sessões de OPU (n=44 procedimentos), sendo que no dia zero (D0), a metade foi alocada no grupo controle (não sincronizada; n=22) ou no tratamento (2 mg de benzoato de estradiol; 150 g de cloprostenol sódico; e 300 mg de progesterona injetável; n=22) e no dia 6 (D6) ocorreu a OPU. Nos resultados obtidos não houve diferença (P>0,05) entre controle e tratamento, nas medianas (IC 95%) de estruturas totais e viáveis, sendo respectivamente, 12 (6-15) e 10 (9-19) CCOs totais; 5,5 (5-8) e 6 (5-9) CCOs viáveis; e a taxa de produção de embriões foi 28% (21-46%) para controle e 33% (22-45%) para tratamento (P > 0,05). Observou-se diferença (P < 0,05) apenas na concentração média de progesterona no D6, sendo 2,8±0,8 ng/mL e 1,1±0,2 ng/mL, para os grupos controle e tratamento, respectivamente. Nas condições deste estudo, conclui-se que o tratamento hormonal para sincronização pré-aspiração não melhorou os parâmetros analisados, portanto, sua aplicação em vacas taurinas é questionável.

Embryo transfer (ET) allows the multiplication of genetically superior females, contributing to increased efficiency in food production. However, both in vivo and in vitro production still need to be improved. In the first study the objective was to identify if PGF administration at the time of artificial insemination (AI) improves fertilization and embryo production rates. Embryo donor cows (n=35) were submitted to superovulation (SOV) twice (n=70 procedures). In each round, half of the cows were non treated (control; n=35) or treated with PGF (482g cloprostenol; n=35) at the time of the first AI. The number, stage of development and quality of embryos were recorded on the day of embryo recovery. The medians (CI 95%) for control and PGF groups were, respectively, 12 (10-18) and 15 (12-18) total structures; 9 (7-11) and 7 (6-10) viable embryos; 1 (0-1) and 1 (1-3) degenerated embryos; and 1 (0-3) and 2 (0-5) non fertilized oocytes (P>0.05). In conclusion, PGF treatment at the time of the first AI does not affect the performance of superovulated cows. In the second study the objective was to evaluate the effect of an injectable hormonal treatment to synchronize the follicular wave of Bos taurus donors on progesterone (P4) concentration, number and quality of cumulus-oocyte complexes (COCs) recovered by ovum pick up (OPU) and IVP efficiency. Bos taurus cows (n=11) were submitted to four OPU sessions (n=44 procedures). On day zero (D0) the cows were allocated to control (not synchronized) or treated group (2 mg of estradiol benzoate; 150 g of sodium cloprostenol; and 300 mg of injectable progesterone). On day 6 (D6) the OPU procedures were performed. There was no difference (P > 0.05) between control and treatment, in the medians (CI 95%) of total and viable structures, being, respectively, 12 (6-15) and 10 (9-19) total oocytes; 5.5 (5-8) and 6 (5-9) viable oocytes; the rate of embryo production was 28% (21-46%) for control and 33% (22-45%) for treatment. A significant difference (P < 0.05) was observed in the concentration of progesterone on D6, being 2.8±0.8 and 1.1±0.2 ng / mL for control and treated groups, respectively. In conclusion, under the conditions of this study, the hormonal treatment for pre-aspiration synchronization did not improve the analyzed parameters, therefore, its application in taurine cows is questionable.

AVALIAÇÃO DE PERDAS GESTACIONAIS EM BOVINOS DE LEITE EM PROGRAMAS DE BIOTÉCNICAS DA REPRODUÇÃO E A PARTICIPAÇÃO DO Neospora caninum

O uso de biotécnicas como ferramenta de manejo reprodutivo, tem evoluído de forma significativa nas últimas décadas, proporcionando aumento da eficiência reprodutiva em bovinos de leite. Dentre as biotécnicas, Inseminação Artificial em Tempo Fixo (IATF), Transferência de Embriões (TE) e a Fertilização in vitro (FIV), são as que mais evoluíram e são atualmente utilizadas em programas reprodutivos de rebanhos leiteiros. Apesar da capacidade destas é necessária a compreensão dos fatores relacionados ao seu sucesso para a aplicação das mesmas, desta forma o desenvolvimento de estudos que avaliem a resposta superovulatória, as taxas de prenhez e perdas gestacionais podem contribuir para o aumento da eficácia. O rigoroso controle sanitário dos rebanhos, torna-se imprescindível para que os respectivos programas possam proporcionar os ganhos esperados em eficiência reprodutiva. Desta forma, dois experimentos foram desenvolvidos. O primeiro experimento teve como objetivo detectar, através da técnica de PCR, o DNA de Neospora caninum em embriões oriundos de vacas soropositivas em protocolos de superovulação para transferência de embriões. Entre receptoras de embriões provenientes de doadoras soropositivas e soronegativas não foram encontradas diferenças na taxa de prenhez (60 e 57,1%, P=0,57), perda gestacional (50% e 43,8%, P=0,79) e número de embriões produzidos após superovulação (40 e 51, P=0.64). Não houve também alteração do status sorológicos das receptoras, independente do status da doadora, assim como não foram identificados o DNA do protozoário em embriões e amostras de PBS da lavagem uterina realizada para a coleta de embriões. Assim, pode-se demonstrar que a técnica de TE é segura e pode ser utilizada em programas de controle da neosporose, ressaltando que apesar da similaridade no número de embriões, houve diferença significativa no número de estruturas congeláveis (25% e 74%, P<0,0001) e transferíveis (27,5% e 78,4%, P<0,0001). O segundo estudo avaliou o efeito do aumento da progesterona circulante (P4) pela indução da formação de corpo lúteo acessório (CL) em receptoras de embriões clonados (TNCS) e produzidos in vitro (FIV). Como esperado, o tratamento com hCG causou ovulação e aumentou a P4 circulante, embora o hCG tendesse a aumentar as prenhezes por TE (P/TE) para receptoras de embriões TNCS nos dias 28 (P = 0,07) e 42 (P = 0,09). As taxas de prenhez foram semelhantes para FIV e embriões TNCS nos dias 28 e 33, no entanto, P/TE foi maior para FIV do que TNCS no dia 42 e mais tarde, devido a maiores (P = 0,05) perdas de gestação no TNCS (44,4%) do que embriões FIV (15,0%) dos dias 33-42. Assim, o aumento da P4 circulante pode melhorar a fertilidade em receptoras de embriões TNCS, como evidenciado pela tendência do tratamento com hCG para aumentar P/ET de embriões TNCS. Conclui-se que a TE é uma técnica viável para o melhoramento genético do rebanho, podendo ser utilizadas também no controle de enfermidades como a neosporose bovina

The use of biotechniques as a reproductive management tool has evolved significantly in recent decades, increasing reproductive efficiency in dairy cattle. Among the biotechniques, FixedTime Artificial Insemination (FTAI), Embryo Transfer (ET) and in vitro Fertilization (IVF) the most evolved and currently used in reproductive programs for dairy herds. Despite their capacity, it is necessary to understand the factors related to their success for their application, thus the development of studies that assess the superovulatory response, pregnancy rates and pregnancy losses can contribute to increased effectiveness. The strict sanitary control of the herds becomes essential so that the respective programs can provide the expected gains in reproductive efficiency. In this way, two experiments were developed. The first experiment aimed to detect, through the PCR technique, the DNA of Neospora caninum in embryos from seropositive cows in superovulation protocols for embryo transfer. Among recipients of embryos from seropositive and seronegative donors, no differences were found in the pregnancy rate (60 and 57.1%, P=0.57), gestational loss (50% and 43.8%, P=0.79) and number of embryos produced after superovulation (40 and 51, P=0.64). There was also no change in the serological status of the recipients, regardless of the status of the donor, as well as the protozoan DNA in embryos and PBS samples from the uterine lavage performed for embryo flushing were not identified. Thus, it can be demonstrated that the TE technique is safe and can be used in neosporosis control programs, noting that despite the similarity in the number of embryos, there was a significant difference in the number of freezeable (25% and 74%, P <0.0001) and transferable (27.5% and 78.4%, P<0.0001) structures. The second study evaluated the effect of increasing circulating progesterone (P4) by inducing accessory corpus luteum (CL) formation in recipients of cloned (SCNT) and in vitro produced (IVF) embryos. As expected, treatment with hCG caused ovulation and increased circulating P4, although hCG tended to increase pregnancies by ET (P/ET) for SCNT embryo recipients on days 28 (P = 0.07) and 42 (P = 0.09). Pregnancy rates were similar for IVF and SCNT embryos on days 28 and 33, however, P/ET was higher for IVF than SCNT on day 42 and later, due to higher (P = 0.05) pregnancy losses in SCNT (44.4%) than IVF embryos (15.0%) from days 33-42. Thus, increasing circulating P4 may improve fertility in recipients of SCNT embryos, as evidenced by the tendency of treatment with hCG to increase P/ET of SCNT embryos. Although additional research is needed, it can be concluded that ET is a viable technique for the genetic improvement of the herd, which can also be used to control diseases such as bovine neosporosis

Produção in vitro de embriões de novilhas Nelore (Bos indicus) de 12 e 24 meses de idade tratadas ou não com FSH

Resumo: A produção in vitro de embriões (PIVE) em animais jovens pode acelerar o ganho genético dos rebanhos diminuindo o intervalo de gerações. Entretanto, doadoras jovens são menos eficientes na OPU/PIVE quando comparadas às doadoras adultas. Sendo assim, o presente estudo buscou avaliar a eficiência de novilhas Nelore (Bos indicus) de 12 e 24 meses de idade, tratadas ou não com FSH, na PIVE, na concepção após a transferência de embriões (TE), e relacionar a PIVE e a TE com a concentração plasmática de IGF1 da doadora. Para tal, 46 novilhas de 12 meses e 45 novilhas de 24 meses de idade foram submetidas a duas OPU num intervalo de 40 dias (delineamento fatorial 2x2, cross-over). Todas as novilhas receberam protocolo de sincronização no dia 0. As novilhas do grupo FSH receberam duas doses de 30mg de FSH no dia 4 e duas doses de 20mg de FSH no dia 5, totalizando 100mg de FSH. No dia 7, as novilhas tiveram o dispositivo removido e foram submetidas à OPU. Os acasalamentos da FIV foram mantidos nas duas réplicas. Os embriões produzidos foram vitrificados (N=202), e posteriormente transferidos em receptoras sincronizadas. As análises estatísticas foram feitas utilizando o software SAS®. Não foi observada interação categoria*FSH para as variáveis estudadas. As novilhas de 24 meses tiveram maior número de oócitos recuperados (12 meses: 16,6±1,2 vs. 24 meses: 20,8±1,5; P=0,0248), número de oócitos viáveis (12 meses: 12,5±1,0 vs. 24 meses: 15,4±1,1; P=0,0585), número de clivados (12 meses: 9,2±0,7 vs. 24 meses: 12,0±1,0; P=0,0211), número de embriões produzidos/OPU (12 meses: 3,4±0,4 vs. 24 meses: 6,4±0,7; P=0,0004) e taxa de blastocisto (12 meses: 20,9% vs. 24 meses: 29,9%; P=0,0177) quando comparadas às novilhas de 12 meses. O FSH aumentou a quantidade de folículos médios (controle: 1,1±0,2 vs. FSH: 15,7±1,7; P<0,0001) e grandes (controle: 0,2±0,1 vs. FSH: 4,2±0,6; P<0,0001) e a taxa de oócitos viáveis (controle: 72,7% vs. FSH: 78,8%;P=0,0225), porém diminuiu a quantidade de oócitos recuperados (controle: 21,2±1,5 vs. FSH: 16,2±1,1; P=0,0077) e a taxa de recuperação (controle: 92,9% vs. FSH: 51,8%; P<0,0001) em relação às novilhas do grupo controle. Não se verificou efeito de tratamento sobre número e taxa de blastocistos. Não houve efeito de categoria e FSH no número de receptoras gestantes/receptoras inovuladas (P/TE). O IGF1 foi maior para novilhas de 24 meses (12 meses: 224,2ng/ml vs. 24 meses: 358,3ng/ml; P<0,0001), porém, não foi influenciado pelo tratamento com FSH. Não houve correlação entre IGF1 e o número de folículos aspirados (R2=0,0237; P=0,1499), número de oócitos viáveis (R2=0,0001; P=0,9661), taxa de oócitos viáveis (R2=0,0678; P=0,0523), número de blastocisto produzido/OPU (R2=0,0075; P=0,4204) e taxa de blastocisto (R2=0,0136; P=0,2768). Observou-se interação Idade*IGF1 (P=0,0004) para P/TE. Apenas os embriões de novilhas de 24 meses apresentaram aumento na P/TE conforme o aumento da IGF1. Os resultados do presente estudo permitem concluir que novilhas de 24 meses possuem maior quantidade de oócitos competentes para PIVE, e apresentam maior concentração de IGF1. Ainda, o FSH melhorou a taxa de oócitos viáveis em novilhas Nelore, porém não influenciou a PIVE e P/TE.

Abstract: The in vitro embryo production (IVEP) of young animals can increase the genetic gain of herds by decreasing the generation interval. However, young donors are less efficient on OPU/IVEP when compared to adult donors. Thus, the present study aimed to evaluate the efficiency of 12 and 24 month old Nelore (Bos indicus) heifers, treated or not with FSH, on the IVEP, conception after embryo transfer (ET) and relate the IVEP and ET with IGF1 blood levels of the donor. For this, 46 heifers aged 12 months and 45 heifers aged 24 months were submitted to two OPUs with an interval of 40 days (2x2 factorial design, cross-over). All heifers of the FSH group received two 30mg doses of FSH on day 4 and two 20mg doses of FSH on day 5, receiving a total of 100mg of FSH. On day 7, the intravaginal device was removed and heifers were submitted to OPU. The IVF mating was maintained for both replicas. The embryos produced were vitrified (n=202) and later transferred to synchronized recipients. The statistical analysis were performed using the SAS® software. No category*FSH interaction was observed for the analyzed variables. The 24 month old heifers had higher number of retrieved oocytes (12 months: 16.6±1.2 vs. 24 months: 20.8±1.5; P=0.0248), number of viable oocytes (12 months: 12.5±1.0 vs. 24 months: 15.4±1.1; P=0.0585), number of cleaved oocytes (12 months: 9.2±0.7 vs. 24 months: 12.0±1.0; P=0.0211), number of embryos produced/OPU (12 months: 3.4±0.4 vs. 24 months: 6.4±0.7; P=0.0004) and blastocyst rate (12 months: 20.9% vs. 24 months: 29.9%; P=0.0177) when compared to 12 month old heifers. FSH increased the number of medium follicles (control: 1.1±0.2 vs. FSH: 15.7±1.7; P<0.0001) and large follicles (control: 0.2±0.1 vs. FSH: 4.2±0.6; P<0.0001) and viable oocyte rate (control: 72.7% vs. FSH: 78.8%;P=0.0225), however, the number of retrieved oocytes (control: 21.2±1.5 vs. FSH: 16.2±1.1; P=0.0077) and the recovery rate (control: 92.9% vs. FSH: 51.8%; P<0.0001) were lower in relation to control heifers. There was no treatment effect on the number and rate of blastocysts. There was no category or FSH effect on the number of pregnant recipients/inovulated recipients (P/ET). IGF1 was higher for 24 month old heifers (12 months: 224.2ng/ml vs. 24 months: 358.3ng/ml; P<0.0001), however, it was not influenced by treatment with FSH. There was no correlation between IGF1 and the number of aspirated follicles (R2=0.0237; P=0.1499), number of viable oocytes (R2=0.0001; P=0.9661), viable oocyte rate (R2=0.0678; P=0.0523), number of blastocysts produced/OPU (R2=0.0075; P=0.4204) and blastocyst rate (R2=0.0136; P=0.2768). There was an Age*IGF1 interaction (P=0.0004) for P/ET. Only embryos from 24-month-old heifers presented an increase on the number of P/ET according to the increase of IGF1. The results of the present study allow the conclusion that 24-month-old heifers have a higher number of competent oocytes for IVEP and present higher concentration of IGF1. In addition, FSH increased the viable oocyte rate of Nelore heifers; however, there was no effect on the IVEP or P/ET.

Assessment of DNA extraction methods for detection of arbuscular mycorrhizal fungi in plant roots by nested-PCR / Avaliação de métodos de extração de ADN para detecção de fungos micorrízicos arbusculares em raízes de plantas por nested-PCR

DNA extraction methods were evaluated for the yield and purity of DNA recovered from mycorrhized roots and whether the recovered DNA is suitable for amplification of arbuscular mycorrhizal (AM) fungal SSU rDNA. The DNeasy Plant Mini Kit and three extraction buffers were used alone or in combination with either polyvinylpyrrolidone (PVP), polyvinylpolypyrrolidone (PVPP) and/or activated charcoal (AC). Among the extraction methods tested, those based on the CTAB buffers yielded more DNA than those based on the TE buffer and the DNeasy Plant Mini Kit. Moreover, the use of AC alone or in combination with PVPP reduced DNA yield, while it significantly improved the purity of recovered DNA, whatever the extraction buffer. On the other hand, the success of nested-PCR amplification was negatively correlated with the amount of template DNA and positively correlated with the purity of recovered DNA. Three methods based on the TE buffer, two on the CTAB-M buffer and one on the DNeasy Plant Mini Kit produced high-quality DNA in terms of purity and PCR performance. However, the TE buffer-based methods are less time consuming than the CTAB-M buffer-based methods, and cheaper than the method based on the DNeasy Plant Mini Kit.(AU)

Diferentes métodos de extração de ADN, a partir de amostras de raízes, foram testados e o ADN obtido foi avaliado para a amplificação de genes ribossomais de fungos micorrízicos arbusculares (AM). Três tampões de extração foram utilizados isoladamente ou em combinação com polivinilpirrolidona (PVP), polivinipolipirrolidona (PVPP) e/ou carvão ativado (CA), além do DNeasy Plant Mini Kit. Entre os métodos de extração testados, aqueles com base no tampão CTAB renderam mais ADN do que os baseados no tampão TE e o DNeasy Plant Mini Kit. A utilização de CA ou PVPP nos diferentes tampões reduziram o rendimento de ADN, contudo, melhoraram significativamente a pureza do ADN recuperado, independentemente do tampão de extração. Por outro lado, o sucesso da amplificação por Nested-PCR foi negativamente correlacionado com a quantidade de DNA molde, e positivamente correlacionada com a pureza do ADN. Três métodos baseados no tampão TE, dois no tampão CTAB-M e o DNeasy Plant Mini Kit produziram ADN de alta qualidade, em termos de pureza e rendimento da PCR. No entanto, os métodos baseados em tampão TE demandam menos tempo do que os métodos baseados em tampão CTAB-M e são mais baratos do que o uso do DNeasy Plant Mini Kit.(AU)

Efeito de sexo e tipo de parto sobre o peso ao nascer de caprinos mestiços Anglo Nubiana / Effect of sex and type of birth on the birth weight of crossbred goats Anglo Nubian

The objective was to estimate the influence of sex, type of birth, month and year of birth on the birth weight feature of Anglo Nubian crossbred goats in the Lower ParnaíbaMaranhão region. Weights were used for Anglo-Nubian goats ½ + SPRD ½ animals 235 belonging to the database of União Farm, born between the years 2007 and 2010. Statistical analysis was performed using the method of least squares and chi-square of contingency tests with a statistical model containing a source of variation in the fixed effects of sex, month and year of birth of lamb, parturition type (single and double) and random error. Means and standard error of birth weight of goats was 2.75 ± 0.71 kg. There was a significant effect of sex, birth month and year of birth on birth weight of goats, while the parturition type (single or double) had no influence on this characteristic and no association with environmental effects.

Objetivou-se estimar a influência dos efeitos de sexo, tipo de parto, mês e ano de nascimento sobre a característica de peso ao nascer de caprinos mestiços Anglo Nubiana na região do Baixo Parnaíba Maranhense. Foram utilizados dados de pesagens de 235 cabritos ½ Anglo Nubiana + ½ SPRD, pertencente ao banco de dados da Fazenda União, nascidos entre os anos de 2007 e 2010. As análises estatísticas foram realizadas utilizando-se o método dos quadrados mínimos e teste de qui-quadrado de contingência. O modelo estatístico continha como fonte de variação os efeitos fixos de sexo, mês e ano de nascimento do cabrito, tipo de parto (simples e duplo) e o erro aleatório. As médias e erro-padrão do peso ao nascer dos caprinos avaliados foram 2,75 ± 0,71 kg. Verificou-se efeito significativo do sexo, mês e ano de nascimento sobre o peso ao nascer dos cabritos, enquanto que o tipo de parto (simples ou duplo) não apresentou influência sobre essa característica e não houve associação com os efeitos de meio.

Efeito de sexo e tipo de parto sobre o peso ao nascer de caprinos mestiços Anglo Nubiana / Effect of sex and type of birth on the birth weight of crossbred goats Anglo Nubian

The objective was to estimate the influence of sex, type of birth, month and year of birth on the birth weight feature of Anglo Nubian crossbred goats in the Lower ParnaíbaMaranhão region. Weights were used for Anglo-Nubian goats ½ + SPRD ½ animals 235 belonging to the database of União Farm, born between the years 2007 and 2010. Statistical analysis was performed using the method of least squares and chi-square of contingency tests with a statistical model containing a source of variation in the fixed effects of sex, month and year of birth of lamb, parturition type (single and double) and random error. Means and standard error of birth weight of goats was 2.75 ± 0.71 kg. There was a significant effect of sex, birth month and year of birth on birth weight of goats, while the parturition type (single or double) had no influence on this characteristic and no association with environmental effects.(AU)

Objetivou-se estimar a influência dos efeitos de sexo, tipo de parto, mês e ano de nascimento sobre a característica de peso ao nascer de caprinos mestiços Anglo Nubiana na região do Baixo Parnaíba Maranhense. Foram utilizados dados de pesagens de 235 cabritos ½ Anglo Nubiana + ½ SPRD, pertencente ao banco de dados da Fazenda União, nascidos entre os anos de 2007 e 2010. As análises estatísticas foram realizadas utilizando-se o método dos quadrados mínimos e teste de qui-quadrado de contingência. O modelo estatístico continha como fonte de variação os efeitos fixos de sexo, mês e ano de nascimento do cabrito, tipo de parto (simples e duplo) e o erro aleatório. As médias e erro-padrão do peso ao nascer dos caprinos avaliados foram 2,75 ± 0,71 kg. Verificou-se efeito significativo do sexo, mês e ano de nascimento sobre o peso ao nascer dos cabritos, enquanto que o tipo de parto (simples ou duplo) não apresentou influência sobre essa característica e não houve associação com os efeitos de meio.(AU)

Body condition score (BCS) and calving order on milk production and composition in zebu cattle / Escore de condição corporal (ECC) e ordem de parto sobre a produção e composição de leite de vacas zebuínas

The present study aimed to evaluate the effect of body condition score (BCS) and calving order on milk production and composition in zebu cattle participating in an official dairy cow tournament. We analyzed milk samples from 47 Gyr, Guzerat and Red Sindhi cows, distributed into classes with respect to lactation stage, milk production, and body condition score. Means for milk composition were within standard ranges for zebu cattle, with the greatest variation recorded for fat and protein content. Fat content was higher for animals in the first month of lactation, with a mean of 5.69%, and protein content was highest after 60 days with an average of 3.55%. A positive correlation of 0.38% (p < 0.05) was observed between milk fat and protein content. First calving animals exhibited lower mean of milk production than those in their second calving or more. Animals with a BCS in class II demonstrated higher daily production up to 30 days of lactation. Body condition score influenced the milk production of zebu cows participating in a dairy cow competition up to the 30th day of lactation.

Objetivou-se avaliar o efeito do escore de condição corporal (ECC) e da ordem de parto (OP) sobre a produção e composição do leite de vacas de raças zebuínas participantes do torneio leiteiro oficial. Foram analisadas amostras de leite proveniente de 47 fêmeas das raças Gir, Guzerá e Sindi, distribuídas em classes quanto ao período de lactação, produção de leite e escore de condição corporal. As médias de composição do leite se encontram dentro dos padrões das raças zebuínas, sendo a maior variação observada para os teores de gordura e proteína. O teor de gordura foi maior para os animais no primeiro mês de lactação, com média de 5,69% e o de proteína após os 60 dias, com média de 3,55%. Houve correlação positiva entre o teor de gordura e proteína no leite que foi de 0,38% (P < 0,05). Os animais de primeira ordem de parto apresentaram média de produção de leite inferior aos de segunda ou mais. Os animais com ECC da classe II apresentaram superioridade para produção diária até os 30 dias de lactação. O escore de condição corporal influenciou a produção de leite de vacas zebu participantes do torneio leiteiro até os 30 dias de lactação.

Body condition score (BCS) and calving order on milk production and composition in zebu cattle / Escore de condição corporal (ECC) e ordem de parto sobre a produção e composição de leite de vacas zebuínas

The present study aimed to evaluate the effect of body condition score (BCS) and calving order on milk production and composition in zebu cattle participating in an official dairy cow tournament. We analyzed milk samples from 47 Gyr, Guzerat and Red Sindhi cows, distributed into classes with respect to lactation stage, milk production, and body condition score. Means for milk composition were within standard ranges for zebu cattle, with the greatest variation recorded for fat and protein content. Fat content was higher for animals in the first month of lactation, with a mean of 5.69%, and protein content was highest after 60 days with an average of 3.55%. A positive correlation of 0.38% (p < 0.05) was observed between milk fat and protein content. First calving animals exhibited lower mean of milk production than those in their second calving or more. Animals with a BCS in class II demonstrated higher daily production up to 30 days of lactation. Body condition score influenced the milk production of zebu cows participating in a dairy cow competition up to the 30th day of lactation.(AU)

Objetivou-se avaliar o efeito do escore de condição corporal (ECC) e da ordem de parto (OP) sobre a produção e composição do leite de vacas de raças zebuínas participantes do torneio leiteiro oficial. Foram analisadas amostras de leite proveniente de 47 fêmeas das raças Gir, Guzerá e Sindi, distribuídas em classes quanto ao período de lactação, produção de leite e escore de condição corporal. As médias de composição do leite se encontram dentro dos padrões das raças zebuínas, sendo a maior variação observada para os teores de gordura e proteína. O teor de gordura foi maior para os animais no primeiro mês de lactação, com média de 5,69% e o de proteína após os 60 dias, com média de 3,55%. Houve correlação positiva entre o teor de gordura e proteína no leite que foi de 0,38% (P < 0,05). Os animais de primeira ordem de parto apresentaram média de produção de leite inferior aos de segunda ou mais. Os animais com ECC da classe II apresentaram superioridade para produção diária até os 30 dias de lactação. O escore de condição corporal influenciou a produção de leite de vacas zebu participantes do torneio leiteiro até os 30 dias de lactação.(AU)

TESTE HIPOSMÓTICO, RESFRIAMENTO DE SÊMEN E TERMOGRAFIA DIGITAL POR INFRAVERMELHO DO ESCROTO DO QUEIXADA (Tayassu pecari)

O Queixada (Tayassu pecari) é um mamífero neotropical classificado como vulnerável devido à caça e destruição de seu habitat. Devido às dificuldades na reprodução em cativeiro, técnicas de reprodução assistida podem ser aplicadas em programas de repovoamento da espécie. Dessa forma, o primeiro capítulo objetivou identificar o melhor protocolo de teste hiposmótico (HOST) para avaliar a integridade funcional dos espermatozoides de queixada. O sêmen de quatro machos adultos foi coletado com auxílio de eletroejaculador após contenção física e protocolo de sedação e anestesia. O sêmen foi avaliado quanto às características macro e microscópicas e diluído nas seguintes soluções hiposmóticas: água destilada (0 mOsmol/L), sacarose (50, 100, 150 mOsm/L) e frutose (50, 100, 150 mOsm/L). Cada amostra foi incubada em duplicata e uma sofreu fixação em solução de citrato de sódio formolizado a 4%. Duzentos espermatozoides foram avaliados por amostra e classificados em reativos ou não ao HOST. Todas as soluções testadas foram semelhantes em identificar o percentual de espermatozoides reativos, independente da amostra ser ou não fixada (P>0,05). Não foram encontradas correlações significativas entre o HOST e os parâmetros seminais avaliados. Dessa forma, pode-se usar água destilada como HOST por apresentar resultados similares e por ser um teste mais barato. No segundo estudo, visando auxiliar na conservação da espécie e permitir o uso racional do queixada em cativeiro e dentro de cadeias produtivas é de grande importância o conhecimento sobre a reprodução da espécie. Objetivou-se avaliar o efeito dos diluidores de sêmen ACP-103®, ACP-116® e BTS na viabilidade espermática durante a refrigeração do sêmen do Tayassu pecari. Foram refrigerados cinco ejaculados provenientes de quatro machos adultos. Os animais foram contidos com auxílio de puçá e submetidos ao protocolo de sedação e anestesia para realização da coleta de sêmen pelo método da eletroejaculação. Depois da coleta, o sêmen foi avaliado macro e microscopicamente e diluído para atingir 35x10 6 espermatozoides/mL em cada um dos três diferentes diluidores testados. O sêmen diluído foi acondicionado em caixa térmica BotuFLEX ® para manter as amostras a 15 º C por um período de 24 horas. Depois da refrigeração, os espermatozoides foram avaliados quanto aos parâmetros de movimento espermático, integridade funcional e estrutural das membranas espermáticas, atividade mitoc ondrial, condensação da cromatina e teste de termorresistência. Os diluidores testados preservaram as características cinéticas, a integridade estrutural e funcional das membranas espermáticas, a atividade mitocondrial e a condensação da cromatina semelhante ao sêmen in natura (P>0,05). O único parâmetro que reduziu com o processo de refrigeração independente do diluidor utilizado foi a VCL (P<0,05). Foi observado aumento do percentual de espermatozoides morfologicamente normais nas amostras refrigeradas em BTS IX (P<0,05). Os diluidores ACP-103®, ACP-116® e BTS podem refrigerar e conservar o sêmen de queixada a 15°C por 24 horas. Objetivou-se no terceiro estudo avaliar o uso da termografia infravermelha na avaliação da temperatura do superficial do escroto de queixadas e comparar com os parâmetros seminais e ambientais. Foram utilizados doze queixadas machos, adultos, com peso médio de 36,4 Kg. A contenção física e química dos animais usou os mesmos procedimentos dos experimentos anteriores. Inicialmente foi realizada a aferição da temperatura superficial do escroto dos queixadas por meio da termografia digital por infravermelho - Termovisor FLIR E60bx®, sendo o foco emissor do aparelho direcionado para o escroto de cada animal e orientado, perpendicularmente, a 1m de distância e emissividade de 0,98. A temperatura abdominal superficial (°C) também foi aferida com o mesmo aparelho para comparação. Foram aferidos dados climáticos de todo o período experimental. Os parâmetros seminais e termográficos foram correlacionados em um segundo momento, para isso a coleta de semen foi realizada com auxílio de um eletroejaculador. A temperatura superficial total do testículo (TSTT) obtida foi de 33,7 °C, o que representou 4,05°C abaixo da temperatura abdominal superficial. As correlações não foram significativas entre a TSTT e parâmetros seminais (P>0,05), mas entre a TSTT e o parâmetro ambiental umidade relativa foi encontrado significância (P<0,05). A termografia infravermelha pode ser usada para avaliar a temperatura superficial total do testículo dos queixadas de forma eficiente, rápida e segura.

White lipped peccary Tayassu pecari ) is a n eotropical mammal classified as vulnerable due to hunting and destruction of its habitat. Due to the difficulties in captive breeding, assisted reproduction techniques can be applied in repopulation programs of the species. In this way, the first chapter aimed to identify the best hyposmotic test protocol (HOST) to evaluate the functional integrity of the peccary spermatozoa. The semen of four adult males was collected with the aid of an electro ejaculator after physical restraint and protocol of sedation and anesthesia. The semen was evaluated for macro and microscopic characteristics and diluted in the following hyposmotic solutions: distilled water (0 mOsmol / L), sucr ose (50, 100, 150 mOsm / L) and fructose (50, 100, 150 mOsm / L). Each sample was incubated in duplicate and one was fixed in 4% formolized sodium citrate solution. Two hundred spermatozoa were evaluated by sample and classified as reactive or not to HOST. All tested solutions were similar in identifying the percentage of reactive spermatozoa, regardless of whether or not the sample was fixed (P> 0.05). No significant correlations were found between HOST and seminal parameters evaluated. In this way, distil led water can be used as HOST because it presents similar results and because it is a cheaper test. In the second study, in order to assist in the conservation of the species and to allow the rational use of the jaw in captivity and within productive chain s, knowledge about the reproduction of the species is of great importance. The objective of this study was to evaluate the effect of ACP 103 ® , ACP 116 ® and BTS semen diluents on sperm viability during cooling of Tayassu pecari semen. Five ejaculates from f our adult males were refrigerated. The animals were submitted to the protocol of sedation and anesthesia for the collection of semen by the electroejaculation method. After collection, the semen was evaluated macro and microscopically and diluted to reach 35x10 6 sperm / mL in each of the three different diluents tested. The diluted semen was packed in a BotuFLEX® thermal box to keep samples at 15º C for a period of 24 hours. After cooling, spermatozoa were evaluated for sperm movement, functional and struct ural integrity of sperm membranes, mitochondrial activity, chromatin condensation and thermoresistance test. The diluents tested preserved the kinetic characteristics, structural and functional integrity of spermatic membranes, mitochondrial activity and c hromatin condensation similar to in natura semen (P> 0.05). The only parameter that reduced with the cooling process independent of the diluent used was VCL (P <0.05). It was observed an increase in the percentage of morphologically normal spermatozoa in t he samples refrigerated in BTS (P <0.05). The ACP 103 ® , ACP 116 ® and BTS diluents can cool and preserve the XI wwhitehite--lipped peccarylipped peccary semen at 15 °semen at 15 °C for 24 hours. The objective of the third C for 24 hours. The objective of the third study was to evaluate the use of infrared thermography in the evaluatiostudy was to evaluate the use of infrared thermography in the evaluation of the n of the superficial temperature of the peccary scrotum and to compare it with the superficial temperature of the peccary scrotum and to compare it with the seminal and environmental parameters. Twelve adult male seminal and environmental parameters. Twelve adult male wwhitehite--lipped peccarylipped peccary with an average weight of 36.4 kg were used. Physical and chemical restraint of with an average weight of 36.4 kg were used. Physical and chemical restraint of the animals usedthe animals used the same procedures as the previous experiments. Initially, it the same procedures as the previous experiments. Initially, it was carried out the calibration of the superficial temperature of the was carried out the calibration of the superficial temperature of the WhiteWhite--lipped lipped peccarypeccary scrotum by means of infrared digital thermography scrotum by means of infrared digital thermography -- FLIR E60bxFLIR E60bx®® thermal imager, being the emitter focthermal imager, being the emitter focus of the device directed to the scrotum of us of the device directed to the scrotum of each animal and oriented, perpendicularly, to 1m distance and emissivity of 0.98. each animal and oriented, perpendicularly, to 1m distance and emissivity of 0.98. The sThe surface abdominal temperature (°urface abdominal temperature (°C) was also measured with the same C) was also measured with the same apparatus for comparison. Climatic data were measured throuapparatus for comparison. Climatic data were measured throughout the ghout the experimental period. The seminal and thermographic parameters were correlated experimental period. The seminal and thermographic parameters were correlated in a second moment, for that the collection of semen was performed with the aid in a second moment, for that the collection of semen was performed with the aid of an electroejaculator. Total testicular surface temperature (TSTT) obtainof an electroejaculator. Total testicular surface temperature (TSTT) obtained was ed was 33.7 °33.7 °C, which was 4.05C, which was 4.05 °°C below the surface abdominal temperature. The C below the surface abdominal temperature. The correlations were not significant between the TSTT and seminal parameters (P> correlations were not significant between the TSTT and seminal parameters (P> 0.05), but between the TSTT and the environmental parameter relative humidity 0.05), but between the TSTT and the environmental parameter relative humidity significance was found (P <0.05). significance was found (P <0.05). Infrared thermography can be used to evaluate Infrared thermography can be used to evaluate the total surface temperature of the the total surface temperature of the wwhitehite--lipped peccarylipped peccary testicles efficiently, testicles efficiently, quickly and safely.quickly and safely.

Relationship between total bacteria counts and somatic cell counts from mammary quarters infected by mastitis pathogens

This study was conducted to establish the relationship between somatic cell count (SCC) and bacterial shedding from mammary quarters according to mastitis pathogens. Milk samples from 638 mammary quarters were examined for mastitis pathogens, SCC and total bacterial count (TBC). The raw data of SCC and TBC were used to perform descriptive statistics. The significance of the arithmetic mean differences between SCC and TBC according to bacteriological examination results was determined by a two-tailed unpaired t-test. Pearson and Spearman´s correlations were done with logarithmic data and linear regression analyses. The geometric means of the bacteriological examination results were (cells mL-1; CFU mL-1): no growth (52,000; 12,000), coagulase-negative staphylococci (85,000; 17,000), Staphylococcus aureus (587,000; 77,000); other streptococci (432,000; 108,000) and Streptococcus agalactiae (1,572,000; 333,000). The Pearson and Spearman's correlations between SCC and TBC were higher than 0.60 for all mastitis pathogens. The regression analyses slopes showed different increase in TBC with the same increase in SCC according to mastitis pathogens. The slope for S. agalactiae (0.542) was higher than that for other mastitis pathogens. The results suggest that the intensity of inflammatory process was associated with number of mastitis pathogens shedding from the mammary gland.

Este estudo foi realizado com objetivo de estabelecer a relação entre contagem de células somáticas (CCS) e a liberação de bactérias de quartos mamários de acordo com os patógenos da mastite. Amostras de leite de 638 quartos mamários foram examinadas para identificação dos patógenos da mastite, CCS e contagem total de bactérias (CTB). Estatísticas descritivas foram utilizadas para avaliar os dados brutos de CCS e CTB. A diferença entre médias para CCS e CTB de acordo com os resultados dos exames bacteriológicos foi avaliada pelo teste T para amostras independentes. Foram realizadas a correlação de Pearson, de Spearman e regressão linear com os dados transformados. As médias geométricas de acordo com os resultados dos exames bacteriológicos foram (células mL-1; UFC mL-1): sem crescimento (52.000; 12.000), estafilococos coagulase negativo (85.000; 17.000), Staphylococcus aureus (587.000; 77000); outros estreptococus (432.000; 108.000) e Streptococcus agalactiae (1.572.000; 333.000). A correlação de Pearson e Spearman entre CCS e CTB foi maior que 0,60 para todos os patógenos da mastite. O coeficiente angular das regressões lineares mostrou diferentes aumentos da CTB como o mesmo aumento da CCS de acordo com os patógenos da mastite. O coeficiente angular para o S. agalactiae (0.542) foi maior em relação aos outros patógenos da mastite. Os resultados sugerem que a intensidade do processo inflamatório foi associada com a quantidade de bactérias da mastite liberada pela glândula mamária.

Relationship between total bacteria counts and somatic cell counts from mammary quarters infected by mastitis pathogens

This study was conducted to establish the relationship between somatic cell count (SCC) and bacterial shedding from mammary quarters according to mastitis pathogens. Milk samples from 638 mammary quarters were examined for mastitis pathogens, SCC and total bacterial count (TBC). The raw data of SCC and TBC were used to perform descriptive statistics. The significance of the arithmetic mean differences between SCC and TBC according to bacteriological examination results was determined by a two-tailed unpaired t-test. Pearson and Spearman´s correlations were done with logarithmic data and linear regression analyses. The geometric means of the bacteriological examination results were (cells mL-1; CFU mL-1): no growth (52,000; 12,000), coagulase-negative staphylococci (85,000; 17,000), Staphylococcus aureus (587,000; 77,000); other streptococci (432,000; 108,000) and Streptococcus agalactiae (1,572,000; 333,000). The Pearson and Spearman's correlations between SCC and TBC were higher than 0.60 for all mastitis pathogens. The regression analyses slopes showed different increase in TBC with the same increase in SCC according to mastitis pathogens. The slope for S. agalactiae (0.542) was higher than that for other mastitis pathogens. The results suggest that the intensity of inflammatory process was associated with number of mastitis pathogens shedding from the mammary gland.

Este estudo foi realizado com objetivo de estabelecer a relação entre contagem de células somáticas (CCS) e a liberação de bactérias de quartos mamários de acordo com os patógenos da mastite. Amostras de leite de 638 quartos mamários foram examinadas para identificação dos patógenos da mastite, CCS e contagem total de bactérias (CTB). Estatísticas descritivas foram utilizadas para avaliar os dados brutos de CCS e CTB. A diferença entre médias para CCS e CTB de acordo com os resultados dos exames bacteriológicos foi avaliada pelo teste T para amostras independentes. Foram realizadas a correlação de Pearson, de Spearman e regressão linear com os dados transformados. As médias geométricas de acordo com os resultados dos exames bacteriológicos foram (células mL-1; UFC mL-1): sem crescimento (52.000; 12.000), estafilococos coagulase negativo (85.000; 17.000), Staphylococcus aureus (587.000; 77000); outros estreptococus (432.000; 108.000) e Streptococcus agalactiae (1.572.000; 333.000). A correlação de Pearson e Spearman entre CCS e CTB foi maior que 0,60 para todos os patógenos da mastite. O coeficiente angular das regressões lineares mostrou diferentes aumentos da CTB como o mesmo aumento da CCS de acordo com os patógenos da mastite. O coeficiente angular para o S. agalactiae (0.542) foi maior em relação aos outros patógenos da mastite. Os resultados sugerem que a intensidade do processo inflamatório foi associada com a quantidade de bactérias da mastite liberada pela glândula mamária.

DIAGNÓSTICO PRECOCE DA GESTAÇÃO EM BOVINOS REALIZADO POR EXAME ULTRASSONOGRÁFICO E SOROLÓGICO

O estudo foi planejado para correlacionar exames ultrassonográficos e sorológicos realizados para o diagnóstico precoce (20 a 30d) de gestação em receptoras de embrião bovino. Cento e vinte (n = 120) receptoras foram sincronizadas (estro = D0) e os embriões frescos produzido in vitro (Biotran IVPP Lab LTDA) transferidos em tempo fixo (TET, em torno D7). No Experimento 1 (n = 46), o diagnóstico de gestação foi realizado no D21, pela detecção do fluxo sanguíneo do CL com a ultrassonografia Doppler colorido (Guimarães et al., Theriogenology 2015) e pela pesquisa sorológica das Glicoproteínas Associadas a Gestação (PAGs). Para o experimento 2 (n = 30), realizada no dia 25, a visualização do conteúdo do útero pela ultrassonografia e também a sorologia para PAGs foram usadas para detectar a gestação. Por último, a sorologia para PAGs foi realizada no D30 do experimento 3. Em todos os experimentos, o diagnóstico ultrassonográfico da vesícula gestacional foi realizada no dia 30 (DG30) e, considerado o padrão "OURO". O procedimento PROC FREQ do SAS foi utilizado para testar o nível de concordância entre os métodos diagnósticos utilizados em cada experimento com o DG30. O método sorológico de diagnóstico aumentou consideravelmente (6,3 para 100%) sua sensibilidade (correta detecção de não gestantes) do D21 para o D25, sendo mantida elevada no D30 (100%). No entanto, sua especificidade (correta detecção de gestantes) apresentou pequenas flutuações (86,7, 84,6 e 81,8%) nos diagnósticos do D21, 25 e 30, respectivamente. Estes dados demonstraram possível aumento das concentrações séricas de PAGs após dia 21. Os exames ultrassonográficos também alteraram sua sensibilidade (100 e 88,2%) e especificidade (53,3 e 92,3%), respectivamente, nos dias 21 e 25. A tecnologia Doppler demonstrou em outros estudos seu potencial para detectar animais não gestantes no D21, mas a especificidade do exame é altamente relacionada à taxa de prenhez do rebanho, e este índice foi baixo (34,8%, 16/46) no experimento 1. O conteúdo gestacional foi visualizado na maioria das vezes no D25, no entanto, a sensibilidade de 88,2% deste exame nesta fase ocorreu devido a duas receptoras gestantes em que o conteúdo uterino não foi visualizado. Estes animais apresentaram sorologia positiva para PAGs. Situação oposta ocorreu no D30, onde o exame ultrassonográfico detectou a perda gestacional enquanto a sorologia para PAG se manteve positiva. Assim, pode-se concluir que o teste sorológico tem maior acurácia após o dia 21 (93,3 e 90,9%, D25 e D30, respectivamente) e o diagnóstico ultrassonográfico melhora gradualmente sua acurácia a partir do D21 (69,6 e 90,0%, respectivamente, D21 e D25). Além disso, no D25, a combinação de ambos os métodos (PAGs e ultrassonografia) pode melhorar significativamente a precisão geral (96,7%) do diagnóstico. Os níveis séricos de PAGs após a perda gestacional podem reduzir a especificidade do teste sorológico.

The study was developed in order to relate sonographic and serologic exams performed for early (20 to 30d) diagnostic of pregnancy of bovine embryo recipients. A Hundred and twenty (n=120) recipients were synchronized (estrous=D0) and the news embryo transferred (TET, around D7) of fresh in vitro embryos (Biotran IVEP Lab LTDA). In the first experiment (n=46), diagnostic of pregnancy were performed on D21 by detecting CL blood flow with Color Doppler ultrasound (Guimaraes et al., Theriogenology 2015) and by serologic search of the Pregnancy-Associated Glycoproteins (PAGs). In the second experiment (n=30), performed on day 25, the ultrasound image of uterine and PAGs serology were used to detect pregnancy. Finally, PAGs serology was performed on D30 in the third experiment. All experiments, the ultrasonic diagnostic of gestational vesicle was performed on day 30 (DG30) and it was considered the as a GOLD pattern. The PROC FREQ procedure was used to test the agreement level of the diagnostic methods in each experiment with DG30. The method based on serologic diagnostic had dramatically improved (6.3 to 100%) its sensitivity right detection of non-pregnant recipients) from D21 to D25 and it was kept high in D30 (100%). However, the specificity right detection of pregnant) of the test had shown only little changes 86.7, 84.6 and 81.8%, for diagnostics D21, 25 and 30, respectively. These data have shown possible increase of serum concentrations of PAGs after the twenty-first day. The sonographic exams also change its sensitivity (100 and 88.2%) and specificity (53.3 and 92.3%), respectively, for D21 and D25. Doppler technology has proved its potential to detect non-pregnant animal on day 21, but the specificity is highly related to the pregnancy rate of the herd, and it was low lower (34.8%, 16/46) in the first experiment. Uterine gestational contents could be visualized most of times in the day 25, however, the sensitivity of 88.2% was achieved due the two pregnant recipients in which the contents were not visualized. These animals were serologic positive for PAGs. Opposed situation occurred on day 30, where uterine ultrasound has detected pregnancy lost while the PAG serology kept positive. Therefore, can be concluded that the serologic pregnancy test has higher accuracy after day 21 (93.3 and 90.9%, for day 25 and 30, respectively) and sonographic diagnostic gradually improve its accuracy from day 21 to 25 (69.6 and 90.0%, respectively). Furthermore, in the day 25, the combination of both methods (PAG and ultrasound) can improve the overall accuracy (96.7%) on diagnostic of bovine pregnancy recipients. Serum PAGs levels after pregnancy lost can reduce the specificity of the serologic test.

PROTOCOLOS HORMONAIS PARA TRANSFERÊNCIA DE EMBRIÕES EQUINOS EM TEMPO FIXO

Nos programas de transferência de embriões um dos principais entraves são a disponibilidade de receptoras aptas por doadora de embrião. Sendo assim, estudos estão sendo desenvolvidos utilizando de diferentes protocolos hormonais para utilização nas receptoras em programas de TE .O objetivo do presente trabalho foi sincronizar éguas receptoras de embriões, independentes da fase do ciclo estral e da atividade ovariana, com o ciclo da doadora, maximizando a utilização das receptoras no programa de transferência de embriões (TE). Foram utilizadas 160 éguas, que foram separadas em grupos de 20 animais conforme a fase do ciclo estral: 1) éguas acíclicas em anestro e transição, 2) cíclicas em estro com folículos < 35 mm, 3) em estro com folículos 35 mm,4) em diestro com CL < 5 dias e 5) em diestro com CL 5 dias. Inicialmente, todos os animais receberam uma aplicação de 10mg de dinoprosttrometamina e 1 aplicação de 17 estradiol por 4 dias consecutivos seguido por uma aplicação de 300 mg de altrenogest. Posteriormente, o protocolo foi modificado e realizado em mais um grupo 6) com uma dose de 10mg de dinoprosttrometamina no segundo dia do tratamento. Os embriões foram transferidos de três a oito dias após a aplicação do altrenogest. O diagnóstico de gestação foi efetuado 5 a 7 dias após a TE. Com apenas uma aplicação de prostaglandina no primeiro dia de tratamento todos os animais apresentaram edema uterino acentuado e taxas de prenhez superior a 70%, entretanto as receptoras que ao início do tratamento apresentavam a presença de CL < 5 dias mostraram um edema uterino significativamente menor que os demais grupos e índices de gestação de 40%, inferiores aos observados nos demais grupos. Entretanto, quando este grupo foi submetido a duas aplicações de prostaglandina nos dois primeiros dias do tratamento as taxas de gestação aumentaram para 70%. Baseado nos dados obtidos pode-se concluir que boas taxas de prenhez de receptoras de embrião estão relacionadas a uma eficiente sensibilização uterina ao estrógeno que contribui para a posterior ação progesteronica fundamental para obtenção da sincronização do ambiente uterino.

In embryo transfer programs, one of the main obstacles is the availability of recipients suitable for embryo donors. Thus, studies are being developed using different hormonal protocols for use in recipients in ET programs. The objective of the present study was to synchronize the uterine environment of embryo recipient mares, independent of the estrous phase and ovarian activity, with the donor cycle, maximizing the use of recipients in the embryo transfer program. A total of 160 mares were used, which were separated into groups of 20 animals according to the estrous phase: acyclic mares in anestrus and transition, cyclic estrus with follicles <35 mm, estrus with follicles 35 mm, in right ventricle with CL<5 Days and in right arm with CL 5 days. Initially, all animals received an application of 10 mg of Dinoprost tromethamine and 1 application of 17 estradiol for 4 consecutive days followed by a 300 mg application of altrenogest. Subsequently, the protocol was modified and another 10mg dose of Dinoprost tromethamine was added on the second day of treatment. The embryos were transferred three to eight days after the application of altrenogest. The diagnosis of gestation was made 5 to 7 days after ET. With only one application of prostaglandin on the first day of treatment, all the animals had marked uterine edema and pregnancy rates higher than 70%; however, those receiving at the start of treatment had a CL <5 days showed significantly lower uterine edema than The other groups and gestation rates of 40%, lower than those observed in the other groups. However, when this group underwent two prostaglandin applications on the first two days of treatment, gestation rates increased to 70%. Based on the data obtained it can be concluded that good pregnancy rates of embryo recipients are related to an efficient uterine sensitization to estrogen that contributes to the subsequent progesterone action fundamental to obtain the synchronization of the uterine environment.

Ruptura de vasos sanguíneos do mesentério em um equino Puro-Sangue Inglês durante exercícios: relato de caso / Rupture of blood vessels of the mesentery in a Thoroughbred during exercise: case report / Rotura de vasos sanguíneos del mesenterio en un equino Pura Sangre Inglés durante el ejercicio: reporte de un caso

Em equinos Puro-Sangue Inglês de corrida, a morte súbita está relacionada à realização de atividade física ou até uma hora após seu término, sendo as principais causas as lesões pulmonares e cardíacas, hemorragia spulmonares, hemorragias idiopáticas dos grandes vasos e lesões musculoesqueléticas. O presente trabalho relato uo caso de um equino, macho, cinco anos, da raça Puro-Sangue Inglês, utilizado para corrida, com histórico de morte súbita durante o exercício. O animal foi encaminhado ao setor de patologia do Departamento de Assistência Veterinária (DAV) do Jockey Club de São Paulo. Após necropsia constatou-se a ruptura de vasos sanguíneos da raiz do mesentério (tronco jejunal), ocasionando hemorragia intra-abdominal e choque hipovolêmico. Embora as hemorragias idiopáticas dos grandes vasos sejam descritas como uma das causas de morte súbita em equinos decorrida, a ruptura de vasos mesentéricos foi pouco encontrada na literatura veterinária. Está afecção pode acometer animais mais jovens mesmo sendo comumente descritos em animais mais velhos.

English Thoroughbred racing horses sudden death is related to death during p'hysical exercise oreven one hour after its completion, the main causes in are pulmonary and cardiac lesions, pulmbnary hemorrhage,idiopathic bleeding of large vessels and musculoskeletal disorders. This study reported a horse, male, five yearsold, Thoroughbred English racing breed, with a track record of sudden death during exercise. The animal was sentto the pathology sector of the Department of Veterinary Service (DAV) of the Jockey Club of São Paulo. Afterautopsy, it was found the presence of a rupture of blood vessels from the mesentery Root üejunaJ trunk) resulting inan intra-abdominal hemorrhage and shock hypovolemic. Although the bleeding of idiopathic large vessel aredescribed as a cause of sudden death in race horses, tear mesenteric vessels were rarely fourid in the veterinaryliterature. This condition can occur in younger animais it is commonly described in older animais.

En caballos de carreras Pura Sangre Inglés Ia muerte súbita se relaciona con Ia muerte durante elejercicio físico o incluso una hora después de su finalización, Ias principales causas de son lesiones pulmonares ycardíacas, hemorragia pulmonar, hemorragia idiopática de los grandes vasos y Ias lesiones musculares -esqueléticas.Este estudio informó un caballo, varón, de cinco anos, de Ia raza pura sangre Inglés de carreras con antecedentesde muerte súbita durante el ejercicio. EI animal fue enviado ai departamento de patología dei Departamento deServicios Veterinarios (DAV) dei Jockey Club de São Paulo, después de Ia autopsia se encontró Ia presencia de unarotura de vasos sanguíneos en Ia Raíz mesenterio (tronco yeyunal) resultante hemorragia intra-abdominal y shock hipovolémico. Aunque el sangrado de vasos grandes idiopática se describen como causa de muerte súbita en loscaballos de carreras, vasos mesentéricos lagrimales se encuentran raramente en Ia literatura veterinaria. Esta condición puede ocurrir en animales jóvenes que se describe comúnmente en animales de mayor edad.

Ruptura de vasos sanguíneos do mesentério em um equino Puro-Sangue Inglês durante exercícios: relato de caso / Rupture of blood vessels of the mesentery in a Thoroughbred during exercise: case report / Rotura de vasos sanguíneos del mesenterio en un equino Pura Sangre Inglés durante el ejercicio: reporte de un caso

Em equinos Puro-Sangue Inglês de corrida, a morte súbita está relacionada à realização de atividade física ou até uma hora após seu término, sendo as principais causas as lesões pulmonares e cardíacas, hemorragia spulmonares, hemorragias idiopáticas dos grandes vasos e lesões musculoesqueléticas. O presente trabalho relato uo caso de um equino, macho, cinco anos, da raça Puro-Sangue Inglês, utilizado para corrida, com histórico de morte súbita durante o exercício. O animal foi encaminhado ao setor de patologia do Departamento de Assistência Veterinária (DAV) do Jockey Club de São Paulo. Após necropsia constatou-se a ruptura de vasos sanguíneos da raiz do mesentério (tronco jejunal), ocasionando hemorragia intra-abdominal e choque hipovolêmico. Embora as hemorragias idiopáticas dos grandes vasos sejam descritas como uma das causas de morte súbita em equinos decorrida, a ruptura de vasos mesentéricos foi pouco encontrada na literatura veterinária. Está afecção pode acometer animais mais jovens mesmo sendo comumente descritos em animais mais velhos.(AU)

English Thoroughbred racing horses sudden death is related to death during p'hysical exercise oreven one hour after its completion, the main causes in are pulmonary and cardiac lesions, pulmbnary hemorrhage,idiopathic bleeding of large vessels and musculoskeletal disorders. This study reported a horse, male, five yearsold, Thoroughbred English racing breed, with a track record of sudden death during exercise. The animal was sentto the pathology sector of the Department of Veterinary Service (DAV) of the Jockey Club of São Paulo. Afterautopsy, it was found the presence of a rupture of blood vessels from the mesentery Root üejunaJ trunk) resulting inan intra-abdominal hemorrhage and shock hypovolemic. Although the bleeding of idiopathic large vessel aredescribed as a cause of sudden death in race horses, tear mesenteric vessels were rarely fourid in the veterinaryliterature. This condition can occur in younger animais it is commonly described in older animais.(AU)

En caballos de carreras Pura Sangre Inglés Ia muerte súbita se relaciona con Ia muerte durante elejercicio físico o incluso una hora después de su finalización, Ias principales causas de son lesiones pulmonares ycardíacas, hemorragia pulmonar, hemorragia idiopática de los grandes vasos y Ias lesiones musculares -esqueléticas.Este estudio informó un caballo, varón, de cinco anos, de Ia raza pura sangre Inglés de carreras con antecedentesde muerte súbita durante el ejercicio. EI animal fue enviado ai departamento de patología dei Departamento deServicios Veterinarios (DAV) dei Jockey Club de São Paulo, después de Ia autopsia se encontró Ia presencia de unarotura de vasos sanguíneos en Ia Raíz mesenterio (tronco yeyunal) resultante hemorragia intra-abdominal y shock hipovolémico. Aunque el sangrado de vasos grandes idiopática se describen como causa de muerte súbita en loscaballos de carreras, vasos mesentéricos lagrimales se encuentran raramente en Ia literatura veterinaria. Esta condición puede ocurrir en animales jóvenes que se describe comúnmente en animales de mayor edad.(AU)