Gonadal characterization of the Amazonian fish Serrapinnus kriegi (Characidae: Cheirodontinae) / Caracterização gonadal do peixe Amazônico Serrapinnus kriegi (Characidae: Cheirodontinae)

Abstract The knowledge of the testicular and ovarian morphology of a particular fish species is of paramount importance. Such analyze enables the development of studies and techniques aiming the improvement of their reproduction, management, commercialization and even their conservation. This study performed the ovarian and testicular characterization of the ornamental Amazon fish Serrapinnus kriegi. A total of three males and three females had their gonads analyzed by optical microscopy. Females present ovaries filled with oocytes in asynchronous development, indicating partial spawning in the species. Moreover, the micropyle and micropilar cell formation was observed in primary growing oocytes, representing a precocious oocyte development; and the zona radiata in the final vitellogenic oocytes is thicker than other related species, evidencing the development of a better protection to the embryos in function of the waters' turbulence that characterize it spawning sites in the Amazonian streams. The male specimens' present anastomosed tubular testes with unrestricted spermatogonia spread along the entire seminiferous tubules. The present data elucidate the dynamic of spermatogenesis and oogenesis of an ornamental Amazonian species, through the description of the male and female germ cells development.

Resumo O conhecimento da morfologia testicular e ovariana de uma determinada espécie de peixe é de suma importância, pois através destas análises é possível o desenvolvimento de estudos e técnicas visando o melhoramento de sua reprodução, manejo e comercialização e até mesmo auxiliar em sua conservação. Este estudo realizou a caracterização ovariana e testicular do peixe Amazônico ornamental Serrapinnus kriegi. Um total de três machos e três fêmeas tiveram suas gônadas analisadas através de microscopia óptica. As fêmeas apresentam ovários preenchidos por oócitos em desenvolvimento assincrônico, indicando desova parcelada da espécie. Além disso, observou-se a formação de micrópila e célula micropilar em oócitos em crescimento primário, representando o desenvolvimento precoce do oócito; a zona radiata nos oócitos vitelogênicos finais é mais espessa em comparação a outras espécies relacionadas, evidenciando o desenvolvimento de uma melhor proteção aos embriões, em função das águas turbulentas que caracterizam seu local de desova nos córregos amazônicos. Os machos apresentam testículos do tipo tubular anastomosado com espermatogônias irrestritas, espalhadas por todo o túbulo seminífero. Os dados apresentados elucidam a dinâmica da espermatogênese e oogênese de uma espécie de peixe ornamental amazônica, por meio da descrição das células germinativas masculinas e femininas.

Length-weight relationships of fish from sandy beaches / Relação peso-comprimento de 16 espécies de peixes que ocorrem perto de praias arenosas ao longo da bacia do baixo rio Negro na Amazônia brasileira

Abstract This study estimated the length-weight relationships of 16 fish species occurring close to the shores of sandy beaches along the lower Negro River basin, Brazilian Amazon. The specimens were captured for one day each month, in October to November 2016, early in the morning and early evening, using trawl net (20 m taken for standard length (SL - 0.1 cm precision) and total weight (TW - 0.01 g precision). The parameters a and b of the equation WT = a.LTb were estimated. The a values ranged from 0.0018 to 0.0226 and b values ranged from 2.5271 to 3.3244. This study also provides new data on of maximum lengths for six species, Amazonsprattus scintilla, Brycon pesu, Moenkhausia megalops, Pachyurus paucirastrus, Reganella depressa and Trachydoras microstomus, and new reports of the LWRs parameters of 15 fish species.

Resumo Este estudo estimou as relações comprimento-peso de 16 espécies de peixes que ocorrem às margens de praias arenosas ao longo da bacia do baixo Rio Negro, Amazônia brasileira. As espécies foram capturadas durante um dia de cada mês, de outubro a novembro de 2016, no início da manhã e no início da noite, usando rede de cerco (20 m de comprimento e 3,5 m de altura, 5 malha mm entre nós opostos). As medidas foram feitas para comprimento padrão (SL - precisão de 0,1 cm) e peso total (TW - precisão de 0,01 g). Os parâmetros a e b da equação WT = a.LTb foram estimados. Os valores de a variaram de 0,0018 a 0,0226 e os valores de b variaram de 2,5271 a 3,3244. Este estudo também fornece novos dados sobre comprimentos máximos para seis espécies, Amazonsprattus scintilla, Brycon pesu, Moenkhausia megalops, Pachyurus paucirastrus, Reganella depressa e Trachydoras microstomus, e novos reportes dos parâmetros da LWRs de 15 espécies de peixes.

Molecular characterization of Astyanax species (Characiformes: Characidae) from the upper Paraguaçu River basin, a hydrographic system with high endemism

Molecular tools have been employed to improve the knowledge about freshwater Neotropical fishes. Such approaches supporting studies of groups including species complexes such as Astyanax, one of the most diversified and taxonomically complex genus of the family Characidae. Here, we employed species delimitation analyses in four Astyanax species described for the upper Paraguaçu River basin, a drainage within Northeastern Mata Atlântica freshwater ecoregion with high endemism. We implemented single and multilocus approaches based on two mitochondrial and one nuclear markers. Cytochrome c Oxidase I sequences previously available for Astyanax species were also added to our dataset. The single locus analyses showed A. epiagos, A. rupestris, and A. aff. rupestris as different Molecular Operational Taxonomic Units (MOTUs), while A. brucutu and A. lorien were grouped. However, the multilocus approach distinguished these two species and showed congruence for the remaining single locus results. Astyanax aff. rupestris was separated into two MOTUs using both approaches, highlighting the need for an integrative taxonomic revision including A. aff. rupestris. These findings contribute to a better understanding of the diversity of this fish group in the upper Paraguaçu, identifying hidden diversity and reinforcing the relevance of this hydrographic system as a notable hotspot for ichthyofauna biodiversity endemism.(AU)

Ferramentas moleculares têm sido empregadas para melhorar o conhecimento sobre os peixes Neotropicais. Tais abordagens apoiam estudos de grupos que incluem complexos de espécies, como Astyanax, um dos gêneros mais diversificados e taxonomicamente complexos dentro da família Characidae. Neste estudo, nós empregamos análises de delimitação de espécies em quatro espécies de Astyanax recentemente descritas da bacia do alto rio Paraguaçu, uma drenagem dentro da ecorregião Mata Atlântica Nordeste que apresenta alto endemismo. Nós realizamos abordagens de loco único e multilocos baseadas em dois marcadores mitocondriais e um nuclear. Sequências de Citocromo c Oxidase I anteriormente disponíveis para espécies de Astyanax foram adicionadas ao nosso conjunto de dados. As análises de loco único mostraram A. epiagos, A. rupestris e A. aff. rupestris como diferentes Unidades Taxonômicas Operacionais Moleculares (MOTUs), enquanto A. brucutu e A. lorien foram agrupadas. Entretanto, a abordagem multilocos distinguiu estas duas espécies e mostrou congruência com os demais resultados das análises de loco único. Astyanax aff. rupestris foi separada em duas MOTUs usando ambas as abordagens, sugerindo a necessidade de uma revisão taxonômica integrativa incluindo A. rupestris e ambas A. aff. rupestris. Esses achados contribuem para uma melhor compreensão da diversidade desse grupo de peixes na bacia do rio Paraguaçu, identificando diversidade oculta e reforçando a relevância desse sistema hidrográfico como um notável hotspot de endemismo da biodiversidade da ictiofauna.(AU)

Phylogeography of Oligosarcus acutirostris (Characiformes: Characidae): testing biogeographic hypotheses in the Northeastern Mata Atlântica freshwater ecoregion

The Northeastern Mata Atlântica freshwater ecoregion (NMAF) is recognized for the high degree of endemism of its ichthyofauna, whose evolutionary and biogeographic histories are still poorly understood. Oligosarcus acutirostris is a freshwater fish species endemic to the NMAF, which is distributed in coastal rivers and streams draining Bahia, Espírito Santo, and part of Minas Gerais states in eastern Brazil. Its widespread distribution in currently isolated river basins along the NMAF prompted this study, which aimed to understand what scenarios would be involved in determining its current distribution pattern, and to contribute to a better understanding of the biogeographic history of the NMAF. For this, mitochondrial and nuclear DNA sequences were analyzed based on samples from different localities along the species distribution, including its type locality. Overall, phylogeographic analyses indicate a strong genetic structure within the species evidenced mainly by the non-sharing of haplotypes between most of the basins analyzed. According to the AMOVA results, the current distribution of haplotypes is better explained by the Pleistocene coastal paleodrainages. The results are also used to test and complement a biogeographic hypothesis previously proposed for the drainages of the NMAF.(AU)

A ecorregião de água doce Mata Atlântica Nordeste (NMAF) é reconhecida pelo alto grau de endemismo da sua ictiofauna, cujas histórias evolutiva e biogeográfica ainda são pouco compreendidas. Oligosarcus acutirostris é uma espécie de peixe de água doce endêmica da NMAF, que está distribuída em rios e riachos costeiros que drenam os estados da Bahia, Espírito Santo e parte de Minas Gerais, no leste do Brasil. Sua ampla distribuição em bacias atualmente isoladas ao longo da NMAF motivou este estudo, que teve como objetivos entender quais cenários estariam envolvidos na determinação do seu padrão atual de distribuição e contribuir para uma melhor compreensão da história biogeográfica da NMAF. Para isto, foram analisadas sequências de DNA nuclear e mitocondrial, a partir de amostras de diferentes localidades ao longo da distribuição da espécie, incluindo sua localidade tipo. No geral, as análises filogeográficas indicam forte estruturação genética na espécie, evidenciada principalmente pelo não compartilhamento de haplótipos entre a maioria das bacias analisadas. De acordo com os resultados da AMOVA, a distribuição atual dos haplótipos é melhor explicada pelas paleodrenagens costeiras do Pleistoceno. Os resultados obtidos também são utilizados para testar e complementar hipótese biogeográfica previamente proposta para as drenagens da NMAF.(AU)

Effect of feeding frequency and water salinization on early development of Pyrrhulina brevis, an Amazonian ornamental fish / Efeito da frequência alimentar e da salinização da água sobre o desenvolvimento inicial de Pyrrhulina brevis, um peixe ornamental da Amazônia

Pyrrhulina brevis is an endemic fish from the Amazon basin that is valued in the ornamental fish market. In larviculture, fish are very sensitive to stressors and have a high mortality rate. Salinized water may provide more energy to overcome stress and feeding frequency is an important strategy to improve productive performance. Therefore, the aim of this study was to evaluate the best feeding frequency and the best level of water salinization for larval development of P. brevis. A total of 360 post-larvae of P. brevis (5.26 ± 1.65 mg, 5.57 ± 0.68 mm) were randomly distributed in 36 aquariums (1 L) in a 3x4 factorial scheme, to evaluate three concentrations of salt in water (0, 1 and 2 g L-1) and four feeding frequencies (once, twice, three and four times a day). We offered 150 Artemia nauplii per day and per post-larvae during 15 days. The fish kept at 1 g L-1 salinized water, and those fed 3 and 4 times a day presented significantly greater final length and weight, weight gain, and specific growth rate for length and weight. An interaction between salinized water and feeding frequency was observed for survival rate. We conclude that, during the initial rearing phase of P. brevis, feeding frequency of three times a day and salinized water at 1 g L-1 is recommended.(AU)

Pyrrhulina brevis é um peixe endêmico da bacia amazônica que apresenta bons valores no mercado de peixes ornamentais. Na larvicultura, os peixes são muito sensíveis aos estressores e apresentam alta taxa de mortalidade. A água salinizada pode fornecer mais energia para superar o estresse e a frequência alimentar é uma estratégia importante para melhorar o desempenho produtivo. Portanto, o objetivo deste trabalho foi avaliar a melhor frequência alimentar e o melhor nível de salinização da água para o desenvolvimento larval de P. brevis. Um total de 360 pós-larvas de P. brevis (5,26 ± 1,65 mg, 5,57 ± 0,68 mm) foram distribuídos aleatoriamente em 36 aquários (1 L) em esquema fatorial 3x4, para avaliar três concentrações de sal na água (0, 1 e 2 g L-1) e quatro frequências de alimentação (uma, duas, três e quatro vezes ao dia). Foram oferecidas 150 náuplios de Artemia por dia e por pós-larva, durante 15 dias. Os peixes mantidos com 1 g L-1 de água salinizada e os alimentados 3 e 4 vezes ao dia apresentaram comprimento e peso finais, ganho de peso e taxa de crescimento específico para comprimento e peso significativamente maiores. Uma interação entre água salinizada e frequência alimentar foi observada para a taxa de sobrevivência. Concluímos que, durante a fase inicial de criação de P. brevis, recomenda-se uma frequência alimentar de três vezes ao dia e água salinizada a 1 g L-1.(AU)

Phagocytotic activity and gene expression of leukocytes isolated from Astyanax lacustris / Atividade fagocítica e expressão gênica de leucócitos isolados de Astyanax lacustris

The constant intensification of aquaculture has considerable increased the stress levels of farmed fish and, consequently, the number and intensity of diseases outbreaks. Thus, studies on fish immune response, especially regarding the interaction of fish leukocytes with potential pathogens and xenobiotics are of great importance in order to develop new prophylactic and curative strategies. We isolated leukocytes from the head kidney of Astyanax lacustris­an important Neotropical fish species for aquaculture and a potential model for Neotropical aquaculture research­using a Percoll centrifugation protocol. The isolated leukocytes were incubated with lipopolysaccharide (LPS), and the expression of genes IL-1ß, IL-8, LysC, and LysG were measured. We assessed the phagocytotic activity of leukocytes using Congo red-dyed yeast, a novel and cost-effective protocol that has been developed in this study. The isolated leukocytes responded to LPS induction, exhibiting strong IL-1ß and IL-8 upregulation, two of the most important pro-inflammatory interleukins for vertebrates immune reponse. The optimal concentration of yeast for the phagocytic assay was 106 cells mL-1, resulting in acceptable phagocytic capacity (PC) but without excess of yeasts during the counting process, ensuring a high precision and accuracy of the method. To the best of our knowledge, the present study is the first to investigate the in vitro gene expression and phagocytic activity of leukocytes isolated from A. lacustris. Our findings will serve as a reference for future studies on the immunology and toxicology of Neotropical fish.

A constante intensificação da aquicultura tem aumentado consideravelmente os níveis de estresse dos animais cultivados e, consequentemente, o número e a intensidade dos surtos de doenças. Logo, estudos sobre a resposta imune dos peixes, especialmente relacionados com a interação dos leucócitos de peixes com potenciais patógenos e xenobióticos, são de grande importância para o desenvolvimento de novas estratégias profiláticas e curativas. No presente trabalho, nós obtivemos sucesso ao isolar leucócitos oriundos do rim cranial de Astyanax lacustris ­ uma importante espécie de peixe Neotropical para a aquicultura e um modelo em potencial para pesquisas em aquicultura Neotropical ­ usando um protocolo de centrifugação com Percoll. Os leucócitos isolados foram incubados com lipossacarídeo (LPS) e, a expressão dos genes IL-1ß, IL-8, LysC, e LysG foi avaliada. Ainda, um novo protocolo para avaliação da atividade fagocítica dos leucócitos utilizando leveduras coradas com Vermelho Congo foi estabelecido. Os leucócitos isolados responderam à indução com LPS, exibindo up regulation dos genes IL-1ß e IL-8, duas das interleucinas pró-inflamatórias mais importantes para a resposta imune de vertebrados. Além do mais, a concentração ótima de leveduras para a avaliação da fagocitose foi de 106 células mL-1, resultando em uma capacidade fagocítica (PC) aceitável, mas sem excesso de leveduras durante o processo de contagem, garantindo maior precisão e eficácia do método. Até o presente momento, o presente estudo é o primeiro a investigar a expressão gênica e atividade fagocítica de leucócitos isolados de A. lacustris através da abordagem in vitro. Ainda, nossos resultados servirão de referência para futuros estudos em imunologia e toxicologia de peixes Neotropicais.

Effect of dosage of orally administered 17α-methyltestosterone on sex reversion of the yellowtail tetra Astyanax lacustris (Lütken, 1875)

The females of yellowtail tetra (Astyanax lacustris), known as the freshwater sardine, are approximately 1.33 times larger than males, and thus, all-female monosex culture would increase production and reduce size variability. The present work aimed to identify the optimal dose of 17α-methyltestosterone (MT) to be used in the masculinization of A. lacustris for indirect sex reversal. Three different concentrations of MT (20, 40, and 60 mg/kg of feed in the diet) were fed to the fry for 30 days. Thirty adult individuals from each treatment, including the control (0 mg MT/kg), were evaluated for gonadal development, morphological and histological sexual identification, zootechnical performance, and the possible genotoxic effect caused by prolonged exposure to MT. MT significantly (P<0.01) affected the differentiation of the gonads, with the presence of possible inhibitory effects in all treatments. Intersex individuals were present in the 20 and 60 mg MT/kg treatments. All treatments were able to masculinize A. lacustris and the treatment with the lowest hormone concentration produced the highest percentage of males 76.7%, while the control had 46.7% males. The presence of erythrocyte nuclear alterations indicated a possible cytotoxic effect of MT in treatments 40 and 60 mg MT/kg, however, the use of the hormone did not affect the growth and the survival of the individuals. Thus, the use of MT is a viable option for obtaining neomales as a first step into the production of all-female progenies.(AU)

Effects of supplementation with vitamins C and E on the acute inflammatory response in Piaractus mesopotamicus / Efeitos da suplementação com vitaminas C e E na resposta inflamatória aguda em Piaractus mesopotamicus

Vitamins C and E are potent antioxidants that reduces the harmful effects of stress in several species including fish. In this study, it was evaluated the effect of vitamins C, E and their combination in the acute aerocystitis induced by inactivated Aeromonas hydrophila in pacu. 288 fish were distributed into 4 groups supplemented for 90 days: G1-control; G2- supplemented with 500 mg of Vitamin C; G3-supplemented with 500 mg of Vitamin E; G4-supplemented with 500 mg of Vitamin C + 500 mg of Vitamin E. The fish were divided in three groups, the first was not inoculated; second were inoculated in the swim bladder with 3 x 109 CFU of inactivated A. hydrophila and the last one with saline. The inflammatory exudate was collected from the swim bladder for assessment of cellular component and cytochemistry. The results showed higher accumulation of leukocytes in fish inoculated with bacteria. Cytochemistry was effective identifying thrombocytes, lymphocytes, macrophages and, granulocytes present in the exudate. It was also observed fish that received supplementation with vitamins presented higher accumulation of total cells in the exudate with a predominance of lymphocytes and thrombocytes. These results suggested that supplementation with vitamins improved the immunological responses.

As vitaminas C e E são potentes antioxidantes que reduzem os efeitos nocivos do estresse em várias espécies, incluindo peixes. Neste estudo, avaliou-se o efeito das vitaminas C, E e sua combinação na aerocistite aguda induzida por Aeromonas hydrophila inativada em pacu. 288 peixes foram distribuídos em 4 grupos suplementados por 90 dias: G1-controle; G2- suplementado com 500 mg de Vitamina C; G3-suplementado com 500 mg de Vitamina E; G4-suplementado com 500 mg de Vitamina C + 500 mg de Vitamina E. Os peixes foram divididos em três grupos, o primeiro não foi inoculado; o segundo foi inoculado na bexiga natatória com 3 x 109 UFC de A. hydrophila inativada e a última com soro fisiológico. O exsudato inflamatório foi coletado da bexiga natatória para avaliação do componente celular e citoquímica. Os resultados mostraram maior acúmulo de leucócitos nos peixes inoculados com a bactéria. A citoquímica foi eficaz na identificação de trombócitos, linfócitos, macrófagos e granulócitos presentes no exsudato. Também foi observado que os peixes que receberam suplementação com vitaminas apresentaram maior acúmulo de células totais no exsudato com predominância de linfócitos e trombócitos. Esses resultados sugeriram que a suplementação com vitaminas melhorou as respostas imunológicas.

Early ontogeny of tetra Markiana nigripinnis (Characiformes: Characidae)

The early development of Markiana nigripinnis is described by morphological characters, pigmentation, and morphometry. Larvae were obtained through semi-natural breeding, collected, fixed, and identified according to their development. Eighty individuals with standard lengths ranging from 3.1 to 24.3 mm were analyzed. Larvae are poorly developed at hatching, with a relatively large yolk sac and finfold. At the preflexion stage, the eyes are pigmented, the mouth and anus are functional, the yolk is completely absorbed, and the pectoral fin bud emerges. At flexion, the first rays of the caudal, anal, and dorsal fins become evident. The pelvic fin bud emerges only at the postflexion stage, in addition to the complete absorption of the finfold. Pigmentation is distributed throughout the body, with a greater concentration on the top of the head, around the mouth, and at the base of the caudal fin. The myomere total number ranged from 34 to 49 (16-23 preanal, and 18-27 postanal). Juveniles show morphological characteristics like adults. The fins ray number are pectoral: 11-13, pelvic: 5-7, dorsal: 8-11, caudal: 16-27, and anal 30-47. The morphometric relationships reveal variations in growth along the early ontogeny of the species.

O desenvolvimento inicial de Markiana nigripinnis foi descrito considerando os caracteres morfológicos, a pigmentação e a morfometria. Indivíduos foram obtidos por meio de reprodução seminatural, coletados, acondicionados, fixados e identificados conforme seu período e estágio de desenvolvimento. Foram analisados 80 indivíduos com comprimento padrão variando de 3,1 a 24,3 mm. As larvas são pouco desenvolvidas à eclosão, com saco vitelino relativamente grande e presença de membrana embrionária. Em pré-flexão, os olhos estão pigmentados, a boca e o ânus são funcionais, o vitelo é completamente absorvido e surge o botão da nadadeira peitoral. Em flexão, os primeiros raios das nadadeiras caudal, anal e dorsal tornam-se evidentes. O botão da nadadeira pélvica aparece somente em pós-flexão, além da completa absorção da nadadeira embrionária. A pigmentação se distribui pelo corpo todo, com maior concentração no topo da cabeça, ao redor da boca e na base da nadadeira caudal. O número total de miômeros variou de 34 a 49 (16-23 pré e 18-27 pós-anal). Os juvenis apresentaram características morfológicas semelhantes ao adulto. O número de raios das nadadeiras é peitoral: 11-13, pélvica: 5-7, dorsal: 8-11, caudal: 16-27 e anal 30-47. As relações morfométricas revelam variações no crescimento ao longo da ontogenia inicial da espécie.

Morphological study of the digestive tract of the cardinal tetra, Paracheirodon axelrodi (Characiformes: Characidae)

The cardinal tetra Paracheirodon axelrodi is a species of the family Characidae of great interest as an ornamental fish. Many aspects of the biology of this species are still unknown. The present work presents a complete description of the different components of the digestive tract of P. axelrodi, analyzing its global anatomical arrangement, the adjacent glands (liver and pancreas) and the previously ignored pyloric caeca, using histological and histochemical techniques with light microscopy and scanning electron microscopy. Three levels of analysis were performed: macroscopic anatomy, histology of the gastrointestinal tract and scanning electron microscopy of mucosal surfaces. The intestinal coefficient (Ci) of P. axelrodi calculated here (0.94) is within the expected range for a carnivorous species. The anatomy of the alimentary and the resulting Ci is consistent with carnivorous diet in line with dietary studies in the wild in this species. The digestive tract, including adjacent glands (liver and pancreas), presented a relatively conserved general pattern within that described for other species of the family Characidae, especially at the histological level.(AU)

El tetra cardenal Paracheirodon axelrodi es una especie de la familia Characidae de gran interés como pez ornamental. Muchos aspectos de la biología de esta especie son aún desconocidos. En este trabajo se presenta una descripción completa de los diferentes componentes del tracto digestivo de P. axelrodi, analizando su disposición anatómica global, las glándulas adyacentes (hígado y páncreas) y la presencia de ciegos pilóricos, mediante técnicas histológicas e histoquímicas con microscopía óptica y electrónica de barrido. Se realizaron tres niveles de análisis: anatomía macroscópica, histología del tracto gastrointestinal y microscopía electrónica de barrido de las superficies mucosas. El coeficiente intestinal (Ci) de P. axelrodi calculado aquí (0,94) está dentro del rango esperado para una especie carnívora. Los estudios anatómicos del tracto alimentario y el Ci son consistentes con una dieta carnívora en línea con los estudios de la dieta en ejemplares silvestres en esta especie. El tracto digestivo, incluyendo las glándulas adyacentes (hígado y páncreas), presentó un patrón general relativamente conservado dentro de lo descrito para otras especies de la familia Characidae, especialmente a nivel histológico.(AU)

A new species of Knodus (Characiformes: Characidae), with deep genetic divergence, from the Mearim and Munim river basins, Northeastern Brazil, and evidence for hidden diversity in adjacent river basins

A new species of Knodus from the Mearim and Munim River basins, Northeastern Brazil, is herein described based on integrative taxonomy, by using different molecular based species delimitation methods and independent approaches. The new species possesses the combination of character states that usually diagnoses the genus. The new species possesses a similar colour pattern to K. victoriae, which is also morphologically similar to it. The species described herein differs from K. victoriae by possessing more total vertebrae, more branched anal-fin rays, and fewer circumpeduncular scales. We also provide a detailed discussion of the morphological diagnostic features exhibited by Knodus species from adjacent river basins.(AU)

Uma nova espécie de Knodus das bacias dos rios Mearim e Munim, Nordeste do Brasil, é descrita com base em taxonomia integrativa, utilizando diferentes métodos moleculares de delimitação de espécies e abordagens independentes. A nova espécie possui a combinação de estados de caráter que geralmente é utilizada para diagnosticar o gênero. A nova espécie possui um padrão de coloração semelhante a K. victoriae, que também é morfologicamente semelhante a ela. A espécie aqui descrita difere de K. victoriae por possuir mais vértebras totais, mais raios ramificados na nadadeira anal e menos escamas circumpedunculares. Nós também fornecemos uma discussão detalhada das características morfológicas diagnósticas exibidas por espécies de Knodus de bacias hidrográficas adjacentes.(AU)

Diet of Psalidodon aff. fasciatus (Cuvier, 1819) (Teleostei: Characidae) in a neotropical river before reservoir formation / Dieta de Psalidodon aff. fasciatus (Cuvier, 1819) (Teleostei: Characidae) antes da formação de reservatório na região neotropical

The main objective of this study was to identify spatial and seasonal variations on the diet of Psalido-don aff. fasciatus from the Tibagi River (South Brazil) before the construction of the Tibagi Montante hydropower plant. Fish were collected quarterly between October 2017 and July 2019. 536 stomachs containing feeding items and identified to the lowest taxonomic level as possible have been analyzed. Results showed that plants, Hymenoptera, and insect parts in general were the most consumed items. The analysis of feeding strategy showed a diet based on rare items but with individuals varying among specialist, generalist, and opportunistic trends depending on the season. The non-metric multidimen-sional scaling (NMDS) revealed diet overlap in both spatial and seasonal terms, which was confir-med by the permutational analysis of variance (PERMANOVA). The indicator value analysis (IndVal) identified 15 items as the most important components of this species' diet such as superior plants, Hymenoptera and insect parts. Therefore, before the formation of the reservoir, P. aff. fasiatus could be characterized as predominantly herbivore with a strong trend for insectivory. Across seasons, this species had a specialized diet all year, although with more specialized preferences in the spring when the consumption of plants was increased.(AU)

O objetivo deste trabalho foi identificar variações espaciais e sazonais da dieta do Psalidodon aff. fas-ciatus do rio Tibagi (Sul do Brasil) antes da construção da usina hidrelétrica Tibagi Montante. Os peixes foram amostrados trimestralmente entre outubro de 2017 e julho de 2019. Foram analisados 536 estômagos contendo itens alimentares e identificados até o menor nível taxonômico possível. Os resultados indicaram que vegetais, Hymenoptera e restos de insetos em geral foram os itens mais con-sumidos. A análise da estratégia alimentar mostrou uma dieta baseada em itens raros, mas com indi-víduos variando entre tendências especialistas, generalistas e oportunistas, dependendo da estação. O escalonamento multidimensional não-métrico (NMDS) mostrou sobreposição da composição da dieta tanto em escala espacial quanto sazonal, o que foi confirmado pela análise de variância permutacional (PERMANOVA). A análise do valor indicador (Indval) identificou 15 itens como os componentes mais importantes na dieta desta espécie, como plantas superiores, Hymenoptera e resto de insetos. Por-tanto, antes da formação do reservatório, P.aff. fasciatus, pode ser caracterizada como predominante-mente herbívora com forte tendência insetívora. Ao longo das estações, esta espécie apresentou dieta especializada durante todo o ano, embora com especialização na primavera, quando houve aumento do consumo de vegetais. (AU)

Trophic relationships among three species of ornamental fish from the region of Lake Amanã, Amazon / Relações tróficas entre três espécies de peixes ornamentais da região do lago de Amanã, Amazonas

The present study objectified to evaluate the trophic relationships and the possible aggressive mimicry involving Carnegiella strigata, Carnegiella marthae and Gnathocharax steindachneri, in lowland forest streams. Samplings occurred in November 2002, March and August 2003 in Amanã Sustainable Development Reserve (ASDR). The total of 943 fish was caught, being 79.43% of C. marthae, 3.18% of C. strigata and 17.39% of G. steindachneri. Stomach contents, degree of stomach repletion, relative volume and frequency of occurrence of food items were evaluated. Thirteen food items were identified, and the presence of terrestrial and aquatic insects indicates the high dependence of these species and the flooded forest. Low feeding overlap was observed between Carnegiella strigata and C. marthae compared to Gnathocharax steindachneri. However, the overlap between the two Carnegiella species was relatively high, which could explain the low frequency of syntopic occurrence among these species, suggesting a possible case of competitive exclusion.

Este estudo teve como objetivo analisar as relações tróficas e a possível existência de uma relação de mimetismo agressivo envolvendo Carnegiella strigata, Carnegiella marthae e Gnathocharax steindachneri, em igarapés de terra firme. As coletas ocorreram em novembro de 2002, março e agosto de 2003 e foram realizadas na Reserva de Desenvolvimento Sustentável de Amanã (RDSA). Foram capturados 943 peixes, onde C. marthae representou 79,43%, C. strigata 3,18% e G. steindachneri 17,39%. Foram analisados os conteúdos estomacais e verificados grau de repleção, volume relativo e frequência de ocorrência dos alimentos. Foram identificados 13 itens alimentares, onde insetos terrestres e aquáticos denotaram alto grau de dependência destas espécies em relação à floresta alagada. Ocorreu baixa sobreposição alimentar das espécies Carnegiella strigata e C. marthae em relação a Gnathocharax steindachneri. Entretanto, a sobreposição entre as duas espécies de Carnegiella foi relativamente alta, o que poderia explicar a baixa frequência de ocorrência sintópica entre essas espécies, sugerindo um possível caso de exclusão competitiva.

High rDNA polymorphisms in Astyanax lacustris (Characiformes: Characidae): new insights about the cryptic diversity in A. bimaculatus species complex with emphasis on the Paraná River basin

This study aimed to identify species of Astyanax bimaculatus group from four Itaipu Reservoir tributaries (Paraná River Basin) by cytogenetics and molecular markers (COI) to investigate the possible occurrence of cryptic diversity in part of this basin. The four populations showed only one karyotype formula and simple AgNORs. FISH with 18S rDNA probe showed a high variation, and 5S rDNA probes evidenced simple sites in most of the specimens, although multiple sites are present in two specimens. The variations of 5S and 18S cistrons generated 13 cytotypes. The molecular data did not reveal cryptic diversity in the populations; however, its grouping with 82 sequences from other stretches of the Paraná River Basin originated three haplogroups (distances of 3.12% and 8.82%) and 33 haplotypes were identified. DNA Barcode suggests that cytogenetic variations represent a high polymorphism degree, and it identified the analyzed specimens as Astyanax lacustris, which confirms the morphological identification. Our data suggest that the cryptic diversity of this group in the tributaries of the Paraná River Basin is different than the proposed by the synonymizations of A. altiparanae and A. asuncionensis to A. lacustris. This study reinforces the importance of integrative cytogenetics and molecular methods for taxonomy.(AU)

Este trabalho teve como objetivo identificar espécies do complexo Astyanax bimaculatus de quatro afluentes do reservatório de Itaipu (bacia do Rio Paraná) por métodos citogenéticos e moleculares (COI), investigando a possibilidade de ocorrência de diversidade críptica em parte desta bacia. As quatro populações apresentaram apenas uma fórmula cariotípica e AgNORs simples. A FISH com rDNA 18S apresentou alto grau de variação e as sondas de rDNA 5S evidenciaram sítios simples na maioria dos exemplares, embora sítios múltiplos tenham sido evidenciados em dois espécimes. As variações dos cistrons 5S e 18S geraram 13 citótipos. Os dados moleculares não revelaram diversidade críptica nas populações, entretanto, seu agrupamento com 82 sequências de outros trechos da mesma bacia formou três haplogrupos (distâncias de 3,12% e 8,82%) e gerou 33 haplótipos. O DNA Barcode sugere que as variações citogenéticas representam um alto grau de polimorfismo e identificou os espécimes analisados como Astyanax lacustris, confirmando a identificação por caracteres morfológicos. Nossos dados sugerem que a diversidade críptica do grupo nos afluentes da bacia do Rio Paraná é diferente do proposto pelas sinonimizações de A. altiparanae e A. asuncionensis para A. lacustris, reforçando a importância da integração de métodos citogenéticos e moleculares para a taxonomia.(AU)

Preparation of tambacu protein concentrates using different methodologies / Elaboração de concentrados proteicos de tambacu a partir de diferentes metodologias

The aim of this study was to develop methodologies to obtain fish protein concentrates from tambacu filleting residues, characterize their physical-chemical composition and evaluate their sensory profile. Concentrates were prepared by one of three methodologies: cooking of the raw material and subsequent drying (FPC1); cooking, drying, lipid removal with ethanol at 70 °C and final drying (FPC2); and three washing steps of the raw material with ethanol at 70 °C and drying (FPC3). FPC2 had a lower final yield (15.5%) and chroma a* (1.77) and chroma b* values (14.12) but higher moisture (5.22%) and protein content (80.39%) and luminosity (74.97), in addition to having the weakest fish taste compared to FPC1 and FPC3. FPC1 had the strongest odour, darkest colour, and strongest fish taste compared to FPC2 and FPC3. Ash, pH values, and water activity were not different between the concentrates. It is concluded that the methodology where lipid removal steps are carried out after cooking and drying (FPC2) is more effective for the removal of lipids and deodorization of tambacu protein concentrate.(AU)

Este trabalho teve por objetivo desenvolver metodologias para a obtenção de concentrados proteicos de pescado a partir de aparas da filetagem de tambacu, caracterizando sua composição físico-química e perfil sensorial. Foram utilizadas três metodologias: cozimento da matéria-prima e posterior secagem (CP1), cozimento, secagem, deslipidificação com etanol a 70°C e secagem final (CP2) e três lavagens da matéria-prima com etanol a 70°C e secagem (CP3). O CP2 apresentou o menor rendimento final (15,5%), porém maior teor de umidade (5,22%), proteína (80,39%) e luminosidade (74,97), além de menores médias para croma a* (1,77), croma b * (14,12), além de sabor de peixe mais fraco comparado aos CP1 e CP3. O CP1 apresentou odor mais forte, cor mais escura e o sabor de peixe mais forte em relação ao CP2 e CP3. Os valores de pH e atividade de água não foram diferentes entre os concentrados. Conclui-se que a metodologia de deslipidificação após o cozimento e secagem (CP2) é mais eficaz para a remoção dos lipídeos e desodorização do concentrado proteico de tambacu.(AU)

In vitro bacterial probiotic selection from Nannostomus beckfordi, an Amazon ornamental fish / [Seleção in vitro de bactérias probióticas do peixe ornamental Amazônico Nannostomus beckfordi]

This study aimed to isolate and select in vitro bacteria with probiotic potential for the Amazon ornamental fish Nannostomus beckfordi. For isolate, twelve fish underwent surgery procedure to remove their intestinal tract, macerate and then inoculate in the plate petri containing de Man Rugosa Sharped Agar (MRS). After bacterial growth (48 hours at 35ºC), selected strains were inoculated in MRS broth and submitted to resistance test with NaCl (0.5, 1.0, 1.5, 2.0, 2.5 and 3.0%), pH (4, 5, 6, 8 and 9) and bile salts (5% w/v). Inhibition test against pathogenic bacteria Aeromonas hydrophila, Pseudomonas aeroginosa, Streptococcus agalactiae and Aeromonas Jandaei was also performed. Within the isolated strains group (23 strains), only six (S1, S2, S3, S4, S5 and S6) showed probiotic potential. Strains S1 and S6 showed the greater resistance for NaCl (0.5% and 1%) and pH (5 and 6), but only S1 obtained better results to resist the bile salts. Even against pathogenic bacteria, the S1 showed the best results with inhibition halos greater than 9 mm. In the end, this bacterial strain (S1) was identified as Enterococcus faecium 11037CHB. Thus, this is the first report regarding isolated autochthonous bacterium E. faecium with probiotic potential of N. beckfordi.

O objetivo deste estudo foi isolar e selecionar in vitro bactérias com potencial probiótico do peixe ornamental Amazônico Nannostomus beckfordi. Para o isolamento, retirou-se o intestino de 12 espécimes, que foram macerados, homogeneizados e semeados em placa de petri contento Ágar Man Rogosa e Sharpe (MRS). Posteriormente ao crescimento bacteriano (48 horas a 35ºC), as cepas selecionadas foram mantidas em caldo MRS e submetidas a testes de resistência a NaCl (0,5, 1,0, 1,5, 2,0 e 2,5 e 3,0%), pH (4, 5, 6, 8 e 9) e sais biliares (5% p/v). O antagonismo foi realizado frente as bactérias patogênicas Aeromonas hydrophila, Pseudomonas aeroginosa, Streptococcus agalactiae e Aeromonas jandaei. Das cepas isoladas (23 cepas), apenas seis (C1, C2, C3, C4, C5 e C6) apresentaram potencial probiótico. As cepas C1 e C6 tiveram maior resistência (p<0,05) para o NaCl (0,5 e 1%) e pH (5 a 6), na presença de sais biliares somente a C1 teve a melhor resistência de crescimento. Para o antagonismo frente as bactérias patogênicas, a C1 apresentou halo de inibição maior que 9 mm. Sendo esta cepa bactéria (C1) identificada como Enterococcus faecium 11037 CHB. Portanto, este é o primeiro relato do isolamento da bactéria autóctone E. faecium em N. beckfordi com potencial probiótico.

Parasitism of Arapaima gigas (Schinz, 1822) in fish farms of the state of Amazonas, Brazil / Parasitismo de Arapaima gigas (Schinz, 1822) em pisciculturas do estado do Amazonas, Brasil

The objective of this study was to investigate the parasites occurrences and to determine the rates of infestation/parasitic infection in juvenile Arapaima gigas from seven fish farms in the state of Amazonas, relating to the characteristics of these fish farms. Of the 70 A. gigas evaluated, 43 were infested/infected, with a total of 133 parasites collected. Three fish farms (2, 4, 6) showed the highest levels of prevalence of parasites (100%, 70%, 70%), mean intensity (4.1±2.6, 8.1±9.2, and 2.1±1.3), and mean abundance (4.1±2.6, 5.7±8.1, and 1.5±1.5), respectively. Prevalence ranged from 30% to 100%, mean intensity from 1.0 to 8.1 and mean abundance from 0.3 to 5.7. Monogenea, Digenea, Nematoda (Hysterothylacium sp. and Spirocamallanus sp.) and Acanthocephala (Neoechinorhynchus sp. and Polyacanthorhynchus sp.) were identified. The parasites Hysterothylacium sp. and Neoechinorhynchus sp. were the most prevalent parasites with 31.43% and 15.71%, respectively. The fish presented negative allometry in growth and constant condition factor. Measures to prevent and control the parasitic diseases diagnosed are discussed as well prophylactic practices that contribute to the biosecurity of the farms.(AU)

O objetivo deste trabalho foi investigar as ocorrências de parasitos e determinar as taxas de infestação/infecção parasitária em juvenis de Arapaima gigas de sete pisciculturas do Estado do Amazonas, relacionando às características dessas pisciculturas. Dos 70 A. gigas avaliados, 43 estavam infestados/infectados, com um total de 133 parasitos coletados. As pisciculturas 2, 4 e 6 apresentaram os maiores níveis de prevalência de parasitas (100%, 70%, 70%), intensidade média (4,1±2,6, 8,1±9,2 e 2,1±1,3) e abundância média (4,1±2,6, 5,7±8,1 e 1,5±1,5), respectivamente. A prevalência variou de 30% a 100%, intensidade média de 1,0 a 8,1 e abundância média de 0,3 a 5,7. Monogenea, Digenea, Nematoda (Hysterothylacium sp. e Spirocamallanus sp.) e Acanthocephala (Neoechinorhynchus sp. e Polyacanthorhynchus sp.) foram identificados. Os parasitas Hysterothylacium sp. e Neoechinorhynchus sp. foram os mais prevalentes com 31,43% e 15,71%, respectivamente. Os peixes apresentaram alometria negativa no crescimento e fator de condição constante. Foram discutidas as medidas de prevenção e controle das doenças parasitárias diagnosticadas, assim como práticas profiláticas que contribuam para a biossegurança das fazendas.(AU)

Divergence times of the Rhoadsia clade (Characiformes: Characidae)

The family Characidae is the most diverse group of fishes in the Neotropics with challenging systematics. The three genera Carlana, Parastremma, and Rhoadsia, formerly considered the subfamily Rhoadsiinae, are now included in the subfamily Stethaprioninae. Previous phylogenetic analyses did not include all genera of Rhoadsiinae, specifically Parastremma. Here, we estimated the phylogenetic relationships and divergence times of the genera of Rhoadsiinae (the Rhoadsia clade) relative to the most representative genera of the Characidae. We used six molecular markers from the mitochondrial and nuclear genome to estimate the phylogeny and divergence times. We confirmed the monophyly of the Rhoadsia clade. Furthermore, we estimated that the Central American genus Carlana and the western Colombian genus Parastremma diverged approximately 13 Mya (95% HPD 8.36­18.11), consistent with the early-closure estimates of the Isthmus of Panama (~15 Mya). The genus Rhoadsia, endemic to Western Ecuador and Northern Peru, was estimated to originate at around 20 Mya (95% HPD 14.35­25.43), consistent with the Andean uplift (~20 Mya).(AU)

La familia Characidae es el grupo más diverso de peces en el Neotrópico con una sistemática compleja. Los tres géneros Carlana, Parastremma y Rhoadsia, antes considerados en la subfamilia Rhoadsiinae, ahora se consideran dentro de la subfamilia Stethaprioninae. Los análisis filogenéticos publicados no incluyen todos los géneros de Rhoadsiinae, específicamente Parastremma. Aquí, estimamos las relaciones filogenéticas y los tiempos de divergencia de los géneros de Rhoadsiinae (el clado Rhoadsia) en relación con los géneros más representativos de Characidae. Utilizamos seis marcadores moleculares del genoma mitocondrial y nuclear para estimar la filogenia y el tiempo de divergencia. Confirmamos la monofilia del clado Rhoadsia. Además, estimamos que el género centroamericano Carlana y el género colombiano occidental Parastremma divergieron aproximadamente hace 13 millones de años (95% HPD 8.36­18.11), lo que es consistente con recientes estimaciones del cierre del Istmo de Panamá (~15 millones de años). Se estimó que el género Rhoadsia, endémico del oeste de Ecuador y el norte de Perú, se originó hace alrededor de 20 millones de años (95% HPD 14.35­25.43), consistente con el levantamiento de los Andes (~20 millones de años).(AU)

Recent dispersal and diversification within the clingfish genus Acyrtus (Actinopterygii: Gobiesocidae), with the description of a new western Atlantic species

The genus Acyrtus (Gobiesocidae) is represented by four valid species distributed in the western Atlantic, and a recently described fifth species from the eastern Pacific. Here, we describe a new species endemic to Trindade Island, Brazil, and provide the first phylogenetic inference for the genus including all representatives. The new species can be distinguished from all its congeners by meristic and morphometric characters, as well as genetic differences. It presents low genetic diversity and, contrarily to other Trindade Island endemic fishes, shows no evidence of recent population growth. Our phylogeny reveals cryptic species and the paraphyletic nature of Acyrtus, which included Arcos nudus (western Atlantic) in a clade that separated from Arcos erythrops (tropical eastern Pacific) around 20 Mya. The three species found in the Brazilian Province, including one that remains undescribed, form a monophyletic clade which colonized the western South Atlantic around 2.6 Mya. Our study suggests that Arcos nudus should be placed in Acyrtus, and that the relationships among the closely-related Gobiesocidae genera Acyrtus (mostly from the Atlantic Ocean) and Arcos (from the Pacific Ocean) need further investigation.(AU)

O gênero Acyrtus (Gobiesocidae) é representado por quatro espécies válidas encontradas no Atlântico ocidental e uma recentemente descrita do Pacífico oriental. Aqui descrevemos uma nova espécie endêmica da Ilha da Trindade, Brasil, e apresentamos a primeira inferência filogenética para o gênero incluindo todos os representantes. A nova espécie pode ser distinguida de suas congêneres por caracteres merísticos e morfométricos, bem como por diferenças genéticas. A espécie apresenta baixa diversidade genética, entretanto, diferentemente de outras espécies endêmicas da Ilha da Trindade, não mostra evidência de expansão populacional recente. A filogenia obtida revelou a existência de espécies crípticas e a natureza parafilética de Acyrtus, o qual inclui Arcos nudus (do Atlântico ocidental), e que é separado de Arcos erythrops (do Pacifico tropical oriental) por cerca de 20 milhões de anos. As três espécies encontradas no Brasil, incluindo uma ainda não descrita, formam um clado monofilético que colonizou o Atlântico Sul ocidental há cerca de 2,6 milhões de anos. Nosso estudo sugere que Arcos nudus deva ser alocado no gênero Acyrtus, e que as relações entre os gêneros Acyrtus (em maioria do Oceano Atlântico) e Arcos (do Oceano Pacífico) precisam ser estudadas em mais detalhes.(AU)

Revisão taxonômica de Psalidodon eigenmanniorum (Cope) com base em análises morfométrica, merística e padrão de colorido (Characiformes: Characidae) / Taxonomic review of Psalidodon eigenmanniorum (Cope) based on morphometric and meristic analysis and color pattern (Characiformes: Characidae)

A identidade de Psalidodon eigenmanniorum (Cope, 1894) e a possibilidade de se constituir em mais de uma espécie é testada através de análises da morfometria (19 medidas), dos caracteres merísticos (14 contagens) e do padrão de colorido de 705 exemplares provenientes dos sistemas dos rios Tramandaí/Mampituba, da laguna dos Patos e drenagem do baixo rio Uruguai. Foram diafanizados e corados 40 exemplares. Os dados morfométricos foram utilizados na Análise de Componentes Principais, Análise Discriminante, Morfometria Geométrica e Função Discriminante. As análises foram feitas considerando os sexos em separado dentro de cada sistema hidrográfico, bem como comparando as populações entre os sistemas hidrográficos e finalmente no conjunto de sistemas representando a área de ocorrência da espécie. A partir dos dados analisados não foram encontradas diferenças entre os sexos. Os resultados mostraram variação morfológica que não sustenta o reconhecimento de possíveis espécies crípticas. A variação encontrada nos dados merísticos, morfométricos e no padrão de colorido justifica a redescrição da espécie. Os resultados das comparações entre as populações indicaram variações nesses caracteres indicando que a espécie possui considerável plasticidade fenotípica.(AU)

The identity of Psalidodon eigenmanniorum (Cope, 1894) and the possibility of constituting more than one species is tested through analyzes of morphometry (19 measurements), meristic characters (14 counts) and the color pattern of 705 specimens from the Tramandaí/Mampituba, from the Patos lagoon and from the lower Uruguay River drainage. Forty specimens were cleared and stained. Morphometric data were used in Principal Component Analysis, Discriminant Analysis, Geometric Morphometry and Discriminant Function. The analysis was carried out considering the sexes separately within each hydrographic system, as well as comparing the populations between the hydrographic systems and finally in the set of systems representing the area of occurrence of the species. No differences were found between the sexes in the analyzed data. The results showed morphological variation that does not support the recognition of possible cryptic species. The variation found in meristic, morphometric and color pattern data justifies the redescription of the species. The species is described to the aforementioned drainages, and the results demonstrate its phenotypic plasticity.(AU)