Genotyping of Malassezia pachydermatis disclosed genetic variation in isolates from dogs in Colombia / Genotipagem de Malassezia pachydermatis revelou variação genética em isolados de cães na Colômbia

Malassezia pachydermatis is a lipophilic and lipid-dependent yeast mostly isolated from animals' skin; hence, it is regarded as a zoophilic species causing otitis externa in dogs. Aspects associated with its epidemiology and pathogenicity is a matter of interest. This study aimed to conduct a molecular characterization of 43 isolates of M. pachydermatis obtained from dogs with otitis externa. For this purpose, the 5.8S internal transcribed spacer 2 (ITS2) and D1/D2 26S rRNA regions were amplified, sequenced and analyzed using restriction fragment length polymorphism (RFLP) with AluI, CfoI, and BstF5I endonucleases. Phylogenetic analyses revealed that these isolates grouped with the sequence types I, IV and V, previously proposed for M. pachydermatis. Interestingly, we found a new polymorphic RFLP pattern using BstF5I, these isolates were associated with the sequence types IV and V, nevertheless an association between polymorphic RFLP patterns, and fosfolipase activity or canine population data was not observed. These findings underline the genetic diversity of M. pachydermatis and provide new insights about the epidemiology of this species in the analyzed population.(AU)

Malassezia pachydermatis é uma levedura lipofílica e dependente de lipídios, principalmente da pele de animais. Sendo, por essa razão, considerada uma espécie zoofílica e causadora de otite externa em cães. Neste sentido, aspectos associados à sua epidemiologia e patogenicidade constituem um tema de interesse científico. O objetivo deste estudo foi realizar a caracterização molecular de 43 isolados de M. pachydermatis obtidos a partir de cães com otite externa. Para esta propósito, foram amplificadas, sequenciadas e analisadas com enzimas de restrição as regiões do gene 5.8S, do espaçador interno transcrito 2 (ITS2) e D1/D2 do 26S do rRNA pelo método RFLP, com as endonucleases AluI, CfOI e BstF5I. Análises filogenéticas revelaram que os isolados se agruparam com as sequências tipo I, IV e V de M. pachydermatis como já descrito anteriormente. De maneira interessante, se observou um novo RFLP polimórfico utilizando BstF5I. Os isolados que mostraram esse padrão foram associados com os padrões IV e V. No entanto, não foi observada associação entre padrões polimórficos de RFLP e atividade de fosfolipase ou dados da população canina. Estes resultados demonstram a diversidade genética de M. pachydermatis e fornecem novas perspectivas sobre a epidemiologia destas espécies na população analisada.(AU)

Genotyping of Malassezia pachydermatis disclosed genetic variation in isolates from dogs in Colombia / Genotipagem de Malassezia pachydermatis revelou variação genética em isolados de cães na Colômbia

Malassezia pachydermatis is a lipophilic and lipid-dependent yeast mostly isolated from animals' skin; hence, it is regarded as a zoophilic species causing otitis externa in dogs. Aspects associated with its epidemiology and pathogenicity is a matter of interest. This study aimed to conduct a molecular characterization of 43 isolates of M. pachydermatis obtained from dogs with otitis externa. For this purpose, the 5.8S internal transcribed spacer 2 (ITS2) and D1/D2 26S rRNA regions were amplified, sequenced and analyzed using restriction fragment length polymorphism (RFLP) with AluI, CfoI, and BstF5I endonucleases. Phylogenetic analyses revealed that these isolates grouped with the sequence types I, IV and V, previously proposed for M. pachydermatis. Interestingly, we found a new polymorphic RFLP pattern using BstF5I, these isolates were associated with the sequence types IV and V, nevertheless an association between polymorphic RFLP patterns, and fosfolipase activity or canine population data was not observed. These findings underline the genetic diversity of M. pachydermatis and provide new insights about the epidemiology of this species in the analyzed population.(AU)

Malassezia pachydermatis é uma levedura lipofílica e dependente de lipídios, principalmente da pele de animais. Sendo, por essa razão, considerada uma espécie zoofílica e causadora de otite externa em cães. Neste sentido, aspectos associados à sua epidemiologia e patogenicidade constituem um tema de interesse científico. O objetivo deste estudo foi realizar a caracterização molecular de 43 isolados de M. pachydermatis obtidos a partir de cães com otite externa. Para esta propósito, foram amplificadas, sequenciadas e analisadas com enzimas de restrição as regiões do gene 5.8S, do espaçador interno transcrito 2 (ITS2) e D1/D2 do 26S do rRNA pelo método RFLP, com as endonucleases AluI, CfOI e BstF5I. Análises filogenéticas revelaram que os isolados se agruparam com as sequências tipo I, IV e V de M. pachydermatis como já descrito anteriormente. De maneira interessante, se observou um novo RFLP polimórfico utilizando BstF5I. Os isolados que mostraram esse padrão foram associados com os padrões IV e V. No entanto, não foi observada associação entre padrões polimórficos de RFLP e atividade de fosfolipase ou dados da população canina. Estes resultados demonstram a diversidade genética de M. pachydermatis e fornecem novas perspectivas sobre a epidemiologia destas espécies na população analisada.(AU)

RAPD-based genotyping of Malassezia pachydermatis from Domestic and wild animals / Genotipificação de Malassezia pachydermatis através da técnica de RAPD

Malassezia pachydermatis (M. pachydermatis) is a fungus of importance in human and veterinary medicine. Although a part of the normal microbiota, it can sometimes be present in its pathogenic form, particularly causing otitis and dermatitis in animals. Among human beings, it mainly affects immune compromised patients and newborns, causing simple pustulosis, seborrheic dermatitis, tinea versicolor or fungemia. This study aimed to analyze the genomic polymorphism in M. pachydermatis samples isolated from Canis familiaris (domestic dog), Felis catus (domestic cat), and Myrmecophaga tridactyla (giant anteater). Two hundred and fourteen samples were collected and cultured in Sabouraud agar with chloranphenicol (100mg L-1) and incubated at 37 C for a period of 7 to 10 days. One hundred and sixty six samples that appeared morphologically comparable to yeast cultures were processed for DNA extraction and PCR was performed for a specific region in the Internal Transcribed Spacer (ITS) of M. pachydermatis. Among these, seven (4.21%) were negative and 159 (95.79%) were positive. Of the 159 positive samples, 102 (64.15%) were from animals with clinical signs and 57 (35.85%) without clinical signs. Fifty-seven samples were selected at random for RAPD-PCR based genotyping and distributed into four genetic groups. Types I and II were more frequent in animals with clinical signs while type III was frequent in healthy animals. Type IV occurred evenly across animals with or without clinical signs. These results indicate differences in pathogenicity of the fungus based on the genotype.

A levedura Malassezia pachydermatis é de importância na medicina humana e veterinária por se apresentar de forma comensal e por vezes sob a forma patogênica. Em animais, causa principalmente otites e dermatites e em humanos acomete principalmente pacientes imunocomprometidos e neonatos, causando desde pustulose simples, dermatite seborréica, pitiríase versicolor até fungemia. Este trabalho teve como objetivo analisar o polimorfismo genômico de amostras de M. pachydermatis nas 208 amostras das espécies Canis familiaris (cão doméstico), 03 amostras de Felis catus (gato doméstico) e 03 amostras de Myrmecophaga tridactyla (tamanduá bandeira). As 214 amostras coletadas foram cultivadas em agar Sabouraud acrescido de cloranfenicol (100mg/l) e incubados a 37C, por um período de sete à dez dias. Os 166 isolados morfologicamente compatíveis com a levedura foram processados para extração do ácido desoxirribonucleico (DNA) e realização da Reação em cadeia pela polimerase (PCR) com oligonucleotídeos específicos para região ITS (Internal Trancribed Spacer) da levedura M. pachydermatis. Quando submetidos à PCR, 07 (4.21%) foram negativas e 159 (95. 79%) tiveram identificação positivas. Das 159 amostras positivas, 102 (64.15%) eram oriundas de animais com sinais clínicos e 57 (35,85%) sem sinais clínicos. Destes, 57 isolados com e sem sinais clínicos, confirmados na PCR foram submetidos a técnica de RAPD-PCR, sendo distribuídos em 4 padrões genéticos. A maioria dos animais doentes foi classificada nos tipos I e II, enquanto os saudáveis no tipo III; no tipoIV houve equivalência entre os isolados, sugerindo diferenças na patogenicidade dos isolados.

RAPD-based genotyping of Malassezia pachydermatis from Domestic and wild animals / Genotipificação de Malassezia pachydermatis através da técnica de RAPD

Malassezia pachydermatis (M. pachydermatis) is a fungus of importance in human and veterinary medicine. Although a part of the normal microbiota, it can sometimes be present in its pathogenic form, particularly causing otitis and dermatitis in animals. Among human beings, it mainly affects immune compromised patients and newborns, causing simple pustulosis, seborrheic dermatitis, tinea versicolor or fungemia. This study aimed to analyze the genomic polymorphism in M. pachydermatis samples isolated from Canis familiaris (domestic dog), Felis catus (domestic cat), and Myrmecophaga tridactyla (giant anteater). Two hundred and fourteen samples were collected and cultured in Sabouraud agar with chloranphenicol (100mg L-1) and incubated at 37 C for a period of 7 to 10 days. One hundred and sixty six samples that appeared morphologically comparable to yeast cultures were processed for DNA extraction and PCR was performed for a specific region in the Internal Transcribed Spacer (ITS) of M. pachydermatis. Among these, seven (4.21%) were negative and 159 (95.79%) were positive. Of the 159 positive samples, 102 (64.15%) were from animals with clinical signs and 57 (35.85%) without clinical signs. Fifty-seven samples were selected at random for RAPD-PCR based genotyping and distributed into four genetic groups. Types I and II were more frequent in animals with clinical signs while type III was frequent in healthy animals. Type IV occurred evenly across animals with or without clinical signs. These results indicate differences in pathogenicity of the fungus based on the genotype.(AU)

A levedura Malassezia pachydermatis é de importância na medicina humana e veterinária por se apresentar de forma comensal e por vezes sob a forma patogênica. Em animais, causa principalmente otites e dermatites e em humanos acomete principalmente pacientes imunocomprometidos e neonatos, causando desde pustulose simples, dermatite seborréica, pitiríase versicolor até fungemia. Este trabalho teve como objetivo analisar o polimorfismo genômico de amostras de M. pachydermatis nas 208 amostras das espécies Canis familiaris (cão doméstico), 03 amostras de Felis catus (gato doméstico) e 03 amostras de Myrmecophaga tridactyla (tamanduá bandeira). As 214 amostras coletadas foram cultivadas em agar Sabouraud acrescido de cloranfenicol (100mg/l) e incubados a 37C, por um período de sete à dez dias. Os 166 isolados morfologicamente compatíveis com a levedura foram processados para extração do ácido desoxirribonucleico (DNA) e realização da Reação em cadeia pela polimerase (PCR) com oligonucleotídeos específicos para região ITS (Internal Trancribed Spacer) da levedura M. pachydermatis. Quando submetidos à PCR, 07 (4.21%) foram negativas e 159 (95. 79%) tiveram identificação positivas. Das 159 amostras positivas, 102 (64.15%) eram oriundas de animais com sinais clínicos e 57 (35,85%) sem sinais clínicos. Destes, 57 isolados com e sem sinais clínicos, confirmados na PCR foram submetidos a técnica de RAPD-PCR, sendo distribuídos em 4 padrões genéticos. A maioria dos animais doentes foi classificada nos tipos I e II, enquanto os saudáveis no tipo III; no tipoIV houve equivalência entre os isolados, sugerindo diferenças na patogenicidade dos isolados.(AU)