Meningoencephalitis caused by Bovine alphaherpesvirus 5 in Pernambuco, Brazil / [Meningoencefalite causada pelo Bovine alphaherpesvirus 5 em Pernambuco, Brasil]

Objetivou-se descrever a ocorrência do Bovine alphaherpesvirus 5 (BoHV5) como causa de meningoencefalite não supurativa em bovinos do estado de Pernambuco, Brasil. Para tanto, 32 amostras de sistema nervoso embebidas em parafina foram obtidas de animais acometidos por doenças neurológicas atendidos na Clínica de Bovinos de Garanhuns da Universidade Federal Rural de Pernambuco (CBG-UFRPE), entre 2012 e 2016. As amostras foram analisadas quanto à presença do gene da glicoproteína C do BoHV5 por reação em cadeia da polimerase (PCR). Dois animais (6,25%) tiveram resultado positivo à PCR, e sua análise de sequenciamento indicou 100% de similaridade para o BoHV5. Os resultados histopatológicos desses dois animais revelaram lesões multifocais de meningoencefalite não supurativa associada à polioencefalomalácia, presença de corpúsculos de inclusão basofílicos, infiltração de células de Gitter e presença de manguitos perivasculares. A PCR se mostra uma importante ferramenta para diferenciação das infecções por BoHV5 de outras enfermidades neurológicas de bovinos, especialmente a raiva.(AU)

Accuracy of quantitative polymerase chain reaction in samples of frozen and paraffin-embedded healthy skin for the diagnosis of canine visceral leishmaniasis / Acurácia da reação em cadeia da polimerase quantitativa em amostras de pele íntegra congelada e parafinada no diagnóstico da leishmaniose visceral canina

The purpose of the present work was to evaluate the accuracy of quantitative polymerase chain reaction (qPCR) performed on samples of fresh frozen tissue (FT) and formalin-fixed, paraffin-embedded (FFPE) healthy skin. This is a validation study conducted with samples from 46 dogs from an endemic area in Brazil. After sample collection, DNA extractions were conducted using commercial kits and qPCR was oriented to kinetoplast DNA (kDNA) targets of the Leishmania infantum species. The results obtained for the FFPE samples showed 63.6% sensitivity and 77.1% specificity, whereas those obtained for the FT samples showed 100% and 48.6%, respectively. Poor agreement was observed for the results of the qPCR technique with FT and FFPE samples. Our results suggest freezing as the most suitable conservation method for the formation of sample databases considering DNA recovery.(AU)

O objetivo deste trabalho foi avaliar a acurácia da PCR quantitativa (qPCR) realizada em amostras de pele íntegra congelada (FT) e parafinada (FFPE). Trata-se de um estudo de validação, com amostras provenientes de 46 cães de uma área endêmica no Brasil. Após as coletas de amostras, as extrações de DNA foram realizadas utilizando-se kits comerciais, e a qPCR foi orientada para alvos do kDNA da espécie Leishmania infantum. Os resultados obtidos para as amostras FFPE foram 63,6% de sensibilidade e 77,1% de especificidade; para as amostras FT, 100% e 48,6%, respectivamente. A concordância dos resultados da técnica de qPCR com amostras FT e FFPE foi pobre. Os resultados sugerem que o congelamento é o método mais adequado de conservação para banco de amostras para recuperação de DNA.(AU)

Accuracy of quantitative polymerase chain reaction in samples of frozen and paraffin-embedded healthy skin for the diagnosis of canine visceral leishmaniasis / Acurácia da reação em cadeia da polimerase quantitativa em amostras de pele íntegra congelada e parafinada no diagnóstico da leishmaniose visceral canina

The purpose of the present work was to evaluate the accuracy of quantitative polymerase chain reaction (qPCR) performed on samples of fresh frozen tissue (FT) and formalin-fixed, paraffin-embedded (FFPE) healthy skin. This is a validation study conducted with samples from 46 dogs from an endemic area in Brazil. After sample collection, DNA extractions were conducted using commercial kits and qPCR was oriented to kinetoplast DNA (kDNA) targets of the Leishmania infantum species. The results obtained for the FFPE samples showed 63.6% sensitivity and 77.1% specificity, whereas those obtained for the FT samples showed 100% and 48.6%, respectively. Poor agreement was observed for the results of the qPCR technique with FT and FFPE samples. Our results suggest freezing as the most suitable conservation method for the formation of sample databases considering DNA recovery.(AU)

O objetivo deste trabalho foi avaliar a acurácia da PCR quantitativa (qPCR) realizada em amostras de pele íntegra congelada (FT) e parafinada (FFPE). Trata-se de um estudo de validação, com amostras provenientes de 46 cães de uma área endêmica no Brasil. Após as coletas de amostras, as extrações de DNA foram realizadas utilizando-se kits comerciais, e a qPCR foi orientada para alvos do kDNA da espécie Leishmania infantum. Os resultados obtidos para as amostras FFPE foram 63,6% de sensibilidade e 77,1% de especificidade; para as amostras FT, 100% e 48,6%, respectivamente. A concordância dos resultados da técnica de qPCR com amostras FT e FFPE foi pobre. Os resultados sugerem que o congelamento é o método mais adequado de conservação para banco de amostras para recuperação de DNA.(AU)

Detection of papillomavirus DNA in formalin-fixed paraffin-embedded equine aural plaque samples / Detecção do DNA de papilomavírus em amostras de placa aural equina fixadas em formalina e embebidas em parafina

A placa aural é uma dermatopatia associada à quatro Equus caballus papillomavirus (EcPVs). Até o momento, o DNA de EcPVs não foi identificado em amostras de placa aural fixadas em formalina e embebidas em parafina (FFPE). O objetivo deste estudo foi otimizar um método para a detecção dos quatro tipos de EcPVs em 21 amostras FFPE usando a PCR. O DNA dos EcPVs foram detectados em 11 amostras (52.4%). O DNA do EcPV4 foi detectado em 38.1% (8/21) e do EcPV3 em 4.8% (1/21) das amostras. Coinfecção foi identificada em duas amostras (9.5%); EcPV4 e 5 foram detectados simultaneamente em uma amostra, enquanto o DNA dos EcPV4 e 6 foi detectado em outra. A especificidade do DNA dos papilomavírus equinos foi avaliada por sequenciamento gênico direto, que confirmou a especificidade dos produtos. A metodologia de PCR proposta possibilita o diagnóstico dos EcPV3, 4, 5 e 6 em amostras FFPE de placa aural equina.(AU)

Detection of papillomavirus DNA in formalin-fixed paraffin-embedded equine aural plaque samples / Detecção do DNA de papilomavírus em amostras de placa aural equina fixadas em formalina e embebidas em parafina

A placa aural é uma dermatopatia associada à quatro Equus caballus papillomavirus (EcPVs). Até o momento, o DNA de EcPVs não foi identificado em amostras de placa aural fixadas em formalina e embebidas em parafina (FFPE). O objetivo deste estudo foi otimizar um método para a detecção dos quatro tipos de EcPVs em 21 amostras FFPE usando a PCR. O DNA dos EcPVs foram detectados em 11 amostras (52.4%). O DNA do EcPV4 foi detectado em 38.1% (8/21) e do EcPV3 em 4.8% (1/21) das amostras. Coinfecção foi identificada em duas amostras (9.5%); EcPV4 e 5 foram detectados simultaneamente em uma amostra, enquanto o DNA dos EcPV4 e 6 foi detectado em outra. A especificidade do DNA dos papilomavírus equinos foi avaliada por sequenciamento gênico direto, que confirmou a especificidade dos produtos. A metodologia de PCR proposta possibilita o diagnóstico dos EcPV3, 4, 5 e 6 em amostras FFPE de placa aural equina.(AU)

Sentinel lymph node biopsy in rats. Comparison between paraffin and frozen section analysis

PURPOSE: To simulate a lymph node metastasis in an animal model using activated carbon, assess their identification in frozen section analysis and compare with histopathological examination in paraffin. METHODS: Thirty two adult female rats were used. They received the carbon injection on its hind legs. Half of the rats was sacrificed on day one, and the other half after 21 days. Thus, 64 lymph nodes were dissected and split longitudinally. One half of the lymph node was sent immediately to frozen section analysis. The other half was fixed in 10% formaldehyde to be cut in paraffin. Slides were divided into quadrants and classified by the presence of carbon in these four quadrants_ They were also classified by the carbon staining intensity. RESULTS: Comparing the slides obtained in the first day and 21 days, there was a tendency of carbon to spread over time, but without statistical significance. The intensity did not alter over time. CONCLUSION: There was no concordance between the two methods of pathological analysis, however the actived carbon was seen in all lymph nodes.(AU)

Histomorphological and immunohistochemical characterization of 172 cutaneous round cell tumours in dogs / Caracterização histomorfológica e imuno-histoquímica de 172 neoplasias cutâneas de células redondas em cães

This paper describes the use of a panel of antibodies (CD117, CD3, CD79a, CD45, cytokeratin, vimentin and E-cadherin) on formalin-fixed, paraffin-embedded sections of canine cutaneous round cell tumours. Neoplastic tumours were diagnosed by histology and histochemical stains and included 107 mast cell tumours, 31 cutaneous histiocytomas, two localized histiocytic sarcomas, 21 cutaneous lymphomas, three plasma cell tumours, one transmissible venereal tumour and seven unclassified round cell tumours. The histologic diagnosis was modified in 39.5% of the total 172 neoplasms. The staining for CD45 and Ecadherin were variable, and therefore, the final diagnoses of cutaneous histiocytoma and localized histiocytic sarcoma were made based on histology in association with negative results for CD3, CD79a, CD117 and cytokeratin. The cellular origin of unclassified round cell tumours was defined in all cases. Cutaneous B-cell lymphoma and plasma cell tumours were CD79a-positive and could be distinguished from each other by the morphological characteristics. Mast cell tumours and T cell lymphoma were CD117 and CD3 positive, respectively. The positive staining for vimentin and the negative staining for CD3, CD79a, CD117 and cytokeratin favoured the diagnosis of transmissible venereal tumours. Thus, the final diagnosis of cutaneous round cell tumours should be based on the interpretation of immunohistochemical results together with the cellular morphology observed by histology. Therefore, more studies to optimize the specific markers in formalin-fixed, paraffinembedded tissues (especially for histiocytes) are required for definitive diagnosis of round cell tumours in dogs.(AU)

Este trabalho descreve o uso de um painel de anticorpos (CD117, CD3, CD79a, CD45, citoqueratina, vimentina e e-caderina em tecidos formalizados e parafinizados para o diagnóstico de neoplasias de células redondas em cães. Os tumores foram diagnosticados usando-se a histopatologia e a marcação imuno-histoquímica. Foram incluídos 107 mastocitomas, 31 histiocitomas cutâneos, 2 sarcomas histiocíticos localizados, 21 linfomas cutâneos, 3 plasmocitomas, 1 tumor venéreo transmissível e 7 tumores de células redondas não classificados. O diagnóstico histológico foi modificado em 39,5% do total de 172 neoplasias. A marcação do anticorpo CD45 e E-caderina foi variável e, nesse sentido, o diagnóstico final de histiocitoma cutâneo e sarcoma histiocítico localizado foi baseado na histologia em associação com os resultados negativos para CD3, CD79a, CD117 e citoqueratina. A origem celular dos tumores de células redondas não classificados foi definida em todos os casos. Linfoma cutâneo de célula B e plasmocitoma foram positivos para CD79a e foram distinguidos entre si pelas características morfológicas. Marcação positiva para vimentina e negativa para CD3, CD79a, CD117 e citoqueratina favoreceram o diagnóstico dos tumores venereos transmissíveis. Assim, o diagnóstico final dos tumores de células redondas foram baseados na interpretação dos resultados da imuno-histoquímica em conjunto com a avaliação das características morfológicas observadas na histologia. Finalmente, mais estudos em relação à padronização de marcadores específicos para tecidos parafinizados (especialmente para histiócitos) são necessários para o diagnóstico definitivo das neoplasias de células redondas em cães.(AU)

Morphology of the male agouti accessory genital glands (Dasyprocta prymnolopha Wagler, 1831) / / Morfologia das glândulas genitais acessórias em cutias (Dasyprocta prymnolopha Wagler, 1831)

The morphology of the accessory genital glands of the male agouti was studied in twenty-three animals that were raised in captivity. Twenty animals had their genital glands dissected in situ for macroscopic description. The samples of each gland were recovered, embedded in paraffin, sliced and stained by Hematoxylin-Eosin technique. It was founded four pairs of glands: the vesicular glands, the coagulating glands, the prostate and the bulbourethral glands. Histological characteristics of the vesicular, coagulating and prostate glands showed similar morphology, within the pseudostratified columnar epithelium. The tubulo-alveolar type of the bulbourethral glands showed a lack of connective tissue among the tubules, a small amount of red stained presented it the cytoplasm, and the presence of vacuoles in the tissue. This study concluded that the agouti showed to have similar morphological aspect described in the others species of rodents.(AU)

A morfologia das glândulas genitais acessórias de cutias foram estudados em 23 animais criados em cativeiros. Vinte animais tiveram suas glândulas genitais dissecadas in situ para as descrições macroscópicas. Para o estudo microscópico foram utilizados três animais. Os fragmentos de cada glândula foram embebidos em parafina, seccionados e corados em hematoxilina e eosina. Foram encontrados quatro pares de glândulas: vesiculares, coaguladoras, próstata e bulbouretrais. As características histológicas da glândula vesicular, coaguladora e próstata mostraram morfologia similar, com epitélio colunar pseudoestratificado. O tipo tuboalveolar da glândula bulbouretral mostrou uma deficiência de tecido conjuntivo, citoplasma pouco corado e presença de vacúolos. Este estudo concluiu que a cutia apresenta as mesmas características morfológicas das glândulas genitais acessórias encontradas em roedores.(AU)

Padronização da técnica de imuno-histoquímica para raiva em amostras de tecido do sistema nervoso central de bovinos fixadas em formol e emblocadas em parafina / Standardization of immunohistochemistry technique for detection of rabies virus in formalin-fixed and paraffin-embedded tissue samples from central nervous system of cattle

Para a padronização da técnica de imuno-histoquímica para raiva foram utilizadas cinco amostras de SNC de bovinos infectados naturalmente com o vírus da raiva usando-se um anticorpo policlonal e dois monoclonais. Para a recuperação antigênica foram avaliados os seguintes reagentes: protease XIV, proteinase K e tampão citrato pH 6,0 mantido a 100ºC por 15 minutos. A detecção de antígeno rábico nas amostras foi possível com os três anticorpos utilizados. O anticorpo policlonal foi superior aos anticorpos monoclonais, demonstrando bons resultados com os três protocolos de recuperação antigênica, obtendo uma maior intensidade de marcação quando utilizado o tampão citrato e calor. A técnica de imuno-histoquímica demonstrou a presença do antígeno viral no citoplasma de neurônios na forma de agregados de grânulos ou de forma redonda ou oval, mostrando cor púsculo de inclusão viral único a múltiplos nos neurônios. A imuno-histoquímica é um método rápido, podendo ser usada na rotina em casos onde inicialmente há suspeita de raiva, especialmente em casos onde fragmentos de cérebro submetidos ao laboratório foram fixados em formol, onde as amostras não podem ser enviadas ao laboratório imediatamente e para a realização de estudos retrospectivos.(AU)

For standardization of the rabies immunohistochemistry technique, five samples of central nervous system (CNS) of cattle naturally infected with rabies virus were examined. One polyclonal antibody and two monoclonal antibodies were used. The following reagents were evaluated for antigen retrieval: XIV protease, proteinase K and citrate buffer (pH 6.0) boiling at 100ºC during 15 minutes in bain-marie. Detection of rabic antigen was possible with the three antibodies tested. The polyclonal antibody was superior to the monoclonal antibodies, demonstrating good results with the three antigen retrieval protocols. The highest intensity staining was obtained with the citrate buffer and heat. The immunohistochemistry technique demonstrated the presence of viral antigens in the cytoplasm of neurons, in form of aggregates or with round or oval shape. The antigens were found as single or multiples inclusion bodies in the neurons. Immunohistochemistry is a fast method that can be used in routine procedures in cases where rabies is suspected, especially when the brain is submitted to the laboratory as formalin-fixed fragments or when samples could not be immediately shipped. The technique is also useful for retrospective studies.(AU)

Padronização da técnica de imuno-histoquímica para raiva em amostras de tecido do sistema nervoso central de bovinos fixadas em formol e emblocadas em parafina / Standardization of immunohistochemistry technique for detection of rabies virus in formalin-fixed and paraffin-embedded tissue samples from central nervous system of cattle

Para a padronização da técnica de imuno-histoquímica para raiva foram utilizadas cinco amostras de SNC de bovinos infectados naturalmente com o vírus da raiva usando-se um anticorpo policlonal e dois monoclonais. Para a recuperação antigênica foram avaliados os seguintes reagentes: protease XIV, proteinase K e tampão citrato pH 6,0 mantido a 100ºC por 15 minutos. A detecção de antígeno rábico nas amostras foi possível com os três anticorpos utilizados. O anticorpo policlonal foi superior aos anticorpos monoclonais, demonstrando bons resultados com os três protocolos de recuperação antigênica, obtendo uma maior intensidade de marcação quando utilizado o tampão citrato e calor. A técnica de imuno-histoquímica demonstrou a presença do antígeno viral no citoplasma de neurônios na forma de agregados de grânulos ou de forma redonda ou oval, mostrando cor púsculo de inclusão viral único a múltiplos nos neurônios. A imuno-histoquímica é um método rápido, podendo ser usada na rotina em casos onde inicialmente há suspeita de raiva, especialmente em casos onde fragmentos de cérebro submetidos ao laboratório foram fixados em formol, onde as amostras não podem ser enviadas ao laboratório imediatamente e para a realização de estudos retrospectivos.(AU)

For standardization of the rabies immunohistochemistry technique, five samples of central nervous system (CNS) of cattle naturally infected with rabies virus were examined. One polyclonal antibody and two monoclonal antibodies were used. The following reagents were evaluated for antigen retrieval: XIV protease, proteinase K and citrate buffer (pH 6.0) boiling at 100ºC during 15 minutes in bain-marie. Detection of rabic antigen was possible with the three antibodies tested. The polyclonal antibody was superior to the monoclonal antibodies, demonstrating good results with the three antigen retrieval protocols. The highest intensity staining was obtained with the citrate buffer and heat. The immunohistochemistry technique demonstrated the presence of viral antigens in the cytoplasm of neurons, in form of aggregates or with round or oval shape. The antigens were found as single or multiples inclusion bodies in the neurons. Immunohistochemistry is a fast method that can be used in routine procedures in cases where rabies is suspected, especially when the brain is submitted to the laboratory as formalin-fixed fragments or when samples could not be immediately shipped. The technique is also useful for retrospective studies.(AU)