Cryptosporidium spp. in dogs - prevalence and genotype distribution

Background: Cryptosporidium spp. is a zoonotic protozoan parasite that affects the gastrointestinal tract of humans and animals. The disease can cause acute and chronic diarrhoea and even death in both humans and animals. In this study, it was aimed to determine the prevalence and genotype distribution of Cryptosporidiosis in shelter dogs in Diyarbakir province located in the Southeastern Anatolia Region of Turkey. Materials, Methods & Results: The animal material of the study consisted of 100 dogs of different breeds and sexes. Faecal samples were collected from the rectum with disposable latex gloves and placed in individual sample containers. All of the samples were examined for Cryptosporidium spp. by Kinyoun Acid Fast and Nested PCR methods. In the Kinyoun Acid Fast staining method, firstly, smear preparations were prepared from fresh faecal samples, fixed in pure methanol for 1 min and allowed to dry. The slides were kept in Kinyoun Carbol-Fuxin for 5 min, dipped in 50% ethyl alcohol, shaken, washed in tap water, kept in 1% sulphuric acid for 2 min and washed in tap water. The slides were kept in methylene blue for 1 min, washed in tap water and allowed to dry. After drying, immersion oil was dripped and examined under a microscope at 100 magnification. DNA extraction was performed from all samples using GeneMATRIX Stool DNA Purification Kit according to the manufacturer's protocol. After Nested PCR analysis was performed. In the PCR step, primers 5'-TTCTAGAGCTAATACATGCG-3' and 5'- CCCATTTCCTTCCTTCGAAACAGGA-3' were used to amplify the 1325 bp gene region. In the nested PCR step, primers 5'- GGAAGGGTTGTATTTATTTATTAGATAAAG-3' and 5'-AAGGAGTAAGGAACAACCTCCA-3' were used to amplify the 826-864 bp gene region. As a result of both methods, a prevalence of 3% was determined. The infection rate was higher in males (3.57%) than females (2.27%) and in younger than 1 year (5.56%) than in older than 1 year (1.56%). The DNA sequences obtained from the sequence analysis of 3 positive PCR samples were analysed in BioEdit software. A phylogenetic tree was constructed with the data set created by using the 18s rRNA gene sequences obtained from the NCBI genbank database and the DNA sequences obtained as a result of the study, and it was shown which Cryptosporidium species the study samples were related to. Today, many Cryptosporidium species have been identified and most of these species have host adaptation. Although C. canis is the most common species in dogs, C. muris, C. meleagridis, and C. parvum have also been detected. Among these species, C. parvum is recognized as a zoonotic species infecting a wide range of mammals. In this study, DNA sequencing of nested PCR positive samples revealed that 3 samples were zoonotic C. parvum. Discussion: This suggests that dogs may be a reservoir for zoonotic transmission of Cryptosporidium. Consequently, it is recommended that people should be informed about the potential for transmission of this protozoan to humans and animals and that control programmes should be implemented, including the prevention of free entry of stray dogs into public places and homes.

Cross-genera amplification and identification of Colpodella sp. with Cryptosporidium primers in fecal samples of zoo felids from northeast China / Amplificação cruzada de gêneros e identificação de Colpodella sp. com iniciadores de Cryptosporidium em amostras fecais de zoofilia do nordeste da China

Abstract The protozoans include many intracellular human pathogens. Accurate detection of these pathogens is necessary to treat the diseases. In clinical epidemiology, molecular identification of protozoan is considered a more reliable and rapid method for identification than microscopy. Among these protozoans, Cryptosporidium considered being one of the important water-borne zoonotic pathogens and a major cause of a diarrheal disease named cryptosporidiosis in humans, domestic animals, and wild animals. This study was aimed to identify Cryptosporidium in zoo felids (N= 56) belonging to different zoo of China, but accidentlly Colpodella was encountered in the zoo felids sample and phylogenetic data confirmed this unexpected amplification from fecal samples using two-step nested-PCR. Phylogenetic analysis revealed the fact about the specific primers used previously by many researchers and cross-genera amplification. We came to know that genetically sequenced amplicon gives more accurate identification of species. This study suggests more investigation on Colpodella which has been neglected previously but gains the attention of researchers after identified from humans and animals and has been known to correlate with neurological symptoms in patients.

Resumo Os protozoários incluem muitos patógenos humanos intracelulares. A detecção acurada desses patógenos é necessária para tratar as doenças. Na epidemiologia clínica, a identificação molecular de protozoários é considerada o método de identificação mais confiável e rápido do que a microscopia. Entre esses protozoários, o Cryptosporidium é considerado um dos importantes patógenos zoonóticos transmitidos pela água e uma das principais causas de uma doença diarreica denominada criptosporidiose em humanos, animais domésticos e selvagens. Este estudo teve como objetivo identificar Cryptosporidium em zoofelídeos (N = 56) pertencentes a diferentes zoológicos da China, mas acidentalmente Colpodella foi encontrada na amostra de zoofelídeos e os dados filogenéticos confirmaram essa amplificação inesperada de amostras fecais usando nested-PCR em duas etapas. A análise filogenética revelou o fato sobre os primers específicos usados ​​anteriormente por muitos pesquisadores e a amplificação entre gêneros. Ficamos sabendo que o amplicon sequenciado geneticamente fornece uma identificação mais acurada das espécies. Este estudo sugere mais investigação sobre Colpodella, que foi negligenciada anteriormente, mas ganha a atenção dos pesquisadores depois de identificada em humanos e animais e é conhecida por se correlacionar com sintomas neurológicos em pacientes.

Occurrence of Cryptosporidium in Anglonubian goats in the municipality of Teresina, state of Piauí, Brazil / Ocorrência de Cryptosporidium em cabras da raça Anglonubiana no município de Teresina, estado do Piauí, Brasil

This research aimed to investigate the occurrence of Cryptosporidium and correlate it with types of housing, feces consistency, and physiological parameters related to the reproductive status of Anglo-Nubian goats reared in the State of Piauí, Brazil. A total of 180 fecal samples were collected from 60 non-pregnant and lactating goats with a mean weight of 35 kg, a body condition score of 3.5, and a mean age of three years from an experimental herd at the Federal University of Piauí (UFPI). Oocysts of protozoa of the genus Cryptosporidium could be found in the studied animals using the modified Ziehl-Neelsen technique in fecal smears and the image analysis system to perform morphometry. Each independent variable in the quantitative and qualitative analyses, that is, weight, body condition score (BCS), physiological status (non-pregnant or lactating), feces consistency (normal, pasty, or diarrheal), and floor types (concrete and slatted), was tested with the dependent variable (positive samples, i.e., the presence of Cryptosporidium oocysts). Twenty-four out of the total number of fecal samples were considered positive for the presence of the protozoan, which means that 13.3% of the animals were parasitized. Moreover, 100% of the positive feces samples had normal consistency (firm) and all parasitized animals were reared in pens with a concrete floor. A statistical variation was observed in the BCS of parasitized animals compared to non-parasitized ones (p > 0.0253). The results showed that the occurrence of Cryptosporidium in experimental goats located in the municipality of Teresina, State of Piauí, Brazil, was considered low, requiring sanitary management measures to prevent infection in animals and humans. This is the first report of Cryptosporidium infection in goats in the State of Piauí.

O objetivo desta pesquisa foi investigar a ocorrência de Crypstoporidium e correlacionar com tipos de alojamento, consistência das fezes e parâmetros fisiológicos ligados ao estado reprodutivo de cabras da raça Anglonubiana criadas no estado do Piauí, Brasil. Foram utilizadas 180 amostras de fezes de 60 cabra, com peso médio de 35kg, escore de condição corporal de 3,5, com idade em média de três anos, e cabras vazias e lactantes, de um rebanho experimental da Universidade Federal do Piauí (UFPI). Utilizando-se a técnica de Ziehl-Neelsen modificada em esfregaço fecal e sistema de análise de imagens para a realização da morfometria, foi possível encontrar oocistos de protozoários do gênero Crypstoporidium nos animais estudados. Nas análises quantitativa e qualitativa, cada variável independente: peso, escore de condição corporal (ECC), estado fisiológico (vazia ou lactante), consistência das fezes (normal, pastosa ou diarreica) e tipos de piso (concreto e ripado), foi testada com a variável dependente (amostras positivas, ou seja, presença de oocistos de Cryptosporidium). Do total de amostras fecais analisadas, 24 delas foram consideradas positivas à presença do protozoário, o que significa que 13,3% dos animais estavam parasitados na ocasião da pesquisa. Foi observado que 100% das amostras de fezes positivas apresentaram consistência normal (firme) e que todos os animais parasitados eram criados em aprisco com piso de concreto. Houve uma variação estatística no ECC dos animais parasitados comparados aos não parasitados (p > 0,0253). Os resultados evidenciaram que a ocorrência de Cryptosporidium em caprinos experimentais localizados no município de Teresina, no estado do Piauí, foi considerada baixa, sendo necessária medidas de manejo sanitário para prevenir a infecção nos animais e no homem. Este é o primeiro relato da infecção por Cryptosporidium em cabras no estado do Piauí.

Cryptosporidium infection in diarrheal bovine dairy calves: occurrence and risk factors in Santa Catarina, Brazil / Infecção por Cryptosporidium em bezerros com diarreia: ocorrência e fatores de risco em Santa Catarina, Brasil

Cryptosporidium protozoa genus are parasites that cause acute enteric disease in young and immunocompromised animals, resulting in anorexia, loss and decrease in weight gain, and, in severe cases, death. Therefore, this study aimed: i) to determine the occurrence of Cryptosporidium spp. in calves with clinical diarrhea in different regions of Santa Catarina, Brazil; ii) to evaluate the risk factors involved with the frequency of infection. iii) to determine the species most involved with the disease in the region. For this, 425 samples were collected in 141 dairy farms, from animals with ages ranging from 0 to 150 days. For this purpose, the samples were submitted to the modified Ziehl-Neelsen technique, with molecular analysis of the positive samples being performed. It was observed 62.1% occurrence of Cryptosporidium spp. in this sampling, especially between 8 to 15 days. Regarding the risk factors evaluated, such as age, management, facilities, water source and Koppen climate (CFA and CFB), none showed statistical significance. Samples positive by the Ziehl-Neelsen technique (32 samples) were randomly selected for molecular diagnosis. Of these, 10 were sequenced, allowing the identification of Crypstosporidium parvum in 6 samples. However, this study proves the existence and high occurrence of the protozoan in different regions of the state of Santa Catarina, Brazil.

Os protozoários do gênero Cryptosporidium são parasitas que causam doença entérica aguda em animais jovens e imunocomprometidos, resultando em anorexia, perda e diminuição do ganho de peso e, em casos graves, morte. Portanto, este estudo teve como objetivo determinar a ocorrência de Cryptosporidium spp. em bezerros com diarreia clínica em diferentes regiões de Santa Catarina, Brasil; bem como avaliar os fatores de risco envolvidos com a frequência de infecção. Além disso, com um número seleto de amostras, buscou-se determinar as espécies mais envolvidas com a doença na região por meio de técnicas moleculares. Para isso, foram coletadas 425 amostras em 141 fazendas leiteiras, de animais com idade variando de 0 a 150 dias. Observou-se 62,1% de ocorrência de Cryptosporidium spp. nesta amostragem, principalmente entre 8 a 15 dias. Em relação aos fatores de risco avaliados, como idade, manejo, instalações, fonte hídrica e clima de Koppen (CFA e CFB), nenhum apresentou significância estatística. No entanto, este estudo comprova a existência e alta ocorrência do protozoário em diferentes regiões do estado de Santa Catarina, Brasil.

Validation of a one-tube nested real-time PCR assay for the detection of Cryptosporidium spp. in avian fecal samples / Validação da nested PCR em tempo real em um tubo para detecção de Cryptosporidium spp. em amostras fecais de aves

Abstract The aim of this study was to validate a one-tube nested real-time PCR assay followed by genetic sequencing to detect and identify Cryptosporidium species and genotypes in birds. A total of 443 genomic DNA extracted from avian fecal samples were analyzed by one-tube nested real-time PCR and conventional nested PCR. By one-tube nested real-time PCR, 90/443 (20.3%) samples were positive for Cryptosporidium spp. In contrast, 36/443 (8.1%) samples were positive for Cryptosporidium spp. by conventional nested PCR. The analytical sensitivity test showed that one-tube nested real-time PCR detects approximately 0.5 oocyst (2 sporozoites) per reaction. An evaluation of analytical specificity did not reveal amplification of microorganisms that commonly present nonspecific amplification with primers used for the diagnosis of Cryptosporidium spp. The repeatability analysis showed the same result in 27 out of 30 samples (90%). As for the reproducibility of one-tube nested real-time PCR, 24 of the 30 samples examined (80%) showed the same result. All the 90 samples amplified by one-tube real-time nested PCR were successfully sequenced, leading to the identification of C. baileyi, C. galli, C. meleagridis, C. proventriculi, and Cryptosporidium avian genotype I. Genetic sequencing of conventional nested PCR amplicons was successful in 10/36 (27.8%) of positive samples.

Resumo O objetivo deste trabalho foi validar um protocolo de nested PCR em tempo real em um tubo (nPCR-TR-1T) seguida de sequenciamento genético para detectar e caracterizar as espécies e genótipos de Cryptosporidium em aves. Um total de 443 amostras de DNA genômico, extraído de amostras fecais de aves, foi analisado pela nPCR-TR-1T e pela nested PCR convencional. Pela nPCR-TR-1T, foi observada positividade para Cryptosporidium spp. de 20,3% (90/443), em contraste com a nested PCR convencional, que apresentou positividade de 8,1% (36/443). O teste de sensibilidade analítica mostrou que a nPCR-TR-1T detecta aproximadamente 0,5 oocisto (2 esporozoítos) por reação. A avaliação da especificidade analítica não revelou amplificação de microrganismos que comumente apresentam amplificação inespecífica com primers utilizados para o diagnóstico de Cryptosporidium spp. O cálculo da repetibilidade evidenciou o mesmo resultado em 27 de 30 amostras (90%). Em relação à reprodutibilidade da nPCR-TR-1T, foi observado o mesmo resultado em 80% (24/30) das amostras examinadas. Foi possível realizar o sequenciamento em todas as 90 amostras amplificadas pela nPCR-TR-1T, com identificação de C. baileyi, C. galli, C. meleagridis, C. proventriculi e Cryptosporidium genótipo I em aves. O sequenciamento dos fragmentos amplificados pela nested PCR convencional foi possível em 10/36 (27,8%) das amostras positivas.

Prevalence of cestodes infection among school children of urban parts of Lower Dir district, Pakistan / Prevalência de infecção de cestóides entre crianças em idade escolar de partes urbanas do distrito de Lower Dir, Paquistão

Tapeworms of zoonotic importance have been described as a leading public health problem. Current research was aim to assess the prevalence of tapeworms among 5-12years school children residing in district Lower Dir, Pakistan from January 2019-December 2019. The wet mount preparation in saline/iodine/methods were used for stool examination. Data was analyzed using appropriate descriptive, static methods. Of the 400 children studied 71.7% were infected with one or more species of intestinal parasites. Single infection of cestode species was found in 69 individuals with 17.2% prevalence and multiple parasitic infections were identified in 19.7% (n=79/400) individuals. The multiple infection were comprised as 10% (n=40) double, 6.75% (n=27) triple and 3% (n=12) quadruple. A total of 9 species of helminths and one species of protozoan infection. Among the helminths Ascaris lumbricoides was the most prevalent 33.1% (n=95), Taenia saginata 22.6% (n=65), hookworm 19.8% (n=57), Hymenolepis nana 18.8% (n=54), Enterobius vermicularis and Hymenolepis diminuta 1.39% (n=4each), Trichuris trichura 1.04% (n=3), Toxocara spp 0.69% (n=2) and Schistosoma japonicum 0.34% (n=1) were reported. One protozoan species was Cryptosporidium spp 0.69% (n=2) in current study. In case of A.lumbricoides, hookworm, E.vermicularis, T.trichura, T.saginata, H.nana and H.diminuta the male children of below 8 years of age were highly infected. Other infections are reported in the same prevalence with slight difference if any. We conclude that there is a need for mass scale campaigns to create awareness regarding health and hygiene in children and the need for development of effective poverty control programs because deworming alone is not adequate to control parasitic infections.

As tênias de importância zoonótica têm sido descritas como um dos principais problemas de saúde pública. A pesquisa atual teve como objetivo avaliar a prevalência de tênias entre crianças em idade escolar de 5 a 12 anos que residem no distrito de Lower Dir, Paquistão, de janeiro de 2019 a dezembro de 2019. Os métodos de preparação para montagem úmida em solução salina/iodo foram usados para exame de fezes. Os dados foram analisados usando métodos descritivos e estáticos apropriados. Das 400 crianças estudadas, 71,7% estavam infectadas com uma ou mais espécies de parasitas intestinais. Infecção única de espécies de cestóides foi encontrada em 69 indivíduos com prevalência de 17,2% e infecções parasitárias múltiplas foram identificadas em 19,7% (n = 79/400) indivíduos. As infecções múltiplas foram compostas por 10% (n = 40) dupla, 6,75% (n = 27) tripla e 3% (n = 12) quádrupla. Um total de 9 espécies de helmintos e uma espécie de infecção por protozoários. Entre os helmintos, Ascaris lumbricoides foi o mais prevalente 33,1% (n = 95), Taenia saginata 22,6% (n = 65), ancilóstomo 19,8% (n = 57), Hymenolepis nana 18,8% (n = 54), Enterobius vermicularis e Hymenolepis diminuta 1,39% (n = 4cada), Trichuris trichura 1,04% (n = 3), Toxocara spp 0,69% (n = 2) e Schistosoma japonicum 0,34% (n = 1). Uma espécie de protozoário foi Cryptosporidium spp 0,69% (n = 2) no estudo atual. No caso de A.lumbricoides, ancilostomíase, E.vermicularis, T.trichura, T.saginata, H.nana e H.diminuta, as crianças do sexo masculino com menos de 8 anos de idade estavam altamente infectadas. Outras infecções são relatadas na mesma prevalência, com ligeira diferença, se houver. Concluímos que há uma necessidade de campanhas em massa para criar consciência sobre saúde e higiene em crianças e a necessidade de desenvolvimento de programas eficazes de controle da pobreza, porque a desparasitação por si só não é adequada para controlar infecções parasitárias.

Zoonoses parasitárias oriundas de fezes de cães no Brasil / Parasitic zoonoses arising from dog feces in Brazil

O crescente número de animais de companhia, principalmente nos grandes centros, tem estreitado o contato entre esses e o homem, aumentando a exposição humana a agentes de zoonoses. A incidência de zoonoses parasitárias é frequente em cães. Entre as zoonoses parasitárias estão: Giardíase, Dipilidiose, Criptosporodiose, Toxocaríase, Larva migrans cutânea, Larva migrans ocular e Larva migrans visceral. Diante do exposto, o objetivo deste estudo foi realizar uma revisão de literatura dessas zoonoses transmitidas por fezes de cães no Brasil. Foi realizada, para isso, uma busca em revistas acadêmicas científicas disponíveis on-line e impressas, com os seguintes termos de indexação: zoonoses parasitárias e parasitos intestinais em cães; sendo incluídos no estudo artigos publicados a partir de 1958 até 2021. Dessa forma, foram reunidos e comparados os diferentes dados encontrados nas fontes de consulta e listadas as principais zoonoses parasitárias em cães, além de etiologia, forma de transmissão e tratamento.

The growing number of companion animals, especially in large cities, has narrowed the contact between these animals and man, increasing human exposure to agents of zoonoses. The incidence of parasitic zoonoses is frequent in dogs. Among the parasitary zoonoses are Giardiasis, Dipilidiosis, Cryptosporodiosis, Toxocariasis, cutaneous larva migrans, ocular larva migrans, and visceral larva migrans. The aim of this study was to conduct a literature review of these zoonoses transmitted by dog feces in Brazil. A search was performed in scientific academic journals available online and in print, with the following indexing terms: parasitary zoonoses and intestinal parasites in dogs. Articles published from 1958 to 2021 were included in the study. Based on these articles, the different data related to the main parasitic zoonoses in dogs, etiology, form of transmission, and treatment were gathered and compared.

Molecular identification of Cryptosporidium baileyi in Muscovy ducks (Cairina moschata domesticus) in free-range production systems / Identificação molecular de Cryptosporidium baileyi em patos Muscovy (Cairina moschata domesticus) em sistemas de produção ao ar livre

Cryptosporidiosis is considered an infection with impact on animal health. It has been associated with high morbidity and mortality rates, leading to significant economic losses to the poultry industry. This study investigated the presence of Cryptosporidium spp. in domestic ducks of family Anatidae (Cairina moschata) from two rustic commercial aviaries located in the city of Rio de Janeiro, Brazil. A total of 315 fecal samples were collected from domestic ducks in two different areas (N=186 in area A and N=129 in area B). The microscopic analysis was conducted using a sugar centrifugal flotation technique for the identification of Cryptosporidium spp. oocysts, followed by PCR/sequencing analyses of the partial sequence of the 18S rDNA gene to determine the Cryptosporidium species. Of the 315 samples collected, only 10 (186/5.38%) from area A were positive for Cryptosporidium. The nucleotide sequence and phylogenetic analyses identified that all samples were identical (100%) and belonged to Cryptosporidium baileyi species, which is closely related to gastric species and of importance in animal health.

Criptosporidiose é considerada uma infeção com impacto na saúde animal. Tem sido associada a altas taxas de morbidade e mortalidade, levando a perdas econômicas significativas para a indústria avícola. Este estudo teve como objetivo investigar a presença de Cryptosporidium spp. em patos domésticos da família Anatidae (Cairina moschata) de dois aviários comerciais rústicos localizados na cidade do Rio de Janeiro, Brasil. Um total de 315 amostras fecais foram coletadas de patos domésticos em duas áreas (Área A / n= 186; Área B / n= 129). Amostras fecais foram processadas e utilizando a técnica de centrífuga e flutuação em solução saturada de açúcar para a identificação de oocistos de Cryptosporidium spp. através da observação microscópica. Naquelas amostras positivas, procedeu-se com o diagnóstico molecular para determinação de espécie de Cryptosporidium. Das 315 amostras coletadas, apenas 10 (186 / 5,38%) da área A foram positivas para Cryptosporidium. A sequência de nucleotídeos e as análises filogenéticas identificaram que todas as amostras eram idênticas (100%) e pertenciam à espécie Cryptosporidium baileyi, intimamente relacionada às espécies gástricas e de importância na saúde animal.

Identification, molecular characterization and factors associated with occurrences of Cryptosporidium spp. in calves on dairy farms in Brazil / Identificação, caracterização molecular e fatores associados à ocorrência de Cryptosporidium spp. em bezerros de propriedades leiteiras no Brasil

Abstract Cattle are an important source of zoonotic species of Cryptosporidium for humans. The aim of this study was to investigate the presence of Cryptosporidium, identify the species and determine the risk factors relating to environment, animals and management among dairy calves in eight Brazilian states. A total of 408 fecal samples from calves aged 1-60 days were analyzed. An epidemiological questionnaire was completed. Sample screening was performed using Ziehl-Neelsen technique and the positive samples were subjected to nested PCR. Cryptosporidium species were identified by means of the PCR-RFLP technique, using SSPI, ASEI and MBOII enzymes. The Ziehl-Neelsen technique showed that 89.7% (35/39) of the farms and 52.9% (216/408) of the samples were positive. Through nested PCR, these protozoa were detected in 54.6% of the samples. The 56 samples subjected to PCR-RFLP presented Cryptosporidium parvum. There was higher prevalence of the parasite in animals aged 7 to 28 days (62.6%). Diarrhea, ages between seven and 28 days and a spring water source were factors associated with the risk of infection. The calf hutch-type management system was associated with reduced infection. These findings demonstrate the high level of Cryptosporidium spp. circulation in cattle herds and the predominance of the species C. parvum.

Resumo O gado é uma fonte importante de espécies zoonóticas de Cryptosporidium para o homem. O objetivo deste estudo foi investigar a presença de Cryptosporidium, identificar a espécie e determinar os fatores de risco relacionados ao meio ambiente, aos animais e ao manejo em bezerros leiteiros em oito estados brasileiros. Um total de 408 amostras fecais de bezerros, com idade entre 1 e 60 dias, foram analisadas. Um questionário epidemiológico foi preenchido. A triagem das amostras foi realizada pela técnica de Ziehl-Neelsen, e as amostras positivas foram submetidas à "nested" PCR. As espécies de Cryptosporidium foram identificadas pela técnica de PCR-RFLP, utilizando-se as enzimas SSPI, ASEI e MBOII. A técnica de Ziehl-Neelsen mostrou que 89,7% (35/39) das fazendas e 52,9% (216/408) das amostras foram positivas. Por meio de nested PCR, esses protozoários foram detectados em 54,6% das amostras. As 56 amostras submetidas à PCR-RFLP apresentaram Cryptosporidium parvum. Houve maior prevalência do parasita em animais de 7 a 28 dias (62,6%). Diarreia, idade entre sete e 28 dias, e fonte de água mineral foram fatores associados ao risco de infecção. O sistema de manejo do tipo "casinha" para bezerros foi associado à redução da infecção. Esses achados demonstram o alto nível de Cryptosporidium spp. em circulação nos rebanhos bovinos e o predomínio da espécie C. parvum.

Antiparasitic and immunomodulating effects of nitazoxanide, ivermectin and selenium on Cryptosporidium infection in diabetic mice / Efeitos antiparasitários e imunomodulantes da nitazoxanida, ivermectina e selênio sobre a infecção por Cryptosporidium em camundongos diabéticos

Abstract The present work aims to investigate the antiparasitic and the immunomodulating effects of nitazoxanide (NTZ) and ivermectin (IVC) alone or combined together or combined with selenium (Se), on Cryptosporidium infection in diabetic mice. The results revealed that the combined NTZ and IVC therapy achieved the highest reduction of fecal oocysts (92%), whereas single NTZ showed the lowest reduction (63%). Also, adding Se to either NTZ or IVC resulted in elevation of oocyst reduction from 63% to 71% and from 82% to 84% respectively. All treatment regimens, with the exception of NTZ monotherapy, showed a significant improvement in the intestinal histopathology, the highest score was in combined NTZ and IVC therapy. The unique results of immunohistochemistry in this study showed reversal of the normal CD4/CD8 T cell ratio in the infected untreated mice, however, following therapy it reverts back to a normal balanced ratio. The combined (NTZ+ IVC) treatment demonstrated the highest level of CD4 T cell expression. Taken together, NTZ and IVC combined therapy showed remarkable anti-parasitic and immunostimulatory effects, specifically towards the CD4 population that seem to be promising in controlling cryptosporidiosis in diabetic individuals. Further research is required to explore other effective treatment strategies for those comorbid patients.

Resumo O presente trabalho tem como objetivo investigar os efeitos anti-parasitários e imunomodulantes da nitazoxanida (NTZ) e ivermectina (IVC), isoladas ou em associação, e do selênio (SE), associado à NTZ ou à IVC, sobre a infecção por Cryptosporidium em camundongos diabéticos. Os resultados revelaram que a terapia combinada com NTZ e IVC resultou em maior redução de oocistos fecais, enquanto a NTZ isolada mostrou a menor redução de oocistos fecais (63%). Além disso, a associação do SE com a NTZ ou IVC resultou em redução do número de oocistos fecais de 63% para 71% e de 82% para 84%, respectivamente. Todos os tratamentos, com exceção da monoterapia com NTZ, mostraram uma melhora significativa nos índices relacionados à histopatologia intestinal. Os resultados da imuno-histoquímica mostraram reversão da razão celular CD4/CD8 T normal nos camundongos infectados não tratados, no entanto, após a terapia, houve retorno à razão celular CD4/CD8 T normal. O tratamento combinado (NTZ+ IVC) demonstrou o mais alto nível de expressão celular CD4 T. Em conclusão, a terapia combinada com NTZ e IVC mostrou efeitos anti-parasitários e imunoestimuladores notáveis, especificamente para a população CD4, que parecem ser promissores para o controle da criptosporidiose em indivíduos diabéticos.

Prevalence of infection by Cryptosporidium spp. in calves and associated risk factors in Northeastern Brazil / [Prevalência da infecção por Cryptosporidium spp. e fatores de risco associados em bezerros do Nordeste do Brasil]

Cryptosporidium spp. are zoonotic protozoa, frequently associated with diarrhea in calves, which are responsible for important economic losses. The aim of this study was to assess the prevalence of infection by Cryptosporidium spp. and its associated risk factors among calves raised in a milk production region of Northeastern Brazil. Fecal samples (n = 385) were obtained from young animals (up to ten months old) and evaluated by means of centrifugal fecal sedimentation in formalin-ether followed by the modified Ziehl-Neelsen staining technique. In addition, Odds Ratio (OR) was calculated to evaluate associations between variables and infection by these protozoa. Out of all samples analyzed, 25.7% (99/385) scored positive for the presence of Cryptosporidium spp. Contact with other species (goat and sheep) (OR = 3.33; p = 0.000), use of a semi-intensive rearing system (OR = 1.70; p = 0.024) and absence of hygienic conditions (fecal contamination of food and water) (OR = 1.64; p = 0.029) were considered to be risk factors. Data herein reported shows that the implementation of hygienic-sanitary measures on the farms studied, it is imperative to reduce Cryptosporidium spp. infection and consequently the economic impact caused by this pathogen.(AU)

Cryptosporidium spp. são protozoários zoonóticos frequentemente associados à diarreia em bezerros e responsáveis por importantes perdas econômicas. O objetivo deste estudo foi avaliar a prevalência e os fatores de risco associados à infecção por Cryptosporidium spp. em bezerros de propriedades leiteiras no Nordeste do Brasil. Amostras fecais (n = 385) foram obtidas de animais jovens (até 10 meses de idade) e avaliadas por centrífugo-sedimentação em formol éter, seguida da técnica de coloração de Ziehl-Neelsen modificada. A Odds Ratio (OR) foi calculada para avaliar a associação entre variáveis e infecção pelos protozoários. De todas as amostras analisadas, 25,7% (99/385) apresentaram oocistos de Cryptosporidium spp. Contato com outras espécies (caprino e ovino) (OR = 3,33; p = 0,000), sistema semi-intensivo de criação (OR = 1,70; p = 0,024) e ausência de condições higiênicas (contaminação fecal do alimento e da água) (OR = 1,64; p = 0,029) foram considerados fatores de risco. Com base nos resultados, é imprescindível a adoção de medidas higiênico-sanitárias nas fazendas estudadas, a fim de reduzir infecção por Cryptosporidium spp. e o impacto econômico causado por esse patógeno.(AU)

Gastrointestinal parasites of a population of emus (Dromaius novaehollandiae) in Brazil / Parasitas gastrointestinais de emus Dromaius novaehollandiae de cativeiro no Brasil

Emus are large flightless birds in the ratite group and are native to Australia. Since the mid-1980s, there has been increased interest in the captive breeding of emus for the production of leather, meat and oil. The aim of this study was to identify gastrointestinal parasites in the feces of emus Dromaius novaehollandiae from a South American scientific breeding. Fecal samples collected from 13 birds were examined by direct smears, both with and without centrifugation, as well as by the fecal flotation technique using Sheather's sugar solution. Trophozoites, cysts and oocysts of protozoa and nematode eggs were morphologically and morphometrically evaluated. Molecular analysis using PCR assays with specific primers for the genera Entamoeba, Giardia and Cryptosporidium were performed. Trophozoites and cysts of Entamoeba spp. and Giardia spp., oocysts of Eimeria spp. and Isospora dromaii, as well as eggs belonging to the Ascaridida order were found in the feces. Three animals were diagnosed with Giardia spp., and three were positive for Entamoeba spp. based on PCR techniques. After analyzing the data, we concluded that emus were infected enzootically by nematode and protozoan species.(AU)

Emus são aves grandes que não voam pertencentes ao grupo das ratitas e são originários da Austrália. Desde meados da década de 1980, aumentou o interesse pela criação de emus em cativeiro para a produção de couro, carne e óleo. O objetivo deste estudo foi identificar parasitas gastrointestinais nas fezes de emus Dromaius novaehollandiae de um criatório científico da América do Sul. Amostras de fezes coletadas de 13 aves foram examinadas por esfregaços diretos, tanto com e sem centrifugação, quanto com a técnica de flutuação fecal utilizando solução de açúcar de Sheather. Trofozoítos, cistos e oocistos de protozoários e ovos de nematóides foram avaliados morfologicamente e morfometricamente. Foram realizadas análises moleculares utilizando ensaios de PCR com primers específicos para os gêneros Entamoeba, Giardia e Cryptosporidium. Trofozoítos e cistos de Entamoeba spp. e Giardia spp., oocistos de Eimeria spp. e Isospora dromaii, bem como ovos pertencentes à ordem Ascaridida foram encontrados nas fezes. Três animais foram diagnosticados com Giardia spp., e três foram positivos para Entamoeba spp. com base em técnicas de PCR. Depois de analisar os dados, concluímos que os emus estavam infectados enzooticamente por espécies de nematóides e protozoários.(AU)

Prevalence and molecular characterization of Cryptosporidium spp. in Père Davids deer (Elaphurus davidianus) in Jiangsu, China / Prevalência e caracterização molecular de Cryptosporidium spp. no cervo de Père David (Elaphurus davidianus) em Jiangsu, China

Cryptosporidium is a zoonotic parasite that causes diarrhea in a broad range of animals, including deer. Little is known about the prevalence and genotype of Cryptosporidium spp. in Père Davids deer. In this study, 137 fecal samples from Père Davids deer were collected between July 2017 and August 2018 in the Dafeng Reserve and analyzed for Cryptosporidium spp. by nested-PCR based on the small subunit ribosomal RNA (SSU rRNA) gene, followed by sequence analyses to determine the species. The 60 kDa glycoprotein (gp60) gene was used to characterize Cryptosporidium spp. Among 137 samples, 2 (1.46%) were positive for Cryptosporidium spp. according to SSU rRNA gene sequencing results. Both samples belonged to the Cryptosporidium deer genotype, with two nucleotide deletions and one nucleotide substitution. The prevalence data and molecular characterization of this study provide basic knowledge for controlling and preventing Cryptosporidium infections in Père Davids deer in this area.(AU)

Cryptosporidium é um parasita zoonótico que causa diarreia em uma ampla gama de animais, incluindo veados. Pouco se sabe sobre a prevalência e o genótipo de Cryptosporidium spp. no cervo de Père David. Neste estudo, 137 amostras fecais do cervo de Père David foram coletadas entre julho de 2017 e agosto de 2018, na Reserva Dafeng, e analisadas para Cryptosporidium spp. por nested-PCR baseado no gene do RNA ribossômico da subunidade pequena (SSU rRNA), seguido de análises de sequências para determinar as espécies. O gene da glicoproteína de 60 kDa (gp60) foi utilizado para caracterizar Cryptosporidium spp. Dentre as 137 amostras, 2 (1,46%) foram positivas para Cryptosporidium spp. de acordo com os resultados do sequenciamento gênico de SSU rRNA. Ambas as amostras pertenciam ao genótipo do cervo Cryptosporidium, com duas deleções nucleotídicas e uma substituição nucleotídica. Os dados de prevalência e a caracterização molecular deste estudo fornecem conhecimentos básicos para controlar e prevenir infecções por Cryptosporidium nos cervos de Père David nessa.(AU)

Occurrence of gastrointestinal protozoans in cats from Londrina, Paraná, Brazil / Ocorrência de protozoários gastrointestinais em gatos de Londrina, Paraná, Brasil

Protozoans are widely distributed, and several species may parasitize the digestive tracts of cats (Felis catus), and can be transmitted to humans. The present study aimed to evaluate the species and occurrence of gastrointestinal protozoans in cats in the city of Londrina, Paraná, Brazil. A total of 206 cat fecal samples were tested, of which 141 were from shelter animals, and 65 were from pets owned by local people. Samples were processed by parasitological techniques. Coproparasitological techniques (Willis, Faust and Ziehl-Neelsen) were performed for detection of protozoan parasites. Subsequently, all samples were processed by PCR protocols specific to Toxoplasma gondii, Giardia spp., and Cryptosporidium spp. PCR products from positive samples were selected for sequencing. No samples were found to be positive for Cryptosporidium spp. using the Ziehl-Neelsen technique. Using specific PCR protocols, 1/206 (0.48%) samples tested positive for Cryptosporidium spp. After purification, this one positive sample was sequenced, and it demonstrated a 100% identity match to Cryptosporidium muris. Using specific PCR protocols, 13/206 (9.22%) cat fecal samples tested, including 2/65 (3.08%) pet cat fecal samples, were positive for T. gondii. PCR analysis revealed that 37/206 (17.96%) of cat fecal samples were positive for Giardia spp., including 27/141 (19.15%) of shelter cat fecal samples, and 10/65 (15.38%) pet cat fecal samples (p = 0.5124). When sequenced, these positive samples showed a 100% identity match with Giardia duodenalis. This study demonstrated that infections with Cryptosporidium spp., Toxoplasma gondii, and Giardia duodenalis are present in the population of both pet cats and shelter cats in the city of Londrina. This poses a risk to public health, because these parasites have a high zoonotic potential.

Os protozoários são amplamente distribuídos, e várias espécies podem parasitar o trato digestivo de gatos (Felis catus) e podem ser transmitidas para humanos. O presente estudo teve como objetivo avaliar as espécies e a ocorrência de protozoários gastrintestinais em gatos na cidade de Londrina, Paraná, Brasil. Um total de 206 amostras de fezes de gato foram testadas, das quais 141 eram de animais de abrigo, e 65 eram de animais de propriedade da população local. As amostras foram processadas por técnicas parasitológicas. Willis e esfregaços fecais foram confeccionados e corados pela técnica de Ziehl-Neelsen modificada para detecção de oocistos de Cryptosporidium spp. Posteriormente, todas as amostras foram processadas por protocolos de PCR específicos para Toxoplasma gondii, Giardia spp. e Cryptosporidium spp. Os produtos de PCR de amostras positivas foram selecionados para sequenciamento. Nenhuma amostra foi considerada positiva para Cryptosporidium spp. usando a técnica de Ziehl-Neelsen. Utilizando protocolos específicos de PCR, 1/206 (0,48%) amostras apresentaram resultados positivos para Cryptosporidium spp. Após a purificação, essa amostra positiva foi sequenciada e demonstrou 100% de equivalência de identidade com Cryptosporidium muris. Utilizando protocolos específicos de PCR, 13/206 (9,22%) amostras fecais de gatos testadas, incluindo 2/65 (3,08%) amostras fecais de gatos de estimação, foram positivas para T. gondii. A análise de PCR revelou que 37/206 (17,96%) das amostras de fezes de gatos foram positivas para Giardia spp., Incluindo 27/141 (19,15%) de amostras fecais de gatos de abrigo, e 10/65 (15,38%) amostras fecais de gatos de estimação (p = 0,5124). Quando sequenciadas, essas amostras positivas apresentaram 100% de equivalência de identidade com Giardia duodenalis. Este estudo demonstrou que as infecções por Cryptosporidium spp., Toxoplasma gondii e Giardia duodenalis estão presentes na população de gatos de estimação e gatos de abrigo na...

Occurrence of gastrointestinal protozoans in cats from Londrina, Paraná, Brazil / Ocorrência de protozoários gastrointestinais em gatos de Londrina, Paraná, Brasil

Protozoans are widely distributed, and several species may parasitize the digestive tracts of cats (Felis catus), and can be transmitted to humans. The present study aimed to evaluate the species and occurrence of gastrointestinal protozoans in cats in the city of Londrina, Paraná, Brazil. A total of 206 cat fecal samples were tested, of which 141 were from shelter animals, and 65 were from pets owned by local people. Samples were processed by parasitological techniques. Coproparasitological techniques (Willis, Faust and Ziehl-Neelsen) were performed for detection of protozoan parasites. Subsequently, all samples were processed by PCR protocols specific to Toxoplasma gondii, Giardia spp., and Cryptosporidium spp. PCR products from positive samples were selected for sequencing. No samples were found to be positive for Cryptosporidium spp. using the Ziehl-Neelsen technique. Using specific PCR protocols, 1/206 (0.48%) samples tested positive for Cryptosporidium spp. After purification, this one positive sample was sequenced, and it demonstrated a 100% identity match to Cryptosporidium muris. Using specific PCR protocols, 13/206 (9.22%) cat fecal samples tested, including 2/65 (3.08%) pet cat fecal samples, were positive for T. gondii. PCR analysis revealed that 37/206 (17.96%) of cat fecal samples were positive for Giardia spp., including 27/141 (19.15%) of shelter cat fecal samples, and 10/65 (15.38%) pet cat fecal samples (p = 0.5124). When sequenced, these positive samples showed a 100% identity match with Giardia duodenalis. This study demonstrated that infections with Cryptosporidium spp., Toxoplasma gondii, and Giardia duodenalis are present in the population of both pet cats and shelter cats in the city of Londrina. This poses a risk to public health, because these parasites have a high zoonotic potential.(AU)

Os protozoários são amplamente distribuídos, e várias espécies podem parasitar o trato digestivo de gatos (Felis catus) e podem ser transmitidas para humanos. O presente estudo teve como objetivo avaliar as espécies e a ocorrência de protozoários gastrintestinais em gatos na cidade de Londrina, Paraná, Brasil. Um total de 206 amostras de fezes de gato foram testadas, das quais 141 eram de animais de abrigo, e 65 eram de animais de propriedade da população local. As amostras foram processadas por técnicas parasitológicas. Willis e esfregaços fecais foram confeccionados e corados pela técnica de Ziehl-Neelsen modificada para detecção de oocistos de Cryptosporidium spp. Posteriormente, todas as amostras foram processadas por protocolos de PCR específicos para Toxoplasma gondii, Giardia spp. e Cryptosporidium spp. Os produtos de PCR de amostras positivas foram selecionados para sequenciamento. Nenhuma amostra foi considerada positiva para Cryptosporidium spp. usando a técnica de Ziehl-Neelsen. Utilizando protocolos específicos de PCR, 1/206 (0,48%) amostras apresentaram resultados positivos para Cryptosporidium spp. Após a purificação, essa amostra positiva foi sequenciada e demonstrou 100% de equivalência de identidade com Cryptosporidium muris. Utilizando protocolos específicos de PCR, 13/206 (9,22%) amostras fecais de gatos testadas, incluindo 2/65 (3,08%) amostras fecais de gatos de estimação, foram positivas para T. gondii. A análise de PCR revelou que 37/206 (17,96%) das amostras de fezes de gatos foram positivas para Giardia spp., Incluindo 27/141 (19,15%) de amostras fecais de gatos de abrigo, e 10/65 (15,38%) amostras fecais de gatos de estimação (p = 0,5124). Quando sequenciadas, essas amostras positivas apresentaram 100% de equivalência de identidade com Giardia duodenalis. Este estudo demonstrou que as infecções por Cryptosporidium spp., Toxoplasma gondii e Giardia duodenalis estão presentes na população de gatos de estimação e gatos de abrigo na...(AU)

Influence of early use of antimicrobial on the health and performance of Holstein calves in the first month of life / Influência do uso precoce de antimicrobiano na sanidade de bezerras holandesas no primeiro mês de vida

The early use of antimicrobial therapy has been introduced in many farms to prevent diarrhea and respiratory disease in young calves; however, there is controversy about whether this practice has a beneficial effect on the health of these animals. This study evaluated the influence of the early use of antimicrobials on the health and performance of neonatal Holstein calves. Twenty-six Holstein calves were screened and divided into two groups, according to the administration (ATB+), or not (ATB-) of tulathromycin (2.5mg/kg, subcutaneously) within the first 12 hours of life. Calves were evaluated by general clinical examination, fecal score, respiratory score, and external palpation of the umbilical region, besides fecal output of dry matter. Anemia was determined by using an automatic system and, also, using a commercial kit for iron dosage. Diarrhea was diagnosed by a centrifuge-flotation technique using a sugar solution (Cryptosporidium) and multiplex semi-nested RT-PCR (rotavirus/coronavirus). The performance of the calves was estimated by Daily Weight Gain (DWG). The young dairy calves were evaluated within 12 hours of birth (≤12h) and at 3-5th (D3-5), 7-9th (D7-9), 13-15th (D13-15), 20-23rd (D20-23), and 27-30th (D27-30) days of life. No difference was noted between the ATB+ and ATB- groups concerning heart rate, respiratory frequency, and rectal temperature. Erythrogram showed a higher frequency of anemia in ATB- group (P=0.016) at the D3-5 check-up; lower values of serum iron were also observed simultaneously (P=0.051). Thirteen cases of respiratory disease were detected during this study; however, no significant difference was observed between the groups in this regard. The frequency of diarrhea (fecal score 2-3) was high in both groups, peaking at D13-D15. No differences were noted between the groups regarding the frequency of diarrhea when considering the dry fecal matter. The predominant etiological agent for diarrhea was Cryptosporidium spp.. The DWG was similar between groups, with maximum weight reduction on D13-15. The administration of tulathromycin in prophylactic dose (2.5mg/kg) at birth decreased the frequency of anemia but did not influence weight gain or the prevalence of diarrhea.(AU)

O uso precoce de antimicrobianos tem sido adotado em muitas fazendas para profilaxia das diarreias e doença respiratória em bezerras, no entanto existem controvérsias sobre os beneficios desta prática na saúde desses animais. Esta pesquisa avaliou a influência do uso precoce de antimicrobiano na sanidade e desempenho de bezerras holandesas recém-nascidas. Para tanto foram selecionadas 26 bezerras Holandesas distribuídas de acordo com a aplicação (ATB+) ou não (ATB-) de tulatromicina (2,5mg/Kg) por via subcutânea até 12h de vida. As bezerras foram examinadas por meio de exame clínico geral, escore fecal, escore respiratório e palpação externa da região umbilical, além da matéria seca fecal. A presença de anemias foi determinada pelo eritrograma utilizando sistema automático e além da dosagem de ferro utilizando kit comercial. O diagnóstico etiológico das diarreias foi investigado por meio da técnica de flutuação em solução saturada de sacarose (Cryptosporidium) e multiplex semi-nested RT-PCR (rotavírus/coronavírus). O desempenho das bezerras foi estimado pelo ganho de peso. As bezerras foram avaliadas até doze horas após o nascimento (≤12h); 3-5º (D3-5); 7-9º (D7-9); 13-15º (D13-15); 20-23º (D20-23); e 27-30º dias de vida (D27-30). Não foram encontradas diferenças entre os grupos ATB+ e ATB- em relação à frequência cardíaca, frequência respiratória e temperatura retal. O eritrograma revelou maior frequência de anemias no grupo ATB- (P=0,016) no D3-5. Neste momento também foram observados menores valores de ferro sérico (P=0,051). Foram detectados treze casos de doença respiratória durante o estudo, no entanto não foi possível detectar diferença entre os grupos. A frequência de diarreias (escore fecal 2 e 3) foi alta em ambos os grupos, observando-se pico no D13-15 (ATB+=92,3%; ATB-=92,3%). Não observamos diferenças entre os grupos em relação a frequência de diarreia considerando-se a matéria seca fecal. O agente etiológico predominante nas diarreias foi o Cryptosporidium. O ganho de peso diário foi igual entre grupos, com intensa redução no GPD no D13-15. A administração de tulatromicina na dose profilática (2,5mg/Kg) ao nascimento diminuiu a frequência de anemias e não influenciou no ganho de peso e prevalência de diarreias.(AU)

Influence of early use of antimicrobial on the health and performance of Holstein calves in the first month of life / Influência do uso precoce de antimicrobiano na sanidade de bezerras holandesas no primeiro mês de vida

The early use of antimicrobial therapy has been introduced in many farms to prevent diarrhea and respiratory disease in young calves; however, there is controversy about whether this practice has a beneficial effect on the health of these animals. This study evaluated the influence of the early use of antimicrobials on the health and performance of neonatal Holstein calves. Twenty-six Holstein calves were screened and divided into two groups, according to the administration (ATB+), or not (ATB-) of tulathromycin (2.5mg/kg, subcutaneously) within the first 12 hours of life. Calves were evaluated by general clinical examination, fecal score, respiratory score, and external palpation of the umbilical region, besides fecal output of dry matter. Anemia was determined by using an automatic system and, also, using a commercial kit for iron dosage. Diarrhea was diagnosed by a centrifuge-flotation technique using a sugar solution (Cryptosporidium) and multiplex semi-nested RT-PCR (rotavirus/coronavirus). The performance of the calves was estimated by Daily Weight Gain (DWG). The young dairy calves were evaluated within 12 hours of birth (≤12h) and at 3-5th (D3-5), 7-9th (D7-9), 13-15th (D13-15), 20-23rd (D20-23), and 27-30th (D27-30) days of life. No difference was noted between the ATB+ and ATB- groups concerning heart rate, respiratory frequency, and rectal temperature. Erythrogram showed a higher frequency of anemia in ATB- group (P=0.016) at the D3-5 check-up; lower values of serum iron were also observed simultaneously (P=0.051). Thirteen cases of respiratory disease were detected during this study; however, no significant difference was observed between the groups in this regard. The frequency of diarrhea (fecal score 2-3) was high in both groups, peaking at D13-D15. No differences were noted between the groups regarding the frequency of diarrhea when considering the dry fecal matter. The predominant etiological agent for diarrhea was Cryptosporidium spp.. The DWG was similar between groups, with maximum weight reduction on D13-15. The administration of tulathromycin in prophylactic dose (2.5mg/kg) at birth decreased the frequency of anemia but did not influence weight gain or the prevalence of diarrhea.(AU)

O uso precoce de antimicrobianos tem sido adotado em muitas fazendas para profilaxia das diarreias e doença respiratória em bezerras, no entanto existem controvérsias sobre os beneficios desta prática na saúde desses animais. Esta pesquisa avaliou a influência do uso precoce de antimicrobiano na sanidade e desempenho de bezerras holandesas recém-nascidas. Para tanto foram selecionadas 26 bezerras Holandesas distribuídas de acordo com a aplicação (ATB+) ou não (ATB-) de tulatromicina (2,5mg/Kg) por via subcutânea até 12h de vida. As bezerras foram examinadas por meio de exame clínico geral, escore fecal, escore respiratório e palpação externa da região umbilical, além da matéria seca fecal. A presença de anemias foi determinada pelo eritrograma utilizando sistema automático e além da dosagem de ferro utilizando kit comercial. O diagnóstico etiológico das diarreias foi investigado por meio da técnica de flutuação em solução saturada de sacarose (Cryptosporidium) e multiplex semi-nested RT-PCR (rotavírus/coronavírus). O desempenho das bezerras foi estimado pelo ganho de peso. As bezerras foram avaliadas até doze horas após o nascimento (≤12h); 3-5º (D3-5); 7-9º (D7-9); 13-15º (D13-15); 20-23º (D20-23); e 27-30º dias de vida (D27-30). Não foram encontradas diferenças entre os grupos ATB+ e ATB- em relação à frequência cardíaca, frequência respiratória e temperatura retal. O eritrograma revelou maior frequência de anemias no grupo ATB- (P=0,016) no D3-5. Neste momento também foram observados menores valores de ferro sérico (P=0,051). Foram detectados treze casos de doença respiratória durante o estudo, no entanto não foi possível detectar diferença entre os grupos. A frequência de diarreias (escore fecal 2 e 3) foi alta em ambos os grupos, observando-se pico no D13-15 (ATB+=92,3%; ATB-=92,3%). Não observamos diferenças entre os grupos em relação a frequência de diarreia considerando-se a matéria seca fecal. O agente etiológico predominante nas diarreias foi o Cryptosporidium. O ganho de peso diário foi igual entre grupos, com intensa redução no GPD no D13-15. A administração de tulatromicina na dose profilática (2,5mg/Kg) ao nascimento diminuiu a frequência de anemias e não influenciou no ganho de peso e prevalência de diarreias.(AU)

Prevalence of intestinal parasite infections in stray and farm dogs from Spain / Prevalência de infecções por parasitos intestinais em cães errantes e de fazenda na Espanha

Dogs play a potential role as reservoirs for zoonotic parasites, being especially problematic uncontrolled dog populations such as stray and farm dogs with access to populated areas. In order to investigate the prevalence of canine intestinal parasites in at-risk dog populations, we tested a total of 233 faecal samples shed by stray and dairy farm dogs from northern Spain. Telemann method was used to detect the presence of eggs and (oo)cysts of common dog intestinal parasites and Cryptosporidium was detected by PCR. One hundred and forty eight out of 233 samples (63.5%) were positive for at least one intestinal parasite, being Ancylostomidae (35.6%; 83/233) and Trichuris (35.2%; 82/233) the parasites most frequently identified. Cryptosporidium DNA was not detected in any of the faecal samples analysed. The overall prevalence was significantly higher in stray dogs than in farm dogs (72.5% vs 58.8%). Specifically, stray dogs had a significantly higher prevalence of Ancylostomatidae, Toxocara, Toxascaris and Taenidae. These dog populations are an important source of environmental contamination with intestinal parasite forms, which could be of significance to animal and human health.(AU)

Os cães desempenham um importante papel como reservatório de parasitos zoonóticos, sendo especialmente problemáticas as populações descontroladas, como a de cães errantes e de fazenda, com acesso às áreas povoadas. Para investigar a prevalência de parasitos intestinais em populações caninas de risco, foram analisadas 233 amostras fecais provenientes de cães de fazendas leiteiras e errantes do norte da Espanha. O método Telemann foi utilizado para detectar ovos, cistos e oocistos dos parasitos caninos mais comuns e para a detecção de Cryptosporidium foi utilizada a técnica da PCR. Cento e quarenta e oito de 233 amostras analisadas (63,5%) foram positivas para pelo menos um parasito intestinal, sendo Ancyostomatidae (35,6%; 83/233) e Trichuris sp. (35,2%; 82/233) os parasitos identificados com maior frequência. O DNA de Cryptosporidium sp. não foi detectado em nenhuma das amostras fecais analisadas. A prevalência geral foi significativamente maior em cães errantes do que em cães de fazenda (72,5% vs 58,8%). Especificamente, os cães errantes tiveram prevalência maior para Ancylostomatidae, Toxocara, Toxascaris e Taenidae. Essas populações de cães são importantes fontes de contaminação ambiental, pois eliminam formas de vida desses parasitos, que podem ter impacto na saúde animal e humana.(AU)

Comparação entre métodos de diagnóstico de Cryptosporidium spp. em amostras fecais de bovinos / Comparison between diagnostic methods of Cryptosporidium spp. in fecal samples from cattle

Criptosporidiose é uma doença entérica com manifestações clínicas variadas e eventual mortalidade, principalmente em animais jovens, causando prejuízos ao desenvolvimento. Este estudo objetivou comparar técnicas de coloração para a detecção de oocistos de Cryptosporidium spp. em fezes de bezerros leiteiros, provenientes dos 22 municípios da região Sul do Rio Grande do Sul, Brasil. Amostras fecais foram colhidas diretamente do reto de 359 bezerros de diferentes raças, machos e fêmeas, com até doze meses de idade. Oocistos de Cryptosporidium spp. foram observados por meio dos métodos colorimétricos de Kinyoun, Safranina e Ziehl-Neelsen e visualizados sob microscopia ótica e porfluorescência com coloração de Auramina. Oocistos de Cryptosporidium spp. Foram observados em 6,69% (24/359) das amostras analisadas. A partir destes resultados pode-se inferir que os quatros métodos colorimétricos, foram eficazes na detecção de Cryptosporidium spp., sendo capaz de revelar este parasito mesmo em amostras com reduzido número de oocistos. Não houve diferença estatisticamente significante entre os métodos para o diagnóstico, apesar do método de fluorescência com coloração de Auramina ter apresentado o melhor resultado em comparação com as técnicas colorimétricas utilizadas neste estudo.

Cryptosporidiosis is an enteric disease with varied clinical manifestations and eventual mortality, mainly in young animals, causing impairment in development. This study aimed to compare staining techniques for the detection of Cryptosporidium spp. oocysts in dairy calf feces from 22 municipalities of the southern region of Rio Grande do Sul, Brazil. Fecal samples were collected directly from the rectum of 359 calves of different breeds ,male and female, up to twelve months old. Cryptosporidium spp. oocysts were observed using the colorimetric methods of Kinyoun, Safranina and Ziehl-Neelsen and were visualized under optical microscopy and by fluorescence with auramine stain. Cryptosporidium spp. oocysts were observed in 6.69% (24/359) of the analyzed samples. From these results it can be inferred that the four colorimetric methods were effective in the detection of Cryptosporidium spp., being able to reveal this parasite even in samples with a reduced number of oocysts. There was no statistically significant difference between the methods for diagnosis, even though, the Auramine staining fluorescence method presented the best result in comparison with the colorimetric techniques used in this study.

Prevalence of Cryptosporidium infection in domestic cats from an urban area in Brazil / Prevalência de infecção por Cryptosporidium em gatos domiciliados em uma área urbana no Brasil

We investigated the occurrence of Cryptosporidium oocysts shedding by domestic cats in an urban setting. The calculation of minimum sample size was based on an estimated prevalence of 10%, 5% absolute sampling error and a 5% significance level, resulting in 138 cats. A total of 612 owners of 2,290 cats had to be contacted for achieving the minimal sample size. In the end, only 55 owners accepted to participate in this investigation. Stool samples collected from 138 dogs were examined by microscopy using modified Kinyoun acid-fast staining, capture ELISA and nested-PCR followed by sequencing. Samples were considered positive when Cryptosporidium were detected by at least two diagnostic methods. Thirteen samples were positive (9.4%; 95% CI: 4.5 - 14.3). Cryptosporidium amplicons from seven out of the 13 samples were successfully sequenced and shared 99% genetic similarity to Cryptosporidium felis, GenBank access AF112575.1 was found. We concluded that Cryptosporidium infection is common in domestic cats from urban area and veterinary practitioners should guide cat owners to adopt preventive measures against the parasite to reduce the chance of infection in cats and householders.

Investigamos a ocorrência de eliminação de oocistos de Cryptosporidium em fezes de gatos domésticos em ambiente urbano. O cálculo do tamanho mínimo amostral baseou-se em uma prevalência estimada de 10%, erro amostral absoluto de 5% e nível de significância de 5%, resultando em 138 gatos. Um total de 612 proprietários de 2.290 gatos precisou ser contatado para atingir o tamanho mínimo amostral. No final, apenas 55 proprietários aceitaram participar dessa investigação. As amostras de fezes coletadas de 138 gatos foram examinadas por microscopia, usando coloração de Kinyoun modificada, ELISA de captura e nested-PCR, seguida de sequenciamento. As amostras foram consideradas positivas quando Cryptosporidium foi detectado por pelo menos duas técnicas de diagnóstico. Treze amostras foram positivas (9,4%; IC95%: 4,5 - 14,3). Os amplicons de Cryptosporidium de sete das 13 amostras foram sequenciados com sucesso e compartilharam 99% de similaridade genética com Cryptosporidium felis (acesso ao GenBank: AF112575.1). Concluímos que a infecção por Cryptosporidium é comum em gatos domésticos em área urbana e os médicos veterinários devem orientar os proprietários de gatos a adotarem medidas preventivas contra o parasita para reduzir a chance de infecção em gatos e humanos.