High titers of anti-Leishmania spp. antibodies in apparently healthy dogs in the North Pioneer Mesoregion of the state of Paraná, Brazil / Títulos altos de anticorpos anti-Leishmania spp. em cães aparentemente saudáveis da Mesoregião Norte Pioneiro do estado do Paraná, Brasil

Leishmaniasis is an anthropozoonosis with vector transmission, and knowledge regarding the occurrence of this parasitosis in sentinels can contribute to infection and disease control measures in humans. The objectives of this study were to evaluate the occurrence of Leishmania exposure and infection in dogs from urban and rural areas in the North Pioneer Mesoregion of the state of Paraná, to evaluate possible risk factors, and to analyze the statistical agreement between the serological techniques that were used. Using a convenience sampling, serum and whole blood samples were collected to perform serological and molecular assays, respectively. The enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and indirect fluorescent antibody test (IFAT) identified 29/204 (14.2%) and 20/204 (9.8%) seropositive dogs, respectively. Five dogs (2.4%) were seropositive for both serological tests, and four dogs presented high titers in the IFAT. None of the samples tested positive for Leishmania spp. DNA according to polymerase chain reaction analysis. No factors were significantly associated with infection. Leishmania parasites circulate in urban and rural dogs in the North Pioneer Mesoregion of the state of Paraná. Despite the absence of clinical cases, seropositive animals with high antibody titers should serve as a warning to the local population that should be properly informed regarding the prevention.(AU)

A Leishmaniose é uma antropozoonose e sua transmissão ocorre através da picada de flebotomíneos de diferentes gêneros, dependendo da localização geográfica. O conhecimento sobre a ocorrência desta parasitose nos reservatórios pode colaborar com medidas de controle da infecção e doença nos humanos. Os objetivos deste estudo foram: avaliar a ocorrência da infecção por Leishmania, em cães de áreas urbanas e rurais, na região da mesorregião Norte Pioneiro do Paraná; avaliar possíveis fatores de risco à infecção e analisar a concordância estatística entre as técnicas sorológicas utilizadas. Para tanto, foram colhidas 204 amostras de soro e sangue total de cães escolhidos aleatoriamente de municípios da mesorregião Norte Pioneiro do Paraná para a detecção de anticorpos anti-Leishmania spp., pelo ensaio imunoenzimático (ELISA) e reação de imunofluorescência indireta (RIFI), e para a detecção de DNA de Leishmania spp. pela reação em cadeia pela polimerase (PCR). Dos 204 cães testados, 29 (14,2%) e 20 (9,8%) foram soropositivos pelo ELISA e RIFI, respectivamente. Cinco cães (2,4%) foram soropositivos em ambos os testes sorológicos. Não foram observados fatores abióticos e bióticos associados à infecção. A concordância entre as técnicas diagnósticas calculada por Kappa foi de 0,34. Conclui-se que, apesar da baixa ocorrência de positividade para leishmaniose e da ausência de casos sintomáticos, os resultados deste estudo devem ser um alerta para a população local por se tratar de uma importante zoonose e, portanto, medidas de prevenção e controle não devem ser negligenciadas.(AU)

Pesquisa de anticorpos para Toxoplasma gondii, Leptospira spp. e Leishmania spp. em cães no município de Pardinho, São Paulo / Research for Toxoplasma gondii, Leptospira spp. and Leishmania spp. antibodies in dogs from Pardinho, São Paulo / Investigación de anticuerpos para Toxoplasma gondii, Leptospira spp. y Leishmania spp. en perros en el municipio de Pardinho, São Paulo

Com a crescente abordagem integração entre saúde humana, saúde animal e ambiental, o cão vem se destacando como potencial reservatório ou sentinela na cadeia epidemiológica de determinadas zoonoses, devido a sua importância como membro do núcleo familiar atual. O presente estudo objetivou determinar a soroprevalência e fatores de risco para toxoplasmose, leptospirose e leishmaniose visceral canina (LVC) em 181 cães do município de Pardinho, SP, Brasil, participantes de Programa de Controle Populacional, realizado pelo Serviço de Vigilância Sanitária local. As amostras de soro foram submetidas a detecção de anticorpos IgG para Toxoplasma gondii (T. gondii)e Leishmania spp. pela reação de imunofluorescência indireta (RIFI), bem como anticorpos para Leptospira spp. pela técnica de soroaglutinação microscópica (SAM). Adicionalmente, questionário epidemiológico relacionado às zoonoses abordadas foi aplicado aos tutores para verificar associação epidemiológica dos fatores de risco com os resultados sorológicos. Para leptospirose, 7/181 (3,87%; IC95% 1,5-7,8%) animais foram reagentes, sendo Canicola o sorovar prevalente (5/7, 71,43%), seguido por Icterohaemorrhagiae (1/7, 14,29%) e Pyrogenes (1/7, 14,29%). Para toxoplasmose, 17/181 (9,39%; IC95% 5,6-14,6%) amostras apresentaram anticorpos específicos, sendo 8/17 (47,05%) com título de 16, 7/17 (41,17%) com título 64, 1/17 (5,88%) com título 256 e 1/17 (5,89%) com título 4096. Por outro lado, nenhuma amostra apresentou anticorpos específicos detectáveis para Leishmania spp. Por meio deste estudo, foi possível o registro da circulação de T. gondii e Leishmania spp. em cães do município estudado. Com isso, demonstra-se a importância de realização de inquéritos sorológicos em cães durante programas de controle populacional. Dada a importância de se controlar estas e outras zoonoses relevantes a saúde pública, se destacam a necessidade de ações de vigilância epidemiológica e a importância do cão como sentinela.

The dog, with the growing approach to the integration between human, animal and environmental, has been standing out as a potential reservoir or sentinel to the epidemiological chain of some specific zoonoses, due to its importance as a member of the current family nucleus. The present study aimed to determine the seroprevalence and risk factors to toxoplasmosis, leptospirosis and canine visceral leishmaniasis (LVC) in 181 dogs from Pardinho, SP, Brazil, included on a Population Control Program carried outby the local Health Surveillance Service. Serum samples were researched for Toxoplasma gondii (T. gondii) and Leishmania spp. IgG antibodies using the indirect immunofluorescence test (IFAT), whereas Leptospira spp. antibodies using the microscopic agglutination test (MAT). Additionally, an epidemiological questionnaire related to the studied zoonoses was applied to the owners to verify the epidemiological association of the risk factors to the serological results. For leptospirosis, seropositivity was in 7/181 (3.87%; 95%CI 1.5-7.8%) animals resulted reagent, with Canicola as the prevalent serovar (5/7, 71.43%), followed by Icterohaemorrhagiae (1/7, 14.29%) and Pyrogenes (1/7, 14.29%). For toxoplasmosis, 17/181 (9.39%; 95%CI 5.6-14.6%) samples resulted positive, presenting titer 16 (8/17, 47.05%), titer 64 (7/17, 41.17%), titer 256 (1/17, 5.89%), and titer 4096 (1/17, 5.88%). On the other hand, no sample resulted positive for Leishmania spp. antibodies. In this way, this study reports the unprecedented record of the circulation of T. gondii and Leptospira spp. among dogs in the studied area. This demonstrates the importance of serological surveys on dogs during population control programs. The need for epidemiological surveillance actions and the importance of the dog as sentinel are highlighted, due to the importance of controlling these and other zoonoses relevant to public health.

Con el creciente enfoque para la integración entre la salud humana, animal y ambiental, el perro se destaca como potencial reservorio o centinela en la cadena epidemiológica de determinadas zoonosis, por su importancia como miembro del núcleo familiar actual. El presente estudio tuvo como objetivo determinar la seroprevalencia y los factores de riesgo para toxoplasmosis, leptospirosis y leishmaniasis visceral canina (LVC) en 181 perros de la ciudad de Pardinho, SP, Brasil, participantes del Programa de Control de la Población, realizado por el Servicio de Vigilancia Sanitaria local. Las muestras de suero fueronsometidas a reacción de inmunofluorescencia indirecta (RIFI) para la detección de anticuerpos IgG para Toxoplasma gondii (T. gondii) y Leishmania spp., así como anticuerpos frente a Leptospiraspp. por la técnica de aglutinación microscópica (SAM). Adicionalmente, se aplicó a los propietarios un cuestionario epidemiológico relacionado a las zoonosis abordadas para verificar la asociación epidemiológica de los factores de riesgo con los resultados serológicos. Para la leptospirosis, 7/181 (3,87%; IC95% 1,5-7,8%) animales fueron reactivos, siendo Canicola el serovar prevalente (5/7, 71,43%), seguido de Icterohaemorrhagiae (1/7, 14,29%) y Pyrogenes (1/7, 14,29%). Para la toxoplasmosis, 17/181 (9,39%; IC95% 5,6-14,6%) mostraron anticuerpos específicos, 8/17 (47,05%) con un título de 16, 7/17 (41,17%) %) con título 64, 1/17 (5,89%) con título 256 y 1/17 (5,88%) con título 4096. Por otro lado, ninguna muestra mostró anticuerpos específicos detectables para Leishmaniaspp. Así, en este estudio fue posible registrar la circulación de T. gondiiy Leishmaniaspp. en los perros del municipio estudiado. Esto demuestra la importancia de realizar investigaciones serológicas en perros durante los programas de control de la población. Dada la importancia de controlar estas y otras zoonosis relevantes para la salud pública, se destaca la necesidad de acciones de vigilancia epidemiológica y la importancia del perro como centinela.

Pesquisa de anticorpos para Toxoplasma gondii, Leptospira spp. e Leishmania spp. em cães no município de Pardinho, São Paulo / Research for Toxoplasma gondii, Leptospira spp. and Leishmania spp. antibodies in dogs from Pardinho, São Paulo / Investigación de anticuerpos para Toxoplasma gondii, Leptospira spp. y Leishmania spp. en perros en el municipio de Pardinho, São Paulo

Com a crescente abordagem integração entre saúde humana, saúde animal e ambiental, o cão vem se destacando como potencial reservatório ou sentinela na cadeia epidemiológica de determinadas zoonoses, devido a sua importância como membro do núcleo familiar atual. O presente estudo objetivou determinar a soroprevalência e fatores de risco para toxoplasmose, leptospirose e leishmaniose visceral canina (LVC) em 181 cães do município de Pardinho, SP, Brasil, participantes de Programa de Controle Populacional, realizado pelo Serviço de Vigilância Sanitária local. As amostras de soro foram submetidas a detecção de anticorpos IgG para Toxoplasma gondii (T. gondii)e Leishmania spp. pela reação de imunofluorescência indireta (RIFI), bem como anticorpos para Leptospira spp. pela técnica de soroaglutinação microscópica (SAM). Adicionalmente, questionário epidemiológico relacionado às zoonoses abordadas foi aplicado aos tutores para verificar associação epidemiológica dos fatores de risco com os resultados sorológicos. Para leptospirose, 7/181 (3,87%; IC95% 1,5-7,8%) animais foram reagentes, sendo Canicola o sorovar prevalente (5/7, 71,43%), seguido por Icterohaemorrhagiae (1/7, 14,29%) e Pyrogenes (1/7, 14,29%). Para toxoplasmose, 17/181 (9,39%; IC95% 5,6-14,6%) amostras apresentaram anticorpos específicos, sendo 8/17 (47,05%) com título de 16, 7/17 (41,17%) com título 64, 1/17 (5,88%) com título 256 e 1/17 (5,89%) com título 4096. Por outro lado, nenhuma amostra apresentou anticorpos específicos detectáveis para Leishmania spp. Por meio deste estudo, foi possível o registro da circulação de T. gondii e Leishmania spp. em cães do município estudado. Com isso, demonstra-se a importância de realização de inquéritos sorológicos em cães durante programas de controle populacional. Dada a importância de se controlar estas e outras zoonoses relevantes a saúde pública, se destacam a necessidade de ações de vigilância epidemiológica e a importância do cão como sentinela.(AU)

The dog, with the growing approach to the integration between human, animal and environmental, has been standing out as a potential reservoir or sentinel to the epidemiological chain of some specific zoonoses, due to its importance as a member of the current family nucleus. The present study aimed to determine the seroprevalence and risk factors to toxoplasmosis, leptospirosis and canine visceral leishmaniasis (LVC) in 181 dogs from Pardinho, SP, Brazil, included on a Population Control Program carried outby the local Health Surveillance Service. Serum samples were researched for Toxoplasma gondii (T. gondii) and Leishmania spp. IgG antibodies using the indirect immunofluorescence test (IFAT), whereas Leptospira spp. antibodies using the microscopic agglutination test (MAT). Additionally, an epidemiological questionnaire related to the studied zoonoses was applied to the owners to verify the epidemiological association of the risk factors to the serological results. For leptospirosis, seropositivity was in 7/181 (3.87%; 95%CI 1.5-7.8%) animals resulted reagent, with Canicola as the prevalent serovar (5/7, 71.43%), followed by Icterohaemorrhagiae (1/7, 14.29%) and Pyrogenes (1/7, 14.29%). For toxoplasmosis, 17/181 (9.39%; 95%CI 5.6-14.6%) samples resulted positive, presenting titer 16 (8/17, 47.05%), titer 64 (7/17, 41.17%), titer 256 (1/17, 5.89%), and titer 4096 (1/17, 5.88%). On the other hand, no sample resulted positive for Leishmania spp. antibodies. In this way, this study reports the unprecedented record of the circulation of T. gondii and Leptospira spp. among dogs in the studied area. This demonstrates the importance of serological surveys on dogs during population control programs. The need for epidemiological surveillance actions and the importance of the dog as sentinel are highlighted, due to the importance of controlling these and other zoonoses relevant to public health.(AU)

Con el creciente enfoque para la integración entre la salud humana, animal y ambiental, el perro se destaca como potencial reservorio o centinela en la cadena epidemiológica de determinadas zoonosis, por su importancia como miembro del núcleo familiar actual. El presente estudio tuvo como objetivo determinar la seroprevalencia y los factores de riesgo para toxoplasmosis, leptospirosis y leishmaniasis visceral canina (LVC) en 181 perros de la ciudad de Pardinho, SP, Brasil, participantes del Programa de Control de la Población, realizado por el Servicio de Vigilancia Sanitaria local. Las muestras de suero fueronsometidas a reacción de inmunofluorescencia indirecta (RIFI) para la detección de anticuerpos IgG para Toxoplasma gondii (T. gondii) y Leishmania spp., así como anticuerpos frente a Leptospiraspp. por la técnica de aglutinación microscópica (SAM). Adicionalmente, se aplicó a los propietarios un cuestionario epidemiológico relacionado a las zoonosis abordadas para verificar la asociación epidemiológica de los factores de riesgo con los resultados serológicos. Para la leptospirosis, 7/181 (3,87%; IC95% 1,5-7,8%) animales fueron reactivos, siendo Canicola el serovar prevalente (5/7, 71,43%), seguido de Icterohaemorrhagiae (1/7, 14,29%) y Pyrogenes (1/7, 14,29%). Para la toxoplasmosis, 17/181 (9,39%; IC95% 5,6-14,6%) mostraron anticuerpos específicos, 8/17 (47,05%) con un título de 16, 7/17 (41,17%) %) con título 64, 1/17 (5,89%) con título 256 y 1/17 (5,88%) con título 4096. Por otro lado, ninguna muestra mostró anticuerpos específicos detectables para Leishmaniaspp. Así, en este estudio fue posible registrar la circulación de T. gondiiy Leishmaniaspp. en los perros del municipio estudiado. Esto demuestra la importancia de realizar investigaciones serológicas en perros durante los programas de control de la población. Dada la importancia de controlar estas y otras zoonosis relevantes para la salud pública, se destaca la necesidad de acciones de vigilancia epidemiológica y la importancia del perro como centinela.(AU)

Antileishmanial activity and immunomodulatory effect of secosubamolide, a butanolide isolated from Nectandra oppositifolia (Lauraceae)

Background:Visceral leishmaniasis is a complex neglected tropical disease caused by Leishmania donovani complex. Its current treatment reveals strong limitations, especially high toxicity. In this context, natural products are important sources of new drug alternatives for VL therapy. Therefore, the antileishmanial and immunomodulatory activity of compounds isolated from Nectandra oppositifolia (Lauraceae) was investigated herein.Methods:The n-hexane extract from twigs of N. oppositifolia were subjected to HPLC/HRESIMS and bioactivity-guided fractionation to afford compounds 1 and 2 which were evaluated in vitro against Leishmania (L.) infantum chagasi and NCTC cells.Results:The n-hexane extract displayed activity against L. (L.) infantum chagasi and afforded isolinderanolide E (1) and secosubamolide A (2), which were effective against L. (L.) infantum chagasi promastigotes, with IC50 values of 57.9 and 24.9 µM, respectively. Compound 2 was effective against amastigotes (IC50 = 10.5 µM) and displayed moderate mammalian cytotoxicity (CC50 = 42 µM). The immunomodulatory studies of compound 2 suggested an anti-inflammatory activity, with suppression of IL-6, IL-10, TNF with lack of nitric oxide.Conclusion:This study showed the antileishmanial activity of compounds 1 and 2 isolated from N. oppositifolia. Furthermore, compound 2 demonstrated an antileishmanial activity towards amastigotes associated to an immunomodulatory effect.(AU)

Influence of apoptosis on liver and spleen resistance in dogs with visceral leishmaniosis / Influência da apoptose na resistência hepática e esplênica de cães com leishmaniose visceral

Abstract The aim of this study was to evaluate apoptosis and parasite load in the liver and spleen of dogs with visceral leishmaniosis (VL), using immunohistochemistry. Liver and spleen samples from 71 dogs with VL were used. The parasite load in the spleen and liver showed significant difference between organs in infected group (P=0.0219). The density of the parasite load in the spleen (median=2.4) was higher than liver (median=0.8). Immunodetection of apoptotic cells was predominant in lymphocytes and differ between the infected and control group in spleen (P=0.0307) and liver (P=0.0346). There was a significant correlation between apoptosis and parasite load (P = 0.0084; r=0.3104) only in the spleen of the infected group, where it was observed that, when increasing the number of apoptotic cells increases the parasitic load. It was concluded that the liver and spleen of infected dogs presented greater numbers of cells undergoing apoptosis (lymphocytes) than the control group, thus suggesting that this process may be contributing towards the survival of Leishmania in these organs, because lymphocyte in apoptosis did not have the ability to present and recognize the antigen, allowing the survival of the parasite.

Resumo O objetivo deste estudo foi avaliar a apoptose e a carga parasitária no fígado e baço de cães com leishmaniose visceral (LV), pela técnica de imuno-histoquímica. Foram utilizadas amostras de fígado e baço de 71 cães com LV. A carga parasitária no baço e fígado mostrou diferença significativa entre os órgãos no grupo infectado (P=0,0219). A densidade da carga de parasita no baço (média=2,4) foi maior do que no fígado (média=0,8). A imunodetecção de células em apoptose foi predominante nos linfócitos, com diferenças entre o grupo infectado e controle no baço (P=0,0307) e fígado (P=0,0346). Houve uma correlação positiva fraca entre apoptose e carga parasitária (P=0,0084; r=0,3104) apenas no baço do grupo infectado, onde observou-se que quando aumentava o número de células em apoptose aumentava a carga parasitária. Concluiu-se que o fígado e o baço de cães infectados apresentam um maior número de células que sofrem apoptose (linfócitos) do que o grupo controle, sugerindo que este processo possa contribuir para a sobrevivência de Leishmania nestes órgãos, pois os linfócitos em apoptose não tiveram a capacidade de apresentar e reconhecer o antígeno, permitindo a sobrevivência do parasita.

Influence of apoptosis on liver and spleen resistance in dogs with visceral leishmaniosis / Influência da apoptose na resistência hepática e esplênica de cães com leishmaniose visceral

Abstract The aim of this study was to evaluate apoptosis and parasite load in the liver and spleen of dogs with visceral leishmaniosis (VL), using immunohistochemistry. Liver and spleen samples from 71 dogs with VL were used. The parasite load in the spleen and liver showed significant difference between organs in infected group (P=0.0219). The density of the parasite load in the spleen (median=2.4) was higher than liver (median=0.8). Immunodetection of apoptotic cells was predominant in lymphocytes and differ between the infected and control group in spleen (P=0.0307) and liver (P=0.0346). There was a significant correlation between apoptosis and parasite load (P = 0.0084; r=0.3104) only in the spleen of the infected group, where it was observed that, when increasing the number of apoptotic cells increases the parasitic load. It was concluded that the liver and spleen of infected dogs presented greater numbers of cells undergoing apoptosis (lymphocytes) than the control group, thus suggesting that this process may be contributing towards the survival of Leishmania in these organs, because lymphocyte in apoptosis did not have the ability to present and recognize the antigen, allowing the survival of the parasite.(AU)

Resumo O objetivo deste estudo foi avaliar a apoptose e a carga parasitária no fígado e baço de cães com leishmaniose visceral (LV), pela técnica de imuno-histoquímica. Foram utilizadas amostras de fígado e baço de 71 cães com LV. A carga parasitária no baço e fígado mostrou diferença significativa entre os órgãos no grupo infectado (P=0,0219). A densidade da carga de parasita no baço (média=2,4) foi maior do que no fígado (média=0,8). A imunodetecção de células em apoptose foi predominante nos linfócitos, com diferenças entre o grupo infectado e controle no baço (P=0,0307) e fígado (P=0,0346). Houve uma correlação positiva fraca entre apoptose e carga parasitária (P=0,0084; r=0,3104) apenas no baço do grupo infectado, onde observou-se que quando aumentava o número de células em apoptose aumentava a carga parasitária. Concluiu-se que o fígado e o baço de cães infectados apresentam um maior número de células que sofrem apoptose (linfócitos) do que o grupo controle, sugerindo que este processo possa contribuir para a sobrevivência de Leishmania nestes órgãos, pois os linfócitos em apoptose não tiveram a capacidade de apresentar e reconhecer o antígeno, permitindo a sobrevivência do parasita.(AU)

Antibodies to Leishmania spp. in domestic felines / Anticorpos anti-Leishmania spp. em felinos domésticos

Leishmaniasis is a vector-borne zoonotic disease caused by protozoa in the genus Leishmania, typical of rural and peri-urban environments. The causative agent of American visceral leishmaniasis is Leishmania (Leishmania) infantum chagasi and the main insect vector in Brazil is Lutzomyia longipalpis. Dogs (Canis familiaris) are important in the transmission of the disease, as a reservoir closely related to humans and an infection source for phlebotomine vectors. Since 1990, an increasing number of feline leishmaniasis cases have been reported, suggesting that domestic cats (Felis catus) might be involved in the epidemiology of the disease. The present study analyzed the prevalence of anti-Leishmania spp. antibodies in naturally infected domestic cats from various neighborhoods in the municipality of Belém, Pará, Brazil, using the indirect immunofluorescence assay (IFA) and the direct agglutination test (DAT). Among the 443 samples tested, 18 (4.06%) presented positive reactions in the IFA. The observed titers were 40 IU in 4.97% of the samples and 80 IU in 0.90%. In the DAT test, positive results were found in 25 (5.64%) of the samples. The observed titers were also 40 IU (4.97%) and 80 IU (0.68%). The agreement rate between the two tests was considered low (Kappa coefficient = 0.10).(AU)

As leishmanioses são zoonoses vetoriais causadas por protozoários do gênero Leishmania, características de ambientes rurais e periurbanos. A leishmaniose visceral americana (LVA) é causada pela Leishmania (Leishmania) infantum chagasi, cujo principal vetor no Brasil é Lutzomyia longipalpis. O cão (Canis familiaris) possui papel ativo na transmissão da doença, pois é um reservatório muito próximo do humano e uma fonte de infecção para o flebotomíneo. O aumento do número de casos de leishmaniose felina, descritos na literatura a partir de 1990, sugere que gatos também podem atuar na epidemiologia dessa enfermidade. O presente estudo avaliou a prevalência de anticorpos anti-Leishmania spp. em gatos domésticos (Felis catus) de diferentes bairros do Município de Belém, Pará (PA), pela Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI) e pelo Teste de Aglutinação Direta (TAD), utilizando-se como ponto de corte o título de 40 UI. Entre os 443 gatos estudados, 18 (4,06%) apresentaram reação sorológica positiva na RIFI. Os títulos observados foram de 40 UI em 0,90%. No TAD, foi encontrada positividade em 25 (5,64%) animais. Os títulos observados foram de 40 UI, em 4,97% dos gatos, e 80 UI, em 0,68%. A concordância entre os testes foi considerada baixa (coeficiente Kappa: 0,10).(AU)