Bacterial communities in artisanal raw bovine milk cheeses from the southern region of Brazil / Comunidades bacterianas em queijos artesanais de leite bovino cru da região sul do Brasil

The production of artisanal cheeses made with raw bovine milk has grown in the southern region of Brazil. It is important to obtain information about the risks of this practice, especially concerning food safety. In this study, next-generation sequencing was used to identify and characterize the bacterial communities of artisanal raw milk cheeses. We analyzed one pool of five raw milk samples (control group M1) from different dairy farms and nine pools (M2-M10) of 45 artisanal raw milk cheeses.The characterization of the bacterial communities included 199 species distributed across 59 different genera dispersed among the samples. Among the genera observed, 11 were classified as beneficial to the aroma, flavour, colour, and texture of the cheese. Thirty-one genera were classified as harmful to these characteristics. Another 17 were classified as potential pathogens for animals and humans, including Aeromonas, Bacillus, Cronobacter, Salmonella, Staphylococcus, and bacteria of the coliform group, including E. coli and Klebsiella. There was a significant difference (P < 0.05) in the number of bacterial communities identified between the control group (M1) and the two pools of artisanal raw milk cheeses (M2 and M8). This study demonstrated that next-generation sequencing provides in-depth information on the composition of the microbiota in artisanal raw milk cheeses, characterizing bacterial communities, identifying the wide microbial diversity, and identifying microbial benefits and risks.

Devido ao aumento da produção de queijos artesanais com leite bovino cru na região sul do Brasil, é importante obter informações sobre os riscos desta prática, principalmente no que se refere à segurança do alimento. Neste estudo foi utilizada a técnica de Next Generation Sequencing (NGS) para identificar e caracterizar comunidades bacterianas de queijos artesanais de leite cru. Foram analisados um pool de cinco amostras de leite cru como grupo controle (M1) de diferentes propriedades leiteiras localizadas na região norte do estado do Rio Grande do Sul, e nove pools (M2-M10) de 45 queijos artesanais de leite cru. A caracterização das comunidades bacterianas incluiu 199 espécies distribuídas em 59 gêneros diferentes dispersos entre as amostras. Dentre os gêneros observados, 11 foram classificados como benéficos ao aroma, sabor, cor e textura do queijo, enquanto 31 gêneros foram classificados como prejudiciais a essas características. Outros 17 foram classificados como potenciais patogênicos para animais e humanos, incluindo Aeromonas, Bacillus, Cronobacter, Salmonella, Staphylococcus, bactérias do grupo coliforme como Escherichia coli e Klebsiella. Houve diferença significativa (P < 0,05) entre o número de comunidades bacterianas identificadas no grupo controle (M1) e dois pools de queijos artesanais de leite cru (M2 e M8). Este estudo demonstra que o NGS fornece informações detalhadas sobre a composição da microbiota em queijos artesanais de leite cru, caracterizando comunidades bacterianas, identificando a ampla diversidade microbiana, os benefícios e riscos microbianos.

Detecção de larvas de Toxocara canis em leite: um estudo experimental em coelhas / Detection of larvae of Toxocara canis in milk: an experimental study in rabbits

Toxocaríase, causada geralmente pelo Toxocara canis, é uma importante zoonose de distribuição mundial. Hospedeiros paratênicos têm sido utilizados para obtenção de informações sobre a transmissão de T. canis. A transmissão transmamária em murinos infectados experimentalmente foi observada com a recuperação de larvas. O objetivo do presente estudo foi de avaliar a possibilidade de transmissão transmamária de Toxocara canis em coelhos, pela detecção direta de larvas no leite. Dezessete coelhas (Nova Zelândia branca) púberes e virgens foram distribuídas em dois grupos. Doze fêmeas foram infectadas com 1000 ovos embrionados de T. canis (Grupo Infectado), por via oral, enquanto outras cinco coelhas foram mantidas sem infecção (Grupo Controle). Um mês após a inoculação, as coelhas foram acasaladas. Nos dias +7, +14 e +21 após o nascimento dos filhotes, foram coletados, por ordenha manual, 500μL de leite, em três lactações consecutivas. A recuperação de larvas foi determinada pelo uso da técnica de centrífugo-sedimentação com formol-éter. A técnica de ELISA foi empregada para confirmar a produção de anticorpos (IgG) anti-T. canis pelas fêmeas infectadas. Observou-se a presença de larvas em cinco das doze (41,7%) coelhas por amostra. As larvas foram recuperadas exclusivamente nos dias +7, +14 de lactação. A detecção foi observada em diferentes lactações. Não houve diferença significativa entre o número de larvas na mesma lactação ou entre as diferentes lactações. Anticorpos anti-T. canis foram detectados em todas as coelhas infectadas. Em conclusão, a presença de larvas no leite de coelhas sugere a possibilidade de transmissão lactogênica em hospedeiros paratênicos. Ademais, a técnica empregada no estudo permite a recuperação de larvas diretamente do leite.(AU)

Toxocariasis, caused most commonly by Toxocara canis, is an important cosmopolitan zoonosis. Paratenic hosts have been employed to provide knowledge regard to the transmission of toxocariasis. Transmammary transmission in murine experimentally infected was observed based on the recovery of larvae from the tissue. The aim of this study was to evaluate the possibility of transmammary transmission of Toxocara canis in rabbits by detecting larvae directly in milk. Seventeen sexually mature virgin white New Zealand female rabbits were divided into two groups. Twelve animals were orally inoculated with 1,000 T. canis embryonated eggs (infected group), and five animals remained uninfected (control group). One month following the infection, the females were mated. Manual collection of 500 μL of milk from each rabbit was performed on days +7, +14 and +21 of lactation for three consecutive lactations. The recovery of larvae was determined via a centrifuge-sedimentation technique using ether and formalin solutions. ELISA test was run to confirm the production of anti-T. canis antibodies (IgG) by infected rabbits. The presence of larvae was observed in milk samples from 5 (41.7%) of the 12 infected rabbits. The total number of recovered larvae was 20, ranging from 1 to 4 larvae per lactation/rabbit. Larvae were recovered exclusively on days 7 and 14 of lactation. Recovery was verified in different lactations. No significant difference was observed with respect to the number of larvae either in the same lactation period or in different lactation periods. Anti-T. canis antibodies were detected in all infected rabbits. In conclusion, the presence of larvae in rabbit milk samples suggests the possibility of galactogenic transmission of T. canis in paratenic hosts. Moreover, the technique employed in this study allows for the recovery of larvae directly from milk.(AU)

Mastite clínica e subclínica em pequenas propriedades leiteiras no município de Araguari – MG / Clinical and subclinical mastitis incidence on small dairy farms in the municipality of Araguari - MG

Os problemas de sanidade das pequenas propriedades rurais afetam a qualidade do leite. O objetivo do presente estudo foi verificar a incidência de mastite clínica e subclínica por meio do teste da caneca telada e do Califórnia Mastite Teste (CMT), em cinco pequenas propriedades do município de Araguari–MG. A pesquisa foi realizada com 69 animais, sendo as coletas realizadas nos meses de junho, julho e agosto de 2010. A incidência de mastite clínica foi menor (10,5%) que a subclínica (33%). Fatores como ordem de parto, período de lactação, uso de pré e pós dipping, higiene do curral e na ordenha, uso de caneca telada e CMT não influenciaram na incidência de casos clínicos e subclínicos.

The sanity problems of small farms affect the quality of milk. The aim of this study was determine the incidence of clinical and subclinical mastitis using the California Mastitis Test (CMT) and mug test in five small properties in Araguari County (Brazil, Minas Gerais state). The research was conducted with 69 animals; samples were performed in the months of June, July and August 2010. The incidence of clinical mastitis was lower (10.5%) than subclinical (33%). Factors such as calving order, lactation period, pre and post dipping, the cleaning of corral and care in milking, using mug test and CMT did not influence the incidence of clinical and subclinical mastitis.

Mastite clínica e subclínica em pequenas propriedades leiteiras no município de Araguari MG / Clinical and subclinical mastitis incidence on small dairy farms in the municipality of Araguari - MG

Os problemas de sanidade das pequenas propriedades rurais afetam a qualidade do leite. O objetivo do presente estudo foi verificar a incidência de mastite clínica e subclínica por meio do teste da caneca telada e do Califórnia Mastite Teste (CMT), em cinco pequenas propriedades do município de Araguari–MG. A pesquisa foi realizada com 69 animais, sendo as coletas realizadas nos meses de junho, julho e agosto de 2010. A incidência de mastite clínica foi menor (10,5%) que a subclínica (33%). Fatores como ordem de parto, período de lactação, uso de pré e pós dipping, higiene do curral e na ordenha, uso de caneca telada e CMT não influenciaram na incidência de casos clínicos e subclínicos.(AU)

The sanity problems of small farms affect the quality of milk. The aim of this study was determine the incidence of clinical and subclinical mastitis using the California Mastitis Test (CMT) and mug test in five small properties in Araguari County (Brazil, Minas Gerais state). The research was conducted with 69 animals; samples were performed in the months of June, July and August 2010. The incidence of clinical mastitis was lower (10.5%) than subclinical (33%). Factors such as calving order, lactation period, pre and post dipping, the cleaning of corral and care in milking, using mug test and CMT did not influence the incidence of clinical and subclinical mastitis.(AU)

Comparação de kits ELISA® comerciais para anticorpos no soro e leite com um teste coproparasitológico em bovinos naturalmente infectados por Fasciola hepatica / Comparison of comercial® ELISA kits for antibodies in serum and milk with a fecal test in cattle naturally infected with Fasciola hepatica

A fasciolose é uma enfermidade causada por um trematoda que acomete o fígado principalmente de ruminantes domésticos, podendo parasitar o homem e seu diagnóstico é realizado rotineiramente por exames coproparasitológicos. O objetivo do presente estudo foi comparar kits comerciais de ELISA para anticorpos no soro e leite com um teste coproprarasitológico em bovinos naturalmente infectados por Fasciola hepatica. Foram coletadas amostras de fezes (92) sangue (92) e leite (43) de bovinos provenientes de propriedades de gado leiteiro do município de Jerônimo Monteiro, sul do Estado do Espírito Santo. As amostras de fezes coletadas foram processadas pela técnica de sedimentação fecal para ovos de F. hepatica, utilizada como padrão ouro para as análises. Amostras de sangue e de leite foram processadas segundo a orientação do fabricante dos respectivos Kits ELISA comerciais testados. Utilizou-se o c² de McNemar para comparação estatística e calcularam-se a sensibilidade e especificidade, valores preditivos e kappa. Os resultados obtidos mostraram que as frequências de positividade pelo uso dos kits ELISA comerciais de soro e de leite diferiram significativamente (p<0,0001) em relação ao exame coproparasitológico. A sensibilidade dos Kits foi de 100%, porém possuíram baixa especificidade, 42,85 e 30% para o soro e leite respectivamente. O coeficiente de kappa mostrou concordância sofrível para os testes de soro (0,33) e de leite (0,21). Os valores preditivos positivos dos kits para soro e leite foram, respectivamente, 44,61 e 38,23% e, os valores preditivos negativos de 100% para ambos os testes. Apesar da maior sensibilidade dos kits ELISA comerciais e, destes apresentarem diferença em relação ao exame coproparasitológico na detecção dos animais positivos para F. hepatica, a escolha de um teste diagnóstico deve considerar o custo benefício. Quando se trata da presença de parasitismo em rebanhos, o tratamento é aplicado em todos os animais e, assim, o exame coproparasitológico para o diagnóstico da doença tem maior eficiência, já que é menos oneroso e de fácil execução.(AU)

The fascioliasis is a disease caused by a trematode that affects the liver mainly of domestic ruminants and can also parasite man; its diagnosis is routinely done by coprological methods. The aim of this study was to compare commercial ELISA kits for antibodies in serum and milk with a coprological test in cattle naturally infected by Fasciola hepatica. We collected fecal, blood and milk samples from cattle in the municipality of Jerônimo Monteiro, southern Espírito Santo state. The fecal samples were processed by the fecal egg sedimentation for F. hepatica, which is used as a gold standard for analyzis. Blood (92) and milk (43) samples were processed according to the manufacturer instructions of the respective commercial ELISA kits tested. We used the McNemar chi-square for statistical comparison and calculated the sensitivity, specificity, predictive values, and kappa. The results showed that the frequency of positivity for the commercial serum ELISA kits (χ2=34.02) and milk (χ2=19.04) differed significantly (p<0.0001) compared with fecal egg sedimentation. The sensitivity of the kits was 100%, but possessed low specificity, 42.85 and 30% for serum and milk respectively. The coefficient kappa showed agreement for testing serum (0.33) and milk (0.21). The positive predictive value of the kits for serum and milk were respectively 44.61% and 38.23%, and negative predictive values were 100% for both tests. Despite the increased sensitivity of commercial ELISA kits and the difference in relation to the fecal egg sedimentation test for detection of F. hepatica positive animals, the choice of a diagnostic test should consider the effectiveness. When a herd is affected by parasitism, treatment is applied to all animals; so, the fecal egg sedimentation test for the diagnosis of disease in the field is most efficient, as the test is cheap and easy to perform.(AU)

Detecção de larvas de Toxocara canis em leite: um estudo experimental em coelhas / Detection of larvae of Toxocara canis in milk: an experimental study in rabbits

Toxocaríase, causada geralmente pelo Toxocara canis, é uma importante zoonose de distribuição mundial. Hospedeiros paratênicos têm sido utilizados para obtenção de informações sobre a transmissão de T. canis. A transmissão transmamária em murinos infectados experimentalmente foi observada com a recuperação de larvas. O objetivo do presente estudo foi de avaliar a possibilidade de transmissão transmamária de Toxocara canis em coelhos, pela detecção direta de larvas no leite. Dezessete coelhas (Nova Zelândia branca) púberes e virgens foram distribuídas em dois grupos. Doze fêmeas foram infectadas com 1000 ovos embrionados de T. canis (Grupo Infectado), por via oral, enquanto outras cinco coelhas foram mantidas sem infecção (Grupo Controle). Um mês após a inoculação, as coelhas foram acasaladas. Nos dias +7, +14 e +21 após o nascimento dos filhotes, foram coletados, por ordenha manual, 500μL de leite, em três lactações consecutivas. A recuperação de larvas foi determinada pelo uso da técnica de centrífugo-sedimentação com formol-éter. A técnica de ELISA foi empregada para confirmar a produção de anticorpos (IgG) anti-T. canis pelas fêmeas infectadas. Observou-se a presença de larvas em cinco das doze (41,7%) coelhas por amostra. As larvas foram recuperadas exclusivamente nos dias +7, +14 de lactação. A detecção foi observada em diferentes lactações. Não houve diferença significativa entre o número de larvas na mesma lactação ou entre as diferentes lactações. Anticorpos anti-T. canis foram detectados em todas as coelhas infectadas. Em conclusão, a presença de larvas no leite de coelhas sugere a possibilidade de transmissão lactogênica em hospedeiros paratênicos. Ademais, a técnica empregada no estudo permite a recuperação de larvas diretamente do leite.

Toxocariasis, caused most commonly by Toxocara canis, is an important cosmopolitan zoonosis. Paratenic hosts have been employed to provide knowledge regard to the transmission of toxocariasis. Transmammary transmission in murine experimentally infected was observed based on the recovery of larvae from the tissue. The aim of this study was to evaluate the possibility of transmammary transmission of Toxocara canis in rabbits by detecting larvae directly in milk. Seventeen sexually mature virgin white New Zealand female rabbits were divided into two groups. Twelve animals were orally inoculated with 1,000 T. canis embryonated eggs (infected group), and five animals remained uninfected (control group). One month following the infection, the females were mated. Manual collection of 500 μL of milk from each rabbit was performed on days +7, +14 and +21 of lactation for three consecutive lactations. The recovery of larvae was determined via a centrifuge-sedimentation technique using ether and formalin solutions. ELISA test was run to confirm the production of anti-T. canis antibodies (IgG) by infected rabbits. The presence of larvae was observed in milk samples from 5 (41.7%) of the 12 infected rabbits. The total number of recovered larvae was 20, ranging from 1 to 4 larvae per lactation/rabbit. Larvae were recovered exclusively on days 7 and 14 of lactation. Recovery was verified in different lactations. No significant difference was observed with respect to the number of larvae either in the same lactation period or in different lactation periods. Anti-T. canis antibodies were detected in all infected rabbits. In conclusion, the presence of larvae in rabbit milk samples suggests the possibility of galactogenic transmission of T. canis in paratenic hosts. Moreover, the technique employed in this study allows for the recovery of larvae directly from milk.