Resumo

The objective of the present study was to evaluate the qPCR for detection and enumeration of Staphylococcus aureus and Streptococcus agalactiae using different milk samplings in comparison to the conventional microbiology. Four dairy herds with a history of subclinical mastitis caused by S. aureus and S. agalactiae were selected. Sampling approach included milk samples from bulk tank (BT), cow level (composite samples, CO), and mammary quarter level (MQ) from 785 lactating cows. Three consecutive monthly milk samplings were carried out, totaling 3347 MQ milk samples, 912 CO, and 12 from BT. All collected milk samples were subjected to conventional microbiology and qPCR for detection and enumeration of S. aureus and S. agalactiae. The qPCR showed 71.5% of diagnostic sensitivity for S. aureus isolated from MQ milk samples, 71.8% for CO, and 50% for BT milk samples compared with conventional microbiology methodology. Taken together, the diagnostic sensitivity for S. agalactiae isolated from MQ milk samples was 90.2, 87.7 for CO, and 90.9% for BT milk samples. In general, the qPCR methodology enabled the detection of S. aureus and S. agalactiae, regardless of the type of milk sampling. The direct use of milk samples to estimate the counting of S. aureus by qPCR demonstrated lower sensitivity than the counting of S. agalactiae, which can be explained by the pathogen infection dynamics and differences in milk sample type.

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Streptococcosis caused by Streptococcus agalactiae is a major economic problem for Nile tilapia Oreochromis niloticus production worldwide. Inactivated vaccines are considered an efficient method for controlling streptococcosis. However, during the vaccination process, stress during fish handling could affect the immune response. Immunomodulators, such as thymomodulin, act on the immune system and can improve vaccination responses. Thus, the aim of this study was to assess the immunomodulatory effect of thymomodulin in O. niloticus vaccinated against S. agalactiae. For this, fish were distributed in a factorial design (2x2x6), corresponding to two levels of thymomodulin supplementation (0.0 and 0.3%), two treatments (sterile phosphate buffered saline and inactivated S. agalactiae vaccine). Initially, fish received thymomodulin supplementation for 30 days. Next, fish were vaccinated by injection intraperitoneal (i.p.) of heat inactivated S. agalactiae vaccine. 15 days after vaccination, all fish were challenged i.p. with S. agalactiae and blood samples were collected at 7, 14, 21 days post infection (DPI).Results revealed that fish supplemented with thymomodulin vaccinated or not developed better protection against S. agalactiae than vaccinated fish without thymomodulin. Furthermore, fish vaccinated and supplemented with thymomodulin presented high levels of antibodies after 14 and21 DPI, suggesting that thymomodulin can promote the immune response in Nile tilapia.

A estreptococose causada pelo Streptococcus agalactiae é um grande problema econômico para a produção de tilápia-do-nilo Oreochromis niloticus em todo o mundo. As vacinas inativadas são consideradas um método eficiente para o controle da estreptococose. No entanto, durante o processo de vacinação o estresse durante o manejo dos peixes pode afetar sua resposta imune. Imunomoduladores como a timomodulina, atuam no sistema imunológico e podem melhorar as respostas vacinais. Assim, o objetivo deste estudo foi avaliar o efeito imunomodulador da timomodulina em O. niloticus vacinado contra S. agalactiae. Para isso, os peixes foram distribuídos em esquema fatorial (2x2x6), correspondendo a dois níveis de suplementação de timodulina (0,0 e 0,3%), dois tratamentos (solução salina tamponada com fosfato estéril e vacina S. agalactiae inativada). Inicialmente, os peixes receberam suplementação de timomodulina por 30 dias. Em seguida, os peixes foram vacinados por via intraperitoneal (i.p.) da vacina de S. agalactiae inativada pelo calor. 15 dias após a vacinação, todos os peixes foram desafiados i.p. com S. agalactiae e amostras de sangue foram coletadas aos 7, 14, 21 dias após a infecção (DPI). Os resultados revelaram que os peixes suplementados com timomodulina vacinados ou não desenvolveram melhor proteção contra S. agalactiae do que os peixes vacinados sem timomodulina. Além disso, os peixes vacinados e suplementados com timomodulina apresentaram altos níveis de anticorpos após 14 e 21 DPI, sugerindo que a timomodulina pode promover a resposta imune em tilápia-do-nilo.

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The objective of this study was to fully describe the protocol with standardized modifications and evaluate the lysozyme activity, an indicator of innate immunity in tilapia, to compare lipopolysaccharide (LPS) with Streptococcus agalactiae injections. Lysozyme was determined in serum using the turbidimetric method, in which lysozyme activity was evaluated by Micrococcus lysodeikticus lysis, with modifications for microplate assay. The experiment was conducted in a completely randomized design. Juvenile tilapia was divided in the following six treatments: challenged with phosphate buffer PBS (control) and 100, 250, 500, and 600 µg kg−1 LPS and S. agalactiae. All treatments were challenged for 72 h and seven days and then sampled to determine lysozyme activity. After 72 h or seven days, concentrations of LPS promoted changes in lysozyme production, either lesser or equal, depending on concentration when compared with fish injected with S. agalactiae. It was possible to standardize the analysis and determine that the treatment with LPS promotes immunomodulation at a concentration of 250 µg kg−1 LPS, this response being similar to challenge with S. agalactiae.

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Mastitis causes significant economic losses to the dairy cattle industry. The present study aimed to evaluate the antibacterial properties of 39 heterocyclic derivatives (1,3-thiazoles and 4-thiazolidinones) against clinical mastitis isolates from dairy cows. Milk samples were collected from cows with clinical mastitis and the bacterial species were identified by PCR. Antibacterial activity was assessed using the broth microdilution method. First, 39 heterocyclic compounds were tested against four bacterial isolates (Staphylococcus aureus, Streptococcus agalactiae, Corynebacterium bovis and Escherichia coli) randomly chosen from those recovered from the milk samples (Study 1). Subsequently, the compounds with the strongest antibacterial activity were tested against all the bacterial isolates recovered from the milk samples (Study 2). 1,3-thiazoles showed the strongest antibacterial activity, specially compounds 30 and 38, which also showed bactericidal properties according to their minimal inhibitory concentration (MIC) and minimal bactericidal concentration (MBC) values. Corynebacterium spp. and Enterobacteriaceae isolates were the most susceptible to compounds 30 and 38. Compounds 30 and 38 are promising targets for new antimicrobial agents.(AU)

A mastite causa significativas perdas econômicas à indústria leiteira bovina. O presente estudo teve como objetivo avaliar as propriedades antibacterianas de 39 derivados heterocíclicos (1,3-tiazóis e 4-tiazolidinonas) contra isolados clínicos de mastite em vacas leiteiras. Amostras de leite foram coletadas de vacas com mastite clínica e as espécies bacterianas isoladas foram identificadas por PCR. A atividade antibacteriana foi avaliada pelo método de microdiluição em caldo. Primeiramente, os 39 compostos heterocíclicos foram testados contra quatro isolados bacterianos (Staphylococcus aureus, Streptococcus agalactiae, Corynebacterium bovis e Escherichia coli) escolhidos aleatoriamente dentre os recuperados das amostras de leite (Estudo 1). Posteriormente, compostos com atividade antibacteriana mais forte foram testados contra todos os isolados bacterianos recuperados das amostras de leite (Estudo 2). Os compostos 1,3-tiazóis apresentaram a maior atividade antibacteriana, principalmente os compostos 30 e 38, que também apresentaram propriedades bactericidas de acordo com seus valores de concentração inibitória mínima (CIM) e concentração bactericida mínima (CBM). Os isolados Corynebacterium spp. e Enterobacteriaceae foram os mais suscetíveis aos compostos 30 e 38. Os compostos 30 e 38 mostraram-se promissores como novos agentes antimicrobianos.(AU)

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Bovine mastitis is the most important disease of dairy herds worldwide. Its main etiologic agents are bacteria, including Streptococcus agalactiae. The importance of this agent in bovine mastitis is because it is highly contagious and has a high impact on the occurrence of clinical mastitis cases and in the increase of the bulk milk somatic cell counts. The dry cow therapy and the treatment of the clinical mastitis cases stand out among the measures to control intramammary infections in cows. However, these strategies require knowledge about the antimicrobial susceptibility of the causal microorganisms. Thus, this study aimed to evaluate the antimicrobial susceptibility of 89 S. agalactiae strains isolated from bovine mastitis between the years 2004 and 2008 in dairy herds from Campo das Vertentes region, Minas Gerais State, Brazil. The disc diffusion technique was used and the antimicrobials currently used in mastitis therapy were tested. The isolates tested showed 100% susceptibility to chloramphenicol, ceftiofur, cefotaxime, enrofloxacin, and cefquinome. High frequencies of susceptibility (>95%) were also observed for the beta-lactams (penicillin G, ampicillin, and oxacillin), cephalosporins (cephalotin, ceftiofur, cefotaxime, cefoperazone, and cefquinome), florfenicol, gentamicin, lincomycin, nitrofurantoin, and sulfamethoprim. The strains showed high frequencies of resistance to neomycin (15.74%), and tetracycline (21.35%). Multidrug resistance was detected in 2.25% of the tested isolates. The results pointed to variations in the antimicrobial susceptibility profiles of the studied strains and the importance of the use of the susceptibility tests to determine the correct antimicrobial to be applied in the treatment of bovine mastitis caused by S. agalactiae. The high frequencies of resistance observed to some antimicrobials, such as neomycin and tetracycline, commonly used in the treatment of mastitis and other pathologies, highlighted the need for more judicious use of antimicrobials on dairy farms.(AU)

A mastite é a principal doença de bovinos leiteiros em todo o mundo e tem como principais agentes as bactérias, entre as quais Streptococcus agalactiae. Esse agente se destaca por ser altamente contagioso e pelos reflexos que causa na incidência de casos clínicos e no incremento da contagem de células somáticas do leite do tanque. Para o controle desta enfermidade, destacam-se a terapia de vacas secas e o tratamento de casos clínicos, medidas que requerem o conhecimento do perfil de sensibilidade dos agentes causais aos antimicrobianos. Este estudo teve como objetivo avaliar os perfis de suscetibilidade a antimicrobianos em 89 amostras de S. agalactiae isoladas de casos de mastite bovina em rebanhos da região de Campo das Vertentes, Minas Gerais, no período de 2004 a 2008. A técnica de difusão em discos foi utilizada e os antimicrobianos correntemente empregados na terapia da mastite foram testados. Os testes de suscetibilidade antimicrobiana apontaram 100% de susceptibilidade para cloranfenicol, ceftiofur, cefotaxima, enrofloxacina e cefquimona. Níveis elevados de susceptibilidade (>95%) foram observados para os betalactâmicos, florfenicol, gentamicina, lincomicina, nitrofurantoína e sulfametoprim. Altas frequências de resistência foram observadas para neomicina (15,74%) e tetraciclina (21,35%). Dois isolados multirresistentes (2,25%) foram encontrados. Os resultados apontaram variações nos perfis se suscetibilidade aos antimicrobianos na população analisada, indicando a importância do uso do antibiograma para a escolha mais criteriosa dos antibacterianos a serem utilizados para o tratamento da mastite bovina causada por S. agalactiae. As altas frequências de resistência detectadas para alguns dos antimicrobianos comumente utilizados para o tratamento de mastite e outras patologias, tais como a neomicina e a tetraciclina, salientam a necessidade de monitoramento permanente do perfil de suscetibilidade aos antimicrobianos e do uso mais criterioso dos mesmos nos rebanhos leiteiros.(AU)

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Nile tilapia (Oreochromis niloticus) has always been considered more resistant to diseases compared to other fish species. However, in recent decades, this fish species has also been susceptible to many bacterial, fungal, parasitic, and nutritional diseases. In Brazil, streptococcosis is one of the main diseases that affect tilapia and has caused many economic losses. A resistance test was conducted with 93 tilapia of four varieties (UFLA strain and three commercial varieties: SC1, SC2, and SC3) to evaluate resistance to experimental inoculation with Streptococcus agalactiae. Each variety was distributed in five aquariums, with nine specimens of the same variety. Among the five aquariums, four housed fish were intraperitoneally inoculated with 10(7) CFU/fish of S. agalactiae and one aquarium harbored fish from the control group, which received 0.1 mL of sterile BHI (Brain Heart Infusion). Significant differences were observed in the survival rates accumulated at the end of the experiment (day 15), with values of 22, 36, 36, and 15% for SC1, SC2, SC3, and UFLA, respectively. The UFLA strain presented lower survival than other strains, which did not differ among the 15 days of challenge. These results demonstrate that there are animals with a better response to the resistance test than others.

A tilápia do Nilo (Oreochromis niloticus) sempre foi considerada mais resistente a doenças em comparação com outras espécies de peixes, porém, nas últimas décadas, essa espécie de peixe também foi suscetível a muitas doenças bacterianas, fúngicas, parasitárias e nutricionais. No Brasil, a estreptococose é uma das principais doenças que afetam a tilápia e causou muitas perdas econômicas. Um teste de resistência foi realizado com 93 tilápias de quatro variedades (linhagem UFLA e três variedades comerciais: SC1, SC2 e SC3) para avaliar a resistência à inoculação experimental com Streptococcus agalactiae. Cada variedade foi distribuída em cinco aquários, com nove espécimes da mesma variedade. Entre os cinco aquários, quatro peixes abrigados foram inoculados intraperitonealmente com 10(7) UFC / peixe de S. agalactiae e um aquário abrigou peixes do grupo controle, que receberam 0,1 mL de BHI estéril (infusão cardíaca cerebral). Diferenças significativas foram observadas nas taxas de sobrevivência acumuladas no final do experimento (dia 15), com valores de 22, 36, 36 e 15% para SC1, SC2, SC3 e UFLA, respectivamente. A linhagem UFLA apresentou menor sobrevivência que as demais, o que não diferiu entre os 15 dias de desafio. Esses resultados demonstram que existem animais com melhor resposta ao teste de resistência do que outros.

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Bovine mastitis is the most frequent disease in dairy herds worldwide, causing great economic losses to both producers and the industry. This disease has direct implications in public health due to the zoonotic potential of some agents involved in its etiology and the presence of antimicrobial residues in milk. Knowledge of the agents involved in its etiology and the susceptibility profiles to antimicrobials is of paramount importance, give the multifactorial aspect of the disease and the importance of milk production in family farming. This study evaluated the prevalence of Staphylococcus aureus and Streptococcus agalactiae in family-owned herds in the Campo das Vertentes region, State of Minas Gerais, and the resistance of these pathogens to the most commonly used antibiotics in the treatment of mastitis in dairy herds. The study involved 200 properties, covering an area of approximately 12,564 km2. The prevalence of pathogens was carried out through microbiological analyses of milk samples from each farm’s milk tank. Modified Baird-Parker Agar medium was used to detect S. aureus, and modified Edwards Agar medium, enriched with 5% defibrinated sheep blood, was used to detect S. agalactiae. Disc diffusion method was used to evaluate resistance to antibiotics. The results showed high prevalence of S. aureus pathogens (71.0%) and S. agalactiae (68.0%) as well as high levels of multidrug resistance. The results show that the control of contagious mastitis in the herds is flawed, which indicates the need for more effective control of these pathogens and more judicious use of antibiotics to minimize resistance.

A mastite bovina é a doença mais frequente em rebanhos leiteiros no mundo todo, acarretando grandes prejuízos econômicos para os produtores e a indústria. A doença também tem implicações na saúde pública, devido ao potencial zoonótico de alguns agentes envolvidos em sua etiologia e à presença de resíduos de antibióticos no leite. Considerando o aspecto multifatorial da doença e a importância da produção de leite na agricultura familiar, o conhecimento dos agentes envolvidos em sua etiologia e os perfis de suscetibilidade aos antibióticos é de suma importância. Neste estudo, avaliaram-se as prevalências de Staphylococcus aureus e Streptococcus agalactiae em rebanhos de propriedades de agricultura familiar, na região do Campo das Vertentes, Minas Gerais, e também se analisou a resistência destes patógenos aos antibióticos mais comumente utilizados no tratamento da mastite em rebanhos leiteiros. O estudo envolveu 200 propriedades, abrangendo uma área de aproximadamente 12.564 km2. As prevalências dos patógenos S. aureus e S. agalactia e foram obtidas por meio de análises microbiológicas de amostras de leite do tanque de expansão de cada propriedade. Para a detecção de S. aureus, utilizou-se o meio seletivo Ágar Baird-Parker modificado e, para a detecção de S. agalactia e, o meio seletivo Ágar Edwards modificado, enriquecido com 5% de sangue ovino desfibrinado.Foi utilizada a técnica de difusão em discos para a avaliação de resistência aos antimicrobianos. Os resultados indicaram altas prevalências dos patógenos S. aureus (71,0%) e S. agalactiae (68,0%), com elevados níveis de resistência frente à polimixina B, penicilina G e ampicilina. O fenômeno da multirresistência foi observado a níveis elevados para ambos os patógenos.Os resultados demonstram que há falhas no controle da mastite contagiosa nos rebanhos estudados, apontando para a necessidade de medidas mais efetivas para o controle destes patógenos...

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Background: Bovine mastitis, a global disease that is responsible for large economic losses each year due to lower milkyield and reduced milk quality. In some countries, especially in China, Streptococcus agalactiae has become one of themost frequently detected pathogen. Antibiotic treatment and vaccine immunization are important strategies for the controlof infectious diseases. The main objective of the present study was to evaluate distribution of bovine mastitis pathogensand antimicrobial resistance of S. agalactiae, and contribute to the treatment of bovine mastitis.Materials, Methods & Results: Clinical mastitis samples (n= 1,122) were collected from 27 dairy farms located in 15different provinces of China during 2012-2018. The pathogens were identified by 16S rDNA method. Antimicrobial susceptibility was assessed by disc diffusion method. Molecular characteristics was distinguished based on PCR. The resultsshowed that the main pathogens were Streptococcus agalactiae (n= 324, 26.2%), Escherichia coli (n= 287, 23.2%), andStaphylococcus aureus (n= 131, 10.6%). The serotypes of Streptococcus agalactiae were serotype II (53.6%), Ia (44 %)and VII (1.2%), respectively. Streptococcus agalactiae were resistant to kanamycin (93.8%), gentamicin (49.4%), vancomycin (49.4%), tetracycline (35.8%), clindamycin (34.6%) and erythromycin (32.1%). The main resistance genes wereermA (53.1%) and ermB (85.2%). Resistance to erythromycin was attributed to the genes ermA (P < 0.05) and resistanceto tetracycline was attributed to the genes tetK, tetM, tetO (P < 0.01). The virulence genes scpB (81.4%), cyl (100%), glnA(76.6%), cfb (98.8%), hylB (98.8%), scaA (69.1%) were detected in almost all isolates.Discussion: In the present study, Streptococcus agalactiae, Escherichia coli and Staphylococcus aureus were the pathogens isolated most frequently from clinical mastitis. In the case of S. agalactiae, we performed capsular serotyping ofisolates...

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Bovine mastitis is the most frequent disease worldwide in dairy herds, causing high economic losses to producers and industry, as well as having implications for public health due to the zoonotic potential of some agents involved in its etiology and the increased risk of antimicrobial residues in milk and its derivatives. Considering the multifactorial aspect of this disease, knowledge of the agents involved in its etiology and their antimicrobial susceptibility profiles is very important. This study was conducted with 306 dairy herds from the Campo das Vertentes region, located in the south of Minas Gerais state, whose owners were milk suppliers to a dairy in the same region. The study involved approximately 34,000 dairy cows and covered an area of approximately 12,564 km2. In these herds, prevalence rates of Staphylococcus aureus and Streptococcus agalactiae and their relationship with bulk milk somatic cell counts (BMSCC), total bacterial counts (TBC), and daily production were evaluated. In addition, analyses of resistance of these pathogens to the antimicrobials most commonly used in the treatment of mastitis in dairy herds were performed. Microbiological analyses of milk samples from collect from bulk milk tanks were performed aiming to evaluate the prevalence of S. aureus and S. agalactiae. For these proposes, the modified Baird-Parker Agar medium was used for detection of S. aureus and the modified Edwards Agar medium, enriched with 5% defibrinated sheep blood, was used for detection of S. agalactiae. The disc diffusion technique was applied to evaluate antimicrobial resistance. Results show high prevalence rates of S. aureus (70.3%) and S. agalactiae (67.0%) in the dairy farms studied, with 47.71% of the herds showing both pathogens. Associations between BMSCC and the presence of pathogens S. aureus and S. agalactiae and between TBC and the presence of S. agalactiae were observed, demonstrating the influence of these pathogens in milk quality. No variation was observed in the distribution of S. aureus and S. agalactiae in the different strata of daily production. High levels of resistance and multi-resistance were observed among the pathogens S. aureus and S. agalactiae. The results indicate the need for more effective control measures for mastitis caused by S. aureus and S. agalactiae in the dairy herds of the region studied and more judicious use of antimicrobials in order to reduce the problem of resistance to them.(AU)

A mastite bovina é a doença de maior frequência em rebanhos leiteiros em nível mundial, acarretando grandes prejuízos econômicos aos produtores e à indústria. Além disso, esta enfermidade tem implicações na saúde pública, devido ao potencial zoonótico de alguns agentes envolvidos em sua etiologia e por aumentar os riscos de resíduos de antimicrobianos no leite e derivados. Considerando o aspecto multifatorial da mastite bovina, o conhecimento dos agentes envolvidos em sua etiologia e os perfis de suscetibilidade aos antibióticos é de suma importância. O estudo envolveu 306 fazendas de leite da região de Campo das Vertentes, localizada no sul de Minas Gerais, cujos proprietários eram fornecedores de leite para um laticínio da região, totalizando aproximadamente 34.000 animais e abrangendo uma área aproximada 12.564 km2. Nestes rebanhos, avaliaram-se a prevalência de Staphylococcus aureus e Streptococcus agalactiae e a relação destes agentes com os índices de contagem de células somáticas do leite do tanque de expansão (CCSt), contagem bacteriana total (CBT) e produção diária. Analisou-se também a resistência destes patógenos aos antimicrobianos mais comumente utilizados no tratamento da mastite em rebanhos leiteiros. Análises microbiológicas de amostras de leite dos tanques de expansão foram realizadas para se determinar as prevalências dos patógenos S. aureus e S. agalactiae. Para a detecção de S. aureus, utilizou-se o meio seletivo Ágar Baird-Parker modificado e para a detecção de S. agalactiae, o meio seletivo Ágar Edwards modificado, enriquecido com 5% de sangue ovino desfibrinado. Foi utilizada a técnica de difusão em discos para a avaliação de resistência aos antimicrobianos. Os resultados apontaram altas prevalências de S. aureus (70,3%) e de S. agalactiae (67,0%), com 47,71% dos rebanhos examinados apresentando ambos os agentes. Verificaram-se associações entre a CCSt e a presença dos patógenos S. aureus e S. agalactiae, e também entre a CBT e a presença de S. agalactiae, demonstrando a interferência negativa destes patógenos nestes quesitos de qualidade. Não se observaram variações nas distribuições dos patógenos S. aureus e nem S. agalactiae em função da produção diária das propriedades estudadas. Níveis elevados de resistência e de multirresistência foram observados para ambos os agentes. Os resultados apontam a necessidade de medidas mais efetivas de controle para S. aureus e S. agalactiae nos rebanhos da região estudada e do uso mais criterioso dos antimicrobianos, visando minimizar o problema da resistência aos mesmos.(AU)

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The objective of this study was to evaluate the effect of vaccination against Streptococcus agalactiae on the morphometry, bromatology, and sensory traits of tilapia bred in net-tanks. Tilapia juveniles were bred in net-tanks separated into two groups: vaccinated and unvaccinated fish. Ten fish from each group were collected from different weight classes: 400-500, 501-600, 601-700, and 701-800 g. Measurements and weighing of whole fish and fillets did not show significant differences between the two groups. Fillet thickness was significantly greater in unvaccinated fish in the weight range of 601-700 g. Significant differences were not found in protein, lipid, ash, or moisture content between the two groups in any of the weight classes studied. Significant preferences between unvaccinated and vaccinated fish were not observed in the paired preference test, regardless of weight class. The hedonic scale analysis showed that tasters moderately liked the tilapia fillets regardless of weight class or whether the fish had been vaccinated. In net-tank breeding experimental conditions, vaccinated and unvaccinated Nile tilapia weighing between 400 and 800 g showed similar morphometric, bromatological, and sensory characteristics.

O objetivo desse trabalho foi avaliar o efeito da vacinação contra Streptococcus agalactiae na morfometria, bromatologia e análise sensorial de tilápia criada em tanque-rede. Juvenis de tilápia foram criadas em tanque-rede separados em dois grupos: peixes vacinados e não vacinados. Foram coletados 10 peixes de cada grupo em diferentes classes de peso: 400-500, 501-600, 601-700 e 701-800 g. As medidas e pesagens do peixe inteiro e do filé não apresentaram diferença significativa entre os dois grupos. A espessura do filé foi significativamente maior nos peixes não vacinados na faixa de 601-700 g. Não teve diferença significativa nos valores de proteína, lipídio, cinza e umidade entre os peixes dos dois grupos em nenhuma das classes de peso estudada. Para o teste pareado preferência, não houve uma preferência significativa entre peixes não vacinados e vacinados independente da classe de peso analisada. A análise de escala hedônica apontou que os provadores gostaram moderadamente do filé de tilápia independente da classe de peso e de ter sido vacinado ou não. Nas condições experimentais de criação em tanques-rede, tilápias do Nilo vacinados e não vacinados, com peso entre 400 e 800 g, apresentaram características morfométricas, bromatológicas e sensoriais semelhantes.

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Uma qualidade desejada do antimicrobiano é que este apresente eficácia na menor concentração possível do princípio ativo. Devemos atentarmos que quanto menor a concentração do fármaco a ser utilizado menor será resíduo ambiental. Como fase inicial do estudo de eficácia há necessidade de verificar a sensibilidade ao princípio ativo. Neste sentido, utilizou-se 10 concentrações do fármaco amoxicilina com redução progressiva da concentração na razão de 2: 11,98; 5,99; 2,99; 1,49; 0,74; 0,37; 0,18; 0,09, 0,045 e 0,022 μg.mL

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This study evalueted the prevalence of Staphylococcus aureus, Streptococcus agalactiae and Escherichia coli in milk samples from 257 goats (513 half-udders) and ten bulk tanks, from ten dairy goat farms of São Paulo State, Brazil, by multiplex-PCR. The samples were screened by microbiological culture (gold-standard), and tested by different multiplex-PCR protocols for the detection of each bacterium. A total of 178 half-udders resulted positive by microbiological culture, with coagulase-negative staphylococci (70%), S. aureus (13.5%), S. intermedius (7.9%), and Enterobacteriaceae (4%) the prevalent pathogens. In other way, multiplex-PCR detected 173 pathogens in 151/523 (28.9%; CI95% 25.2-32.9%) milk samples 144/513 (28.1%) half-udders and 7/10 (70%) bulk tanks, with E. coli (86/162, 51.9%) and S. aureus (50/162, 30.9%) the prevalent ones in half-udders, and S. aureus (6/10, 60%) and E. coli (4/5, 36.4%) in bulk tanks. Multiplex-PCR showed a high performance for the detection of three bacteria at a time in mastitic goat milk direct from half-udders or bulk tanks. Thus, this multiplex-PCR protocol proved to be an adequate tool for the identification of the most common mastitis pathogens, independent of their phenotypic characteristics in the diagnosis of clinical mastitis in goats, allowing a continuous and better vigilance and monitoring the herd, being included in quality programs.(AU)

Este estudo avaliou por multiplex-PCR a prevalência de Staphylococcus aureus, Streptococcus agalactiae e Escherichia coli em amostras de leite de 257 caprinos (513 tetos) e dez tanques de expansão, em dez fazendas leiteiras do estado de São Paulo, Brasil. As amostras foram triadas por cultura microbiológica (padrão-uro) e testadas por diferentes protocolos multiplex-PCR para a detecção de cada bactéria. Um total de 178 amostras de leite foram positivos na cultura microbiológica, com estafilococos coagulase-negativos (70%), S. aureus (13,5%), S. intermedius (7,9%) e Enterobacteriaceae (4%) como patógenos prevalentes. Por outro lado, a PCR multiplex detectou 173 patógenos em 151/523 (28,9%, IC95% 25,2-32,9%) amostras de leite, 144/513 (28,1%) amostras de tetos e 7/10 (70%) em tanques de expansão, E. coli (86/162, 51,9%) e S. aureus (50/162, 30,9%) foram identificados nas amostras de tetos e S. aureus (6/10, 60%) e E. coli (4/5, 36,4%) em tanques expansão. Multiplex-PCR mostrou um alto desempenho para a detecção das três bactérias em leite de cabra com mastite ou em tanques de expansão. Dessa forma, este protocolo multiplex-PCR provou ser uma ferramenta adequada para a identificação dos patógenos mais comuns da mastite, independentemente de suas características fenotípicas no diagnóstico de mastite clínica em caprinos, permitindo uma vigilância contínua e melhor acompanhamento do rebanho, sendo incluído em programas de qualidade.(AU)

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La leche es un elemento esencial para todos los grupos de edad. La mastitis es un proceso infeccioso con múltiples etiologías, que implican microorganismos ambientales y contagiosos. Los estreptococos que pertenece a un grupo de microorganismos de diferentes tipos y grados de patogenicidad y virulencia. Streptococcus agalactiae es un patógeno contagiosa, por lo tanto, adaptado para la supervivencia en la glándula mamaria interna. Los estreptococos del ambiente se consideran oportunistas, porque una vez que invaden la glándula mamaria no pueden adaptarse en su interior, provocando una respuesta inflamatoria inmediata con la infección a corto plazo. A pesar de la diferenciación de los patógenos contagiosos y ambientales es necesario evaluar otros factores tales como el perfil de la ocurrencia de CCS, la aparición de la mastitis clínica, la investigación de factores de riesgo, y los resultados de las pruebas microbiológicas con la caracterización de los agentes causantes. Las muestras de leche positivas en California Mastitis Test (n = 123) fueron cultivadas en medios de agar sangre y agar MacConkey durante 72 horas a 37o C con la observación cada 24 horas en las características fenotípicas de las colonias, tales como; tamaño, la producción de pigmentos, la hemólisis, como gramo y prueba de catalasa para diferenciar entre Staphylococcus y Streptococcus. Las colonias sospechosas [...]

Milk is an essential food for all age groups. Mastitis is an infectious process with multiple etiologies, involving environmental and contagious microorganisms. Streptococci belonging to a group of micro-organisms of different types and degrees of pathogenicity and virulence. Streptococcus agalactiae is a contagious pathogen, therefore, adapted to survival in internal mammary gland. Environmental Streptococcusare considered opportunistic because once they invade the mammary gland, they cannot adapt inside it, causing an immediate inflammatory response with short-term infection. Despite the differentiation of contagious and environmental pathogens it is necessary to evaluate other factors such as profile of the occurrence of CCS, occurrence of clinical mastitis, research of risk factors, and the results of microbiological tests with the characterization of the causative agents. Milk samples positive in California Mastitis Test(n = 123) were cultured in blood agar media and MacConkey agar media for 72 hours, at 37oC, with observation every 24 hours in the phenotypic characteristics of the colonies such as size, pigment production , hemolysis, such as Gram and catalase test to differentiate between Staphylococcus and Streptococcus. Suspect colonies were picked in BHI for biochemical tests, CAMP test, sodium hippurate hydrolysis and hydrolysis of esculin. They were isolated 36 [...]

O leite é um alimento imprescindível para todas as faixas etárias. A mastite é um processo infeccioso de múltipla etiologia, com envolvimento de micro-organismos contagiosos e ambientais. Os estreptococos pertencem a um grupo de patógenos com diferentes espécies, e graus de patogenicidade e virulência. Streptococcus agalactiaeé um patógeno contagioso, portanto, adaptado à sobrevivência interna na glândula mamária. Os estreptococcos ambientais são considerados oportunistas, pois, após invasão da glândula mamária, não se adaptam em seu interior, causando resposta inflamatória imediata com infecção de curta duração. Apesar da diferenciação entre patógenos contagiosos e ambientais, é necessária a avaliação de outros fatores como: perfil da ocorrência da CCS, ocorrência de mastite clínica, pesquisa dos fatores de risco, e os resultados dos exames microbiológicos com a caracterização dos agentes causais. Amostras de leite com CMT positivo (n=123) foram cultivadas em ágar sangue bovino a 5% e ágar MacConkey por até 72 horas, a 37oC, com observação a cada 24 horas das características fenotípicas das colônias como tamanho, produção de pigmento, hemólise bem como a realização de Gram e prova de catalase para diferenciação entre os gêneros Staphylococcus e Streptococcus. Colônias suspeitas foram repicadas em BHI para provas bioquímicas, CAMP teste, hidrólise do hipurato de sódio e [...]

Resumo

Abstract Streptococcus agalactiae is one of the most common pathogens leading to mastitis in dairy herds worldwide; consequently, the pathogen causes major economic losses for affected farmers. In this study, multilocus sequence typing (MLST), genotypic capsular typing by multiplex polymerase chain reaction (PCR), and virulence gene detection were performed to address the molecular epidemiology of 59 bovine (mastitis) S. agalactiae isolates from 36 dairy farms located in the largest milk-producing mesoregions in Brazil (Minas Gerais, São Paulo, Paraná, and Pernambuco). We screened for the virulence genes bac, bca, bibA, cfb, hylB, fbsA, fbsB, PI-1, PI-2a, and PI-2b, which are associated with adhesion, invasion, tissue damage, and/or immune evasion. Furthermore, five capsular types were identified (Ia, Ib, II, III, and IV), and a few isolates were classified as non-typeable (NT). MLST revealed the following eight sequence types (STs): ST-61, ST-67, ST-103, ST-146, ST-226, ST-314, and ST-570, which were clustered in five clonal complexes (CC64, CC67, CC103, CC17, and CC314), and one singleton, ST-91. Among the virulence genes screened in this study, PI-2b, fbsB, cfb, and hylB appear to be the most important during mastitis development in cattle. Collectively, these results establish the molecular epidemiology of S. agalactiae isolated from cows in Brazilian herds. We believe that the data presented here provide a foundation for future research aimed at developing and implementing new preventative and treatment options for mastitis caused by S. agalactiae.

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Streptococcus agalactiae is one of the main causative agents of bovine mastitis and is associated with several economic losses for producers. Few studies have evaluated antimicrobial susceptibility and the prevalence of genetic resistance determinants among isolates of this bacterium from Brazilian dairy cattle. This work aimed to evaluate the frequency of the antimicrobial resistance genes ermA, ermB, mefA, tetO, tetM, aphA3, and aad-6, and in vitro susceptibility to the antimicrobials amikacin, erythromycin, clindamycin, tetracycline, gentamicin, penicillin, ceftiofur, and cefalotin, and the associations between resistance genotypes and phenotypes among 118 S. agalactiae isolates obtained from mastitic cows in Brazilian dairy herds. Of the resistance genes examined, ermB was found in 19 isolates (16.1%), tetO in 23 (19.5%), and tetM in 24 (20.3%). The genes ermA, mefA, aphA3, and aad-6 were not identified. There was an association between the presence of genes ermB, tetM, and tetO and phenotypic resistance to erythromycin, clindamycin, and tetracycline. Rates of resistance to the tested antibiotics varied, as follows: erythromycin (19.5%), tetracycline (35.6%), gentamicin (9.3%), clindamycin (20.3%), penicillin (3.4%), and amikacin (38.1%); conversely, all isolates were susceptible to ceftiofur and cefalotin. Antimicrobial resistance testing facilitates the treatment decision process, allowing the most judicious choice of antibiotics. Moreover, it enables regional and temporal monitoring of the resistance dynamics of this pathogen of high importance to human and animal health.

Streptococcus agalactiae é um dos principais agentes causadores de mastite em bovinos e de consequentes perdas econômicas aos produtores. Poucos estudos que avaliaram a susceptibilidade a antimicrobianos e a presença de determinantes genéticos de resistência para este agente em bovinos leiteiros do Brasil. Este trabalho teve por objetivo avaliar a frequência dos genes de resistência a antimicrobianos ermA, ermB, mefA, tetO, tetM, aphA3, aad-6, bem como a susceptibilidade in vitro aos antimicrobianos amicacina, eritromicina, clindamicina, tetraciclina, gentamicina, penicilina, ceftiofur e cefalotina, e as associações entre genótipos e fenótipos de resistência em 118 isolados de S. agalactiae provenientes de casos de mastite em rebanhos bovinos brasileiros. Dentre os genes de resistência pesquisados, ermB foi encontrado em 19 isolados (16,1%), tetO em 23 (19,5%) e tetM em 24 (20,3%). Os genes ermA, mefA, apha3 e aad6 não foram detectados. Verificou-se associação entre a presença dos genes ermB, tetM e tetO e os fenótipos de resistência à eritromicina, clindamicina e tetraciclina. Foram encontrados diferentes índices de resistência aos antibióticos testados: Eritromicina (19,5%), tetraciclina (35,6%), gentamicina (9,3%), clindamicina (20,3%), penicilina (3,4%) e amicacina (38,1%). Todos os isolados foram susceptíveis ceftiofur e cefalotina. Os testes de resistência aos antimicrobianos auxiliam na tomadade decisões relacionadas aos tratamentos, permitindo a escolha mais criteriosa dos antimicrobianos e oacompanhamento espaço-temporal da dinâmica de resistência para este patógeno tão relevante na saúdehumana e animal.

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A bactéria Streptococcus agalactiae é um potente agente causador de surtos por doenças bacterianas em peixes. O estresse provocado pelo manejo zootécnico e pela má qualidade ambiental torna a tilápia susceptível às infecções por essa bactéria. O objetivo do presente trabalho foi avaliar a resistência de tilápias-do-nilo imunizadas com soro hiperimune anti-S. agalactiae, posteriormente desafiadas com cepa homóloga da mesma bactéria. Após determinação da DL 50 de S. agalactiae, 36 tilápias foram distribuídas em quatro aquários, dois para o grupo controle e dois para inoculação celomática para produção de anticorpos anti-S. agalactiae. No 21° e 28° dias, foi coletado sangue para obtenção de soro hiperimune utilizado na transferência passiva. Em seguida, 30 tilápias foram distribuídas em três aquários e submetidas a três tratamentos: GI: controle; GII: imunizadas com o soro inativado; GIII: imunizadas com soro ativo...

The Streptococcus agalactiae bacteria is a potent agent which causes outbreaks of bacterial diseases in fish. The stress caused by management and poor environmental quality makes tilapia susceptible to infections, including by bacterium. The aim of this study was to evaluate the resistance of the Nile tilapia immunized with hyperimmune serum against S. agalactiae subsequently challenged with homologous strain of the same bacteria. After determining the DL 50 of S. agalactiae, 36 tilapias were distributed in 4 aquariums, 2 for the control group and 2 for the group via coelomic, inoculated with the DL 50 for anti-S. agalactiae antibodies production. On the 21st and 28th day blood was collected for the obtainment of hiperimmune serum used in passive transference. Then, 30 tilapias were distributed in 3 aquariums submitted to 3 treatments (GI: control; GII: immunized with inactivated-serum; GIII: immunized with non-inactivated serum)...

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Bovine mastitis is the inflammation of the mammary gland which causes great losses in milk production. Therefore, the objective of study was to evaluate the prevalence, causative agents and factors related to management practices and production characteristics that influenced clinical mastitis in 44 dairy farms of Viçosa-MG. In 617 cows, clinical mastitis was determined by clinical examination of the mammary gland and mug test. Milk samples from mammary quarters with clinical mastitis were subjected to microbiological tests. A structured questionnaire was used to determine the risk factors for mastitis. The prevalence of clinical mastitis in cattle was 4.8%. The etiological agents more isolated were Staphylococcus aureus (29.73%), Streptococcus agalactiae (16.21%), Escherichia coli (13.51%) and yeast (13.51%). The high number of lactating animals per property, lack of herd sanity, poor hygiene of the environment and inappropriate practices of dry cow treatment had a significant association (p 0.05) with the prevalence of clinical mastitis. Therefore, environmental and animals management should be reviewed to help to reduce cases of mastitis in cattle of Viçosa (MG)

A mastite bovina é a inflamação da glândula mamária que ocasiona grandes perdas na produção leiteira. Portanto, objetivou-se avaliar a prevalência, agentes causadores e fatores relacionados às práticas de manejo e características de produção determinantes de mastite clínica em 44 propriedades leiteiras de Viçosa MG. Em 617 vacas, a mastite clínica foi determinada por meio de exame clínico da glândula mamária e teste da caneca. Amostras de leite dos quartos mamários com mastite clínica foram submetidas à exames microbiológicos. Um questionário estruturado foi aplicado para determinar os fatores de risco à mastite. A prevalência de mastite clínica nos rebanhos foi de 4,8%. Os agentes etiológicos mais isolados foram Staphylococcus aureus (29,73%), Streptococcus agalactiae (16,21%), Escherichia coli (13,51%) e Leveduras (13,51%). O grande número de animais em lactação por propriedade, falta de sanidade do rebanho, falta de higiene do ambiente e práticas inadequadas de tratamento de vaca seca tiveram associação significativa (p 0,05) com a prevalência de mastite clínica. Portanto, os manejos ambiental e animal devem ser revistos para auxiliar na diminuição de casos de mastite em rebanhos de Viçosa (MG)

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O objetivo desta revisão sistemática foi avaliar a eficácia das vacinas descritas na literatura para infecções causadas por S. agalactiae em tilápia. Uma busca eletrônica foi realizada utilizando o “Web of Science”, “Scopus”, “PubMed” e “CAB bancos de dados diretos”, abrangendo todos os artigos publicados até março de 2014. O delineamento experimental, a qualidade metodológica, tipo de vacina e os resultados dos estudos foram analisados. Foram avaliados protocolos de vacinação com base na administração intraperitoneal, banho de imersão e de alimentação. Esta revisão sistemática sugere que vacinas administradas por via intraperitoneal apresenta maior eficácia contra a infecção por S. agalactiae.

The aim of this systematic review was to evaluate the efficacy of the vaccines described in the literature for infections caused by S. agalactiae in tilapia .An electronic search was made of the "Web of Science", "Scopus", "PubMed" and "CAB direct" databasis in February and March 2014. The experimental design, methodological quality, type of vaccine and results of the studies were analyzed. Were evaluated vaccination protocols based on intraperitoneal routes of administration, immersion bath and feed. This systematic review suggests that vaccines administered intraperitoneally showed better efficacy against infection by S. agalactiae.

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Environmental changes affect fish homeostasis, turning them more susceptible to diseases. In Brazil, outbreaks of Streptococcus agalactiae infection have been reported in Nile tilapia when they are outside of their thermal comfort zone. This investigation evaluated mortality rate and which were the most infected organs at temperatures that naturally occurred in southern of Brazil. Forty Nile tilapia (Oreochromis niloticus) were infected with S. agalactiae and distributed in four groups (n=10) and each group was exposed to a different temperature: G1: 24°C, G2: 26°C, G3: 28°C, and G4: 32°C. Fish were monitored for 10 days. In this period, fish that presented irreversible clinical signs were sacrificed and samples of brain, liver, and kidney were collected for bacteriological and molecular analysis. Signs compatible with a streptococcal infection were observed in all groups. Highest mortality rates occurred at 24°C and 32°C. The brain was the most affected organ with the highest percentage of isolation of S. agalactiae by both methods of diagnosis. The results suggest that, as in mammals, temperatures that are further away from the comfort zone influence fish homeostasis, increasing susceptibility to bacterial infections.

Mudanças ambientais afetam a homeostase dos peixes, tornando-os mais suscetíveis a doenças. No Brasil, têm sido relatados surtos de infecção por Streptococcus agalactiae em tilápia do Nilo, principalmente quando se encontram fora da zona de conforto térmico. No presente trabalho, foi avaliada a taxa de mortalidade e determinado quais foram os órgãos mais afetados por essa bactéria em temperaturas que ocorrem naturalmente no Sul do Brasil. Quarenta tilápias-do-nilo (Oreochromis niloticus) foram infectadas por Streptococcus agalactiae e distribuídas em quatro grupos (n = 10), cada um deles submetidos a diferentes temperaturas: G1: 24°C, G2: 26°C, G3: 28°C e G4: 32°C. Os peixes foram monitorados durante 10 dias. Os peixes com sinais clínicos irreversíveis foram sacrificados e coletadas amostras de cérebro, fígado e rins para análise bacteriológica e molecular. Foram observados sinais compatíveis com infecção estreptocócica em todos os grupos. A taxa de mortalidade mais elevada ocorreu nos grupos mantidos nas temperaturas de 24°C e 32°C. O cérebro foi o órgão mais afetado, com a maior percentagem de isolamento de S. agalactiae pelos dois métodos de diagnóstico. Os resultados sugerem que, tal como nos mamíferos, temperaturas que estão mais afastadas da zona de conforto afetam significativamente a homeostase dos peixes, aumentando a sua susceptibilidade para infecções bacterianas.

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Streptococcus agalactiae (GBS) is a major source of human perinatal diseases and bovine mastitis. Erythromycin (Ery) and tetracycline (Tet) are usually employed for preventing human and bovine infections although resistance to such agents has become common among GBS strains. Ery and Tet resistance genes are usually carried by conjugative transposons (CTns) belonging to the Tn916 family, but their presence and transferability among GBS strains have not been totally explored. Here we evaluated the presence of Tet resistance genes (tetM and tetO) and CTns among Ery-resistant (Ery-R) and Ery-susceptible (Ery-S) GBS strains isolated from human and bovine sources; and analyzed the ability for transferring resistance determinants between strains from both origins. Tet resistance and int-Tn genes were more common among Ery-R when compared to Ery-S isolates. Conjugative transfer of all resistance genes detected among the GBS strains included in this study (ermA, ermB, mef, tetM and tetO), in frequencies between 1.10-7 and 9.10-7, was possible from bovine donor strains to human recipient strain, but not the other way around. This is, to our knowledge, the first report of in vitro conjugation of Ery and Tet resistance genes among GBS strains recovered from different hosts.