Real-time polymerase chain reaction for detection and enumeration of Staphylococcus aureus and Streptococccus agalactiae using different milk samplings

The objective of the present study was to evaluate the qPCR for detection and enumeration of Staphylococcus aureus and Streptococcus agalactiae using different milk samplings in comparison to the conventional microbiology. Four dairy herds with a history of subclinical mastitis caused by S. aureus and S. agalactiae were selected. Sampling approach included milk samples from bulk tank (BT), cow level (composite samples, CO), and mammary quarter level (MQ) from 785 lactating cows. Three consecutive monthly milk samplings were carried out, totaling 3347 MQ milk samples, 912 CO, and 12 from BT. All collected milk samples were subjected to conventional microbiology and qPCR for detection and enumeration of S. aureus and S. agalactiae. The qPCR showed 71.5% of diagnostic sensitivity for S. aureus isolated from MQ milk samples, 71.8% for CO, and 50% for BT milk samples compared with conventional microbiology methodology. Taken together, the diagnostic sensitivity for S. agalactiae isolated from MQ milk samples was 90.2, 87.7 for CO, and 90.9% for BT milk samples. In general, the qPCR methodology enabled the detection of S. aureus and S. agalactiae, regardless of the type of milk sampling. The direct use of milk samples to estimate the counting of S. aureus by qPCR demonstrated lower sensitivity than the counting of S. agalactiae, which can be explained by the pathogen infection dynamics and differences in milk sample type.

Thymomodulin enhances vaccination responses against Streptococcus agalactiae in Nile tilapia / Timomodulina melhora as respostas vacinais contra Streptococcus agalactiae em tilápia-do-Nilo

Streptococcosis caused by Streptococcus agalactiae is a major economic problem for Nile tilapia Oreochromis niloticus production worldwide. Inactivated vaccines are considered an efficient method for controlling streptococcosis. However, during the vaccination process, stress during fish handling could affect the immune response. Immunomodulators, such as thymomodulin, act on the immune system and can improve vaccination responses. Thus, the aim of this study was to assess the immunomodulatory effect of thymomodulin in O. niloticus vaccinated against S. agalactiae. For this, fish were distributed in a factorial design (2x2x6), corresponding to two levels of thymomodulin supplementation (0.0 and 0.3%), two treatments (sterile phosphate buffered saline and inactivated S. agalactiae vaccine). Initially, fish received thymomodulin supplementation for 30 days. Next, fish were vaccinated by injection intraperitoneal (i.p.) of heat inactivated S. agalactiae vaccine. 15 days after vaccination, all fish were challenged i.p. with S. agalactiae and blood samples were collected at 7, 14, 21 days post infection (DPI).Results revealed that fish supplemented with thymomodulin vaccinated or not developed better protection against S. agalactiae than vaccinated fish without thymomodulin. Furthermore, fish vaccinated and supplemented with thymomodulin presented high levels of antibodies after 14 and21 DPI, suggesting that thymomodulin can promote the immune response in Nile tilapia.

A estreptococose causada pelo Streptococcus agalactiae é um grande problema econômico para a produção de tilápia-do-nilo Oreochromis niloticus em todo o mundo. As vacinas inativadas são consideradas um método eficiente para o controle da estreptococose. No entanto, durante o processo de vacinação o estresse durante o manejo dos peixes pode afetar sua resposta imune. Imunomoduladores como a timomodulina, atuam no sistema imunológico e podem melhorar as respostas vacinais. Assim, o objetivo deste estudo foi avaliar o efeito imunomodulador da timomodulina em O. niloticus vacinado contra S. agalactiae. Para isso, os peixes foram distribuídos em esquema fatorial (2x2x6), correspondendo a dois níveis de suplementação de timodulina (0,0 e 0,3%), dois tratamentos (solução salina tamponada com fosfato estéril e vacina S. agalactiae inativada). Inicialmente, os peixes receberam suplementação de timomodulina por 30 dias. Em seguida, os peixes foram vacinados por via intraperitoneal (i.p.) da vacina de S. agalactiae inativada pelo calor. 15 dias após a vacinação, todos os peixes foram desafiados i.p. com S. agalactiae e amostras de sangue foram coletadas aos 7, 14, 21 dias após a infecção (DPI). Os resultados revelaram que os peixes suplementados com timomodulina vacinados ou não desenvolveram melhor proteção contra S. agalactiae do que os peixes vacinados sem timomodulina. Além disso, os peixes vacinados e suplementados com timomodulina apresentaram altos níveis de anticorpos após 14 e 21 DPI, sugerindo que a timomodulina pode promover a resposta imune em tilápia-do-nilo.

Lysozyme activity as an indicator of innate immunity of tilapia (Oreochromis niloticus) when challenged with LPS and Streptococcus agalactiae

The objective of this study was to fully describe the protocol with standardized modifications and evaluate the lysozyme activity, an indicator of innate immunity in tilapia, to compare lipopolysaccharide (LPS) with Streptococcus agalactiae injections. Lysozyme was determined in serum using the turbidimetric method, in which lysozyme activity was evaluated by Micrococcus lysodeikticus lysis, with modifications for microplate assay. The experiment was conducted in a completely randomized design. Juvenile tilapia was divided in the following six treatments: challenged with phosphate buffer PBS (control) and 100, 250, 500, and 600 µg kg−1 LPS and S. agalactiae. All treatments were challenged for 72 h and seven days and then sampled to determine lysozyme activity. After 72 h or seven days, concentrations of LPS promoted changes in lysozyme production, either lesser or equal, depending on concentration when compared with fish injected with S. agalactiae. It was possible to standardize the analysis and determine that the treatment with LPS promotes immunomodulation at a concentration of 250 µg kg−1 LPS, this response being similar to challenge with S. agalactiae.

Antimicrobial properties of heterocyclic compounds against clinical mastitis isolates / Propriedades antimicrobianas de compostos heterocíclicos contra isolados de mastite clínica

Mastitis causes significant economic losses to the dairy cattle industry. The present study aimed to evaluate the antibacterial properties of 39 heterocyclic derivatives (1,3-thiazoles and 4-thiazolidinones) against clinical mastitis isolates from dairy cows. Milk samples were collected from cows with clinical mastitis and the bacterial species were identified by PCR. Antibacterial activity was assessed using the broth microdilution method. First, 39 heterocyclic compounds were tested against four bacterial isolates (Staphylococcus aureus, Streptococcus agalactiae, Corynebacterium bovis and Escherichia coli) randomly chosen from those recovered from the milk samples (Study 1). Subsequently, the compounds with the strongest antibacterial activity were tested against all the bacterial isolates recovered from the milk samples (Study 2). 1,3-thiazoles showed the strongest antibacterial activity, specially compounds 30 and 38, which also showed bactericidal properties according to their minimal inhibitory concentration (MIC) and minimal bactericidal concentration (MBC) values. Corynebacterium spp. and Enterobacteriaceae isolates were the most susceptible to compounds 30 and 38. Compounds 30 and 38 are promising targets for new antimicrobial agents.(AU)

A mastite causa significativas perdas econômicas à indústria leiteira bovina. O presente estudo teve como objetivo avaliar as propriedades antibacterianas de 39 derivados heterocíclicos (1,3-tiazóis e 4-tiazolidinonas) contra isolados clínicos de mastite em vacas leiteiras. Amostras de leite foram coletadas de vacas com mastite clínica e as espécies bacterianas isoladas foram identificadas por PCR. A atividade antibacteriana foi avaliada pelo método de microdiluição em caldo. Primeiramente, os 39 compostos heterocíclicos foram testados contra quatro isolados bacterianos (Staphylococcus aureus, Streptococcus agalactiae, Corynebacterium bovis e Escherichia coli) escolhidos aleatoriamente dentre os recuperados das amostras de leite (Estudo 1). Posteriormente, compostos com atividade antibacteriana mais forte foram testados contra todos os isolados bacterianos recuperados das amostras de leite (Estudo 2). Os compostos 1,3-tiazóis apresentaram a maior atividade antibacteriana, principalmente os compostos 30 e 38, que também apresentaram propriedades bactericidas de acordo com seus valores de concentração inibitória mínima (CIM) e concentração bactericida mínima (CBM). Os isolados Corynebacterium spp. e Enterobacteriaceae foram os mais suscetíveis aos compostos 30 e 38. Os compostos 30 e 38 mostraram-se promissores como novos agentes antimicrobianos.(AU)

Antimicrobial properties of heterocyclic compounds against clinical mastitis isolates / Propriedades antimicrobianas de compostos heterocíclicos contra isolados de mastite clínica

Mastitis causes significant economic losses to the dairy cattle industry. The present study aimed to evaluate the antibacterial properties of 39 heterocyclic derivatives (1,3-thiazoles and 4-thiazolidinones) against clinical mastitis isolates from dairy cows. Milk samples were collected from cows with clinical mastitis and the bacterial species were identified by PCR. Antibacterial activity was assessed using the broth microdilution method. First, 39 heterocyclic compounds were tested against four bacterial isolates (Staphylococcus aureus, Streptococcus agalactiae, Corynebacterium bovis and Escherichia coli) randomly chosen from those recovered from the milk samples (Study 1). Subsequently, the compounds with the strongest antibacterial activity were tested against all the bacterial isolates recovered from the milk samples (Study 2). 1,3-thiazoles showed the strongest antibacterial activity, specially compounds 30 and 38, which also showed bactericidal properties according to their minimal inhibitory concentration (MIC) and minimal bactericidal concentration (MBC) values. Corynebacterium spp. and Enterobacteriaceae isolates were the most susceptible to compounds 30 and 38. Compounds 30 and 38 are promising targets for new antimicrobial agents.(AU)

A mastite causa significativas perdas econômicas à indústria leiteira bovina. O presente estudo teve como objetivo avaliar as propriedades antibacterianas de 39 derivados heterocíclicos (1,3-tiazóis e 4-tiazolidinonas) contra isolados clínicos de mastite em vacas leiteiras. Amostras de leite foram coletadas de vacas com mastite clínica e as espécies bacterianas isoladas foram identificadas por PCR. A atividade antibacteriana foi avaliada pelo método de microdiluição em caldo. Primeiramente, os 39 compostos heterocíclicos foram testados contra quatro isolados bacterianos (Staphylococcus aureus, Streptococcus agalactiae, Corynebacterium bovis e Escherichia coli) escolhidos aleatoriamente dentre os recuperados das amostras de leite (Estudo 1). Posteriormente, compostos com atividade antibacteriana mais forte foram testados contra todos os isolados bacterianos recuperados das amostras de leite (Estudo 2). Os compostos 1,3-tiazóis apresentaram a maior atividade antibacteriana, principalmente os compostos 30 e 38, que também apresentaram propriedades bactericidas de acordo com seus valores de concentração inibitória mínima (CIM) e concentração bactericida mínima (CBM). Os isolados Corynebacterium spp. e Enterobacteriaceae foram os mais suscetíveis aos compostos 30 e 38. Os compostos 30 e 38 mostraram-se promissores como novos agentes antimicrobianos.(AU)

Antimicrobial susceptibility profile of Streptococcus agalactiaestrains isolated from bovine mastitis / Perfil de susceptibilidade a antimicrobianos em Streptococcus agalactiae isolados de mastite bovina

Bovine mastitis is the most important disease of dairy herds worldwide. Its main etiologic agents are bacteria, including Streptococcus agalactiae. The importance of this agent in bovine mastitis is because it is highly contagious and has a high impact on the occurrence of clinical mastitis cases and in the increase of the bulk milk somatic cell counts. The dry cow therapy and the treatment of the clinical mastitis cases stand out among the measures to control intramammary infections in cows. However, these strategies require knowledge about the antimicrobial susceptibility of the causal microorganisms. Thus, this study aimed to evaluate the antimicrobial susceptibility of 89 S. agalactiae strains isolated from bovine mastitis between the years 2004 and 2008 in dairy herds from Campo das Vertentes region, Minas Gerais State, Brazil. The disc diffusion technique was used and the antimicrobials currently used in mastitis therapy were tested. The isolates tested showed 100% susceptibility to chloramphenicol, ceftiofur, cefotaxime, enrofloxacin, and cefquinome. High frequencies of susceptibility (>95%) were also observed for the beta-lactams (penicillin G, ampicillin, and oxacillin), cephalosporins (cephalotin, ceftiofur, cefotaxime, cefoperazone, and cefquinome), florfenicol, gentamicin, lincomycin, nitrofurantoin, and sulfamethoprim. The strains showed high frequencies of resistance to neomycin (15.74%), and tetracycline (21.35%). Multidrug resistance was detected in 2.25% of the tested isolates. The results pointed to variations in the antimicrobial susceptibility profiles of the studied strains and the importance of the use of the susceptibility tests to determine the correct antimicrobial to be applied in the treatment of bovine mastitis caused by S. agalactiae. The high frequencies of resistance observed to some antimicrobials, such as neomycin and tetracycline, commonly used in the treatment of mastitis and other pathologies, highlighted the need for more judicious use of antimicrobials on dairy farms.(AU)

A mastite é a principal doença de bovinos leiteiros em todo o mundo e tem como principais agentes as bactérias, entre as quais Streptococcus agalactiae. Esse agente se destaca por ser altamente contagioso e pelos reflexos que causa na incidência de casos clínicos e no incremento da contagem de células somáticas do leite do tanque. Para o controle desta enfermidade, destacam-se a terapia de vacas secas e o tratamento de casos clínicos, medidas que requerem o conhecimento do perfil de sensibilidade dos agentes causais aos antimicrobianos. Este estudo teve como objetivo avaliar os perfis de suscetibilidade a antimicrobianos em 89 amostras de S. agalactiae isoladas de casos de mastite bovina em rebanhos da região de Campo das Vertentes, Minas Gerais, no período de 2004 a 2008. A técnica de difusão em discos foi utilizada e os antimicrobianos correntemente empregados na terapia da mastite foram testados. Os testes de suscetibilidade antimicrobiana apontaram 100% de susceptibilidade para cloranfenicol, ceftiofur, cefotaxima, enrofloxacina e cefquimona. Níveis elevados de susceptibilidade (>95%) foram observados para os betalactâmicos, florfenicol, gentamicina, lincomicina, nitrofurantoína e sulfametoprim. Altas frequências de resistência foram observadas para neomicina (15,74%) e tetraciclina (21,35%). Dois isolados multirresistentes (2,25%) foram encontrados. Os resultados apontaram variações nos perfis se suscetibilidade aos antimicrobianos na população analisada, indicando a importância do uso do antibiograma para a escolha mais criteriosa dos antibacterianos a serem utilizados para o tratamento da mastite bovina causada por S. agalactiae. As altas frequências de resistência detectadas para alguns dos antimicrobianos comumente utilizados para o tratamento de mastite e outras patologias, tais como a neomicina e a tetraciclina, salientam a necessidade de monitoramento permanente do perfil de suscetibilidade aos antimicrobianos e do uso mais criterioso dos mesmos nos rebanhos leiteiros.(AU)

Antimicrobial susceptibility profile of Streptococcus agalactiaestrains isolated from bovine mastitis / Perfil de susceptibilidade a antimicrobianos em Streptococcus agalactiae isolados de mastite bovina

Bovine mastitis is the most important disease of dairy herds worldwide. Its main etiologic agents are bacteria, including Streptococcus agalactiae. The importance of this agent in bovine mastitis is because it is highly contagious and has a high impact on the occurrence of clinical mastitis cases and in the increase of the bulk milk somatic cell counts. The dry cow therapy and the treatment of the clinical mastitis cases stand out among the measures to control intramammary infections in cows. However, these strategies require knowledge about the antimicrobial susceptibility of the causal microorganisms. Thus, this study aimed to evaluate the antimicrobial susceptibility of 89 S. agalactiae strains isolated from bovine mastitis between the years 2004 and 2008 in dairy herds from Campo das Vertentes region, Minas Gerais State, Brazil. The disc diffusion technique was used and the antimicrobials currently used in mastitis therapy were tested. The isolates tested showed 100% susceptibility to chloramphenicol, ceftiofur, cefotaxime, enrofloxacin, and cefquinome. High frequencies of susceptibility (>95%) were also observed for the beta-lactams (penicillin G, ampicillin, and oxacillin), cephalosporins (cephalotin, ceftiofur, cefotaxime, cefoperazone, and cefquinome), florfenicol, gentamicin, lincomycin, nitrofurantoin, and sulfamethoprim. The strains showed high frequencies of resistance to neomycin (15.74%), and tetracycline (21.35%). Multidrug resistance was detected in 2.25% of the tested isolates. The results pointed to variations in the antimicrobial susceptibility profiles of the studied strains and the importance of the use of the susceptibility tests to determine the correct antimicrobial to be applied in the treatment of bovine mastitis caused by S. agalactiae. The high frequencies of resistance observed to some antimicrobials, such as neomycin and tetracycline, commonly used in the treatment of mastitis and other pathologies, highlighted the need for more judicious use of antimicrobials on dairy farms.(AU)

A mastite é a principal doença de bovinos leiteiros em todo o mundo e tem como principais agentes as bactérias, entre as quais Streptococcus agalactiae. Esse agente se destaca por ser altamente contagioso e pelos reflexos que causa na incidência de casos clínicos e no incremento da contagem de células somáticas do leite do tanque. Para o controle desta enfermidade, destacam-se a terapia de vacas secas e o tratamento de casos clínicos, medidas que requerem o conhecimento do perfil de sensibilidade dos agentes causais aos antimicrobianos. Este estudo teve como objetivo avaliar os perfis de suscetibilidade a antimicrobianos em 89 amostras de S. agalactiae isoladas de casos de mastite bovina em rebanhos da região de Campo das Vertentes, Minas Gerais, no período de 2004 a 2008. A técnica de difusão em discos foi utilizada e os antimicrobianos correntemente empregados na terapia da mastite foram testados. Os testes de suscetibilidade antimicrobiana apontaram 100% de susceptibilidade para cloranfenicol, ceftiofur, cefotaxima, enrofloxacina e cefquimona. Níveis elevados de susceptibilidade (>95%) foram observados para os betalactâmicos, florfenicol, gentamicina, lincomicina, nitrofurantoína e sulfametoprim. Altas frequências de resistência foram observadas para neomicina (15,74%) e tetraciclina (21,35%). Dois isolados multirresistentes (2,25%) foram encontrados. Os resultados apontaram variações nos perfis se suscetibilidade aos antimicrobianos na população analisada, indicando a importância do uso do antibiograma para a escolha mais criteriosa dos antibacterianos a serem utilizados para o tratamento da mastite bovina causada por S. agalactiae. As altas frequências de resistência detectadas para alguns dos antimicrobianos comumente utilizados para o tratamento de mastite e outras patologias, tais como a neomicina e a tetraciclina, salientam a necessidade de monitoramento permanente do perfil de suscetibilidade aos antimicrobianos e do uso mais criterioso dos mesmos nos rebanhos leiteiros.(AU)

Evaluation of resistance against Streptococcus agalactiae in four farmed strains of Nile tilapia (Oreochromis niloticus) / Avaliação da resistência contra Streptococcus agalactiae em quatro linhagens cultivadas de tilápia do Nilo (Oreochromis niloticus)

Nile tilapia (Oreochromis niloticus) has always been considered more resistant to diseases compared to other fish species. However, in recent decades, this fish species has also been susceptible to many bacterial, fungal, parasitic, and nutritional diseases. In Brazil, streptococcosis is one of the main diseases that affect tilapia and has caused many economic losses. A resistance test was conducted with 93 tilapia of four varieties (UFLA strain and three commercial varieties: SC1, SC2, and SC3) to evaluate resistance to experimental inoculation with Streptococcus agalactiae. Each variety was distributed in five aquariums, with nine specimens of the same variety. Among the five aquariums, four housed fish were intraperitoneally inoculated with 10(7) CFU/fish of S. agalactiae and one aquarium harbored fish from the control group, which received 0.1 mL of sterile BHI (Brain Heart Infusion). Significant differences were observed in the survival rates accumulated at the end of the experiment (day 15), with values of 22, 36, 36, and 15% for SC1, SC2, SC3, and UFLA, respectively. The UFLA strain presented lower survival than other strains, which did not differ among the 15 days of challenge. These results demonstrate that there are animals with a better response to the resistance test than others.

A tilápia do Nilo (Oreochromis niloticus) sempre foi considerada mais resistente a doenças em comparação com outras espécies de peixes, porém, nas últimas décadas, essa espécie de peixe também foi suscetível a muitas doenças bacterianas, fúngicas, parasitárias e nutricionais. No Brasil, a estreptococose é uma das principais doenças que afetam a tilápia e causou muitas perdas econômicas. Um teste de resistência foi realizado com 93 tilápias de quatro variedades (linhagem UFLA e três variedades comerciais: SC1, SC2 e SC3) para avaliar a resistência à inoculação experimental com Streptococcus agalactiae. Cada variedade foi distribuída em cinco aquários, com nove espécimes da mesma variedade. Entre os cinco aquários, quatro peixes abrigados foram inoculados intraperitonealmente com 10(7) UFC / peixe de S. agalactiae e um aquário abrigou peixes do grupo controle, que receberam 0,1 mL de BHI estéril (infusão cardíaca cerebral). Diferenças significativas foram observadas nas taxas de sobrevivência acumuladas no final do experimento (dia 15), com valores de 22, 36, 36 e 15% para SC1, SC2, SC3 e UFLA, respectivamente. A linhagem UFLA apresentou menor sobrevivência que as demais, o que não diferiu entre os 15 dias de desafio. Esses resultados demonstram que existem animais com melhor resposta ao teste de resistência do que outros.

Evaluation of resistance against Streptococcus agalactiae in four farmed strains of Nile tilapia (Oreochromis niloticus) / Avaliação da resistência contra Streptococcus agalactiae em quatro linhagens cultivadas de tilápia do Nilo (Oreochromis niloticus)

Nile tilapia (Oreochromis niloticus) has always been considered more resistant to diseases compared to other fish species. However, in recent decades, this fish species has also been susceptible to many bacterial, fungal, parasitic, and nutritional diseases. In Brazil, streptococcosis is one of the main diseases that affect tilapia and has caused many economic losses. A resistance test was conducted with 93 tilapia of four varieties (UFLA strain and three commercial varieties: SC1, SC2, and SC3) to evaluate resistance to experimental inoculation with Streptococcus agalactiae. Each variety was distributed in five aquariums, with nine specimens of the same variety. Among the five aquariums, four housed fish were intraperitoneally inoculated with 10(7) CFU/fish of S. agalactiae and one aquarium harbored fish from the control group, which received 0.1 mL of sterile BHI (Brain Heart Infusion). Significant differences were observed in the survival rates accumulated at the end of the experiment (day 15), with values of 22, 36, 36, and 15% for SC1, SC2, SC3, and UFLA, respectively. The UFLA strain presented lower survival than other strains, which did not differ among the 15 days of challenge. These results demonstrate that there are animals with a better response to the resistance test than others.(AU)

A tilápia do Nilo (Oreochromis niloticus) sempre foi considerada mais resistente a doenças em comparação com outras espécies de peixes, porém, nas últimas décadas, essa espécie de peixe também foi suscetível a muitas doenças bacterianas, fúngicas, parasitárias e nutricionais. No Brasil, a estreptococose é uma das principais doenças que afetam a tilápia e causou muitas perdas econômicas. Um teste de resistência foi realizado com 93 tilápias de quatro variedades (linhagem UFLA e três variedades comerciais: SC1, SC2 e SC3) para avaliar a resistência à inoculação experimental com Streptococcus agalactiae. Cada variedade foi distribuída em cinco aquários, com nove espécimes da mesma variedade. Entre os cinco aquários, quatro peixes abrigados foram inoculados intraperitonealmente com 10(7) UFC / peixe de S. agalactiae e um aquário abrigou peixes do grupo controle, que receberam 0,1 mL de BHI estéril (infusão cardíaca cerebral). Diferenças significativas foram observadas nas taxas de sobrevivência acumuladas no final do experimento (dia 15), com valores de 22, 36, 36 e 15% para SC1, SC2, SC3 e UFLA, respectivamente. A linhagem UFLA apresentou menor sobrevivência que as demais, o que não diferiu entre os 15 dias de desafio. Esses resultados demonstram que existem animais com melhor resposta ao teste de resistência do que outros.(AU)

Prevalence and antibiotic resistance of Staphylococcus aureus and Streptococcus agalactiae in family-owned dairy herds in the state of Minas Gerais, Brazil

Bovine mastitis is the most frequent disease in dairy herds worldwide, causing great economic losses to both producers and the industry. This disease has direct implications in public health due to the zoonotic potential of some agents involved in its etiology and the presence of antimicrobial residues in milk. Knowledge of the agents involved in its etiology and the susceptibility profiles to antimicrobials is of paramount importance, give the multifactorial aspect of the disease and the importance of milk production in family farming. This study evaluated the prevalence of Staphylococcus aureus and Streptococcus agalactiae in family-owned herds in the Campo das Vertentes region, State of Minas Gerais, and the resistance of these pathogens to the most commonly used antibiotics in the treatment of mastitis in dairy herds. The study involved 200 properties, covering an area of approximately 12,564 km2. The prevalence of pathogens was carried out through microbiological analyses of milk samples from each farm’s milk tank. Modified Baird-Parker Agar medium was used to detect S. aureus, and modified Edwards Agar medium, enriched with 5% defibrinated sheep blood, was used to detect S. agalactiae. Disc diffusion method was used to evaluate resistance to antibiotics. The results showed high prevalence of S. aureus pathogens (71.0%) and S. agalactiae (68.0%) as well as high levels of multidrug resistance. The results show that the control of contagious mastitis in the herds is flawed, which indicates the need for more effective control of these pathogens and more judicious use of antibiotics to minimize resistance.

A mastite bovina é a doença mais frequente em rebanhos leiteiros no mundo todo, acarretando grandes prejuízos econômicos para os produtores e a indústria. A doença também tem implicações na saúde pública, devido ao potencial zoonótico de alguns agentes envolvidos em sua etiologia e à presença de resíduos de antibióticos no leite. Considerando o aspecto multifatorial da doença e a importância da produção de leite na agricultura familiar, o conhecimento dos agentes envolvidos em sua etiologia e os perfis de suscetibilidade aos antibióticos é de suma importância. Neste estudo, avaliaram-se as prevalências de Staphylococcus aureus e Streptococcus agalactiae em rebanhos de propriedades de agricultura familiar, na região do Campo das Vertentes, Minas Gerais, e também se analisou a resistência destes patógenos aos antibióticos mais comumente utilizados no tratamento da mastite em rebanhos leiteiros. O estudo envolveu 200 propriedades, abrangendo uma área de aproximadamente 12.564 km2. As prevalências dos patógenos S. aureus e S. agalactia e foram obtidas por meio de análises microbiológicas de amostras de leite do tanque de expansão de cada propriedade. Para a detecção de S. aureus, utilizou-se o meio seletivo Ágar Baird-Parker modificado e, para a detecção de S. agalactia e, o meio seletivo Ágar Edwards modificado, enriquecido com 5% de sangue ovino desfibrinado.Foi utilizada a técnica de difusão em discos para a avaliação de resistência aos antimicrobianos. Os resultados indicaram altas prevalências dos patógenos S. aureus (71,0%) e S. agalactiae (68,0%), com elevados níveis de resistência frente à polimixina B, penicilina G e ampicilina. O fenômeno da multirresistência foi observado a níveis elevados para ambos os patógenos.Os resultados demonstram que há falhas no controle da mastite contagiosa nos rebanhos estudados, apontando para a necessidade de medidas mais efetivas para o controle destes patógenos...

Distribution of serotypes, antimicrobial resistance and virulence genes among Streptococcus agalactiae isolated from bovine in China

Background: Bovine mastitis, a global disease that is responsible for large economic losses each year due to lower milkyield and reduced milk quality. In some countries, especially in China, Streptococcus agalactiae has become one of themost frequently detected pathogen. Antibiotic treatment and vaccine immunization are important strategies for the controlof infectious diseases. The main objective of the present study was to evaluate distribution of bovine mastitis pathogensand antimicrobial resistance of S. agalactiae, and contribute to the treatment of bovine mastitis.Materials, Methods & Results: Clinical mastitis samples (n= 1,122) were collected from 27 dairy farms located in 15different provinces of China during 2012-2018. The pathogens were identified by 16S rDNA method. Antimicrobial susceptibility was assessed by disc diffusion method. Molecular characteristics was distinguished based on PCR. The resultsshowed that the main pathogens were Streptococcus agalactiae (n= 324, 26.2%), Escherichia coli (n= 287, 23.2%), andStaphylococcus aureus (n= 131, 10.6%). The serotypes of Streptococcus agalactiae were serotype II (53.6%), Ia (44 %)and VII (1.2%), respectively. Streptococcus agalactiae were resistant to kanamycin (93.8%), gentamicin (49.4%), vancomycin (49.4%), tetracycline (35.8%), clindamycin (34.6%) and erythromycin (32.1%). The main resistance genes wereermA (53.1%) and ermB (85.2%). Resistance to erythromycin was attributed to the genes ermA (P < 0.05) and resistanceto tetracycline was attributed to the genes tetK, tetM, tetO (P < 0.01). The virulence genes scpB (81.4%), cyl (100%), glnA(76.6%), cfb (98.8%), hylB (98.8%), scaA (69.1%) were detected in almost all isolates.Discussion: In the present study, Streptococcus agalactiae, Escherichia coli and Staphylococcus aureus were the pathogens isolated most frequently from clinical mastitis. In the case of S. agalactiae, we performed capsular serotyping ofisolates...

Prevalence and antibiotic resistance of Staphylococcus aureus and Streptococcus agalactiae in family-owned dairy herds in the state of Minas Gerais, Brazil

Bovine mastitis is the most frequent disease in dairy herds worldwide, causing great economic losses to both producers and the industry. This disease has direct implications in public health due to the zoonotic potential of some agents involved in its etiology and the presence of antimicrobial residues in milk. Knowledge of the agents involved in its etiology and the susceptibility profiles to antimicrobials is of paramount importance, give the multifactorial aspect of the disease and the importance of milk production in family farming. This study evaluated the prevalence of Staphylococcus aureus and Streptococcus agalactiae in family-owned herds in the Campo das Vertentes region, State of Minas Gerais, and the resistance of these pathogens to the most commonly used antibiotics in the treatment of mastitis in dairy herds. The study involved 200 properties, covering an area of approximately 12,564 km2. The prevalence of pathogens was carried out through microbiological analyses of milk samples from each farms milk tank. Modified Baird-Parker Agar medium was used to detect S. aureus, and modified Edwards Agar medium, enriched with 5% defibrinated sheep blood, was used to detect S. agalactiae. Disc diffusion method was used to evaluate resistance to antibiotics. The results showed high prevalence of S. aureus pathogens (71.0%) and S. agalactiae (68.0%) as well as high levels of multidrug resistance. The results show that the control of contagious mastitis in the herds is flawed, which indicates the need for more effective control of these pathogens and more judicious use of antibiotics to minimize resistance.(AU)

A mastite bovina é a doença mais frequente em rebanhos leiteiros no mundo todo, acarretando grandes prejuízos econômicos para os produtores e a indústria. A doença também tem implicações na saúde pública, devido ao potencial zoonótico de alguns agentes envolvidos em sua etiologia e à presença de resíduos de antibióticos no leite. Considerando o aspecto multifatorial da doença e a importância da produção de leite na agricultura familiar, o conhecimento dos agentes envolvidos em sua etiologia e os perfis de suscetibilidade aos antibióticos é de suma importância. Neste estudo, avaliaram-se as prevalências de Staphylococcus aureus e Streptococcus agalactiae em rebanhos de propriedades de agricultura familiar, na região do Campo das Vertentes, Minas Gerais, e também se analisou a resistência destes patógenos aos antibióticos mais comumente utilizados no tratamento da mastite em rebanhos leiteiros. O estudo envolveu 200 propriedades, abrangendo uma área de aproximadamente 12.564 km2. As prevalências dos patógenos S. aureus e S. agalactia e foram obtidas por meio de análises microbiológicas de amostras de leite do tanque de expansão de cada propriedade. Para a detecção de S. aureus, utilizou-se o meio seletivo Ágar Baird-Parker modificado e, para a detecção de S. agalactia e, o meio seletivo Ágar Edwards modificado, enriquecido com 5% de sangue ovino desfibrinado.Foi utilizada a técnica de difusão em discos para a avaliação de resistência aos antimicrobianos. Os resultados indicaram altas prevalências dos patógenos S. aureus (71,0%) e S. agalactiae (68,0%), com elevados níveis de resistência frente à polimixina B, penicilina G e ampicilina. O fenômeno da multirresistência foi observado a níveis elevados para ambos os patógenos.Os resultados demonstram que há falhas no controle da mastite contagiosa nos rebanhos estudados, apontando para a necessidade de medidas mais efetivas para o controle destes patógenos...(AU)

Distribution of serotypes, antimicrobial resistance and virulence genes among Streptococcus agalactiae isolated from bovine in China

Background: Bovine mastitis, a global disease that is responsible for large economic losses each year due to lower milkyield and reduced milk quality. In some countries, especially in China, Streptococcus agalactiae has become one of themost frequently detected pathogen. Antibiotic treatment and vaccine immunization are important strategies for the controlof infectious diseases. The main objective of the present study was to evaluate distribution of bovine mastitis pathogensand antimicrobial resistance of S. agalactiae, and contribute to the treatment of bovine mastitis.Materials, Methods & Results: Clinical mastitis samples (n= 1,122) were collected from 27 dairy farms located in 15different provinces of China during 2012-2018. The pathogens were identified by 16S rDNA method. Antimicrobial susceptibility was assessed by disc diffusion method. Molecular characteristics was distinguished based on PCR. The resultsshowed that the main pathogens were Streptococcus agalactiae (n= 324, 26.2%), Escherichia coli (n= 287, 23.2%), andStaphylococcus aureus (n= 131, 10.6%). The serotypes of Streptococcus agalactiae were serotype II (53.6%), Ia (44 %)and VII (1.2%), respectively. Streptococcus agalactiae were resistant to kanamycin (93.8%), gentamicin (49.4%), vancomycin (49.4%), tetracycline (35.8%), clindamycin (34.6%) and erythromycin (32.1%). The main resistance genes wereermA (53.1%) and ermB (85.2%). Resistance to erythromycin was attributed to the genes ermA (P < 0.05) and resistanceto tetracycline was attributed to the genes tetK, tetM, tetO (P < 0.01). The virulence genes scpB (81.4%), cyl (100%), glnA(76.6%), cfb (98.8%), hylB (98.8%), scaA (69.1%) were detected in almost all isolates.Discussion: In the present study, Streptococcus agalactiae, Escherichia coli and Staphylococcus aureus were the pathogens isolated most frequently from clinical mastitis. In the case of S. agalactiae, we performed capsular serotyping ofisolates...(AU)

Staphylococcus aureus and Streptococcus agalactiae: prevalence, resistance to antimicrobials, and their relationship with the milk quality of dairy cattle herds in Minas Gerais state, Brazil / Staphylococcus aureus e Streptococcus agalactiae: prevalência, resistência aos antimicrobianos e suas relações com a qualidade do leite em rebanhos leiteiros de Minas Gerais, Brasil

Bovine mastitis is the most frequent disease worldwide in dairy herds, causing high economic losses to producers and industry, as well as having implications for public health due to the zoonotic potential of some agents involved in its etiology and the increased risk of antimicrobial residues in milk and its derivatives. Considering the multifactorial aspect of this disease, knowledge of the agents involved in its etiology and their antimicrobial susceptibility profiles is very important. This study was conducted with 306 dairy herds from the Campo das Vertentes region, located in the south of Minas Gerais state, whose owners were milk suppliers to a dairy in the same region. The study involved approximately 34,000 dairy cows and covered an area of approximately 12,564 km2. In these herds, prevalence rates of Staphylococcus aureus and Streptococcus agalactiae and their relationship with bulk milk somatic cell counts (BMSCC), total bacterial counts (TBC), and daily production were evaluated. In addition, analyses of resistance of these pathogens to the antimicrobials most commonly used in the treatment of mastitis in dairy herds were performed. Microbiological analyses of milk samples from collect from bulk milk tanks were performed aiming to evaluate the prevalence of S. aureus and S. agalactiae. For these proposes, the modified Baird-Parker Agar medium was used for detection of S. aureus and the modified Edwards Agar medium, enriched with 5% defibrinated sheep blood, was used for detection of S. agalactiae. The disc diffusion technique was applied to evaluate antimicrobial resistance. Results show high prevalence rates of S. aureus (70.3%) and S. agalactiae (67.0%) in the dairy farms studied, with 47.71% of the herds showing both pathogens. Associations between BMSCC and the presence of pathogens S. aureus and S. agalactiae and between TBC and the presence of S. agalactiae were observed, demonstrating the influence of these pathogens in milk quality. No variation was observed in the distribution of S. aureus and S. agalactiae in the different strata of daily production. High levels of resistance and multi-resistance were observed among the pathogens S. aureus and S. agalactiae. The results indicate the need for more effective control measures for mastitis caused by S. aureus and S. agalactiae in the dairy herds of the region studied and more judicious use of antimicrobials in order to reduce the problem of resistance to them.(AU)

A mastite bovina é a doença de maior frequência em rebanhos leiteiros em nível mundial, acarretando grandes prejuízos econômicos aos produtores e à indústria. Além disso, esta enfermidade tem implicações na saúde pública, devido ao potencial zoonótico de alguns agentes envolvidos em sua etiologia e por aumentar os riscos de resíduos de antimicrobianos no leite e derivados. Considerando o aspecto multifatorial da mastite bovina, o conhecimento dos agentes envolvidos em sua etiologia e os perfis de suscetibilidade aos antibióticos é de suma importância. O estudo envolveu 306 fazendas de leite da região de Campo das Vertentes, localizada no sul de Minas Gerais, cujos proprietários eram fornecedores de leite para um laticínio da região, totalizando aproximadamente 34.000 animais e abrangendo uma área aproximada 12.564 km2. Nestes rebanhos, avaliaram-se a prevalência de Staphylococcus aureus e Streptococcus agalactiae e a relação destes agentes com os índices de contagem de células somáticas do leite do tanque de expansão (CCSt), contagem bacteriana total (CBT) e produção diária. Analisou-se também a resistência destes patógenos aos antimicrobianos mais comumente utilizados no tratamento da mastite em rebanhos leiteiros. Análises microbiológicas de amostras de leite dos tanques de expansão foram realizadas para se determinar as prevalências dos patógenos S. aureus e S. agalactiae. Para a detecção de S. aureus, utilizou-se o meio seletivo Ágar Baird-Parker modificado e para a detecção de S. agalactiae, o meio seletivo Ágar Edwards modificado, enriquecido com 5% de sangue ovino desfibrinado. Foi utilizada a técnica de difusão em discos para a avaliação de resistência aos antimicrobianos. Os resultados apontaram altas prevalências de S. aureus (70,3%) e de S. agalactiae (67,0%), com 47,71% dos rebanhos examinados apresentando ambos os agentes. Verificaram-se associações entre a CCSt e a presença dos patógenos S. aureus e S. agalactiae, e também entre a CBT e a presença de S. agalactiae, demonstrando a interferência negativa destes patógenos nestes quesitos de qualidade. Não se observaram variações nas distribuições dos patógenos S. aureus e nem S. agalactiae em função da produção diária das propriedades estudadas. Níveis elevados de resistência e de multirresistência foram observados para ambos os agentes. Os resultados apontam a necessidade de medidas mais efetivas de controle para S. aureus e S. agalactiae nos rebanhos da região estudada e do uso mais criterioso dos antimicrobianos, visando minimizar o problema da resistência aos mesmos.(AU)

Staphylococcus aureus and Streptococcus agalactiae: prevalence, resistance to antimicrobials, and their relationship with the milk quality of dairy cattle herds in Minas Gerais state, Brazil / Staphylococcus aureus e Streptococcus agalactiae: prevalência, resistência aos antimicrobianos e suas relações com a qualidade do leite em rebanhos leiteiros de Minas Gerais, Brasil

Bovine mastitis is the most frequent disease worldwide in dairy herds, causing high economic losses to producers and industry, as well as having implications for public health due to the zoonotic potential of some agents involved in its etiology and the increased risk of antimicrobial residues in milk and its derivatives. Considering the multifactorial aspect of this disease, knowledge of the agents involved in its etiology and their antimicrobial susceptibility profiles is very important. This study was conducted with 306 dairy herds from the Campo das Vertentes region, located in the south of Minas Gerais state, whose owners were milk suppliers to a dairy in the same region. The study involved approximately 34,000 dairy cows and covered an area of approximately 12,564 km2. In these herds, prevalence rates of Staphylococcus aureus and Streptococcus agalactiae and their relationship with bulk milk somatic cell counts (BMSCC), total bacterial counts (TBC), and daily production were evaluated. In addition, analyses of resistance of these pathogens to the antimicrobials most commonly used in the treatment of mastitis in dairy herds were performed. Microbiological analyses of milk samples from collect from bulk milk tanks were performed aiming to evaluate the prevalence of S. aureus and S. agalactiae. For these proposes, the modified Baird-Parker Agar medium was used for detection of S. aureus and the modified Edwards Agar medium, enriched with 5% defibrinated sheep blood, was used for detection of S. agalactiae. The disc diffusion technique was applied to evaluate antimicrobial resistance. Results show high prevalence rates of S. aureus (70.3%) and S. agalactiae (67.0%) in the dairy farms studied, with 47.71% of the herds showing both pathogens. Associations between BMSCC and the presence of pathogens S. aureus and S. agalactiae and between TBC and the presence of S. agalactiae were observed, demonstrating the influence of these pathogens in milk quality. No variation was observed in the distribution of S. aureus and S. agalactiae in the different strata of daily production. High levels of resistance and multi-resistance were observed among the pathogens S. aureus and S. agalactiae. The results indicate the need for more effective control measures for mastitis caused by S. aureus and S. agalactiae in the dairy herds of the region studied and more judicious use of antimicrobials in order to reduce the problem of resistance to them.(AU)

A mastite bovina é a doença de maior frequência em rebanhos leiteiros em nível mundial, acarretando grandes prejuízos econômicos aos produtores e à indústria. Além disso, esta enfermidade tem implicações na saúde pública, devido ao potencial zoonótico de alguns agentes envolvidos em sua etiologia e por aumentar os riscos de resíduos de antimicrobianos no leite e derivados. Considerando o aspecto multifatorial da mastite bovina, o conhecimento dos agentes envolvidos em sua etiologia e os perfis de suscetibilidade aos antibióticos é de suma importância. O estudo envolveu 306 fazendas de leite da região de Campo das Vertentes, localizada no sul de Minas Gerais, cujos proprietários eram fornecedores de leite para um laticínio da região, totalizando aproximadamente 34.000 animais e abrangendo uma área aproximada 12.564 km2. Nestes rebanhos, avaliaram-se a prevalência de Staphylococcus aureus e Streptococcus agalactiae e a relação destes agentes com os índices de contagem de células somáticas do leite do tanque de expansão (CCSt), contagem bacteriana total (CBT) e produção diária. Analisou-se também a resistência destes patógenos aos antimicrobianos mais comumente utilizados no tratamento da mastite em rebanhos leiteiros. Análises microbiológicas de amostras de leite dos tanques de expansão foram realizadas para se determinar as prevalências dos patógenos S. aureus e S. agalactiae. Para a detecção de S. aureus, utilizou-se o meio seletivo Ágar Baird-Parker modificado e para a detecção de S. agalactiae, o meio seletivo Ágar Edwards modificado, enriquecido com 5% de sangue ovino desfibrinado. Foi utilizada a técnica de difusão em discos para a avaliação de resistência aos antimicrobianos. Os resultados apontaram altas prevalências de S. aureus (70,3%) e de S. agalactiae (67,0%), com 47,71% dos rebanhos examinados apresentando ambos os agentes. Verificaram-se associações entre a CCSt e a presença dos patógenos S. aureus e S. agalactiae, e também entre a CBT e a presença de S. agalactiae, demonstrando a interferência negativa destes patógenos nestes quesitos de qualidade. Não se observaram variações nas distribuições dos patógenos S. aureus e nem S. agalactiae em função da produção diária das propriedades estudadas. Níveis elevados de resistência e de multirresistência foram observados para ambos os agentes. Os resultados apontam a necessidade de medidas mais efetivas de controle para S. aureus e S. agalactiae nos rebanhos da região estudada e do uso mais criterioso dos antimicrobianos, visando minimizar o problema da resistência aos mesmos.(AU)

Morphometric, bromatological, and sensory analysis of Nile tilapia vaccinated against Streptococcus agalactiae / Análise morfométrica, bromatológica e sensorial de tilápia do Nilo vacinada contra Streptococcus agalactiae

The objective of this study was to evaluate the effect of vaccination against Streptococcus agalactiae on the morphometry, bromatology, and sensory traits of tilapia bred in net-tanks. Tilapia juveniles were bred in net-tanks separated into two groups: vaccinated and unvaccinated fish. Ten fish from each group were collected from different weight classes: 400-500, 501-600, 601-700, and 701-800 g. Measurements and weighing of whole fish and fillets did not show significant differences between the two groups. Fillet thickness was significantly greater in unvaccinated fish in the weight range of 601-700 g. Significant differences were not found in protein, lipid, ash, or moisture content between the two groups in any of the weight classes studied. Significant preferences between unvaccinated and vaccinated fish were not observed in the paired preference test, regardless of weight class. The hedonic scale analysis showed that tasters moderately liked the tilapia fillets regardless of weight class or whether the fish had been vaccinated. In net-tank breeding experimental conditions, vaccinated and unvaccinated Nile tilapia weighing between 400 and 800 g showed similar morphometric, bromatological, and sensory characteristics.(AU)

O objetivo desse trabalho foi avaliar o efeito da vacinação contra Streptococcus agalactiae na morfometria, bromatologia e análise sensorial de tilápia criada em tanque-rede. Juvenis de tilápia foram criadas em tanque-rede separados em dois grupos: peixes vacinados e não vacinados. Foram coletados 10 peixes de cada grupo em diferentes classes de peso: 400-500, 501-600, 601-700 e 701-800 g. As medidas e pesagens do peixe inteiro e do filé não apresentaram diferença significativa entre os dois grupos. A espessura do filé foi significativamente maior nos peixes não vacinados na faixa de 601-700 g. Não teve diferença significativa nos valores de proteína, lipídio, cinza e umidade entre os peixes dos dois grupos em nenhuma das classes de peso estudada. Para o teste pareado preferência, não houve uma preferência significativa entre peixes não vacinados e vacinados independente da classe de peso analisada. A análise de escala hedônica apontou que os provadores gostaram moderadamente do filé de tilápia independente da classe de peso e de ter sido vacinado ou não. Nas condições experimentais de criação em tanques-rede, tilápias do Nilo vacinados e não vacinados, com peso entre 400 e 800 g, apresentaram características morfométricas, bromatológicas e sensoriais semelhantes.(AU)

Morphometric, bromatological, and sensory analysis of Nile tilapia vaccinated against Streptococcus agalactiae / Análise morfométrica, bromatológica e sensorial de tilápia do Nilo vacinada contra Streptococcus agalactiae

The objective of this study was to evaluate the effect of vaccination against Streptococcus agalactiae on the morphometry, bromatology, and sensory traits of tilapia bred in net-tanks. Tilapia juveniles were bred in net-tanks separated into two groups: vaccinated and unvaccinated fish. Ten fish from each group were collected from different weight classes: 400-500, 501-600, 601-700, and 701-800 g. Measurements and weighing of whole fish and fillets did not show significant differences between the two groups. Fillet thickness was significantly greater in unvaccinated fish in the weight range of 601-700 g. Significant differences were not found in protein, lipid, ash, or moisture content between the two groups in any of the weight classes studied. Significant preferences between unvaccinated and vaccinated fish were not observed in the paired preference test, regardless of weight class. The hedonic scale analysis showed that tasters moderately liked the tilapia fillets regardless of weight class or whether the fish had been vaccinated. In net-tank breeding experimental conditions, vaccinated and unvaccinated Nile tilapia weighing between 400 and 800 g showed similar morphometric, bromatological, and sensory characteristics.

O objetivo desse trabalho foi avaliar o efeito da vacinação contra Streptococcus agalactiae na morfometria, bromatologia e análise sensorial de tilápia criada em tanque-rede. Juvenis de tilápia foram criadas em tanque-rede separados em dois grupos: peixes vacinados e não vacinados. Foram coletados 10 peixes de cada grupo em diferentes classes de peso: 400-500, 501-600, 601-700 e 701-800 g. As medidas e pesagens do peixe inteiro e do filé não apresentaram diferença significativa entre os dois grupos. A espessura do filé foi significativamente maior nos peixes não vacinados na faixa de 601-700 g. Não teve diferença significativa nos valores de proteína, lipídio, cinza e umidade entre os peixes dos dois grupos em nenhuma das classes de peso estudada. Para o teste pareado preferência, não houve uma preferência significativa entre peixes não vacinados e vacinados independente da classe de peso analisada. A análise de escala hedônica apontou que os provadores gostaram moderadamente do filé de tilápia independente da classe de peso e de ter sido vacinado ou não. Nas condições experimentais de criação em tanques-rede, tilápias do Nilo vacinados e não vacinados, com peso entre 400 e 800 g, apresentaram características morfométricas, bromatológicas e sensoriais semelhantes.

Determinação da concentração inibitória mínima e bactericida da amoxicilina para bactéria S. agalactiae isolada de tilápia do nilo

Uma qualidade desejada do antimicrobiano é que este apresente eficácia na menor concentração possível do princípio ativo. Devemos atentarmos que quanto menor a concentração do fármaco a ser utilizado menor será resíduo ambiental. Como fase inicial do estudo de eficácia há necessidade de verificar a sensibilidade ao princípio ativo. Neste sentido, utilizou-se 10 concentrações do fármaco amoxicilina com redução progressiva da concentração na razão de 2: 11,98; 5,99; 2,99; 1,49; 0,74; 0,37; 0,18; 0,09, 0,045 e 0,022 μg.mL

Determinação da concentração inibitória mínima e bactericida da amoxicilina para bactéria S. agalactiae isolada de tilápia do nilo

Uma qualidade desejada do antimicrobiano é que este apresente eficácia na menor concentração possível do princípio ativo. Devemos atentarmos que quanto menor a concentração do fármaco a ser utilizado menor será resíduo ambiental. Como fase inicial do estudo de eficácia há necessidade de verificar a sensibilidade ao princípio ativo. Neste sentido, utilizou-se 10 concentrações do fármaco amoxicilina com redução progressiva da concentração na razão de 2: 11,98; 5,99; 2,99; 1,49; 0,74; 0,37; 0,18; 0,09, 0,045 e 0,022 μg.mL <->1. Para cada teste, foram ensaiados 3 tubos por concentração e o teste foi repetido 4 vezes. O meio utilizado foi caldo Mueller-Hinton com cátions ajustados suplementado com sangue lisado de cavalo a 5%. Para cada tubo teste havia a concentração final de 2,0 x 10 UFC de bactéria de Streptococcus agalactiae. Os mesmos foram incubados a 28°C por 48 horas. Após este período, uma alíquota de 100 μL de cada tubo foi dispersa em superfície em placa de petri com ágar sangue seletivo para S. agalactiae, incubados nas mesmas condições dos tubos. Realizado após 48 horas a contagem de unidades formadoras de colônia por mL (UFC.mL-1. Assim, os resultados para CIM 99,9% para todas as repetições realizadas oscilou de 0,09 a 0,18 μg.mL-1 e o CBM 100% oscilou entre 1,5 a 2 ,5 μg.mL-1. A média encontrada para controle positivo foi de 1,04 x 107 UFC.mL-1 e os tubos pertencentes ao controle negativo não apresentaram nenhuma multiplicação bacteriana. Em comparação a literatura de referência, amoxicilina triidratada apresentou para o isolado de S. agalactiae um valor de CIM e CBM baixo, considerando assim sensível e adequado para o ensaio.(AU)

Detection of Staphylococcus aureus, Streptococcus agalactiae and Escherichia coli in Brazilian mastitic milk goats by multiplex-PCR / Detecção de Staphylococcus aureus, Streptococcus agalactiae e Escherichia coli em leite caprino mastítico no Brasil, por multiplex-PCR

This study evalueted the prevalence of Staphylococcus aureus, Streptococcus agalactiae and Escherichia coli in milk samples from 257 goats (513 half-udders) and ten bulk tanks, from ten dairy goat farms of São Paulo State, Brazil, by multiplex-PCR. The samples were screened by microbiological culture (gold-standard), and tested by different multiplex-PCR protocols for the detection of each bacterium. A total of 178 half-udders resulted positive by microbiological culture, with coagulase-negative staphylococci (70%), S. aureus (13.5%), S. intermedius (7.9%), and Enterobacteriaceae (4%) the prevalent pathogens. In other way, multiplex-PCR detected 173 pathogens in 151/523 (28.9%; CI95% 25.2-32.9%) milk samples 144/513 (28.1%) half-udders and 7/10 (70%) bulk tanks, with E. coli (86/162, 51.9%) and S. aureus (50/162, 30.9%) the prevalent ones in half-udders, and S. aureus (6/10, 60%) and E. coli (4/5, 36.4%) in bulk tanks. Multiplex-PCR showed a high performance for the detection of three bacteria at a time in mastitic goat milk direct from half-udders or bulk tanks. Thus, this multiplex-PCR protocol proved to be an adequate tool for the identification of the most common mastitis pathogens, independent of their phenotypic characteristics in the diagnosis of clinical mastitis in goats, allowing a continuous and better vigilance and monitoring the herd, being included in quality programs.(AU)

Este estudo avaliou por multiplex-PCR a prevalência de Staphylococcus aureus, Streptococcus agalactiae e Escherichia coli em amostras de leite de 257 caprinos (513 tetos) e dez tanques de expansão, em dez fazendas leiteiras do estado de São Paulo, Brasil. As amostras foram triadas por cultura microbiológica (padrão-uro) e testadas por diferentes protocolos multiplex-PCR para a detecção de cada bactéria. Um total de 178 amostras de leite foram positivos na cultura microbiológica, com estafilococos coagulase-negativos (70%), S. aureus (13,5%), S. intermedius (7,9%) e Enterobacteriaceae (4%) como patógenos prevalentes. Por outro lado, a PCR multiplex detectou 173 patógenos em 151/523 (28,9%, IC95% 25,2-32,9%) amostras de leite, 144/513 (28,1%) amostras de tetos e 7/10 (70%) em tanques de expansão, E. coli (86/162, 51,9%) e S. aureus (50/162, 30,9%) foram identificados nas amostras de tetos e S. aureus (6/10, 60%) e E. coli (4/5, 36,4%) em tanques expansão. Multiplex-PCR mostrou um alto desempenho para a detecção das três bactérias em leite de cabra com mastite ou em tanques de expansão. Dessa forma, este protocolo multiplex-PCR provou ser uma ferramenta adequada para a identificação dos patógenos mais comuns da mastite, independentemente de suas características fenotípicas no diagnóstico de mastite clínica em caprinos, permitindo uma vigilância contínua e melhor acompanhamento do rebanho, sendo incluído em programas de qualidade.(AU)