COMPARAÇÃO ENTRE CULTIVO E DETECÇÃO MOLECULAR PARA DIAGNÓSTICO DE DERMATÓFITOS DIRETAMENTE DO PELAME DE CÃES E DE GATOS

Os dermatófitos são responsáveis pela doença fúngica mais frequente na clínica médica veterinária de pequenos animais: a dermatofitose. Trata-se de uma zoonose de distribuição mundial, caracterizada pela infecção de estruturas queratinizadas, como pele, cabelos, pelame, unhas e garras. O cultivo micológico é o padrão de referência para o diagnóstico dessa micose, no entanto requer aproximadamente 15 dias para um resultado definitivo. Métodos de diagnóstico moleculares baseados em PCR possuem elevada sensibilidade e especificidade, além de proporcionarem resultados entre um a três dias. O objetivo deste estudo foi realizar a detecção molecular de dermatófitos diretamente de amostras de pelame de cães e de gatos com suspeita de dermatofitose e comparar os resultados obtidos com o método padrão de referência. Foram coletadas 219 amostras de pelame, as quais foram submetidas ao cultivo micológico e à extração de DNA para realização de análise por qPCR. A comparação entre testes mostrou concordância de resultados em 70% das amostras: a qPCR identificou corretamente amostras positivas em cultivo em 34% dos casos, enquanto identificou corretamente amostras negativas em cultivo em 95% dos casos. Além disso, a qPCR foi capaz de detectar dermatófitos em sete amostras negativas em cultivo. A qPCR detectou maior proporção de dermatófitos em amostras de gatos (20%) do que em amostras de cães (13%). Diferentes métodos prévios à extração de DNA (tratamento por congelamento versus sem tratamento) e uso de amostras com diferentes períodos entre coleta e extração de DNA (menor ou igual a um ano versus maior que um ano) foram comparados, observando-se que o uso de amostras frescas associado ao tratamento por congelamento prévio à extração de DNA proporcionou 64% de positividade na qPCR das amostras positivas em cultivo. Ainda, amostras de alta pureza e concentração de DNA apresentaram 82% de positividade na qPCR das amostras positivas em cultivo. A qPCR pode ser utilizada como um teste de triagem inicial prévio ao cultivo micológico. Ainda assim, a técnica molecular desenvolvida deve ser adaptada com a adição de novos métodos juntos à extração a fim de aumentar sua eficácia, podendo se tornar o método de escolha para a detecção de dermatófitos em amostras clínicas no futuro.

Dermatophytes are responsible for the most common fungal disease in small animal veterinary practice: dermatophytosis. It is a worldwide zoonosis characterized by infection of keratinized structures such as skin, hair, fur, nails and claws. Mycological culture is the reference standard for diagnosis of this ringworm, however it requires at least 15 days for a definitive result. PCR-based diagnostic methods are high sensitivity and specificity and provide results within one to three days. The aim of this study was to perform molecular detection of dermatophytes directly from dog and cat fur samples with suspected dermatophytosis and to compare results with reference standard method. A total of 219 fur samples were collected and submitted to mycological culture and DNA extraction for qPCR analysis. Comparison between tests showed results agreement in 70% of samples: qPCR correctly identified positive samples in culture in 34% of cases; while correctly identified negative culture samples in 95% of cases. In addition, qPCR was able to detect dermatophytes in seven negative culture samples. qPCR detected a higher proportion of dermatophytes in cat (20%) than in dog (13%) samples. Different methods prior to DNA extraction (freezing treatment versus untreated) and use of samples with different periods between DNA collection and extraction (less than or equal to one year versus more than one year) were compared: use of fresh samples associated with freezing treatment prior to DNA extraction yielded 64% positivity in qPCR of positive samples in culture. Also, high purity and high amount of DNA samples yielded 82% positivity in qPCR of positive samples in culture. qPCR can be used as initial screening test prior to mycological culture. Nevertheless, this molecular technique developed must be adapted with addition of new methods together with extraction in order to increase its effectiveness and could become the method of choice for dermatophytes detection in clinical samples in future.

ANÁLISE GENÉTICA E DESENVOLVIMENTO DE UM MÉTODO DE DIAGNÓSTICO, BASEADO EM PCR, PARA DETECÇÃO DE Cyniclomyces guttulatus EM FEZES DE CÃES

O significado das infecções fúngicas dos animais tem sido amplamente ignorado por muitos veterinários. No entanto, problemas recentes de doenças fúngicas de destaque, por exemplo, a esporotricose de felinos e humanos no Brasil e a criptococose zoonótica em todo o mundo, demonstraram a necessidade de reverter essa tendência negativa há muito estabelecida. A levedura ascomicética Cyniclomyces guttulatus é a única espécie atualmente incluída no gênero Cyniclomyces. Tradicionalmente, era vista como um componente comensal da microbiota intestinal de coelhos e outros herbívoros. O aumento do interesse em C. guttulatus se desenvolveu com base em relatos da Europa, Ásia, América do Norte e Brasil, sugerindo que C. guttulatus representava um patógeno emergente e / ou oportunista de cães, onde sua presença em números elevados, estava ligada a sinais clínicos, incluindo diarreia, gastroenterite e colangiohepatite. No entanto, pesquisas recentes conduzidas na Holanda e nos Estados Unidos argumentaram que a presença dessa levedura em cães que sofrem de doença gastrintestinal é provavelmente mais circunstancial e não tem relevância clínica. O diagnóstico de C. guttulatus em fezes e / ou em material clínico é realizado principalmente usando análises microscópicas e microbiológicas baseadas em cultura. Em uma minoria de estudos, a identificação definitiva das colônias da levedura foi feita usando amplificação por reação em cadeia da polimerase (PCR) e sequenciamento de um fragmento do gene 26S rDNA (codifica a subunidade maior do RNA ribossomal). O presente estudo relata o desenvolvimento de métodos moleculares inovadores para detecção e caracterização de culturas de leveduras e para a detecção e caracterização independente de cultura de C. guttulatus diretamente de fezes de cães. A disponibilidade dos ensaios servirá para reduzir as dúvidas sobre a validade dos diagnósticos morfológicos e pode reduzir o tempo para confirmação do diagnóstico molecular em até 48 horas, ao invés do prazo atual de 7 a 10 dias. A genotipagem de uma coleção de isolados de porquinhos-da-índia (n = 1), coelhos (n = 20) e cães (n = 8) utilizou amplificação por PCR e sequenciamento de fragmentos das sequências que codificam as subunidades maior (26S) e menor (18S) do DNA ribossomal, as subunidades RPB1 e RPB2 do gene que codifica a RNA polimerase II, o citocromo oxidase II e as regiões espaçadoras internas transcritas (ITS). Alinhamentos de sequências e avaliações da similaridade de nucleotídeos para a maioria das sequências serviram para apoiar dados de estudos anteriores que sugeriram a possível existência de duas espécies de Cyniclomyces. Curiosamente, o uso da região ITS indicou que pode haver pelo menos três espécies de Cyniclomyces. Conclui-se que a identificação das novas espécies de Cyniclomyces questiona grande parte dos dados produzidos até o momento em relação à patogenicidade desse organismo. Prevê-se que os resultados deste trabalho sirvam para estimular uma expansão do estudo do gênero Cyniclomyces e, como tal, contribuam significativamente para a compreensão do seu papel na saúde dos cães

Many veterinary scientists have largely overlooked the significance of fungal infections in animals. However, recent high-profile fungal disease problems e.g. sporotrichosis of felines and humans in Brazil and zoonotic cryptococcosis worldwide, have demonstrated the need to revert this long-established negative trend. The ascomycete yeast Cyniclomyces guttulatusis is the only species currently included in the genus Cyniclomyces. Traditionally, it was viewed as a commensal component of the gut microbiota of rabbits and other herbivores. Increased interest in C. guttulatus developed based on reports from Europe, Asia, North America and Brazil suggesting that C. guttulatus represented an emerging and/or opportunistic pathogen in dogs, where its presence, in large numbers, was linked to clinical signs including diarrhea, gastroenteritis and cholangiohepatitis. However, recent investigations conducted in The Netherlands and the United States have argued that the presence of this yeast in dogs suffering gastrointestinal disease is most likely circumstantial and is not of clinical relevance. Diagnosis of C. guttulatus in feces and/or in clinical material is conducted primarily using microscopic and microbiological, culture-based analyses. In a minority of studies, definitive identification of yeast colonies was made using polymerase chain reaction (PCR) amplification and sequencing of a fragment of the universal yeast gene 26S (encodes for the large subunit of ribosomal RNA). The current study reports the development of innovative, molecular methods for the detection and characterization of yeast cultures and for the culture-independent detection and characterization of C. guttulatus directly from canine feces. The availability of the assays will serve to reduce doubt over the validity of morphological diagnostics and can reduce the time for a confirmed molecular diagnosis to 48 hours, rather than the actual timescale of 7-10 days. Genotyping of a collection of isolates from guinea pigs (n=1), rabbits (n= 20) and dogs (n=8), used PCR-based amplification and sequencing of fragments of the sequences encoding the large (26S) and small (18S) subunits of ribosomal rDNA, the subunits RPB1 and RPB2 of the gene encoding RNA polymerase II, Cytochrome oxidase II and the internal transcribed spacer (ITS) regions of the nuclear ribosomal RNA gene cluster. Sequence alignments and evaluations of nucleotide similarity for most sequences, served to support data from earlier studies, which had suggested the possible existence of two species of Cyniclomyces. Intriguingly, the use of the ITS region indicated that there may exist at least three species of Cyniclomyces. The identification of the new species of Cyniclomyces calls into question much of the data produced until now in relation to the pathogenicity of this organism. It is envisaged that the findings of this research will serve to stimulate an expansion in the study of the genus Cyniclomyces, and as such will make significant contributions to our comprehension of its role in canine health.

Nocardiose cutânea em felino: relato de caso / Feline cutaneous nocardiosis: case report

A nocardiose cutânea é uma condição supurativa a piogranulomatosa, que ocorre após penetração do agente em ferimentos napele que foram expostas a água ou ao solo contaminado. A doença se manifesta com formação de abscessos localizados, comfístulas e úlceras necróticas que drenam uma secreção serossanguinolenta, atingindo membros ou abdômen. É rara em gatos, enestes, a maior parte se deve a infecção por Nocardia asteroides. Este relato objetivou descrever o diagnóstico clínico e laboratorialde um felino doméstico com diagnóstico microbiológico de Nocardia asteroides, descrevendo o tratamento preconizado combase no antibiograma. Uma gata castrada, sem raça definida (SRD), com cinco anos de idade, desenvolveu lesão cutânea emforma de tratos fistulosos drenando secreção piossanguinolenta sob a região frontal da face, membros torácicos e abscesso emmembro pélvico, além de inapetência, emagrecimento e apatia. Havia sido tratada anteriormente de forma empírica para infecçãobacteriana com enrofloxacina, seguida de cefalexina após identificação bacteriana de Staphylococcus spp. Realizou-se coleta doexsudato para fins de cultura e antibiograma. O diagnóstico foi de nocardiose e o agente identificado como Nocardia asteroidese os micro-organismos foram sensíveis apenas a amicacina, neomicina e canamicina. Foi instituído tratamento com amicacina(10 mg/kg, a cada 12 horas), passando após sete dias a ser administrado a cada 24 horas devido a cilindrúria constatada atravésde urinálise. A remissão dos sinais ocorreu com 20 dias de uso contínuo do antibiótico, o qual foi mantido por mais três semanassem outras complicações com resolução da cilindrúria.(AU)

The cutaneous nocardiosis is a suppurative to pyogranulomatous condition that occurs after penetration of the agent on woundsin the skin that were exposed to contaminated water or soil. The disease is manifested with formation of localized abscess, withnecrotic fistula and ulcers that draining a serosanguineous secretion, reaching limbs or abdomen. It is rare in cats, and in these, themost are due to infection by Nocardia asteroides. This report aimed to describe the clinical and laboratory diagnosis of a domesticfeline with microbiological diagnosis of Nocardia asteroides, describing the recommended treatment based on antibiogram. A spayedfemale cat, mongrel, with five years of age, developed cutaneous lesions in the form of fistulous tracts draining piosanguinolentasecretion on the frontal region of the face, forelimb and abscess in hind limb, and loss of appetite, weight loss and apathy. It hadpreviously been treated empirically for bacterial infections with enrofloxacin, followed by cephalexin after bacterial identification ofStaphylococcus spp. Held collection of exudate for culture and antibiogram. It was diagnosed nocardiosis and the identified agentas Nocardia asteroides and microrganisms were sensitive only to amikacin, kanamycin and neomycin. Treatment with amikacin (10mg / kg every 12 hours) was introduced, and seven days after being administered once every 24 hours due to cilindruria detectedby urinalysis. The remission of the signs occurred 20 days of continuous use of the antibiotics, which was maintained for threeweeks without further complications with resolution of the cilindruria.(AU)

Análise bacteriológica e físico-química de leite cru resfriado, proveniente de posto de refrigeração, sob inspeção federal, em Rio Bonito, RJ

Com o objetivo de avaliar a qualidade microbiológica e fisico-química do leite cru de propriedades rurais do município de Rio Bonito-RJ e arredores, foram analisadas 20 amostras de leite provenientes de Posto de Refrigeração, subsidiado à Indústria Nestlé, coletadas de latões e de tanque de refrigeração. Realizaram-se análises microbiológicas como Contagem Total de Bactérias Heterotróficas Aeróbias Mesófilas (B.H.A.M), Contagem total de Bactérias Heterotróficas Aeróbias Psicotrófilas (B.H.A.P) seguindo as análises fisico-químicas, tais como: temperatura, acidez titulável, prova alizarol, lactofermentação, prova da redução e contagem de células somáticas. Para as variáveis da prova do alizarol houve reprovação em 20% das amostras, já para acidez 95% estavam dentro dos padrões normais. A temperatura das amostras, no ato da coleta, apresentou grandes variações em decorrência da distância e transporte inadequados. No teste da redutase apenas 15% foram consideradas boas ou ótimas e na lactofermentação 100% das amostras formaram algum tipo de coágulo. Em relação à contagem de bactérias, as B.H.A.M foram encontradas fora dos padrões em 65% das amostras e nas B.H.A.P em 80% dos resultados encontrados. Quanto à contagem de células somáticas apenas uma amostra apresentou-se fora do padrão. Conclui-se que a qualidade do leite pode ser melhorada por meio de assistência técnica e instrucional aos produtores, considerando os aspectos da legislação vigente associados à higienização adequada dos latões e utensílios de ordenha. O leite deve ser resfriado na fazenda e transportado sem delongas até a cooperativa.(AU)

With the objective of evaluating the microbiology and physicochemical quality of raw milk from rural properties in the city of Rio Bonito-RJ and surrounding areas, were analyzed 20 samples of raw milk from Refrigeration Station, subsidized by Nestlé, collected from bulk milk collectors and cooling tank. Microbiological analyzes were performed as Total Counting of Mesophilic Aerobic Heterotrophic Bacteria (MA.H.B), Total Counting of Heterotrophic Aerobic Psychophotrophic Bacteria (H.A.P.B) and physicochemical analyzes: temperature, titratable acidity, alizarol test, lactofermentation, reduction test and cell count somatic cells. For the variables of the alizarol test there was reprobation in 20% of the samples, already for acidity 95% were within normal standards. The temperature of the samples, at the time of collection, presented great variations due to inadequate distance and transport. In the reductase test only 15% were considered good or optimal and in the lactofermentation 100% of the samples formed some type of clot. Regarding bacterial counts, M.A.H.B. were found out of standards in 65% of samples and in H.A.P.B in 80% of the results found. As for somatic cell count, only one sample was out of standard. It is concluded that the quality of milk can be improved by providing technical and instructional assistance to producers and by appropriate hygiene of brass and milking utensils. The milk should be cooled on the farm and transported without delay to the Milk Collection Centers.(AU)

Análise bacteriológica e físico-química de leite cru resfriado, proveniente de posto de refrigeração, sob inspeção federal, em Rio Bonito, RJ

Com o objetivo de avaliar a qualidade microbiológica e fisico-química do leite cru de propriedades rurais do município de Rio Bonito-RJ e arredores, foram analisadas 20 amostras de leite provenientes de Posto de Refrigeração, subsidiado à Indústria Nestlé, coletadas de latões e de tanque de refrigeração. Realizaram-se análises microbiológicas como Contagem Total de Bactérias Heterotróficas Aeróbias Mesófilas (B.H.A.M), Contagem total de Bactérias Heterotróficas Aeróbias Psicotrófilas (B.H.A.P) seguindo as análises fisico-químicas, tais como: temperatura, acidez titulável, prova alizarol, lactofermentação, prova da redução e contagem de células somáticas. Para as variáveis da prova do alizarol houve reprovação em 20% das amostras, já para acidez 95% estavam dentro dos padrões normais. A temperatura das amostras, no ato da coleta, apresentou grandes variações em decorrência da distância e transporte inadequados. No teste da redutase apenas 15% foram consideradas boas ou ótimas e na lactofermentação 100% das amostras formaram algum tipo de coágulo. Em relação à contagem de bactérias, as B.H.A.M foram encontradas fora dos padrões em 65% das amostras e nas B.H.A.P em 80% dos resultados encontrados. Quanto à contagem de células somáticas apenas uma amostra apresentou-se fora do padrão. Conclui-se que a qualidade do leite pode ser melhorada por meio de assistência técnica e instrucional aos produtores, considerando os aspectos da legislação vigente associados à higienização adequada dos latões e utensílios de ordenha. O leite deve ser resfriado na fazenda e transportado sem delongas até a cooperativa.

With the objective of evaluating the microbiology and physicochemical quality of raw milk from rural properties in the city of Rio Bonito-RJ and surrounding areas, were analyzed 20 samples of raw milk from Refrigeration Station, subsidized by Nestlé, collected from bulk milk collectors and cooling tank. Microbiological analyzes were performed as Total Counting of Mesophilic Aerobic Heterotrophic Bacteria (MA.H.B), Total Counting of Heterotrophic Aerobic Psychophotrophic Bacteria (H.A.P.B) and physicochemical analyzes: temperature, titratable acidity, alizarol test, lactofermentation, reduction test and cell count somatic cells. For the variables of the alizarol test there was reprobation in 20% of the samples, already for acidity 95% were within normal standards. The temperature of the samples, at the time of collection, presented great variations due to inadequate distance and transport. In the reductase test only 15% were considered good or optimal and in the lactofermentation 100% of the samples formed some type of clot. Regarding bacterial counts, M.A.H.B. were found out of standards in 65% of samples and in H.A.P.B in 80% of the results found. As for somatic cell count, only one sample was out of standard. It is concluded that the quality of milk can be improved by providing technical and instructional assistance to producers and by appropriate hygiene of brass and milking utensils. The milk should be cooled on the farm and transported without delay to the Milk Collection Centers.

Histoplasmose: um risco ocupacional entre pesquisadores que realizam trabalho de campo? / Is the histoplasmosis an occupational hazard between the investigators who perform field work?

A histoplasmose é micose sistêmica causada por Histoplasma capsulatum. A infecção humana ocorre pela inalação de microconídios encontrados em solo contendo excretas de aves e/ou morcegos. Neste estudo foi enfatizado o potencial das atividades profissionais praticadas em cavernas em possibilitar risco de infecção por Histoplasma. Utilizando-se questionário semiestruturado, foram obtidas informações sobre o trabalho de campo executado por um grupo de 15 biólogos. A presença de anticorpos séricos anti-H. capsulatum foi avaliada em amostras de sangue coletadas desses profissionais. Na entrevista, 87% dos indivíduos relataram frequentes visitas a cavernas, 53% acampamento no interior das grutas; 33% capturade morcegos e 53% de coleta de amostras de solo. A maioria das cavernas situa-se nas regiões sudeste e centro-oeste do Brasil. A detecção de anticorpos por imunodifusão dupla demonstrou que 20% dos soros reagiram com o antígeno de H. capsulatum. Por immunoblotting, houve 94,1% de reconhecimento específico da fração de 94 kDa, sugerindo-se que os indivíduos entraram em contato com H. capsulatum. Este estudo sugere fortemente que a prática da espeleologia propicia a exposição dos indivíduos a espécies fúngicas que habitam saprofiticamente o meio ambiente, especialmente H. capsulatum, configurando-se como potencial fator de risco para infecções.(AU)

Histoplasmosis is a systemic mycosis caused by Histoplasma capsulatum. Human infection occurs by inhaling the microconidia found in soil contaminated with birds and/or bats excrements. In this study, the potential risk of infection with Histoplasma from practicing professional activities in caves was emphasized. Information on the fieldwork conducted by a group of 15 biologists were obtained through a semi-structuredquestionnaire; and the presence of antibodies anti-H. capsulatum was evaluated in their serum samples. The data analysis showed that 87% of subjects reported the frequent cave exploration, 53% camping inside the caves, 33% bats capturing activities, and 53% soil samples collection. The majority of the caves are located in the Southeast and Midwest regions of Brazil. By using double immunodiffusion assay, 20% of sera reacted with H. capsulatum antigen. By immunoblotting, it was found 94.1% of specific recognition of 94 kDa fraction, suggesting that the individuals had contact with the fungus. This study strongly suggests that the individuals practicing speleology were prone to fungal species exposure, which inhabit the environment as saprophytes, especially H. capsulatum, and it might characterize a potential risk factor for infections.(AU)

IDENTIFICAÇÃO, QUANTIFICAÇÃO E VIRULÊNCIA "IN VITRO" DE LEVEDURAS DA MICROBIOTA CÉRVICO-VAGINAL DE CADELAS

ANTÔNIO, Denise dos Santos Navarro. Identificação, quantificação e virulência in vitro de leveduras da microbiota cervico-vaginal de cadelas. Projeto de Dissertação (Mestrado em Medicina Veterinária, Patologia Animal). Instituto de Veterinária, Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro, Seropédica, RJ, 2015. Diferentes problemas são atualmente observados na reprodução canina, dentre os quais se destacam aqueles que levam à infertilidade, anestro persistente ou a uma baixa prolificidade. A presença de micro-organismos ou a contaminação por eles no trato genital pode ser considerada normal. Alguns animais, no entanto, apresentam mecanismos de defesa alterados e, em decorrência, pode-se observar a multiplicação de micro-organismos no trato genital, culminando em infecções clínicas e subclínicas. É parco o conhecimento da microbiota cervico vaginal de cadelas e ainda menor quando consideramos a presença de fungos filamentosos e leveduras. Também não se conhece a virulência destas leveduras, o que leva a um questionamento sobre a capacidade de estas promoverem distúrbios reprodutivos. Objetivou-se verificar as espécies de leveduras presentes na mucosa cérvico-vaginal de cadelas e o poder de virulência in vitro dos isolados por ensaios de produção de protease e fosfolipase. Foram utilizadas 40 fêmeas caninas a partir de seis meses, sem limite de idade, sem distinção com relação a raça, divididas em dois grupos: Grupo I (cadelas não ovariectomizadas) e grupo II (cadelas gestantes), as quais foram submetidas a exames clínico/ comportamental e complementares para verificar a higidez. As amostras foram coletadas por dois métodos distintos, com o swab e por meio de um lavado cérvico-vaginal, realizado com solução salina estéril. Após a coleta realizou-se mensuração do pH vaginal com fita da Macherey-Nagel. Os lavados relativos a cada animal foram mantidos sob refrigeração, para posterior processamento, incluindo-se, isolamento, identificação, quantificação e avaliação dos fatores de virulência. Para o isolamento, as amostras foram semeadas na superfície de meio de cultura Ágar Infuso Cérebro e Coração, acrescido de cloranfenicol. Em seguida, foram realizadas as provas bioquímicas necessárias para a identificação das leveduras isoladas. A avaliação da produção de protease e de fosfolipase foi realizada in vitro, utilizando-se os meios específicos, acompanhando-se o desenvolvimento das colônias e o desenvolvimento de halos relacionados com a produção destas enzimas. Das 40 cadelas utilizadas para coleta do material ginecológico, em 33 (82,5%) obteve-se o crescimento fúngico. Foram obtidos 60 isolados, sendo 21 (35,0%) identificados como Candida spp, 19 (31.66%) Malassezia spp, 13 (21,66%) Rhodotorula spp e 7 (11,66%) Trichosporon spp. Em relação a contagem de células viáveis, para o primeiro grupo a média foi de aproximadamente 24,10 + 01 e para o segundo de 36,76 + 01. Das 60 cepas testadas para produção de protease 22 (36,66%) foram negativas, 20 (33,33%) positivas e 18 (30,0%) forte positivas, e para produção de fosfolipase 27 (45,0%) foram negativas, 23 (38,33%) forte positivas e 10 (16,66%) positivas. A grande maioria das amostras isoladas apresentou algum grau de virulência se considerarmos a capacidade de produção de protease e fosfolipase. O isolamento das cepas agentes de possíveis distúrbios reprodutivos, a determinação das espécies e a avaliação dos fatores de virulência representam talvez a solução de inúmeros distúrbios ainda pouco explicados e controlados na medicina veterinária.

ANTÔNIO, Denise dos Santos Navarro. Identification, quantification and in vitro virulence yeast of microbiota cervicovaginal of bitches. Dissertation project (Master of Veterinary Medicine, Animal Pathology). Veterinary Institute. Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro, Seropédica, RJ, 2015. Different problems are currently observed in canine reproduction, among which stand out those that lead to infertility, continuing anoestrus or a low prolificacy. The presence of microorganisms or contamination by them in the genital tract can be regarded as normal. Some animals, however, have changed defense mechanisms and, consequently, can observe the multiplication of microorganisms in the genital tract, culminating in clinical and subclinical infections. It is meager the knowledge of cervical vaginal microbiota of female dogs and even smaller when considering the presence of filamentous fungi and yeasts. Also, the power of virulence of these yeasts is not known, which leads to questions about the ability of these promote reproductive disorders. The objective was to verify the species of yeast present in cervical-vaginal mucosa of female dogs and the in vitro virulence by the isolated protease and phospholipase production trials. We used 40 bitches from six months with no age limit, no distinction with respect to race, divided into two groups: Group I (not ovariectomized bitches) and group II (pregnant bitches), which were submitted to clinical/behavioral and complementary tests to check the healthiness. Samples were collected by two different methods, with the "swab" and by a cervico-vaginal lavage performed with sterile saline. After the collection was measurement of vaginal pH with ribbon Macherey-Nagel. The samples of each animal were kept under refrigeration for further processing, including, isolation, identification, quantification and evaluation of virulence factors. For isolation, the samples were sown on the surface of a Brain Heart Infusion Agar, plus chloramphenicol. Then the necessary biochemical tests for the identification of yeasts were performed. The evaluation of the production of protease and phospholipase was performed "in vitro" using the specific means, accompanying the development of the colonies and the halos development related to the production of these enzymes. Of the 40 dogs used for collection of gynecological material, in 33 (82.5%) was obtained a growth of the fungal. Were obtained 60 isolates, 21 (35.0%) identified as Candida spp, 19 (31.66%) Malassezia spp, 13 (21.66%) Rhodotorula spp and 7 (11.66%) Trichosporon spp For viable cell count of the first group average was approximately 01 + 24,10 and the second 36,76 + 01. Among the 60 strains tested for protease production 22 (36.66%) were negative, 20 (33.33%) positive and 18 (30.0%) strong positive, and for the production of phospholipase 27 (45.0%) were negative, 23 (38.33%) strong positive and 10 (16.66%) positive. The large majority of the isolates showed some degree of virulence considering the production capacity of protease and phospholipase. The isolation of strains agents of possible reproductive disorders, determination of species and the evaluation of virulence factors represent perhaps the solution of numerous disturbances poorly explained and controlled in veterinary medicine.