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Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-203424

Resumo

ANTÔNIO, Denise dos Santos Navarro. Identificação, quantificação e virulência in vitro de leveduras da microbiota cervico-vaginal de cadelas. Projeto de Dissertação (Mestrado em Medicina Veterinária, Patologia Animal). Instituto de Veterinária, Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro, Seropédica, RJ, 2015. Diferentes problemas são atualmente observados na reprodução canina, dentre os quais se destacam aqueles que levam à infertilidade, anestro persistente ou a uma baixa prolificidade. A presença de micro-organismos ou a contaminação por eles no trato genital pode ser considerada normal. Alguns animais, no entanto, apresentam mecanismos de defesa alterados e, em decorrência, pode-se observar a multiplicação de micro-organismos no trato genital, culminando em infecções clínicas e subclínicas. É parco o conhecimento da microbiota cervico vaginal de cadelas e ainda menor quando consideramos a presença de fungos filamentosos e leveduras. Também não se conhece a virulência destas leveduras, o que leva a um questionamento sobre a capacidade de estas promoverem distúrbios reprodutivos. Objetivou-se verificar as espécies de leveduras presentes na mucosa cérvico-vaginal de cadelas e o poder de virulência in vitro dos isolados por ensaios de produção de protease e fosfolipase. Foram utilizadas 40 fêmeas caninas a partir de seis meses, sem limite de idade, sem distinção com relação a raça, divididas em dois grupos: Grupo I (cadelas não ovariectomizadas) e grupo II (cadelas gestantes), as quais foram submetidas a exames clínico/ comportamental e complementares para verificar a higidez. As amostras foram coletadas por dois métodos distintos, com o swab e por meio de um lavado cérvico-vaginal, realizado com solução salina estéril. Após a coleta realizou-se mensuração do pH vaginal com fita da Macherey-Nagel. Os lavados relativos a cada animal foram mantidos sob refrigeração, para posterior processamento, incluindo-se, isolamento, identificação, quantificação e avaliação dos fatores de virulência. Para o isolamento, as amostras foram semeadas na superfície de meio de cultura Ágar Infuso Cérebro e Coração, acrescido de cloranfenicol. Em seguida, foram realizadas as provas bioquímicas necessárias para a identificação das leveduras isoladas. A avaliação da produção de protease e de fosfolipase foi realizada in vitro, utilizando-se os meios específicos, acompanhando-se o desenvolvimento das colônias e o desenvolvimento de halos relacionados com a produção destas enzimas. Das 40 cadelas utilizadas para coleta do material ginecológico, em 33 (82,5%) obteve-se o crescimento fúngico. Foram obtidos 60 isolados, sendo 21 (35,0%) identificados como Candida spp, 19 (31.66%) Malassezia spp, 13 (21,66%) Rhodotorula spp e 7 (11,66%) Trichosporon spp. Em relação a contagem de células viáveis, para o primeiro grupo a média foi de aproximadamente 24,10 + 01 e para o segundo de 36,76 + 01. Das 60 cepas testadas para produção de protease 22 (36,66%) foram negativas, 20 (33,33%) positivas e 18 (30,0%) forte positivas, e para produção de fosfolipase 27 (45,0%) foram negativas, 23 (38,33%) forte positivas e 10 (16,66%) positivas. A grande maioria das amostras isoladas apresentou algum grau de virulência se considerarmos a capacidade de produção de protease e fosfolipase. O isolamento das cepas agentes de possíveis distúrbios reprodutivos, a determinação das espécies e a avaliação dos fatores de virulência representam talvez a solução de inúmeros distúrbios ainda pouco explicados e controlados na medicina veterinária.

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ANTÔNIO, Denise dos Santos Navarro. Identification, quantification and in vitro virulence yeast of microbiota cervicovaginal of bitches. Dissertation project (Master of Veterinary Medicine, Animal Pathology). Veterinary Institute. Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro, Seropédica, RJ, 2015. Different problems are currently observed in canine reproduction, among which stand out those that lead to infertility, continuing anoestrus or a low prolificacy. The presence of microorganisms or contamination by them in the genital tract can be regarded as normal. Some animals, however, have changed defense mechanisms and, consequently, can observe the multiplication of microorganisms in the genital tract, culminating in clinical and subclinical infections. It is meager the knowledge of cervical vaginal microbiota of female dogs and even smaller when considering the presence of filamentous fungi and yeasts. Also, the power of virulence of these yeasts is not known, which leads to questions about the ability of these promote reproductive disorders. The objective was to verify the species of yeast present in cervical-vaginal mucosa of female dogs and the in vitro virulence by the isolated protease and phospholipase production trials. We used 40 bitches from six months with no age limit, no distinction with respect to race, divided into two groups: Group I (not ovariectomized bitches) and group II (pregnant bitches), which were submitted to clinical/behavioral and complementary tests to check the healthiness. Samples were collected by two different methods, with the "swab" and by a cervico-vaginal lavage performed with sterile saline. After the collection was measurement of vaginal pH with ribbon Macherey-Nagel. The samples of each animal were kept under refrigeration for further processing, including, isolation, identification, quantification and evaluation of virulence factors. For isolation, the samples were sown on the surface of a Brain Heart Infusion Agar, plus chloramphenicol. Then the necessary biochemical tests for the identification of yeasts were performed. The evaluation of the production of protease and phospholipase was performed "in vitro" using the specific means, accompanying the development of the colonies and the halos development related to the production of these enzymes. Of the 40 dogs used for collection of gynecological material, in 33 (82.5%) was obtained a growth of the fungal. Were obtained 60 isolates, 21 (35.0%) identified as Candida spp, 19 (31.66%) Malassezia spp, 13 (21.66%) Rhodotorula spp and 7 (11.66%) Trichosporon spp For viable cell count of the first group average was approximately 01 + 24,10 and the second 36,76 + 01. Among the 60 strains tested for protease production 22 (36.66%) were negative, 20 (33.33%) positive and 18 (30.0%) strong positive, and for the production of phospholipase 27 (45.0%) were negative, 23 (38.33%) strong positive and 10 (16.66%) positive. The large majority of the isolates showed some degree of virulence considering the production capacity of protease and phospholipase. The isolation of strains agents of possible reproductive disorders, determination of species and the evaluation of virulence factors represent perhaps the solution of numerous disturbances poorly explained and controlled in veterinary medicine.

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