In vitro antimicrobial activity of methanolic extracts from cutaneous secretions of Amazonian amphibians against phytopathogens of agricultural interest / Atividade antimicrobiana in vitro de extratos metanólicos de secreções cutâneas de anfíbios amazônicos sobre fitopatógenos de interesse agrícola

The biochemical defense mechanisms of amphibians involve cutaneous secretions of bioactive molecules with antimicrobial activity. This study evaluated the in vitro activity of methanolic extracts from cutaneous secretions of two amphibian species of the Bufonidae family, Rhaebo guttatus and Rhinella marina, in the control of the phytopathogens Fusarium udum, Fusarium solani, Colletotrichum truncatum, Aspergillus flavus, Rhizoctonia solani, Macrophomina phaseolina, and Calonectria pseudometrosideri. The R. guttatus extract decreased the mycelial growth of F. udum, F. solani, A. flavus, and M. phaseolina at some tested concentrations. The R. marina extract decreased the mycelial growth of C. truncatum at the concentration of 0.5 mg mL-¹, and inhibited the mycelial growth of A. flavus at concentrations of 0.1 and 0.5 mg mL-¹, which was similar to the inhibition by the positive control. The R. marina extract also decreased the microsclerotia production by R. solani at concentrations of 0.2 and 0.3 mg mL-¹. In addition, the extracts inhibited conidial sporulation and germination at varying degrees. The inhibition of appressoria formation in C. truncatum by the R. guttatus and R. marina extracts was 85-99% and 63-100%, respectively. Our results demonstrated that treatment with extracts from R. guttatus and R. marina cutaneous secretions showed antifungal activity against the studied phytopathogens.(AU)

Os mecanismos de defesa bioquímica dos anfíbios envolvem secreções cutâneas de moléculas bioativas com atividade antimicrobiana. Este estudo avaliou a atividade in vitro de extratos metanólicos da secreção cutânea de duas espécies de anfíbios da família Bufonidae, Rhaebo guttatus e Rhinella marina, no controle dos patógenos Fusarium udum, Fusarium solani, Colletotrichum truncatum, Aspergillus flavus, Rhizoctonia solani, Macrophomina phaseolina e Calonectria pseudometrosideri. O extrato de R. guttatus inibiu o crescimento micelial de F. udum, F. solani, A. flavus e M. phaseolina em algumas concentrações testadas. O extrato de R. marina inibiu o crescimento micelial de C. truncatum na concentração de 0,5 mg mL-¹, e inibiu o crescimento micelial de A. flavus nas concentrações de 0,1 e 0,5 mg mL-¹, que foi semelhante à inibição pelo controle positivo. O extrato de R. marina também diminuiu a produção de microescleródios de R. solani nas concentrações de 0,2 e 0,3 mg mL-¹. Além disso, os extratos inibiram a esporulação e germinação de conídios em graus variados. A inibição da formação de apressórios em C. truncatum pelos extratos de R. guttatus e R. marina foi de 85%-99% e 63%-100%, respectivamente. Nossos resultados demonstraram que o tratamento com extratos da secreção cutânea de R. guttatus e R. marina apresentou atividade antifúngica sobre os fitopatógenos estudados.(AU)

Characterization of Pseudomonas bacteria of Piper tuberculatum regarding the production of potentially bio-stimulating compounds for plant growth / Caracterização de bactérias Pseudomonas de Piper tuberculatum quanto à produção de compostos potencialmente bioestimulantes para o crescimento de plantas

Despite advances in the identification and characterization of endophytic bacteria in various plant species worldwide, little is known about such microorganisms in plants from the Amazon region. Previous studies reported that Piper tuberculatum endophytic Pseudomonas (isolates Pt12 and Pt13, identified as Pseudomonas putida and Pseudomonas sp., respectively) were able to inhibit the in vitro growth of Fusarium solani f. sp. piperis, which causes root rot in black pepper (Piper nigrum), and that Pt13 promoted the growth of P. nigrum. Therefore, the aim here was to characterize these bacteria regarding their ability to produce plant growth-promoting substances [siderophores, indol acetic acid (IAA) and soluble phosphate]. Chrome azurol S assays were performed for the detection of siderophores. For qualitative and quantitative assays of IAA production and phosphate solubilization, Salkowski´s reagent and NBRIP medium with molybdenum blue reagent, respectively, were used. Results revealed that Pt12 and Pt13 were able to synthesize IAA, mainly under a high concentration of L-tryptophan, indicating that they are IAA-producing bacteria, probably through a tryptophan-dependent biosynthesis pathway. The presence of P. nigrum extract positively influenced the IAA production by Pt12 and Pt13, with highest values of 125 and 90 µg mL-1, respectively. In addition, Pt12 was positive for the production of siderophores and produced 56.56 µg mL-1 of soluble phosphate. In contrast, Pt13 showed no ability to produce siderophores or to solubilize phosphate. Besides their potential in controlling plant diseases, Pt12 and Pt13 have potential as biofertilizers, favoring sustainable agriculture.(AU)

Apesar dos avanços na identificação e caracterização de bactérias endofíticas em espécies vegetais em todo o mundo, pouco se sabe sobre esses microrganismos em plantas da região amazônica. Estudos anteriores mostraram que Pseudomonas de Piper tuberculatum (isolados Pt12 e Pt13, identificados como Pseudomonas putida e Pseudomonas sp., respectivamente) são capazes de inibir Fusarium solani f. sp. piperis, que causa a podridão das raízes da pimenteira-do-reino (Piper nigrum), e que Pt13 promoveu o crescimento de P. nigrum. Portanto, o objetivo do presente trabalho foi caracterizar essas bactérias quanto à capacidade de produzir substâncias potencialmente bioestimulantes para o crescimento vegetal [sideróforos, ácido indol acético (AIA) e fosfato solúvel]. Ensaios de Cromo Azurol S foram realizados para detecção de sideróforos. Para os ensaios qualitativos e quantitativos de produção de AIA e solubilização de fosfato, foram utilizados o reagente de Salkowski e o meio NBRIP com azul de molibdênio, respectivamente. Os resultados revelaram que Pt12 e Pt13 sintetizaram AIA, principalmente sob alta concentração de L-triptofano, indicando que provavelmente utilizam uma via de biossíntese dependente deste aminoácido. A presença do extrato de P. nigrum influenciou positivamente a produção de AIA por Pt12 e Pt13, com valores máximos de 125 e 90 µg mL-1, respectivamente. Além disso, Pt12 foi positiva para produção de sideróforos e produziu 56.56 µg.mL-1 de fosfato solúvel. Em contraste, Pt13 não produziu sideróforos, nem solubilizou fosfato. Além do potencial de controle de doenças de plantas, Pt12 e Pt13 têm potencial como biofertilizantes, favorecendo a agricultura sustentável.(AU)

Effect of chitosan on the mycelial growth of Fusarium oxysporum, Rhizoctonia solani and Trichoderma spp / Efeito da quitosana no crescimento micelial de Fusarium oxysporum, Rhizoctonia solani e Trichoderma spp

Fungicides, often used in conventional farming systems, can harm humans, animals and damage the environment. Chitosan, which is extracted from the crustacean shell, has shown to be a harmless and cheap alternative to fungicides. This study aimed to test the inhibitory effect of chitosan on the mycelial growth of Fusarium oxysporum, Rhizoctonia solani and Trichoderma spp. Different concentrations of chitosan (0, 1, 2, 4, 8 and 16%) were supplemented to 1% acetic acid Potato Dextrose Agar (PDA). The fungi were inoculated in the center of the plates, incubated at 25 °C, with or without a 12-hour photoperiod. Daily measurements were performed in two transverse diameters until the mycelium reached the edges of the Petri dish. Fusarium oxysporum mycelial growth was significantly inhibited by chitosan at concentrations 1, 2, 4, and 8%, on the 4th, 5th and 6th evaluation days, in a 12-hour photoperiod. However, for Rhizoctonia solani, there was no reduction on mycelial growth. Trichoderma spp. presented the greatest mycelial reduction, in both light schemes, in all the concentrations evaluated, on days one, two and three. The results indicate that the mycelial growth of Fusarium oxysporum and Trichoderma spp. were inhibited by chitosan. Although, the combined use of chitosan and Trichoderma spp. as biocontrol agents of phytopathogens is not indicated.

Os fungicidas, frequentemente utilizados em sistemas agrícolas convencionais, podem prejudicar seres humanos, animais e danificar o meio ambiente. A quitosana, extraída da casca do crustáceo, tem se mostrado uma alternativa inofensiva e barata aos fungicidas. Este trabalho teve como objetivo testar o efeito inibitório da quitosana sobre o crescimento micelial de Fusarium oxysporum, Rhizoctonia solani e Trichoderma spp. Diferentes concentrações de quitosana (0,1, 2, 4, 8 e 16%) foram adicionadas em Batata Dextrose Agar (BDA) preparado em 1% de ácido acético. Os fungos foram inoculados no centro das placas,incubados a 25 °C, com ou sem fotoperíodo de 12 horas. Medições diárias foramrealizadas em dois diâmetros transversais até o micélio atingir as bordas da placade Petri. O crescimento micelial de Fusarium oxysporum foi significativamente inibido pela quitosana nas concentrações 1, 2, 4 e 8%, nos dias 4, 5 e 6 deavaliação, em fotoperíodo de 12 horas. No entanto, para Rhizoctonia solani não houve redução no crescimento micelial. Trichoderma spp. apresentou a maior redução micelial, em ambos os esquemas de luz, em todas as concentrações avaliadas, nos dias um, dois e três. Os resultados indicam que o crescimento micelial de Fusarium oxysporum e Trichoderma spp. foram inibidos pela quitosana. Assim, o uso combinado de quitosana e Trichoderma spp. como agentes de biocontrole de fitopatógenos não é indicado.

Effect of chitosan on the mycelial growth of Fusarium oxysporum, Rhizoctonia solani and Trichoderma spp / Efeito da quitosana no crescimento micelial de Fusarium oxysporum, Rhizoctonia solani e Trichoderma spp

Fungicides, often used in conventional farming systems, can harm humans, animals and damage the environment. Chitosan, which is extracted from the crustacean shell, has shown to be a harmless and cheap alternative to fungicides. This study aimed to test the inhibitory effect of chitosan on the mycelial growth of Fusarium oxysporum, Rhizoctonia solani and Trichoderma spp. Different concentrations of chitosan (0, 1, 2, 4, 8 and 16%) were supplemented to 1% acetic acid Potato Dextrose Agar (PDA). The fungi were inoculated in the center of the plates, incubated at 25 °C, with or without a 12-hour photoperiod. Daily measurements were performed in two transverse diameters until the mycelium reached the edges of the Petri dish. Fusarium oxysporum mycelial growth was significantly inhibited by chitosan at concentrations 1, 2, 4, and 8%, on the 4th, 5th and 6th evaluation days, in a 12-hour photoperiod. However, for Rhizoctonia solani, there was no reduction on mycelial growth. Trichoderma spp. presented the greatest mycelial reduction, in both light schemes, in all the concentrations evaluated, on days one, two and three. The results indicate that the mycelial growth of Fusarium oxysporum and Trichoderma spp. were inhibited by chitosan. Although, the combined use of chitosan and Trichoderma spp. as biocontrol agents of phytopathogens is not indicated.(AU)

Os fungicidas, frequentemente utilizados em sistemas agrícolas convencionais, podem prejudicar seres humanos, animais e danificar o meio ambiente. A quitosana, extraída da casca do crustáceo, tem se mostrado uma alternativa inofensiva e barata aos fungicidas. Este trabalho teve como objetivo testar o efeito inibitório da quitosana sobre o crescimento micelial de Fusarium oxysporum, Rhizoctonia solani e Trichoderma spp. Diferentes concentrações de quitosana (0,1, 2, 4, 8 e 16%) foram adicionadas em Batata Dextrose Agar (BDA) preparado em 1% de ácido acético. Os fungos foram inoculados no centro das placas,incubados a 25 °C, com ou sem fotoperíodo de 12 horas. Medições diárias foramrealizadas em dois diâmetros transversais até o micélio atingir as bordas da placade Petri. O crescimento micelial de Fusarium oxysporum foi significativamente inibido pela quitosana nas concentrações 1, 2, 4 e 8%, nos dias 4, 5 e 6 deavaliação, em fotoperíodo de 12 horas. No entanto, para Rhizoctonia solani não houve redução no crescimento micelial. Trichoderma spp. apresentou a maior redução micelial, em ambos os esquemas de luz, em todas as concentrações avaliadas, nos dias um, dois e três. Os resultados indicam que o crescimento micelial de Fusarium oxysporum e Trichoderma spp. foram inibidos pela quitosana. Assim, o uso combinado de quitosana e Trichoderma spp. como agentes de biocontrole de fitopatógenos não é indicado.(AU)

Desempenho produtivo de maracujazeiro amarelo em área com Fusarium solani / Yellow passion fruit productive performance in area with fusarium

O uso de porta-enxertos tolerantes apresenta bons resultados no manejo da murcha de Fusarium (Fusarium solani) no maracujazeiro-amarelo(Passiflora edulis Sims), considerada um dos principais problemas na cultura, que afeta o sistema radicular da planta e não tem controle químico. O presente trabalho teve po robjetivo avaliar a sobrevivência, o desempenho agronômico de plantas e as características físicas de frutos de maracujazeiro-amarelo (Passiflora edulis Sims) enxertadas em diferentes porta-enxertos em área com murcha de Fusarium. O experimento foi conduzido no Sítio Bela Vista, localizado no município de Pracinha, SP, no período de agosto de 2014 a maio de 2015, e adotou-se o delineamento em blocos ao acaso, com cinco tratamentos, cinco repetições e quatro plantas por parcela. Os tratamentos utilizados foram os porta-enxertos: P. alata Dryand, P. gibertii N.E. Brown, P. caerulea Linnaeus, enxertia dupla P.gibertiix P.edulise plantas sem enxerto. Avaliaram-se o diâmetro do caule do porta-enxerto e do enxerto, o comprimento de ramos secundários, o número de ramos terciários, o número de plantas sobreviventes, os diâmetros longitudinal e transversal dos frutos, o número e a massa de frutos e a produtividade. O maior diâmetro do porta-enxerto foi observado em Passiflora alata enquanto que na região do enxerto foi em plantas de Passiflora edulis. O comprimento dos ramos secundários e o número de ramos terciários foram afetados pelo tipo de enxertia e pelo porta-enxerto utilizado. As maiores sobrevivências de plantas foram observadas em Passiflora alata (90%)e Passifloragibertii (100%).O maior número de frutos por planta e produtividade ocorreram em plantas enxertadas sobre P. gibertii.A adoção da enxertia dupla utilizando-se Passiflora gibertii x Passiflora edulis e a enxertia simples com Passiflora caerulea não se mostraram eficientes no controle desta doença. As espécies Passiflora gibertiie Passiflora alata apresentaram potencial para serem utilizados como porta-enxertos para o maracujazeiro-amarelo.

The use of tolerant rootstocks has shown good results in the control of Fusarium wilt in yellow passion fruit, which is considered one of the main problems in the crop as it affects the plant’s root system and has no chemical control. The present study aimed to evaluate the survival rates, the agronomic performance of the plants and the physical characteristics of the yellow passion fruit (Passiflora edulisSims) grafted on different root stocks in area with Fusarium wilt. The experiment was carried in Pracinha, in the State of São Paulo, Brazil, from August 2014 to May 2015, and a randomized block design was adopted, with five treatments, five replications and four plants per plot. The treatments were constituted by the following rootstocks: Passiflora alata Dryand, Passiflora gibertii N.E. Brown, Passiflora caerulea Linnaeus, double grafting P. gibertii x P. edulis and plants without grafting. The stem diameter of rootstock and the graft, the lenght of secondary branches, the number of tertiary branches, the number of surviving plants, the longitudinal and transversal diameters of the fruits, the number and mass of fruits and the productivity were evaluated. The largest diameter of the rootstock was observed in Passiflora alata while in the graft it was in plants of Passifloraedulis. The length of the secondarty branches and the number of tertiary branches were affected by the type of grafting and the rootstock used. The highest survival rates were observed in Passiflor aalata (90%)and Passiflora gibertii (100%).The highest number of fruits per plant and productivity occurred in plants grafted on Passiflora gibertii. The adoption of double grafting using Passiflora gibertii x Passiflora edulis and simple grafting with Passiflora caerulea were not effective in the control of this disease. The species Passiflora gibertii and Passiflora alata showed the potential to be used as a rootstock for yellow passion fruit.

Desempenho produtivo de maracujazeiro amarelo em área com Fusarium solani / Yellow passion fruit productive performance in area with fusarium

O uso de porta-enxertos tolerantes apresenta bons resultados no manejo da murcha de Fusarium (Fusarium solani) no maracujazeiro-amarelo(Passiflora edulis Sims), considerada um dos principais problemas na cultura, que afeta o sistema radicular da planta e não tem controle químico. O presente trabalho teve po robjetivo avaliar a sobrevivência, o desempenho agronômico de plantas e as características físicas de frutos de maracujazeiro-amarelo (Passiflora edulis Sims) enxertadas em diferentes porta-enxertos em área com murcha de Fusarium. O experimento foi conduzido no Sítio Bela Vista, localizado no município de Pracinha, SP, no período de agosto de 2014 a maio de 2015, e adotou-se o delineamento em blocos ao acaso, com cinco tratamentos, cinco repetições e quatro plantas por parcela. Os tratamentos utilizados foram os porta-enxertos: P. alata Dryand, P. gibertii N.E. Brown, P. caerulea Linnaeus, enxertia dupla P.gibertiix P.edulise plantas sem enxerto. Avaliaram-se o diâmetro do caule do porta-enxerto e do enxerto, o comprimento de ramos secundários, o número de ramos terciários, o número de plantas sobreviventes, os diâmetros longitudinal e transversal dos frutos, o número e a massa de frutos e a produtividade. O maior diâmetro do porta-enxerto foi observado em Passiflora alata enquanto que na região do enxerto foi em plantas de Passiflora edulis. O comprimento dos ramos secundários e o número de ramos terciários foram afetados pelo tipo de enxertia e pelo porta-enxerto utilizado. As maiores sobrevivências de plantas foram observadas em Passiflora alata (90%)e Passifloragibertii (100%).O maior número de frutos por planta e produtividade ocorreram em plantas enxertadas sobre P. gibertii.A adoção da enxertia dupla utilizando-se Passiflora gibertii x Passiflora edulis e a enxertia simples com Passiflora caerulea não se mostraram eficientes no controle desta doença. As espécies Passiflora gibertiie Passiflora alata apresentaram potencial para serem utilizados como porta-enxertos para o maracujazeiro-amarelo.(AU)

The use of tolerant rootstocks has shown good results in the control of Fusarium wilt in yellow passion fruit, which is considered one of the main problems in the crop as it affects the plants root system and has no chemical control. The present study aimed to evaluate the survival rates, the agronomic performance of the plants and the physical characteristics of the yellow passion fruit (Passiflora edulisSims) grafted on different root stocks in area with Fusarium wilt. The experiment was carried in Pracinha, in the State of São Paulo, Brazil, from August 2014 to May 2015, and a randomized block design was adopted, with five treatments, five replications and four plants per plot. The treatments were constituted by the following rootstocks: Passiflora alata Dryand, Passiflora gibertii N.E. Brown, Passiflora caerulea Linnaeus, double grafting P. gibertii x P. edulis and plants without grafting. The stem diameter of rootstock and the graft, the lenght of secondary branches, the number of tertiary branches, the number of surviving plants, the longitudinal and transversal diameters of the fruits, the number and mass of fruits and the productivity were evaluated. The largest diameter of the rootstock was observed in Passiflora alata while in the graft it was in plants of Passifloraedulis. The length of the secondarty branches and the number of tertiary branches were affected by the type of grafting and the rootstock used. The highest survival rates were observed in Passiflor aalata (90%)and Passiflora gibertii (100%).The highest number of fruits per plant and productivity occurred in plants grafted on Passiflora gibertii. The adoption of double grafting using Passiflora gibertii x Passiflora edulis and simple grafting with Passiflora caerulea were not effective in the control of this disease. The species Passiflora gibertii and Passiflora alata showed the potential to be used as a rootstock for yellow passion fruit.(AU)

Culture media to detect and criteria to evaluate and report the activity of extracellular enzymes produced by phytopathogenic fungi / Meios de cultura para detectar e critérios para avaliar e divulgar atividade de enzimas extracelulares produzidas por fungos fitopatogênicos

Extracellular enzymes are involved in the fungal pathogenesis in plants. Currently, culture media, data analyses, and data report related to extracellular enzymes produced in vitro conditions are different and therefore, lack standardization. This work aimed to compare the culture media cited on the literature (normal) with the potato-dextrose-agar (PDA) medium combined with a specific compound to produce extracellular enzymes through three soilborne phytopathogenic fungi (F. solani f. sp. passiflorae, S. rolfsii, and R. solani AG-4 HGI), as well as to analyze and report enzyme data based on five different criteria. The assay was randomized, with three factors (culture media, isolates, and enzymes) and six repetitions. The studied enzymes were amylase (AM), carboxymethylcellulase (CMCase), lipase (LP), laccase (LC), catalase (CT), and gelatinase (GT). The normal media detected more enzymes and was more precise compared to the PDA medium plus specific compound. The criteria that calculated the area of the circular crown of AM, CMCase, LP, and LC and measured the intensity (0 = absence, up to 4 = intense) of CT and GT adopting note scale were the best to evaluate and report the results of the enzymes. We suggest the normal media culture to study enzyme production, as well as the criteria mentioned to assess and report the data related to enzyme activities.(AU)

As enzimas extracelulares estão envolvidas na patogênese de fungos em plantas. Atualmente, não há uma padronização de meios de cultura, formas de analisar e divulgar os dados de enzimas extracelulares produzidas em condições in vitro. Assim, o presente trabalho objetivou comparar os meios de cultura específicos relatados na literatura (normal) com o meio de batata-dextrose-ágar mais adição do substrato específico para produção de enzimas extracelulares por três diferentes fungos fitopatogênicos habitantes de solo (Fusarium solani f. sp. passiflorae, Sclerotium rolfsii e Rhizoctonia solani AG-4 HGI), bem como avaliar os dados das enzimas por cinco critérios diferentes. O delineamento experimental adotado foi o inteiramente ao acaso, em esquema de três fatores (meios, isolados e enzimas), com seis repetições. As enzimas investigadas foram amilase, carboximetilcelulase, lipase, lacase, catalase e gelatinase. Os meios normais detectaram mais enzimas, e essa detecção foi mais precisa em comparação com os meios de batata-dextrose-ágar mais o substrato específico. Os critérios que calcularam a área da coroa circular para as enzimas amilase, carboximetilcelulase, lipase e lacase e adotaram a escala de notas para medir a intensidade (0=ausência até 4=intensa) de catalase e gelatinase foram os melhores para avaliar e divulgar os resultados das enzimas. Assim, sugere-se padronizar os meios normais para estudos de produção de enzimas, bem como os critérios citados para avaliar e divulgar os dados das atividades das referidas enzimas.(AU)

Culture media to detect and criteria to evaluate and report the activity of extracellular enzymes produced by phytopathogenic fungi / Meios de cultura para detectar e critérios para avaliar e divulgar atividade de enzimas extracelulares produzidas por fungos fitopatogênicos

Extracellular enzymes are involved in the fungal pathogenesis in plants. Currently, culture media, data analyses, and data report related to extracellular enzymes produced in vitro conditions are different and therefore, lack standardization. This work aimed to compare the culture media cited on the literature (normal) with the potato-dextrose-agar (PDA) medium combined with a specific compound to produce extracellular enzymes through three soilborne phytopathogenic fungi (F. solani f. sp. passiflorae, S. rolfsii, and R. solani AG-4 HGI), as well as to analyze and report enzyme data based on five different criteria. The assay was randomized, with three factors (culture media, isolates, and enzymes) and six repetitions. The studied enzymes were amylase (AM), carboxymethylcellulase (CMCase), lipase (LP), laccase (LC), catalase (CT), and gelatinase (GT). The normal media detected more enzymes and was more precise compared to the PDA medium plus specific compound. The criteria that calculated the area of the circular crown of AM, CMCase, LP, and LC and measured the intensity (0 = absence, up to 4 = intense) of CT and GT adopting note scale were the best to evaluate and report the results of the enzymes. We suggest the normal media culture to study enzyme production, as well as the criteria mentioned to assess and report the data related to enzyme activities.(AU)

As enzimas extracelulares estão envolvidas na patogênese de fungos em plantas. Atualmente, não há uma padronização de meios de cultura, formas de analisar e divulgar os dados de enzimas extracelulares produzidas em condições in vitro. Assim, o presente trabalho objetivou comparar os meios de cultura específicos relatados na literatura (normal) com o meio de batata-dextrose-ágar mais adição do substrato específico para produção de enzimas extracelulares por três diferentes fungos fitopatogênicos habitantes de solo (Fusarium solani f. sp. passiflorae, Sclerotium rolfsii e Rhizoctonia solani AG-4 HGI), bem como avaliar os dados das enzimas por cinco critérios diferentes. O delineamento experimental adotado foi o inteiramente ao acaso, em esquema de três fatores (meios, isolados e enzimas), com seis repetições. As enzimas investigadas foram amilase, carboximetilcelulase, lipase, lacase, catalase e gelatinase. Os meios normais detectaram mais enzimas, e essa detecção foi mais precisa em comparação com os meios de batata-dextrose-ágar mais o substrato específico. Os critérios que calcularam a área da coroa circular para as enzimas amilase, carboximetilcelulase, lipase e lacase e adotaram a escala de notas para medir a intensidade (0=ausência até 4=intensa) de catalase e gelatinase foram os melhores para avaliar e divulgar os resultados das enzimas. Assim, sugere-se padronizar os meios normais para estudos de produção de enzimas, bem como os critérios citados para avaliar e divulgar os dados das atividades das referidas enzimas.(AU)

Efeito combinado de carvacrol e tiabendazol contra Colletotrichum gloesporioides, Fusarium solani e Alternaria alternata / Combined effect of carvacrol and thiabendazole against Colletotrichum gloesporioides, Fusarium solani and Alternaria alternata

O objetivo deste trabalho foi determinar a atividade antimicrobiana do carvacrol e sua combinação com tiabendazol no controle de fungos patogênicos deteriorantes de frutas (Colletotrichum gloesporioides, Fusarium solani e Alternaria alternata). O carvacrol apresentou uma concentração inibitória mínima (CIM) de 282 a 563 μg mL-1 para os fungos testados. Quando avaliado em conjunto com o tiabendazol apresentou efeito aditivo contra C. gloesporioides e F. solani (FICI 0,5 e 1,0, respectivamente) e sinérgico contra a A.alternata (FICI 0,1). Houve redução da CIM do carvacrol de 50 a 88%. Este estudo mostra o potencial do uso.(AU)

Efeito combinado de carvacrol e tiabendazol contra Colletotrichum gloesporioides, Fusarium solani e Alternaria alternata / Combined effect of carvacrol and thiabendazole against Colletotrichum gloesporioides, Fusarium solani and Alternaria alternata

O objetivo deste trabalho foi determinar a atividade antimicrobiana do carvacrol e sua combinação com tiabendazol no controle de fungos patogênicos deteriorantes de frutas (Colletotrichum gloesporioides, Fusarium solani e Alternaria alternata). O carvacrol apresentou uma concentração inibitória mínima (CIM) de 282 a 563 μg mL-1 para os fungos testados. Quando avaliado em conjunto com o tiabendazol apresentou efeito aditivo contra C. gloesporioides e F. solani (FICI 0,5 e 1,0, respectivamente) e sinérgico contra a A.alternata (FICI 0,1). Houve redução da CIM do carvacrol de 50 a 88%. Este estudo mostra o potencial do uso.

Inoculation methods and aggressiveness of five Fusarium species against peach palm / Métodos de inoculação e agressividade de cinco espécies de Fusarium à pupunheira

Fusarium wilt is a major disease which affects peach palm (Bactris gasipaes Kunth.var gasipaes Henderson). This study aimed to evaluate inoculation methods and aggressiveness of isolates of five Fusarium species on peach palm. Fusarium proliferatum can infect the leaves, stem, and roots of peach palm. F. proliferatum, F. oxysporum species complex (FOSC), F. verticillioides, F. solani species complex (FSSC), and Gibberella fujikuroi species complex (GFSC) are pathogenic to peach palm. The use of Fusarium-colonized ground corn for root inoculation was effective and reduced the level of damage to plants.(AU)

A fusariose é uma das principais doenças da pupunheira (Bactris gasipaes Kunth.var gasipaes Henderson). O objetivo deste trabalho foi avaliar métodos de inoculação e a agressividade de isolados de cinco espécies de Fusarium à pupunheira. Demonstrou-se que Fusarium proliferatum pode infectar folhas, caule e raízes de pupunheira. Verificou-se que as espécies F. proliferatum, F. oxysporum species complex (FOSC), F. verticillioides, F. solani species complex (FSSC) e Gibberella. fujikuroi species complex (GFSC) são patogênicas à pupunheira e, que o uso da quirera colonizada por Fusarium para inoculação de raízes foi efetivo e reduziu o nível de injúrias às plantas.(AU)

Inoculation methods and aggressiveness of five Fusarium species against peach palm / Métodos de inoculação e agressividade de cinco espécies de Fusarium à pupunheira

Fusarium wilt is a major disease which affects peach palm (Bactris gasipaes Kunth.var gasipaes Henderson). This study aimed to evaluate inoculation methods and aggressiveness of isolates of five Fusarium species on peach palm. Fusarium proliferatum can infect the leaves, stem, and roots of peach palm. F. proliferatum, F. oxysporum species complex (FOSC), F. verticillioides, F. solani species complex (FSSC), and Gibberella fujikuroi species complex (GFSC) are pathogenic to peach palm. The use of Fusarium-colonized ground corn for root inoculation was effective and reduced the level of damage to plants.

A fusariose é uma das principais doenças da pupunheira (Bactris gasipaes Kunth.var gasipaes Henderson). O objetivo deste trabalho foi avaliar métodos de inoculação e a agressividade de isolados de cinco espécies de Fusarium à pupunheira. Demonstrou-se que Fusarium proliferatum pode infectar folhas, caule e raízes de pupunheira. Verificou-se que as espécies F. proliferatum, F. oxysporum species complex (FOSC), F. verticillioides, F. solani species complex (FSSC) e Gibberella. fujikuroi species complex (GFSC) são patogênicas à pupunheira e, que o uso da quirera colonizada por Fusarium para inoculação de raízes foi efetivo e reduziu o nível de injúrias às plantas.

Phytochemistry, antioxidant potential and antifungal of Byrsonima crassifolia on soil phytopathogen control

Abstract The use of chemical defensives to control fungal diseases has by consequence to impact negatively over the environment and human health, this way, the use of plant extracts with antifungal properties along with proper cultural management makes viable an alternative plant production control, specially for familiar and organic cultures. The objective of this study was to perform phytochemical and antioxidant analysis of Byrsonima crassifolia (canjiqueira) barks and evaluate its antifungal potential over Fusarium solani and Sclerotinia sclerotiorum mycelial growth. The ethanol extract from plants collected in Pantanal, Mato Grosso do Sul, Brazil was submitted to phytochemical prospection, total phenol and flavonoids quantification and antioxidant activiy determination (DPPH). To evaluate antifungal activity concentrations of 800, 1200, 1600, 2000 and 2400 µg 100 mL-1 of ethanol extract were used. Which concentration was separately incorporated in agar (PDA) and shed in Petri dishes, followed by the fungi mycelial disc where the colonies diameter was measured daily. Negatives control with agar without extract and agar with an ethanol solution were used. The B. crassifolia ethanol extract presented inhibitory activity over the fungi studied where concentrations of 800 and 1600 µg 100 mL-1, inhibited 38% of the mycelial growth of F. solani; to S. sclerotiorum the best concentration was 2400 µg 100 mL1, reducing 37.5%. The antifungal bark extract potential of this specie is attributed to phenolic compounds and to triterpenes derivatives.

Resumo A aplicação de defensivos químicos para o controle de doenças fúngicas tem por consequência impactos sobre o ambiente e a saúde humana, dessa forma, a utilização de extratos vegetais com propriedades antifúngicas associado ao manejo adequado de culturas, torna-se uma proposta viável de controle alternativo, principalmente na agricultura orgânica e familiar. Neste sentido, objetivou-se neste trabalho realizar a análise fitoquímica e antioxidante das cascas de Byrsonima crassifolia (canjiqueira) e avaliar seu potencial antifúngico sobre o crescimento micelial de Fusarium solani e Sclerotinia sclerotiorum. O extrato etanólico das cascas da planta, coletadas no Pantanal do Rio Negro, em Mato Grosso do Sul, foi submetido à prospecção fitoquímica, quantificação de fenóis totais e flavonoides e determinação da atividade antioxidante (DPPH). Para a avaliação da atividade antifúngica foram utilizadas as concentrações de 800, 1200, 1600, 2000 e 2400 µg 100 mL-1 do extrato etanólico. Cada concentração foi incorporada, separadamente, em ágar BDA, e vertida em placas de petri, seguido do disco de micélio do fungo, onde o diâmetro das colônias foi medido diariamente. Utilizou-se como controle negativo, ágar sem extrato e ágar com solução etanólica. O extrato etanólico de B. crassifolia apresentou atividade inibitória sobre os fungos estudados, onde as concentrações de 800 e 1600 µg 100 mL-1, inibiram 38% do crescimento micelial de F. solani; para S. sclerotiorum, a melhor concentração foi de 2400 µg 100 mL1, com 37,5% de redução de crescimento. Atribui-se o potencial antifúngico do extrato da casca da espécie aos compostos fenólicos e derivados de triterpenos.

Phytochemistry, antioxidant potential and antifungal of Byrsonima crassifolia on soil phytopathogen control

Abstract The use of chemical defensives to control fungal diseases has by consequence to impact negatively over the environment and human health, this way, the use of plant extracts with antifungal properties along with proper cultural management makes viable an alternative plant production control, specially for familiar and organic cultures. The objective of this study was to perform phytochemical and antioxidant analysis of Byrsonima crassifolia (canjiqueira) barks and evaluate its antifungal potential over Fusarium solani and Sclerotinia sclerotiorum mycelial growth. The ethanol extract from plants collected in Pantanal, Mato Grosso do Sul, Brazil was submitted to phytochemical prospection, total phenol and flavonoids quantification and antioxidant activiy determination (DPPH). To evaluate antifungal activity concentrations of 800, 1200, 1600, 2000 and 2400 µg 100 mL-1 of ethanol extract were used. Which concentration was separately incorporated in agar (PDA) and shed in Petri dishes, followed by the fungi mycelial disc where the colonies diameter was measured daily. Negatives control with agar without extract and agar with an ethanol solution were used. The B. crassifolia ethanol extract presented inhibitory activity over the fungi studied where concentrations of 800 and 1600 µg 100 mL-1, inhibited 38% of the mycelial growth of F. solani; to S. sclerotiorum the best concentration was 2400 µg 100 mL1, reducing 37.5%. The antifungal bark extract potential of this specie is attributed to phenolic compounds and to triterpenes derivatives.

Resumo A aplicação de defensivos químicos para o controle de doenças fúngicas tem por consequência impactos sobre o ambiente e a saúde humana, dessa forma, a utilização de extratos vegetais com propriedades antifúngicas associado ao manejo adequado de culturas, torna-se uma proposta viável de controle alternativo, principalmente na agricultura orgânica e familiar. Neste sentido, objetivou-se neste trabalho realizar a análise fitoquímica e antioxidante das cascas de Byrsonima crassifolia (canjiqueira) e avaliar seu potencial antifúngico sobre o crescimento micelial de Fusarium solani e Sclerotinia sclerotiorum. O extrato etanólico das cascas da planta, coletadas no Pantanal do Rio Negro, em Mato Grosso do Sul, foi submetido à prospecção fitoquímica, quantificação de fenóis totais e flavonoides e determinação da atividade antioxidante (DPPH). Para a avaliação da atividade antifúngica foram utilizadas as concentrações de 800, 1200, 1600, 2000 e 2400 µg 100 mL-1 do extrato etanólico. Cada concentração foi incorporada, separadamente, em ágar BDA, e vertida em placas de petri, seguido do disco de micélio do fungo, onde o diâmetro das colônias foi medido diariamente. Utilizou-se como controle negativo, ágar sem extrato e ágar com solução etanólica. O extrato etanólico de B. crassifolia apresentou atividade inibitória sobre os fungos estudados, onde as concentrações de 800 e 1600 µg 100 mL-1, inibiram 38% do crescimento micelial de F. solani; para S. sclerotiorum, a melhor concentração foi de 2400 µg 100 mL1, com 37,5% de redução de crescimento. Atribui-se o potencial antifúngico do extrato da casca da espécie aos compostos fenólicos e derivados de triterpenos.

Phytochemistry, antioxidant potential and antifungal of Byrsonima crassifolia on soil phytopathogen control / Fitoquímica, potencial antioxidante e antifúngico de Byrsonima crassifolia nocontrole de fitopatógenos de solo

The use of chemical defensives to control fungal diseases has by consequence to impact negatively over the environment and human health, this way, the use of plant extracts with antifungal properties along with proper cultural management makes viable an alternative plant production control, specially for familiar and organic cultures. The objective of this study was to perform phytochemical and antioxidant analysis of Byrsonima crassifolia (canjiqueira) barks and evaluate its antifungal potential over Fusarium solani and Sclerotinia sclerotiorum mycelial growth. The ethanol extract from plants collected in Pantanal, Mato Grosso do Sul, Brazil was submitted to phytochemical prospection, total phenol and flavonoids quantification and antioxidant activiy determination (DPPH). To evaluate antifungal activity concentrations of 800, 1200, 1600, 2000 and 2400 µg 100 mL-1 of ethanol extract were used. Which concentration was separately incorporated in agar (PDA) and shed in Petri dishes, followed by the fungi mycelial disc where the colonies diameter was measured daily. Negatives control with agar without extract and agar with an ethanol solution were used. The B. crassifolia ethanol extract presented inhibitory activity over the fungi studied where concentrations of 800 and 1600 µg 100 mL-1, inhibited 38% of the mycelial growth of F. solani; to S. sclerotiorum the best concentration was 2400 µg 100 mL1, reducing 37.5%. The antifungal bark extract potential of this specie is attributed to phenolic compounds and to triterpenes derivatives.(AU)

A aplicação de defensivos químicos para o controle de doenças fúngicas tem por consequência impactos sobre o ambiente e a saúde humana, dessa forma, a utilização de extratos vegetais com propriedades antifúngicas associado ao manejo adequado de culturas, torna-se uma proposta viável de controle alternativo, principalmente na agricultura orgânica e familiar. Neste sentido, objetivou-se neste trabalho realizar a análise fitoquímica e antioxidante das cascas de Byrsonima crassifolia (canjiqueira) e avaliar seu potencial antifúngico sobre o crescimento micelial de Fusarium solani e Sclerotinia sclerotiorum. O extrato etanólico das cascas da planta, coletadas no Pantanal do Rio Negro, em Mato Grosso do Sul, foi submetido à prospecção fitoquímica, quantificação de fenóis totais e flavonoides e determinação da atividade antioxidante (DPPH). Para a avaliação da atividade antifúngica foram utilizadas as concentrações de 800, 1200, 1600, 2000 e 2400 µg 100 mL-1 do extrato etanólico. Cada concentração foi incorporada, separadamente, em ágar BDA, e vertida em placas de petri, seguido do disco de micélio do fungo, onde o diâmetro das colônias foi medido diariamente. Utilizou-se como controle negativo, ágar sem extrato e ágar com solução etanólica. O extrato etanólico de B. crassifolia apresentou atividade inibitória sobre os fungos estudados, onde as concentrações de 800 e 1600 µg 100 mL-1, inibiram 38% do crescimento micelial de F. solani; para S. sclerotiorum, a melhor concentração foi de 2400 µg 100 mL1, com 37,5% de redução de crescimento. Atribui-se o potencial antifúngico do extrato da casca da espécie aos compostos fenólicos e derivados de triterpenos.(AU)

Improved antifungal activity of barley derived chitinase I gene that overexpress a 32 kDa recombinant chitinase in Escherichia coli host

Abstract Agricultural crops suffer many diseases, including fungal and bacterial infections, causing significant yield losses. The identification and characterisation of pathogenesis-related protein genes, such as chitinases, can lead to reduction in pathogen growth, thereby increasing tolerance against fungal pathogens. In the present study, the chitinase I gene was isolated from the genomic DNA of Barley (Hordeum vulgare L.) cultivar, Haider-93. The isolated DNA was used as template for the amplification of the 935 bp full-length chitinase I gene. Based on the sequence of the amplified gene fragment, class I barley chitinase shares 93% amino acid sequence homology with class II wheat chitinase. Interestingly, barley class I chitinase and class II chitinase do not share sequence homology. Furthermore, the amplified fragment was expressed in Escherichia coli Rosetta strain under the control of T7 promoter in pET 30a vector. Recombinant chitinase protein of 35 kDa exhibited highest expression at 0.5 mM concentration of IPTG. Expressed recombinant protein of 35 kDa was purified to homogeneity with affinity chromatography. Following purification, a Western blot assay for recombinant chitinase protein measuring 35 kDa was developed with His-tag specific antibodies. The purified recombinant chitinase protein was demonstrated to inhibit significantly the important phytopathogenic fungi Alternaria solani, Fusarium spp, Rhizoctonia solani and Verticillium dahliae compared to the control at concentrations of 80 µg and 200 µg.

Improved antifungal activity of barley derived chitinase I gene that overexpress a 32 kDa recombinant chitinase in Escherichia coli host

Agricultural crops suffer many diseases, including fungal and bacterial infections, causing significant yield losses. The identification and characterisation of pathogenesis-related protein genes, such as chitinases, can lead to reduction in pathogen growth, thereby increasing tolerance against fungal pathogens. In the present study, the chitinase I gene was isolated from the genomic DNA of Barley (Hordeum vulgare L.) cultivar, Haider-93. The isolated DNA was used as template for the amplification of the ∼935 bp full-length chitinase I gene. Based on the sequence of the amplified gene fragment, class I barley chitinase shares 93% amino acid sequence homology with class II wheat chitinase. Interestingly, barley class I chitinase and class II chitinase do not share sequence homology. Furthermore, the amplified fragment was expressed in Escherichia coli Rosetta strain under the control of T7 promoter in pET 30a vector. Recombinant chitinase protein of 35 kDa exhibited highest expression at 0.5 mM concentration of IPTG. Expressed recombinant protein of 35 kDa was purified to homogeneity with affinity chromatography. Following purification, a Western blot assay for recombinant chitinase protein measuring 35 kDa was developed with His-tag specific antibodies. The purified recombinant chitinase protein was demonstrated to inhibit significantly the important phytopathogenic fungi Alternaria solani, Fusarium spp, Rhizoctonia solani and Verticillium dahliae compared to the control at concentrations of 80 µg and 200 µg.(AU)

Efficiency of garden waste compost teas on tomato growth and its suppressiveness against soilborne pathogens

The use of compost teas is of great interest to sustainable agriculture. Aerated compost tea (ACT) and aerated vermicompost tea (AVT) originating from garden waste have been analytically characterized and tested in vitro and in vivo on tomato plants to determine their suppressive effect on Rhizoctonia solani and Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici. The nitrogen (N, 3840 ppm) and potassium superoxide (K2O, 5800 ppm) contents were relevant in ACT. Both ACT and AVT were shown to contain indoleacetic acid IAA (80 - 20 mg L−1), salicylic acid (5.85 - 1.33 ng L−1) and humic acids (190 - 140 mg L−1). Direct confrontation assays against the pathogens showed that ACT had a high suppressive effect on F. oxysporum f. sp. lycopersici (relative growth of the pathogen [RG]: 12 %) and AVT had a high suppressive effect on R. solani (RG: 18 %). These suppressive effects have been confirmed by tests performed in vitro and on potted tomato plants. Results of plants growth assays showed that both teas can be applied, in their concentrated forms, to the growth medium. The analysis of the growth effect of the teas on tomato plants clearly indicated that both ACT and AVT, when applied weekly, produce a positive effect on shoot and root dry weight (dry weights were tripled), chlorophyll content and stem diameter compared to untreated plants. These results support the use of ACT and AVT as potential alternatives to the application of synthetic fungicides, and as plant promoters in crop production, for attaining environmental sustainability for farming and food safety.

Efficiency of garden waste compost teas on tomato growth and its suppressiveness against soilborne pathogens

The use of compost teas is of great interest to sustainable agriculture. Aerated compost tea (ACT) and aerated vermicompost tea (AVT) originating from garden waste have been analytically characterized and tested in vitro and in vivo on tomato plants to determine their suppressive effect on Rhizoctonia solani and Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici. The nitrogen (N, 3840 ppm) and potassium superoxide (K2O, 5800 ppm) contents were relevant in ACT. Both ACT and AVT were shown to contain indoleacetic acid IAA (80 - 20 mg L−1), salicylic acid (5.85 - 1.33 ng L−1) and humic acids (190 - 140 mg L−1). Direct confrontation assays against the pathogens showed that ACT had a high suppressive effect on F. oxysporum f. sp. lycopersici (relative growth of the pathogen [RG]: 12 %) and AVT had a high suppressive effect on R. solani (RG: 18 %). These suppressive effects have been confirmed by tests performed in vitro and on potted tomato plants. Results of plants growth assays showed that both teas can be applied, in their concentrated forms, to the growth medium. The analysis of the growth effect of the teas on tomato plants clearly indicated that both ACT and AVT, when applied weekly, produce a positive effect on shoot and root dry weight (dry weights were tripled), chlorophyll content and stem diameter compared to untreated plants. These results support the use of ACT and AVT as potential alternatives to the application of synthetic fungicides, and as plant promoters in crop production, for attaining environmental sustainability for farming and food safety.(AU)

Phytochemistry, antioxidant potential and antifungal of Byrsonima crassifolia on soil phytopathogen control

Abstract The use of chemical defensives to control fungal diseases has by consequence to impact negatively over the environment and human health, this way, the use of plant extracts with antifungal properties along with proper cultural management makes viable an alternative plant production control, specially for familiar and organic cultures. The objective of this study was to perform phytochemical and antioxidant analysis of Byrsonima crassifolia (canjiqueira) barks and evaluate its antifungal potential over Fusarium solani and Sclerotinia sclerotiorum mycelial growth. The ethanol extract from plants collected in Pantanal, Mato Grosso do Sul, Brazil was submitted to phytochemical prospection, total phenol and flavonoids quantification and antioxidant activiy determination (DPPH). To evaluate antifungal activity concentrations of 800, 1200, 1600, 2000 and 2400 µg 100 mL-1 of ethanol extract were used. Which concentration was separately incorporated in agar (PDA) and shed in Petri dishes, followed by the fungi mycelial disc where the colonies diameter was measured daily. Negatives control with agar without extract and agar with an ethanol solution were used. The B. crassifolia ethanol extract presented inhibitory activity over the fungi studied where concentrations of 800 and 1600 µg 100 mL-1, inhibited 38% of the mycelial growth of F. solani; to S. sclerotiorum the best concentration was 2400 µg 100 mL1, reducing 37.5%. The antifungal bark extract potential of this specie is attributed to phenolic compounds and to triterpenes derivatives.

Resumo A aplicação de defensivos químicos para o controle de doenças fúngicas tem por consequência impactos sobre o ambiente e a saúde humana, dessa forma, a utilização de extratos vegetais com propriedades antifúngicas associado ao manejo adequado de culturas, torna-se uma proposta viável de controle alternativo, principalmente na agricultura orgânica e familiar. Neste sentido, objetivou-se neste trabalho realizar a análise fitoquímica e antioxidante das cascas de Byrsonima crassifolia (canjiqueira) e avaliar seu potencial antifúngico sobre o crescimento micelial de Fusarium solani e Sclerotinia sclerotiorum. O extrato etanólico das cascas da planta, coletadas no Pantanal do Rio Negro, em Mato Grosso do Sul, foi submetido à prospecção fitoquímica, quantificação de fenóis totais e flavonoides e determinação da atividade antioxidante (DPPH). Para a avaliação da atividade antifúngica foram utilizadas as concentrações de 800, 1200, 1600, 2000 e 2400 µg 100 mL-1 do extrato etanólico. Cada concentração foi incorporada, separadamente, em ágar BDA, e vertida em placas de petri, seguido do disco de micélio do fungo, onde o diâmetro das colônias foi medido diariamente. Utilizou-se como controle negativo, ágar sem extrato e ágar com solução etanólica. O extrato etanólico de B. crassifolia apresentou atividade inibitória sobre os fungos estudados, onde as concentrações de 800 e 1600 µg 100 mL-1, inibiram 38% do crescimento micelial de F. solani; para S. sclerotiorum, a melhor concentração foi de 2400 µg 100 mL1, com 37,5% de redução de crescimento. Atribui-se o potencial antifúngico do extrato da casca da espécie aos compostos fenólicos e derivados de triterpenos.