Single Nucleotide Polymorphisms of Candidate Genes Related to Egg Production Traits in Vietnamese Indigenous Chickens

ABSTRACT The objective of this work was to detect single nucleotide polymorphisms (SNPs) in two candidate genes known to relate with reproductive traits in Vietnamese chicken. Two indigenous breeds Ri and Mia chickens were used for genotyping 4 SNPs namely intron 1 of growth hormon gene (GH), exon 5 of prolactin receptor gene (PRLR5), a 24 bp nucleotide sequence insertion-deletion at situation -358 in 5- untranslated region of prolatin gene (PRL24); and at site C2404T of prolactin gene (PRL2402). It was shown that the SNP sites of these candidate genes were identified in two local breeds. Three genotypes of each loci were found (AA, AB and BB for GH; II, ID and DD for 24 bp indel of PRL and CC, CT and TT for PRL2402), except only genotypes of AA and BB of PRLR5 were detected (no heterozygous genotype of AB). The frequencies of the desired genotypes of AA (GH), BB (PRLR5), II (PRL24) and CC (PRL2402) were low in both indigenous Ri and Mia chickens. Based on this study it could be suggested that the study on association between these loci with egg production traits and the selection to increase the desired genotype frequency in poputions are necessary to improve egg production of Ri and Mia chickens.

Variants in GH, IGF1, and LEP genes associated with body traits in Santa Inês sheep

Growth hormone (GH), insulin-like growth factor 1 (IGF1), and leptin (LEP) can be candidate genes for association studies because they play vital roles in the metabolism process. Thus, this study aimed to identify variants in these genes associated with body traits in Santa Inês sheep. The following were recorded: body weight at 100 (BW100) and 240 days (BW240), average daily gain (ADG), withers (WH) and croup (CH) heights, body length (BL), thoracic (TG) and leg (LG) girths, thoracic (TW) and croup (CW) widths, body depth (BD), rib eye area (REA), fat thickness (FT), and carcass finishing score (CFS). Single-locus association analysis was performed with 11 variants in IGF1, 18 in LEP, and 16 in GH. Moreover, two haplotypes in IGF1 and one haplotype in LEP were evaluated in haplotype association analysis. The single-locus analysis revealed 23 suggestive additive effects (p < 0.05), but no additive effect was found at the Bonferroni threshold. Haplotype association analysis revealed 19 additive effects, of which ten were at the Bonferroni threshold (p < 0.0074). In IGF1 gene, haplotype replacements were associated with ADG 20.51(7.37), CH 4.09(1.21), WH 3.52(1.20), BL 3.94(1.19), TG 3.88(1.30), TW 1.13(0.36), and LG 3.40(1.08); while in the LEP gene the haplotype replacement was associated with BW100 1.83(0.51), BD −2.51(0.56), and CFS −0.24(0.06). Therefore, there are haplotypes in IGF1 and LEP genes associated with body traits in Santa Inês sheep, which can be useful in marker-assisted selection.

Variants in GH, IGF1, and LEP genes associated with body traits in Santa Inês sheep

Growth hormone (GH), insulin-like growth factor 1 (IGF1), and leptin (LEP) can be candidate genes for association studies because they play vital roles in the metabolism process. Thus, this study aimed to identify variants in these genes associated with body traits in Santa Inês sheep. The following were recorded: body weight at 100 (BW100) and 240 days (BW240), average daily gain (ADG), withers (WH) and croup (CH) heights, body length (BL), thoracic (TG) and leg (LG) girths, thoracic (TW) and croup (CW) widths, body depth (BD), rib eye area (REA), fat thickness (FT), and carcass finishing score (CFS). Single-locus association analysis was performed with 11 variants in IGF1, 18 in LEP, and 16 in GH. Moreover, two haplotypes in IGF1 and one haplotype in LEP were evaluated in haplotype association analysis. The single-locus analysis revealed 23 suggestive additive effects (p < 0.05), but no additive effect was found at the Bonferroni threshold. Haplotype association analysis revealed 19 additive effects, of which ten were at the Bonferroni threshold (p < 0.0074). In IGF1 gene, haplotype replacements were associated with ADG 20.51(7.37), CH 4.09(1.21), WH 3.52(1.20), BL 3.94(1.19), TG 3.88(1.30), TW 1.13(0.36), and LG 3.40(1.08); while in the LEP gene the haplotype replacement was associated with BW100 1.83(0.51), BD −2.51(0.56), and CFS −0.24(0.06). Therefore, there are haplotypes in IGF1 and LEP genes associated with body traits in Santa Inês sheep, which can be useful in marker-assisted selection.(AU)

Regulação hormonal no metabolismo energético de não ruminantes em estado de jejum / Hormonal regulation in the energetic metabolism of non-ruminants in state of fasting / Regulación hormonal en el metabolismo energético de no rumiantes en estado de ayuno

El objetivo de esta revision fue resaltar el comportamiento hormonal (insulina, glucagon, grelina, leptina, T3, T4, cortisol, adrenalina, IGF y GH) que actúan sobre el metabolismo energético de animals no rumiantes en estado de ayuno. Los procesos metabólicos están regulados por la disponibilidade de substrato, por mecanismos neuroendocrinos. Para comprender las vías metabólicas y su regulación hormonal en los diferentes tejidos, es necessário detener el metabolismo especializado en los diversos órganos y tejidos que integran el metabolismo energético en todo el cuerpo del animal. Así, se espera dilucidar la amplia gama de hormonas movilizadoras de energia y los mecanismos hormonales presentes en cada tejido, así como describer la interrelación entre insulin, glucagón y adrenalina en la coordinación del metabolismo energético de músculo, hígado y tejido adipose, debido a que cada tejido tiene sus propias características metabólicas, en general, la concentración de nutrientes en la sangre es controlada por el hígado, que a su vez se convierte en el órgano central para mantener la homeostasis de los principals nutrientes. El suministro de energia en el cuerpo durante el período de ayuno se debe a la degradación del glucógeno, la proteólisis muscular y la lipólisis que jugarán roles fisiológicos específicos para que las vías metabólicas tengan sus propias características...

The objective of this review was to emphasize the hormonal behavior (Insulin, glucagon, ghrelin, leptin, T3, T4, cortisol, adrenaline IGF and GH) acting on energy metabolism of non-ruminant animals on the fasting state. Metabolic processes are regulated by the availability of substrate, by neuroendocrine mechanisms. To understand the metabolic pathways and their hormonal regulation on the different tissues, it is necessary to stop to the specialized metabolism on the various organs and tissues that integrate the energy metabolism in the whole organism of the animal. Thus it is expected to elucidate the broad range of energy mobilization hormones and the hormonal mechanisms present in each tissue, as well as to describe the interrelationship between insulin, glucagon and adrenaline in the coordination of energetic metabolism of muscle, liver and tissue Because each tissue has its own metabolic characteristics, in general, the concentration of nutrients in the blood is controlled by the liver, which in turn becomes the central organ of the maintenance of the homeostasis of the main nutrients. The energy supply in the body during the fasting period is due to the degradation of glycogen, muscular proteolysis and lipolysis that will play specific physiological roles so that the metabolic pathways have their own characteristics, the release of the hormones being regulated by...

Objetivou-se com está revisão ressaltar o comportamento hormonal (insulina, glucagon, grelina, leptina, T3, T4, cortisol, adrenalina IGF e GH) atuantes no metabolismo energético de animais não ruminantes sobre o estado de jejum. Os processos metabólicos são regulados pela disponibilidade de substrato, por mecanismos neuroendócrinos. Para entender as vias metabólicas e sua regulação hormonal sobre os diferentes tecidos, faz-se necessário deter-se ao metabolismo especializado sobre os vários órgãos e tecidos que integram o metabolismo energético em todo o organismo do animal. Assim espera-se elucidar o amplo alcance dos hormônios de mobilização de energia e os mecanismos hormonais presente em cada tecido, como também descrever a inter-relação entre a insulina, o glucagon e a adrenalina na coordenação do metabolismo energético do músculo, fígado e tecido adiposo, pois cada tecido tem características metabólicas própria, de um modo geral, a concentração dos nutrientes no sangue é controlada pelo fígado, que por sua vez, torna-se o órgão central da manutenção da homeostasia dos principais nutrientes. O aporte energético no organismo durante o período de jejum se dá pela degradação de glicogênio, a proteólise muscular e lipólise que vão desempenhar papéis fisiológicos específicos para que as vias metabólicas tenham características próprias, sendo a liberação dos hormônios regulada...

Regulação hormonal no metabolismo energético de não ruminantes em estado de jejum / Hormonal regulation in the energetic metabolism of non-ruminants in state of fasting / Regulación hormonal en el metabolismo energético de no rumiantes en estado de ayuno

El objetivo de esta revision fue resaltar el comportamiento hormonal (insulina, glucagon, grelina, leptina, T3, T4, cortisol, adrenalina, IGF y GH) que actúan sobre el metabolismo energético de animals no rumiantes en estado de ayuno. Los procesos metabólicos están regulados por la disponibilidade de substrato, por mecanismos neuroendocrinos. Para comprender las vías metabólicas y su regulación hormonal en los diferentes tejidos, es necessário detener el metabolismo especializado en los diversos órganos y tejidos que integran el metabolismo energético en todo el cuerpo del animal. Así, se espera dilucidar la amplia gama de hormonas movilizadoras de energia y los mecanismos hormonales presentes en cada tejido, así como describer la interrelación entre insulin, glucagón y adrenalina en la coordinación del metabolismo energético de músculo, hígado y tejido adipose, debido a que cada tejido tiene sus propias características metabólicas, en general, la concentración de nutrientes en la sangre es controlada por el hígado, que a su vez se convierte en el órgano central para mantener la homeostasis de los principals nutrientes. El suministro de energia en el cuerpo durante el período de ayuno se debe a la degradación del glucógeno, la proteólisis muscular y la lipólisis que jugarán roles fisiológicos específicos para que las vías metabólicas tengan sus propias características...(AU)

The objective of this review was to emphasize the hormonal behavior (Insulin, glucagon, ghrelin, leptin, T3, T4, cortisol, adrenaline IGF and GH) acting on energy metabolism of non-ruminant animals on the fasting state. Metabolic processes are regulated by the availability of substrate, by neuroendocrine mechanisms. To understand the metabolic pathways and their hormonal regulation on the different tissues, it is necessary to stop to the specialized metabolism on the various organs and tissues that integrate the energy metabolism in the whole organism of the animal. Thus it is expected to elucidate the broad range of energy mobilization hormones and the hormonal mechanisms present in each tissue, as well as to describe the interrelationship between insulin, glucagon and adrenaline in the coordination of energetic metabolism of muscle, liver and tissue Because each tissue has its own metabolic characteristics, in general, the concentration of nutrients in the blood is controlled by the liver, which in turn becomes the central organ of the maintenance of the homeostasis of the main nutrients. The energy supply in the body during the fasting period is due to the degradation of glycogen, muscular proteolysis and lipolysis that will play specific physiological roles so that the metabolic pathways have their own characteristics, the release of the hormones being regulated by...(AU)

Objetivou-se com está revisão ressaltar o comportamento hormonal (insulina, glucagon, grelina, leptina, T3, T4, cortisol, adrenalina IGF e GH) atuantes no metabolismo energético de animais não ruminantes sobre o estado de jejum. Os processos metabólicos são regulados pela disponibilidade de substrato, por mecanismos neuroendócrinos. Para entender as vias metabólicas e sua regulação hormonal sobre os diferentes tecidos, faz-se necessário deter-se ao metabolismo especializado sobre os vários órgãos e tecidos que integram o metabolismo energético em todo o organismo do animal. Assim espera-se elucidar o amplo alcance dos hormônios de mobilização de energia e os mecanismos hormonais presente em cada tecido, como também descrever a inter-relação entre a insulina, o glucagon e a adrenalina na coordenação do metabolismo energético do músculo, fígado e tecido adiposo, pois cada tecido tem características metabólicas própria, de um modo geral, a concentração dos nutrientes no sangue é controlada pelo fígado, que por sua vez, torna-se o órgão central da manutenção da homeostasia dos principais nutrientes. O aporte energético no organismo durante o período de jejum se dá pela degradação de glicogênio, a proteólise muscular e lipólise que vão desempenhar papéis fisiológicos específicos para que as vias metabólicas tenham características próprias, sendo a liberação dos hormônios regulada...(AU)

Identification of novel single nucleotide polymorphisms in the growth hormone ( GH ) gene in Anatolian water buffalo ( Bubalus bubalis ) populations in Turkey

This study was conducted to investigate the growth hormone (GH; somatotropin-like) gene polymorphisms in 150 water buffalo (Bubalus bubalis) from different regions of Turkey. 404 bp long partial intron 4, exon 5, 3' UTR regions of the GH gene (also called GH/AluI locus) and 347 bp long exon-intron 3 and partial exon 4 regions of the GH gene (also called GH/MspI locus) were amplified, and their PCR products analyzed via DNA sequencing method. Seven genotypes due to twenty single nucleotide polymorphisms (SNP) and one deletion/insertion were identified in a 347 bp long region of the GH/MspI locus. A missense mutation from glycine to glutamate amino acid and four silent mutations in the serine, threonine, and asparagine amino acids were determined in the exon 3 region of the GH gene. Four genotypes due to eight SNP were identified in a 404 bp long region of the GH/AluI locus. A missense mutation from lysine to arginine amino acid and six silent mutations in Leucine, aspartate, histidine, lysine, arginine, and cysteine amino acids were revealed in the exon 5 region of the GH gene. The partial DNA sequence of the GH gene in water buffalos was reported, and these sequences were deposited at the NCBI Genbank database with the accession numbers MN266903-MN266909 and MN530973-MN530976. These SNP may have an effect on economic (such as body composition) and carcass traits, reproduction, and milk yield and content in water buffalo populations and may prove to be useful for water buffalo breeding.(AU)

Infecção de trato urinário inferior por Citrobacter sp em cadela com hipoadrenocorticismo / Citrobacter sp lower urinary tract infection in a bitch with hypoadrenocorticism

Citrobacter sp. é um microrganismo frequentemente encontrado em vagina de cadelas, mas corresponde a menos de 3% do total de microrganismos isolados em urocultura. O hipoadrenocorticismo (HA) é uma doença endócrina incomum e que leva a poliúria e hipostenúria. O objetivo deste trabalho é relatar o caso de uma fêmea da espécie canina, da raça Teckel, 11 anos, atendida com queixa de urina de odor alterado há vários dias, além de vômito, diarreia e inapetência há três dias, e poliúria e polidipsia há 2 meses, com histórico de tratamento anterior com mitotano para hiperadrenocorticismo. O diagnóstico foi de ITU por Citrobacter sp., além de HA iatrogênico. Como destaques nos exames, relação sódio:potássio de 22,6 foi observada, sugestiva de HA, que foi confirmado por teste de estimulação com ACTH, além de urina inicialmente hipostenúrica (densidade 1,006), o que pode ser atribuído ao washout medular renal devido à hiponatremia causada pelo hipoadrenocorticismo. O tratamento foi feito com amoxicilina associada a ácido clavulânico por 20 dias, além da terapia específica para HA com prednisona e fludrocortisona, que foi continuado. A paciente recuperou-se bem, a densidade urinária aumentou após início do tratamento para HA e não houve recidiva da ITU em período de acompanhamento de 8 meses. Acredita-se que a baixa densidade urinária causada pelo HA tenha sido fator essencial para a oco

Citrobacter sp. is a normal constituent of bitches vagina, but it is related to less than 3% of total isolated microorganism in uroculture. Hypoadrenocorticism (HA) is an endocrine disease uncommonly diagnosed that leads to polyuria and hypostenuria. The aim of this work is report the case of a Teckel bitch, 11 years old, attended with complaint of altered urinary smell for several days, besides vomiting, diarrhea and inappetence for three days, and polyuria and polydispsia for two months, with previous mitotane treatment for hyperadrenocorticism. The diagnosis was Citrobacter UTI, besides iatrogenic HA. The most important exam results include sodium:potassium ratio of 22.6, suggestive of HA, that was confirmed by ACTH stimulation test. Besides, hypostenuria (urinary specific gravity USG - of 1.006) was noted, attributed to renal medular washout due to hyponatremia seen in HA. Therapy comprised amoxicillin associated with clavulanic acid for 20 days, in addition to specific therapy for AH with prednisone and fludrocortisone. The patient recovery well, USG increased after the beginning of the treatment for HA and there was no UTI reinfection for a 8 month period. It is believed that low USG due to HA was essential for the occurrence of Citrobacter UTI.(AU)

Infecção de trato urinário inferior por Citrobacter sp em cadela com hipoadrenocorticismo / Citrobacter sp lower urinary tract infection in a bitch with hypoadrenocorticism

Citrobacter sp. é um microrganismo frequentemente encontrado em vagina de cadelas, mas corresponde a menos de 3% do total de microrganismos isolados em urocultura. O hipoadrenocorticismo (HA) é uma doença endócrina incomum e que leva a poliúria e hipostenúria. O objetivo deste trabalho é relatar o caso de uma fêmea da espécie canina, da raça Teckel, 11 anos, atendida com queixa de urina de odor alterado há vários dias, além de vômito, diarreia e inapetência há três dias, e poliúria e polidipsia há 2 meses, com histórico de tratamento anterior com mitotano para hiperadrenocorticismo. O diagnóstico foi de ITU por Citrobacter sp., além de HA iatrogênico. Como destaques nos exames, relação sódio:potássio de 22,6 foi observada, sugestiva de HA, que foi confirmado por teste de estimulação com ACTH, além de urina inicialmente hipostenúrica (densidade 1,006), o que pode ser atribuído ao washout medular renal devido à hiponatremia causada pelo hipoadrenocorticismo. O tratamento foi feito com amoxicilina associada a ácido clavulânico por 20 dias, além da terapia específica para HA com prednisona e fludrocortisona, que foi continuado. A paciente recuperou-se bem, a densidade urinária aumentou após início do tratamento para HA e não houve recidiva da ITU em período de acompanhamento de 8 meses. Acredita-se que a baixa densidade urinária causada pelo HA tenha sido fator essencial para a oco

Citrobacter sp. is a normal constituent of bitches’ vagina, but it is related to less than 3% of total isolated microorganism in uroculture. Hypoadrenocorticism (HA) is an endocrine disease uncommonly diagnosed that leads to polyuria and hypostenuria. The aim of this work is report the case of a Teckel bitch, 11 years old, attended with complaint of altered urinary smell for several days, besides vomiting, diarrhea and inappetence for three days, and polyuria and polydispsia for two months, with previous mitotane treatment for hyperadrenocorticism. The diagnosis was Citrobacter UTI, besides iatrogenic HA. The most important exam results include sodium:potassium ratio of 22.6, suggestive of HA, that was confirmed by ACTH stimulation test. Besides, hypostenuria (urinary specific gravity – USG - of 1.006) was noted, attributed to renal medular washout due to hyponatremia seen in HA. Therapy comprised amoxicillin associated with clavulanic acid for 20 days, in addition to specific therapy for AH with prednisone and fludrocortisone. The patient recovery well, USG increased after the beginning of the treatment for HA and there was no UTI reinfection for a 8 month period. It is believed that low USG due to HA was essential for the occurrence of Citrobacter UTI.

Effect of recombinant bovine somatotropin (rbST) treatment on follicular population and development in non-lactating dairy cows

The aim of this study was to evaluate the long-term effects of recombinant bovine somatotropin (rbST) on follicle population and ovulatory follicle development in non-lactating dairy cows. Twenty-one Jersey cows were allocated in rbST (n=11) or control (n=10) groups. On day -60, cows in rbST group received 500 mg of somatotropin (s.c. Lactotropin®, Elanco). On day 0, control and rbST cows received an intravaginal progesterone-releasing device (1.9 g, CIDR®, Zoetis) and GnRH (100 mg, IM, Factrel®, Zoetis). On day 8, cows received PGF2α (25 mg, IM, Lutalyse®, Zoetis) and the CIDR® was removed. Twelve hours after device removal (D8), serum, follicular fluid and granulosa cells samples were collected. Serum and follicular concentration of estradiol (E2) and progesterone (P4) were analyzed. Total RNA was extracted from granulosa cells to measure gene expression of LHCGR, STAR, HSD-3B1, CYP11A1, CYP19A1, CYP17A1, IGFR and PAPPA by real-time PCR. Ultrasonography was performed on days -60, -53, -46, -14, -7, 0 and 8 for antral follicle count. Results were analyzed by repeated measures ANOVA and t-test. There was no effect of rbST treatment on the number of follicles during the 60 days period, as well as no effect on serum and follicular fluid E2 and follicular fluid P4 at the moment of follicle aspiration. There was a reduction in PAPPA (P = 0.006), CYP11A1 (P = 0.04) and CYP19A1 (P = 0.002) mRNA levels in granulosa cells of the pre-ovulatory follicle of rbST treated cows. In conclusion, a single dose of rbST did not have long-term effects on antral follicle population, serum and follicular E2/P4 concentrations in non-lactating dairy cows. Despite that, rbST injection decreased granulosa cell expression of genes related to steroidogenesis in the pre-ovulatory follicle.

Effect of recombinant bovine somatotropin (rbST) treatment on follicular population and development in non-lactating dairy cows

The aim of this study was to evaluate the long-term effects of recombinant bovine somatotropin (rbST) on follicle population and ovulatory follicle development in non-lactating dairy cows. Twenty-one Jersey cows were allocated in rbST (n=11) or control (n=10) groups. On day -60, cows in rbST group received 500 mg of somatotropin (s.c. Lactotropin®, Elanco). On day 0, control and rbST cows received an intravaginal progesterone-releasing device (1.9 g, CIDR®, Zoetis) and GnRH (100 mg, IM, Factrel®, Zoetis). On day 8, cows received PGF2α (25 mg, IM, Lutalyse®, Zoetis) and the CIDR® was removed. Twelve hours after device removal (D8), serum, follicular fluid and granulosa cells samples were collected. Serum and follicular concentration of estradiol (E2) and progesterone (P4) were analyzed. Total RNA was extracted from granulosa cells to measure gene expression of LHCGR, STAR, HSD-3B1, CYP11A1, CYP19A1, CYP17A1, IGFR and PAPPA by real-time PCR. Ultrasonography was performed on days -60, -53, -46, -14, -7, 0 and 8 for antral follicle count. Results were analyzed by repeated measures ANOVA and t-test. There was no effect of rbST treatment on the number of follicles during the 60 days period, as well as no effect on serum and follicular fluid E2 and follicular fluid P4 at the moment of follicle aspiration. There was a reduction in PAPPA (P = 0.006), CYP11A1 (P = 0.04) and CYP19A1 (P = 0.002) mRNA levels in granulosa cells of the pre-ovulatory follicle of rbST treated cows. In conclusion, a single dose of rbST did not have long-term effects on antral follicle population, serum and follicular E2/P4 concentrations in non-lactating dairy cows. Despite that, rbST injection decreased granulosa cell expression of genes related to steroidogenesis in the pre-ovulatory follicle.(AU)

Nursery growth and rhizobia symbiosis of scandent Leguminosae species native to the Amazon region / Crescimento e simbiose com rizóbios em casa de vegetação de espécies de Leguminosae escandentes nativas da região Amazônica

A great number of species and individuals of scandent legumes establishing symbiosis with nitrogen fixing bacteria occurs in the Amazon Forest. These symbiosis probably play an important role in contributing to nitrogen incorporation in this ecossystem. The objectives of this study were to evaluate the growth of eight species of scandent legumes in five nursery substrates; to compare nodulation with rhizobia strains introduced or native to these substrates; and to characterize phenotypically and genetically these rhizobia. The experiment was carried out in a completely randomized design with five replications. Five to seven months after seedling emergency, according to the legume species, growth and nodulation parameters were determined. Rhizobia identification of strains was carried out by 16S rRNA gene partial sequencing. The survival of seedlings after the transplanting varied from 93 to 98%, in Ultisol (Argissolo in Brazilian classification), collected in primary forest, and fertilized with all nutrients, except nitrogen (ULTfert); and in a clay and sand mixture, in a ratio 3:2 (CONV), respectively. Species with height superior to 30 cm, in general, grew better in substrates with higher fertility: ULTfert and Humic Gley soil (HG). Seven out of the eight species were able to nodulate. The percentage of nodulation per substrate was: SAND, washed sand with mixed inoculum of 100 rhizobia strains plus fertilization (100), HG (80), CONV (100), ULT, A-horizon of red-yellow Ultisol collected in the Ducke Forest Reserve (Manaus) (44), and ULTfert (55%). Bradyrhizobium spp. were isolated from nodules of all species and substrates. Burkolderia fungorum was isolated from Dalbergia inundata. For Dalbergia riedelli and Dalbergia inundata, this is the first report on the identification of symbiotic strains. Scandent legumes present high survival of seedlings in nursery, and develop better in substrates with higher fertility, and generally present symbiosis with [...].(AU)

Um grande número de espécies e indivíduos de leguminosas escandentes estabelecendo simbiose com bactérias fixadoras de nitrogênio ocorrem na floresta Amazônica. Estas simbioses provavelmente desempenham importante papel, contribuindo para incorporação de nitrogênio neste ecossistema. Os objetivos deste trabalho foram avaliar o crescimento de oito espécies de leguminosas escandentes em cinco substratos no viveiro; comparar a nodulação com as estirpes de rizóbio introduzidas ou nativas destes substratos; e caracterizar esses rizóbios fenotípica e geneticamente. O experimento foi conduzido em delineamento inteiramente casualizado com cinco repetições. Cinco a sete meses após a emergência das mudas parâmetros de crescimento e nodulação foram determinados. A identificação das estirpes de rizóbios foi feita pelo sequenciamento parcial do gene 16S rRNA. A sobrevivência das mudas após o transplante variou de 93 a 98%, em um Argissolo (Ultisol de acordo com a classificação da USDA), coletado em floresta primária e adubado com todos os nutrientes, exceto nitrogênio (ULTfert), e na mistura argila e areia, na proporção 3:2 (CONV), respectivamente. Espécies que apresentaram altura superior a 30 cm, no geral, cresceram melhor nos substratos de maior fertilidade: ULTfert e solo Glei Húmico (GH). Das oito espécies estudadas, sete nodularam. A porcentagem de nodulação por substrato foi: AREIA, areia lavada com inóculo misto de 100 estirpes de rizóbio mais adubação (100), GH (80), CONV (100), ULT, horizonte A de Argissolo vermelho-amarelo coletado na Reserva Florestal Ducke (Manaus) (44) e ULTfert (55%). Bradyrhizobium spp. foram isolados de nódulos de todas as espécies e substratos. Burkolderia fungorum foi isolada de Dalbergia inundata. Este é o primeiro relato de identificação de estirpes simbióticas para Dalbergia riedelli e Dalbergia inundata. Leguminosas escandentes apresentaram alta sobrevivência de mudas em casa de vegetação e desenvolveram-se [...](AU)

Nursery growth and rhizobia symbiosis of scandent Leguminosae species native to the Amazon region / Crescimento e simbiose com rizóbios em casa de vegetação de espécies de Leguminosae escandentes nativas da região Amazônica

A great number of species and individuals of scandent legumes establishing symbiosis with nitrogen fixing bacteria occurs in the Amazon Forest. These symbiosis probably play an important role in contributing to nitrogen incorporation in this ecossystem. The objectives of this study were to evaluate the growth of eight species of scandent legumes in five nursery substrates; to compare nodulation with rhizobia strains introduced or native to these substrates; and to characterize phenotypically and genetically these rhizobia. The experiment was carried out in a completely randomized design with five replications. Five to seven months after seedling emergency, according to the legume species, growth and nodulation parameters were determined. Rhizobia identification of strains was carried out by 16S rRNA gene partial sequencing. The survival of seedlings after the transplanting varied from 93 to 98%, in Ultisol (Argissolo in Brazilian classification), collected in primary forest, and fertilized with all nutrients, except nitrogen (ULTfert); and in a clay and sand mixture, in a ratio 3:2 (CONV), respectively. Species with height superior to 30 cm, in general, grew better in substrates with higher fertility: ULTfert and Humic Gley soil (HG). Seven out of the eight species were able to nodulate. The percentage of nodulation per substrate was: SAND, washed sand with mixed inoculum of 100 rhizobia strains plus fertilization (100), HG (80), CONV (100), ULT, A-horizon of red-yellow Ultisol collected in the Ducke Forest Reserve (Manaus) (44), and ULTfert (55%). Bradyrhizobium spp. were isolated from nodules of all species and substrates. Burkolderia fungorum was isolated from Dalbergia inundata. For Dalbergia riedelli and Dalbergia inundata, this is the first report on the identification of symbiotic strains. Scandent legumes present high survival of seedlings in nursery, and develop better in substrates with higher fertility, and generally present symbiosis with [...].

Um grande número de espécies e indivíduos de leguminosas escandentes estabelecendo simbiose com bactérias fixadoras de nitrogênio ocorrem na floresta Amazônica. Estas simbioses provavelmente desempenham importante papel, contribuindo para incorporação de nitrogênio neste ecossistema. Os objetivos deste trabalho foram avaliar o crescimento de oito espécies de leguminosas escandentes em cinco substratos no viveiro; comparar a nodulação com as estirpes de rizóbio introduzidas ou nativas destes substratos; e caracterizar esses rizóbios fenotípica e geneticamente. O experimento foi conduzido em delineamento inteiramente casualizado com cinco repetições. Cinco a sete meses após a emergência das mudas parâmetros de crescimento e nodulação foram determinados. A identificação das estirpes de rizóbios foi feita pelo sequenciamento parcial do gene 16S rRNA. A sobrevivência das mudas após o transplante variou de 93 a 98%, em um Argissolo (Ultisol de acordo com a classificação da USDA), coletado em floresta primária e adubado com todos os nutrientes, exceto nitrogênio (ULTfert), e na mistura argila e areia, na proporção 3:2 (CONV), respectivamente. Espécies que apresentaram altura superior a 30 cm, no geral, cresceram melhor nos substratos de maior fertilidade: ULTfert e solo Glei Húmico (GH). Das oito espécies estudadas, sete nodularam. A porcentagem de nodulação por substrato foi: AREIA, areia lavada com inóculo misto de 100 estirpes de rizóbio mais adubação (100), GH (80), CONV (100), ULT, horizonte A de Argissolo vermelho-amarelo coletado na Reserva Florestal Ducke (Manaus) (44) e ULTfert (55%). Bradyrhizobium spp. foram isolados de nódulos de todas as espécies e substratos. Burkolderia fungorum foi isolada de Dalbergia inundata. Este é o primeiro relato de identificação de estirpes simbióticas para Dalbergia riedelli e Dalbergia inundata. Leguminosas escandentes apresentaram alta sobrevivência de mudas em casa de vegetação e desenvolveram-se [...]

EFEITO DA APLICAÇÃO DE GH SOBRE A PROLIFERAÇÃO CELULAR EM TESTÍCULOS DE RATOS WISTAR SOB TREINAMENTO RESISTIDO

Efeito da aplicação de GH sobre a proliferação celular em testículos de ratos Wistar submetidos ao hormônio do crescimento sob treinamento resistido O hormônio do crescimento (GH) é frequentemente utilizado de forma indiscriminada por indivíduos que buscam um melhor desempenho físico, com finalidade de aumentar a massa muscular, o que pode levar a efeitos não desejados ao organismo. O objetivo do presente estudo foi investigar a proliferação celular e a expressão gênica ligadas à multiplicação celular em testículos de ratos Wistar que foram submetidos ao hormônio do crescimento sob treinamento resistido. Foram utilizados 32 ratos machos Wistar, com idade de 9 semanas, divididos em 4 grupos experimentais: CG (grupo controle, n=8); GHG (grupo de animais em que se administrou 0,2 UI/Kg de GH, 3 vezes por semana por 30 dias, n=8); TG (grupo de animais submetidos ao treinamento resistido, 4 séries de 10 saltos em água com 50% do peso do animal, 3 vezes por semana durante 30 dias, n=8) e GHTG (grupo de animais submetidos ao treinamento resistido e à administração de GH, n=8). Após a eutanásia dos ratos, os testículos foram coletados para verificar a proliferação celular pela técnica de AgNOR e para a RT- qPCR dos genes-alvo Ghr, Igf1 e Igf2. A análise estatística dos dados foi ANOVA seguida de Tukey, diferença estatística significativa foi considerada com p<0,05. Os ratos do GHG apresentaram maior ganho de peso que os demais grupos e maior peso testicular que o GHTG (p<0,05). Não houve diferença significativa na contagem de regiões organizadoras de nucléolos e na área dos núcleos e dos nucléolos. Também não houve diferença significativa na expressão dos genes-alvo. A realização do experimento se justifica para saber se o uso de GH em ratos machos haveria multiplicação celular e se o uso do GH juntamente com o treinamento resistido afetaria geneticamente o sistema reprodutor masculino. Concluiu-se que a aplicação de GH sob treinamento resistido não alteram a proliferação celular testicular nem a expressão gênica de Ghr, Igf1 e Igf2 nos testículos de ratos Wistar no período analisado.

Effect of GH application on cell proliferation in Wistar rats testicles submitted to growth hormone under resisted training Growth hormone (GH) is often used indiscriminately by individuals looking for better physical performance, in order to increase muscle mass, which can lead to unwanted effects on the body. The aim of the present study was to investigate cell proliferation and gene expression linked to cell multiplication in testicles of Wistar rats that were subjected to growth hormone under resistance training. 32 male Wistar rats, aged 9 weeks, were used, divided into 4 experimental groups: CG (control group, n = 8); GHG (group of animals administered 0.2 IU / kg of GH, 3 times a week for 30 days, n = 8); TG (group of animals submitted to resistance training, 4 series of 10 jumps in water with 50% of the animal's weight, 3 times a week for 30 days, n = 8) and GHTG (group of animals submitted to resistance training and administration GH, n = 8). After the mice were euthanized, the testicles were collected to check for cell proliferation by the AgNOR technique and for the RT-qPCR of the target genes Ghr, Igf1 and Igf2. The statistical analysis of the data was ANOVA followed by Tukey, a statistically significant difference was considered with p <0.05. GHG rats showed greater weight gain than the other groups and greater testicular weight than GHTG (p <0.05). There was no significant difference in the count of nucleolus organizing regions and in the area of nucleus and nucleolus. There was also no significant difference in the expression of the target genes. The experiment is justified to find out if the use of GH in male rats would have cell multiplication and if the use of GH together with resistance training would genetically affect the male reproductive system. It was concluded that the application of GH under resistance training does not alter the testicular cell proliferation or the gene expression of Ghr, Igf1 and Igf2 in the testicles of Wistar rats in the analyzed period.

Expressão de genes envolvidos no perfil de ácidos graxos e proteólise post mortem de bovinos Nelore e Rubia Gallega x Nelore

Objetivou-se avaliar o perfil de ácidos graxos e a maciez da carne de bovinos Nelore e Rubia Gallega x Nelore, e entender as diferenças na qualidade da carne por meio da avaliação de parâmetros bioquímicos e metabólicos sanguíneos, da expressão de genes envolvidos no metabolismo lipídico e na proteólise post mortem, e da avaliação da abundância de proteínas envolvidas no processo proteolítico e crescimento muscular. Foram utilizados 16 bovinos Nelore (N) e 16 bovinos Rubia Gallega x Nelore (RGN), machos não castrados, com idade média de 11 meses e 280 kg ± 15 kg de peso vivo inicial. Os animais foram mantidos nas mesmas condições de manejo e receberam a mesma dieta ad libitum. Após 120 dias de confinamento, os animais foram abatidos. Durante o abate, foram coletadas amostras de sangue para as análises de parâmetros bioquímicos e metabólicos e amostras do músculo longissimus para a extração de RNA e abundância proteica (zero dia). As amostras de músculo longissimus utilizadas nas análises de força de cisalhamento (FC), cor (COR), perda por cocção (PPC), degradação proteica, perfil de ácidos graxos e lipídeos totais (LT) foram coletadas durante a desossa. As amostras destinadas à FC, PPC, COR e degradação proteica foram maturadas por zero, 7, 14 e 21 dias. A expressão relativa de mRNA foi avaliada para os seguintes genes: C/EBP, ZFP423, FABP4, ACC, LPL, ACOX, LEP, SCD, TGF, MSTN, CAPN1, CAPN2 e CAST. A abundância proteica foi realizada para as proteínas: troponina, calpaína, HSP 27, HSP 70 e miostatina. O delineamento foi inteiramente casualizado, considerando cada animal uma unidade experimental. Para as análises avaliadas ao longo do tempo de maturação, os dados foram analisados em parcelas subdivididas, considerando um arranjo fatorial 2x4, sendo os efeitos fixos: os grupos genéticos (N e RGN), os tempos de maturação (zero, 7, 14 e 21 dias) e suas interações. A significância foi declarada quando P 0,05. Bovinos RGN apresentaram carnes mais macias, com menor PPC e menor teor de LT (P 0,05) quando comparados aos N. Bovinos N apresentaram maiores concentrações de ácidos graxos hipercolesterolêmicos, 14:0 e 16:0 e maior atividade da enzima 9 dessaturase (P 0,05). Por outro lado, o grupo RGN apresentou melhor índice 11 de saúde (P 0,05) na carne, além de menor concentração sérica de colesterol total, HDL e LDL nos animais, quando comparados ao grupo N (P 0,05). Em relação aos hormônios, as concentrações de hormônio do crescimento (GH) e leptina não foram influenciadas pelos grupos genéticos (P > 0,05), diferentemente do IGF-1 e da insulina que apresentaram maiores e menores concentrações em RGN, respectivamente, (P 0,05). Ademais, os genes TGF, MSTN, C/EBP, LPL e ACOXforam mais expressos em animais cruzados RGN, indicando diferenças na formação de fibras musculares e no metabolismo lipídico entre os grupos genéticos. Não foram encontradas alterações na expressão gênica de CAPN1, CAPN2 e CAST entre os grupos genéticos estudados (P > 0,05) apesar de terem apresentado valores de FC diferentes. Por outro lado, bovinos RGN apresentaram maior degradação de troponina-T (P = 0,0244). No entanto, não houve diferença entre os grupos genéticos para autólise de µ-calpaína (P = 0,9854), havendo apenas para o tempo de maturação (P < 0,0001). Observou-se interação para degradação de HSP 27 (P = 0,0006), indicando que a degradação desta proteína é maior e mais rápida em bovinos RGN. A abundância de HSP 70 foi alterada pelo tempo de maturação (P < 0,0001). A abundância proteica da miostatina não foi alterada pelo grupo genético (P = 0,3489). De modo geral, bovinos Rubia Gallega x Nelore apresentam carnes mais macias e mais desejável à saúde humana, quando comparados à raça Nelore. Estas diferenças podem ser explicadas pelos resultados hormonais de IGF-1 e insulina, pelos genes TGF, MSTN, LPL, ACOXe pela degradação de troponina-T e abundância de HSPs.

The objective of this study was to evaluate the fatty acid profile and meat tenderness of Nelore and Rubia Gallega x Nelore cattle, and to understand the differences in meat quality through the evaluation of blood biochemical and metabolic parameters, expression of genes involved in lipid metabolism and post mortem proteolysis, and evaluation of the abundance of proteins involved in proteolytic process and muscle growth. Sixteen Nelore (N) and 16 crossbred Rubia Gallega x Nelore (RGN), noncastrated males, with an average age of 11 months and 280 kg ± 15 kg of initial live weight were used. The animals were kept under the same management conditions and received the same diet ad libitum. After 120 days of feedlot finishing, the animals were harvested. During harvest, blood samples were collected for analysis of biochemical and metabolic parameters and longissimus muscle samples for RNA extraction and protein abundance (zero day). The longissimus muscle samples used in the shear force (SF), color, cooking loss (CL), protein degradation, fatty acid profile and total lipids analysis were collected during deboning. Samples from SF, color, CL, and protein degradation were aged for zero, 7, 14 and 21 days. Relative mRNA expression was evaluated for the following genes: C/EBP, ZFP423, FABP4, ACC, LPL, ACOX, LEP, SCD, TGF, MSTN, CAPN1, CAPN2, and CAST. Protein abundance was performed for the proteins: troponin, calpain, HSP 27, HSP 70 and myostatin. The design was completely randomized, considering each animal an experimental unit. For analysis evaluated over the aging time, the data were analyzed in subdivided plots, considering a 2x4 factorial arrangement. The model included the fixed effects: genetic groups (N and RGN), the maturation times (zero, 7, 14 and 21 days) and their interactions. Significance was declared when P 0.05. RGN cattle had more tender meat, lower CL and lower total lipids content (P 0.05) when compared to N. Beef from N Cattle presented higher concentrations of hypercholesterolemic fatty acids, 14: 0 and 16: 0 and higher enzyme activity 9 desaturase (P 0.05). On the other hand, RGN group had better health index (P 0.05) in meat, besides lower serum total cholesterol, HDL and LDL in animals when compared 13 to N group (P 0.05). Regarding hormones, growth hormone (GH) and leptin concentrations were not influenced by genetic groups (P > 0.05), unlike IGF-1 and insulin, which presented higher and lower RGN concentrations, respectively, (P 0.05). In addition, TGF, MSTN, C/EBP, LPL, and ACOXgenes were more expressed in RGN animals, indicating differences in muscle fiber formation and lipid metabolism between genetic groups. No There were no differences in gene expression of CAPN1, CAPN2 and CAST between the genetic groups studied (P > 0.05), although different SF values. On the other hand, RGN cattle showed greater degradation of troponin-T (P = 0.0244). However, there was no difference between the genetic groups for µ-calpain autolysis (P = 0.9854), except for aging time (P <0.0001). There was interaction for degradation of HSP 27 (P = 0.0006), indicating that the degradation of this protein is greater and faster in RGN cattle than N. HSP 70 abundance was altered by aging time (P < 0.0001). Myostatin protein abundance was not influenced by genetic group (P = 0.3489). In general, Rubia Gallega x Nelore cattle provide more tender beef and more desirable to human health when compared to Nelore breed. These differences can be explained by the hormonal results of IGF-1 and insulin, besides TGF, MSTN, LPL, ACOX genes and troponin-T degradation and abundance of HSPs.

Expressão gênica de GHR, IGF1 E IGF2 no ovário de ratas submetidas ao treinamento resistido e/ou ao GH

O hormônio de crescimento (GH) é utilizado de forma indiscriminada por atletas e desconhece o efeito da administração do GH exógeno associado ao treinamento resistido no ovário de mulheres. O GH pode agir diretamente nos órgãos alvos por meio do seu receptor (GHR) ou indiretamente pelo aumento do fator do crescimento semelhante à insulina 1 (IGF1) produzido pelo fígado e liberado na corrente sanguínea ou pela produção local de IGF1 e IGF2. O objetivo foi verificar a expressão gênica de Igf1, Igf2 e Ghr, e a população folicular e de corpo lúteo no ovário de ratas Wistar submetidas ao treinamento resistido associado ao tratamento com GH recombinante humano (rhGH). As 40 ratas do experimento foram distribuídas em 4 grupos (n=10): controle (CT); ratas com administração de 0,2 UI/Kg de rhGH (GH); ratas submetidas ao treinamento resistido (RT); e ratas submetidas a administração rhGH e ao treinamento resistido (RTGH). O treinamento resistido foi realizado em meio aquático com carga de 50% do peso do animal, em 4 séries de 10 saltos com intervalo de um minuto entre as séries. As ratas eram submetidas ao treinamento e ao rhGH 3 vezes/semana, em dias intercalados, por 30 dias. Após o período experimental, as ratas foram eutanasiadas em fase de diestro, foram colhidos os ovários para morfologia e para expressão gênica (RT-qPCR) dos genes Ghr, Igf1 e Igf2. A análise estatística realizada foi ANOVA seguida do pós teste de Tukey (P<0,05). Não foram encontradas diferenças entre os grupos na expressão gênica de Igf1 e Igf2, nem tampouco no número de folículos primordiais, primários, secundários, terciparios e corpos lúteos. A abundância de RNAm do Ghr foi maior (P<0,0194) no RT (2,24±0,53) que nos demais grupos; CT (1,06±0,14); GH (1,06±0,13) e RTGH (0,87±0,10). Conclui-se que o GH associado ou não ao treinamento resistido não altera o número de folículos e corpos lúteos, nem tampouco a abundância de RNAm de Ghr, Igf1 e Igf2 em ovários de ratas. Porém o treinamento resistido leva ao aumento na expressão gênica de Ghr em ovários de ratas Wistar.

Growth hormone (GH) is used indiscriminately by female athletes and those attending gyms and the effect of exogenous GH administration associated with resistance exercise on the ovaries of these women is unknown. GH can act directly on target organs through its receptor (GHR) or indirectly by increasing the insulin-like growth factor 1 (IGF1) produced by the liver and released into the bloodstream, or by local production of IGF1 and IGF2. The objective of this study was to verify the gene expression of Igf1, Igf2, and Ghr and the follicular and corpus luteum (CL) population in the ovaries of Wistar rats submitted to resistance exercise associated with recombinant human GH (rhGH). The 40 rats were divided into 4 groups (n = 10): control (CT); rats administered 0.2 IU/Kg rhGH (GH); rats submitted to resistance exercise (RT); and rats submitted to rhGH administration and resistance exercise (RTGH). The resistance exercise was performed in the aquatic environment with a load of 50% of the animals weight, in 4 sets of 10 jumps, with an interval of one minute between sets. The rats underwent exercise and rhGH 3 times/week, on intercalary days, for 30 days. After the experimental period, the rats were euthanized in the diestrus phase, the ovaries were collected for morphology and for gene expression (RT-qPCR) of the Ghr, Igf1 and Igf2 genes. The statistical analysis performed used ANOVA followed by the Tukey test (P <0.05). No differences were found between the groups in Igf1 and Igf2 gene expression, or in the number of primordial, primary, secundary, tertiary follicles and corpora lutea. The mRNA abundance of Ghr was higher (P <0.0194) in the RT (2.24±0.53) than in the other groups; CT (1.06±0.14); GH (1.06±0.13); and RTGH (0.87±0.10). It is concluded that GH associated or not with resistance exercise does not alter the number of follicles and corpus luteum, or the mRNA abundance of Ghr, Igf1, and Igf2 in the ovaries of rats. However, resistance exercise leads to an increase in gene expression of Ghr in Wistar rat ovaries.

Ovarian aging in growth hormone receptor knockout mice supplemented with 17-Estradiol

Camundongos knockout para o gene do receptor do hormônio de crescimento (GH) (GHRKO) têm atividade de GH ausente. Estes camundongos são o principal modelo para acessar os efeitos do GH e são conhecidos por terem maior longevidade e as fêmeas apresentarem vida reprodutiva prolongada. O 17-estradiol (17-E2) é um hormônio capaz de prolongar a longevidade dos camundongos. Assim, o objetivo deste estudo foi avaliar a reserva ovariana, em ovários de camundongos normais e GHRKO suplementados ou não com 17-estradiol. Nossa hipótese era que o knok out do GHR e o tratamento com 17-estradiol diminuiriam a ativação de folículos primordiais de forma complementar em camundongos.Seis camundongos GHRKO e seis camundongos wild-type (WT) foram divididos em quatro grupos: camundongos normais GHRKO (GHRKO; n = 3), camundongos GHRKO suplementados com 17-E2 (GHRKO-E2; n = 3), wild-type (WT) camundongos com dieta normal (WT; n = 3) e camundongos WT suplementados com 17-E2 (WT-E2; n = 3). E2 foi fornecido na comida durante quatro meses. Lâminas histológicas foram preparadas a partir dos ovários dos camundongos. Imagens das seções ovarianas foram capturadas por uma câmera acoplada a um microscópio, e os folículos foram contados e medidos. A análise estatística considerou o efeito do genótipo (GHRKO vs WT), tratamento (E2 vs CONT) e sua interação. Tanto o genótipo (p = 0,0117) quanto a dieta (p = 0,0136) tiveram efeito no número de folículos primordiais e na interação entre eles (p = 0,004). O número de folículos primordiais foi maior no grupo GHRKO-CONT (2632 ± 181) do que nos outros grupos. O tratamento com 17a-E2 reduziu o n�ero de fol�ulos primordiais nos ratinhos GHRKO para um n�el semelhante ao WT, mas n� teve efeito nos ratinhos WT. Camundongos WT tiveram um número maior de folículos primários do que ratos GHRKO (p = 0,006). A dieta 17-E2 não exerceu efeito sobre o número de folículos primários (p = 0,785). Em síntese, camundongos GHRKO não tratados tiveram um aumento na reserva ovariana do que os camundongos WT. No entanto, os genótipos tratados com 17-E2 responderam diferentemente. Quando tratado, grupo GHRKO diminuiu a reserva de folículos primordiais enquanto os camundongos WT mantiveram o número de folículos primordiais, o que indica que o 17-E2 tem um papel na ativação folicular que não atua da mesma forma quando os níveis de GH/IGF são baixos.

Mice with growth hormone (GH) receptor gene disruption (GHRKO) have absent GH activity. These mice are the main model to access the effects of GH and are known for having extended lifespan and female reproductive longevity. 17-estradiol (17-E2) is a molecule reported to extend mice lifespan. Hence, the aim of this study was to evaluate the ovarian reserve, in ovaries of normal and GHRKO mice supplemented or not with 17-estradiol. Our hypothesis was that GHR disruption and 17-Estradiol treatment would decrease the activation of primordial follicles in a complementary way in mice. Six GHRKO mice and six wild-type (WT) mice were divided into four groups: GHRKO mice normal diet (GHRKO; n=3), GHRKO mice supplemented with 17-E2 (GHRKO-E2; n=3), WT mice normal diet (WT; n=3) and WT mice supplemented with 17-E2 (WT-E2; n=3). E2 was provided in the food for four months. Histological slides were prepared from the mice ovaries. Images of the ovarian sections were captured by a camera coupled to a microscope, and the follicles were counted and measured. The statistical analysis considered the effect of the genotype (GHRKO vs WT), treatment (E2 vs CONT) and its interaction. Both genotype (p=0.0117) and diet (p=0.0136) had effects on the number of primordial follicles count as well as the interaction between them (p=0.004). The number of primordial follicles was higher on the GHRKO-CONT group (2632±181) than in the other groups. 17-E2 treatment reduced the number of primordial follicles in the GHRKO mice to a level similar to WT, but had no effect on WT mice. WT mice had a higher number of primary follicles than GHRKO mice (p=0.006). 17-E2 diet exerted no effect on the number of primary follicles (p=0.785). In summary, non-treated GHRKO mice had an increased primordial follicle reserve than WT mice. However, the genotypes treated with 17-E2 responded differently, GHRKO decreased the primordial follicle reserve and WT mice maintained the primordial follicles number, which indicates that 17-E2 has a differential role on follicle activation when there is a lack of GH /IGF-I.

Effect of porcine somatotropin on metabolism and testicular characteristics of prepubertal pigs / Efeito da somatotrofina suína sobre o metabolismo e características testiculares de suínos pré-púberes

The effect of pST on the testicular characteristics and metabolic parameters of prepubertal pigs was evaluated. Experiment 1 aimed to determine the interval between applications of pST based on the concentrations of circulating IGF-I. Experiment 2 aimed to evaluate the effect of pST on metabolic parameters, testicular characteristics, and expression of GHR, IGF-I and PCNA. In Experiment 1 twelve piglets with 30 days of age were used. The pST Group (n = 6) was submitted to one i.m. injection of pST and the Control Group (n = 6) to one placebo injection. Blood collections were performed until day 7 post pST application to determine IGF-I concentration and metabolic profile. In Experiment 2 twelve piglets with 22 days of age were used. The pST Group was submitted to pST injections every three days, and the Control Group received placebo doses during 30 days. Blood collections were performed every 3 days. Samples of liver and testicular tissue were collected to determine gene expression and testicular characteristics. In Experiment 1 IGF-I concentration was higher for the pST Group (P = 0.02). In Experiment 2 the pST Group had higher body and testicular weight (P=0.06) and increased gene expression of PCNA in testes (P < 0.05). However, a reduction in the number of seminiferous tubules, and Sertoli cells, and in GHR expression (P < 0.05) was observed. Thus, pST administration increased body and testis development in prepubertal pigs, however it reduced the density of seminiferous tubules and Sertoli cells.(AU)

Foi investigado o efeito da pST sobre características testiculares e metabolismo de suínos pré-púberes. O Experimento 1 determinou o intervalo entre aplicações de pST, baseado nas concentrações de IGF-I. O Experimento 2 avaliou o efeito da pST sobre o metabolismo, características testiculares e expressão gênica de GHR, IGF-I e PCNA. No Experimento 1, foram usados 12 leitões com 30 dias de idade. O grupo pST (n = 6) foi submetido a uma injeção IM de pST e o grupo Controle (n = 6) a uma injeção de placebo. Coletas de sangue foram realizadas até o dia sete após a aplicação de pST para determinação dos níveis de IGF-I e parâmetros metabólicos. No Experimento 2, foram usados 12 leitões com 22 dias de idade. O grupo pST foi submetido às aplicações de pST a cada 3 dias, e o grupo Controle, às doses de placebo, durante 30 dias. Coletas de sangue foram realizadas a cada três dias. Amostras de fígado e testículo foram coletadas para determinar a expressão gênica e características testiculares. No Experimento 1, a concentração de IGF-I foi maior no grupo pST (P = 0,02). No Experimento 2, o grupo pST teve maior peso corporal e testicular (P = 0,06) e aumento na expressão de PCNA no testículo (P < 0,05). Contudo, foi observada uma redução no número de túbulos seminíferos, células de Sertoli e GHR (P < 0,05). Assim, a administração de pST aumentou o desenvolvimento testicular e corporal de suínos pré-púberes, porém reduziu a densidade de túbulos seminíferos e células de Sertoli.(AU)

INFLUÊNCIA DA ORIGEM E DA CONCENTRAÇÃO DE FSH SOBRE O CULTIVO IN VITRO DE FOLÍCULOS OVARIANOS ISOLADOS NA ESPÉCIE CAPRINA

Os objetivos deste estudo foram: 1) investigar uma curva concentração-resposta do FSH recombinante humano (hrFSH) no cultivo in vitro de folículos pré-antrais (FOPA) e antrais precoces (FOA) isolados caprinos (Fase 1); 2) comparar três diferentes origens de FSH (hipofisário porcino e recombinantes bovino e humano) durante o cultivo in vitro de FOPA e FOA caprinos isolados (Fase 2); 3) investigar se a extensão do período de cultivo, juntamente com mudanças dinâmicas na composição do meio de cultivo para cada estádio folicular, poderia melhorar a eficiência do sistema de cultivo in vitro para FOPA caprinos a taxas equivalentes aos FOA (Fase 3). Na fase 1, folículos isolados foram cultivados por 18 dias nos seguintes tratamentos: meio básico de cultivo (controle); ou meio controle suplementado com 10, 50 ou 100 mUI/mL de rhFSH. Na fase 2, FOPA e FOA foram cultivados por 18 dias e os tratamentos foram: meio base suplementado sem FSH (controle), 10, 50, ou 100 mUI/mL de pFSH (pFSH10, pFSH50 e pFSH100, respectivamente), 100 ng/mL de rbFSH (rbFSH) e 50 mUI/mL de rhFSH (rhFSH). Na fase 3, foram utilizados meios específicos para o cultivo in vitro de FOPA e FOA durante 24 ou 18 dias, respectivamente. A composição do meio de cultivo foi fixa (FOPA e FOA) ou dinâmica (FOPA). Os FOPA foram cultivados em meio fixo com alta concentração de insulina ou em meio dinâmico (insulina alta nos primeiros 6 dias, seguida de baixa insulina + GH até o final do período de cultivo) com ou sem GDF-9. Foram avaliadas a morfologia folicular, a formação de antro, a taxa de crescimento e a produção de estradiol, a viabilidade oocitária e a configuração da cromatina, bem como a expressão gênica relativa do mRNA da parede folicular, nas três fases. Na fase 1, nos FOA, a adição de FSH50 aumentou o diâmetro folicular e a taxa de crescimento, o percentual de oócitos totalmente crescidos e o diâmetro oocitário (P < 0,05) e tendeu a aumentar o percentual de oócitos em MII quando comparados ao controle (P = 0,07). Na fase 2, os tratamentos contendo pFSH apresentaram um percentual menor de folículos intactos e produção de estradiol e maior taxa de extrusão (P < 0,05). Para FOPA, a adição de pFSH10, pFSH100 e rhFSH diminuiu (P < 0,05) a retomada meiótica de oócitos em comparação aos tratamentos controle e rbFSH. Nos folículos antrais, rhFSH e pFSH10 aumentaram (P < 0,05, P = 0,08) a maturação oocitária. Em conclusão, a fonte de FSH afetou diferentemente a expressão gênica e a dinâmica folicular dos folículos pré-antrais e antrais in vitro. Na fase 3, o sistema de cultivo (fixo vs dinâmico) afetou diferentemente o resultado de todos os parâmetros avaliados, ou seja, morfologia e crescimento folicular, produção de estradiol, expressão gênica e maturação oocitária. Dependendo do sistema de cultivo, FOPA e FOA apresentaram taxas de crescimento e de maturação oocitária semelhantes quando cultivados in vitro sob as mesmas condições experimentais.

The aims of this study were: 1) investigate a concentration-response curve of human recombinant FSH (rhFSH) for in vitro culture of isolated caprine preantral and early antral follicles. (Phase 1); 2) compare three different sources of FSH (recombinant bovine, recombinant human, and porcine pituitary) during the in vitro culture of isolated caprine preantral and early antral follicles under the same experimental conditions (Phase 2); 3) investigate whether the extension of the culture period together with dynamic changes in the culture medium composition for each follicular stage could improve the efficiency of the in vitro culture system for late caprine preantral follicles (LPF) to rates equivalent to early antral follicles (EAF) (Phase 3). In phase 1, isolated follicles were cultured for 18 days in the following treatments: basic culture medium (control); or control medium supplemented with 10, 50, and 100 mIU/mL of hrFSH.In phase 2, preantral and early antral follicles were cultured for 18 days and the treatments were: base medium supplemented with no FSH (control), 10, 50, or 100 mIU/mL pFSH (pFSH10, pFSH50, and pFSH100, respectively), 100 ng/mL rbFSH (rbFSH), and 50 mIU/mL rhFSH (rhFSH). In phase 3, specific media were used for the in vitro culture of LPF and EAF during 24 or 18 days, respectively. Culture medium composition was either fixed (LPF and EAF) or dynamic (LPF). LPF were cultured either in a fixed medium with high insulin concentration, or in a dynamic medium (high insulin in the first 6 days followed by low insulin + GH until the end of the culture period) with or without GDF-9. EAF were cultured in a fixed medium containing low insulin, GH, and with or without GDF-9. Follicle morphology, antrum formation, growth rate, and estradiol production, and oocyte viability and chromatin configuration, and follicle wall mRNA relative gene expression were evaluated in the three phases. In phase 1, in antral follicles, the FSH addition at 50 mIU/mL increased follicular diameter and growth rate, the percentage of fully grown oocytes, and oocyte diameter (P < 0.05), and tended to increase the percentage of MII oocytes when compared to the control (P = 0.07). For preantral follicles, the addition of pFSH10, pFSH100, and rhFSH decreased (P < 0.05) oocyte meiotic resumption compared to control and rbFSH treatments. For antral follicles, rhFSH and pFSH10 increased (P = 0.08 P < 0.05) oocyte maturation. In conclusion, the source of FSH differently affected gene expression and follicular dynamics of preantral and antral follicles in vitro. In phase 3, the culture system (fixed vs. dynamic) differently affected the outcome of all parameters evaluated, i.e., follicle morphology and growth, estradiol production, gene expression, and oocyte maturation. Depending on the culture system, LPF and EAF had similar growth rates and oocyte maturation rates when cultured in vitro under the same experimental conditions.

Associação de polimorfismo microssatélite no gene GH em Tambaqui (Colossoma macropomum) com características fenotípicas e expressão gênica

MARQUES, M. F. Associação de polimorfismo microssatélite no gene GH em Tambaqui (Colossoma macropomum) com características fenotípicas e expressão gênica. 2018. 41 f. Tese (Doutorado em Ciências) Faculdade de Zootecnia e Engenharia de Alimentos, Universidade de São Paulo, Pirassununga, 2018. O objetivo do trabalho foi verificar se existe associação dos polimorfismos de lócus microssatélites com o desempenho e expressão gênica. Após genotipagem, os alelos 122 e 130 foram observados, com frequência de 0,94 e 0,06. A frequência gênica foi de 0,88 para animais 130/130 e de 0,12 para indivíduos 122/130. Não houve diferença para os dados fenotípicos entre animais de genótipos diferentes, embora o grupo de animais heterozigoto tenha apresentado uma leve superioridade. A taxa de expressão do Gh não é estatisticamente diferente entre os genótipos observados, porém o grupo homozigoto teve uma taxa de expressão de mRNA maior e mesmo assim menores valores de peso e comprimento, sugerindo uma correlação. O par de iniciadores desenhado amplificou e genotipou com eficiência o locus STR nos animais estudados. A falta de qualidade da água e o manejo inadequado dos animais podem ser os causadores das alterações histopatológicas encontradas no fígado dos animais estudados. Os peixes podem ser via de contaminação humana, devido ao seu consumo como alimento, portanto, medidas de controle devem ser iniciadas para minimizar esse processo. Estudos mais aprofundados com maior controle ambiental, maior variabilidade alélica, maior número amostral e análise de outros genes de interesse associados, seriam interessantes para complementar e enriquecer o presente trabalho.

MARQUES, M. F. Association of microsatellite polymorphism in the GH gene in Tambaqui (Colossoma macropomum) with phenotypic characteristics and gene expression. 2018. 41 f. Tese (Doutorado em Ciências) Faculdade de Zootecnia e Engenharia de Alimentos, Universidade de São Paulo, Pirassununga, 2018. The objective of this study was to verify if there is association of polymorphisms of microsatellite loci with the performance and gene expression. After genotyping, alleles 122 and 130 were observed, with a frequency of 0,94 and 0,06. The gene frequency was 0,88 for 130/130 animals and 0,12 for 122/130 individuals. There was no difference for phenotypic data among animals of different genotypes, although the group of heterozygous animals presented a slight superiority. The expression rate of GH is not statistically different among the observed genotypes, but the homozygote group had a higher mRNA expression rate and even lower values of weight and length, suggesting a correlation. The pair of primers designed amplified and efficiently genotyped the STR locus in the animals studied. The lack of water quality and inadequate management of the animals may be the cause of the histopathological changes found in the liver of the animals studied. Fish can be a way of human contamination, due to their consumption as food, therefore, control measures must be initiated to minimize this process. Further studies with greater environmental control, greater allelic variability, greater sample size and analysis of other associated genes of interest, would be interesting to complement and enrich the present work.

UFO DE SELEÇÃO ASSISTIDA POR MARCADORES MOLECULARES EM MELHORAMENTO GENÉTICO DE SUÍNOS

Resumo: Com o avanço do conhecimento sobre o genoma animal, a produção de suínos se beneficia das novas ferramentas moleculares na busca de melhores resultados zootécnicos, como eficiência alimentar, número de leitões desmamados/porca ano, maior produção de carne na carcaça, melhor rendimento dos cortes cárneos. Assim a utilização dos marcadores moleculares seleciona os melhores genótipos para as características desejadas, permitindo um menor tempo entre as gerações, menor custo para os produtores, maior rendimento de produtos para indústria e melhor qualidade para os consumidores. O trabalho foi dividido em duas etapas onde no primeiro estudo procurou-se avaliar em uma população de 272 matrizes Large White, os polimorfismos dos genes DGAT1, LEPR, HFABP, MC4R, SREBF1 pela técnica do ARMS-PCR e para o polimorfismo do gene GH empregouse a técnica do PCR-RFLP. O DNA genômico foi extraído do bulbo do pelo. Os primers foram desenhados para cada um dos genes utilizando as sequências depositadas no GenBanK. Após o sequenciamento do DNA não foi encontrado polimorfismos, com exceção do marcador MC4R que apresentou 100% de heterozigose. Da população inicial, 209 amostras foram genotipados para o gene pGH, onde um amplicon de 605 pares de base foi digerido pela enzima de restrição DdeI, resultando em dois alelos. O alelo D1 com 335,148 e 122 pb e o alelo D2 com 457 e 148 pb. A frequência genotípica de D1D2 foi de 88% e para D2D2 de 22%. O alelo D1 apresentou frequência de 11% e D2 89%. A alta intensidade de seleção para raças comerciais, justifica a ausência ou o baixo número de polimorfismos para os genes estudados. Para a segunda parte da pesquisa objetivou-se associar o polimorfismo do pGH/DdeI com características de carcaça e qualidade de carne. Utilizou-se uma população de 476 animais provenientes do cruzamento do macho AGPIC 415 e fêmeas LW X LD livres da mutação do gene halotano, machos castrados e fêmeas com idade de 150 a 180 dias. Foram coletadas as informações como peso da carcaça quente, comprimento de carcaça, pH 45min e pH ± 16h pós mortem dos músculos Longíssimus cervicis, Longíssimus dorsi e Semimebranosus, espessura de toucinho, profundidade do músculo LD e cor pelo sistema CIELAB. A capacidade de retenção de água foi realizada pelo método do papel filtro no músculo Semimebranosus e calculado a porcentagem de carne magra. Encontrou-se um SNP na posição g365G> A, com a troca do núcleotideo guanina por uma adenina, e em consequência, o aminoácido arginina por uma glutamina. Apresentou o alelo D1 com os fragmentos de 335 pb, 148 pb e 122 pb e o alelo D2 com 457 genotípicas pb e 148 pb com as frequencias de 0,43 e 0,57 respectivamente. As frequências encontradas foram as seguintes: D1D1 (22,09%), D1D2 (49,82%), D2D2 (28,09%). Após a realização do teste de qui-quadro a população se apresentou em equilibrio de Hardy-Weinberg. O polimorfismo do gene pGH/DdeI apresentou relação com as características de carne magra e pH a 45, propriedades estas importantes para a comercialização da carne fresca bem como produtos processados.

With the advancement of knowledge about the animal genome, the production of pigs benefits from the new molecular tools in search of the best zootechnical, results such as feed efficiency, number of piglets weaned / sow year, higher meat production in the carcass, better yield of meat cuts. Thus, the use of molecular markers selects the best genotypes for the desired characteristics, allowing shorter generation time, lower cost to producers, higher yields of products for industry and better quality for consumers. The work was divided into two stages where the first study sought to evaluate in a population of 272 Large White matrices the polymorphisms of the DGAT1, LEPR, HFABP, MC4R, SREBF1 genes by the ARMS-PCR technique and for the pGH gene polymorphism the PCR-RFLP technique was used. Genomic DNA was extracted from the hair bulb. The primers were designed for each of the genes using the sequences deposited in GenBanK. After DNA sequencing no polymorphisms were found, with the exception of the MC4R marker which showed 100% heterozygosity. Considering the initial population, 209 samples were genotyped for the pGH gene, where a 605 base pair amplicon was digested by restriction enzyme DdeI, resulting in two alleles. The D1 allele with 335,148 and 122 pb and the D2 allele with 457 and 148 pb. The genotypic frequency of D1D2 was 88% and for D2D2 22%. The D1 allele had a frequency of 11% and for D2 of 89%. The high intensity of selection for commercial breeds justifies the absence or the low number of polymorphisms for the genes studied. For the second part of the research, we aimed to associate pGH / DdeI polymorphism with carcass characteristics and meat quality. A population of 476 animals from the crossing of the AGPIC 415 male and LW X LD females free from the halothane gene mutation, castrated males and females aged 150 to 180 days. The information were collected as warm carcass weight, carcass length, pH 45min and pH ± 16h postmortem of the muscles Longíssimos cervicis, Longíssimos dorsi and Semimebranosus, backfat thickness, LD muscle depth and color by the CIELAB system. The water holding capacity was determined by the filter paper method in the Semimebranosus muscle and the percentage of lean meat was calculated. A SNP at position g365G> A was found, with the exchange of the guanine nucleotide by an adenine and consequently the amino acid arginine by a glutamine. It presented the D1 allele with fragments of 335 bp, 148 bp and 122 bp and the D2 allele with 457 bp and 148 bp and with frequencies of 0.43 and 0.57 respectively. The genotypic frequencies found were as follows: D1D1 (22.09%), D1D2 (49.82%), D2D2 (28.09%). After the chi-square test the population presented in Hardy-Weinberg equilibrium. The polymorphism of the pGH / DdeI gene was related to the characteristics of lean meat and pH to 45, properties that are important for the commercialization of fresh meat as well as processed products.