Equines infected by Leishmania (Leishmania) Infantum in the endemic area of Teresina, Piauí, Brazil / Equídeos infectados por Leishmania (Leishmania) Infantum na área endêmica de Teresina, Piauí, Brasil

This study aims to research natural Leishmania sp equine infection in an endemic American Tegumentary Leishmaniasis area of Teresina City, Piauí State, Brazil. Leishmania are caused by intracellular hemoflagellate protozoa of the gender Leishmania. Clinically we can observe a variety of signals since cutaneous injuries until viscerotropic types which are more severe and potentially fatal. They constitute a great worldwide public health problem. The dog is considered the main domestic reservoir of American Visceral Leishmaniasis (AVL). In the peridomicile of rural abodes, the equines, although with less relevance than canines, may become an important host for this parasite. Peripheral blood was collected from 42 equines for DNA research of leishmania spp through the technique of "nested" PCR with oligonucleotides flanking the region ITS1. The confirmation of the species was performed by the digestion of the amplified product with restriction enzyme Hae III. The animals did not present any suggestive clinical pathology signal, however, 21 (50%) were PCR positive for Leishmaniasis (14 equines, four donkeys and three mules). The digestion of the product from "nested" PCR permitted to identify DNA sequences of Leishmania (Leishmania) infantum, characterizing the infection as American Visceral Leishmaniasis (AVL). The presence of infected equines with Leishmania (Leishmania) infantun suggests theirparticipation in the cycle of visceral Leishmaniasis transmission in Teresina City, Piauí State, Brazil.(AU)

Objetivou-se com este estudo pesquisar infecção natural de equídeos por Leishmania sp em área endêmica de leishmaniose tegumentar americana de Teresina, Piauí, Brasil. As leishmanioses são causadas por protozoário hemoflagelado, intracelular integrante do gênero Leishmania. Clinicamente observa-se uma variedade de sinais desde lesões cutâneas até formas viscerotrópicas que são mais graves e potencialmente fatais. Constituem grande problema de saúde pública mundial. O cão é considerado o principal reservatório doméstico de leishmaniose visceral americana (LVA). No peridomicílio de moradias rurais, os equídeos, embora com menor relevância que os canídeos, podem se transformar em importante hospedeiro para este parasito. Coletou-se sangue periférico de 42 equídeos para pesquisa de DNA de leishmânia spp através da técnica de "nested" reação em cadeia de polimerase (PCR) com oligonucleotídeos flanqueando a região ribossomal internal transcribed spacer 1 (ITS1). A confirmação da espécie foi realizada pela digestão do produto amplificado com enzima de restrição Hae III. Os animais não apresentavam sinal clínico sugestivo de nenhuma patologia, entretanto 21 (50%) foram PCR positivos para leishmaniose (14 equinos, quatro asininos e três muares). A digestão do produto da "nested" PCR permitiu identificar sequências de DNA de Leishmania (Leishmania) infantum, caracterizando a infecção como leishmaniose visceral americana (LVA). A presença de equídeos infectados com Leishmania (Leishmania) infantum sugere sua participação no ciclo de transmissão da leishmaniose visceral em Teresina, Piauí, Brasil.(AU)

First record of Trypanosoma sp. (Protozoa: Kinetoplastida) in tuvira (Gymnotus aff. inaequilabiatus) in the Pantanal wetland, Mato Grosso do Sul State, Brazil

The blood infection by Trypanosoma sp. in tuvira (Gymnotus aff. inaequilabiatus) from the Pantanal wetland was reported in this study. Ten fish from the Paraguay River in the Pantanal were evaluated for the presence of hemoflagellates. Trypomastigotes of Trypanosoma sp. were observed in blood smears from three fish (30% prevalence) and some forms were seen to be undergoing division. Using the diagnostic methods of fresh examination and blood centrifugation in hematocrit capillary tubes, the prevalence rate was 80%. This is the first report of Trypanosoma sp. in tuvira in Brazil.

O objetivo do presente estudo foi reportar a infecção por Trypanosoma sp. em tuviras (Gymnotus aff. inaequilabiatus) oriundas do Pantanal Sul-mato-grossense, Brasil. Dez peixes provenientes do rio Paraguai, Pantanal Sul-mato-grossense, foram avaliados quanto à presença de hemoflagelados. Tripomastigotas de Trypanosoma sp. foram observados nas extensões sanguíneas de três peixes (30% de prevalência), e algumas formas encontravam-se em divisão. Por meio do exame a fresco e da centrifugação do sangue em capilar de hematócrito como métodos para diagnóstico, a taxa de prevalência foi de 80%. Esse é o primeiro relato de Trypanosoma sp. em tuviras no Brasil.

First record of Trypanosoma sp. (Protozoa: Kinetoplastida) in tuvira (Gymnotus aff. inaequilabiatus) in the Pantanal wetland, Mato Grosso do Sul State, Brazil / Primeiro registro de Trypanosoma sp. (Protozoa: Kinetoplastida) em tuvira(Gymnotus aff. inaequilabiatus) no Pantanal, Mato Grosso do Sul, Brasil

The blood infection by Trypanosoma sp. in tuvira (Gymnotus aff. inaequilabiatus) from the Pantanal wetland was reported in this study. Ten fish from the Paraguay River in the Pantanal were evaluated for the presence of hemoflagellates. Trypomastigotes of Trypanosoma sp. were observed in blood smears from three fish (30% prevalence) and some forms were seen to be undergoing division. Using the diagnostic methods of fresh examination and blood centrifugation in hematocrit capillary tubes, the prevalence rate was 80%. This is the first report of Trypanosoma sp. in tuvira in Brazil. (AU)

O objetivo do presente estudo foi reportar a infecção por Trypanosoma sp. em tuviras (Gymnotus aff. inaequilabiatus) oriundas do Pantanal Sul-mato-grossense, Brasil. Dez peixes provenientes do rio Paraguai, Pantanal Sul-mato-grossense, foram avaliados quanto à presença de hemoflagelados. Tripomastigotas de Trypanosoma sp. foram observados nas extensões sanguíneas de três peixes (30% de prevalência), e algumas formas encontravam-se em divisão. Por meio do exame a fresco e da centrifugação do sangue em capilar de hematócrito como métodos para diagnóstico, a taxa de prevalência foi de 80%. Esse é o primeiro relato de Trypanosoma sp. em tuviras no Brasil. (AU)

DESENVOLVIMENTO DE TESTE IMUNOENZIMÁTICO ELISA PARA DIAGNÓSTICO DA TRIPANOSOMÍASE BOVINA UTILIZANDO PROTEÍNA RECOMBINANTE DE Trypanosoma vivax UBERABA, MG 2016

A tripanosomíase é causada pelo protozoário hemoflagelado Trypanosoma vivax e acomete ungulados domésticos e selvagens. Estima-se que animais infectados contribuam com uma perda anual de 160 milhões de dólares, devido a redução na produção de leite e carne, perda de escore corporal, dificuldades na reprodução, abortos e em muitos casos, morte. O patógeno causa sintomatologia clínica que pode ser similar a outras patologias que acometem bovinos, portanto o diagnóstico deve ser preciso e não erroneamente diagnosticado como uma doença com sintomatologia similar. O objetivo do presente trabalho foi obter proteína recombinante do Trypanosoma vivax e padronizar um teste ELISA (Enzime linked immunosorbent assay), para diagnóstico da tripanosomíase bovina com maior sensibilidade e especificidade. Uma proteína foi selecionada por meio de análise por bioinformática, produzida de forma recombinante, expressa, purificada e utilizada na padronização do ELISA. Inicialmente, diferentes concentrações de proteína recombinante (1, 10, 100 e 1000 nanogramas) foram testadas, bem como diferentes diluições de pool de soros positivos de animais experimentalmente infectados e negativos (1:100, 1:250 e 1:500) e diferentes diluições de conjugado anti-IgG marcado com peroxidase (1:5000, 1:10000 e 1:20000). Após a padronização, foi realizado o teste utilizando-se amostras de bovinos infectados experimentalmente por T. vivax nos dias 0, 21, 24, 27 e 30 pós-infecção experimental. A maior diferença de densidade ótica entre animais positivos e negativos foi observada utilizando-se 1000 nanogramas de proteína recombinante, soro na diluição de 1:100 e conjugado na diluição de 1:5000. Após analisar as densidades óticas, foi realizada a curva ROC (Receiver Operating Characteristic) e estabelecido um ponto de corte de 0,04. O teste apresentou acurácia de 98,6%, sensibilidade de 94,4% e especificidade de 100%. Valor preditivo positivo e valor preditivo negativo foram 100% e 93,3%, respectivamente. A razão de verossimilhança negativa e positiva foram de 0,06 e +, respectivamente. A padronização se mostrou adequada com a quantidade utilizada de proteína recombinante de 1000 nanogramas, diluição de soros de 1:100 e diluição de conjugado de 1:5000. Sensibilidade e especificidade obtidos com soro de animais infectados experimentalmente são promissores e destacam o potencial da proteína recombinante para diagnóstico preciso da tripanosomíase bovina.

Tripanosomiasis is caused by the hemoflagellate protozoan Trypanosoma vivax and affects domestic and wild ungulates. It is estimated that infected animals can contribute to an estimated annual loss of 160 million dollars, due to decrease in milk and meat production, loss of body condition, difficulties in reproduction, abortion, and in many cases death. The pathogen causes clinical symptoms that can be similar to other pathologies that affect bovines, therefore, the diagnosis must be precise and not misdiagnosed to a disease with similar symptoms. The objective of this present study was to obtain recombinant protein from Trypanosoma vivax and standardize an ELISA (Enzime linked immunosorbent assay), for the diagnosis of bovine tripanosomiasis with higher sensitivity and specificity. A protein was selected via bioinformatics analysis, recombinantly produced, expressed, purified and used in ELISA padronization. Initially, different concentrations of recombinant protein (1, 10, 100 and 1000 nanograms) were tested, as well as different dilutions of sera pool of positive animals experimentally infected and negative (1:100, 1:250 e 1:500), and different dilutions of conjugate anti-IgG marked with peroxidase (1:5000, 1:10000 and 1:20000). After padronization, the test was performed using samples from bovines experimentally infected with T. vivax on days 0, 21, 24, 27 and 30 after experimental infection. The highest difference of optical density among positive and negative animals was observed using 1000 nanograms of recombinant protein, sera dilution of 1:100 and conjugate dilution of 1:5000. After optical density analysis, a Receiver Operating Carachteristic (ROC) curve was done and a cut- off of 0,04 was stablished. The test showed accuracy of 98,6%, sensibility of 94,4% and specificity of 100%. Predicted positive and negative values were respectively 100% e 93,3%. Negative and positive likelihood ratio were respectively 0,06 e +. Standardization showed adequate with the used amount of recombinant protein of 1000 nanograms, sera dilution of 1:100 and conjugate dilution of 1:5000. Sensitivity and specificity results obtained using sera of experimentally infected animals were promising and show the potential of the recombinant protein for the precise diagnose of bovine tripanosomiasis.

Resposta eritropoética de ratos em diferentes graus de parasitemia por Trypanosoma evansi

Trypanosoma evansi is a flagellate protozoan that causes a disease characterized by high parasitemia and acute anemia in various species. This study was aimed at evaluating and establishing a relationship between different parasitemia levels and eritropoyesis in Wistar rats (Rattus norvegicus) experimentally infected by T. evansi. Forty two animals were used. In 36 animals parasites were inoculated by intraperitoneal blood injection of 0.2ml containing 2.5x104 parasites. Six non-inoculated animals were used as controls. Parasitemia was evaluated every 12 hours and the animals were allocated in groups according to parasitemia levels. Then they were classified according to average number of parasites in 10 random homogeneous fields, Group A: control (not-inoculated); B: rats with 1-10 trypanosomes/field; C: 11-20 trypanosomes/field; D: 21-30 trypanosomes/field; E: 31-40 trypanosomes/field; F: 41-50 trypanosomes/field; G: more then 51. Blood samples were taken when the animals reached the correspondent group number of parasites. Hemogram and iron levels were evaluated and a bone marrow cytology was performed to detect the myeloid:erythroid ratio. Statistical analysis showed a significant reduction on red blood cells count and hematocrit from group E on and also hemoglobin on groups F and G. The myeloid:erythroid ratio reduced from 0.7 to 0.6 on groups F and G (P 0.005). Iron levels alterations were not detected. These data showed that Wistar rats with parasitemia higher then 31 parasites per field have an acute anemia associated to a compensatory hematopoietic activity.

O Trypanosoma evansi é um protozoário hemoflagelado que causa, em várias espécies, uma doença caracterizada por altos níveis de parasitemia, com rápido desenvolvimento de anemia. Este trabalho teve como objetivo investigar a relação entre o grau de parasitemia e a alteração na eritropoese de ratos (Rattus norvegicus) da linhagem Wistar infectados experimentalmente com T. evansi. Foram utilizados 42 ratos, dos quais 36 foram inoculados pela via intraperitoneal com 0,2ml de sangue, contendo 2,5 x 104 parasitas. Seis ratos não-inoculados foram utilizados como controles. Após inoculação, a parasitemia foi avaliada a cada 12h. Os grupos para análise foram estipulados de acordo com a média de tripanossomas em 10 campos homogêneos focados aleatoriamente, sendo: A, controle; B, animais que apresentaram um grau de parasitemia entre 1-10 tripanossomas/campo; C, ratos com 11-20 tripanossomas/campo; D, ratos com 21-30 tripanossomas/campo; E, ratos com 31-40 tripanossomas/campo; F, 41-50 tripanossomas/campo; e G, ratos com mais de 51 tripanossomas/campo. Quando os animais apresentaram o número de protozoários equivalente ao grupo, foram coletadas amostras de sangue para realização de hemograma e dosagem de ferro, e foi realizada citologia de medula óssea para avaliação da relação mielóide:eritróide. A análise estatística mostrou redução significativa das hemácias e do hematócrito a partir de 31 tripanossomas/campo (grupos E, F e G; P 0,005) e a redução de hemoglobina ocorreu a partir de 41 tripanossomas/campo (grupos F e G; P 0,005). A relação mielóide:eritróide foi reduzida de 0,7 para 0,6 a partir de 41 tripanossomas/campo (grupos F e G; P 0,005). Não foram detectadas variações na concentração de ferro. Os dados obtidos demonstraram que ratos com parasitemia acima de 31 tripanossomas por campo desenvolvem uma anemia aguda, com um aumento compensatório na atividade hematopoética.

Resposta eritropoética de ratos em diferentes graus de parasitemia por Trypanosoma evansi

Trypanosoma evansi is a flagellate protozoan that causes a disease characterized by high parasitemia and acute anemia in various species. This study was aimed at evaluating and establishing a relationship between different parasitemia levels and eritropoyesis in Wistar rats (Rattus norvegicus) experimentally infected by T. evansi. Forty two animals were used. In 36 animals parasites were inoculated by intraperitoneal blood injection of 0.2ml containing 2.5x104 parasites. Six non-inoculated animals were used as controls. Parasitemia was evaluated every 12 hours and the animals were allocated in groups according to parasitemia levels. Then they were classified according to average number of parasites in 10 random homogeneous fields, Group A: control (not-inoculated); B: rats with 1-10 trypanosomes/field; C: 11-20 trypanosomes/field; D: 21-30 trypanosomes/field; E: 31-40 trypanosomes/field; F: 41-50 trypanosomes/field; G: more then 51. Blood samples were taken when the animals reached the correspondent group number of parasites. Hemogram and iron levels were evaluated and a bone marrow cytology was performed to detect the myeloid:erythroid ratio. Statistical analysis showed a significant reduction on red blood cells count and hematocrit from group E on and also hemoglobin on groups F and G. The myeloid:erythroid ratio reduced from 0.7 to 0.6 on groups F and G (P 0.005). Iron levels alterations were not detected. These data showed that Wistar rats with parasitemia higher then 31 parasites per field have an acute anemia associated to a compensatory hematopoietic activity.

O Trypanosoma evansi é um protozoário hemoflagelado que causa, em várias espécies, uma doença caracterizada por altos níveis de parasitemia, com rápido desenvolvimento de anemia. Este trabalho teve como objetivo investigar a relação entre o grau de parasitemia e a alteração na eritropoese de ratos (Rattus norvegicus) da linhagem Wistar infectados experimentalmente com T. evansi. Foram utilizados 42 ratos, dos quais 36 foram inoculados pela via intraperitoneal com 0,2ml de sangue, contendo 2,5 x 104 parasitas. Seis ratos não-inoculados foram utilizados como controles. Após inoculação, a parasitemia foi avaliada a cada 12h. Os grupos para análise foram estipulados de acordo com a média de tripanossomas em 10 campos homogêneos focados aleatoriamente, sendo: A, controle; B, animais que apresentaram um grau de parasitemia entre 1-10 tripanossomas/campo; C, ratos com 11-20 tripanossomas/campo; D, ratos com 21-30 tripanossomas/campo; E, ratos com 31-40 tripanossomas/campo; F, 41-50 tripanossomas/campo; e G, ratos com mais de 51 tripanossomas/campo. Quando os animais apresentaram o número de protozoários equivalente ao grupo, foram coletadas amostras de sangue para realização de hemograma e dosagem de ferro, e foi realizada citologia de medula óssea para avaliação da relação mielóide:eritróide. A análise estatística mostrou redução significativa das hemácias e do hematócrito a partir de 31 tripanossomas/campo (grupos E, F e G; P 0,005) e a redução de hemoglobina ocorreu a partir de 41 tripanossomas/campo (grupos F e G; P 0,005). A relação mielóide:eritróide foi reduzida de 0,7 para 0,6 a partir de 41 tripanossomas/campo (grupos F e G; P 0,005). Não foram detectadas variações na concentração de ferro. Os dados obtidos demonstraram que ratos com parasitemia acima de 31 tripanossomas por campo desenvolvem uma anemia aguda, com um aumento compensatório na atividade hematopoética.