Phyto- and Bio-Chemical evaluation of Diospyros kaki L. cultivated in Egypt and its biological activities / Avaliação fito e bioquímica de Diospyros kaki L. cultivado no Egito e suas atividades biológicas

Diospyros kaki L. or Costata cultivar is the main persimmon variety progressively consumed in the Egyptian market and exportation. The objective of this study was to investigate the bioprotective effects of the alcoholic extract of fruits as well as leaves of D. kaki using in-vivo rat models. Petroleum ether extracts of fruits and leaves were analytically characterized for saponifiable and unsaponifiable compounds by GC/MS. Main flavonoids were chromatographically isolated from 80% aqueous methanol extract of leaves. Chemical evaluation for fruits and leaves namely, content of moisture, ash, proteins, fatty acids, amino acids, fat and water soluble vitamins, minerals, carotenoids was carried out. Total antioxidant activity was determined by radical scavenging effects using DPPH assay. The effect on biochemical parameters and its biological activity were also performed. Results revealed the identification of the major compounds of saponifiable and unsaponifiable matters of fruits and leaves. Scopoletin, as well as, kaempferol, luteolin, rutin and apigenin 7-O-glucoside were isolated and identified. It showed that this plant can provide a good nutritional value and it is safe regarding the kidney and liver functions, good source that help in enhancing the antioxidant defense against free radicals. No abnormal effects were found in lipids profile on experimental animals and there were good results in the ratio of HDL and LDL cholesterol. Also, this plant can help in optimizing blood sugar, enhancing the level of blood haemoglobin. It is concluded that D. kaki displays a good source of nutrients and bioactive compounds that may contribute to its therapeutic benefits against the risk of disease complications.(AU)

Diospyros kaki L. ou Costata é a principal variedade de caqui progressivamente consumida no mercado e exportação egípcia. O objetivo deste estudo foi investigar os efeitos bioprotetores do extrato alcoólico de frutos e folhas de D. kaki utilizando modelos de ratos in vivo. Extratos de éter de petróleo provenientes de frutos e folhas foram caracterizados analiticamente para compostos saponificáveis e insaponificáveis por GC/MS. Os principais flavonoides foram isolados cromatograficamente, a partir de 80% de extrato aquoso de folhas de metanol. Foi realizada avaliação química de frutos e folhas, ou seja, de teor de umidade, cinzas, proteínas, ácidos graxos, aminoácidos, vitaminas lipossolúveis e solúveis em água, minerais, carotenoides. Foi caracterizada a atividade antioxidante, utilizando ensaio (DPPH). O efeito nos parâmetros bioquímicos e sua atividade biológica também foram analisados. Os resultados revelaram a identificação dos principais compostos saponificáveis e insaponificáveis de frutos e folhas. Escopoletina, bem como kaempferol, luteolina, rutina e apigenina 7-O-glicosídeo foram isolados e identificados. Também demonstraram que esta planta pode proporcionar um bom valor nutricional e é segura em relação às funções renais e hepáticas, boa fonte que ajuda a melhorar a defesa antioxidante contra os radicais livres. Não foram encontrados efeitos anormais no perfil lipídico em testes em animais, e houve um efeito satisfatório na relação de colesterol HDL e LDL. Além disso, esta planta pode ajudar na otimização do açúcar no sangue, aumentando o nível de hemoglobina. Conclui-se que o D. kaki apresenta uma boa fonte de nutrientes e de compostos bioativos que contribuem para seus benefícios terapêuticos e contra o risco de complicações de doenças.(AU)

Phyto- and Bio-Chemical evaluation of Diospyros kaki L. cultivated in Egypt and its biological activities

Abstract Diospyros kaki L. or Costata cultivar is the main persimmon variety progressively consumed in the Egyptian market and exportation. The objective of this study was to investigate the bioprotective effects of the alcoholic extract of fruits as well as leaves of D. kaki using in-vivo rat models. Petroleum ether extracts of fruits and leaves were analytically characterized for saponifiable and unsaponifiable compounds by GC/MS. Main flavonoids were chromatographically isolated from 80% aqueous methanol extract of leaves. Chemical evaluation for fruits and leaves namely, content of moisture, ash, proteins, fatty acids, amino acids, fat and water soluble vitamins, minerals, carotenoids was carried out. Total antioxidant activity was determined by radical scavenging effects using DPPH assay. The effect on biochemical parameters and its biological activity were also performed. Results revealed the identification of the major compounds of saponifiable and unsaponifiable matters of fruits and leaves. Scopoletin, as well as, kaempferol, luteolin, rutin and apigenin 7-O-glucoside were isolated and identified. It showed that this plant can provide a good nutritional value and it is safe regarding the kidney and liver functions, good source that help in enhancing the antioxidant defense against free radicals. No abnormal effects were found in lipids profile on experimental animals and there were good results in the ratio of HDL and LDL cholesterol. Also, this plant can help in optimizing blood sugar, enhancing the level of blood haemoglobin. It is concluded that D. kaki displays a good source of nutrients and bioactive compounds that may contribute to its therapeutic benefits against the risk of disease complications.

Resumo Diospyros kaki L. ou Costata é a principal variedade de caqui progressivamente consumida no mercado e exportação egípcia. O objetivo deste estudo foi investigar os efeitos bioprotetores do extrato alcoólico de frutos e folhas de D. kaki utilizando modelos de ratos in vivo. Extratos de éter de petróleo provenientes de frutos e folhas foram caracterizados analiticamente para compostos saponificáveis e insaponificáveis por GC/MS. Os principais flavonoides foram isolados cromatograficamente, a partir de 80% de extrato aquoso de folhas de metanol. Foi realizada avaliação química de frutos e folhas, ou seja, de teor de umidade, cinzas, proteínas, ácidos graxos, aminoácidos, vitaminas lipossolúveis e solúveis em água, minerais, carotenoides. Foi caracterizada a atividade antioxidante, utilizando ensaio (DPPH). O efeito nos parâmetros bioquímicos e sua atividade biológica também foram analisados. Os resultados revelaram a identificação dos principais compostos saponificáveis e insaponificáveis de frutos e folhas. Escopoletina, bem como kaempferol, luteolina, rutina e apigenina 7-O-glicosídeo foram isolados e identificados. Também demonstraram que esta planta pode proporcionar um bom valor nutricional e é segura em relação às funções renais e hepáticas, boa fonte que ajuda a melhorar a defesa antioxidante contra os radicais livres. Não foram encontrados efeitos anormais no perfil lipídico em testes em animais, e houve um efeito satisfatório na relação de colesterol HDL e LDL. Além disso, esta planta pode ajudar na otimização do açúcar no sangue, aumentando o nível de hemoglobina. Conclui-se que o D. kaki apresenta uma boa fonte de nutrientes e de compostos bioativos que contribuem para seus benefícios terapêuticos e contra o risco de complicações de doenças.

Potential of Baccharis alnifolia Meyen & Walpan (Chilka) from northern Chile used as a medicinal infusion / Potencial de Baccharis alnifolia Meyen & Walpan (Chilka) do norte do Chile usado como infusão medicinal

Baccharis alnifolia Meyen & Walp. is a native and medicinal, Chilean Altiplano herb that is used as a poultice and also consumed as an infusion to relieve inflammation. This study evaluated the antioxidant and cytotoxic effect of the ethanolic extract of B. alnifolia and their infusion. It was reported that the ethanol extract contains 4.42 mg GAE/g of dry weight and the infusion contains 35.86 mg GAE/L of total polyphenols. Also, it determined the antioxidant capacity using Ferric reducing antioxidant power (FRAP), Oxygen Radical Absorbance Capacity (ORAC) and Trolox equivalent antioxidant capacity (TEAC) assay. Moreover, seven metabolites including between phenolic acids and flavonoids were identified for the first time in both extracts of the medicinal plant Baccharis alnifolia. The UHPLC-DAD chromatograms revealed the majority presence of ferulic acid and luteolin, both could be responsible for the antioxidant and cytotoxic activity. Furthermore, we realized a preliminary screening of cytotoxicity in different tumor cell lines, finding that these extracts have cytotoxic potential on kidney cells.(AU)

Baccharis alnifolia Meyen & Walp. é uma erva altiplana nativa e medicinal, chilena que é usada como cataplasma e também consumida como uma infusão para aliviar a inflamação. Este estudo avaliou o efeito antioxidante e citotóxico do extrato etanólico de B. alnifolia e sua infusão. Verificou-se que o extrato etanólico contém 4,42 mg GAE / g de peso seco e a infusão contém 35,86 mg GAE / L de polifenóis totais. Além disso, determinou a capacidade antioxidante utilizando o poder antioxidante redutor de Fração (FRAP), Capacidade de Absorção Radical de Oxigênio (ORAC) e capacidade antioxidante equivalente de Trolox (TEAC). Além disso, sete metabólitos, entre ácidos fenólicos e flavonóides, foram identificados pela primeira vez em ambos os extratos da planta medicinal Baccharis alnifolia. Os cromatogramas UHPLC-DAD revelaram a presença majoritária de ácido ferúlico e luteolina, ambos podendo ser responsáveis pela atividade antioxidante e citotóxica. Além disso, realizamos uma triagem preliminar da citotoxicidade em diferentes linhagens de células tumorais, descobrindo que esses extratos têm potencial citotóxico nas células renais.(AU)

First phytochemical and biological study of the ethanolic extract from leaves of Capirona decorticans (Rubiaceae) / Primeiro estudo fitoquímico e biológico do extrato etanólico de folhas de Capirona decorticans (Rubiaceae)

Capirona decorticans (Rubiaceae) is popularly used to treat warts, wounds, mycoses and scabies, and is also a component of the Ayahuasca tea. Despite its popular use, the phytochemical and pharmacological research on this species is limited. Therefore, this work quantified phenolic compounds in the ethanolic extract (EE) and hydromethanolic fraction (FM) (406, 293 mgEAG g-1, respectively) from leaves of C. decorticans. We identified flavonoids by LC-MS/MS-MMR-ESI (apigenin, rutin, luteolin, miricetin, quercetin, quercetin-3--D-glucoside, quercetrin), and evaluated oxidative stress and mutagenic/antimutagenic effect of EE and FM through an in vivo experiment using Swiss mice and cyclophosphamide (CP) as an inducer of DNA damage and oxidative stress. Mice were pretreated for 15 consecutive days with EE or FM (250 mg kg-1) and then intraperitoneally injected with CP (25 mg kg-1). Carbonylated proteins, ascorbic acid, catalase and thiobarbituric acid-reactive substances were measured in hepatic and renal tissues. The mutagenic/antimutagenic effect was evaluated through the Micronucleus Test. Protein carbonylation in the liver of animals exposed to CP was reduced by FM. There was no significant effect on other markers of oxidative stress. The groups treated with the extracts showed a significant percentage reduction (EE = 96% and FM = 71%) in the frequency of micronucleated polychromatic erythrocytes induced by CP. EE showed mutagenicity when used alone. The EE and FM of C. decorticans leaves showed antioxidant potential equivalent to that observed in other species, did not cause oxidative stress, nor toxicity, and had a protective and antimutagenic effect, although the EE showed signs of mutagenicity.

Capirona decorticans (Rubiaceae) é popularmente usada para tratar verrugas, feridas, micoses e sarna, e como um componente do chá de Ayahuasca. Apesar do uso popular, são limitadas as pesquisas fitoquímicas e farmacológicas sobre a espécie. Portanto, este estudo quantificou compostos fenólicos no extrato etanólico (EE) e na fração hidrometanólica (FM) (406 e 293 mgEAG g-1, respectivamente) de folhas de C. decorticans. Identificamos flavonoides por LC-MS / MS-MMR-ESI (apigenina, rutina, luteolina, miricetina, quercetina, quercetina-3--D-glicosídeo, quercetrina), e avaliamos o estresse oxidativo e o efeito mutagênico/antimutagênico de EE e FM em um experimento in vivo utilizando camundongos Swiss e ciclofosfamida (CP) como um indutor de danos no DNA e estresse oxidativo. Os camundongos foram pré-tratados por 15 dias consecutivos com EE ou FM (250 mg kg-1) e injetados intraperitonealmente com CP (25 mg kg-1). Proteínas carboniladas, ácido ascórbico, catalase e substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico foram dosadas em tecidos hepáticos e renais. O efeito mutagênico/antimutagênico foi avaliado através do Teste de Micronúcleo. Houve carbonilação protéica no fígado de animais expostos à CP, que foi reduzida pela FM. Não houve efeito significativo sobre outros marcadores de estresse oxidativo. Os grupos tratados com os extratos apresentaram uma redução percentual significativa (EE = 96% e FM = 71%) na frequência de eritrócitos policromáticos micronucleados induzidos pela PC. O EE também apresentou mutagenicidade quando utilizado isoladamente. O EE e FM das folhas de C. decorticans apresentaram potencial antioxidante equivalente ao observado em outras espécies, não causaram estresse oxidativo, nem toxicidade, e tiveram efeito protetor e antimutagênico, embora a EE tenha apresentado mutagenicidade.

First phytochemical and biological study of the ethanolic extract from leaves of Capirona decorticans (Rubiaceae) / Primeiro estudo fitoquímico e biológico do extrato etanólico de folhas de Capirona decorticans (Rubiaceae)

Capirona decorticans (Rubiaceae) is popularly used to treat warts, wounds, mycoses and scabies, and is also a component of the Ayahuasca tea. Despite its popular use, the phytochemical and pharmacological research on this species is limited. Therefore, this work quantified phenolic compounds in the ethanolic extract (EE) and hydromethanolic fraction (FM) (406, 293 mgEAG g-1, respectively) from leaves of C. decorticans. We identified flavonoids by LC-MS/MS-MMR-ESI (apigenin, rutin, luteolin, miricetin, quercetin, quercetin-3--D-glucoside, quercetrin), and evaluated oxidative stress and mutagenic/antimutagenic effect of EE and FM through an in vivo experiment using Swiss mice and cyclophosphamide (CP) as an inducer of DNA damage and oxidative stress. Mice were pretreated for 15 consecutive days with EE or FM (250 mg kg-1) and then intraperitoneally injected with CP (25 mg kg-1). Carbonylated proteins, ascorbic acid, catalase and thiobarbituric acid-reactive substances were measured in hepatic and renal tissues. The mutagenic/antimutagenic effect was evaluated through the Micronucleus Test. Protein carbonylation in the liver of animals exposed to CP was reduced by FM. There was no significant effect on other markers of oxidative stress. The groups treated with the extracts showed a significant percentage reduction (EE = 96% and FM = 71%) in the frequency of micronucleated polychromatic erythrocytes induced by CP. EE showed mutagenicity when used alone. The EE and FM of C. decorticans leaves showed antioxidant potential equivalent to that observed in other species, did not cause oxidative stress, nor toxicity, and had a protective and antimutagenic effect, although the EE showed signs of mutagenicity.(AU)

Capirona decorticans (Rubiaceae) é popularmente usada para tratar verrugas, feridas, micoses e sarna, e como um componente do chá de Ayahuasca. Apesar do uso popular, são limitadas as pesquisas fitoquímicas e farmacológicas sobre a espécie. Portanto, este estudo quantificou compostos fenólicos no extrato etanólico (EE) e na fração hidrometanólica (FM) (406 e 293 mgEAG g-1, respectivamente) de folhas de C. decorticans. Identificamos flavonoides por LC-MS / MS-MMR-ESI (apigenina, rutina, luteolina, miricetina, quercetina, quercetina-3--D-glicosídeo, quercetrina), e avaliamos o estresse oxidativo e o efeito mutagênico/antimutagênico de EE e FM em um experimento in vivo utilizando camundongos Swiss e ciclofosfamida (CP) como um indutor de danos no DNA e estresse oxidativo. Os camundongos foram pré-tratados por 15 dias consecutivos com EE ou FM (250 mg kg-1) e injetados intraperitonealmente com CP (25 mg kg-1). Proteínas carboniladas, ácido ascórbico, catalase e substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico foram dosadas em tecidos hepáticos e renais. O efeito mutagênico/antimutagênico foi avaliado através do Teste de Micronúcleo. Houve carbonilação protéica no fígado de animais expostos à CP, que foi reduzida pela FM. Não houve efeito significativo sobre outros marcadores de estresse oxidativo. Os grupos tratados com os extratos apresentaram uma redução percentual significativa (EE = 96% e FM = 71%) na frequência de eritrócitos policromáticos micronucleados induzidos pela PC. O EE também apresentou mutagenicidade quando utilizado isoladamente. O EE e FM das folhas de C. decorticans apresentaram potencial antioxidante equivalente ao observado em outras espécies, não causaram estresse oxidativo, nem toxicidade, e tiveram efeito protetor e antimutagênico, embora a EE tenha apresentado mutagenicidade.(AU)

Anti-equine arteritis virus activity of ethanolic extract and compounds from Origanum vulgare / Atividade do extrato etanólico e compostos de Origanum vulgare contra o virus da arterite equina

The equine arteritis virus (EAV) is responsible by an important respiratory and reproductive disease in equine populations and there is no specific antiviral treatment available. The objective of this study was to investigate the activity of an ethanolic crude extract of Origanum vulgare (EEO) and of isolated compound caffeic acid, p-coumaric acid, rosmarinic acid, quercetin, luteolin, carnosol, carnosic acid, kaempferol and apigenin against EAV. The assays were performed using non-cytotoxic concentrations. The antiviral activity was monitored initially by cytopathic effect inhibition (CPE) assay in RK13 cells in the presence or absence of EEO. Pre-incubated cells with EEO were also examined to show prophylactic effect. Direct viral inactivation by EEO and isolated compounds was evaluated by incubation at 37C or 20C. After the incubation period, the infectivity was immediately determined by virus titrations on cell cultures and expressed as 50% tissue culture infective dose (TCID50)/100 µL. There was significant virucidal activity of EEO and of the compounds caffeic acid, p-coumaric acid, quercetin, carnosic acid and kaempferol. When EEO was added after infection, EEO inhibited the virus growth in infected cells, as evidenced by significant reduction of the viral titre. The results provide evidence that the EEO exhibit an inhibitory effect anti-EAV. Among the main compounds evaluated, caffeic acid, p-coumaric acid,carnosic acid, kaempferol and mainly quercetin, contributed to the activity of EEO. EEO may represent a good prototype for the development of a new antiviral agent, presenting promising for combating arteriviruses infections.(AU)

O virus da arterite equine (EAV) é responsável por uma importante doença respiratória e reprodutiva na população de equinos e não há tratamento antiviral específico disponível. O objetivo desse estudo foi investigar a atividade de um extrato etanólico de Origanum vulgare (EEO) e dos compostos isolados ácido caféico, ácido p-cumarico, ácido rosmarínico, quercetina, luteolina, carnosol, ácido carnósico, campferol e apigenina contra o EAV. Os ensaios foram realizados com concentrações não citotóxicas. A atividade antiviral foi monitorada inicialmente por um ensaio de inibição de efeito citopático (CPE) em células RK13 na presença ou ausência do EEO. Células pré-incubadas com o EEO foram também examinadas para a presença de efeito profilático. Inativação direta do EAV pelo EEO e pelos compostos isolados foi avaliada mediante incubação a 37C ou 20C. Após o período de incubação, a infectividade foi imediatamente determinada por titulação viral em cultivo celular sendo expresso como dose infectiva a 50% (TCID50)/100 µL. Houve significativa atividade virucida do EEO e dos compostos ácido caféico, ácido p-cumarico, quercetina, ácido carnósico e campferol. Quando o EEO foi adicionado após a infecção, o EEO inibiu a replicação do vírus nas células infectadas, o que foi evidenciado pela redução significativa do título viral. Os resultados fornecem evidências de que o EEO possui efeito anti-EAV.Entre os principais compostos presentes avaliados, ácido caféico, ácido p-cumarico, ácido carnósico, campferol e, principalmente, quercetina, contribuíram para a atividade antiviral do extrato. O EEO pode representar um bom protótipo para o desenvolvimento de um novo agente antiviral, sendo promissor para combater infecções por arterivírus.(AU)

Phyto- and Bio-Chemical evaluation of Diospyros kaki L. cultivated in Egypt and its biological activities

Abstract Diospyros kaki L. or Costata cultivar is the main persimmon variety progressively consumed in the Egyptian market and exportation. The objective of this study was to investigate the bioprotective effects of the alcoholic extract of fruits as well as leaves of D. kaki using in-vivo rat models. Petroleum ether extracts of fruits and leaves were analytically characterized for saponifiable and unsaponifiable compounds by GC/MS. Main flavonoids were chromatographically isolated from 80% aqueous methanol extract of leaves. Chemical evaluation for fruits and leaves namely, content of moisture, ash, proteins, fatty acids, amino acids, fat and water soluble vitamins, minerals, carotenoids was carried out. Total antioxidant activity was determined by radical scavenging effects using DPPH assay. The effect on biochemical parameters and its biological activity were also performed. Results revealed the identification of the major compounds of saponifiable and unsaponifiable matters of fruits and leaves. Scopoletin, as well as, kaempferol, luteolin, rutin and apigenin 7-O-glucoside were isolated and identified. It showed that this plant can provide a good nutritional value and it is safe regarding the kidney and liver functions, good source that help in enhancing the antioxidant defense against free radicals. No abnormal effects were found in lipids profile on experimental animals and there were good results in the ratio of HDL and LDL cholesterol. Also, this plant can help in optimizing blood sugar, enhancing the level of blood haemoglobin. It is concluded that D. kaki displays a good source of nutrients and bioactive compounds that may contribute to its therapeutic benefits against the risk of disease complications.

Resumo Diospyros kaki L. ou Costata é a principal variedade de caqui progressivamente consumida no mercado e exportação egípcia. O objetivo deste estudo foi investigar os efeitos bioprotetores do extrato alcoólico de frutos e folhas de D. kaki utilizando modelos de ratos in vivo. Extratos de éter de petróleo provenientes de frutos e folhas foram caracterizados analiticamente para compostos saponificáveis e insaponificáveis por GC/MS. Os principais flavonoides foram isolados cromatograficamente, a partir de 80% de extrato aquoso de folhas de metanol. Foi realizada avaliação química de frutos e folhas, ou seja, de teor de umidade, cinzas, proteínas, ácidos graxos, aminoácidos, vitaminas lipossolúveis e solúveis em água, minerais, carotenoides. Foi caracterizada a atividade antioxidante, utilizando ensaio (DPPH). O efeito nos parâmetros bioquímicos e sua atividade biológica também foram analisados. Os resultados revelaram a identificação dos principais compostos saponificáveis e insaponificáveis de frutos e folhas. Escopoletina, bem como kaempferol, luteolina, rutina e apigenina 7-O-glicosídeo foram isolados e identificados. Também demonstraram que esta planta pode proporcionar um bom valor nutricional e é segura em relação às funções renais e hepáticas, boa fonte que ajuda a melhorar a defesa antioxidante contra os radicais livres. Não foram encontrados efeitos anormais no perfil lipídico em testes em animais, e houve um efeito satisfatório na relação de colesterol HDL e LDL. Além disso, esta planta pode ajudar na otimização do açúcar no sangue, aumentando o nível de hemoglobina. Conclui-se que o D. kaki apresenta uma boa fonte de nutrientes e de compostos bioativos que contribuem para seus benefícios terapêuticos e contra o risco de complicações de doenças.

EFEITO ANTIOXIDANTE DO EXTRATO ETANÓLICO DA CASCA DO PEQUI (CARYOCAR BRASILIENSE) EM CÉLULAS ENDOTELAIS CARDÍACAS

O desequilíbrio endógeno ou exógeno das espécies reativas de oxigênio (ROS) favorece o comprometimento das células endoteliais e a morte nas doenças cardiovasculares isquêmicas e no diabetess tipo II. A casca do fruto do Pequi (Caryocar brasiliense) é rica em polifenóis, amplamente reconhecidos como antioxidantes naturais. Avaliou-se a concentração fenólica total do extrato etanólico da casca de Pequi, a capacidade antioxidante in vitro, a sua composição e efeito sobre os níveis de ROS intracelulares em células endoteliais de artéria coronária humana, obtidas de pacientes saudáveis (HCAEC) ou diabéticos (D-HCAEC) e submetidas a hipóxia ou hiperóxia. A concentração total de compostos fenólicos no extrato foi de 696,91 mg equivalente de ácido gálico/100g de peso seco, e a porcentagem de sequestro de radicais livres 92,79%. Os principais fenóis identificados foram os ácidos gálico, elágico e protocatecuico, juntamente com luteolina e rutina. O Pequi demonstrou efeitos positivos na proliferação celular em HCAEC e D-HCAEC expostas a 100 M H2O2. Quando as células saudáveis e diabéticas foram incubadas com 10 ou 25 g/mL de Extrato de Pequi por 24h e posteriormente expostas a 100 M de H2O2 por seis horas ou hipóxia por 48 horas, os níveis intracelulares de ROS diminuíram substancialmente. Os achados demonstram que o extrato da casca do Pequi diminui os níveis de ROS e aumenta a proliferação de HACEC e HCAEC devido aos seus componentes antioxidantes. O extrato de Pequi pode constituir uma fonte alternativa natural de antioxidantes para prevenir lesões nas células endoteliais relacionadas à isquemia e diabetess.

Endogenous or exogenous imbalance of reactive oxygen species (ROS) favors endothelial cell impairment and death in ischemic cardiovascular diseases and type II diabetess. The bark of the fruit from Brazilian native plant Pequi (Caryocar brasiliense, Camb) is rich in polyphenols, widely recognized as natural antioxidants. We analyzed the Pequi Bark Ethanolic Extract total phenolic concentration, in vitro antioxidant capacity, and phenolic composition. Furthermore, we evaluated the effect of the extract on intracellular ROS levels in Human Coronary Artery Endothelial Cells obtained from healthy (HCAEC) or diabetic patients (D-HCAEC) and subjected to hypoxia or hyperoxia. Total phenols concentration in the Pequi Extract was 696,91 mg of gallic acid equivalent/100g of dry weight, and free radicals scavenging percentage 92,79%. The main phenolic compounds identified in the extract were acids gallic, ellagic, and protocatechuic, along with luteolin and rutin. Pequi demonstrated positive effects on cell proliferation in HCAEC and D-HCAEC exposed to 100 M H2O2. When healthy and diabetic cells were incubated with either 10 or 25 g/mL of Pequi Extract for 24h and later exposed to either 100 M H2O2 for six hours or hypoxia for 48 hours, ROS intracellular levels decreased substantially. Together, these findings demonstrate that Pequi bark extract decreases ROS levels and increases HACEC's and HCAEC proliferation due to its antioxidant components. Pequi extract may be a natural, alternative source for antioxidants to prevent endothelial cell injuries related to ischemia and diabetess.

Radiolabeling of methanol extracts of yarrow (Achillea millefolium l) in rats / Radiomarcação do extrato metanólico de yarrow (Achillea millefolium l) em ratos

PURPOSE: Current study is focused on extraction with methanol, purification, labeling with 131I using iodogen method of the yarrow plant and investigating in vivo biological activity using biodistribution and imaging studies on healthy animal models. The aim of the study is to contribute plant extracts to discover new drugs in the diagnosis and treatment of several diseases. METHODS: Nine female and nine male healthy Wistar albino rats, which were approximately 100-150 g in weight, were used for biodistribution studies. For imaging studies four healthy male Balb-C mice were used. Quality control studies were done utilizing thin layer radio chromatography (TLRC) and high performance liquid chromatography (HPLC) methods. For biodistribution studies, 131I radiolabeled Peak 7 (131I-Peak 7) was sterilized and injected into the tail veil of rats and imaging studies were obtained using Kodak FX PRO in vivo Imaging System. RESULTS: The radiolabeling yield of each purified the bioactive extracts of the yarrow plant, seven peaks was between 79 and 92%. The highest radiolabeling yield was calculated for 131I radiolabeled seventh peak (131I-Peak 7) (92.78±5.04, n=5). For this reason the biodistribution and imaging studies were done for 131I-Peak 7. That's why; these studies with Peak 7 were carried out. CONCLUSION: Peak 7 was radiolabeled with 131I in high yield for using imaging and therapeutic studies in nuclear medical applications.(AU)

OBJETIVO: O atual estudo tem por objetivo a extração com metanol, purificação, marcação com I131 usando o método direto de marcação da planta Achillea, para investigar in vivo a atividade biológica usando biodistribuição e estudos de imagem em modelos animais saudáveis. O objetivo do estudo é contribuir com extratos de plantas para descobrir novas drogas para o diagnóstico e tratamento de várias doenças. MÉTODOS: Nove fêmeas e nove machos ratos Wistar albino saudáveis, com aproximadamente 100 a 150g de peso foram usados para estudos de biodistribuição. Para estudos de imagem, quatro camundongos Balb-C machos e saudáveis foram usados. Estudos de controle de qualidade foram realizados usando métodos de cromatografia de camada fina e cromatografia líquida de alta performance. Para estudos de biodistribuição, pico 5 radiografado com I131 (I131-Peak 7) foi esterilizado e injetado na veia da cauda dos ratos e estudos de imagem foram obtidos usando Sistema de Imagem Kodak FX PRO in vivo. RESULTADOS: O retorno radiomarcado de cada extrato bioativo purificado da planta Achillea sete picos estavam entre 79 e 92%. O retorno com maior marcação foi calculado para I131 sétimo pico (I131-Peak 7) (92,78±5,04, n=5). Por esta razão os estudos de biodistribuição e de imagem foram feitos para I131-Peak 7. CONCLUSÃO: Peak 7 foi radiomarcado com I131 em alto retorno para uso em estudos terapêuticos e de imagens nas aplicações médicas nucleares.(AU)

Otimização e validação de metodologia analítica para determinação de flavonóis e flavonas por CLAE em pólen apícola utilizando-se análise de superfície de resposta / Optimization and validation of HPLC methodology for determining flavonols and flavones in bee pollen by surface methodology

Foi otimizada a metodologia analítica para determinar quatro flavonóis: miricetina (M), quercetina (Q), kanferol (K) e isoramnetina (I); e duas flavonas: luteolina (L) e apigenina (A) em amostras de pólen apícola desidratado produzidas em três estados brasileiros: Bahia (BA), São Paulo (SP) e Santa Catarina (SC). Delineamento Composto Central Rotacional (DCCR) foi utilizado para investigar os efeitos da concentração de HCl e do tempo de hidrólise sobre a concentração de cada flavonoide. A condição ótima encontrada para extração/hidrólise dos flavonoides estudados foi: 1,0M HCl/30 minutos. A melhor separação dos flavonoides foi conseguida com a coluna de fase reversa Symmetry C18 e fase móvel de metanol: tetrahidrofurano: água(26:57:17), acidificados com 0,3 de ácido fórmico em corrida isocrática (CLAE). As curvas-padrão apresentaram coeficientes de correlação superiores a 0,99. Os limites de detecção foram de 1,04, 0,88, 0,89,1,64, 0,82 e 1,19 μg/mL respectivamente para M, L, Q, A, I e K.(AU)

Evaluation of the antimicrobial activity of crude extracts and isolated constituents from Chresta scapigera

Crude extracts and eight isolated compounds from Chresta scapigera were evaluated for antibacterial and antifungal activities by the agar-well diffusion method. Twenty strains, including Gram-positive and Gram-negative bacteria and yeasts were used in the bioassay. Hexane extracts presented the best results while ethanol extracts did not indicate inhibition of the microbial growth. Amongst the evaluated compounds b-amyrin acetate, tiliroside and luteolin showed the strongest antimicrobial effect.

Os extratos brutos e oito constituintes isolados de Chresta scapigera foram avaliados para as atividades antibacteriana e antifúngica, utilizando o método de difusão em ágar. Vinte cepas indicadoras, incluindo bactérias (Gram-positivas e Gram-negativas) e leveduras, foram utilizadas no bioensaio. Os melhores resultados foram obtidos para os extratos hexânicos, enquanto os extratos etanólicos não inibiram o crescimento microbiano. Acetato de b-amirina, tilirosídeo e luteolina foram os mais eficazes dentre os constituintes avaliados.

Bixin, Norbixin and Quercetin and lipid metabolism effects in rabbits / Bixina, Norbixina e Quercetina e seus efeitos no metabolismo lipídico de coelhos

Flavonoids have been isolated with several biological activities and there are correlations among the consumption of rich foods in flavonoids and heart diseases. The 7-glucosyl-apigenin, 7- bisulfate-apigenin, 7-glucosyl-luteolin, 7-bisulfate-luteolin flavonoids and bixin and norbixin were isolated from urucu seeds. The aim of this study was to test the bixin and norbixin dyes and quercetin flavonoid from urucu and bixin with quercetin association to obtain its hypolipidemic effects in rabbits. Induction of hyperlipidaemia was performed with 1% cholesterol + 0,1% colic acid during 28 days. The substances were applied through the oral route, in capsule, in the doses of 0,01 mol/kg body weight. Total cholesterol, HDL-cholesterol and triacylglycerols have quantified from serum, after 28 days, and showed in mg/dL The best results for total cholesterol reduction and the HDL-cholesterol elevated levels maintenance was obtained with bixin. On the other hand, the best results for triacylglycerols reduction have been obtained with quercetin. The bixin and quercetin association showed efficacy to HDL-cholesterol and triacylglycerols and norbixin to total cholesterol and HDL-cholesterol. These results stimulate further research on the use of these substances as pharmacs in the heart diseases treatment and/or prevention.

Os flavonóides apresentam diversas atividades biológicas (antioxidantes, antiinflamatórios, anticancerígenos, dentre outras) e estreitas correlações entre o consumo de alimentos ricos em flavonóides e doenças cardíacas. Pesquisas mostram que os flavonóides 7-glicosil-apigenina, 7-bissulfato-apigenina, 7-glicosil-luteolina, 7-bissulfato-luteolina e os corantes bixina e norbixina foram isolados e identificadas suas estruturas de sementes de urucum. O objetivo deste estudo foi testar, isoladamente bixina, norbixina e a quercetina, presentes no urucum e a associação da bixina com a quercetina, para verificar seus efeitos hipolipidêmicos em coelhos. A hiperlipidemia foi induzida misturando à ração colesterol 1% + ácido cólico 0,1%, durante 28 dias. As substâncias testadas foram fornecidas na dose de 0,01 mol/kg de peso corporal, por via oral, em cápsulas. Após 28 dias, as dosagens sorológicas foram efetuadas e os resultados expressos em mg/dL de colesterol, colesterol-HDL e triacilgliceróis. De acordo com os resultados obtidos, concluiu-se que a bixina apresentou o maior valor na redução do colesterol total embora não tenha sido significativo na manutenção dos níveis elevados de colesterol-HDL e a quercetina na redução dos triacilgliceróis. A bixina apresentou melhor eficácia em relação ao colesterol-HDL uma vez que a redução deste parâmetro foi menor (-11,43%) ao se comparar o grup

Optimization and validation of HPLC methodology for determining flavonols and flavones in vegetables / Otimização e validação de metodologia analítica para determinação de flavonóis e flavonas por CLAE em hortaliças

The objective of this investigation was to optimize the analytical methodology for determining flavonols and flavones in vegetables. The hydrolysis procedure was optimized using Central Composite Rotational Design (CCRD) to investigate the effects of HCl concentration and hydrolysis time. This step was carried out simultaneously with extraction with 50% aqueous methanol, and refluxing at 90C. A Waters liquid chromatograph, with Nova-Pak C18 column and photodiode array detector, was used. The analyzed compounds were myricetin (M), quercetin (Q), kaempferol (K), luteolin (L), and apigenin (A). The optimum conditions found for hydrolysis for each vegetable were: 1.0M HCl for 6 hours for spinach and kale, 1.6M HCl for 5 hours for roquette, 1.2M HCl for 2 hours for lettuce, 1.7M HCl for 4.3 hours for parsley, and 0.8M HCL for 2.5 hours for onion. The best gradient (HPLC) for separating flavonoids from these vegetables consisted of methanol:water (acidified with 0.03% formic acid) 20:80, changing to 45:55 in 5 minutes, 48:52 in 17 minutes, returning to 20:80 in 20 minutes. The standard curves of the flavonoids had coefficients of correlation higher than 0.99. The detection limits were 0.5, 0.4, 0.5, 0.6 and 1.0g/mL for M, Q, L, K, and A, respectively.

O objetivo deste trabalho foi otimizar a metodologia analítica para determinação de flavonóis e flavonas em hortaliças. A hidrólise foi otimizada utilizando-se Delineamento Composto Central Rotacional (DCCR) para investigar os efeitos da concentração de HCl e do tempo de hidrólise. Essa etapa foi realizada simultaneamente com a extração por metanol aquoso 50%, em refluxo a 90ºC. Foi utilizado cromatógrafo líquido Waters com coluna Nova-Pak C18 e detector de arranjo de diodos. Os compostos estudados foram miricetina (M), quercetina (Q), kaempferol (K), luteolina (L) e apigenina (A). As condições ótimas encontradas para hidrólise de cada hortaliça foram: 1,0M HCl/6 horas para espinafre e couve, 1,6M HCl/5 horas para rúcula, 1,2M HCl/2 horas para alface, 1,7M HCl/4,3 horas para salsa e 0,8M HCl/2,5 horas para cebola. O melhor gradiente para separação (CLAE) dos flavonóides das hortaliças em estudo foi constituído de metanol:água (acidificados com 0,3% de ácido fórmico) 20:80, chegando a 45:55 em 5 minutos, 48:52 em 17 minutos e voltando a 20:80 em 20 minutos. As curvas analíticas apresentaram coeficientes de correlação maiores que 0,99. Os limites de detecção foram de 0,5, 0,4, 0,5, 0,6 e 1,0g/mL, respectivamente, para M, Q, L, K e A.

Anti-equine arteritis virus activity of ethanolic extract and compounds from Origanum vulgare / Atividade do extrato etanólico e compostos de Origanum vulgare contra o virus da arterite equina

The equine arteritis virus (EAV) is responsible by an important respiratory and reproductive disease in equine populations and there is no specific antiviral treatment available. The objective of this study was to investigate the activity of an ethanolic crude extract of Origanum vulgare (EEO) and of isolated compound caffeic acid, p-coumaric acid, rosmarinic acid, quercetin, luteolin, carnosol, carnosic acid, kaempferol and apigenin against EAV. The assays were performed using non-cytotoxic concentrations. The antiviral activity was monitored initially by cytopathic effect inhibition (CPE) assay in RK13 cells in the presence or absence of EEO. Pre-incubated cells with EEO were also examined to show prophylactic effect. Direct viral inactivation by EEO and isolated compounds was evaluated by incubation at 37C or 20C. After the incubation period, the infectivity was immediately determined by virus titrations on cell cultures and expressed as 50% tissue culture infective dose (TCID50)/100 µL. There was significant virucidal activity of EEO and of the compounds caffeic acid, p-coumaric acid, quercetin, carnosic acid and kaempferol. When EEO was added after infection, EEO inhibited the virus growth in infected cells, as evidenced by significant reduction of the viral titre. The results provide evidence that the EEO exhibit an inhibitory effect anti-EAV. Among the main compounds evaluated, caffeic acid, p-coumaric acid,carnosic acid, kaempferol and mainly quercetin, contributed to the activity of EEO. EEO may represent a good prototype for the development of a new antiviral agent, presenting promising for combating arteriviruses infections.

O virus da arterite equine (EAV) é responsável por uma importante doença respiratória e reprodutiva na população de equinos e não há tratamento antiviral específico disponível. O objetivo desse estudo foi investigar a atividade de um extrato etanólico de Origanum vulgare (EEO) e dos compostos isolados ácido caféico, ácido p-cumarico, ácido rosmarínico, quercetina, luteolina, carnosol, ácido carnósico, campferol e apigenina contra o EAV. Os ensaios foram realizados com concentrações não citotóxicas. A atividade antiviral foi monitorada inicialmente por um ensaio de inibição de efeito citopático (CPE) em células RK13 na presença ou ausência do EEO. Células pré-incubadas com o EEO foram também examinadas para a presença de efeito profilático. Inativação direta do EAV pelo EEO e pelos compostos isolados foi avaliada mediante incubação a 37C ou 20C. Após o período de incubação, a infectividade foi imediatamente determinada por titulação viral em cultivo celular sendo expresso como dose infectiva a 50% (TCID50)/100 µL. Houve significativa atividade virucida do EEO e dos compostos ácido caféico, ácido p-cumarico, quercetina, ácido carnósico e campferol. Quando o EEO foi adicionado após a infecção, o EEO inibiu a replicação do vírus nas células infectadas, o que foi evidenciado pela redução significativa do título viral. Os resultados fornecem evidências de que o EEO possui efeito anti-EAV.Entre os principais compostos presentes avaliados, ácido caféico, ácido p-cumarico, ácido carnósico, campferol e, principalmente, quercetina, contribuíram para a atividade antiviral do extrato. O EEO pode representar um bom protótipo para o desenvolvimento de um novo agente antiviral, sendo promissor para combater infecções por arterivírus.