Investigation of Chlamydia sp., Morbillivirus sp., Parvovirus sp., Leishmania sp. and Alphacoronavirus sp. in captive giant anteaters (Myrmecophaga tridactyla) / [Investigação de Chlamydia sp., Morbillivirus sp., Parvovirus sp., Leishmania sp. e Alphacoronavirus sp. em tamanduás-bandeira (Myrmecophaga tridactyla) em cativeiro]

This research aimed to investigate the occurrence of Chlamydia sp., Morbillivirus sp., Parvovirus sp., Leishmania sp. and Alphacoronavirus sp. in captive giant anteaters. Blood and fecal samples were taken from 16 animals in institutions from the states of Minas Gerais, Bahia and Distrito Federal, which had been in captivity for at least a year. A commercial rapid chromatographic immunoassay test was used for detecting coronavirus and parvovirus antigens, in addition to antibodies against leishmaniasis, all results being negative. In the case of the test for antibodies against distemper, four (4/16; 25%) anteaters had an average titration, two (2/16; 12.5%) a low titration and ten (10/16; 62.5%) were non-reactive. Using the DOT-ELISA (dot blotting) method for detection of immunoglobulin G, only one specimen obtained a 1 : 40 titration. For the polymerase chain reaction tests for Leishmania and Chlamydia, all samples were negative.

Esta pesquisa teve como objetivo investigar a ocorrência de Chlamydia sp., Morbillivirus sp., Parvovirus sp., Leishmania sp. e Alphacoronavirus sp. em tamanduás-bandeira cativos. Foram colhidas amostras de sangue e fezes de 16 animais em instituições dos estados de Minas Gerais, Bahia e Distrito Federal, que estavam em cativeiro há pelo menos um ano. Um teste comercial rápido de imunoensaio cromatográfico foi usado para detectar antígenos de coronavírus e parvovírus, além de anticorpos contra a leishmaniose, sendo todos os resultados negativos. No caso do teste para anticorpos contra a doença, quatro (4/16; 25%) tamanduás apresentaram titulação média, dois (2/16; 12,5%) uma titulação baixa e dez (10/16; 62,5%) não foram reativos. A partir do método DOT-ELISA (dot blotting) para detecção de imunoglobulina G, apenas um espécime obteve uma titulação de 1: 40. Para os testes de reação em cadeia da polimerase para Leishmania e Chlamydia, todas as amostras foram negativas.

4-hydroxy-2-nonenal as a marker of the oxidative stress in brains of dogs with canine distemper / 4-hidroxi-2-nonenal como marcador de estresse oxidativo no cérebro de cães com cinomose

Canine Distemper is a disease caused by Canine morbillivirus (CM), a pantropic virus that can affect the central nervous system (CNS), causing demyelination. However, the pathogenesis of this lesion remains to be clarified. Brain samples of 14 naturally infected dogs by CM were analyzed to evaluate the presence of oxidative stress and demyelination. RT-PCR assay was performed to confirm a diagnosis of canine distemper in the brain, immunohistochemistry anti-CM was used to localize the viral proteins in the tissue, and anti-4-hydroxy-2-nonenal (4-HNE) was a marker of a product of lipid peroxidation. The results showed the presence of viral proteins in the demyelinated area with the presence of 4-HNE. Our results suggest that the CM virus infection causes oxidative stress leading to lipid peroxidation, which causes tissue damage and demyelination. In conclusion, oxidative stress plays a significant role in canine distemper pathogenesis in the CNS.(AU)

A cinomose canina é uma doença causada pelo Morbilivírus canino (CM), um vírus pantrópico que pode afetar o sistema nervoso central (SNC), causando desmielinização. No entanto, a patogênese dessa lesão não está totalmente esclarecida. RT-PCR e imuno-histoquímica foram realizadas para confirmação do diagnóstico de cinomose em amostras de encéfalo de 14 cães naturalmente infectados. Após confirmação, foi realizada uma avaliação do estresse oxidativo por imuno-histoquímica com uso de anti-4-hidroxi-nonenal (4HNE) como marcador de produtos resultantes da peroxidação lipídica. Os resultados sugerem que a infecção pelo CM causa estresse oxidativo no tecido, levando a peroxidação lipídica, a qual causa danos ao tecido, culminando com desmielinização. Conclui-se que o estresse oxidativo tem papel importante na patogênese da cinomose canina no sistema nervoso central.(AU)

Cinomose em canídeos silvestres no Brasil / Distemper in wild canids in Brazil

A cinomose é uma doença viral multissistêmica causada por um Morbillivirus. No Brasil, existem seis espécies de canídeos silvestres vulneráveis a essa enfermidade. Dessa forma, este trabalho tem como objetivo apresentar uma revisão sobre a situação da cinomose em canídeos silvestres no Brasil e os impactos causados na fauna brasileira. A transmissão do vírus ocorre através do contato com amostras contaminadas, a exemplo dos aerossóis, excretas e secreções de indivíduos infectados. Os sinais clínicos mais prevalentes são de ordem neurológica, entretanto, também podem ser identificadas manifestações respiratórias, cutâneas e gastrointestinais. Portanto, o diagnóstico consiste na avaliação da sintomatologia apresentada em conjunto com testes específicos, como isolamento viral, ELISA, imunofluorescência e RT-PCR. Atualmente, não existe tratamento específico. Desta forma, são realizados apenas cuidados paliativos. Os grandes carnívoros são os mamíferos mais ameaçados do mundo, sobretudo, em consequência dos impactos causados pela redução do habitat natural, associada à expansão territorial humana. As epidemias também justificam as altas taxas de mortalidades desses animais, o que pode estar relacionado com comportamentos sociais e de farejamento, assim como o crescente contato entre animais silvestres e domésticos devido à urbanização e à proximidade genética que os canídeos silvestres têm com os cães domésticos, tornando-os suscetíveis às infecções. Visto que a cinomose é uma patologia emergente em populações de carnívoros silvestres e que a presença de cães domésticos não vacinados em áreas de conservação representa um grande risco de contaminação, conclui-se que a não vacinação está diretamente associada à perpetuação do vírus no meio selvagem.

Distemper is a multisystem viral disease caused by a Morbillivirus. In Brazil, there are six species of wild canids, vulnerable to this disease. Therefore, the present work aims to develop a review on the situation of distemper in wild canids in Brazil and the impacts caused on the Brazilian fauna. The virus transmission occurs through contact with contaminated samples, such as aerosols, excreta, and secretions from infected individuals. The most prevalent clinical signs are neurological; however, respiratory, cutaneous and gastrointestinal manifestations can also be identified. Thus, the diagnosis consists of evaluating the symptoms presented together with specific tests, such as viral isolation, ELISA, immunofluorescence, and RT-PCR. Currently, there is no specific treatment. Therefore, only palliative care is performed. Large carnivores are the most threatened mammals in the world, mainly as a result of the impacts caused by the reduction of natural habitat, associated with human territorial expansion. Epidemics also justify the high mortality rates of these animals, which may be related to social and sniffing behaviors, as well as the increasing contact between wild and domestic animals due to urbanization and the genetic proximity that wild canids have with domestic dogs, making them susceptible to infections. Since distemper is an emerging pathology in populations of wild carnivores and the presence of unvaccinated domestic dogs in conservation areas represents a great risk of contamination, it is concluded that non-vaccination is directly associated with the perpetuation of the virus in the wild.

Mucosa cytopathology for research of Sinegaglia-Lentz corpuscles in canine distemper / Citopatologia de mucosa para pesquisa de corpúsculos de Sinegaglia-Lentzna cinomose canina

Canine distemper (CD) is a multisystemic and infectious disease caused by a Morbillivirus. The search for viral inclusions by mucosal cytology is a low cost and high practical alternative, which establishes the definitive diagnosis of CD, but is little reported in the literature. The objective was to encourage the use of mucosal cytopathology to identify Sinegaglia-Lentz corpuscles in the veterinary routine as an alternative or complementary to blood screening, providing a selection of photographs of the viral inclusions. Selected were 16 dogs with classic systemic or neurological disorders and positive for the chromatographic immunoassay for CD. Samples of the conjunctival, nasal and genital epithelium were collected with the aid of a sterile swab for making slides. Whole blood was also collected to make a blood smear. The slides were stained with a fast panoptic and observed by optical microscopy to directly search for eosinophilic viral inclusions, at 40 and 100x magnification. Sinegaglia-Lentz corpuscles were detected in nine of the 16 dogs (56.25%), five in conjunctival mucosa (41.65%), three in nasal mucosa (25%), one in genital mucosa (8.33%) and three in blood smear (25%). It is concluded that mucosa cytopathology, especially conjunctival, for Sinegaglia-Lentz research is an auxiliary tool for the early and definitive diagnosis of canine distemper. However, the absence

A cinomose canina (CC) é uma doença multissistêmica e infectocontagiosa causada por um Morbillivirus. A pesquisa de inclusões virais por citologia da mucosa é uma alternativa de baixo custo e alta praticidade, que estabelece o diagnóstico definitivo da CC, mas pouco relatada em literatura. Objetivou-se encorajar o uso da citopatologia da mucosa para identificar corpúsculos de Sinegaglia-Lentzna rotina veterinária como alternativa ou complementar à triagem no sangue, fornecendo uma seleção de fotografias das inclusões virais. Foram selecionados 16 cães com distúrbios sistêmicos ou neurológicos clássicos epositivos ao imunoensaio cromatográfico para CC. Amostras do epitélio conjuntival, nasal e genital foram coletadas com auxílio de swab estéril, para confecção de lâminas. O sangue total também foi colhido para confecção de esfregaço sanguíneo. As lâminas foram coradas com panóptico rápido e observadas por microscopia óptica para pesquisa direta de inclusões virais eosinofílicas, em ampliação de 40 e 100x. Os corpúsculos de Sinegaglia-Lentzforam detectados em nove dos 16 cães (56,25%), cinco em mucosa conjuntival (41,65%), três em mucosa nasal (25%), um em mucosa genital (8,33%) e três em esfregaço de sangue (25%). Conclui-se que a citopatologia de mucosa, sobretudo conjuntival, para pesquisa de Sinegaglia-Lentzé uma ferramenta auxiliar ao diagnóstico precoce e definitivo da cinomose canina. Contudo, a ausência de inclusões virais nestas amostras não descarta a possibilidade da doença.

Mucosa cytopathology for research of Sinegaglia-Lentz corpuscles in canine distemper / Citopatologia de mucosa para pesquisa de corpúsculos de Sinegaglia-Lentzna cinomose canina

Canine distemper (CD) is a multisystemic and infectious disease caused by a Morbillivirus. The search for viral inclusions by mucosal cytology is a low cost and high practical alternative, which establishes the definitive diagnosis of CD, but is little reported in the literature. The objective was to encourage the use of mucosal cytopathology to identify Sinegaglia-Lentz corpuscles in the veterinary routine as an alternative or complementary to blood screening, providing a selection of photographs of the viral inclusions. Selected were 16 dogs with classic systemic or neurological disorders and positive for the chromatographic immunoassay for CD. Samples of the conjunctival, nasal and genital epithelium were collected with the aid of a sterile swab for making slides. Whole blood was also collected to make a blood smear. The slides were stained with a fast panoptic and observed by optical microscopy to directly search for eosinophilic viral inclusions, at 40 and 100x magnification. Sinegaglia-Lentz corpuscles were detected in nine of the 16 dogs (56.25%), five in conjunctival mucosa (41.65%), three in nasal mucosa (25%), one in genital mucosa (8.33%) and three in blood smear (25%). It is concluded that mucosa cytopathology, especially conjunctival, for Sinegaglia-Lentz research is an auxiliary tool for the early and definitive diagnosis of canine distemper. However, the absence

A cinomose canina (CC) é uma doença multissistêmica e infectocontagiosa causada por um Morbillivirus. A pesquisa de inclusões virais por citologia da mucosa é uma alternativa de baixo custo e alta praticidade, que estabelece o diagnóstico definitivo da CC, mas pouco relatada em literatura. Objetivou-se encorajar o uso da citopatologia da mucosa para identificar corpúsculos de Sinegaglia-Lentzna rotina veterinária como alternativa ou complementar à triagem no sangue, fornecendo uma seleção de fotografias das inclusões virais. Foram selecionados 16 cães com distúrbios sistêmicos ou neurológicos clássicos epositivos ao imunoensaio cromatográfico para CC. Amostras do epitélio conjuntival, nasal e genital foram coletadas com auxílio de swab estéril, para confecção de lâminas. O sangue total também foi colhido para confecção de esfregaço sanguíneo. As lâminas foram coradas com panóptico rápido e observadas por microscopia óptica para pesquisa direta de inclusões virais eosinofílicas, em ampliação de 40 e 100x. Os corpúsculos de Sinegaglia-Lentzforam detectados em nove dos 16 cães (56,25%), cinco em mucosa conjuntival (41,65%), três em mucosa nasal (25%), um em mucosa genital (8,33%) e três em esfregaço de sangue (25%). Conclui-se que a citopatologia de mucosa, sobretudo conjuntival, para pesquisa de Sinegaglia-Lentzé uma ferramenta auxiliar ao diagnóstico precoce e definitivo da cinomose canina. Contudo, a ausência de inclusões virais nestas amostras não descarta a possibilidade da doença.(AU)

Aspectos anatomopatológicos e imuno-histoquímicos de cinomose em graxains / Anatomopathological and immunohistochemical aspects of distemper virus in crab-eating-foxes and pampa-foxes

Background: Distemper is a contagious disease with worldwide distribution, which is caused by a single-stranded RNAvirus of the genus Morbillivirus. The Crab-eating fox (Cerdocyon thous) and the Pampas fox (Lycalopex gymnocercus), wildcanids commonly found in the state of Rio Grande do Sul, are highly susceptible to the disease. Distemper virus infection oftenshows a multisystemic presentation. Central nervous system lesions are frequently reported, and may lead to death of wild canids.Distemper virus infection affecting these species has been cited by several studies; nonetheless, case descriptions involving theCrab-eating fox and the Pampas fox are infrequent. Therefore, the objective of the present study is to describe the anatomopathological and immunohistochemical aspects of distemper in the referred species, aiming to assist with the diagnosis of the disease.Materials, Methods & Results: A retrospective study was performed, and the necropsy reports of Crab-eating foxes and Pampasfoxes admitted to SPV-UFRGS from 2010 to 2016 were reviewed. Necropsy reports were revised in order to obtain information related to the clinical history and anatomopathological findings, and cases compatible with distemper were selected. Dataregarding the affected species, sex, approximate age, origin and clinical signs were compiled and analyzed. Selected histologicalsections of brain and cerebellum were submitted for immunohistochemistry (IHC) for monoclonal antibody canine distempervirus. In the studied period, 20 animals of the referred species were subjected to necropsy, of which four were diagnosed withdistemper as a cause of death. Of the affected animals, two were female and two were male. Three were juvenile and one wasan adult animal. Clinical signs reported included myoclonia, opisthotonos, forelimb paresis and nystagmus. No significant grosschanges were noted. Histopathological findings were restricted to the central nervous system...

Aspectos anatomopatológicos e imuno-histoquímicos de cinomose em graxains / Anatomopathological and immunohistochemical aspects of distemper virus in crab-eating-foxes and pampa-foxes

Background: Distemper is a contagious disease with worldwide distribution, which is caused by a single-stranded RNAvirus of the genus Morbillivirus. The Crab-eating fox (Cerdocyon thous) and the Pampas fox (Lycalopex gymnocercus), wildcanids commonly found in the state of Rio Grande do Sul, are highly susceptible to the disease. Distemper virus infection oftenshows a multisystemic presentation. Central nervous system lesions are frequently reported, and may lead to death of wild canids.Distemper virus infection affecting these species has been cited by several studies; nonetheless, case descriptions involving theCrab-eating fox and the Pampas fox are infrequent. Therefore, the objective of the present study is to describe the anatomopathological and immunohistochemical aspects of distemper in the referred species, aiming to assist with the diagnosis of the disease.Materials, Methods & Results: A retrospective study was performed, and the necropsy reports of Crab-eating foxes and Pampasfoxes admitted to SPV-UFRGS from 2010 to 2016 were reviewed. Necropsy reports were revised in order to obtain information related to the clinical history and anatomopathological findings, and cases compatible with distemper were selected. Dataregarding the affected species, sex, approximate age, origin and clinical signs were compiled and analyzed. Selected histologicalsections of brain and cerebellum were submitted for immunohistochemistry (IHC) for monoclonal antibody canine distempervirus. In the studied period, 20 animals of the referred species were subjected to necropsy, of which four were diagnosed withdistemper as a cause of death. Of the affected animals, two were female and two were male. Three were juvenile and one wasan adult animal. Clinical signs reported included myoclonia, opisthotonos, forelimb paresis and nystagmus. No significant grosschanges were noted. Histopathological findings were restricted to the central nervous system...(AU)

Environmental aspects and diseases related to immunosuppression in cetaceans: a concise review / Aspectos ambientais e infecciosos relacionados à imunossupressão em cetáceos: uma breve revisão

The analysis of the health status of sentinel animals is a key element for the evaluation of ecosystem health conditions, since these animals respond to small and large scale changes in ecological factors and the quality of the environment. In the marine environment, the changes are systemic and accumulate impacts of coastal zones and oceanic activities, with aquatic mammals being species that reflect changes in biological and health parameters. For these animals several studies have reported an increase in the frequency and diversity of diseases, including infections by pathogens from the terrestrial environment. This increase may be related to impairment of the immune system activity of these organisms in response to potential synergistic factors. In cetaceans, immunosuppression may be caused by infection with viral agents, such as Morbillivirus, which induce severe lymphoid depletion and is responsible for several cases of mass mortality; chemical contamination, highlighting the organochlorines and trace elements (mainly mercury and cadmium); and even by chronic stress. Anthropic impacts are important stressors, and the consequences are more evident in animals of coastal habits, which leads to a constant release of glucocorticoid hormones and consequent lymphoid depletion, a mechanism similar to that occurring in terrestrial mammals. Immunosuppressed animals are susceptible to opportunistic diseases, some more severe and rare, with the risk of decline of populations. The objective of this review was to provide information on the aspects related to immunosuppression in cetaceans, associating etiological factors and pathological findings, and to highlight the relevance of the evaluation of the endocrine and immune system of marine animals as a reflection of the health status of marine ecosystems.(AU)

A análise do estado de saúde de animais sentinela é elemento-chave para avaliação das condições da saúde ecossistêmica, pois estes animais respondem a mudanças em pequena e larga escala em fatores ecológicos e da qualidade do ambiente. No ambiente marinho, as alterações são sistêmicas e acumulam impactos das zonas costeiras e de atividades oceânicas, sendo os mamíferos aquáticos espécies que refletem as mudanças em parâmetros biológicos e de saúde. Para estes animais diversos estudos vêm relatando um aumento da frequência e diversidade de doenças, incluindo infecções por patógenos provenientes do ambiente terrestre. Este aumento pode estar relacionado ao comprometimento da atividade do sistema imunológico destes organismos em resposta à potenciais fatores sinérgicos. Em cetáceos, a imunossupressão pode ter como causas a infecção por agentes virais, como o Morbillivirus, que induz severa depleção linfoide e é responsável por diversos casos de mortalidade em massa; a contaminação química, destacando os organoclorados e elementos traço (principalmente o mercúrio e o cádmio); e mesmo pelo estresse crônico. Impactos antrópicos são importantes agentes estressores, sendo mais evidentes as consequências em animais de hábitos costeiros, os quais acarretam uma constante liberação de hormônios glicocorticoides e consequente depleção linfoide, mecanismo semelhante ao que ocorre nos mamíferos terrestres. Os animais imunossuprimidos são vulneráveis às doenças oportunistas, algumas mais severas e raras, com risco de dizimar populações. O objetivo desta revisão foi compilar informações sobre os aspectos relacionados à imunossupressão em cetáceos, associando fatores etiológicos e achados patológicos, e destacar a relevância da avaliação do sistema endócrino e imunológico em animais marinhos como reflexo do estado de saúde dos ecossistemas marinhos.(AU)

ATUALIZAÇÕES NA NEUROPATOGENIA DA CINOMOSE

O objetivo deste estudo foi revisar a neuropatogenia causada pelo Morbillivirus em cães, através de revisão de literatura sistemática com ênfase na fisiopatogenia da cinomose. Foram analisadas amostras de encéfalos de cães com diagnóstico de cinomose que vieram a óbito, com base em análise histopatológica das lesões. A cinomose é uma doença multissistêmica grave, altamente contagiosa, com altas taxas de morbidade e mortalidade. É necessário um estudo completo da neuropatogenia da cinomose, abrangendo a etiopagenia e as complicações neurológicas da doença para elucidar detalhadamente as consequências dessa infecção, como as lesões desmielinizantes multifocais crônicas. Nessas patologias, os nucleocapsídeos virais por não utilizarem envelopamento em partículas virais para a sua multiplicação, são transmitidos para as células nervosas através de receptores, principalmente os astrócitos. A fusão célula a célula depende da nectina-4, presente nas cepas desmielinizantes do vírus da cinomose (VCC). Algumas pesquisas mostram que o vírus da cinomose acomete o SNC, mesmo que a infecção não tenha gerado alterações neurológicas. Os mecanismos de invasão e disseminação cerebral do Morbillivirus ainda não são totalmente conhecidos. A análise das alterações neuropatológicas causadas pela presença do VCC pode auxiliar estudos de novos tratamentos que visam à recuperação de sinais neurológicos de cães acometidos pela cinomose, que resultam nas principais causas de óbitos.

The aim of this study was to review the neuropathogenesis caused by Morbillivirus in dogs through systematic literature review with emphasis on the pathophysiology of canine distemper. Encephalic samples from dogs diagnosed with canine distemper that died were analyzed based on histopathological analysis of the lesions. Canine distemper is a severe, highly contagious, multisystemic disease with high morbidity and mortality rates. A complete study of the neuropathogenesis of canine distemper, covering the etiopathogenesis and neurological complications of the disease is necessary to elucidate in detail the consequences of this infection in the Central Nervous System (CNS), such as chronic multifocal demyelinating lesions. In these pathologies, the viral nucleocapsids by they do not use envelopment in viral particles for their multiplication, they are transmitted to the nerve cells through receptors, mainly the astrocytes. Cell-to-cell fusion depends on nectin-4, which is present in demyelinating strains of cynomatosis virus (DCV). Some research shows that the distemper virus affects the CNS, even if the infection has not generated neurological changes. The mechanisms of brain invasion and dissemination of Morbillivirus are not yet fully known. The analysis of neuropathological changes caused by the presence of CCV to support studies of new treatments aimed at the recovery of neurological signs in dogs affected by canine distemper, which results in the main causes of death.

OCORRÊNCIA DE Chlamydia sp., Morbillivirus sp., Parvovirus sp., Leishmania sp. e Alphacoronavirus sp. EM TAMANDUÁS-BANDEIRA (Myrmecophaga tridactyla) CATIVOS

Animais silvestres podem se infectar com patógenos comumente diagnosticados em criações domésticas e desenvolver quadros clínicos ou subclínicos das doenças. Esse quadro é agravado por ações antrópicas e a criação de fauna silvestre em cativeiro, que ocasionam maior proximidade entre diferentes espécies, o que pode facilitar a transmissão de agentes infecciosos e provocar impacto na conservação de grupos ameaçados de extinção. O estado de conservação do tamanduá-bandeira (Myrmecophaga tridactyla) está classificado como vulnerável no Brasil e a espécie é foco de programas de monitoramento e conservação. Conhecer as doenças que podem afetar a espécie é importante para direcionar estratégias de revigoramento populacional e otimizar ações para a conservação desses animais. A presente revisão tem como objetivo fazer o levantamento bibliográfico sobre as principais enfermidades estudadas na espécie Myrmecophaga tridactyla.

Wild animals can become infected with pathogens commonly diagnosed in domestic livestock and develop clinical or subclinical diseases. This situation is worsened by anthropic actions and wildlife breeding in captivity, which can cause greater proximity between different species, and this may facilitate the transmission of infectious agents, and impact the conservation of endangered groups. The conservation status of the giant anteater (Myrmecophaga tridactyla) is classified as vulnerable in Brazil and the species is the object of monitoring and conservation programs. Knowing the diseases that can affect the species is important to guide strategies to revitalize populations and optimize actions for the conservation of these animals. The present review aims to gather literature on the main diseases studied in the species Myrmecophaga tridactyla.

CARACTERIZAÇÃO HISTOPATOLÓGICA DA MATRIZ EXTRACELULAR DO SISTEMA NERVOSO CENTRAL DE CÃES COM CINOMOSE CANINA

A cinomose canina é uma enfermidade cosmopolita e endêmica no Brasil, muitas vezes letal, e que pode provocar leucoencefalite desmeilinizante, lesão semelhante à que ocorre na esclerose múltipla humana. Apesar de sua importância, a patogenia da desmielinização não está completamente elucidada e o microambiente encefálico, incluindo a matriz extracelular, é um importante fator adjuvante nessa lesão já descritos na esclerose múltipla, porém ainda não comprovado na cinomose canina. Portanto o objetivo neste trabalho é caracterizar a matriz extracelular do sistema nervoso central de cães com cinomose canina, a partir de técnicas de histoquímica. Foram coletados fragmentos de córtex e cerebelo de 14 cães naturalmente infectados com cinomose canina encaminhados para necropsia no Laboratório de Patologia Animal do Hospital Veterinário da Universidade Federal de Uberlândia. Os fragmentos foram processados rotineiramente e submetidos a coloração histoquímica com Hematoxilina e Eosina (H.E.), Tricrômico de Masson (TM), Periódico Ácido-Schiff (PAS) e Reticulina. As lâminas foram escaneadas pelo aparelho Aperio Scanscope AT- Leica e lidas a partir do software ImageScope. Além disso as imagens foram transferidas para o software ImageJ e então as marcações das colorações foram quantificadas em lesões de desmielinização, necrose e áreas não lesionadas. Notou-se que a desmielinização foi a lesão mais frequente no H.E., e também foi a mais identificada na coloração de PAS. Os fragmentos corados com TM evidenciaram marcação azulada em vasos e meninge, em intensidades diferentes, o que indica uma mudança na composição da parede vascular que apresenta uma maior deposição de fibras colágenas nesse local. Além disso, na coloração de reticulina observou-se mudança uma maior desorganização da parede vascular, principalmente nas áreas de necrose. Nessas mesmas áreas notou-se pigmentação rosada no interior de macrófagos corados com PAS, indicando uma participação dessas células na estruturação da matriz extracelular do SNC de cães com cinomose canina. Nossa pesquisa evidenciou uma participação da matriz extracelular na patogenia da cinomose canina utilizando colorações histoquímicas facilmente encontradas na rotina de laboratório histopatológico. Mais estudos são necessários para um melhor detalhamento da participação dessas moléculas na patogenia dessa doença viral.

Canine distemper is a cosmopolitan disease, usually lethal, endemic in Brazil, and it can cause demyelinating leucoencephalitis, similar to human multiple sclerosis. Demyelination is not completely understood, even though it is important, and the encephalic microenvironment, including the extracellular matrix, is an important key factor in this lesion previously described in multiple sclerosis but not proved in canine distemper. Thereby, the aim of this work is to characterize the extracellular matrix using histochemical techniques in the encephalon of dogs naturally infected by canine distemper. Samples of cortex and cerebellum of 14 naturally infected dogs with canine distemper were collected after being sent for necropsy in the Animal Pathology Laboratory of the Veterinary Hospital of Uberlândia Federal University. The samples were processed as routine and submitted to histochemical stain with Hematoxylin and Eosin (H.E), Masson Trichrome (MT), Periodic Acid-Schiff (PAS) and Reticulin. The slides were scanned by Aperio Scanscope AT Leica and were read through ImageScope software. In addition, the images were transferred to ImageJ and the stain was quantified in areas of demyelination, necrosis, and non-lesion. Demyelination was the most frequent lesion in H.E. and it was also more noted in PAS. The TM samples showed blue stain around vessels and meninge, which indicates a change in the vascular wall composition showing more collagen deposition in this area. Reticulin stain pointed a disorganization in the vascular wall, more visible at necrotic areas. Still in that lesioned area, PAS stained pink inside macrophages, pointing that these cells were involved in the structure of the extracellular matrix in the encephalon. This study proved an involvement of the extracellular matrix in the pathogeny of canine distemper by the usage of histochemical stains easily found in histopathology laboratories. More researches should be done to better detail the involvement of these molecules in the course of this viral disease.

CARACTERIZAÇÃO DO GENE DA PROTEÍNA HEMAGLUTININA DO VÍRUS DA CINOMOSE CANINA EM CÃES NATURALMENTE INFECTADOS NOS ESTADOS DE MATO GROSSO E RONDÔNIA

O Morbillivirus canino (CDV) é o agente etiológico da cinomose canina (CC), uma importante doença de cães e carnívoros silvestres caracterizada por alta morbidade e mortalidade. A proteína hemaglutinina (H) presente no envelope possui importante função de adsorção viral e por isso apresenta elevada variabilidade genética em relação aos outros genes do CDV. Por essa razão tem sido utilizada para caracterizar as estirpes do CDV, permitindo a identificação de linhagens específicas. Diante do exposto o objetivo do presente estudo foi caracterizar a proteína hemaglutinina (H) em estirpes de CDV detectados em 15 cães naturalmente infectados no estado de Mato Grosso e Rondônia. As amostras foram coletadas de tecido nervoso central de cães que vieram a óbito. Foram inicialmente submetidas a RT-PCR para detecção do gene do nucleocapsídeo (N). As positivas foram em seguida testadas para amplificar o gene H. Em dez amostras houve amplificação completa do gene H. Análise filogenética revelou que as amostras se posicionaram em dois grupos: um geneticamente relacionado com isolados do Uruguai e, outro com linhagens oriundos de cepas brasileiras (especificamente dos estados do Paraná e Rio Grande do Sul), todas as sequências foram classificadas dentro do genótipo América do Sul I/ Europa.

Canine Morbillivirus (CDV) is the etiological agent of canine distemper (CC), an important disease of dogs and wild carnivores characterized by high morbidity and mortality. The hemagglutinin (H) protein present in the envelope has an important function of viral adsorption and therefore has high genetic variability in relation to the other CDV genes. For this reason, it has been used to characterize CDV strains, allowing the identification of specific strains. Given the above, the objective of the present study was to characterize the hemagglutinin (H) protein in CDV strains detected in 15 naturally infected dogs in the states of Mato Grosso and Rondônia. The samples were collected from central nervous tissue of dogs that died. They were initially submitted to RT-PCR to detect the nucleocapsid (N) gene. The positive ones were then tested to amplify the H gene. In ten samples, there was complete amplification of the H gene. Phylogenetic analysis revealed that the samples were positioned in two groups: one genetically related to isolates from Uruguay and the other with strains from Brazilian strains (specifically from the states of Paraná and Rio Grande do Sul), all sequences were classified within the South America I / Europe genotype.

CARACTERIZAÇÃO IMUNO-HISTOQUÍMICA DE ANTÍGENOS DE MORBILLIVÍRUS CANINO EM FELÍDEOS NEOTROPICAIS DO SUL DO BRASIL

O morbillivirus canino (CDV) é considerado um patógeno emergente em animais silvestres e tem demonstrado alta capacidade de infectar diferentes espécies animais. Entretanto, relatos na literatura brasileira descrevendo a infecção de felídeos neotropicais são escassos. Consequentemente, o objetivo do trabalho foi identificar partículas virais de CDV em tecidos de felídeos neotropicais do Sul do Brasil utilizando um protocolo imuno-histoquímico (IHQ) para identificar a presença intralesional de antígenos do CDV, podendo então fazer a associação com os achados histopatológicos. Foram utilizados tecidos provenientes de três espécies de felídeos neotropicais: puma (Puma concolor, n=1), maracajá (Leopardus wideii, n=1) e gato- mourisco (Herpailurus yagouaroundi). Todos os felídeos eram mantidos no Santuário Biológico de Bela Vista. Fragmentos de pulmão e vesícula urinária de todos os animais foram coletados e processados para avaliação histopatológica de rotina a fim de identificar possíveis padrões de lesões associados ao CDV, como ocorrido em cães domésticos. Com base no padrão da doença, identificado pela histopatologia, foram realizados ensaios de IHC para identificação de antígenos do CDV. A análise histopatológica revelou pneumonia intersticial nos pulmões do maracajá e gato- mourisco, e degeneração balonosa do urotélio da bexiga do puma. Ambas as alterações revelaram imunorreatividade positiva para antígenos de CDV. Em conclusão, antígenos intralesionais de CDV foram identificados em tecidos de felídeos neotropicais, confirmando infecção ativa nesses animais. Esses achados adicionam às poucas descrições de infecções induzidas por CDV em hospedeiros mamíferos que não o cão doméstico do Brasil.

Canine morbillivirus (CDV) is considered an emerging pathogen in wild animals and has demonstrated a high capacity to infect different animal species. However, reports in the Brazilian literature describing the infection of neotropical felids are scarce. Consequently, the aim of the study was to identify CDV viral particles in tissues of neotropical felids from southern Brazil using an immunohistochemical protocol (IHC) to identify the intralesional presence of CDV antigens, and then be able to make the association with histopathological findings. Tissues from three species of Neotropical felids were used: cougar (Puma concolor, n = 1), margay (Leopardus wideii, n = 1) and jaguarundi (Herpailurus yagouaroundi). All felids were kept in the Bela Vista Biological Sanctuary. Lung and urinary bladder fragments from all animals were collected and processed for routine histopathological evaluation in order to identify possible patterns of CDV- associated injuries, as occurred in domestic dogs. Based on the disease pattern, identified by histopathology, IHC assays were performed to identify CDV antigens. Histopathological analysis revealed interstitial pneumonia in the margay and jaguarundi lungs and ballooning degeneration of the cougars urinary bladder urothelium. Both findings revealed positive immunoreactivity for CDV antigens. In conclusion, intralesional antigens of CDV were identified in tissues of neotropical felids, confirming active infection in these animals. These findings add to the few descriptions of CDV-induced infections in mammalian hosts other than Brazil's domestic dog.

AVALIAÇÃO IMUNOHISTOQUÍMICA DO ESTRESSE OXIDATIVO NO SISTEMA NERVOSO CENTRAL DE CÃES POSITIVOS PARA CINOMOSE

A cinomose canina é uma doença causada pelo Canine morbillivirus (CM), um patógeno pantrópico que pode afetar o Sistema Nervoso Central (SNC), causando desmielinização. No entanto, a patogênese dessa lesão ainda precisa ser esclarecida. Amostras do SNC de 14 cães naturalmente infectados por CM foram analisadas para avaliar a correlação entre estresse oxidativo e desmielinização. Fragmentos de SNC desses cães foram submetidos à RT-PCR para detecção parcial do gene que codifica a nucleoproteína de CM; imunohistoquímica anti-CM para localizar as proteínas virais no tecido e imunohistoquímica anti-4-hidroxinonenal (4-HNE) como marcador de produto da peroxidação lipídica. A presença de peroxidação lipídica foi comparada com a presença de desmielinização em cortes histológicos corados com HE. Foi possível a detecção de material gênico de CM em todas as amostras. Por meio dos resultados, observou-se que a área desmielinizada foi positiva para a presença de proteínas virais e células imunomarcadas para 4-HNE. Após a análise dos resultados, conclui-se que a presença do vírus gera estresse oxidativo que leva a peroxidação lipídica, causando danos aos tecidos e resulta em desmielinização. Logo, o estresse oxidativo desempenha um papel importante na patogênese da cinomose canina.

Canine Distemper is a disease caused by Canine morbillivirus (CM), a pantropic pathogen that can affect the Central Nervous System (CNS) causing demyelination. However, the pathogenesis of this lesion remains to be clarified. CNS fragments were submitted to RT-PCR for partial detection of the gene that encodes the CM nucleoprotein; anti-CM immunohistochemistry to locate viral proteins in the tissue and anti-4-hydroxynonenal immunohistochemistry (4-HNE) as a marker of lipid peroxidation product. Through the results, it was observed that the demyelinated area was positive for the presence of viral proteins and cells immunostained for 4-HNE. The results showed the presence of virus proteins in the demyelinated area with the presence of 4-HNE. Considering these results, we strongly believe that the virus presence causes oxidative stress leading to lipid peroxidation, which causes tissue damage and results in demyelination. In conclusion, oxidative stress plays an important role in canine distemper pathogenesis.

Caracterização histopatológica, imuno-histoquímica e molecular de doenças emergentes em cetáceos no litoral do Paraná

Há evidências crescentes sobre a importância dos mamíferos aquáticos para os ecossistemas e sobre as consequências das atividades humanas. As alterações no ecossistema causadas pelas atividades humanas geram impactos à biodiversidade e inúmeras consequências, incluindo o aumento da suscetibilidade a patógenos e doenças emergentes. Entre as doenças infecciosas emergentes, a morbilivirose de cetáceos, a toxoplasmose e a brucelose, representam, de fato, um potencial risco para a conservação e preservação dos cetáceos. Essas doenças podem desencadear mortalidade massiva, restringir o crescimento de indivíduos, aumentar o risco de extinção e provocar perda da biodiversidade. Ademais, a frequente detecção de novas cepas virais de morbillivírus de cetáceos (CeMV) aumenta a preocupação com a preservação de cetáceos em todo o mundo. Portanto, o objetivo do presente estudo foi verificar a prevalência e os achados patológicos associados ao CeMV e outros patógenos em cetáceos encalhados no litoral do Estado do Paraná sob condições naturais e a possível relação com impactos antrópicos e naturais. O estudo foi realizado no litoral do Paraná e no Complexo Estuarino de Paranaguá compreendendo uma área total de 618 km2. A base de dados do Programa de Monitoramento de Praias da Bacia de Santos foi consultada para verificar os registros de todos os cetáceos encalhados entre fevereiro, 2016 a novembro, 2018, de onde todas as amostras foram obtidas. Como critério de inclusão, apenas animais em boa ou moderada condição de preservação post-mortem e com amostras suficientes para análise molecular, histopatológica e imuno-histoquímica (IHQ) foram avaliados. Amostras de pulmão, sistema nervoso central (SNC) e linfonodos foram imersas em solução de formalina tamponada a 10% e rotineiramente processadas para avaliação histopatológica e imuno-histoquímica anti-CDV e anti-Toxoplasma gondii. Um anticorpo monoclonal anti-CDV foi utilizado para a pesquisa de CeMV devido a reação cruzada entre diferentes cepas de morbillivírus demonstradas por estudos sorológicos. Amostras de pulmão e SNC foram congeladas a -20º para posterior transcrição reversa e reação em cadeia da polimerase (RT-PCR). Do total de 325 registros de cetáceos autopsiados, 40 animais apresentaram todos os critérios de inclusão. A espécie mais comumente observada foi o boto-cinza (Sotalia guianensis, 30/40; 75%) e a interação antrópica mais frequente foi a interação com a pesca (21/40; 52,5%). Na histopatologia, foi observado infiltrado inflamatório linfoplasmocitário peribronquial ou peribronquiolar e encefalite discreta com manguitos de até duas camadas foram os principais achados patológicos associados à infecção por CeMV. A sobreposição de lesões típicas de CeMV por agentes secundários, como o nematoide Halocercus brasiliensis, foi observada em cinco (12,5%) animais. Na avaliação imuno-histoquímica, foi observada a prevalência de antígenos de CeMV em 11 (11/40; 27,5%) animais. A maioria dos animais apresentaram imunomarcação intracitoplasmática apenas no pulmão e um animal apresentou imunorreatividade em todos os órgãos avaliados. Todas as amostras foram negativas para CeMV na análise molecular usando a RT-PCR. A negatividade da análise molecular é multifatorial e provavelmente incluem-se (i) distribuição heterogênea do vírus nos órgãos, (ii) degradação do RNA devido à baixa preservação do tecido frequentemente observada em animais encalhados, ou degradação do RNA nas amostras por RNases e/ou mudanças térmicas, (iii) baixa carga viral, (iv) alvos diferentes na IHQ e na RT-PCR. Em conclusão, o diagnóstico de CeMV é desafiador em áreas em que episódios epidêmicos não foram registrados ainda e devido às alterações post-mortem. Entretanto, observamos uma prevalência de 27,5% de CeMV com predominância de alterações pulmonares associadas por meio de uma combinação de análise histopatológica e imuno-histoquímica. Esse vírus pode desempenhar um papel importante no encalhe de cetáceos, assim como, agir como um agente imunossupressor causando e/ou facilitando infecções secundárias. Os resultados aqui descritos ampliam o conhecimento sobre CeMV na nossa região e este é o primeiro estudo realizado sob condições naturais no Brasil.

There is growing evidence about the importance of aquatic mammals to ecosystems and the consequences of human activities. The changes in the ecosystem caused by human activities have impacts on biodiversity and countless consequences, including increased susceptibility to pathogens and emerging diseases. Among the emerging infectious diseases, cetacean morbidity, toxoplasmosis and brucellosis, in fact, represent a potential risk for the conservation and preservation of cetaceans. These diseases can trigger massive mortality, restrict the growth of individuals, increase the risk of extinction and cause loss of biodiversity. In addition, the frequent detection of new viral strains of cetacean morbillivirus (CeMV) raises concerns about the preservation of cetaceans worldwide. Therefore, the objective of the present study was to verify the prevalence and pathological findings associated with CeMV and other pathogens in stranded cetaceans on the coast of the State of Paraná under natural conditions and the possible relationship with anthropic and natural impacts. The study was carried out on the coast of Paraná and in the Estuarine Paranaguá Complex, comprising a total area of 618 km2. The database of the Santos Basin Beach Monitoring Program was consulted to verify the records of all stranded cetaceans between February 2016 to November 2018, from where all samples were obtained. As an inclusion criterion, only animals in good or moderate condition of post-mortem preservation and with sufficient samples for molecular, histopathological and immunohistochemical (IHC) analysis were evaluated. Samples of lung, central nervous system (CNS) and lymph nodes were immersed in 10% buffered formalin solution and routinely processed for histopathological and anti-CDV immunohistochemistry and anti-Toxoplasma gondii. An anti-CDV monoclonal antibody was used for CeMV screening due to the cross reaction between different strains of morbillivirus demonstrated by serological studies. Lung and CNS samples were frozen at -20º for subsequent reverse transcription and polymerase chain reaction (RT-PCR). Of the total of 325 autopsied cetacean records, 40 animals met all inclusion criteria. The species most observed was the Guiana dolphin (Sotalia guianensis, 30/40; 75%) and the most frequent anthropogenic interaction was bycatch (21/40; 52.5%). In histopathology, peribronchial or peribronchiolar lymphoplasmacytic inflammatory infiltrate and mild encephalitis with cuffs of up to two layers were observed as the main pathological findings associated with infection by CeMV. The overlapping of typical CeMV lesions by secondary agents, such as the nematode Halocercus brasiliensis, was observed in five (12.5%) animals. In the immunohistochemical evaluation, the prevalence of CeMV antigens was observed in 11 (11/40; 27.5%) animals. Most animals presented intracytoplasmic immunostaining only in the lung and one animal showed immunoreactivity in all organs evaluated. All samples were negative for CeMV in the molecular analysis using RT-PCR. The negativity of the molecular analysis is multifactorial and probably includes (i) heterogeneous distribution of the virus in the organs, (ii) degradation of the RNA due to the low tissue preservation frequently observed in stranded animals, or degradation of the RNA in the samples by RNases and / or thermal changes, (iii) low viral load, (iv) different targets in IHC and RT-PCR. In conclusion, the diagnosis of CeMV is challenging in areas where epidemic episodes have not been recorded yet and due to post-mortem changes. However, we observed a 27.5% prevalence of CeMV with a predominance of associated pulmonary changes through a combination of histopathological and immunohistochemical analysis. This virus can play an important role in stranding cetaceans, as well as acting as an immunosuppressive agent causing and / or facilitating secondary infections. The results described here expand the knowledge about CeMV in our region and this is the first study carried out under natural conditions in Brazil.

DETECÇÃO MOLECULAR DE PARAMIXOVÍRUS EM MORCEGOS NO BIOMA CERRADO DO ESTADO DE MATO GROSSO

Os morcegos são abundantes no mundo, com diversas espécies catalogadas de acordo com sua anatomia, estilo de vida e seu grande papel no ecossistema. Mas a sua grande relevância na medicina veterinária e na saúde humana se dá pelo fato de representarem reservatórios de vírus emergentes. Atualmente no Brasil, além do vírus da raiva amplamente pesquisado em morcegos, estes animais são reservatórios para transmissão de patógenos causadores de doenças em humanos e animais. Entre os paramixovírus que podem causar várias doenças nos humanos, temos os vírus da parainfluenza tipos 1, 2, 3 e 4, vírus da caxumba, sarampo, vírus Nipah e vírus Hendra, dentre outros. Entre estes patógenos, diversos agentes classificados nessa família viral têm os morcegos como hospedeiro natural, havendo potencial de transmissão a partir desses hospedeiros para os animais de produção e os seres humanos. Considerando que no Brasil ainda há poucos estudos sobre os paramixovírus, é imprescindível a realização de trabalhos como este para que se obtenha mais informações tanto em âmbito regional como nacional. Desta forma, o presente estudo teve o objetivo de investigar a presença dos paramixovírus em morcegos do bioma Cerrado, através da técnica de semi-nested RT-PCR com posterior sequenciamento direto dos fragmentos. Para tal foram realizadas capturas a campo de 40 morcegos silvestres, sendo 37 da espécie hematófaga Desmodus rotundus e três de espécies insetívoras. Após a captura dos morcegos, foi realizada a necropsia de cada animal, seguida de coleta de amostras de tecido encefálico e intestinal que foram submetidas às análises moleculares de semi-nested RT-PCR e sequenciamento direto. Como resultado observou-se que nove amostras foram positivas para identificação de paramixovírus, sendo detectado um novo tipo de paramixovírus em morcegos.

Bats are abundant in the world, with several species cataloged according to their anatomy, lifestyle and their critical role in the ecosystem. But their major relevance in veterinary medicine and human health is due to the fact that they represent reservoirs of emerging viruses. Currently in Brazil, in addition to the rabies virus widely researched in bats that are its reservoirs, these animals can transmit disease-causing pathogens in humans and animals. Several paramyxoviruses can cause diseases in humans, such as parainfluenza virus types 1, 2, 3 and 4, mumps virus, measles, Nipah virus, and Hendra virus, among others. Among these pathogens, several agents classified in this viral family have bats as a natural host, with potential for transmission from these hosts to domestic animals and humans. Considering that in Brazil there are still few studies on paramyxoviruses, it is essential to carry out studies such as this one in order to obtain more information both at the regional and national levels. Thus, the present study aimed to investigate the presence of paramyxoviruses in bats from the Cerrado biome, using the semi-nested RT-PCR technique with subsequent direct sequencing of the fragments obtained. Forty wildbats were captured, 37 of which were hematophagous species and three of insectivorous species. After bat capture, necropsy of each animal was performed, followed by collection of brain and intestinal tissue samples, which were subjected to molecular analyzes of semi-nested RT-PCR and direct sequencing. As a result, it was observed that nine samples were positive for the identification of paramyxovirus, and a new type of paramyxovirus was detected in bats.

CARACTERIZAÇÃO IMUNOHISTOQUÍMICA DE MORBILIRIRUS CANINO EM QUATIS (Nasua nasua) DO SUL DO BRASIL

O morbilivirus canino (também conhecido como CDV), é considerado um patógeno de uma doença infecciosa emergente em animais selvagens e tem demonstrado alta capacidade de infectar diferentes espécies animais. No entanto, a patogênese da doença em espécies selvagens ainda não está esclarecida e há poucas descrições de infecções por CDV e outros patógenos virais de doenças infecciosas em animais selvagens no Brasil. Consequentemente, este estudo investigou a possível ocorrência de doenças virais em quatis (Nasua nasua) no Sul do Brasil, comparando os padrões histopatológicos observados nos quatis com o cão doméstico e utilizando um protocolo imuno-histoquímico (IHQ) para identificar a presença intralesional de antígenos do CDV, podendo então associá-lo à infecção. Fragmentos de tecido de quatis (n = 13) que morreram no Refúgio Biológico Bela Vista, Foz do Iguaçu, Paraná, sul do Brasil, entre 1993 e 2012, foram rotineiramente processados para histopatologia, a fim de identificar os principais padrões histopatológicos em comparação aos do cão doméstico. Secções duplicadas desses tecidos (pulmão, fígado, bexiga e intestino delgado) foram usados em ensaios IHQ para identificar os antígenos do CDV, a partir de parafina fixada em formalina (FFPE). Além disso, secções de tecidos FFPE selecionados desses quatis foram utilizados em ensaios IHQ projetados para identificar antígenos de adenovírus canino tipo 1 e 2 (CAdV-1 e 2) e parvovírus canino tipo 2 (CPV-2). Também foram usados métodos histoquímicos para possível identificação de agentes de doenças bacterianas e fúngicas. Os principais padrões histopatológicos identificados foram pneumonia intersticial (9/13; 69,2%), nefrite intersticial (6/13; 46,2%), enterite atrófica (4/13; 30,8%) e degeneração balonosa no epitélio urotelial (3/13; 23,1%). Três quatis demonstraram imunorreatividade intralesional e intracitoplasmática positivas para antígenos de CDV (3/13; 23,1%). A coloração IHQ positiva para antígenos do CDV foi identificada no citoplasma das células epiteliais dos brônquios no pulmão, associado a pneumonia intersticial em todos os quatis (3/3; 100%) que continham os antígenos de CDV. Adicionalmente, a imunorreatividade intracitoplasmática positiva para antígenos de CDV foi identificada nos enterócitos das criptas de Lieberkhun, nas vilosidades da mucosa intestinal e nos neurônios mientéricos do intestino delgado (2/3; 66,7%), também nas células epiteliais uroteliais da bexiga (2/3; 66,7%). Antígenos de CPV-2, CAdV-1 e CAdV-2 não foram identificados em nenhuma amostra de tecido testada e a coloração histoquímica não demonstrou organismos fúngicos e/ou bacterianos associados às lesões descritas acima. Esses achados indicam que esses quatis foram infectados por CDV e desenvolveram lesões com padrões histopatológicos semelhantes aos observados nos cães domésticos, sugerindo que essa espécie selvagem pode atuar como hospedeiro potencial para o CDV.

Canine morbillivirus (also known as canine distemper virus, CDV), is considered as an emerging infectious disease pathogen for wild animals and has demonstrated elevated capacity to infect different species of animals. However, the pathogenesis of the disease in wildlife species remains unclear and there are few descriptions of infections due to CDV and other viral infectious disease pathogens in wild animals from Brazil. Consequently, this investigated the possible occurrence of viral disease in coatis (Nasua nasua) from Southern Brazil, by comparing the histopathological patterns observed in coatis with those of the domestic dog and then used an immunohistochemical (IHC) protocol to identify the intralesional presence of antigens of CDV; thereby, associating CDV with infection. Tissue fragments (n = 13) of coatis (Nasua nasua) that died at the Bela Vista Biological Refuge, Foz do Iguaçu, Parana, southern Brazil, between 1993 and 2012, were routinely processed to identify histopathologic patterns associated with infectious disease agents of the domestic dog. Duplicate sections of these tissues (lung, liver, urinary bladder and small intestine) were used in an IHC assay designed to identify antigens of CDV from formalin-fixed paraffin-embedded (FFPE). Additionally, selected FFPE tissues sections from these coatis were used in IHC assays designed to identify antigens of canine adenovirus type 1 and 2 (CAdV-1 and 2) and canine parvovirus type 2 (CPV-2). Furthermore, histochemical methods were used to identify possible bacterial or fungal disease agents. The main histopathological patterns observed were interstitial pneumonia (9/13; 69.2%), interstitial nephritis (6/13; 46.2%), atrophic enteritis (4/13; 30.8%) and ballooning degeneration of urothelial epithelium (3/13; 23.1%). Three coatis (3/13; 23.1%) demonstrated positive intralesional, intracytoplasmic immunoreactivity to antigens of CDV. A positive immunohistochemical staining for CDV antigens was identified in the bronchial epithelial cells of the lungs diagnosed with interstitial pneumonia in all coatis (3/3; 100%) that contained CDV antigens. Additionally, positive intracytoplasmic immunoreactivity to CDV antigens were identified within the enterocytes of the Lieberkhun crypts, intestinal mucosa villus, and myenteric neurons of the small intestinal (2/3; 66.7%) and in the degenerated urothelial epithelial cells of the urinary bladder (2/3; 66.7%). CPV-2, CAdV-1 and CAdV-2 antigens were not identified in any tested tissue sample; while, the histochemical stain did not identify fungal or bacterial organism associated with the above described lesions. These findings indicate that these coatis were infected by CDV and developed similar histopathologic patterns as observed in the domestic dog, suggesting that this wild species may serve as a potential host for CDV. Key words: canine distemper virus. Emerging infectious diseases. Comparative pathology. Wild carnivores. Procionids.

Investigação de infecções por Brucella e Morbillivirus em cetáceos e sirênios nas regiões Norte e Nordeste do Brasil

Os mamíferos aquáticos são susceptíveis a infecções por uma ampla variedade de microrganismos, incluindo bactérias, fungos, vírus e parasitas, cabendo destaque às infecções por Brucella e Morbillivirus, as quais vêm sendo evidenciadas em uma ampla variedade de espécies de mamíferos marinhos em diversas localidades geográficas. Nos mamíferos marinhos, a brucelose é causada pelas espécies Brucella ceti e Brucella pinnipedialis, tendo os cetáceos e os pinípedes como hospedeiros preferenciais, respectivamente. Algumas estirpes foram associadas a infecções zoonóticas. Nos cetáceos e pinípedes, os morbillivirus têm o potencial de causar grandes epidemias com mortalidade em massa das espécies acometidas, podendo ocasionar extinções locais em virtude da tendência cíclica desta infecção. Ambas as infecções já foram registradas em cetáceos marinhos no Brasil, incluindo a recente descrição de epizootia associada a alta mortalidade de botos-cinza (Sotalia guianensis) no Rio de Janeiro, RJ, Brasil. Até o momento, infecções por Brucella e Morbillivirus não foram descritas em golfinhos de rio e em sirênios. Assim, o objetivo do presente trabalho foi investigar a ocorrência de infecções por Brucella spp. e Morbillivirus em cetáceos e sirênios nas regiões Norte e Nordeste do Brasil. Foram analisados 57 peixes-boi marinhos (Trichechus manatus) incluindo animais cativos, reintroduzidos e de vida livre, 84 peixes-boi amazônicos cativos (Trichechus inunguis) e 23 cetáceos, compreendendo amostras de animais vivos e provenientes do banco de amostras de instituições responsáveis pela reabilitação e monitoramento destas espécies. Foram obtidas amostras de tecidos, swabs nasais, genitais, orais e anais e sangue, as quais foram utilizadas para o diagnóstico direto das infecções, pela reação em cadeia pela polimerase (PCR). Amostras de soro foram submetidas ao teste sorológico do antígeno acidificado tamponado (AAT) para detecção de anticorpos anti-Brucella. Os animais com resultados positivos nos testes sorológicos e/ou moleculares para brucelose, tiveram suas amostras analisadas pelo cultivo microbiológico. Amostras positivas nas reações moleculares foram submetidas à caracterização molecular para a confirmação do resultado e caracterização da estirpe bacteriana e/ou viral. Todos os sirênios analisados apresentaram resultado negativo no teste do AAT para sorodiagnóstico de Brucella, bem como nas reações moleculares para detecção de Brucella e morbilivírus em amostras de swabs, tecidos e sangue. Dentre os cetáceos analisados, um espécime de boto-cinza (Sotalia guianensis), macho, encontrado encalhado em Pernambuco, apresentou resultado positivo na PCR para detecção de Brucella spp. em amostra de rim, tendo sido identificada a espécie B. ceti. O isolamento bacteriano não foi bem-sucedido. Num segundo espécime de boto-cinza (S. guianensis), fêmea, encalhada em Alagoas, foi detectado morbillivirus em amostras de fígado e rim. De acordo com os resultados obtidos, não foram verificadas evidência de infecções por Brucella e Morbillivirus em sirênios no Brasil. Quanto aos cetáceos, este corresponde ao segundo relato no Brasil de infecção por Brucella nessa espécie de cetáceo, sendo o primeiro relato de infecção por morbillivirus em boto-cinza na região nordeste do Brasil. Estes resultados alertam para a importância do monitoramento sanitário sistemático desses patógenos, particularmente nesta espécie de golfinho.

Aquatic mammals are susceptible to infections by a variety of microorganisms, including bacteria, fungi, viruses and parasites, with emphasis on Brucella and Morbillvirus infections, which have been evidenced in a wide variety of marine mammal species in several geographical locations. In marine mammals, brucellosis is caused by Brucella ceti and Brucella pinnipedialis, having the cetaceans and pinnipeds as the preferred hosts, respectively. Some Brucella strains have been associated with zoonotic infections. In cetaceans and pinnipeds, morbiliviruses have the potential to cause large epidemics with mass mortality of the affected species with potential to cause local extinctions due to the cyclic tendency of this infection. Both infections have been reported in marine cetaceans in Brazil, including a recent described morbillivirus infection associated with an unusual mass mortality of Guiana dolphins (Sotalia guianensis) in Rio de Janeiro, RJ, Brazil. Until now, Brucella and Morbillivirus infections have not been reported in river dolphins and sirenian. The objective of the present study was to investigate the occurrence of Brucella spp. and Morbillivirus infections in cetaceans and sirenians in the northern and north-eastern regions of Brazil. Fifty-seven marine manatees (Trichechus manatus) were analyzed including captive, reintroduced and free-living animals, 84 captive Amazonian manatees (Trichechus inunguis) and 23 cetaceans were analysed, comprising samples from live animals and from the bank of samples from institutions involved in the rehabilitation and monitoring of these species. Tissue samples, nasal, genital, oral and anal swabs and blood, which were used for direct diagnosis of the infections using the polymerase chain reaction (PCR). Sera was used to detect anti-Brucella antibodies through the buffered acidified antigen test (BAAT). The animals with positive results in serological and/or molecular tests for brucellosis had their samples analysed by microbiological culturing. Positive samples in the molecular reactions were subjected to the sequencing of amplified products to confirm the result and characterize the detected bacterial and/or viral strain detected. All the sirenians analysed were negative in the BAAT test for Brucella serodiagnosis, as well as through the PCR for the detection of Brucella and morbilivirus. Among the cetaceans analysed, a specimen of male Guiana dolphin (S. guianensis), found stranded in Pernambuco, had a Brucella positive PCR result in a kidney sample, with the identification of B. ceti. Bacterial isolation was not successful. In a second specimen of female Guiana dolphin found stranded in Alagoas, morbillivirus was detected in liver and kidney samples. According to the results obtained, there was no evidence of Brucella and Morbillivirus infections in manatees in Brazil. Regarding the cetaceans, this is the second report in Brazil of Brucella infection in this cetacean species, and the first report of morbillivirus infection in Guiana dolphin in the north-eastern Brazilian regions. These results highlight for the importance of conducting systematic health monitoring of these pathogens, particularly in this dolphin species.

EFEITOS DA TERAPIA COM CÉLULAS ESTROMAIS MESENQUIMAIS MULTIPOTENTES EM CÃES COM ENCEFALOMIELITE PELO VÍRUS DA CINOMOSE

As células estromais mesenquimais multipotentes (MSCs) são células adultas que residem em diversos tecidos do corpo e possuem capacidade proliferativa, imunomoduladora, anti-inflamatória e neuroregenerativa representado pela secreção de citocinas e fatores neurotróficos. O tecido neural possui baixa capacidade regenerativa após lesões traumáticas, inflamatórias e degenerativas, sendo alvo de estudos com uso de MSCs devido ao seu potencial terapêutico. A cinomose é uma doença viral infectocontagiosa comum em cães que acomete o sistema nervoso central refletindo em sinais clínicos neurológicos causadas por lesões desmielinizantes, resultantes da replicação viral no interior dos oligodendrócitos e de células da microglia, pela regulação do complexo de histocompatibilidade de classe I e infiltração de células inflamatórias. Nesse sentido, com o intuito de reduzir os sinais clínicos neurológicos, o objetivo desse estudo foi avaliar a eficácia terapêutica das MSCs derivadas do tecido adiposo canino pela via intratecal (IT) em cães com encefalomielite viral por cinomose. Foram utilizados 10 cães, sem raça definida, apresentando sinais neurológicos de início agudo e progressivo com diagnóstico positivo pelo teste de Reação em Cadeia pela Polimerase quantitativo (qPCR). No momento 0 (M0), foi realizado exame neurológico, teste qPCR, hemograma e bioquímica sérica. No momento 1 (M1), os animais foram submetidos à anestesia para exame de ressonância magnética (RM), seguido da colheita do líquido cefalorraquiano (LCR), e então transplante de 10x106 MSCs pela via IT. Trinta dias após o transplante no momento 2 (M2), foram realizados o exame clínico, neurológico, hemograma, bioquímico, RM e analise do LCR. De acordo com os resultados obtidos nas condições experimentais descritas conclui-se que a via intratecal para o transplante das ASCs alogênicas em cães é viável e segura, pois demonstrou ser minimamente invasiva, rápida e permite transplantar um grande número de células no espaço subaracnóideo. As ASCs alogênicas por via intratecal demonstraram ser efetivas na melhora dos sinais clínicos.

Multipotent mesenchymal stromal cells (MSCs) are adult cells that reside in various tissues of the body and have proliferative, immunomodulatory, anti-inflammatory and neurooregenerative capacity represented by secretion of cytokines and neurotrophic factors. Neural tissue has low regenerative capacity after traumatic lesions, inflammatory and degenerative, being the target of studies with the use of MSCs due to its therapeutic potential. Distemper is a common viral disease, infectious and contagious of dogs that affects the central nervous system reflecting on clinical neurological signs caused by demyelinating lesions, resulting from viral replication within the oligodendrocytes and microglial cells, by regulation of the class I histocompatibility complex and infiltration of inflammatory cells. Thus, in order to reduce neurological clinical signs, the objective of this study was to evaluate the therapeutic efficacy of MSCs derived from canine adipose tissue by the intrathecal route (IT) in dogs with viral encephalomyelitis due to distemper. Ten dogs were used, mixed breed, presenting neurological signs of acute and progressive onset with positive diagnosis by quantitative Polymerase Chain Reaction (qPCR). At time 0 (M0), neurological examination, qPCR test, blood count and serum biochemistry were performed. At the moment 1 (M1), the animals were submitted to anesthesia for magnetic resonance imaging (MRI), followed by cerebrospinal fluid (CSF) harvest, and then transplantation of 10x106 MSCs via the IT. Thirty days after transplantation at time 2 (M2), clinical, neurological, hemogram, biochemical, MRI and CSF analyzes were performed. According to results in the experimental conditions described, it is concluded that the via intrathecal for the transplantation of allogeneic ASCSs in dogs is viable and safe as it has been shown to be minimally invasive, rapid and allows to transplant a large number of cells in the subarachnoid space. Intrathecal allogeneic ASCSs have been shown to be effective in improving clinical signs.

Analysis of infection epidemiological distemper virus, dogs in the municipality of Garanhuns, Pernambuco, Brazil / Análise epidemiológica da infecção pelo vírus da cinomose, em cães do município de Garanhuns, Pernambuco, Brasil

Distemper is caused by a Morbillivirus and has worldwide distribution, the dog being the major reservoir for this virus. Transmission occurs by aerosols and the virus can be excreted at the end of the acute phase. It is a disease with no predilection for race, age or sex; however the literature suggests that puppies are most affected. In this study were analyzed serum samples from pet dogs in the city districts and neighborhoods of Garanhuns Boa Vista, Cohab 1, Cohab 2, Magano and center during the period from August to December 2012. Samples were collected from dogs older than three months, not vaccinated against distemper. To produce the maps of geographical distribution of animals were collected coordinates for each home visit. Of the samples analyzed, 90.38% were positive, and 28.72% had high antibody concentration, 47.88% and 23.40% average concentration or low. By analyzing  the distribution by districts observed a higher prevalence of infection in neighborhoods with Cohab 2 100.00% and Cohab 1 with 96.00%; Boa Vista with 93.10%; Magano with 78.26%; center with 50.00%. This study did not identify any variable associated with infection related to sex and 100.0% of the animals, including positive and negative, were not castrated. It was shown that 75.0% of the animals had never been taken to the veterinarian, and of these, 94.8% were positive, a fact that may be related to higher seropositivity in these animals. The results of this study show that the canine distemper virus is widespread in the canine population of Garanhuns, Pernambuco, highlights the importance of epidemiological studies to characterize the real situation of infection by this virus in canine populations, in order to reduce damage to animal health caused by this agent.(AU)

A cinomose é causada por um Morbilivirus e tem distribuição mundial, sendo o cão o principal reservatório para o vírus. A transmissão ocorre através de aerossóis sendo que este pode ser excretado no fim da fase aguda. Trata-se de uma doença sem predileção por raça, idade ou sexo, no entanto a literatura cita que filhotes são mais acometidos. No estudo realizado foram analisadas amostras de soro de cães domiciliados, nos bairros do município de Garanhuns sendo os bairros escolhidos a Boa Vista, Cohab 1, Cohab 2, Magano e Centro, durante o período de agosto a dezembro de 2012. Foram coletadas amostras de cães com idade superior a três meses, não vacinados contra a cinomose. Para elaboração dos mapas de distribuição geográfica dos animais foram coletadas coordenadas em cada casa visita para a coleta. Das amostras analisadas, 90,38% foram positivas, sendo que 28,72% apresentaram concentração alta de anticorpos, 47,88% concentração média e 23,40% concentração baixa. Ao analisar a distribuição por bairros observou-se uma maior prevalência da infecção nos bairros Cohab 2 com 100,00% e Cohab 1 com 96,00%; Boa Vista com 93,10%; Magano com 78,26%; Centro com 50,00%. Neste estudo não foi identificada nenhuma variável associada à infecção referente ao sexo, pois foram acometidos tanto machos quanto fêmeas e 100,0% dos animais, incluindo positivos e negativos, não eram castrados. Foi evidenciado que 75,0% dos animais nunca tinham sido levados ao veterinário, e destes, 94,8% foram positivos, fato este que pode estar relacionado à maior soropositividade nestes animais. Os resultados obtidos nesse estudo mostram que o vírus da cinomose canina encontra-se disseminado na população canina de Garanhuns, Pernambuco, destaca-se a importância de estudos epidemiológicos para a caracterização da real situação da infecção por este vírus nas populações caninas, com o intuito de reduzir os prejuízos à saúde animal provocados pelo agente.(AU)