Effects of time-dependent degradation and freezing on biomechanical properties of healthy bovine jejunum / Efeitos da degradação dependente do tempo e do congelamento sobre as propriedades biomecânicas do jejuno bovino saudável

Degradation of bovine small intestine and respective effects on biomechanics have not been described to date. Biomechanical testing of intestinal tissues is often carried out within a few hours of donor death and tissue deterioration is not accounted for. Freezing is efficient for the preservation of several tissues; however, it may cause cellular damage. This study investigated the morphologic and biomechanical changes of bovine jejunum at different postmortem moments. Effects of freezing and thawing on morphology and biomechanical behavior were also examined. Macroscopic changes were first noted within eight hours of death. At this time, histologic changes also started to set in, and biomechanical tests revealed lower bursting pressure (203.10±46.14mmHg). At 12 hours, tissue rearrangement was noted, and bursting pressure increased (238.43±31.04mmHg). A second drop in pressure was detected at 18 hours (235.20±38.21mmHg), followed by a progressive drop until the end of the experimental period. Histologic changes revealed progressive deterioration. Mechanical resistance did not differ between thawed and fresh specimens. It was concluded that bovine jejunal specimens retain biomechanical resistance up to 6 hours after death. Freezing and thawing did not affect the mechanical resistance of the intestinal wall in this experimental model.

A degradação do intestino delgado de bovinos e seu efeito biomecânico não são descritos na literatura. Trabalhos que envolvem a biomecânica intestinal realizam os ensaios em poucas horas após o óbito dos doadores, sem avaliação de seu estado de deterioração. O congelamento é eficiente na conservação de vários tecidos, porém pode provocar danos em nível celular. Este estudo teve por objetivo avaliar a degradação morfológica e biomecânica do jejuno de bovinos em diferentes tempos post mortem. O efeito do congelamento e do descongelamento sobre essas características também foi avaliado. As primeiras alterações macroscópicas foram observadas oito horas após o óbito. No mesmo momento, se iniciaram as alterações histológicas e a menor pressão suportada ao teste biomecânico (203,10±46,14mmHg). A partir de 12 horas, o tecido sofreu um rearranjo, suportando maior pressão (238,43±31,04mmHg). Uma segunda queda foi detectada após 18 horas (235,20±38,21mmHg), seguida de redução progressiva até o término do experimento. As lesões histológicas foram progressivas e graduais. As amostras testadas após descongelamento não apresentaram diferença estatística quanto à resistência mecânica em comparação com os espécimes frescos. Concluiu-se que as amostras mantêm sua resistência biomecânica até 6 horas após o óbito. Também se mostrou que o congelamento e o descongelamento, nas condições testadas, não alteraram a resistência mecânica da parede intestinal.

Evaluation of equine (Equus cabbalus) corneal endothelium stored in EUSOL-C® preservation medium / Avaliação do endotélio da córnea de equinos (Equus cabbalus) acondicionado em meio de preservação de córnea Eusol-C®

The objective of this study was evaluate the maintenance of the corneal endothelium of horses in cold EUSOL-C® preservation medium over different periods (seven and 14 days) using scanning electron microscopy. A total of 20 pairs of eyes from horses were analysed. The corneas were divided into four groups of 10 corneas each (G1, G2, G3 and G4): G1 - the samples were kept in the preservation medium for seven days; G3 - the samples were kept in the preservation medium for for 14 days; G2 and G4 were formed by the control corneal buttons of G1 and G3, respectively. The average cell loss observed in G1 was 7.62%, in G2 it was 7.04%, in G3 9.12% and in G4 7.16%. No statistically significant differences were observed between the four groups. It was concluded that the Eusol-C® hypothermic preservation medium provided satisfactory preservation of the corneal endothelium in equine species for up to 14 days.

Objetivou-se avaliar a manutenção do endotélio da córnea de equinos em meio de preservação a frio EUSOL-C® em diferentes períodos de acondicionamento (sete e 14 dias) utilizando microscopia eletrônica de varredura. Foram avaliados 40 bulbos oculares de 20 equinos. Os bulbos oculares foram divididos em quatro grupos (G1, G2, G3 e G4), nos quais: G1 foi composto por 10 botões corneais acondicionados em meio de preservação para córnea Eusol-C® durante sete dias; o G3 foi formado por 10 botões corneais acondicionados em meio de preservação para córnea Eusol-C® durante 14 dias. O G2 e G4 foram formados pelas córneas controle armazenadas imediatamente em glutaraldeído. A média da perda celular observada no G1 foi de 7,62%, no G2 foi de 7,04 %, no G3 foi de 9,12% e o no G4 foi de 7,16%. Não foram observadas diferenças estatisticamente significativas entre os quatro grupos. Foi possível concluir que o meio de preservação hipotérmico Eusol-C® proporcionou de forma satisfatória a preservação do endotélio da córnea na espécie equina durante o período de até 14 dias.

Evaluation of equine (Equus cabbalus) corneal endothelium stored in EUSOL-C® preservation medium / Avaliação do endotélio da córnea de equinos (Equus cabbalus) acondicionado em meio de preservação de córnea Eusol-C®

The objective of this study was evaluate the maintenance of the corneal endothelium of horses in cold EUSOL-C® preservation medium over different periods (seven and 14 days) using scanning electron microscopy. A total of 20 pairs of eyes from horses were analysed. The corneas were divided into four groups of 10 corneas each (G1, G2, G3 and G4): G1 - the samples were kept in the preservation medium for seven days; G3 - the samples were kept in the preservation medium for for 14 days; G2 and G4 were formed by the control corneal buttons of G1 and G3, respectively. The average cell loss observed in G1 was 7.62%, in G2 it was 7.04%, in G3 9.12% and in G4 7.16%. No statistically significant differences were observed between the four groups. It was concluded that the Eusol-C® hypothermic preservation medium provided satisfactory preservation of the corneal endothelium in equine species for up to 14 days.(AU)

Objetivou-se avaliar a manutenção do endotélio da córnea de equinos em meio de preservação a frio EUSOL-C® em diferentes períodos de acondicionamento (sete e 14 dias) utilizando microscopia eletrônica de varredura. Foram avaliados 40 bulbos oculares de 20 equinos. Os bulbos oculares foram divididos em quatro grupos (G1, G2, G3 e G4), nos quais: G1 foi composto por 10 botões corneais acondicionados em meio de preservação para córnea Eusol-C® durante sete dias; o G3 foi formado por 10 botões corneais acondicionados em meio de preservação para córnea Eusol-C® durante 14 dias. O G2 e G4 foram formados pelas córneas controle armazenadas imediatamente em glutaraldeído. A média da perda celular observada no G1 foi de 7,62%, no G2 foi de 7,04 %, no G3 foi de 9,12% e o no G4 foi de 7,16%. Não foram observadas diferenças estatisticamente significativas entre os quatro grupos. Foi possível concluir que o meio de preservação hipotérmico Eusol-C® proporcionou de forma satisfatória a preservação do endotélio da córnea na espécie equina durante o período de até 14 dias.(AU)

Viability of cryopreserved bull spermatozoa collected from the epididymis stored for 12 hours at 4ºC / Viabilidade dos espermatozoides criopreservados de touros, colhidos do epidídimo após 12 horas a 4ºC

The purpose of this study was to evaluate effect of epididymis cooling on bovine frozen sperm viability. Ten pairs of testes/epididymes were collected of a commercial slaughterhouse; one epididymis from each pair was refrigerated at 4ºC for 12 hours and the other immediately proceeded. Epididymis was isolated, sperm cells collected after epididymal slicing and then analyzed regarding to motility, vigor, total number of sperm, morphology and membrane integrity. Sperm cells were frozen in Botubov® extender (Botupharma Biotecnologia Animal, Botucatu, SP, Brazil) and thawed for semen analysis. The same procedure was performed with cooled testis/epididymis. Results demonstrated higher viability (p < = 0,05) of fresh cells to the total number of spermatozoa (1,9 ± 1,2 versus 0,9 ± 0,9 x 109 spermatozoa), sperm motility (74,0 ± 15,1 versus 20,5 ± 13,8%) and vigor (3,7 ± 0,5 versus 1,7 ± 0,8), and for pos-thawing motility (23,5 ± 16,7 versus 8,0 ± 7,9%) and vigor (2,0 ± 0,8 versus 0,8 ± 0,8) when spermatozoa were collected immediately post-slaughter than maintained cooling 12 hours, respectively. We conclude that 12 hours of epididymis cooling after slaughter decreases sperm cells quality.(AU)

O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito da refrigeração do epidídimo, sobre a viabilidade dos espermatozoides congelados. Foram colhidos dez pares de testículos/epidídimos de um abatedouro comercial. Um dos epidídimos foi refrigerado a 4C durante 12 horas e o contralateral foi imediatamente processado. O epidídimo foi isolado, as células espermáticas extraídas e analisadas quanto à motilidade, vigor, concentração, morfologia e integridade da membrana. Após a análise, os espermatozoides foram congelados em diluente Botubov® (Botupharma Biotecnologia Animal, Botucatu, SP, Brasil) e descongelados para análise. O mesmo procedimento foi realizado com o testículo/epidídimo refrigerado. Os resultados evidenciaram maior viabilidade (p < = 0,05) das células pré-congelação para os parâmetros, número total de espermatozides (1,9 ± 1,2 versus 0,9 ± 0,9 x 109 espermatozoides), motilidade (74,0 ± 15,1 versus 20,5 ± 13,8%) e vigor (3,7 ± 0,5 versus 1,7 ± 0,8), e pós-congelação, motilidade (23,5 ± 16,7 versus 8,0 ± 7,9%) e vigor (2,0 ± 0,8 versus 0,8 ± 0,8) quando os espermatozoides foram colhidos a partir de epidídimos processados imediatamente após o abate quando comparados aos mantidos 12 horas sob refrigeração, respectivamente. Conclui-se que 12 horas de refrigeração do epidídimo após o abate, prejudica a qualidade das células espermáticas, impossibilitando a congelação do sêmen.(AU)

Propriedades tensiométricas do peritônio da paca (Cuniculus paca) a fresco e conservado em glicerina 98 por cento / Tensiometer peritoneum properties of the paca (Cuniculus paca) fresh and preserved in glycerin 98 por cento

In constant searching for alternative biological material to perform implants and new options of experimental animal models, the objective of this investigation was to describe the mechanical properties of the peritoneum paca (Cuniculus paca Linnaeus, 1766) fresh and preserved in 98% glycerin. Samples of fresh and preserved in glycerin for periods of 30, 60 and 90 days were subjected to mechanical tests. Four adult animals, male or female, with mean body weight of eight kilograms, were used for collecting samples of the peritoneum. All tissues preserved in glycerin 98% showed a decrease in stiffness and increase in ductility and toughness. Considering the maximum force applied to the peritoneum, significant increase was observed in values (p<0.01) of samples stored for 60 and 90 days when compared to fresh material. In relation to the stretch variable, an increase was observed in all storage time of glycerin samples, verifying significant difference (p<0,01) when compared with the fresh samples. The variable area also showed significance (p <0.01) between the values of the fresh samples (5.40 mm²) and preserved in the glycerin by periods of 30 days (4.50 mm²), 60 days (9.00 mm²) and 90 days (7.20 mm²), thus indicating that the area of this membrane increased by 0.033 mm² per day. Generally, it was concluded that the 98% glycerin is a substance effective for the preservation of the peritoneum of the agouti paca, therefore improves its mechanical properties allowing the support membranes greater deformation forces. Thus, the results obtained in mechanical tests of the peritoneum of paca suggest its use as an alternative biological material.(AU)

Na busca constante, tanto de material biológico alternativo para a realização de implantes, quanto de novas opções de modelos de experimentação animal, o objetivo desta investigação foi descrever o comportamento mecânico do peritônio da paca (Cuniculus paca Linnaeus, 1766) a fresco e conservado em glicerina a 98%. Amostras frescas e conservadas em glicerina por períodos de 30, 60 e 90 dias foram submetidas a testes mecânicos de tração. Quatro animais adultos, três machos e uma fêmeas, com peso corporal médio de oito quilogramas, foram utilizados para colheita das amostras de peritônio. Todos os tecidos conservados em glicerina a 98% apresentaram diminuição na rigidez e aumento na ductibilidade e tenacidade. Considerando-se a força máxima aplicada ao peritônio, evidenciou-se aumento significativo nos valores (p<0,01) das amostras conservadas por 60 e 90 dias, quando comparado ao material a fresco. Com relação a variável alongamento, notou-se aumento nos valores relativos aos materiais em glicerina em todos os tempos de conservação, verificando-se diferença significativa (p<0,01) entre os valores das amostras a fresco. A variável área também se apresentou significativa (p<0,01) entre os valores das amostras a fresco (5,40 mm²) e os preservados em glicerina pelos períodos de 30 dias (4,50 mm²), 60 dias (9,00 mm²) e 90 dias (7,20 mm²), indicando assim, que a área desta membrana aumentou em 0,033 mm² por dia. Mediante os resultados observados, concluiu-se que a glicerina 98% é uma substância eficiente para a conservação do peritônio da paca, pois melhorou suas propriedades mecânicas permitindo que as membranas suportem maiores forças de deformação. Assim, os resultados obtidos nos ensaios mecânicos do peritônio da paca sugerem sua utilização como mais uma opção de material biológico.(AU)

OSTEOSSARCOMA EM CÃES: CARACTERIZAÇÃO CLÍNICO-PATOLÓGICA E AVALIAÇÃO DE FATORES PROGNÓSTICOS HISTOPATOLÓGICOS E DE IMUNO-HISTOQUÍMICA

Neoplasias em animais domésticos são afecções crescentes em medicina veterinária, especialmente devido ao aumento da longevidade destes animais e aos melhores métodos de diagnóstico. Em cães, os tumores ósseos são relativamente comuns e o osteossarcoma, representa 85% das neoplasias ósseas diagnosticadas nesta espécie. Este trabalho teve como objetivo descrever os aspectos epidemiológicos, clínicos e patológicos do osteossarcoma canino de 2006 a 2018 e avaliar fatores prognósticos associados ao neoplasma. Os materiais e métodos aplicados e resultados obtidos foram apresentados em dois artigos científicos. O primeiro artigo descreve os aspectos epidemiológicos e patológicos de 36 casos de osteossarcoma extraesquelético em cães. No período analisado, 2006 a 2016, o osteossarcoma acometeu os tecidos moles em 16,7% dos casos. As fêmeas, com média de 10,4 anos de idade e peso médio de 19,5 kg foram mais acometidas. Não houve predisposição racial. Os principais locais foram: glândula mamária (80,6%), tecido subcutâneo (5,6%) e fígado (5,6%). Na histologia, os osteossarcomas osteoblásticos (61,1%) de grau II e III foram os mais frequentes. Metástases nodais ocorreram em 21,4% dos casos na mama. Metástases distantes ocorreram nos pulmões (57,1%), fígado (14,3%), baço (14,3%) e em múltiplos sítios (14,3%). Metástases pulmonares foram mais frequentes em cadelas com osteossarcoma de glândula mamária. O segundo artigo descreve os aspectos clínico-patológicos de 153 casos de ostessarcoma apendicular em cães, dos quais os dados de sobrevida de 22 caninos submetidos a intervenções cirúrgicas e à quimioterapia foram confrontados estatisticamente com os dados clínicos, histopatológicos e imunohistoquímicos para correlação prognóstica. No período analisado, 2008 a 2018, o osteossarcoma acometeu o tecido ósseo em 83% dos casos e deste, 82% envolviam o esqueleto apendicular. A média de idade foi de nove anos e o peso médio de 33,4 kg. Não houve predileção sexual. A raça pura mais acometida foi o Rottweiler (42%). Os principais locais acometidos foram: úmero proximal (95%), fêmur distal (70%), rádio distal (96%) e tíbia proximal (56%). Na histologia, o subtipo osteoblástico foi o mais frequente (57%). Metástases nodais ocorreram em 14% dos casos. Metástases distantes ocorreram em 75% dos casos, nos quais o pulmão (43%) foi o principal órgão acometido. Quanto à análise de fatores prognósticos, o peso, idade, sexo, membro e osso afetado, classificação histológica, contagem mitótica e grau histológico não influenciaram na sobrevida (p > 0,05). Neoplasmas na extremidade proximal dos membros tiverem uma tendência a um pior prognóstico (p=0,06). Para estes casos, a taxa de sobrevida em um ano foi de 14,3%, enquanto que na extremidade distal a taxa foi de 46,7%. Não houve diferença significativa em relação à sobrevida quando utilizadas as técnicas de amputação ou preservação do membro, desde que associadas à quimioterapia (p=0,20). A sobrevida para estes casos variou de 73 a 1185 dias e a média foi de 394 dias. Todos os casos apresentaram marcação citoplasmática para osteopontina, porém a intensidade e o percentual de células neoplásicas marcadas não influenciaram na sobrevida (p > 0,05). Em 80% dos casos com metástases deste estudo houve marcação acentuada para osteopontina.

Neoplasms in domestic animals are increasing in veterinary medicine, especially due to the increased longevity of these animals and the best diagnostic methods. In dogs, bone tumors are relatively common and osteosarcoma accounts for 85% of the bone neoplasms diagnosed in this species. The objective of this study was to describe the epidemiological, clinical and pathological aspects of canine osteosarcoma from 2006 to 2018 and to evaluate prognostic factors associated with neoplasm. The materials and methods applied and results obtained were presented in two scientific papers. The first article describes the epidemiological and pathological aspects of 36 cases of extra-skeletal osteosarcoma in dogs. In the analyzed period, from 2006 to 2016, osteosarcoma affected the soft tissues in 16.7% of cases. Females, with a mean age of 10.4 years, mean weight of 19.5 kg were the most affected. There was no racial predisposition. The main sites were: mammary gland (80.6%), followed by subcutaneous tissue (5.6%) and liver (5.6%). In histology, osteoblastic osteosarcomas (61.1%) of grade II and III were the most frequent. Nodal metastases were present in 21.4% of the cases that occurred in the breast. Distant metastases occurred in the lungs (57.1%), liver (14.3%), spleen (14.3%) and multiple sites (14.3%). Pulmonary metastases were more frequent in bitches with osteosarcoma of the mammary gland. The second article describes the clinical-pathological aspects of 153 cases of appendicular ostessarcoma in dogs, of which the survival data of 22 canine submitted to surgery and chemotherapy were statistically compared with the clinical, histopathological and immunohistochemical data for prognostic correlation. In the analyzed period, from 2008 to 2018, the osteosarcoma affected the bone tissue in 83% of the cases and of this, 82% involved the appendicular skeleton. The mean age was 9 years and the mean weight was 33.4 kg. There was no sexual predilection. The pure breed most affected was the Rottweiler (42%). The main sites were: proximal humerus (95%), distal femur (70%), distal radius (96%) and proximal tibia (56%). In histology, osteoblastic osteosarcomas were more frequent (57%). Nodal metastases occurred in 14% of cases. Distant metastases occurred in 75% of cases, in which the lung (43%) was the main organ affected. Regarding the analysis of prognostic factors, weight, age, sex, affected limb and bone, histological classification, mitotic count and histological grade did not influence survival (p> 0.05). Neoplasms located at the proximal extremities of the limbs tend to have a poor prognosis (p = 0.06). For these cases, the survival rate at one year was 14.3%, while at the distal end the rate was 46.7%. There was no significant difference in survival when using amputation or limb preservation techniques, since they were associated with chemotherapy (p = 0.20). The survival of these dogs ranged from 73 to 1185 days, with a mean of 394 days. All cases presented cytoplasmic marking for osteopontin, but the intensity and percentage of marked neoplastic cell did not influence the survival (p> 0.05). In 80% of the cases with metastases from this study there was marked marking for osteopontin.

Effects of ischemic preconditioning associated to different preservation solutions in protecting the intestinal graft / Efeitos do precondicionamento isquêmico associado a diferentes soluções de preservação na proteção do enxerto intestinal

PURPOSE: To evaluate the effects of ischemic preconditioning (IPC) associate with different preservation solutions, in the protecting of gut. METHODS: Four groups of 14 rats underwent laparotomy and collecting 20 cm of ileum, for preservation, at 4ºC, in Belzer (Belz), Ringer (RL), Celsior (Cs) and Custodiol (Cust) solutions, for 24 hours. Prior to collection, half of the animals in each group were subjected to IPC. During preservation, in the periods of zero, 12, 18 and 24 hours, were conducted evaluating the degree of mucosal injury and dosage of malondialdehyde acid (MDA). RESULTS: In all periods the RL group, with and without IPC, presented MDA values higher than the Belz and Cs. The degree of mucosal injury in the non-ipc RLgroup with 12h preservation was higher than the others; with 18 and 24h, the RL and Cust had higher degrees of damage than Cs and Belz. With IPC, in all periods, the group Cs and Belz had lower degrees of injury. CONCLUSION: The Celsior and Belzer solutions had better protective effects on the gut and these effects were enhanced by IPC.(AU)

OBJETIVO: Avaliar os efeitos do precondicionamento isquêmico (PCI) associado a diferentes soluções de preservação, na proteção do intestino delgado. MÉTODOS: Quatro grupos de 14 ratos Wistar, foram submetidos à laparotomia e coleta de 20 cm de íleo, para preservação, a 4ºC, nas soluções de Belzer (Belz), Ringer (RL), Celsior (Cs) e Custodiol (Cust) por 24 horas. Previamente à coleta, em metade dos animais de cada grupo, o intestino foi submetido ao PCI. Durante a preservação, nos períodos de Zero, 12, 18 e 24 horas, foram realizados avaliação do grau de lesão da mucosa e dosagem do ácido malondialdeído (MDA). RESULTADOS: Em todos os períodos o grupo RL, sem e com pci, apresentou valores maiores de MDA do que o Belz e Cs. O grau de lesão da mucosa nos grupos sem pci com preservação de 12h, no grupo RL, foi maior que nos demais; com 18h e 24h o grupo RL e Cust apresentaram maiores graus de lesão do que Cs e Belz. Com o pci, em todos os períodos, os grupos Belz e Cs apresentaram menores graus de lesão CONCLUSÃO: As Soluções Celsior e Belzer tiveram melhores efeitos na proteção do intestino e estes efeitos foram incrementados pelo precondicionamento isquêmico.(AU)

UTILIZAÇÃO DE MATRIZ CORNEAL SUÍNA DESCELULARIZADA EM CERATOPLASTIAS

A córnea é considerada a porção refratária mais importante do olho devido sua curvatura e transparência. Entre as enfermidades que acometem essa estrutura se destacam as ulcerações corneais, que quando não são tratadas adequadamente podem levar a perda da visão. O tratamento das ulcerações corneais complicadas consiste na realização de enxertos e transplantes, procedimentos que, por apresentarem grandes demandas devido a seus resultados satisfatórios, encontram dificuldades na obtenção de doadores. A bioengenharia tem apresentado progressos significativos envolvendo técnicas que visam recosntituir parte ou a totalidade da espessura danificada da córnea com a utilização de biomateriais, como por exemplo, o uso de membrana amniótica descelularizada, conjuntiva descelularizada de suíno, mucosa oral autóloga e matriz corneal descelularizada suína. Estudos com córneas descelularizadas apresentaram resultados satisfatórios, efeitos estes que criaram novas possibilidades terapêuticas para o tratamento de lesões corneais que necessitem de enxertos. A descelularização de um tecido ou órgão consiste na remoção de células e de seus componentes sem alterar a matriz extracelular minimizando qualquer efeito adverso na composição e integridade da estrura remanescente, entre os protocolos utilizados nesse processo têm-se a utilização de métodos químicos, biológicos, físicos ou uma associação destes. Para verificar a eficiência da descelularização são realizadas várias análises, entre elas a histológica, a histoquímica, a extração e quantificação do material genético. Avaliações microbiológicas também são realizadas para verificar a eficiência da esterilização durante o procedimento de preparação das matrizes corneais descelularizadas, assim como seu armazenamento em meio conservante por um determinado período. As matrizes podem ser armazenadas utilizando vários meios conservantes como o Eusol®, Optisol®, RPMI-1640®, Glicerina, entre outros. Este estudo teve como objetivo avaliar a eficiência da descelularização de córneas suínas utilizando solução de hidróxido de sódio (0,5 M) e sua utilização em uma ceratoplastia lamelar em cão. As córneas foram coletadas em abatedouros da região metropolitana do Recife e transportadas para o Laboratório de Oftalmologia Experimental da Universidade Federal Rural de Pernambuco, onde foram esterilizadas em iodopovidona 10% (vic pharma®), descelularizadas utilizando solução de hidróxido de sódio (0,5 M) e conservadas em meio RPMI-1640® e glicerol (1:1) sob temperatura de 20 C negativos. Foram realizados estudos histológicos e histoquímicos para verificar a presença de células residuais e organização das fibras colágenas no estroma, a extração e quantificão do DNA das córneas controle e descelularizadas, e análise microbiológica do meio de conservação. O paciente que recebeu o enxerto lamelar utilizando a matriz corneal suína descelularizada foi avaliado oftalmologicamente em diferentes periodos pós operatórios. Como resultado a solução de hidróxido de sódio (0,5 M) foi eficiente na descelularização da córnea suína, a análise microbiológica teve resultado negativo para bactérias e fungos, as córneas apresentaram conservação adequada em meio RPMI-1640® e glicerol (1:1), e a ceratoplastia lamelar em cão utilizando a matriz córneal suína descelularizada apresentou resultados satisfatórios.

The cornea is considered the most important refractory portion of the eye due to its curvature and transparency. Among the diseases that affect this structure, corneal ulcerations is the most common and when untreated can lead to vision loss. Complicated corneal ulcers require the use of grafts or even corneal transplants. Corneal transplants may be challenging due to high demand and difficulty in obtaining donors. Bioengineering techniques to reconstruct partial or total corneal lesions with the use of biomaterials have had significant progress. These biomaterials include decellularized amniotic membrane, decellularized pig conjunctiva, autologous oral mucosal epithelium and decellularized porcine corneas. Studies with decellularized corneas showed satisfactory results, shedding light into new therapeutic possibilities for the treatment of corneal lesions that require grafts. The decellularization of a tissue or organ consists in removing cells and their components without changing the extracellular matrix, preserving integrity of its structure and composition. The protocols used to obtain these extracellular matrixes include methods such as chemical, biological, physical or a combination of these. Decellularization efficiency is verified through many analyzes, including histological, histochemical and extraction and quantification of genetic material. Microbiological evaluation is also conducted to check if sterilization procedures during corneal preparation were efficient and if storage medium did not suffer contamination during a certain period of time. Many storage mediums for cellular matrixes are available such as Eusol®, Optisol®, RPMI 1640®, glycerine, among others. This study aimed to evaluate the efficiency of decellularization of pig corneas using sodium hydroxide solution (0.5 M) and the use of extracellular matrix for the treatment of corneal ulcer in a dog that underwent lamellar keratoplasty. Corneas were obtained from a local butcher from the metropolitan region of Recife and transported to the Experimental Ophthalmology Laboratory at the Federal Rural University of Pernambuco, where they were sterilized in 10% povidone iodine (vic pharma®), decellularized using sodium hydroxide solution (0.5 M) and maintained in RPMI 1640® and glycerol (1:1) at - 20 °C. Histological and histochemical studies were performed to verify cellular and collagen fiber organization in corneal stroma, DNA extraction was performed to verify the presence of cell residues from decellularized corneas and microbiological analysis of the conservation medium. Patient that received lamellar graft using decellularized corneal matrix had ophthalmic evaluation in different postoperative periods. Results demonstrated that Sodium hydroxide solution (0.5 M) was effective in decellularizing porcine cornea, microbiological analysis was negative for bacteria and fungi, corneas presented adequate preservation in RPMI 1640® and glycerol (1:1) medium. Lamellar keratoplasty in a dog using corneal decellularized matrix demonstrated satisfactory results.

Conservação de folículos pré-antrais bovinos em solução salina 0.9 por cento ou TCM 199 / Preservation of bovine preantral follicles in 0.9 percent saline solution or TCM 199

Investigou-se a eficiência da solução salina 0,9 por cento (SS) e TCM 199 na conservação de folículos pré-antrais (FOPA) bovinos in situ em diferentes temperaturas e tempos de incubação. Cada par ovariano foi dividido em 25 fragmentos. Um fragmento foi escolhido aleatoriamente e fixado imediatamente após a coleta (controle). Os demais foram distribuídos em tubos contendo SS ou TCM 199 a 4, 20 ou 39ºC por 2, 4, 12 ou 24h. A análise histológica mostrou que a conservação a 4ºC em ambas as soluções manteve a porcentagem de FOPA normais similar ao controle. A conservação em SS a 20ºC por 12 ou 24h, TCM 199 a 20ºC por 24h e em ambas as soluções a 39ºC a partir de 2h aumentou (P<0,05) a porcentagem de FOPA degenerados comparada à porcentagem de folículos-controle. Em ambas as soluções, independente do tempo de incubação, a porcentagem de folículos normais, após conservação a 39ºC, foi (P<0,05) menor que a obtida com 4 e 20ºC. FOPA bovinos podem ser conservados eficientemente a 4ºC por até 24h em ambas as soluções, e a 20ºC por 4 e 12h em SS e TCM 199, respectivamente.(AU)

The efficiency of 0.9 percent saline solution (SS) and TCM 199 on the preservation of bovine preantral follicles (PF) in situ at different temperatures and incubation times was investigated. Each ovarian pair was divided into 25 fragments. One fragment was taken randomly and immediately fixed (control). The other fragments were distributed in tubes containing SS or TCM 199 at 4, 20 or 39ºC for 2, 4, 12 or 24h. The histological analysis showed that the storage at 4ºC in both solutions kept the percentage of normal follicles similar to control values. Preservation in SS at 20ºC for 12 or 24h, TCM 199 at 20ºC for 24h and in both solutions at 39ºC from 2 h onward (P<0.05) increased the percentage of degenerated follicles when compared with control. In both solutions, independent of incubation time, the percentage of normal follicles observed at 39ºC was (P<0.05) lower them those observed at 4 and 20ºC. Bovine PF can be preserved efficiently at 4ºC for up to 24h in both solutions, at 20ºC for 4 and 12h in SS and TCM 199, respectively.(AU)