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Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-204609

Resumo

A córnea é considerada a porção refratária mais importante do olho devido sua curvatura e transparência. Entre as enfermidades que acometem essa estrutura se destacam as ulcerações corneais, que quando não são tratadas adequadamente podem levar a perda da visão. O tratamento das ulcerações corneais complicadas consiste na realização de enxertos e transplantes, procedimentos que, por apresentarem grandes demandas devido a seus resultados satisfatórios, encontram dificuldades na obtenção de doadores. A bioengenharia tem apresentado progressos significativos envolvendo técnicas que visam recosntituir parte ou a totalidade da espessura danificada da córnea com a utilização de biomateriais, como por exemplo, o uso de membrana amniótica descelularizada, conjuntiva descelularizada de suíno, mucosa oral autóloga e matriz corneal descelularizada suína. Estudos com córneas descelularizadas apresentaram resultados satisfatórios, efeitos estes que criaram novas possibilidades terapêuticas para o tratamento de lesões corneais que necessitem de enxertos. A descelularização de um tecido ou órgão consiste na remoção de células e de seus componentes sem alterar a matriz extracelular minimizando qualquer efeito adverso na composição e integridade da estrura remanescente, entre os protocolos utilizados nesse processo têm-se a utilização de métodos químicos, biológicos, físicos ou uma associação destes. Para verificar a eficiência da descelularização são realizadas várias análises, entre elas a histológica, a histoquímica, a extração e quantificação do material genético. Avaliações microbiológicas também são realizadas para verificar a eficiência da esterilização durante o procedimento de preparação das matrizes corneais descelularizadas, assim como seu armazenamento em meio conservante por um determinado período. As matrizes podem ser armazenadas utilizando vários meios conservantes como o Eusol®, Optisol®, RPMI-1640®, Glicerina, entre outros. Este estudo teve como objetivo avaliar a eficiência da descelularização de córneas suínas utilizando solução de hidróxido de sódio (0,5 M) e sua utilização em uma ceratoplastia lamelar em cão. As córneas foram coletadas em abatedouros da região metropolitana do Recife e transportadas para o Laboratório de Oftalmologia Experimental da Universidade Federal Rural de Pernambuco, onde foram esterilizadas em iodopovidona 10% (vic pharma®), descelularizadas utilizando solução de hidróxido de sódio (0,5 M) e conservadas em meio RPMI-1640® e glicerol (1:1) sob temperatura de 20 C negativos. Foram realizados estudos histológicos e histoquímicos para verificar a presença de células residuais e organização das fibras colágenas no estroma, a extração e quantificão do DNA das córneas controle e descelularizadas, e análise microbiológica do meio de conservação. O paciente que recebeu o enxerto lamelar utilizando a matriz corneal suína descelularizada foi avaliado oftalmologicamente em diferentes periodos pós operatórios. Como resultado a solução de hidróxido de sódio (0,5 M) foi eficiente na descelularização da córnea suína, a análise microbiológica teve resultado negativo para bactérias e fungos, as córneas apresentaram conservação adequada em meio RPMI-1640® e glicerol (1:1), e a ceratoplastia lamelar em cão utilizando a matriz córneal suína descelularizada apresentou resultados satisfatórios.

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The cornea is considered the most important refractory portion of the eye due to its curvature and transparency. Among the diseases that affect this structure, corneal ulcerations is the most common and when untreated can lead to vision loss. Complicated corneal ulcers require the use of grafts or even corneal transplants. Corneal transplants may be challenging due to high demand and difficulty in obtaining donors. Bioengineering techniques to reconstruct partial or total corneal lesions with the use of biomaterials have had significant progress. These biomaterials include decellularized amniotic membrane, decellularized pig conjunctiva, autologous oral mucosal epithelium and decellularized porcine corneas. Studies with decellularized corneas showed satisfactory results, shedding light into new therapeutic possibilities for the treatment of corneal lesions that require grafts. The decellularization of a tissue or organ consists in removing cells and their components without changing the extracellular matrix, preserving integrity of its structure and composition. The protocols used to obtain these extracellular matrixes include methods such as chemical, biological, physical or a combination of these. Decellularization efficiency is verified through many analyzes, including histological, histochemical and extraction and quantification of genetic material. Microbiological evaluation is also conducted to check if sterilization procedures during corneal preparation were efficient and if storage medium did not suffer contamination during a certain period of time. Many storage mediums for cellular matrixes are available such as Eusol®, Optisol®, RPMI 1640®, glycerine, among others. This study aimed to evaluate the efficiency of decellularization of pig corneas using sodium hydroxide solution (0.5 M) and the use of extracellular matrix for the treatment of corneal ulcer in a dog that underwent lamellar keratoplasty. Corneas were obtained from a local butcher from the metropolitan region of Recife and transported to the Experimental Ophthalmology Laboratory at the Federal Rural University of Pernambuco, where they were sterilized in 10% povidone iodine (vic pharma®), decellularized using sodium hydroxide solution (0.5 M) and maintained in RPMI 1640® and glycerol (1:1) at - 20 °C. Histological and histochemical studies were performed to verify cellular and collagen fiber organization in corneal stroma, DNA extraction was performed to verify the presence of cell residues from decellularized corneas and microbiological analysis of the conservation medium. Patient that received lamellar graft using decellularized corneal matrix had ophthalmic evaluation in different postoperative periods. Results demonstrated that Sodium hydroxide solution (0.5 M) was effective in decellularizing porcine cornea, microbiological analysis was negative for bacteria and fungi, corneas presented adequate preservation in RPMI 1640® and glycerol (1:1) medium. Lamellar keratoplasty in a dog using corneal decellularized matrix demonstrated satisfactory results.

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