Retrospective study of Bovine herpesvirus 5 meningoencephalitis in cattle from São Paulo State, Brazil / Estudo retrospectivo de meningoencefalite por herpesvírus bovino-5 em bovinos do estado de São Paulo, Brasil

Meningoencephalitis caused by Bovine herpesvirus 5 (BoHV-5) is an important neurological disease that affects Brazilian cattle herds. The present study investigated the presence of BoHV-5 DNA in cattle diagnosed with meningoencephalitis at Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, UNESP - Univ Estadual Paulista from 1980 to 2009. The records obtained from the Large Animal Internal Medicine Service and the Animal Pathology Service were reviewed to identify clinical and epidemiological data from cattle with neurological signs. Excluding rabies cases, we found 115 cases of cattle with neurological signs that had been necropsied. Non-suppurative meningoencephalitis was diagnosed in 28 animals of the 115 initially selected based on histopathological examination of brain tissues. Of these 28 animals, 15 (54%) were positive for BoHV-5 DNA by polymerase chain reaction (PCR) of formalin-fixed paraffin-embedded (FFPE) brain samples. PCR target was 159-bp fragment from the BoHV-5 glycoprotein C gene. The oldest case identified in the present study was from 1988. PCR was a good tool for the diagnosis of BoHV-5 DNA extracted from FFPE tissues, allowing retrospective studies of samples stored for more than 20 years.(AU)

A meningoencefalite por herpesvírus bovino-5 (BoHV-5) é uma doença neurológica importante no rebanho bovino brasileiro. Este estudo tem por objetivo verificar a presença do DNA de BoHV-5 em bovinos diagnosticados com meningoencefalite na Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia da Universidade Estadual Paulista, entre os anos de 1980 e 2009. Foram revisados os arquivos do Serviço de Clínica de Grandes Animais e da Patologia Animal em busca dos dados clínicos e epidemiológicos de bovinos com sinais neurológicos. Excluídos os casos de raiva, foram encontrados 115 casos de bovinos com sinais neurológicos, que foram necropsiados. O exame histopatológico realizado nos tecidos encefálicos desses animais constatou lesões de meningoencefalite não supurativa em 28 animais. Destes, em 15 (54%) casos foi identificada a presença do DNA de BoHV-5 por meio de PCR realizada em amostras de tecido encefálico fixadas em formalina e incluídas em parafina (FFPE). O alvo da PCR foi um fragmento de 159 pb do gene da glicoproteína C do BoHV-5. O caso mais antigo identificado neste estudo foi de 1988. A PCR apresentou-se como boa ferramenta para o diagnóstico do DNA de BoHV-5 extraído de tecidos FFPE, possibilitando estudos retrospectivos e diagnóstico de amostras com mais de 20 anos de armazenamento.(AU)

Retrospective study of Bovine herpesvirus 5 meningoencephalitis in cattle from São Paulo State, Brazil / Estudo retrospectivo de meningoencefalite por herpesvírus bovino-5 em bovinos do estado de São Paulo, Brasil

Meningoencephalitis caused by Bovine herpesvirus 5 (BoHV-5) is an important neurological disease that affects Brazilian cattle herds. The present study investigated the presence of BoHV-5 DNA in cattle diagnosed with meningoencephalitis at Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, UNESP - Univ Estadual Paulista from 1980 to 2009. The records obtained from the Large Animal Internal Medicine Service and the Animal Pathology Service were reviewed to identify clinical and epidemiological data from cattle with neurological signs. Excluding rabies cases, we found 115 cases of cattle with neurological signs that had been necropsied. Non-suppurative meningoencephalitis was diagnosed in 28 animals of the 115 initially selected based on histopathological examination of brain tissues. Of these 28 animals, 15 (54%) were positive for BoHV-5 DNA by polymerase chain reaction (PCR) of formalin-fixed paraffin-embedded (FFPE) brain samples. PCR target was 159-bp fragment from the BoHV-5 glycoprotein C gene. The oldest case identified in the present study was from 1988. PCR was a good tool for the diagnosis of BoHV-5 DNA extracted from FFPE tissues, allowing retrospective studies of samples stored for more than 20 years.(AU)

A meningoencefalite por herpesvírus bovino-5 (BoHV-5) é uma doença neurológica importante no rebanho bovino brasileiro. Este estudo tem por objetivo verificar a presença do DNA de BoHV-5 em bovinos diagnosticados com meningoencefalite na Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia da Universidade Estadual Paulista, entre os anos de 1980 e 2009. Foram revisados os arquivos do Serviço de Clínica de Grandes Animais e da Patologia Animal em busca dos dados clínicos e epidemiológicos de bovinos com sinais neurológicos. Excluídos os casos de raiva, foram encontrados 115 casos de bovinos com sinais neurológicos, que foram necropsiados. O exame histopatológico realizado nos tecidos encefálicos desses animais constatou lesões de meningoencefalite não supurativa em 28 animais. Destes, em 15 (54%) casos foi identificada a presença do DNA de BoHV-5 por meio de PCR realizada em amostras de tecido encefálico fixadas em formalina e incluídas em parafina (FFPE). O alvo da PCR foi um fragmento de 159 pb do gene da glicoproteína C do BoHV-5. O caso mais antigo identificado neste estudo foi de 1988. A PCR apresentou-se como boa ferramenta para o diagnóstico do DNA de BoHV-5 extraído de tecidos FFPE, possibilitando estudos retrospectivos e diagnóstico de amostras com mais de 20 anos de armazenamento.(AU)

Padronização da técnica de imunocitoquímica no diagnóstico da leishmaniose visceral canina

As leishmanioses são doenças causadas por protozoários do gênero Leishmania, parasito que infecta e se multiplica em células do sistema monocítico fagocitário de diversas espécies animais. São doenças enquadradas como negligenciadas pela Organização Mundial de Saúde (OMS) e que afetam populações em diversos países. No Brasil já estão presentes em todas as regiões, causando prejuízos à saúde pública e onerações com tratamentos e prevenção. Antes associadas a áreas rurais, as leishmanioses hoje afetam também populações urbanas e os cães são considerados principais reservatórios da LV nesses ambientes. A transmissão do parasito se dá quando o inseto flebotomíneo ingere formas infectantes de leishmania ao realizar repasto sanguíneo em animais infectados, podendo transmitir esses parasitos em novo repasto. Para o diagnóstico da LV são utilizados o Teste Rápido Imunocromatográfico (TRI) para triagem e os testes sorológicos Enzyme Linked Immunosorbent Assay (ELISA) ou Ensaio Imunoenzimático (EIE) e a Reação de Imunofluorescência direta (RIFI), além da Reação em Cadeia de Polimerase (PCR) e o exame direto como confirmatórios. O exame direto, com a observação do parasito em amostras biológicas, é considerado teste padrão ouro, mas requer pessoal treinado para a identificação do protozoário na amostra. Métodos como a imunocitoquímica podem aumentar a acurácia dessa observação. O presente trabalho comparou 4 técnicas de preparação de amostras citológicas (cellblock, formol 10%, metanol e paraformaldeído/PBS) extraídas de medula óssea, pele e linfonodo, de 20 cães soropositivos para Leishmania sp., submetidas a protocolo de imunocitoquímica (ICQ). Com o protocolo de ICQ desenvolvido notou-se aumento de 15% de positivos em ICQ de medula óssea em relação ao exame citopatológico, de 30% na análise de linfonodos e de 5% para pele quando comparados aos exames citopatológicos, aumentando assim a eficiência do diagnóstico. As técnicas de fixação do material biológico apresentaram imunomarcação satisfatórias com melhores resultados obtidos pela técnica de cellblock de agarose seguida pela fixação em formol a 10% e emblocamento em parafina, fixação em álcool metanol e por último a técnica de fixação em paraformaldeído/PBS.

Leishmaniasis are diseases caused for protozoa of the genus Leishmania, a parasite that infects and multiplies in cells of the monocytic phagocytic system of several animal species. They are diseases framed as neglected by the World Health Organization (WHO) and affecting populations in several countries. In Brazil they are already present in all the regions, causing damages to the public health and wages with treatments and prevention. Previously associated with rural areas, leishmaniasis today also affect urban populations and dogs are considered the main LV reservoirs in these environments. The transmission of the parasite occurs when the phlebotomine insect ingests infectious forms of leishmania when performing blood ingestion in infected animals, being able to transmit these parasites in new ingestion. For the diagnosis of VL, the Rapid Immunochromatographic Test (TRI) for screening and the Enzyme Linked Immunosorbent Assay (ELISA) or Immunoenzymatic Assay (EIE) and the Direct Immunofluorescence Reaction (IFR) tests, in addition to the Polymerase Chain Reaction (PCR) and direct examination as confirmatory. Direct examination, with the observation of the parasite in biological samples, is considered gold standard test, but requires personnel trained in the identification of the protozoan in the sample. Methods such as immunocytochemistry may increase the accuracy of this observation. The present work compared 4 techniques for the preparation of cytological samples (cellblock, 10% formaldehyde, methanol and paraformaldehyde / PBS) extracted from bone marrow, skin and lymph node of 20 dogs seropositive to Leishmania sp., Submitted to an immunocytochemistry protocol (ICQ) . With the ICQ protocol, a 15% positive increase in bone marrow ICQ was observed in relation to cytopathological examination, 30% in lymph node analysis and 5% in skin when compared to cytopathological tests, thus increasing the efficiency of the diagnosis. The techniques of fixation of the biological material presented satisfactory immunostaining with better results obtained by the agarose cellblock technique followed by fixation in 10% formaldehyde and paraffin embedding, fixation in alcohol methanol and lastly the fixation technique in paraformaldehyde / PBS.

Effects of aroeira (Schinus terebinthifoliu Raddi) oil on cutaneous wound healing in rats

PURPOSE: To evaluate the effects of aroeira (Schinus terebinthifolius) ointment on skin wound healing in rats. METHODS: Adult male rats (n=20) were divided into four groups of five animals each, as follows: G4, G7, G14 and G21, which corresponds to 4th, 7th, 14th and 21th days postoperatively. Each animal were made two incisions on the skin, including the subcutaneous tissue, in the right and left sides of thoracic region, separated by a distance of two inches. The right lesion was treated with base ointment (vaseline, lanolin); the left one was treated with base ointment containing 5% of aroeira oil. At the end of each experimental period the lesions were evaluated for the contraction degree. Then held the collection of fragments that were fixed in 10% formalin and processed for paraffin embedding. In the histological sections (5μm) was evaluated the morphology and quantified the collagen and blood vessels. The data obtained were submitted to ANOVA test complemented by Tukey-Kramer test (p<0.05). RESULTS: The contraction of the lesions was higher in wounds treated with aroeira oil than in controls at 7th and 14th days (p<0.01), whereas in the 21st day all lesions were already completely healed. The morphology showed granulation tissue more developed, with fibroblasts more bulky and collagen fibers more arranged in the experimental group at 4th, 7th and 14th days. The morphometry showed a significant increase in the quantification of collagen fibers in the experimental group at 7th and 14th days (p<0.05). CONCLUSION: The aroeira oil accelerates the healing process of wounds as a macroscopic, morphological and morphometrical analysis.(AU)

Effects of angico extract (Anadenanthera colubrina var. cebil) in cutaneous wound healing in rats / Efeitos do extrato de angico (Anadenanthera colubrina var. cebil) em feridas cutâneas de ratos

PURPOSE: To study the effects of the angico extract (Anadenanthera colubrina var. cebil) on the healing of rat skin. METHODS: Twenty adult rats were divided into four groups of five animals each, the G4, G7, G14 and G21, which corresponds to the respective postoperative days. Each group received two incisions on skin and subcutaneous tissue in the right and left antimere of the thoracic region, separated by a distance of 2 cm. The right lesion was treated daily with saline and the left with the angico alcoholic extract (5%). At the end of each experimental period, animals were euthanized and fragments of the wound area, together with the edges were removed, fixed in 10% formaldehyde solution and processed for paraffin embedding. In the histological sections with 5 µm of thickness, were carried out immunohistochemical methods for detection of blood vessels (VEGF) and stained with hematoxylin and eosin for morphological analysis. Statistical analysis was done by ANOVA and Tukey test (p<0.05). RESULTS: Morphological analysis showed larger fibroblasts and a higher concentration of collagen fibers in days 7 and 14 in wounds treated with the angico extract. Morphometric analysis demonstrated a significant increase in the number of blood vessels in both the seventh and 14th days (p<0.01) in wounds treated with the angico extract. CONCLUSION: The angico alcoholic extract (Anadenanthera colubrina var. cebil) induces the acceleration of wound healing in skin wounds of rats.(AU)

OBJETIVO: Avaliar os efeitos do extrato de angico (Anadenanthera colubrina var. cebil) na cicatrização em pele de ratos. MÉTODOS: Ratos machos adultos (n=20) foram distribuídos em quatro grupos de cinco animais cada, a saber: G4, G7, G14 e G21, o que corresponde a quatro, sete, 14 e 21 dias de pós-operatório. Cada grupo recebeu duas incisões na pele compreendendo o tecido subcutâneo, nos antímeros direito e esquerdo da região torácica, separadas por uma distância de dois cm. A lesão esquerda com extrato alcoólico de angico (5%), iniciando-se logo após a cirurgia por 21 dias consecutivos. Ao final de cada período (4, 7, 14 e 21 de pós-operatório) experimental foram coletados fragmentos da área da ferida, fixada em formol a 10% e processadas para inclusão em parafina. Nos cortes histológicos com 5 µm de espessura, foram realizados métodos imunoistoquímicos para detecção dos vasos sanguíneos (VEGF) e coloração pela hematoxilina para análise morfológica. Os dados obtidos foram submetidos à análise estatística ANOVA complementada pelo teste de Tukey-Kramer (p<0,05). RESULTADOS: A análise morfológica mostrou fibroblastos mais volumosos e alta concentração de fibras colágenas no 7º e 14º dias nas feridas tratadas com extrato de angico. A análise morfométrica demonstrou aumento significativo no número de vasos sanguíneos no sétimo e 14º dias (p<0,01) de pós-operatório em feridas tratadas com extrato de angico. CONCLUSÃO: O extrato hidroalcoólico a 5% da casca e entrecasca do angico (Anadenanthera colubrina var. cebil) acelera a neoangiogênese em feridas cutâneas de ratos.(AU)

EFEITOS DA SINVASTATINA E HIDROCLOROTIAZIDA EM LESÕES ÓSSEAS CRIADAS EXPERIMENTALMENTE NA TÍBIA DE RATOS WINSTAR

A cicatrização óssea pode se tornar um grande desafio ortopédico na medicina veterinária, pois em alguns casos que apresentam falhas ósseas com grandes extensões, demandam muito tempo para se regenerar ou até mesmo a necessidade de múltiplos procedimentos cirúrgicos para correção do defeito. A sinvastatina é um medicamento muito utilizado como agente hipolipidêmico e a hidroclorotiazida é usada no controle da hipertensão, mas vários estudos vêm demonstrando que esses fármacos têm ação osteoindutora. O presente estudo avaliou a ação da sinvastatina associada à hidroclorotiazida no reparo de lesões ósseas induzidas experimentalmente na tíbia de ratos. Foi realizada uma falha óssea bicortical na tíbia direita de 48 femeas (Rattusnorvegicus, variação albinus, Wistar) divididas em grupos de 6 animais sendo eles Grupo: Controle (C), Sinvastatina (S), Hidroclorotiazida (H), Sinvastatina e hidroclorotiazida (S+H) avaliados nos tempos de sete e 15 dias após a cirurgia. As medicações foram feitas por gavagem nas doses de 20mg/kg de sinvastatina e 15mg/kg de hidroclorotiazida, uma vez ao dia até o dia da eutanásia. Após a eutanásia as tíbias foram removidas, fixadas, desmineralizadas e processadas para inclusão em parafina. Os cortes semi-seriados obtidos foram corados em Hematoxilina-Eosina (HE) e Tricrômico de Mallory. Nos cortes histológicos em HE foi realizada análise qualitativa, onde foram avaliados os aspectos morfológicos do reparo ósseo na área da lesão. Nos cortes em Tricrômico de Mallory foram obtidas porcentagem de matriz óssea neoformada. A análise qualitativa mostrou uma aceleração na cicatrização óssea nos animais tratados por 15 dias do grupo H, os grupos S e S+H não apresentaram diferença siguinificativa na consolidação óssea. A análise quantitativa não mostrou diferença significativa na formação de matriz óssea entre os grupos estudados. Em conclusão, este trabalho mostrou a hidroclorotiazida promoveu uma melhora significativa na cicatrização de falhas ósseas realizadas experimentalmente na tíbia de ratas após quinze dias de tratamento, a sinvastatina e a associação das duas drogas não apresentaram diferença significativa na consolidação óssea no mesmo intervalo de tempo.

Bone healing can become a major orthopedic challenge in veterinary medicine. In some cases it requires long periods of time to regenerate large bone fractures or even needs multiple surgical procedures to correct the flaw. Sinvastatin is widely used as a hypolipidemic agent and hydrochlorothiazide is used on hypertension control but several studies have shown that these drugs have osteoinductiv action. The present study assessed the action of sinvastatin associated with hydrochlorothiazide in repairing experimentally induced tibia fractures in rats. A bicortical bone defect was made in the right tibia of 48 females (Rattusnorvegicus, albinus variaction, Wistar) divided into groups of 6 animals: Control (C), Sinvastatin (S), Hydrochlorothiazide (H),Sinvastatin and hydrochlorothiazide (S + H) and posteriorly evaluated at 7 and 15 days. The drugs were administered by gavage at doses of 20 mg/kg for simvastatin and 15 mg/kg for hydrochlorothiazide, once a day, until the day of euthanasia. After euthanasia the tibias were removed, fixated, decalcified and processed for paraffin embedding. The semi-serial histological sections obtained were colored with Hematoxylin-Eosin (HE) and Mallorys Trichrome. The morphologic aspects of bone repairing was assessed observing the HE-colored bone tissue samples from the damaged area. Samples colored with Mallorys Trichrome were used to obtain a percentage of bone matrix formation. Qualitative analysis demonstrated an accelerated rate of the healing process in animals treated for 15 days in the H group, a positive bias in the S group, and no detectable enhancement in the S + H group whatsoever. By contrast, quantitative analisys showed no significant results in any group for bone matrix formation. In conclusion, this study revealed that hydrochlorothiazide promoted a significant improvement in healing experimentally-made tibia fractures in rats treated for 15 days. The simvastatin and the association of both drugs showed no results for the same period of time.

Hermaphroditism among dioecious Tagelus plebeius (Lightfoot, 1786) (Mollusca, Psammobiidae) and Iphigenia brasiliana (Lamarck, 1818) (Mollusca, Donacidae) on the Cachoeira River Estuary, Ilhéus, Bahia, Brazil / Hermafroditismo nos moluscos dióicos Tagelus plebeius (Lightfoot, 1786) (Mollusca, Psammobiidae) e Iphigenia brasiliana (Lamarck, 1818) (Mollusca, Donacidae) na região estuarina do Rio Cachoeira, Ilhéus, Bahia, Brasil

The samples of Tagelus plebeius and Iphigenia brasiliana were manually collected on the Cachoeira River estuary region (Ilhéus, BA, Brazil) between August 2005 and August 2006, with a periodicity of 15 days, with 20 animals collected/sampled, performing 500 samples from each species. The animals were measured, eviscerated and kept in solution of Davidson and after 24-30 hours, they were transferred to ethanol 70 percent. The material was processed for routine histology, with paraffin embedding, obtaining 7 μm thick slices, stained with Harris hematoxilin and Eosin (HE). By light microscopy analysis, 2 cases of hermaphroditism (0.4 percent) in T. plebeius samples and one case (0.2 percent) in I. brasiliana were registered with predominance of female over male follicles.(AU)

Os exemplares de Tagelus plebeius e Iphigenia brasiliana foram manualmente coletados na região estuarina do Rio Cachoeira (Ilhéus, Bahia), entre agosto de 2005 e agosto de 2006, com coleta quinzenal de 20 animais, totalizando 500 exemplares/espécie. Os animais foram mensurados, eviscerados e fixados em solução de Davidson por 24-30 horas e depois transferidos para etanol a 70 por cento. O material foi processado por técnica rotineira de histologia, com inclusão em parafina, obtenção de cortes com 7 μm de espessura e coloração por hematoxilina de Harris e Eosina (HE). A análise em microscopia de luz evidenciou 2 casos de hermafroditismo (0,4 por cento) em T. plebeius e um caso (0,2 por cento) em I. brasiliana (0,2 por cento), com predominância de folículos femininos sobre os masculinos.(AU)