The ovarian and uterine responses of Baixadeiro mares to prostaglandin synchronization during the dry and rainy seasons

This study aimed to evaluate the effect of synchronization with prostaglandin F2α in Baixadeiro mares during the rainy and dry seasons. Fourteen mares were synchronized by administering two doses of 1 mL prostaglandin PGF 2α and monitored by rectal palpation and ultrasound for the assessment of follicular development and uterine echotexture. Of this total, nine mares allowed the collection of blood, in which the blood was collected by venipuncture of the jugular vein to determine progesterone (P4) by ELISA. Mares showed no differences (P > 0.05) in weight, body score condition (BSC), tone, uterine edema, frequency of ovulation, synchronization interval, estrus, and the total number of follicles between periods. However, there was a difference in large increased follicle diameter (P < 0.05) during the dry season. The average concentrations of P4 in mares differed (P < 0.05) between the pre- and post-ovulatory phases for both seasons and after ovulation, with higher concentrations in the rainy season. Furthermore, statistical differences in daily light (P < 0.05) were observed between the dry and rainy periods. Thus, we conclude that mares from the genetic grouping Baixadeiro showed no reproductive seasonality, though there was a difference in luminosity between the rainy and dry seasons. The treatment with two doses of PGF 2α was effective in synchronizing the mares, promoting the return of estrus in the dry and rainy periods. The mares remaining cyclically active throughout the year provided there were appropriate forage availability and quality levels to allow for normal values of body weight and condition.

The ovarian and uterine responses of Baixadeiro mares to prostaglandin synchronization during the dry and rainy seasons

This study aimed to evaluate the effect of synchronization with prostaglandin F2α in Baixadeiro mares during the rainy and dry seasons. Fourteen mares were synchronized by administering two doses of 1 mL prostaglandin PGF 2α and monitored by rectal palpation and ultrasound for the assessment of follicular development and uterine echotexture. Of this total, nine mares allowed the collection of blood, in which the blood was collected by venipuncture of the jugular vein to determine progesterone (P4) by ELISA. Mares showed no differences (P > 0.05) in weight, body score condition (BSC), tone, uterine edema, frequency of ovulation, synchronization interval, estrus, and the total number of follicles between periods. However, there was a difference in large increased follicle diameter (P < 0.05) during the dry season. The average concentrations of P4 in mares differed (P < 0.05) between the pre- and post-ovulatory phases for both seasons and after ovulation, with higher concentrations in the rainy season. Furthermore, statistical differences in daily light (P < 0.05) were observed between the dry and rainy periods. Thus, we conclude that mares from the genetic grouping Baixadeiro showed no reproductive seasonality, though there was a difference in luminosity between the rainy and dry seasons. The treatment with two doses of PGF 2α was effective in synchronizing the mares, promoting the return of estrus in the dry and rainy periods. The mares remaining cyclically active throughout the year provided there were appropriate forage availability and quality levels to allow for normal values of body weight and condition.(AU)

Aspectos morfofisiológicos e biotécnicas aplicadas à reprodução de novilhas bovinas e búfalas pré-púberes / Morphophysiological aspects and biotechnologies applied to the reproduction of prepubertal bovine and buffalo heifers

A puberdade corresponde ao momento da primeira ovulação, que culmina com o desenvolvimento final dos órgãos e estruturas envolvidas no controle neuro-endócrino reprodutivo. É um fenômeno multifatorial com grande impacto na vida produtiva das futuras matrizes e em sua eficiência econômica, ocorrendo muitas interações entre os fatores internos e externos. A idade da puberdade está relacionada ao peso corporal, que possui grandes efeitos da genética do animal e sua interação com o ambiente, especialmente a nutrição e interação social com machos. Algumas espécies, como os bubalinos, sofrem efeito de outros elementos ambientais, como a luminosidade e o fotoperíodo. A puberdade novilhas búfalas ou bovinas pode ser adiantada por meio do emprego de biotécnicas: indução da puberdade ou inseminação artificial em tempo fixo (IATF). Em ambas, os protocolos baseiam-se, principalmente, em aplicação de progestágeno associado com fonte de estradiol; mas a indução também pode ser realizada utilizando outros hormônios, como hormônio liberador de gonadotrofinas, prostaglandinas e gonadotrofina coriônica equina. No emprego da IATF, novilhas pré-púberes podem ser induzidas e inseminadas com outro protocolo de sincronização ou podem ser inseminadas com o mesmo protocolo de IATF, podendo aumentar as taxas de prenhez e diminuir os custos. Adiantando a puberdade, ocorre incremento na produção, melhorando a eficiência econômica da atividade pecuária.(AU)

Puberty corresponds to the moment of the first ovulation, which culminates in the final development of the organs and structures involved in the neuro-endocrine control of reproduction. It is a multifactorial phenomenon with a great impact on the productive life of future matrices and their economic efficiency, with many interactions between internal and external factors. The age of puberty is related to body weight, which has great effects on the animal's genetics and its interaction with the environment, especially nutrition and social interaction with males. Some species, such as buffalo, are affected by other environmental elements, such as luminosity and photoperiod. Puberty in buffaloes and bovine heifers can be advanced through the use of biotechniques: induction of puberty or timed artificial insemination (TAI). In both, the protocols are mainly based on the application of progestogen associated with a source of estradiol; but induction can also be performed using other hormones, such as gonadotropin-releasing hormone, prostaglandins and equine chorionic gonadotropin. In the employment of the TAI, prepubertal heifers can be induced and inseminated with another synchronization protocol or they can be inseminated with the same TAI protocol, which can increase pregnancy rates and decrease costs. Advancing puberty, there is an increase in production, improving the economic efficiency of livestock activity.(AU)

The role of prostaglandin F2α on ovulation and LH release in cows / A função da prostaglandina F2α na ovulação e na liberação de LH em vacas

This study aimed to evaluate the role of prostaglandin F2α (PGF) on ovulation. In Experiment 1, cows were randomly allocated to two treatments to receive 150 µg of d-Cloprostenol (PGF Group, n = 12) or 2 mL of NaCl 0.9% (Control Group, n = 11) and CIDRs, were removed 4 days later. No cow ovulated in Control and PGF groups. In Experiment 2, cows were randomly separated into two experimental groups to receive 4 injections of 150 µg of d-Cloprostenol (n = 9) or 2 mL of NaCL 0.9% (n = 9). In this experiment, ovulation was not observed in any cows. In Experiment 3, ovariectomized cows receive three injections of 300µg of PGF analog (PGF Group, n = 5), 100µg of Lecirelin (GnRH Group, n = 5) or 2 mL of PBS (Control Group, n = 4). The LH concentration was higher (P <0.0001) in cows from the GnRH group than in the PGF and Control groups. In experiment 4, cows with preovulatory follicles (>11.5 mm) were treated with Saline (Control Group, n = 6); Lecirelin (GnRH Group, n = 7) or Cloprostenol Sodium (PGF Group, n = 6). There was a significant increase in the vascular area of follicles from 0 to 24 h in GnRH and PGF treatments. In conclusion, PGF was not able to induce ovulation in cows with high or low plasma progesterone concentration. Additionally, PGF alone was not able to induce LH release and follicle luteinization, but increased follicular vascularization.(AU)

O objetivo deste estudo foi avaliar o papel da prostaglandina F2α (PGF) na ovulação. No Experimento 1, as vacas foram alocadas aleatoriamente em dois tratamentos para receber 150 µg de d-Cloprostenol (Grupo PGF, n = 12) ou 2 mL de NaCl 0,9% (Grupo Controle, n = 11) e os CIDR, foram removidos 4 dias depois. Nenhuma vaca ovulou nos grupos Controle e PGF. No Experimento 2, as vacas foram separadas aleatoriamente em dois grupos experimentais para receber 4 injeções de 150 µg de d-Cloprostenol (n = 9) ou 2 mL de NaCL 0,9% (n = 9). Não foi observada ovulação em nenhum dos animais deste experimento. No Experimento 3, vacas ovariectomizadas receberam três injeções de 300µg de análogo de PGF (Grupo PGF, n = 5), 100µg de Lecirelina (Grupo GnRH, n = 5) ou 2 mL de PBS (Grupo Controle, n = 4). A concentração de LH foi maior (P <0,0001) nas vacas do grupo GnRH do que nos grupos PGF e Controle. No Experimento 4, vacas com folículos pré-ovulatórios (> 11,5 mm) foram tratadas com solução salina (Grupo Controle, n = 6), Lecirelina (Grupo GnRH, n = 7) ou Cloprostenol Sódico (Grupo PGF, n = 6). Houve um aumento significativo na área vascular dos folículos de 0 a 24h nos tratamentos com GnRH e PGF. Em conclusão, a PGF não foi capaz de induzir ovulação em vacas com alta ou baixa concentração plasmática de progesterona. Além disso, a PGF sozinha não foi capaz de induzir a liberação de LH e a luteinização do folículo, mas aumentou a vascularização folicular.(AU)

The role of prostaglandin F2α on ovulation and LH release in cows / A função da prostaglandina F2α na ovulação e na liberação de LH em vacas

This study aimed to evaluate the role of prostaglandin F2α (PGF) on ovulation. In Experiment 1, cows were randomly allocated to two treatments to receive 150 µg of d-Cloprostenol (PGF Group, n = 12) or 2 mL of NaCl 0.9% (Control Group, n = 11) and CIDRs, were removed 4 days later. No cow ovulated in Control and PGF groups. In Experiment 2, cows were randomly separated into two experimental groups to receive 4 injections of 150 µg of d-Cloprostenol (n = 9) or 2 mL of NaCL 0.9% (n = 9). In this experiment, ovulation was not observed in any cows. In Experiment 3, ovariectomized cows receive three injections of 300µg of PGF analog (PGF Group, n = 5), 100µg of Lecirelin (GnRH Group, n = 5) or 2 mL of PBS (Control Group, n = 4). The LH concentration was higher (P <0.0001) in cows from the GnRH group than in the PGF and Control groups. In experiment 4, cows with preovulatory follicles (>11.5 mm) were treated with Saline (Control Group, n = 6); Lecirelin (GnRH Group, n = 7) or Cloprostenol Sodium (PGF Group, n = 6). There was a significant increase in the vascular area of follicles from 0 to 24 h in GnRH and PGF treatments. In conclusion, PGF was not able to induce ovulation in cows with high or low plasma progesterone concentration. Additionally, PGF alone was not able to induce LH release and follicle luteinization, but increased follicular vascularization.(AU)

O objetivo deste estudo foi avaliar o papel da prostaglandina F2α (PGF) na ovulação. No Experimento 1, as vacas foram alocadas aleatoriamente em dois tratamentos para receber 150 µg de d-Cloprostenol (Grupo PGF, n = 12) ou 2 mL de NaCl 0,9% (Grupo Controle, n = 11) e os CIDR, foram removidos 4 dias depois. Nenhuma vaca ovulou nos grupos Controle e PGF. No Experimento 2, as vacas foram separadas aleatoriamente em dois grupos experimentais para receber 4 injeções de 150 µg de d-Cloprostenol (n = 9) ou 2 mL de NaCL 0,9% (n = 9). Não foi observada ovulação em nenhum dos animais deste experimento. No Experimento 3, vacas ovariectomizadas receberam três injeções de 300µg de análogo de PGF (Grupo PGF, n = 5), 100µg de Lecirelina (Grupo GnRH, n = 5) ou 2 mL de PBS (Grupo Controle, n = 4). A concentração de LH foi maior (P <0,0001) nas vacas do grupo GnRH do que nos grupos PGF e Controle. No Experimento 4, vacas com folículos pré-ovulatórios (> 11,5 mm) foram tratadas com solução salina (Grupo Controle, n = 6), Lecirelina (Grupo GnRH, n = 7) ou Cloprostenol Sódico (Grupo PGF, n = 6). Houve um aumento significativo na área vascular dos folículos de 0 a 24h nos tratamentos com GnRH e PGF. Em conclusão, a PGF não foi capaz de induzir ovulação em vacas com alta ou baixa concentração plasmática de progesterona. Além disso, a PGF sozinha não foi capaz de induzir a liberação de LH e a luteinização do folículo, mas aumentou a vascularização folicular.(AU)

Hormonal protocols for the synchronization and induction of synchronized estrus in dairy ewes kept under tropical conditions

Background: Lacaune is an important sheep breed and shows reproductive seasonality which affects dairy product supply. The most common hormonal protocols are based on progesterone-releasing devices in order to reach reproductive activity. Due to international consumer demand for natural, green, and clean methods, such issues encourage the minimal or absent use of synthetic hormones in livestock. In this sense, the present study tested the efficiency of induction and estrus synchronization protocols in lacaune ewes, considering: application interval of synthetic prostaglandin at the breeding season; length of synthetic progesterone exposure; and eCG dose at the outbreeding season. Materials, Methods & Results: In study 1: 52 ewes were submitted to estrus synchronization protocol using two doses of d-cloprostenol 7 or 9 days apart. In study 2: 47 ewes were submitted to estrus induction protocol using an intravaginal device containing 60 mg of medroxyprogesterone acetate maintained for 6, 9, or 12 days. In study 3: 46 ewes were submitted to synchronized estrus induction protocol using intravaginal progesterone device for six days. On the fifth day, d-cloprostenol and 300 IU or 400 IU of eCG were administered. For all studies, signs of estrus beginning/ending were recorded and natural mating was performed. After 30 days, transrectal ultrasound was performed for pregnancy diagnosis. In study 1, groups presented similar rate of estrus behavior (78.8%) and pregnancy (average 75.6%). Meanwhile, compared to G9days (37.8 ± 7.2 h), interval between the second dose of prostaglandin and beginning of estrus was smaller in G7days (31.5 ± 7.8 h). No difference was found among variables studied in study 2 (P > 0.05), nevertheless the SD for the estrus duration was shorter (P < 0.05) in G6days and G12 days when compared with the G9days . Equally, the SD...

Hormônios utilizados na indução da ovulação em bovinos Artigo de revisão / Hormones used as ovulation inducers in cattle A review

Diversos hormônios podem ser utilizados em protocolos que visam otimizar biotécnicas reprodutivas como a inseminação artificial (IA) e inseminação artificial em tempo fixo (IATF), que exigem controle preciso do ciclo estral e da ovulação. Alguns hormônios possuem ação central no eixo hipotalâmico-hipofisário, como o hormônio liberador de gonadotrofinas (GnRH) e os ésteres de estradiolcomo o benzoato (BE) e o cipionato de estradiol (CE), enquanto outros como a gonadotrofina coriônica humana (hCG) e o hormônio luteinizante (LH) apresentam ação local, a nível ovariano. Atualmente os protocolos mais utilizados para indução da ovulação utilizam GnRH e estrógenos. Recentemente, foi demonstrado que as prostaglandinas possuem efeitos positivos na indução do processo ovulatório, mas seu mecanismo de ação não está totalmente esclarecido. A presente revisão tem por objetivo abordar os principais indutores da ovulação utilizados em protocolos para controle do ciclo estral em bovinos, relatando o período de ocorrência das ovulações após a sua aplicação.(AU)

Several hormones may be used in protocols aimed to optimize reproductive biotechniques such as artificial insemination (AI) and fixed-timed artificial insemination (FTAI) which require precise control of the estrous cycle and the ovulation. Some hormones act on the hypothalamic-pituitary axis, such as the gonadotrophin releasing hormone (GnRH) and estradiol esters such as estradiol benzoate (EB) and cypionate (EC), whereas others act directly on the ovaries, such as human chorionic gonadotrophin (hCG) and luteinizing hormone (LH). Currently, the most commonly used protocols for ovulation induction use GnRH or estrogen. Prostaglandins have recently been shown to have positive effects on induction of the ovulatory process, but their mechanism of action is not fully understood. The present review aims to address the main ovulation inducers used in protocols to control the estrous cycle in cattle, emphasizing the period between their administration and the occurrence of ovulation.(AU)

Hormônios utilizados na indução da ovulação em bovinos – Artigo de revisão / Hormones used as ovulation inducers in cattle – A review

Diversos hormônios podem ser utilizados em protocolos que visam otimizar biotécnicas reprodutivas como a inseminação artificial (IA) e inseminação artificial em tempo fixo (IATF), que exigem controle preciso do ciclo estral e da ovulação. Alguns hormônios possuem ação central no eixo hipotalâmico-hipofisário, como o hormônio liberador de gonadotrofinas (GnRH) e os ésteres de estradiolcomo o benzoato (BE) e o cipionato de estradiol (CE), enquanto outros como a gonadotrofina coriônica humana (hCG) e o hormônio luteinizante (LH) apresentam ação local, a nível ovariano. Atualmente os protocolos mais utilizados para indução da ovulação utilizam GnRH e estrógenos. Recentemente, foi demonstrado que as prostaglandinas possuem efeitos positivos na indução do processo ovulatório, mas seu mecanismo de ação não está totalmente esclarecido. A presente revisão tem por objetivo abordar os principais indutores da ovulação utilizados em protocolos para controle do ciclo estral em bovinos, relatando o período de ocorrência das ovulações após a sua aplicação.

Several hormones may be used in protocols aimed to optimize reproductive biotechniques such as artificial insemination (AI) and fixed-timed artificial insemination (FTAI) which require precise control of the estrous cycle and the ovulation. Some hormones act on the hypothalamic-pituitary axis, such as the gonadotrophin releasing hormone (GnRH) and estradiol esters such as estradiol benzoate (EB) and cypionate (EC), whereas others act directly on the ovaries, such as human chorionic gonadotrophin (hCG) and luteinizing hormone (LH). Currently, the most commonly used protocols for ovulation induction use GnRH or estrogen. Prostaglandins have recently been shown to have positive effects on induction of the ovulatory process, but their mechanism of action is not fully understood. The present review aims to address the main ovulation inducers used in protocols to control the estrous cycle in cattle, emphasizing the period between their administration and the occurrence of ovulation.

Indução do estro em cutias (Dasyprocta leporina) utilizando-se protocolos à base de prostaglandina isolada ou em associação com análogo de GnRH / Estrus induction in agoutis (Dasyprocta leporina) using protocols based on prostaglandin isolated or in association to GnRH analogue

Comparou-se a eficiência de protocolos para indução de estro em cutias. Em cinco fêmeas, foram administradas duas doses de cloprostenol (5µg) com intervalo de nove dias, via intraperitoneal; em outras cinco, administraram-se 30µg de análogo do hormônio liberador de gonadotrofinas (GnRH), via intravulvar, seguidos de 5µg de cloprostenol, via intraperitoneal, após sete dias e, após mais dois dias, nova dose do análogo de GnRH. A cada três dias, a ciclicidade reprodutiva dos animais foi monitorada, por meio de coleta de sangue, para dosagem hormonal, ultrassonografia ovariana e citologia vaginal. Duas das fêmeas que receberam apenas prostaglandina, as quais estavam em fase luteal no início do tratamento, manifestaram o estro aos três e seis dias após a segunda administração da droga. Já nas fêmeas que receberam a prostaglandina associada ao análogo do GnRH, duas que originalmente estavam em fase luteal apresentaram estro aos quatro dias após o tratamento, e uma outra apenas após 10 dias. Não foram evidenciadas diferenças estatísticas quanto à eficiência dos tratamentos (P>0,05). Conclui-se que, de acordo com os protocolos utilizados, o uso da prostaglandina isolada ou em associação com análogo do GnRH para a indução do estro em cutias D. leporina apresenta eficiência limitada às fêmeas que estejam em fase luteal por ocasião do início do tratamento.(AU)

We compared the efficiency of protocols for estrus induction in agoutis. Five females received double intraperitoneal administration of cloprostenol (5µg) on a 2-days interval; other five females were treated with intravulvar administration of 30µg gonadotrophin release hormone analogue (GnRH associated to intraperitoneal administration of 5µg cloprostenol after seven days and a new administration of GnRH analogue after two days. Every 3 days, the agoutis' reproductive cycle was monitored by blood collection for hormonal analysis, ovarian ultrasound and vaginal cytology. Two females, originally in luteal phase, that received isolated prostaglandin presented estrous signs at 3 and 6 days after the second drug administration. From the females that received the association, two that were originally in luteal phase presented estrus at 4 days after treatment, and one other presented estrus only after 10 days. There was no significant statistical difference regarding the efficiency of treatments for estrus induction (P>0.05). We conclude that, according to the protocols tested in the study, the use of isolated prostaglandin or its association to GnRH analogue for estrus induction in D. leporine shows an efficiency limited to the females that were in luteal phase in the beginning of the treatment.(AU)

Indução do estro em cutias (Dasyprocta leporina) utilizando-se protocolos à base de prostaglandina isolada ou em associação com análogo de GnRH / Estrus induction in agoutis (Dasyprocta leporina) using protocols based on prostaglandin isolated or in association to GnRH analogue

Comparou-se a eficiência de protocolos para indução de estro em cutias. Em cinco fêmeas, foram administradas duas doses de cloprostenol (5µg) com intervalo de nove dias, via intraperitoneal; em outras cinco, administraram-se 30µg de análogo do hormônio liberador de gonadotrofinas (GnRH), via intravulvar, seguidos de 5µg de cloprostenol, via intraperitoneal, após sete dias e, após mais dois dias, nova dose do análogo de GnRH. A cada três dias, a ciclicidade reprodutiva dos animais foi monitorada, por meio de coleta de sangue, para dosagem hormonal, ultrassonografia ovariana e citologia vaginal. Duas das fêmeas que receberam apenas prostaglandina, as quais estavam em fase luteal no início do tratamento, manifestaram o estro aos três e seis dias após a segunda administração da droga. Já nas fêmeas que receberam a prostaglandina associada ao análogo do GnRH, duas que originalmente estavam em fase luteal apresentaram estro aos quatro dias após o tratamento, e uma outra apenas após 10 dias. Não foram evidenciadas diferenças estatísticas quanto à eficiência dos tratamentos (P>0,05). Conclui-se que, de acordo com os protocolos utilizados, o uso da prostaglandina isolada ou em associação com análogo do GnRH para a indução do estro em cutias D. leporina apresenta eficiência limitada às fêmeas que estejam em fase luteal por ocasião do início do tratamento.(AU)

We compared the efficiency of protocols for estrus induction in agoutis. Five females received double intraperitoneal administration of cloprostenol (5µg) on a 2-days interval; other five females were treated with intravulvar administration of 30µg gonadotrophin release hormone analogue (GnRH associated to intraperitoneal administration of 5µg cloprostenol after seven days and a new administration of GnRH analogue after two days. Every 3 days, the agoutis' reproductive cycle was monitored by blood collection for hormonal analysis, ovarian ultrasound and vaginal cytology. Two females, originally in luteal phase, that received isolated prostaglandin presented estrous signs at 3 and 6 days after the second drug administration. From the females that received the association, two that were originally in luteal phase presented estrus at 4 days after treatment, and one other presented estrus only after 10 days. There was no significant statistical difference regarding the efficiency of treatments for estrus induction (P>0.05). We conclude that, according to the protocols tested in the study, the use of isolated prostaglandin or its association to GnRH analogue for estrus induction in D. leporine shows an efficiency limited to the females that were in luteal phase in the beginning of the treatment.(AU)

Prostaglandin A1 inhibits the replication of bovine viral diarrhea virus

Bovine viral diarrhea virus can cause acute disease in livestock, leading to economic losses. We show that Prostaglandin A1 inhibits bovine viral diarrhea virus replication in Madin-Darby bovine kidney cells (94% inhibition using 5 µg/mL). Light and electron microscopy of infected cells shows that Prostaglandin A1 also prevents virus-induced vacuolization, but at higher concentrations (10 µg/mL).(AU)

Manipulação hormonal do ciclo estral em ovinos: uma revisão / Hormonal manipulation of the estrous cycle in sheep: a review

O consumo de carne ovina no Brasil tem apresentado aumento expressivo, mas sem oferta suficiente para atender a demanda gerada. Visto os entraves reprodutivos na espécie, buscam-se alternativas de manejo que possam incrementar sua eficiência, como a associação de protocolos de sincronização e indução de estro/ovulação. Embora os mais utilizados sejam protocolos a base de prostaglandina F2α (PGF) ou progesterona, a associação com gonadotrofinas tem sido avaliada e demonstra aumento nas taxas reprodutivas.Objetivou-se com este artigo rever os protocolos de sincronização utilizados em ovinos e discutir estratégias para incremento da produção.

The consumption of sheep meat in Brazil has presented a significant increase, but there is no enough product in the market to meet this demand. Considering the reproductive obstacles in the species, alternatives of reproductive management that increase its efficiency, such as the association of synchronization protocols andestrus induction, are sought. Although the most commonly used are prostaglandin or progesterone-basedprotocols, their association with gonadotrophins has been evaluated and allows an increase in reproductive rates. The objective of this article was to review the synchronization protocols used in the species and to discuss strategies to increase production.

Effects of dorzolamide/timolol and tafluprost on intraocular pressure and pupil diameter in healthy dogs / Efeitos da dorzolamida/timolol e da tafluprosta sobre a pressão intraocular e o diâmetro pupilar em cães saudáveis

This study aimed to evaluate and compare the effects of the fixed combination of dorzolamide/timolol with those of tafluprost on intraocular pressure (IOP) and pupil diameter (PD) in healthy dogs (n=10). Two experiments were conducted with an interval of 30 days. In both, IOP and PD were assessed at 8, 11, 14, 17, and 20h. Parameters were evaluated during baseline, treatment period of four days, and one day of post-treatment. During treatment phase, IOP decreased by 0.74 (P 0.05), 1.88 (P 0.01), 2.94 (P 0.001), and 3.10mmHg (P 0.01), in dorzolamide/timolol-treated eyes; and by 1.50, 2.18, 2.14, and 2.18mmHg (P 0.001), in tafluprost-treated eyes. PD decreased by 0.24 (P 0.01), 0.32 (P 0.01), 0.49 (P 0.001), and 0.40mm (P 0.001), in dorzolamide/timolol treated eyes; and by 2.31, 2.55, 2.43, and 2.70mm (P 0.001), in tafluprost-treated eyes. Dorzolamide/timolol and tafluprost were able to decrease IOP and PD in healthy dogs. However, a cumulative effect of the fixed combination of dorzolamide/timolol was more effective in reducing IOP, than tafluprost. Comparisons between treatments showed that tafluprost was more effective in reducing PD throughout the treatment phase.

O estudo objetivou avaliar e comparar os efeitos da combinação fixa da dorzolamida/timolol com os da tafluprosta sobre a pressão intraocular (PIO) e o diâmetro pupilar (DP) em cães saudáveis (n=10). Dois experimentos com intervalo de 30 dias foram conduzidos. Em ambos, a PIO e o DP foram avaliados às 8, 11, 14, 17 e às 20h. Os parâmetros foram avaliados durante a fases basal, um período de tratamento de quatro dias, e um dia de pós-tratamento. Durante a fase de tratamento, a PIO dos olhos tratados com dorzolamida/timolol reduziram em 0.74 (P 0.05), 1.88 (P 0.01), 2.94 (P 0.001), e 3.10mmHg (P 0.01); e dos olhos tratados com tafluprosta em 1.50, 2.18, 2.14 e 2.18mmHg (P 0.001). O DP dos olhos tratados com dorzolamida/timolol reduziram em 0.24 (P 0.01), 0.32 (P 0.01), 0.49 (P 0.001) e 0.40mm (P 0.001); e dos olhos tratados com tafluprosta em 2.31, 2.55, 2.43 e 2.70mm (P 0.001). A dorzolamida/timol e a tafluprosta foram capazes de reduzir a PIO e o DP em cães saudáveis. Porém, efeito cumulativo do tratamento com dorzolamida/timolol foi observado, decorridos três dias de tratamento. Por essa razão, a dorzolamida/timolol foi mais efetiva que a tafluprosta na redução da PIO. Comparações entre os tratamentos demonstraram que a tafluprosta foi mais efetiva em reduzir o DP, durante toda a fase de tratamento.

Effects of dorzolamide/timolol and tafluprost on intraocular pressure and pupil diameter in healthy dogs / Efeitos da dorzolamida/timolol e da tafluprosta sobre a pressão intraocular e o diâmetro pupilar em cães saudáveis

This study aimed to evaluate and compare the effects of the fixed combination of dorzolamide/timolol with those of tafluprost on intraocular pressure (IOP) and pupil diameter (PD) in healthy dogs (n=10). Two experiments were conducted with an interval of 30 days. In both, IOP and PD were assessed at 8, 11, 14, 17, and 20h. Parameters were evaluated during baseline, treatment period of four days, and one day of post-treatment. During treatment phase, IOP decreased by 0.74 (P 0.05), 1.88 (P 0.01), 2.94 (P 0.001), and 3.10mmHg (P 0.01), in dorzolamide/timolol-treated eyes; and by 1.50, 2.18, 2.14, and 2.18mmHg (P 0.001), in tafluprost-treated eyes. PD decreased by 0.24 (P 0.01), 0.32 (P 0.01), 0.49 (P 0.001), and 0.40mm (P 0.001), in dorzolamide/timolol treated eyes; and by 2.31, 2.55, 2.43, and 2.70mm (P 0.001), in tafluprost-treated eyes. Dorzolamide/timolol and tafluprost were able to decrease IOP and PD in healthy dogs. However, a cumulative effect of the fixed combination of dorzolamide/timolol was more effective in reducing IOP, than tafluprost. Comparisons between treatments showed that tafluprost was more effective in reducing PD throughout the treatment phase.(AU)

O estudo objetivou avaliar e comparar os efeitos da combinação fixa da dorzolamida/timolol com os da tafluprosta sobre a pressão intraocular (PIO) e o diâmetro pupilar (DP) em cães saudáveis (n=10). Dois experimentos com intervalo de 30 dias foram conduzidos. Em ambos, a PIO e o DP foram avaliados às 8, 11, 14, 17 e às 20h. Os parâmetros foram avaliados durante a fases basal, um período de tratamento de quatro dias, e um dia de pós-tratamento. Durante a fase de tratamento, a PIO dos olhos tratados com dorzolamida/timolol reduziram em 0.74 (P 0.05), 1.88 (P 0.01), 2.94 (P 0.001), e 3.10mmHg (P 0.01); e dos olhos tratados com tafluprosta em 1.50, 2.18, 2.14 e 2.18mmHg (P 0.001). O DP dos olhos tratados com dorzolamida/timolol reduziram em 0.24 (P 0.01), 0.32 (P 0.01), 0.49 (P 0.001) e 0.40mm (P 0.001); e dos olhos tratados com tafluprosta em 2.31, 2.55, 2.43 e 2.70mm (P 0.001). A dorzolamida/timol e a tafluprosta foram capazes de reduzir a PIO e o DP em cães saudáveis. Porém, efeito cumulativo do tratamento com dorzolamida/timolol foi observado, decorridos três dias de tratamento. Por essa razão, a dorzolamida/timolol foi mais efetiva que a tafluprosta na redução da PIO. Comparações entre os tratamentos demonstraram que a tafluprosta foi mais efetiva em reduzir o DP, durante toda a fase de tratamento.(AU)

Effect of Flunixin Meglumine administration on seminal characteristics of male sheep and goat / Efeito da administração de Flunixina Meglumine sobre as características seminais de machos ovinos e caprinos

Testicular degeneration is a multifactorial process increasing the concentration of prostaglandins in seminal plasma. Both increase and decrease of these hormones tend to promote loss of seminal quality. Flunixin meglumine is a potent anti-inflammatory drug capable of modulating the production of prostaglandins and is widely used in female reproduction. However, it is rarely used in males with the same objective. Therefore, this study aimed to evaluate the effects of this drug on seminal quality of male lambs and goats with spermatic characteristics unfavorable for reproduction. To this end, a total of 15 breeding animals were evaluated, of which six goats and four sheep with poor seminal quality were selected according to the criteria established by the Brazilian College of Animal Reproduction (CBRA). Three semen samples were collected from each animal. Then, the flunixin meglumine treatment was initiated and ejaculates were collected at two different periods after the drug was administered (from day 21 until day 35 and from day 49 to day 63). Macroscopic and microscopic parameters were assessed in semen samples and scrotal circumference and percentages of sperm pathologies were measured and compared between the three periods. Data with normal distribution were analyzed using ANOVA at 5% probability, and comparisons between periods within the same species were performed using the Tukey test. An improvement was observed in the analyses of mass motility, percentage motility, andsperm vigor. Scrotal circumference had no variation. Concerning sperm pathologies, an increase inthe number of normal spermatozoids was observed due to a significant reduction in minor and majordefects, and the latter remained low even after the treatment was finished. Therefore, flunixin megluminepresented beneficial effects on seminal parameters of male goats and lamb with unfavorable spermaticcharacteristics. These findings indicate this drug may be used in the treating of...(AU)

A degeneração testicular é um processo multifatorial que leva ao aumento das prostaglandinas no plasma do ejaculado, sendo que tanto seu acréscimo quanto a redução baixam a qualidade seminal. A Flunixina Meglumine é um potente anti-inflamatório, capaz de modular a produção de prostaglandinas, amplamente difundido na reprodução de fêmeas, mas pouco utilizado em machos para esse fim. Por isso, esse trabalho buscou avaliar o efeito deste fármaco sobre a qualidade seminal de machos ovinos e caprinos que apresentem quadro espermático desfavorável à reprodução. Para tanto, um total de 15 reprodutores pertencentes à Universidade Federal do Ceará foram avaliados, dos quais foram selecionados seis bodes e quatro carneiros com sêmen de baixa qualidade, segundo os critérios do Colégio Brasileiro de Reprodução Animal (CBRA). Foram realizadas três colheitas prévias de cada animal, aplicado o tratamento com Flunixina Meglumine e, em seguida, foram colhidos ejaculados de dois momentos posteriores à aplicação do fármaco (do D21 ao D35 e do D49 ao D63). Os parâmetros espermáticos de natureza macro e microscópica, assim como a circunferência escrotal e o percentual de patologias espermáticas foram comparados entre os três momentos e os dados de distribuição normal foram avaliados por ANOVA a 5% de probabilidade e as comparações entre os momentos dentro de cada espécie quando significativa foram feitas pelo teste de Tukey. Houve melhora na motilidade massal, motilidade percentual e vigor espermático. Não ocorreu variação da circunferência escrotal e, no tocante às patologias espermáticas, observou-se um aumento no número de espermatozoides normais, devido a uma redução significativa de defeitos menores e maiores, sendo que estes permaneceram menores mesmo após cessar a influência do tratamento. Assim, a Flunixina Meglumine mostrou uma ação benéfica sobre os parâmetros seminais de machos ovinos e caprinos com quadro espermático desfavorável, sugerindo a indicação do fármaco para...(AU)

Sincronização Do Estro E Ovulação Com Progesterona Em Ovelhas / Estrus And Ovulation Synchronization With Progesterone In Sheep / Sincronización Del Estro Y Ovulación Con Progesterona En Ovejas

Com a atual expansão da criação de ovinos no Brasil e a necessidade de melhoramento genético dos rebanhos, a alternativa mais benéfica disponível é a inseminação artificial (IA), sendo sua adoção facilitada pelo uso concomitante da sincronização do estro e ovulação visando à inseminação artificial em tempo fixo (IATF). O ciclo estral nas ovelhas tem duração de 17 dias, que se divide em fase luteal e fase folicular. A ovelha é uma poliéstrica estacional caracterizado por períodos de atividade sexual durante os dias curtos (outono e inverno) com ciclos regulares. Durante os dias longos (primavera-verão), a atividade sexual diminui com os animais apresentando desde completo anestro até irregularidade dos ciclos. Para escolha da técnica de sincronização deve ser considerada a estacionalidade reprodutiva dos ovinos, uma vez que, dependendo da época do ano, será peculiar a técnica a ser empregada. Existem basicamente dois conjuntos de métodos de manipulação do ciclo estral em ovinos, um natural, o chamado efeito macho, outro que inclui métodos artificiais, que empregam progestágenos e as prostaglandinas. Progesterona e progestágenos são amplamente utilizados para sincronização do estro em ovelhas. Em ovinos: as esponjas vaginais de liberação lenta impregnadas com 50 mg MAP são muito utilizadas e existe também o dispositivo intravaginal de liberação de drogas (CIDR®).(AU)

With the current expansion of sheep farming in Brazil and the need for genetic improvement of livestock, the most beneficial alternative available is artificial insemination (AI), and its adoption was facilitated by concomitant use of synchronization of estrus and ovulation in order to time artificial insemination fixed (IATF). The estrous cycle in sheep lasts 17 days, which is divided into luteal phase and follicular phase. The sheep is an animal with reproductive seasonality characterized by periods of sexual activity during the short days (autumn and winter) with regular cycles. During the long days (spring-summer), sexual activity decreases with animals displaying complete anestrus up from irregularity of cycles. To choose the synchronization technique, the reproductive seasonality of the sheep should be considered, since, depending on the time of year, the technique to be used will be peculiar. There are basically two methods of manipulating the estrous cycle in sheep, a natural one, the so-called male effect, another that includes artificial methods that employ progestogens and prostaglandins. Progesterone and progestagens are widely used for synchronization of oestrus in ewes. In sheep: vaginal sponges impregnated withslow-release 50 mg MAP are widely used and there is also the intravaginal drug delivery device (CIDR®).(AU)

Con la actual expansión de la cría de ovinos en Brasil y la necesidad de mejoramiento genético de los rebaños, la alternativa más beneficiosa disponible es la inseminación artificial (IA), siendo su adopción facilitada por el uso concomitante de la sincronización del estro y la ovulación visando la inseminación artificial a tiempo fijo (IATF). El ciclo estral en las ovejas tiene una duración de 17 días, que se divide en fase luteal y fase folicular. La oveja es poliésica estacional caracterizado por períodos de actividad sexual durante los días cortos (otoño e invierno) con ciclos regulares. Durante los días largos (primavera-verano), la actividad sexual disminuye con los animales presentando desde completo anestro hasta irregularidad de los ciclos. Para elegir la técnica de sincronización debe ser considerada la estacionalidad reproductiva de los ovinos, ya que, dependiendo de la época del año, será peculiar la técnica a ser empleada. Hay básicamente dos métodos de manipulación del ciclo estral en ovinos, un natural, el llamado efecto macho, otro que incluye métodos artificiales, que emplean progestágenos y las prostaglandinas. Progesterona y progestágenos son ampliamente utilizados para la sincronización del estro en ovejas. En ovinos: las esponjas vaginales de liberación lenta impregnadas con 50 mg MAP son muy utilizadas y existe también el dispositivo intravaginal de liberación de drogas (CIDR®).(AU)

Sincronização Do Estro E Ovulação Com Progesterona Em Ovelhas / Estrus And Ovulation Synchronization With Progesterone In Sheep / Sincronización Del Estro Y Ovulación Con Progesterona En Ovejas

Com a atual expansão da criação de ovinos no Brasil e a necessidade de melhoramento genético dos rebanhos, a alternativa mais benéfica disponível é a inseminação artificial (IA), sendo sua adoção facilitada pelo uso concomitante da sincronização do estro e ovulação visando à inseminação artificial em tempo fixo (IATF). O ciclo estral nas ovelhas tem duração de 17 dias, que se divide em fase luteal e fase folicular. A ovelha é uma poliéstrica estacional caracterizado por períodos de atividade sexual durante os dias curtos (outono e inverno) com ciclos regulares. Durante os dias longos (primavera-verão), a atividade sexual diminui com os animais apresentando desde completo anestro até irregularidade dos ciclos. Para escolha da técnica de sincronização deve ser considerada a estacionalidade reprodutiva dos ovinos, uma vez que, dependendo da época do ano, será peculiar a técnica a ser empregada. Existem basicamente dois conjuntos de métodos de manipulação do ciclo estral em ovinos, um natural, o chamado efeito macho, outro que inclui métodos artificiais, que empregam progestágenos e as prostaglandinas. Progesterona e progestágenos são amplamente utilizados para sincronização do estro em ovelhas. Em ovinos: as esponjas vaginais de liberação lenta impregnadas com 50 mg MAP são muito utilizadas e existe também o dispositivo intravaginal de liberação de drogas (CIDR®).

With the current expansion of sheep farming in Brazil and the need for genetic improvement of livestock, the most beneficial alternative available is artificial insemination (AI), and its adoption was facilitated by concomitant use of synchronization of estrus and ovulation in order to time artificial insemination fixed (IATF). The estrous cycle in sheep lasts 17 days, which is divided into luteal phase and follicular phase. The sheep is an animal with reproductive seasonality characterized by periods of sexual activity during the short days (autumn and winter) with regular cycles. During the long days (spring-summer), sexual activity decreases with animals displaying complete anestrus up from irregularity of cycles. To choose the synchronization technique, the reproductive seasonality of the sheep should be considered, since, depending on the time of year, the technique to be used will be peculiar. There are basically two methods of manipulating the estrous cycle in sheep, a natural one, the so-called male effect, another that includes artificial methods that employ progestogens and prostaglandins. Progesterone and progestagens are widely used for synchronization of oestrus in ewes. In sheep: vaginal sponges impregnated withslow-release 50 mg MAP are widely used and there is also the intravaginal drug delivery device (CIDR®).

Con la actual expansión de la cría de ovinos en Brasil y la necesidad de mejoramiento genético de los rebaños, la alternativa más beneficiosa disponible es la inseminación artificial (IA), siendo su adopción facilitada por el uso concomitante de la sincronización del estro y la ovulación visando la inseminación artificial a tiempo fijo (IATF). El ciclo estral en las ovejas tiene una duración de 17 días, que se divide en fase luteal y fase folicular. La oveja es poliésica estacional caracterizado por períodos de actividad sexual durante los días cortos (otoño e invierno) con ciclos regulares. Durante los días largos (primavera-verano), la actividad sexual disminuye con los animales presentando desde completo anestro hasta irregularidad de los ciclos. Para elegir la técnica de sincronización debe ser considerada la estacionalidad reproductiva de los ovinos, ya que, dependiendo de la época del año, será peculiar la técnica a ser empleada. Hay básicamente dos métodos de manipulación del ciclo estral en ovinos, un natural, el llamado efecto macho, otro que incluye métodos artificiales, que emplean progestágenos y las prostaglandinas. Progesterona y progestágenos son ampliamente utilizados para la sincronización del estro en ovejas. En ovinos: las esponjas vaginales de liberación lenta impregnadas con 50 mg MAP son muy utilizadas y existe también el dispositivo intravaginal de liberación de drogas (CIDR®).

Gastrite iatrogênica - Relato de caso / Gastritis iatrogenica - Case report

A mucosa estomacal é protegida por muco, constituído principalmente por prostaglandinas protetoras. O uso de anti-inflamatórios não esteroidais (AI- NEs) pode provocar gastrite devido à capacidade dos AINEs de inibir a ação da cicloxigenase resultando na não formação de prostaglandinas, tendo como sinais clínicos característicos inapetência, regurgitação ou emese, hemorragias e mele- na ou hematoquezia. Foi atendido um cão da raça Fila mestiço com 10 anos de idade, apresentando, há 10 dias, hiporexia, poliúria e polidipsia. Na anamnese, o tutor relatou que antes do aparecimento dos sinais ele forneceu ao animal fluni- xin meglumine associado à sulfa, dipirona e dimeticona, em dose desconhecida, durante 5 dias, para uma sensibilidade dolorosa nos membros posteriores; e que há cinco dias, administrou um vermífugo (pirantel, praziquantel e ivermectina). O quadro do animal piorou gradativamente e dois dias antes da consulta, o ani- mal tornou-se apático e inapetente, apresentando melena e tremores, entretanto sem a presença de emese. No exame físico, foi averiguado intensa sensibilidade abdominal, aumento dos linfonodos axilares bilaterais, ceratite no olho esquer- do, conjuntivite bilateral, mucosa hipocorada e desidratação de 10%. Imedia- tamente, foi iniciada um tratamento fluidoterápico e exames complementares, porém, o animal veio a óbito duas horas após seu internamento e assim, foi en- caminhado para a realização de necropsia, onde foi observada úlceras extensas na região caudal do esôfago e em toda a mucosa do estômago, confirmando o diagnóstico de gastrite. Diante do histórico do uso de anti-inflamatórios, somada as características das lesões e suas localizações, o diagnóstico conclusivo foi de gastrite iatrogênica por anti-inflamatório não esteroidal (AINES). Conclui-se que o uso indiscriminado de anti-inflamatórios, sem assistência de um médico veterinário, por proprietários pode provocar um quadro de gastrite iatrogênica, podendo levar a morte no caso de atraso a busca de assistência médico veteriná- ria adequada. Apesar das graves lesões apresentadas na necropsia do esôfago e estomago, o animal não apresentava vômito ou regurgitação, sinais comuns em esofagites e gastrites.

Polysaccharide extract of Mimosa tenuiflora stem barks stimulates acute inflammatory response via nitric oxide / Extrato polissacarídico oriundo das cascas do caule de Mimosa tenuiflora induz resposta inflamatória aguda via óxido nítrico

Mimosa tenuiflora (Mimosaceae) or jurema-preta is well distributed in the northeast Brazil, being popularly used to treat skin lesions, burns and inflammation. The healing effect of the alcoholic extract prepared with its barks corroborates the popular use. This study aimed to evaluate the inflammatory response of polysaccharides extracted from M. tenuiflora barks (EP-Mt) by methanol/NaOH and ethanol precipitation. Inflammatory activity was assessed in rat models of acute inflammation (paw edema and peritonitis), by the following parameters: edema, vascular permeability, leukocyte migration, myeloperoxidase activity and pharmacological modulation of nitric oxide and prostaglandins. EP-Mt presented 3.8% yield, 41% carbohydrate and 0.34% protein. EP-Mt (0.01, 0.1, 1.0 mg kg-1) injected by subcutaneous route elicited paw edema that lasted from 30-420 min, with maximal effect at 1 mg kg-1 (40x vs. saline), and was inhibited by L-NAME (52%) and dexamethasone (26%). EP-Mt (1 mg kg-1, via intraperitoneal) stimulated leukocytes migration (2.2x), mainly neutrophils (6.5x) and MPO activity (96%). The leukocyte migration elicited by EP-Mt was inhibited by dexamethasone (39%) and L-NAME (38%). EP-Mt containing high carbohydrate content induces acute inflammation via nitric oxide, which open perspectives of application in pathological conditions of immunosuppression.(AU)

Mimosa tenuiflora (Mimosaceae) ou "jurema-preta", amplamente distribuída no nordeste brasileiro, é utilizada popularmente no tratamento de lesões de pele, queimaduras e inflamação. O efeito cicatrizante do extrato alcoólico de suas cascas corrobora o uso popular. Avaliou-se o efeito inflamatório dos polissacarídeos da casca de M. tenuiflora (EP-Mt), obtidos por extração com metanol/NaOH e precipitação com etanol. O efeito inflamatório foi avaliado em modelos agudos em ratos (edema de pata, peritonite) por meio dos seguintes parâmetros: edema, permeabilidade vascular, migração leucocitária, atividade da mieloperoxidase e modulação farmacológica de prostaglandinas e óxido nítrico. EP-Mt apresentou 3,8% de rendimento, 41% de carboidratos totais e 0,34% de proteína. EP-Mt (0,01, 0,1, 1,0 mg kg-1), administrado por via subcutânea, induziu edema de pata com duração de 30 a 420 min e efeito máximo na dose de 1 mg kg-1 (40x vs. salina), o qual foi inibido por L-NAME (52%) e dexametasona (26%). EP-Mt (1 mg kg-1, via intraperitoneal) estimulou a migração de leucócitos (2,2x vs. salina), principalmente de neutrófilos (6,5x), com aumento da atividade da mieloperoxidase (96%). A migração de leucócitos foi inibida por dexametasona (39%) e L-NAME (38%). EP-Mt contendo elevado teor de carboidratos induz inflamação aguda via óxido nítrico com perspectivas de aplicação em condições patológicas(AU)

Expression of epidermal growth factor (EGF) and its receptor in bovine endometrium throughout the luteal phase: effects of EGF on prostaglandin production in endometrial cells

Epidermal growth factor (EGF) is produced in bovine endometrium throughout the estrous cycle. However, little is known about the expression of the EGF receptor (EGFR) and the roles of EGF in bovine endometrium. To clarify whether EGF is involved in local regulation of bovine endometrial function, first we determined the EGF protein and the expression of EGFR mRNA in endometrial tissues throughout the luteal stages. EGF protein concentration was higher(P < 0.05) in the mid (days 8-12) luteal stage than in the other luteal stages. EGFR mRNA expression was higher (P < 0.05) in the mid and late (days 15-17) luteal stages than in the other luteal stages. To investigate the protein concentrations of EGF and EGFR mRNA expression in cultured bovine endometrial cells, epithelial and stromal cells were isolated between day 0 and day 4 post-ovulation from 22 uteri. Both EGF protein concentration and EGFR mRNA expression were higher (P < 0.05) in epithelial cells than in stromal cells. Then, to examine the possible role of EGF in the regulation of prostaglandin F2α (PGF2α) and prostaglandin E2 (PGE2), cultured endometrial epithelial and stromal cells were exposed to EGF (0, 1, 10 and 100 nm) for 24 h. In epithelial cells, EGF (10 and/or 100 nm) increased (P < 0.05) PGF2α and PGE2 secretion, but in stromal cells EGF (100 nm) increased (P < 0.05) PGF2α, but not PGE2 secretion. These results indicate that 1) the highest amount of EGF is produced by bovine endometrium at the mid-luteal stage, 2) endometrial EGFR mRNA expressions are higher at mid and late-luteal stages than other stages, 3) EGF is expressed mainly by uterine epithelial cells and 4) EGF has the ability to increase PGE2 and PGF2α production in both epithelial and stromal cells and therefore may play a role in local regulation of uterine function.