Performance of the tetra-primer PCR technique compared to PCR-RFLP in the search for rs12979860 (C/T) and rs8099917 (T/G) single nucleotide polymorphisms (SNPs) in the IFNL4 gene / Desempenho da técnica tetra-primer PCR em relação a PCR-RFLP na pesquisa de polimorfismos de nucleotídeos únicos (SNPs) rs12979860 (C/T) e rs8099917 (T/G) no gene IFNL4

Single nucleotide polymorphisms (SNPs, rs12979860 e rs8099917) in the Interferon Lambda 4 gene (IFNL4, formerly IFNL3and/or IL28B) has been associated with failure in the innate immune response, sustained virological response in hepatitis C, and HTLV-1-associated myelopathy (HAM) development. To search for these polymorphisms several methodologies can be employed, such as sequencing, real-time or quantitative polymerase chain reaction (qPCR), restriction fragment length polymorphism analysis in PCR products (PCR-RFLP), and tetra-primer PCR. The present study compared the performance of the tetra-primer PCR in relation to the PCR-RFLP, both optimized in the Research HTLV Laboratory of the Center of Immunology of Instituto Adolfo Lutz in São Paulo. One hundred DNA samples obtained from patients of STD/Aids Reference Centre in São Paulo, previously analyzed for IL28B SNPs by PCR-RFLP were selected for analysis, after confirming that they represent all IL28B SNPs patterns described in the literature. The results obtained showed concordance between the PCR-RFLP and the tetra-primer PCR SNPs results, and because of the low cost, easy to perform, and minor employment of biological specimen and reagents, the tetra-primer PCR is of choice to be used in routine. (AU)

Polimorfismos de nucleotídeos únicos (single nucleotide polymorphisms, SNPs rs12979860 e rs8099917) no gene que codifica o Interferon Lambda 4 (IFNL4, antigamente IFNL3 e/ou IL28B) têm sido associados às falhas na resposta imune inata e resposta virológica sustentada na hepatite C, e a mielopatia associada ao HTLV-1 (HTLV-1-associated myelopathy, HAM). A pesquisa destes polimorfismos pode empregar diversas metodologias: sequenciamento, reação em cadeia da polimerase em tempo real ou quantitativa (quantitative polymerase chain reaction, qPCR), análise de fragmentos de restrição enzimática em produtos de PCR (restriction fragment length polymorphism in PCR products, PCR-RFLP) e a tetra-primer PCR. Este estudo comparou o desempenho da tetra-primer PCR em relação a PCR-RFLP, ambas otimizadas no Laboratório de Pesquisa em HTLV do Centro de Imunologia do Instituto Adolfo Lutz de São Paulo. Foram selecionadas 100 amostras de DNA obtidas de pacientes do Centro de Referência e Treinamento em DST/Aids de São Paulo cujos SNPs na IL28B foram anteriormente determinados por PCR-RFLP e representaram todos os perfis descritos em literatura. Os resultados obtidos mostraram concordância entre elas, e pelo fato da tetra-primer PCR ter menor custo, ser de fácil execução, empregar menos tempo, insumos e material biológico, é a técnica de escolha para uso em rotina. (AU)

Morphological study of the digestive tract of the cardinal tetra, Paracheirodon axelrodi (Characiformes: Characidae)

The cardinal tetra Paracheirodon axelrodi is a species of the family Characidae of great interest as an ornamental fish. Many aspects of the biology of this species are still unknown. The present work presents a complete description of the different components of the digestive tract of P. axelrodi, analyzing its global anatomical arrangement, the adjacent glands (liver and pancreas) and the previously ignored pyloric caeca, using histological and histochemical techniques with light microscopy and scanning electron microscopy. Three levels of analysis were performed: macroscopic anatomy, histology of the gastrointestinal tract and scanning electron microscopy of mucosal surfaces. The intestinal coefficient (Ci) of P. axelrodi calculated here (0.94) is within the expected range for a carnivorous species. The anatomy of the alimentary and the resulting Ci is consistent with carnivorous diet in line with dietary studies in the wild in this species. The digestive tract, including adjacent glands (liver and pancreas), presented a relatively conserved general pattern within that described for other species of the family Characidae, especially at the histological level.(AU)

El tetra cardenal Paracheirodon axelrodi es una especie de la familia Characidae de gran interés como pez ornamental. Muchos aspectos de la biología de esta especie son aún desconocidos. En este trabajo se presenta una descripción completa de los diferentes componentes del tracto digestivo de P. axelrodi, analizando su disposición anatómica global, las glándulas adyacentes (hígado y páncreas) y la presencia de ciegos pilóricos, mediante técnicas histológicas e histoquímicas con microscopía óptica y electrónica de barrido. Se realizaron tres niveles de análisis: anatomía macroscópica, histología del tracto gastrointestinal y microscopía electrónica de barrido de las superficies mucosas. El coeficiente intestinal (Ci) de P. axelrodi calculado aquí (0,94) está dentro del rango esperado para una especie carnívora. Los estudios anatómicos del tracto alimentario y el Ci son consistentes con una dieta carnívora en línea con los estudios de la dieta en ejemplares silvestres en esta especie. El tracto digestivo, incluyendo las glándulas adyacentes (hígado y páncreas), presentó un patrón general relativamente conservado dentro de lo descrito para otras especies de la familia Characidae, especialmente a nivel histológico.(AU)

Early ontogeny of tetra Markiana nigripinnis (Characiformes: Characidae)

The early development of Markiana nigripinnis is described by morphological characters, pigmentation, and morphometry. Larvae were obtained through semi-natural breeding, collected, fixed, and identified according to their development. Eighty individuals with standard lengths ranging from 3.1 to 24.3 mm were analyzed. Larvae are poorly developed at hatching, with a relatively large yolk sac and finfold. At the preflexion stage, the eyes are pigmented, the mouth and anus are functional, the yolk is completely absorbed, and the pectoral fin bud emerges. At flexion, the first rays of the caudal, anal, and dorsal fins become evident. The pelvic fin bud emerges only at the postflexion stage, in addition to the complete absorption of the finfold. Pigmentation is distributed throughout the body, with a greater concentration on the top of the head, around the mouth, and at the base of the caudal fin. The myomere total number ranged from 34 to 49 (16-23 preanal, and 18-27 postanal). Juveniles show morphological characteristics like adults. The fins ray number are pectoral: 11-13, pelvic: 5-7, dorsal: 8-11, caudal: 16-27, and anal 30-47. The morphometric relationships reveal variations in growth along the early ontogeny of the species.

O desenvolvimento inicial de Markiana nigripinnis foi descrito considerando os caracteres morfológicos, a pigmentação e a morfometria. Indivíduos foram obtidos por meio de reprodução seminatural, coletados, acondicionados, fixados e identificados conforme seu período e estágio de desenvolvimento. Foram analisados 80 indivíduos com comprimento padrão variando de 3,1 a 24,3 mm. As larvas são pouco desenvolvidas à eclosão, com saco vitelino relativamente grande e presença de membrana embrionária. Em pré-flexão, os olhos estão pigmentados, a boca e o ânus são funcionais, o vitelo é completamente absorvido e surge o botão da nadadeira peitoral. Em flexão, os primeiros raios das nadadeiras caudal, anal e dorsal tornam-se evidentes. O botão da nadadeira pélvica aparece somente em pós-flexão, além da completa absorção da nadadeira embrionária. A pigmentação se distribui pelo corpo todo, com maior concentração no topo da cabeça, ao redor da boca e na base da nadadeira caudal. O número total de miômeros variou de 34 a 49 (16-23 pré e 18-27 pós-anal). Os juvenis apresentaram características morfológicas semelhantes ao adulto. O número de raios das nadadeiras é peitoral: 11-13, pélvica: 5-7, dorsal: 8-11, caudal: 16-27 e anal 30-47. As relações morfométricas revelam variações no crescimento ao longo da ontogenia inicial da espécie.

Effect of dosage of orally administered 17α-methyltestosterone on sex reversion of the yellowtail tetra Astyanax lacustris (Lütken, 1875)

The females of yellowtail tetra (Astyanax lacustris), known as the freshwater sardine, are approximately 1.33 times larger than males, and thus, all-female monosex culture would increase production and reduce size variability. The present work aimed to identify the optimal dose of 17α-methyltestosterone (MT) to be used in the masculinization of A. lacustris for indirect sex reversal. Three different concentrations of MT (20, 40, and 60 mg/kg of feed in the diet) were fed to the fry for 30 days. Thirty adult individuals from each treatment, including the control (0 mg MT/kg), were evaluated for gonadal development, morphological and histological sexual identification, zootechnical performance, and the possible genotoxic effect caused by prolonged exposure to MT. MT significantly (P<0.01) affected the differentiation of the gonads, with the presence of possible inhibitory effects in all treatments. Intersex individuals were present in the 20 and 60 mg MT/kg treatments. All treatments were able to masculinize A. lacustris and the treatment with the lowest hormone concentration produced the highest percentage of males 76.7%, while the control had 46.7% males. The presence of erythrocyte nuclear alterations indicated a possible cytotoxic effect of MT in treatments 40 and 60 mg MT/kg, however, the use of the hormone did not affect the growth and the survival of the individuals. Thus, the use of MT is a viable option for obtaining neomales as a first step into the production of all-female progenies.(AU)

Zootechnical performance, degree of steatosis and the genotoxic potential in yellowtail tetra Astyanax lacustris fed with different levels of L-carnitine / Desempenho zootécnico, grau de esteatose e potencial genotóxico de lambaris Astyanax lacustris alimentados com diferentes níveis de L-carnitina

L-carnitine perform a major role in transporting long-chain fatty acids into the mitochondria, where they are oxidized. It has been used in animal diets to decrease fat and increase muscle protein. The aim of this study was to evaluate the zootechnical performance, degree of steatosis in the liver, and genotoxic potential in Astyanax lacustris fed with different levels of L-carnitine (LC). Yellowtail tetra juveniles (n = 140) were distributed in 20 tanks of 70 L, with seven fish in each, in a water recirculation system with controlled temperature (27±0.1°C). The treatments with different levels of L-carnitine supplementation were: 0 (control), 250, 500, 750, and 1000 mg of LC per kg of food. The diets were provided twice a day for 60 days. The results showed that the different levels of LC did not affect (P>0.05) weight gain, survival, viscerosomatic index, and the liver hepatocytes showed a normal appearance. However, the use of LC supplementation showed genotoxic potential with a significant difference (P<0.05) for cell alterations when compared to the control at concentrations above 500mg kg-1.

A L-carnitina exerce um papel importante no transporte de ácidos graxos de cadeia longa até a mitocôndria para serem oxidados e tem sido incorporada em rações para animais com o objetivo de diminuir a deposição de gordura e aumentar a proteína muscular. O objetivo deste trabalho foi avaliar o desempenho zootécnico, o grau de esteatose no fígado e o potencial genotóxico em Astyanax lacustris alimentados com diferentes níveis de L-carnitina (LC). Juvenis de lambari-do-rabo-amarelo (n=140) foram distribuídos em 20 caixas de 70L, sete peixes em cada, em um sistema de recirculação de água com temperatura controlada (27±0,1°C). Os tratamentos com os níveis de suplementação foram: 0 (controle), 250, 500, 750 e 1000 mg de LC kg-1 de ração. As dietas foram fornecidas duas vezes ao dia, durante 60 dias. Os resultados mostraram que os diferentes níveis de LC não influenciaram (P>0,05) o ganho de peso; a sobrevivência, o índice viscerossomático e os hepatócitos do fígado apresentaram-se com aparência normal. No entanto, a suplementação com LC apresentou potencial genotóxico com diferença significativa (P<0,05) para alterações celulares quando comparada ao controle em concentrações superiores a 500mg kg-1.

Phagocytotic activity and gene expression of leukocytes isolated from Astyanax lacustris / Atividade fagocítica e expressão gênica de leucócitos isolados de Astyanax lacustris

The constant intensification of aquaculture has considerable increased the stress levels of farmed fish and, consequently, the number and intensity of diseases outbreaks. Thus, studies on fish immune response, especially regarding the interaction of fish leukocytes with potential pathogens and xenobiotics are of great importance in order to develop new prophylactic and curative strategies. We isolated leukocytes from the head kidney of Astyanax lacustris­an important Neotropical fish species for aquaculture and a potential model for Neotropical aquaculture research­using a Percoll centrifugation protocol. The isolated leukocytes were incubated with lipopolysaccharide (LPS), and the expression of genes IL-1ß, IL-8, LysC, and LysG were measured. We assessed the phagocytotic activity of leukocytes using Congo red-dyed yeast, a novel and cost-effective protocol that has been developed in this study. The isolated leukocytes responded to LPS induction, exhibiting strong IL-1ß and IL-8 upregulation, two of the most important pro-inflammatory interleukins for vertebrates immune reponse. The optimal concentration of yeast for the phagocytic assay was 106 cells mL-1, resulting in acceptable phagocytic capacity (PC) but without excess of yeasts during the counting process, ensuring a high precision and accuracy of the method. To the best of our knowledge, the present study is the first to investigate the in vitro gene expression and phagocytic activity of leukocytes isolated from A. lacustris. Our findings will serve as a reference for future studies on the immunology and toxicology of Neotropical fish.

A constante intensificação da aquicultura tem aumentado consideravelmente os níveis de estresse dos animais cultivados e, consequentemente, o número e a intensidade dos surtos de doenças. Logo, estudos sobre a resposta imune dos peixes, especialmente relacionados com a interação dos leucócitos de peixes com potenciais patógenos e xenobióticos, são de grande importância para o desenvolvimento de novas estratégias profiláticas e curativas. No presente trabalho, nós obtivemos sucesso ao isolar leucócitos oriundos do rim cranial de Astyanax lacustris ­ uma importante espécie de peixe Neotropical para a aquicultura e um modelo em potencial para pesquisas em aquicultura Neotropical ­ usando um protocolo de centrifugação com Percoll. Os leucócitos isolados foram incubados com lipossacarídeo (LPS) e, a expressão dos genes IL-1ß, IL-8, LysC, e LysG foi avaliada. Ainda, um novo protocolo para avaliação da atividade fagocítica dos leucócitos utilizando leveduras coradas com Vermelho Congo foi estabelecido. Os leucócitos isolados responderam à indução com LPS, exibindo up regulation dos genes IL-1ß e IL-8, duas das interleucinas pró-inflamatórias mais importantes para a resposta imune de vertebrados. Além do mais, a concentração ótima de leveduras para a avaliação da fagocitose foi de 106 células mL-1, resultando em uma capacidade fagocítica (PC) aceitável, mas sem excesso de leveduras durante o processo de contagem, garantindo maior precisão e eficácia do método. Até o presente momento, o presente estudo é o primeiro a investigar a expressão gênica e atividade fagocítica de leucócitos isolados de A. lacustris através da abordagem in vitro. Ainda, nossos resultados servirão de referência para futuros estudos em imunologia e toxicologia de peixes Neotropicais.

Gonadal characterization of the Amazonian fish Serrapinnus kriegi (Characidae: Cheirodontinae) / Caracterização gonadal do peixe Amazônico Serrapinnus kriegi (Characidae: Cheirodontinae)

Abstract The knowledge of the testicular and ovarian morphology of a particular fish species is of paramount importance. Such analyze enables the development of studies and techniques aiming the improvement of their reproduction, management, commercialization and even their conservation. This study performed the ovarian and testicular characterization of the ornamental Amazon fish Serrapinnus kriegi. A total of three males and three females had their gonads analyzed by optical microscopy. Females present ovaries filled with oocytes in asynchronous development, indicating partial spawning in the species. Moreover, the micropyle and micropilar cell formation was observed in primary growing oocytes, representing a precocious oocyte development; and the zona radiata in the final vitellogenic oocytes is thicker than other related species, evidencing the development of a better protection to the embryos in function of the waters' turbulence that characterize it spawning sites in the Amazonian streams. The male specimens' present anastomosed tubular testes with unrestricted spermatogonia spread along the entire seminiferous tubules. The present data elucidate the dynamic of spermatogenesis and oogenesis of an ornamental Amazonian species, through the description of the male and female germ cells development.

Resumo O conhecimento da morfologia testicular e ovariana de uma determinada espécie de peixe é de suma importância, pois através destas análises é possível o desenvolvimento de estudos e técnicas visando o melhoramento de sua reprodução, manejo e comercialização e até mesmo auxiliar em sua conservação. Este estudo realizou a caracterização ovariana e testicular do peixe Amazônico ornamental Serrapinnus kriegi. Um total de três machos e três fêmeas tiveram suas gônadas analisadas através de microscopia óptica. As fêmeas apresentam ovários preenchidos por oócitos em desenvolvimento assincrônico, indicando desova parcelada da espécie. Além disso, observou-se a formação de micrópila e célula micropilar em oócitos em crescimento primário, representando o desenvolvimento precoce do oócito; a zona radiata nos oócitos vitelogênicos finais é mais espessa em comparação a outras espécies relacionadas, evidenciando o desenvolvimento de uma melhor proteção aos embriões, em função das águas turbulentas que caracterizam seu local de desova nos córregos amazônicos. Os machos apresentam testículos do tipo tubular anastomosado com espermatogônias irrestritas, espalhadas por todo o túbulo seminífero. Os dados apresentados elucidam a dinâmica da espermatogênese e oogênese de uma espécie de peixe ornamental amazônica, por meio da descrição das células germinativas masculinas e femininas.

Length-weight relationships of fish from sandy beaches / Relação peso-comprimento de 16 espécies de peixes que ocorrem perto de praias arenosas ao longo da bacia do baixo rio Negro na Amazônia brasileira

Abstract This study estimated the length-weight relationships of 16 fish species occurring close to the shores of sandy beaches along the lower Negro River basin, Brazilian Amazon. The specimens were captured for one day each month, in October to November 2016, early in the morning and early evening, using trawl net (20 m taken for standard length (SL - 0.1 cm precision) and total weight (TW - 0.01 g precision). The parameters a and b of the equation WT = a.LTb were estimated. The a values ranged from 0.0018 to 0.0226 and b values ranged from 2.5271 to 3.3244. This study also provides new data on of maximum lengths for six species, Amazonsprattus scintilla, Brycon pesu, Moenkhausia megalops, Pachyurus paucirastrus, Reganella depressa and Trachydoras microstomus, and new reports of the LWRs parameters of 15 fish species.

Resumo Este estudo estimou as relações comprimento-peso de 16 espécies de peixes que ocorrem às margens de praias arenosas ao longo da bacia do baixo Rio Negro, Amazônia brasileira. As espécies foram capturadas durante um dia de cada mês, de outubro a novembro de 2016, no início da manhã e no início da noite, usando rede de cerco (20 m de comprimento e 3,5 m de altura, 5 malha mm entre nós opostos). As medidas foram feitas para comprimento padrão (SL - precisão de 0,1 cm) e peso total (TW - precisão de 0,01 g). Os parâmetros a e b da equação WT = a.LTb foram estimados. Os valores de a variaram de 0,0018 a 0,0226 e os valores de b variaram de 2,5271 a 3,3244. Este estudo também fornece novos dados sobre comprimentos máximos para seis espécies, Amazonsprattus scintilla, Brycon pesu, Moenkhausia megalops, Pachyurus paucirastrus, Reganella depressa e Trachydoras microstomus, e novos reportes dos parâmetros da LWRs de 15 espécies de peixes.

Effect of zeolite-chlorella top dressing on scar metabolism and conversion of dairy cows' feed / Efeito de aperitivos de zeólita-chlorella no metabolismo cicatricial e na conversão de ração para vacas leiteiras

In scientific and economic experience, the effect of zeolite-chlorella top dressing (CCP) from 28-29% zeolite, 1.5-2% Chlorella vulgaris powder and 75-76% cake on the productive effect of feed and digestion metabolism of dairy cows has been studied. Tetra-edric frame-hollow zeolite crystals have selectively adsorbing and ion-filtering properties, and chlorella enriches with amino acids and vitamins. The introduction of CCP into the diet of cows of the experimental group increased the mineral-vitamin balance and positively affected the metabolism of cicatricial digestion. The pH shift from 6.14 to 6.17 activated the ecosystem of the rumen microflora, increased the synthesis of LVH 0.79 mmol/100ml, due to an increase in the volume of acetates from 54.1±3.0 to 57.2±2.2 mmol/100ml, increased the number of infusoria by 41.1 thousand/ml more than the control group. An increase in the amylolytic activity of the rumen chyme by 2.8 mg/starch, and cellulolytic activity by 2.8% increased scar digestion. This increased the consumption of the dry matter of the diet by cows of the experimental group by 0.48 ± 0.06 kg/head. /day. and daily milk yields by 1.06 ± 0.03 kg against the control. An increase in protein and fat in milk with a decrease in somatic cells, and in the blood of erythrocytes and hemoglobin increased biosynthesis, which increased the conversion rate of feed from 0.68 to 0.72, and protein from 17.0% to 18.9%.

A experiência científica e econômica estudou o efeito produtivo da alimentação e o metabolismo da digestão de vacas leiteiras, de Zeolite-Chlorella (CHP), de 28-29% de zeólita, 1,5-2% de pó de Chlorella vulgaris e 75-76% de bagaço. Os cristais ocos de estrutura tetraedrítica do zeólito possuem propriedades seletivas de adsorção e ionofiltração, e a Chlorella enriquece com aminoácidos e vitaminas. A introdução na dieta de vacas de um grupo experiente de CHP aumentou o equilíbrio mineral-vitamínico e afetou significativamente o metabolismo da digestão cicatricial. A mudança de pH de 6,14 para 6,17 ativou o ecossistema da microflora cicatricial, aumentou a síntese de LLA 0,79 mmol/ 100ml, devido à uveistivanie do volume de acetatos de 54,1±3,0 para 57,2±2,2 mmol/100ml, aumentou o número de infusórios em 41,1 mil/ml mais do que o grupo controle. O aumento da atividade amilolítica do quimo da cicatriz em 2,8 mg / amido e da atividade celulosolítica em 2,8% aumentou a digestão cicatricial. Isso aumentou a ingestão de matéria seca das vacas do grupo experimental em 0,48±0,06 kg/gol./dia e a produção diária de leite em 1,06±0,03 kg contra o controle. O aumento da proteína e da gordura no leite, com a diminuição das células somáticas, e no sangue de glóbulos vermelhos e hemoglobina aumentou a biossíntese, o que aumentou a taxa de conversão alimentar de 0,68 para 0,72 e proteína de 17,0% para 18,9%.

Molecular characterization of Astyanax species (Characiformes: Characidae) from the upper Paraguaçu River basin, a hydrographic system with high endemism

Molecular tools have been employed to improve the knowledge about freshwater Neotropical fishes. Such approaches supporting studies of groups including species complexes such as Astyanax, one of the most diversified and taxonomically complex genus of the family Characidae. Here, we employed species delimitation analyses in four Astyanax species described for the upper Paraguaçu River basin, a drainage within Northeastern Mata Atlântica freshwater ecoregion with high endemism. We implemented single and multilocus approaches based on two mitochondrial and one nuclear markers. Cytochrome c Oxidase I sequences previously available for Astyanax species were also added to our dataset. The single locus analyses showed A. epiagos, A. rupestris, and A. aff. rupestris as different Molecular Operational Taxonomic Units (MOTUs), while A. brucutu and A. lorien were grouped. However, the multilocus approach distinguished these two species and showed congruence for the remaining single locus results. Astyanax aff. rupestris was separated into two MOTUs using both approaches, highlighting the need for an integrative taxonomic revision including A. aff. rupestris. These findings contribute to a better understanding of the diversity of this fish group in the upper Paraguaçu, identifying hidden diversity and reinforcing the relevance of this hydrographic system as a notable hotspot for ichthyofauna biodiversity endemism.(AU)

Ferramentas moleculares têm sido empregadas para melhorar o conhecimento sobre os peixes Neotropicais. Tais abordagens apoiam estudos de grupos que incluem complexos de espécies, como Astyanax, um dos gêneros mais diversificados e taxonomicamente complexos dentro da família Characidae. Neste estudo, nós empregamos análises de delimitação de espécies em quatro espécies de Astyanax recentemente descritas da bacia do alto rio Paraguaçu, uma drenagem dentro da ecorregião Mata Atlântica Nordeste que apresenta alto endemismo. Nós realizamos abordagens de loco único e multilocos baseadas em dois marcadores mitocondriais e um nuclear. Sequências de Citocromo c Oxidase I anteriormente disponíveis para espécies de Astyanax foram adicionadas ao nosso conjunto de dados. As análises de loco único mostraram A. epiagos, A. rupestris e A. aff. rupestris como diferentes Unidades Taxonômicas Operacionais Moleculares (MOTUs), enquanto A. brucutu e A. lorien foram agrupadas. Entretanto, a abordagem multilocos distinguiu estas duas espécies e mostrou congruência com os demais resultados das análises de loco único. Astyanax aff. rupestris foi separada em duas MOTUs usando ambas as abordagens, sugerindo a necessidade de uma revisão taxonômica integrativa incluindo A. rupestris e ambas A. aff. rupestris. Esses achados contribuem para uma melhor compreensão da diversidade desse grupo de peixes na bacia do rio Paraguaçu, identificando diversidade oculta e reforçando a relevância desse sistema hidrográfico como um notável hotspot de endemismo da biodiversidade da ictiofauna.(AU)

Seasonal variation of thyroxine concentration in Karagouniko and Chios rams in temperate environmental conditions

It is well known that the concentration of the thyroid hormone thyroxine increases as day length increases, and the other way around, in Karagouniko and Chios ewes but based on openly international English literature, nothing is known about this hormone on the rams of the breeds mentioned above concerning a meticulous analysis of their aerial environment. So from this perspective, the current research was conducted to investigate the thyroxine concentrations of Karagouniko and Chios rams, taking into account two periods, January-June and July-November, when the day length was increasing and decreasing, respectively. Apart from photoperiod, the meteorological variables air temperature, relative humidity, and sunshine were taken into consideration in the farm of the Artificial Insemination Center of Karditsa (39021΄18΄΄N, 21054΄19΄΄E), Greece (temperate climate zone), where the experimental animals raised. The possible change of thyroxine concentration in both sheep breeds and the possible changes of the abovementioned meteorological variables between the examined periods were detected using t-tests. Higher thyroxine values (P < 0.05) were confirmed in JanuaryJune (55.11 ng/ml in Karagouniko and 47.72 ng/ml in Chios rams), in comparison to July-November (49.03 ng/ml in Karagouniko and 44.14 ng/ml in Chios rams). Air temperature and sunshine followed a reverse course (P < 0.05). In both periods, Karagouniko rams were characterized by higher concentrations of thyroxine than Chios rams (P < 0.01). Our results add more insight into the physiology of Karagouniko and Chios sheep related to thyroxine and temperate aerial environment.

Phylogeography of Oligosarcus acutirostris (Characiformes: Characidae): testing biogeographic hypotheses in the Northeastern Mata Atlântica freshwater ecoregion

The Northeastern Mata Atlântica freshwater ecoregion (NMAF) is recognized for the high degree of endemism of its ichthyofauna, whose evolutionary and biogeographic histories are still poorly understood. Oligosarcus acutirostris is a freshwater fish species endemic to the NMAF, which is distributed in coastal rivers and streams draining Bahia, Espírito Santo, and part of Minas Gerais states in eastern Brazil. Its widespread distribution in currently isolated river basins along the NMAF prompted this study, which aimed to understand what scenarios would be involved in determining its current distribution pattern, and to contribute to a better understanding of the biogeographic history of the NMAF. For this, mitochondrial and nuclear DNA sequences were analyzed based on samples from different localities along the species distribution, including its type locality. Overall, phylogeographic analyses indicate a strong genetic structure within the species evidenced mainly by the non-sharing of haplotypes between most of the basins analyzed. According to the AMOVA results, the current distribution of haplotypes is better explained by the Pleistocene coastal paleodrainages. The results are also used to test and complement a biogeographic hypothesis previously proposed for the drainages of the NMAF.(AU)

A ecorregião de água doce Mata Atlântica Nordeste (NMAF) é reconhecida pelo alto grau de endemismo da sua ictiofauna, cujas histórias evolutiva e biogeográfica ainda são pouco compreendidas. Oligosarcus acutirostris é uma espécie de peixe de água doce endêmica da NMAF, que está distribuída em rios e riachos costeiros que drenam os estados da Bahia, Espírito Santo e parte de Minas Gerais, no leste do Brasil. Sua ampla distribuição em bacias atualmente isoladas ao longo da NMAF motivou este estudo, que teve como objetivos entender quais cenários estariam envolvidos na determinação do seu padrão atual de distribuição e contribuir para uma melhor compreensão da história biogeográfica da NMAF. Para isto, foram analisadas sequências de DNA nuclear e mitocondrial, a partir de amostras de diferentes localidades ao longo da distribuição da espécie, incluindo sua localidade tipo. No geral, as análises filogeográficas indicam forte estruturação genética na espécie, evidenciada principalmente pelo não compartilhamento de haplótipos entre a maioria das bacias analisadas. De acordo com os resultados da AMOVA, a distribuição atual dos haplótipos é melhor explicada pelas paleodrenagens costeiras do Pleistoceno. Os resultados obtidos também são utilizados para testar e complementar hipótese biogeográfica previamente proposta para as drenagens da NMAF.(AU)

Effect of feeding frequency and water salinization on early development of Pyrrhulina brevis, an Amazonian ornamental fish / Efeito da frequência alimentar e da salinização da água sobre o desenvolvimento inicial de Pyrrhulina brevis, um peixe ornamental da Amazônia

Pyrrhulina brevis is an endemic fish from the Amazon basin that is valued in the ornamental fish market. In larviculture, fish are very sensitive to stressors and have a high mortality rate. Salinized water may provide more energy to overcome stress and feeding frequency is an important strategy to improve productive performance. Therefore, the aim of this study was to evaluate the best feeding frequency and the best level of water salinization for larval development of P. brevis. A total of 360 post-larvae of P. brevis (5.26 ± 1.65 mg, 5.57 ± 0.68 mm) were randomly distributed in 36 aquariums (1 L) in a 3x4 factorial scheme, to evaluate three concentrations of salt in water (0, 1 and 2 g L-1) and four feeding frequencies (once, twice, three and four times a day). We offered 150 Artemia nauplii per day and per post-larvae during 15 days. The fish kept at 1 g L-1 salinized water, and those fed 3 and 4 times a day presented significantly greater final length and weight, weight gain, and specific growth rate for length and weight. An interaction between salinized water and feeding frequency was observed for survival rate. We conclude that, during the initial rearing phase of P. brevis, feeding frequency of three times a day and salinized water at 1 g L-1 is recommended.(AU)

Pyrrhulina brevis é um peixe endêmico da bacia amazônica que apresenta bons valores no mercado de peixes ornamentais. Na larvicultura, os peixes são muito sensíveis aos estressores e apresentam alta taxa de mortalidade. A água salinizada pode fornecer mais energia para superar o estresse e a frequência alimentar é uma estratégia importante para melhorar o desempenho produtivo. Portanto, o objetivo deste trabalho foi avaliar a melhor frequência alimentar e o melhor nível de salinização da água para o desenvolvimento larval de P. brevis. Um total de 360 pós-larvas de P. brevis (5,26 ± 1,65 mg, 5,57 ± 0,68 mm) foram distribuídos aleatoriamente em 36 aquários (1 L) em esquema fatorial 3x4, para avaliar três concentrações de sal na água (0, 1 e 2 g L-1) e quatro frequências de alimentação (uma, duas, três e quatro vezes ao dia). Foram oferecidas 150 náuplios de Artemia por dia e por pós-larva, durante 15 dias. Os peixes mantidos com 1 g L-1 de água salinizada e os alimentados 3 e 4 vezes ao dia apresentaram comprimento e peso finais, ganho de peso e taxa de crescimento específico para comprimento e peso significativamente maiores. Uma interação entre água salinizada e frequência alimentar foi observada para a taxa de sobrevivência. Concluímos que, durante a fase inicial de criação de P. brevis, recomenda-se uma frequência alimentar de três vezes ao dia e água salinizada a 1 g L-1.(AU)

Effects of supplementation with vitamins C and E on the acute inflammatory response in Piaractus mesopotamicus / Efeitos da suplementação com vitaminas C e E na resposta inflamatória aguda em Piaractus mesopotamicus

Vitamins C and E are potent antioxidants that reduces the harmful effects of stress in several species including fish. In this study, it was evaluated the effect of vitamins C, E and their combination in the acute aerocystitis induced by inactivated Aeromonas hydrophila in pacu. 288 fish were distributed into 4 groups supplemented for 90 days: G1-control; G2- supplemented with 500 mg of Vitamin C; G3-supplemented with 500 mg of Vitamin E; G4-supplemented with 500 mg of Vitamin C + 500 mg of Vitamin E. The fish were divided in three groups, the first was not inoculated; second were inoculated in the swim bladder with 3 x 109 CFU of inactivated A. hydrophila and the last one with saline. The inflammatory exudate was collected from the swim bladder for assessment of cellular component and cytochemistry. The results showed higher accumulation of leukocytes in fish inoculated with bacteria. Cytochemistry was effective identifying thrombocytes, lymphocytes, macrophages and, granulocytes present in the exudate. It was also observed fish that received supplementation with vitamins presented higher accumulation of total cells in the exudate with a predominance of lymphocytes and thrombocytes. These results suggested that supplementation with vitamins improved the immunological responses.

As vitaminas C e E são potentes antioxidantes que reduzem os efeitos nocivos do estresse em várias espécies, incluindo peixes. Neste estudo, avaliou-se o efeito das vitaminas C, E e sua combinação na aerocistite aguda induzida por Aeromonas hydrophila inativada em pacu. 288 peixes foram distribuídos em 4 grupos suplementados por 90 dias: G1-controle; G2- suplementado com 500 mg de Vitamina C; G3-suplementado com 500 mg de Vitamina E; G4-suplementado com 500 mg de Vitamina C + 500 mg de Vitamina E. Os peixes foram divididos em três grupos, o primeiro não foi inoculado; o segundo foi inoculado na bexiga natatória com 3 x 109 UFC de A. hydrophila inativada e a última com soro fisiológico. O exsudato inflamatório foi coletado da bexiga natatória para avaliação do componente celular e citoquímica. Os resultados mostraram maior acúmulo de leucócitos nos peixes inoculados com a bactéria. A citoquímica foi eficaz na identificação de trombócitos, linfócitos, macrófagos e granulócitos presentes no exsudato. Também foi observado que os peixes que receberam suplementação com vitaminas apresentaram maior acúmulo de células totais no exsudato com predominância de linfócitos e trombócitos. Esses resultados sugeriram que a suplementação com vitaminas melhorou as respostas imunológicas.

The emerald green tetra: a new restricted-range Hyphessobrycon (Characiformes: Characidae) from the upper rio Juruena, Chapada dos Parecis, Brazil

A new species of Hyphessobrycon is described from the rio Mutum, a tributary of the rio Juruena, rio Tapajós basin, Brazil. The new taxon can be distinguished from its congeners by the presence of a well-defined and relatively narrow dark midlateral stripe on body, extending from head to the middle caudal-fin rays, presence of a humeral blotch, distal profile of the anal fin falcate in males, 13-16 branched anal-fin rays (vs. 17-26), and 11 or 12 horizontal scale rows around caudal peduncle. The new species shows polymorphism regarding the presence of the adipose fin, and a discussion on this type of polymorphism across the family and its systematic implications is presented.(AU)

Uma espécie nova de Hyphessobrycon é descrita do rio Mutum, um afluente do rio Juruena, bacia do rio Tapajós, Brasil. O táxon novo pode ser distinguido de seus congêneres pela presença de uma faixa média-lateral escura bem definida e relativamente estreita no corpo, estendendo-se da cabeça aos raios médios da nadadeira caudal, presença de uma mancha umeral, 13-16 raios da nadadeira anal ramificada (vs. 17-26) e 11-12 séries horizontais de escamas ao redor do pedúnculo caudal. A espécie nova apresenta polimorfismo em relação à presença da nadadeira adiposa. Assim, é apresentada uma discussão sobre esse tipo de polimorfismo em toda a família e suas implicações na sistemática do grupo.(AU)

Sperm cryopreservation of Prochilodus brevis using different concentrations of non-permeable cryoprotectants

The action of substances with non-permeable cryoprotectant potential, besides glucose, has not yet been studied for the species Prochilodus brevis. The objective of this work was to evaluate the action of four non-permeable cryoprotectants on this species sperm cryopreservation. Five pools were cryopreserved in a solution of 5% glucose and 10% dimethyl sulfoxide (Me2SO) associated or not (control) with cryoprotectants egg yolk (5, 10 or 12%), soy lecithin (2.5, 7.5 or 10%), sucrose (5, 10 or 20%) and lactose (5, 8 or 15%). After thawing, samples were evaluated for sperm kinetics (total motility, motility duration, velocities, and wobble - WOB), morphology and membrane and DNA integrity. The treatments containing egg yolk improved significantly (P<0.05) results when compared the control for the membrane integrity parameter. When compared to other treatments, egg yolk, at any concentration, presented higher results (P<0.05) for membrane integrity, total motility, curvilinear velocity (VCL) and average path velocity (VAP) parameters. Egg yolk also showed the best results for WOB, but it did not differ from 5% and 8% lactose and 5% and 20% sucrose. Soy lecithin had the lowest percentages of morphologically normal sperm (P<0.05), while the other treatments did not differ from each other. There was no difference regarding DNA integrity data. Thus, 5% egg yolk is indicated as a non-permeable cryoprotectant for P. brevis, in association with 5% glucose and 10% Me2SO.(AU)

Myxobolus spp. (Cnidaria: Myxobolidae) in the circulating blood of fishes from Goiás and Mato Grosso States, Brazil: case report / Myxobolus spp. (Cnidaria: Myxobolidae) no sangue circulante de peixes dos estados de Goiás e Mato Grosso, Brasil: relato de caso

Myxosporidiosis is an infectious disease caused by myxozoans of the Phylum Cnidaria, Class Myxosporea, and Order Bivalvulida, considered a common parasite in fresh and saltwater fishes that parasitize many organs, especially gills. In the present study, 49 specimens of fishes belonging to eight genera: Tetragonopterus, Leporinus, Myleus, Pirinampus, Rhapiodon, Pygocentrus, Ageneiosus, and Serrasalmus were collected and blood smears were made, fixed with absolute methanol, and stained with Giemsa 10% to survey hemoparasites. However, myxospores were found in the circulating blood of five (10.20%) fishes belonging to genus Tetragonopterus, Myleus, and Pygocentrus. Two morphological types of Myxobolus spp. were identified in all the five fish specimens analyzed. Usually, investigations on myxozoans in fish are carried out with the search for plasmodia or cysts in the fish organs and observation of the cavity of organs. Nevertheless, this study highlights the importance of also examining the blood of these animals, since these parasites can cause severe pathogenic diseases in fish. Thus, the blood analyses can proportionate preventive sanitary control for commercial fish avoiding economic loss.

A mixosporidiose é considerada uma doença infecciosa causada por mixozoários pertentences ao Filo Cnidaria, Classe Myxosporea e Ordem Bivalvulida, considerados parasitos comuns de peixes de água doce e salgada, parasitando vários órgãos, principalmente as brânquias. No presente estudo, 49 espécimes de peixes pertencentes a oito gêneros: Tetragonopterus, Leporinus, Myleus, Pirinampus, Rhapiodon, Pygocentrus, Ageneiosus and Serrasalmus foram coletados e extensões sanguíneas foram feitas com a finalidade de encontrar hemoparasitos. Entretanto, mixoesporos foram observados em cinco (10.20%) espécimes de peixes, pertencentes aos gêneros Tetragonopterus, Myleus e Pygocentrus. Dois morfotipos de Myxobolus spp. foram identificados parasitando esses peixes. Normalmente, as investigações sobre mixozoários em peixes é realizada com a procura de plasmódios ou cistos nos órgãos dos peixes e observação da cavidade de órgãos. Porém, esse trabalho ressalta a importância de se examinar também o sangue desses animais, já que esses parasitos podem ocasionar patogenias severas em peixes. Sendo assim, a análise sanguínea pode proporcionar controle sanatório preventivo para peixes comerciais e evitar perdas econômicas.

Myxobolus spp. (Cnidaria: Myxobolidae) in the circulating blood of fishes from Goiás and Mato Grosso States, Brazil: case report / Myxobolus spp. (Cnidaria: Myxobolidae) no sangue circulante de peixes dos estados de Goiás e Mato Grosso, Brasil: relato de caso

Myxosporidiosis is an infectious disease caused by myxozoans of the Phylum Cnidaria, Class Myxosporea, and Order Bivalvulida, considered a common parasite in fresh and saltwater fishes that parasitize many organs, especially gills. In the present study, 49 specimens of fishes belonging to eight genera: Tetragonopterus, Leporinus, Myleus, Pirinampus, Rhapiodon, Pygocentrus, Ageneiosus, and Serrasalmus were collected and blood smears were made, fixed with absolute methanol, and stained with Giemsa 10% to survey hemoparasites. However, myxospores were found in the circulating blood of five (10.20%) fishes belonging to genus Tetragonopterus, Myleus, and Pygocentrus. Two morphological types of Myxobolus spp. were identified in all the five fish specimens analyzed. Usually, investigations on myxozoans in fish are carried out with the search for plasmodia or cysts in the fish organs and observation of the cavity of organs. Nevertheless, this study highlights the importance of also examining the blood of these animals, since these parasites can cause severe pathogenic diseases in fish. Thus, the blood analyses can proportionate preventive sanitary control for commercial fish avoiding economic loss.(AU)

A mixosporidiose é considerada uma doença infecciosa causada por mixozoários pertentences ao Filo Cnidaria, Classe Myxosporea e Ordem Bivalvulida, considerados parasitos comuns de peixes de água doce e salgada, parasitando vários órgãos, principalmente as brânquias. No presente estudo, 49 espécimes de peixes pertencentes a oito gêneros: Tetragonopterus, Leporinus, Myleus, Pirinampus, Rhapiodon, Pygocentrus, Ageneiosus and Serrasalmus foram coletados e extensões sanguíneas foram feitas com a finalidade de encontrar hemoparasitos. Entretanto, mixoesporos foram observados em cinco (10.20%) espécimes de peixes, pertencentes aos gêneros Tetragonopterus, Myleus e Pygocentrus. Dois morfotipos de Myxobolus spp. foram identificados parasitando esses peixes. Normalmente, as investigações sobre mixozoários em peixes é realizada com a procura de plasmódios ou cistos nos órgãos dos peixes e observação da cavidade de órgãos. Porém, esse trabalho ressalta a importância de se examinar também o sangue desses animais, já que esses parasitos podem ocasionar patogenias severas em peixes. Sendo assim, a análise sanguínea pode proporcionar controle sanatório preventivo para peixes comerciais e evitar perdas econômicas.(AU)

Life-History traits of Hollandichthys multifascitus (Eigenmann & Norris, 1900) (Characiformes: Characidae) in coastal Atlantic Forest blackwater streams from Southeastern Brazil

Ecological and life history traits have been used to understand the basic ecology of fishes. This study aimed to examine the existence of plasticity in life history traits of populations of Hollandichthys multifasciatus in ten blackwater streams. This is an inseminating Characidae, endemic to the Atlantic coastal drainages of Brazil. Different aspects of the life-history of the species, such as mean length, sex ratio, absolute and relative fecundity, gonadosomatic index, condition factor, length-weight relationship and the growth parameter (b) of 185 specimens were studied during the period of low precipitation (June-September). Fish samples were obtained along a 100 m stretch of each stream, and some habitat variables recorded. ANOVA and Kruskal-Wallis tests indicated a similarity in most of the analyzed traits, with exception of the mean length of immatures, Gonadosomatic Index of mature males and condition factor of immatures and mature adults. Also, slope tests of the length-weight relationship were significantly different for immatures. The observed differences were attributed to heterogeneity in food availability and/or other site-specific factors, which may influence growth and/or breeding aspects among the studied localities. The approach used herein may improve understanding of trait plasticity under natural conditions, helping to understand fish-community responses to anthropogenic changes.(AU)

A new species of Knodus (Characiformes: Characidae), with deep genetic divergence, from the Mearim and Munim river basins, Northeastern Brazil, and evidence for hidden diversity in adjacent river basins

A new species of Knodus from the Mearim and Munim River basins, Northeastern Brazil, is herein described based on integrative taxonomy, by using different molecular based species delimitation methods and independent approaches. The new species possesses the combination of character states that usually diagnoses the genus. The new species possesses a similar colour pattern to K. victoriae, which is also morphologically similar to it. The species described herein differs from K. victoriae by possessing more total vertebrae, more branched anal-fin rays, and fewer circumpeduncular scales. We also provide a detailed discussion of the morphological diagnostic features exhibited by Knodus species from adjacent river basins.(AU)

Uma nova espécie de Knodus das bacias dos rios Mearim e Munim, Nordeste do Brasil, é descrita com base em taxonomia integrativa, utilizando diferentes métodos moleculares de delimitação de espécies e abordagens independentes. A nova espécie possui a combinação de estados de caráter que geralmente é utilizada para diagnosticar o gênero. A nova espécie possui um padrão de coloração semelhante a K. victoriae, que também é morfologicamente semelhante a ela. A espécie aqui descrita difere de K. victoriae por possuir mais vértebras totais, mais raios ramificados na nadadeira anal e menos escamas circumpedunculares. Nós também fornecemos uma discussão detalhada das características morfológicas diagnósticas exibidas por espécies de Knodus de bacias hidrográficas adjacentes.(AU)